Регулирующая лимфангиогенез рецепторная тирозинкиназа FLT4 (VEGER3) и ее участие в опухолевом росте тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.14, доктор биологических наук Карамышева, Аида Фуадовна

• Карамышева, Аида Фуадовна
• доктор биологических наук
• 2003

Оглавление диссертации доктор биологических наук Карамышева, Аида Фуадовна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Основные типы клеток, входящие в состав сосудов.

Формирование первичной сосудистой сети (васкулогенез) и ангиогенез

1.2. Активация ангиогенеза при опухолевом росте

1.3. Факторы роста клеток эндотелия сосудов

1.3.1. Факторы роста фибробластов

1.3.2. Фактор роста эндотелия сосудов VEGF-A 18 Изоформы фактора роста VEGF-A

1.3.3. Другие факторы роста семейства VEGF 23 Фактор роста VEGF-B 23 Фактор роста VEGF-C 25 Фактор роста VEGF-D 26 Фактор роста VEGF-E 27 Плацентарный фактор роста

1.4. Рецепторы факторов роста семейства VEGF

1.4.1. Рецепторы, взаимодействующие с фактором роста 29 VEGF-A (VEGFR1 и VEGFR2)

1.4.2. Рецептор VEGFR

1.4.3. Нейропилины

1.5. Сигнальная система Tie2/Ang

1.5.1. Семейство рецепторов Tie и взаимодействующие с ними 39 факторы роста

1.5.2. Процессы, контролируемые сигнальной системой 42 Tie2/Ang-1 при формировании сосудов

1.6. Процесс формирования сосудов в норме и в опухоли и участие 44 в нем сигнальных систем

1.7. Сигнальные пути, в которых участвуют рецепторы семейства 47 VEGFR

1.7.1. Сигнальные пути с участием рецептора VEGFR

1.7.2. Сигнальные пути с участием рецептора VEGFR

1.7.3. Сигнальные пути с участием рецептора VEGFR

ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

ГЛАВА Ш. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Ш. 1. Клонирование гена FLT4 ( VEGFR3) человека

Ш. 1.1 .Секвенирование и анализ клонов, кодирующих трансмембранный и тирозинкиназные домены белкового продукта гена FLT4 (VEGFR3) Ш. 1.2.Секвенирование и анализ клонов, кодирующих внеклеточную область белкового продукта гена FLT4 (VEGFR3)

Ш. 1.3.Секвенирование и анализ клонов, содержащих З'-область 98 гена FLT4 (VEGFR3) Ш.2. Частичное клонирование гена Flt4 мыши

Ш.З. Определение хромосомной локализации генов Flt4 мыши и

FLT4 ( VEGFR3) человека Ш.4. Исследование экспрессии гена FLТ4 ( VEGFR3) в линиях клеток 115 человека и грызунов, в плаценте человека и в нормальных тканях мыши методом Норзерн блот-гибридизации

Ш.4.1. Исследование экспрессии гена FLT4 ( VEGFR3) в линиях опухолевых клеток и плаценте человека Ш.4.2. Исследование экспрессии гена Flt4 в нормальных тканях 119 мыши и в трансформированных линиях клеток грызунов

Ш.5. Исследование экспрессии генов рецептора FLT4 (VEGFR3) и его 122 лиганда VEGF-C в линиях опухолевых клеток человека и трансформированных клеток экспериментальных животных методом RT-PCR

П1.6. Исследование роли VEGF-C/FLT4 (VEGFR3)-3aBHCHMoft сигнальной системы в регуляции пролиферации клеток Ш.7. Исследование экспрессии гена Flt4 в спонтанных и перевиваемых гепатомах мыши Ш.8. Исследование экспрессии генов FLT4 ( VEGFR3) и его лиганда 132 VEGF-C в опухолях человека

Ш.8.1. Исследование экспрессии FLT4 (VEGFR3) в опухолях человека методом Норзерн блот-гибридизации Ш.8.2. Исследование экспрессии FLT4 (VEGFR3) и взаимодействующего с ним фактора роста VEGF-C при 133 злокачественной и доброкачественной патологии щитовидной железы человека методом RT-PCR • Ш.8.3. Иммуногистохимическое исследование экспрессии белков

FLT4 (VEGFR3) и VEGF-C в опухолях щитовидной железы человека. Сравнение с нормальной окружающей тканью. III.8.4. Иммуногистохимическое исследование экспрессии белков 143 FLT4 (VEGFR3) и CD 31 в опухолях щитовидной железы человека

ГЛАВА IV. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Регулирующая лимфангиогенез рецепторная тирозинкиназа FLT4 (VEGER3) и ее участие в опухолевом росте»

Необходимым условием роста и развития опухолей является ангиогенез - возникновение в них новой сосудистой системы. Понимание механизмов, регулирующих процессы формирования и развития систем кровеносных и лимфатических сосудов опухоли, может предоставить дополнительные возможности для терапии и диагностики злокачественных новообразований.

Важным достижением исследований в этой области за последнее десятилетие явилось обнаружение специфических рецепторов (VEGFR), локализованных на поверхностной мембране клеток эндотелия сосудов и взаимодействующих с ними факторов роста (VEGF).

Рецепторы VEGFR и их лиганды через связанные с ними сигнальные системы регулируют многие ключевые этапы формирования сосудов, включая пролиферацию клеток эндотелия кровеносных и лимфатических сосудов, их дифференцировку из клеток-предшественников, а также процессы, приводящие к образованию зрелой сосудистой системы. Экспрессия всех 3-х рецепторов VEGFR совершенно необходима для формирования сосудов: отсутствие хотя бы одного из этих рецепторов приводит к нарушениям, несовместимым с жизнью эмбриона.

Рецепторы VEGFR и их лиганды - VEGF оказались удобными молекулярными маркерами, исследование экспрессии которых дает возможность оценить состояние сосудистой системы и активность ангиогенеза в ткани. Оценка этих показателей является важной с точки зрения прогноза дальнейшего развития новообразований, т.к. увеличение размеров и прогрессия опухоли тесно связаны со стимуляцией роста в ней новых сосудов. Кроме того, обнаружение рецепторов VEGFR и их лигандов предоставило возможность для поиска подходов к изменению активности ангиогенеза в ткани за счет стимуляции или ингибирования связанных с этими молекулами сигнальных систем.

В нашей работе был впервые клонирован ген одного из рецепторов клеток эндотелия сосудов - FLT4 (VEGFR3). Анализ структуры предполагаемого белкового продукта гена FLT4 (VEGFR3) показал, что он принадлежит к суперсемейству рецепторных тирозинкиназ и наиболее гомологичен рецепторам FLT1 (VEGFR 1) и Flkl/KDR (VEGFR2) семейства факторов роста эндотелия сосудов VEGF. При этом оказалось, что в отличие от двух других рецепторов VEGFR, локализованных, в основном, на клетках эндотелия кровеносных сосудов, FLT4 (VEGFR3) преимущественно локализован на клетках эндотелия лимфатических сосудов, являясь тем самым одним из первых специфических маркеров лимфатических сосудов [69, 82].

Идентификация FLT4 (VEGFR3) в качестве маркера лимфатической системы, исследование уровня его генной экспрессии и распределения бежа в опухолях и в нормальной ткани давали возможность изучить изменения, происходящие в лимфатической системе в процессе развития опухоли. Ранее, из-за отсутствия специфических маркеров, позволяющих различать эндотелий кровеносных и лимфатических сосудов, характеристика изменений, происходящих с лимфатической сосудистой системой при озлокачесггвлении ткани, была затруднена.

Цель дальнейшей работы заключалась в исследовании возможной роли рецептора FLT4 (VEGFR3) и связанных с ним сигнальных систем в опухолевой прогрессии и в регуляции пролиферации экспрессирующих этот рецептор клеток.

В соответствии с этим, были поставлены следующие задачи:

1. Исследовать экспрессию гена FLT4 (VEGFR3) и его лиганда VEGF-C в культурах нормальных и трансформированных клеток человека и грызунов.

2. Исследовать роль FLT4 (УЕОРПЗ)-зависимой сигнальной системы в регуляции пролиферации экспрессирующих этот рецептор клеток.

3. Исследовать экспрессию гена FLT4 (VEGFR3) в спонтанных и индуцированных гепатомах мыши.

4. Исследовать экспрессию гена FLT4 (VEGFR3) и его лиганда VEGF-C в образцах с различной патологией щитовидной железы человека, включающей в себя как доброкачественные и злокачественные опухоли, так и неопухолевые пролиферативные изменения.

5. Исследовать распределение белка FLT4 (VEGFR3) и VEGF-C в аденомах и аденокарциномах щитовидной железы человека.

6. Сравнить распределение и активность маркера кровеносных сосудов CD31 и маркера лимфатических сосудов FLT4 (VEGFR3) в аденокарциномах щитовидной железы человека.

При исследовании экспрессии генов FLT4 (VEGFR3) и его лиганда VEGF-C в культуральных линиях трансформированных клеток было установлено, что в линиях клеток, происходящих из солидных опухолей человека, ген FLT4 (VEGFR3) экспрессирован крайне редко, в отличие от практически всегда экспрессирующегося в этих линиях гена VEGF-C. Однако в тех исключительных случаях, когда в этих клетках наблюдается ко-экспрессия обоих генов, связанная с ними сигнальная система может вносить заметный вклад в регуляцию клеточной пролиферации.

В нашей работе были впервые получены данные об экспрессии генов рецептора FLT4 (VEGFR3) и одного из его лигандов - VEGF-C в образцах с различной патологией щитовидной железы человека: в злокачественных и доброкачественных опухолях, а также при различных зобных патологиях и аутоиммунных тироидитах. Впервые было показано, что экспрессия и гена, и бежа FLT4 (VEGFR3) в аденокарциномах щитовидной железы достоверно снижена по сравнению с его экспрессией в аденомах, в других исследованных тиреоидных патологиях или в нормальной ткани щитовидной железы человека.

Иммуногистохимическое сравнение экспрессии FLT4 (VEGFR3) и маркера кровеносной системы, CD 31, в аденокарциномах щитовидной железы не выявило аналогичного снижения уровня экспрессии последнего.

Таким образом, в нашей работе также впервые показано, что некоторые не являющиеся эндотелиальными опухолевые линии клеток могут экспрессировать рецептор FLT4 (VEGFR3) и его лиганд VEGF-С, и в таких клетках FLT4 (УЕОРКЗ)-зависимая сигнальная система вносит существенный вклад в регуляцию их пролиферации.

В нашей работе впервые показано снижение уровня экспрессии маркера лимфатических сосудов FLT4 (VEGFR3) в аденокарциномах щитовидной железы человека по сравнению с другими пролиферативными тиреоидными патологиями и нормальной тканью щитовидной железы. Эти данные указывают на то, что в злокачественных опухолях щитовидной железы не только не происходит стимуляции лимфангиогенеза, но система лимфатических сосудов находится, скорее, в подавленном состоянии.

Сравнение экспрессии маркеров лимфатической - FLT4 (VEGFR3) - и кровеносной - CD 31 - систем показало, что такое подавление характерно только для лимфатических сосудов. Более того, уменьшение экспрессии рецептора FLT4 (VEGFR3) в аденокарциномах может приводить к стимуляции ангиогенеза опухоли за счет того, что лиганды этого рецептора - VEGF-C и VEGF-D - в большей степени могут взаимодействовать со своим вторым рецептором - VEGFR2, являющимся основным регулятором формирования кровеносной сосудистой системы.

Заключение диссертации по теме «Онкология», Карамышева, Аида Фуадовна

ВЫВОДЫ

1. Клонирован новый ген - FLT4 (VEGFR3) - принадлежащий семейству генов, кодирующих рецепторные тирозинкиназы (РТК). Ген FLT4 (VEGFR3) вместе с генами FLTI (VEGFR1) и Flkl/KDR (VEGFR2) составляет новую подгруппу генов, белковые продукты которых характеризуются 7-ю иммуноглобулинподобными доменами во внеклеточной области. Ген локализован в области q34-35 хромосомы 5 человека.

2. Найдены 2 изоформы гена FLT4 (VEGFR3), экспрессирующиеся в плаценте человека в виде 2-х транскриптов размером 5,8 kb и 4,7 kb. Секвенирование короткой и длинной изоформ гена FLT4 (VEGFR3) показало, что белковый продукт более длинной изоформы этого гена содержит дополнительные 65 амк в области СООН-конца.

3. Частично клонирован ген Flt4 мыши. Показано, что 3'-область гена FU4 мыши гомологична длинной изоформе гена FLT4 (VEGFR3) человека. Ген Flt4 локализован в области А5-В1 хромосомы 11 мыши. Ген FU4 экспрессируется в большинстве тканей мыши в виде единственного транскрипта размером 5,8 kb.

4. Частота экспрессии гена FLT4 (VEGFR3) в культивируемых опухолевых клетках невысока (3/7 в клетках гемобластозов и 1/5 в культурах клеток, происходящих из солидных опухолей человека). В единственных ко-экспрессирующих FLT4 (VEGFR3) и его лиганд VEGF-C клетках А549 эта сигнальная система вносит существенный вклад (до 50%) в стимуляцию пролиферации.

5. Уровень экспрессии гена FLT4 (VEGFR3) в нормальных и опухолевых тканях человека крайне низок. При исследовании экспрессии гена FLT4 (VEGFR3) в образцах с различной патологией щитовидной железы человека обнаружено существенное снижение частоты и уровня экспрессии короткой и особенно длинной изоформ гена в аденокарциномах по сравнению с аденомами, неопухолевыми пролиферативными и аутоиммунными заболеваниями. Полученные данные указывают на возможность использования экспрессии FLT4 (VEGFR3) в качестве диагностического маркера при некоторых опухолевых патологиях.

6. Иммуногистохимическое окрашивание параллельных срезов аденокарцином щитовидной железы выявило пониженную интенсивность экспрессии в них маркера лимфатических сосудов FLT4 (VEGFR3), но не маркера кровеносных сосудов CD31, свидетельствующую об ингибировании лимфатической, но не кровеносной системы в тиреоидных аденокарциномах.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Les genes FLT3 et FLT4, codant pour des recepteurs a tyrosine kinase apparentes aux produits de proto-oncogenes FMS et KIT // Les Journees Curie, Paris, France, Fevrier, 1992, p. 18 (соавт. Rosnet O., Galland F., Marchetto S., Pebnsque M.-J., Mattei M.G., Courcoul M.A., Dubreuil P., Birnbaum D.)

2. FLT3 and FLT4: receptors related to KIT and VEGFR // Proceedings of the 8th Oncogene Meeting, Frederick, USA, June, 1992, p. 74 (соавт. Galland

F., Rosnet O., Marchetto S., Pebusque M.-J., deLapeyriere O., Planche J., Courcoul M.A., Dubreuil P., Birg F., Birnbaum D.)

3. Chromosomal localization of FLT4, a novel receptor-type tyrosine kinase gene // Genomics, 1992, v. 13, pp.475-478 (соавт. Galland F., Mattei M.

G., Rosnet O., Marchetto S., Birnbaum D.)

4. The FLT4 gene encodes a transmembrane tyrosine kinase rekated to the vascular endothelial growth factor receptor // Oncogene, 1993, v.8, pp. 1233-1240 (соавт. Galland F., Pebusque M.-J., Borg J.-P., Rottapel R., Dubreuil P., Rosnet O.)

5. FLT4 - новый ген семейства рецептороподобных тирозинкиназ -клонирование, экспрессия в опухолях // Материалы I Съезда онкологов России, 1996 г., М., ч.1, с. 82-83 (соавт. Шушанов С.С., Birnbaum D.)

6. Expression of the FLT4/VEGFR3 receptor tyrosine kinase encoding gene in hepatic tumors // Int. J. Oncology, 1996, v.8, pp. 921-924 (соавт. Shushanov S., Adelaide J., Kakpakova E., Abdryashitov R., Stavrovskaya A., Birnbaum D.)

7. VEGFc and FLT4/VEGFcR expression in human thyroid tumors and various thyroid proliferative disorders, and in cell culture // Proceedings of the UICC Cancer Management Meeting, Vienna, 1997, p. 5 8 (соавт.

Shushanov S., Bronstein M., Adelaide J., Shatalova L., Kakpakova E., Stavrovskaya A., Bimbamn D.)

8. VEGFc expression in various human thyroid diseases // J. Endocrinol. Invest., 1997, v.20, Suppl.2, p.76 (соавт. Bronstein M., Shushanov S., Adelaide J., Shatalova L., Stavrovskaya A., Birnbaum D.)

9. Возможная роль экспрессии VEGFc и его рецептора FLT4 при патологии щитовидной железы человека // Материалы Международной конференции «Рецепция и внутриклеточная сигнализация», Пущино, 1998, с.95-96 (соавт. Шушанов С.С., Бронштейн М.И., Шаталова Л.Д., Ставровская А.А

10. VEGFc modifies tumor cell proliferation in culture // Proceedings of the Int. Conference "Biological basis for antiangiogenic therapy", 1999, Abstr. F-ll (соавт. Shushanov S.S., Kakpakova E.S., Siemeister G., Barleon В., Martiny-Baron G., Marme D., Birnbaum D., Stavrovskaya A.)

11. Expression of VEGFc and its receptor FLT4 (VEGFR3) in human thyroid diseases // Clinical Cancer Res., v.5, Suppl., 1999, Abstr. 32 (соавт. Shushanov S.S., Stavrovskaya A., Bronstein M., Adelaide J., Geneix J., Jacquemier J., Birnbaum D.)

12. Исследование роли нового ростового фактора VEGFc в канцерогенезе // Материалы симпозиума «Биологические основы терапии онкогематологических заболеваний у детей», М., 1999, с. 18 (соавт. Шушанов С.С.)

13. Экспрессия нового ростового фактора семейства VEGF (VEGFc) и его рецептора FLT4 при различных патологиях щитовидной железы человека и в клеточных культурах // Цитология, т.41, 1999, с.324 (соавт. Шушанов С.С., Бронштейн М.И., Шаталова Л.Д., Ставровская А.А.

14. VEGFc and VEGFR3 expression in human thyroid pathologies // Int. J. Cancer, v.86, 2000, pp.47-52 (соавт. Shushanov S.S., Bronstein M.I.,

Adelaide J., Jussila L., Tchipysheva Т., Jacquemier J., Stavrovskaya A., Birnbaum D.)

15. Сравнение экспрессии маркеров ангиогенеза CD31 и лимфангиогенеза VEGFR3 в опухолях щитовидной железы человека // V Ежегодная российская онкологическая конференция, М., 2001 (соавт. Jacquemier J., Birnbaum D., Ставровская A.A.)

16. Изменение активности VEGFc/VEGFR3-3aBHCHMofi сигнальной системы в процессе развития злокачественных новообразований // Материалы международного симпозиума «Биологические основы терапии онкогематологических заболеваний», М., 2001, с.7 (соавт. Какпакова Е.С., Шушанов С.С., Шишкин А.А., Ставровская А.А.)

17. Факторы роста эндотелия сосудов (VEGF): сравнительная характеристика VEGFa- и VEGFc-зависимых систем // Цитология, т.43, 2001, с.353

18. Экспрессия мРНК фактора роста эндотелия сосудов VEGFc и двух изоформ его рецептора VEGFR3 в норме и опухолях человека // Вестник РОНЦ РАМН, №1, 2001, с.3-8 (соавт. Шушанов С.С., Шишкин А.А., Губина О.В., Давыдова И.Ю., Мусаткина Е.А., Кобзева В.К., Ставровская А.А.)

19. Ангиогенез опухоли: механизмы, новые подходы к терапии. В кн. «Канцерогенез», М., изд-во «Научный мир», 2001, с. 298-309.

20. Expression of markers of lymphangiogenesis (VEGFR3) and angiogenesis (CD31) in human thyroid tumors // Int. J. Cancer, Suppl. 13, 2002, p.219 (соавт. Jacquemier J., Geneix J., Stavrovskaya A., Birnbaum D.)

21. Изменение регулирующей лимфангиогенез VEGFR3-3aBHCHMoft сигнальной системы в злокачественных опухолях человека // Вопросы гематологии/ онкологии и иммунопатологии в педиатрии, т.1, №2, с.96

Список литературы диссертационного исследования доктор биологических наук Карамышева, Аида Фуадовна, 2003 год

1. Ahn C.S., Kang J.Y., Rho J.S., et al. Angiogenesis in squamous epithelial lesions of the uterine cervix. // J. Clin. Oncol., 1997, v. 16, pp.552a.

2. Albelda S.M., Muller W.A., Buck C.A., Newman P.J. Molecular and cellular properties of PEC AM-1 (endoCAM/CD31): a novel vascular cell-cell adhesion molecule. // J. Cell. Biol., 1991, v. 14, pp. 1059-1068.

3. Aprelikova O., Pajusola K., Partanen J., Armstrong E., Alitalo R., Bailey S.K., McMahon J., Wasmuth J., Huebner K., Alitalo K. FLT4, a novel class HI receptor tyrosine kinase in chromosome 5q33-qter. // Cancer Res., 1992, v.52, pp.746-748.

4. Arasteh K., Hannah A. The role of vascular endothelial growth factor (VEGF) in AIDS-related Kaposi's sarcoma. // The Oncologist, 2000, v.5, pp.28-31.

5. Benton W.D., Davis R.W. Screening A,gt recombinant clones by hybridization to single plaques in situ. // Science, 1977, v. 196, pp.180.

6. Bernatchez P.N., Soker S., Sirois M.G. Vascular endothelial growth factor effect on endothelial cell proliferation, migration, and platelet-activating factor aynthesis is Flk-1-dependent. // J. Biol. Chem., 1999, v.274, pp.31047-31054.

7. Bochner B.H., Cote R.H., Weidner N. et al. Angiogenesis in bladder cancer: relationship between microvessel density and tumor prognosis. // J. Natl. Cancer Inst., 1995, v.87, pp. 1603-1612.

8. Boocock C.A., Charnock-Jones D.S., Sharkey A.M., et al. Expression of vascular endothelial growth factor and its receptors fit and KDR in ovarian carcinoma. //J. Natl. Cancer Inst., 1985, v.87, pp.506-516.

9. Borg J.P., de Lapeyriere O., Noguchi Т., Rottapel R., Dubreuil P., Birnbaum D. Biochemical characterization of two isoforms of FLT4, a VEGF receptor-related tyrosine kinase. // Oncogene, 1995, v. 10, pp.973984.

10. Busam K.J., Berwick M., Blessing K., Fandrey K., Kang S., Karaoli Т., Fine J., Cochran A.J., White W.L., Rivers J. Tumor vascularity is not a prognostic factor for malignant melanoma of the skin. // Am. J. Pathol., 1995, v. 147, pp. 1049-1056.

11. Cantley L.C., Auger K.R., Carpenter C., Duckworth В., Graziani A., Kapeller R., SoltofF S. Oncogenes and signal transduction. // Cell, 1991, v.64, pp.281-302.

12. Carmeliet P., Collen D. Molecular analysis of blood vessel formation and disease. // Am. J. Physiol., 1997, v.273, pp. H2091-H2104.

13. Carnochan P., Briggs J.C., Westbury G., Davies A.J.S. The vascularity of cutaneous melanoma: a quantitative histological study of lesions 0.85-125 mm thickness. //Br. J. Cancer, 1991, v.64, pp. 102-107.

14. Chen H., Chedotal A., He Z., Goosman C.S., Tessier-Lavigne M. Neuropilin-2, a novel member of the neuropilin family, is a high affinity receptor for the semaphorins Sema E and Sema IV but not Sema III. // Neuron, 1997, v. 19, pp.547-559.

15. De Vries C., Escobedo J.A., Ueno H., Houck K., Ferrara N., Williams L.T. The fins-like tyrosine kinase, a receptor for vascular endothelial growth factor. // Science, 1992, v.255, pp.989-991.

16. Dickinson A.J., Fox S.B., Persad R.A., Hollyer J., Sibley G.N.A., Harris A.L. Quantification of angiogenesis as an independent predictor of prognosis in invasive bladder carcinomas. // Br. J. Urol., 1994, v.74, pp.762-766.

17. Dougher-Vermazen M., Hulmes J.D., Bohlen P., Terman B.L Biological activity and phosphorylation sites of the bacterially expressed cytosolic domain of the KDR VEGF-receptor. // Biochem. Biophys. Res. Communs., 1994, v.205, pp.728-738.

18. Dumont D.J., Yamaguchi T.P., Conlon R.A., Rossant J., Breitman M.L.

19. Тек, a novel tyrosine kinase gene located on mouse chromosome 4, is expressed in endothelial cells, and their presumptive precursors. // Oncogene, 1992, v.7, pp. 1471-1480.

20. Eliceiri B.P., Paul R., Schwartzberg P L., Hood J.D., Leng J., Cheresh D.A. Selective requirement for Src kinases during VEGF-induced angiogenesis and vascular permeability. //Mol. Cell, 1999, v.4, pp.915-924.

21. FantI W.J., Johnson D.E., Wiliams L.T. Signalling by receptor tyrosine kinases. // Annu. Rev. Biochem., 1993, v.62, pp.453-481.

22. Fen Z., Daniel Т.О. 5' Untranslated sequences determine degradative pathway for alternate PDGF B/c-sis mRNA's. // Oncogene, 1991, v.6, pp.953-959.

23. Ferrara N., Henzel W.J. Pituitary follicular cells secrete a novel heparin-binding growth factor specific for vascular endothelial cells. // Biochem. Biophys. Res. Commun., 1989, v.161, pp.851-858.

24. Folkman J. Angiogenesis: therapeutic implications. // N. Engl. J. Med., 1971, v.285, pp. 1182-1186.• 34. Folkman J., D'Amore P. Blood vessel formation: what is its molecularbasis? // Cell, 1996, v.87, pp.1153-1155.

25. Folkman J., Klagsbrun M. Angiogenic factors. // Science, 1987, v.235, pp.442-447.

26. Fong G.H., Rossant J., Gertsenstein M., Breitman M.L. Role of the Flt-1 receptor tyrosine kinase in regulating the assembly of vascular endothelium. //Nature, 1995, v.376, pp.66-70.

27. Fontanini G., Bigini D., Vignati S., Bassolo F., Mussi A., Lucchi M., Chine S., Angeletti C.A., Harris A.L., Bevilacqua G. Microvessel count predicts metastatic disease and survival in non-small cell lung cancer. // J. Pathol., 1995, v. 177, pp.57-63.

28. Foumier E., Blaikie P., Rosnet O., Margolis В., Birnbaum D., Borg J.P. Role of tyrosine residues and protein interaction domains of SHC adaptor in VEGF receptor 3 signaling. // Oncogene, 1999, v.18, pp.507-514.

29. Foumier E., Dubreuil P., Birnbaum D., Borg J.P. Mutatuion at tyrosine residue 1337 abrogates ligand-dependent transforming capacity of the FLT4 receptor. // Oncogene, 1995, v. 11, pp.921-931.

30. Frater-Schroder M., Risau W., Hallmann R., Gautsch P., Bohlen P. Tumor necrosis factor type alpha, a potent inhibitor of endothelial cell growth in vitro, is angiogenic in vivo. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1987, v.84, pp.5277-5281.

31. Galland F., Karamysheva A., Mattei M.G., Rosnet O., Marchetto S., Birnbaum D. Chromosomal localization of FLT4, a novel receptor-type tyrosine kinase gene. // Genomics, 1992, v. 13, pp.475-478.

32. Giatromanlaki A., Koukourakis M., O'Byrne K.M, Fox S., Whitehouse R., Talbot D.C., Harris A.L., Gatter K.C. Prognostic value of angiogenesis in operable non-small cell lung cancer. // J. Pathol., 1996, v. 179, pp,80-88.

33. Gospodarowicz D., Abraham J.A., Schilling J. Isolation and characterization of a vascular endothelial cell mitogen produced by pituitary-derived folliculo stellate cells. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, v.86, pp.7311-7315.

34. Grunstein M., Hogness D. Colony hybridization: A method for the isolation of cloned DNAs that contain a specific gene. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1975, v.72, pp.3961.

35. Hanahan D. Signaling vascular morphogenesis and maintenance. // Science, 1997, v.211, pp.48-50.

36. Hanahan D., Folkman J. Patterns and emerging mechanisms of the angiogenic switch during tumorigenesis. // Cell, 1996, v.86, pp. 353-364.

37. He Z., Tessier-Lavigne M. Neuropilin is a receptor for the axonal chemorepellent Semaphorin III. // Cell, 1997, v.90, pp.739-751.

38. Herold-Mendel C., Mueller M., Fusenig N., Steiner H.H., Reisser C. Expression and functional significance of VEGF receptors in human tumor cells. // Proc. ELSO Meeting, 2002, Abstract 328.

39. Hiratsuka S., Minowa O., Kuno J., Noda Т., Shibuya M. Flt-1 lacking the tyrosine kinase domain is sufficient for normal development and angiogenesis in mice. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1998, v.95, pp.93499354.

40. Houck K.A., Leung D.W., Rowland A.M, Winer J., Ferrara N. Dual regulation of vascular endothelial growth factor bioavailability by genetic and proteolytic mechanisms. // J. Biol. Chem., 1992, v.267, pp.2603126037.

41. Hung C.J., Ginzinger D.G., Zarnegar R., Kanauchi H., Wong M.G., Kebebew E., Clark O.H., Duh Q.Y. Expression of vascular endothelial growth factor-C in benign and malignant thyroid tumors. J. Clin. Endocrinol. Metab., 2003, 88, 3694-3699.

42. Irrthum A., Karkkainen M.J., Devriendt K., Alitalo K., Vikkula M. Congenital hereditary lymphedema caused by a mutation that inactivates VEGFR3 tyrosine kinase. // Am. J. Hum. Gen., 2000, v.67, pp.295-301.

43. Ito N., Wernstedt C., Engstrom U., Claesson-Welsh L. Identification of vascular endothelial growth factor receptor-1 tyrosine phosphorylation sites and binding of SH2 domain-containing molecules. // J. Biol. Chem., 1998, v.273, pp.23410-23418.

44. Jeltsch M., Kaipainen A., Joukov V., Meng X., Lakso M., Rauvala H., • Swartz M., Fukumura D., Jain R.K., Alitalo K. Hyperplasia of lymphaticvessels in VEGF-C transgenic mice. // Science, 1997, v.276, pp. 1423-1425.

45. Joukov V., Sorsa Т., Kumar V., Jeltsch M., Claesson-Welsh L., Cao Y., Saksela O., Kalkkinen N., Alitalo K. Proteolytic processing regulates receptor specificity and activity of VEGF-C. // EMBO J., 1997, v. 16, pp.3898-3911.

46. Karkkainen M.J., Ferrell R.E., Lawrence E.C., Kimak M.A., Levinson K.L., McTigue M.A., Alitalo K., Finegold D.N. Missense mutations interfere with VEGFR-3 signaling in primary lymphoedema // Nature

47. Genet., 2000, v.25, pp.153-159.

48. Kawakami A., Kitsukawa Т., Takagi S., Fujisawa H. Developmental^ regulated expression of a cell surface protein, neuropilin, in the mouse nervous system. // J. Neurobiol., 1995, v.29, pp. 1-17.

49. Keck P.J., Hauser S.D., Krivi G., Sanzo K., Warren Т., Feder J., Connolly D.T. Vascular permeability factor, an endothelial cell mitogen related to PDGF. // Science, 1989, v.246, pp.1309-1312.

50. Kendall R.L., Thomas K.A. Inhibition of vascular endothelial cell growth factor activity by an endogenously encoded soluble receptor. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1993, v.90, pp. 10705-10709.

51. Klagsbrun M. The fibroblast growth factor family: structural and biological properties. // Prog. Growth Factor Res., 1989, v. 1, pp.207-235.

52. Klagsbrun M., D'Amore P.A. Regulators of angiogenesis. // Annu. Rev. Physiol., 1991, v.53, pp.217-239.

53. Koch C.A., Anderson D., Moran M.F., Ellis C., Pawson T. SH2 and SH3 domains: elements that control interactions of cytoplasmic signaling proteins. //Science, 1991, v.252, pp.668-674.

54. Koch A.E., Polverini P.J., Kunkel S.L., Harlow L.A., DiPietro L.A., Elner V.M., Elner S.G., Strieter R.M. Interleukin-8 as a macrophage-derived mediator of angiogenesis. // Science, 1992, v.258, pp. 1798-1801.

55. Kolodkin A.L., Levengood D.V., Rowe E.G., Tai Y.T., Giger R.J., Ginty D.D. Neuropilin is a Semaphorin III receptor. // Cell, 1997, v.90, pp.753762.

56. Kozak, M. An analysis of 5'-noncoding sequences from 699 vertebrate messenger RNAs. //Nucl. Acids Res., 1987, v. 15, pp.8125-8148.

57. Kroll J., Waltenberger J. The vascular endothelial growth factor receptor KDR activates multiple signal transduction pathways in porcrine aortic endothelial cells. // J. Biol. Chem., 1997, v.272, pp.32521-32527.

58. Kukk E., Lymboussaki A., Taira S., Kaipainen A., Jeltsch M., Joukov V., Alitalo K. VEGF-C receptor binding and pattern of expression with VEGFR-3 suggests a role in lymphatic vascular development. // Development, 1996, v. 122, pp.3829-3837.

59. Lauren J., Gunji Y., Alitalo K. Is angiopoietin-2 necessary for the initiation of tumor angiogenesis? // Am. J. Pathol., 1998, v.153, pp.1333-1339.

60. Lee A.H., Dublin E.A., Bobrow L.G., Poulsom R. Invasive lobular and invasive ductal carcinoma of the breast show distinct patters of vascular-endothelial-growth-factor expression and angiogenesis. // J. Pathol., 1998, v.185, pp. 394-401.

61. Lee J., Gray A., Yuan J., Luoh S.-M., Avraham H., Wood W.I. Vascular endothelial growth factor-related protein: A ligand and specific activator of the tyrosine kinase receptor Flt4. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1996, v.93, pp. 1988-1992.

62. Leung D.W., Cachianes G., Kuang W.J., Goeddel D.V., Ferrara N. Vascular endothelial growth factor is a secreted angiogenic mitogen. // Science, 1989, v.246, pp. 1306-1309.

63. Locopo N., Fanelli M., Gasparini G. Clinical significance of angiogenic factors in breast cancer. // Breast Cancer Res. Treat., 1998, v.52, pp. 159173.

64. Lopez-Graniel C.M, Tamez de Leon D., Meneses-Garcia A., Gomez-Ruiz

65. C., Frias-Mendivil M., Granados-Garcia M., Barrera-Franco J.L. Tumor angiogenesis as a prognostic factor in oral cavity carcinomas. // J. Exp. Clin. Cancer Res., 2001, v.20, pp.463-468.

66. Macchiarini P., Fontanini G., Hardin M.J., Squartini F., Angeletti C.A. Relation of neovascularisation to metastasis of non-small-cell lung cancer. II Lancet, 1992, v.340, pp. 145-146.

67. Maglione D., Guerriero V., Viglietto G., Delli-Bovi P., Persico M.G. Isolation of a human placenta cDNA coding for a protein related to the vascular permeability factor. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1991, v.88, pp.9267-9271.

68. Maisonpierre P.C., Suri C., Jones P.F., Bartukova S., Wiegand S.J.,

69. Radziejewski C., Compton D., McClain J., Aldrich Т.Н., Papadopoulos N., Daly T.J., Davis S., Sato T.N., Yancopoulos G.D. Angiopoietin-2, a naturalantagonist for Tie2 that disrupts in vivo angiogenesis. // Science, 1997, v.277, pp.55-60.

70. Massague J. The transforming growth factor (3 family. // Ann. Rev. Cell. Biol., 1990, v.6, pp.597-641.

71. Mattern J., Koomagi R., Volm M. Association of vasculat endothelial growth factor expression with intratumoral microvessel density and tumour cell proliferation in human epidermoid lung carcinoma. // Br. J. Cancer, 1996, v.73, pp.931-934.

72. McAustin B.R., Bender V., Reilly W., Moss B.A. New functions of epidermal growth factor: stimulation of capillary endothelial cell migration and matrix dependent proliferation. // Cell. Biol. Int. Rep., 1985, v.9, pp. 175-182.

73. Meiter D., Crawford S.E., Rademaker A.W., Cohn S. Tumor angiogenesis correlates with metastatic disease, m-myc amplification, and poor outcome in human neuroblastoma. // J. Clin. Oncol., 1996, v. 14, pp.405-414.

74. Millauer В., Shawver L.K., Plate K.H., Risau W., Ullrich A. Glioblastoma growth inhibited in vivo by a dominant-negative Flk-1 mutant. // Nature, 1994, v.367, pp.576-579.

75. Millauer В., Wizigmann-Voos S., Schnurch H., Martinez R., Moller N.P., Risau W., Ullrich A. High affinity VEGF binding and developmental expression suggest Flk-1 as a major regulator of vasculogenesis and angiogenesis. // Cell, 1993, v.72, pp.835-846.

76. Obermair A., Kurz C., Czerwenka K., Thoma M., Kaider A., Wagner Т., Gitsch G., Sevelda P. Microvessel density and vessel invasion in lymph-node-negative breast cancer: effect on recurrence-free survival. // Int. J. Cancer, 1995, v.62, pp.126-131.

77. O'Brien Т., Cranston D., Fuggle S., Bicknell R., Harris A.L. Different angiogenic pathways characterize superficial and invasive bladder cancer. // Cancer Res., 1995, v.55, pp.510.

78. Ohta Y., Endo Y., Tanaka ML, Shimizu J., Oda M., Hayashi Y., Watanabe Y., Sasaki T. Significance of vascular endothelial growth factor messenger RNA expression in primary lung cancer. // Clin. Cancer Res., 1996, v.2, pp.1411-1416.

79. Olson T.A., Mohanraj D., Carson L.F., Ramakrishnan S. Vascular permeability factor gene expression in normal and neoplastic human ovaries. // Cancer Res., 1993, v.54, pp.276-280.

80. Orlandini M., Marconcini L., Ferruzzi R., Oliviero S. Identification of a c-fos-induced gene that is related to the platelet-derived growth factor/ vascular endothelial growth factor family. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1996, v.93, pp. 11675-11680.

81. Pajusola K., Aprelikova O., Pelicci G., Weich H., Claesson-Welsh L., Ahtalo K. Signalling properties of FLT4, a proteolytically processed receptor tyrosine kinase related to two VEGF receptors. // Oncogene, 1994, v.9, pp.3545-3555.

82. Plate K.H., Breier G., Weich H.A., Risau W. Vascular endothelial growth gactor is a potential tumor angiogenesis factor in human gliomas in vivo. II Nature, 1992, v.359, pp.845-848.

83. Puri M.C., Rossant J., Alitalo K., Bernstein A., Partanen J. The receptor tyrosine kinase TIE is required for integrity and survival of vascular endothelial cells. // EMBO J., 1995, v.14, pp.5884-5891.

84. Quinn T.P., Peters K.G., De Vries C., Ferrara N., Williams L.T. Fetal liver kinase 1 is a receptor for vascular endothelial growth factor and is selectively expressed in vascular endothelium. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1993, v.90, pp.7533-7537.

85. Rao C.D., Pech M., Robbins K.C., Aaronson S.A. The 5' untranslated sequence of the c-sw/platelet-derived growth factor 2 transcript is a potent translational inhibitor. //Mol. Cell. Biol., 1988, v.8, pp.284-292.

86. Risau W. Mechanisms of angiogenesis. // Nature, 1997, v.386, pp.671-674.

87. Ristimaki A., Narko K., Enholm В., Joukov V., Alitalo K. Proinflammatory cytokines regulate expression of the lymphatic endothelial mitogen vascular endothelial growth factor-C. // J. Biol. Chem., 1998, v.273, pp.8413-8418.

88. Rosen E.M., Grant D.S., Kleinman H.K., Goldberg I.D., Bhargava M.M., Nickoloff B.J., Kinsella J.L., Polverini P. Scatter factor (hepatocyte growth factor) is a potent angiogenic factor in vivo. // Symp. Soc. Exp. Biol., 1993, v.47, pp.227-234.

89. Rosnet O., Marchetto S., deLapeyriere O., Birnbaum D. Murine Flt3, a gene encoding a novel tyrosine kinase receptor of the PDGFR/CSF1R family. // Oncogene, 1991, v.6, pp.1641-1650.

90. Rosnet О., Mattei M.G., Marchetto S., Birnbaum D. Isolation and chromosomal localization of a novel FMS-like tyrosine kinase gene. // Genomics, 1991, v.9, pp.380-385.

91. Rosnet O., Stephenson D., Mattei M.G., Marchetto S., Shibuya M., Chapman V.M., Birnbaum D. Close physical linkage of the FLTI and FLT3 genes on chromosome 13 in man and chromosome 5 in mouse. // Oncogene, 1993, v.8, pp. 173-179.

92. Saaristo A., Karpanen Т., Alitalo K. Mechanisms of angiogenesis and their use in the inhibition of tumor growth and metastasis. // Oncogene, 2000, v.19, pp.6122-6129.

93. Sait S.N., Dougher-Vermazen M., Shows T.B., Terman B.I. The kinase insert domain receptor gene (KDR) has been relocated to chromosome 4qll^ql2. // Cytogenet. Cell Genet., 1995, v.70, pp.145-146.

94. Salven P., Ruotsalainen Т., Mattson K., Joensuu H. High pretreatment serum level of vascular endothelial growth factor (VEGF) is associated with poor outcome in small-cell lung cancer. // Int. J. Cancer, 1998, v.79, pp.144.

95. Sato T.N., Qin Y., Kozak C.A., Audus K.L. Tie-1 and tie-2 define a new class of putative receptor tyrosine kinase genes expressed in early embryonic vascular system. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1993, v. 90, pp.9355-9358.

96. Satoh H., Yoshida M.C., Matsushime H., Sliibuya M., Sasaki M. Regional localization of the human c-ros-1 on 6q22 and fit on 13ql2. // Jpn. J. Cancer Res. (Gann), 1987, v.78, pp.772-775.

97. Seetharam L., Gotoh N., Maru Y., Neufeld G., Yamaguchi S., Shibuya M. A unique signal transduction from FLT tyrosine kinase, a receptor for vascular endothelial growth factor VEGF. // Oncogene, 1995, v. 10, pp. 135147.

98. Senger D.R., Perruzzi C.A., Feder J., Dvorak H.F. A highly conserved vascular permeability factor secreted by a variety of human and rodent tumor cell lines. // Cancer Res., 1986, v.46, pp.5629-5632.

99. Shalaby F., Ho J., Stanford W., Fisher K., Schuh A., Schwartz L., Bernstein A., Rossant J.A. A requirement for Flk-1 in primitive and definitive hematopoiesis and vasculogenesis, // Cell, 1997, v.89, pp.981990.

100. Shalaby F., Rossant J., Yamaguchi T.P., Gertsenstein M., Wu X.F., Breitman M.L., Schuh A.C. Failure of blood-island formation and vasculogenesis in Flk-1-deficient mice. // Nature, v.376, pp.62-66, 1995.

101. Shibuya M., Ito N, Claesson-Welsh L. Structure and function of vascular endothelial growth factor receptor-1 and -2. // Curr. Top. Microbiol. Immunol., 1999, v.237, pp.59-83.

102. Shweiki D., Itin A., Soffer D., Keshet E. Vascular endothelial growth factor induced by hypoxia may mediate hypoxia-initiated angiogenesis. // Nature, 1992, v.359, pp.843-845.

103. Slavin J. Fibroblast growth factors: at the heart of angiogenesis. // Cell Biol. Int., 1995, v.19, pp.431-444.

104. Soker S., Takashima S., Miao H.Q., Neufeld G., Klagsbrun M. Neuropilin-1 is expressed by endothelial and tumor cells as an isoform-specific receptor for vascular endothelial growth factor. // Cell, 1998, v.92, pp.735745.

105. Srivastava A., Laidler P., Davies R.P., Horgan K., Hughes L.E. The prognostic significance of tumor vascularity in intermediate-thickness (0.76-4.0 mm thick) skin melanoma // Am. J. Pathol., 1988, v. 133, pp.419423.

106. Suri C., Jones P.F., Patan S., Bartunkova S., Maisonpierre P.C., Davis S., Sato T.N., Yancopoulos G.D. Requisite role of angiopoietin-1, a ligand for the TIE2 receptor, during embryonic angiogenesis. // Cell, 1997, v. 87, pp. 1161-1169.

107. Takagi S., Kasuya Y., Shimizu M., Matsuura Т., Tsuboi M., Kawakami A., Fujisawa H. Expression of a cell adhesion molecule, neuropilin, in the developing chick nervous system. // Dev. Biol., 1995, v. 170, pp.207-222.

108. Tanaka S., Ouchi Т., Hanafusa H. Downstream of Crk adaptor signaling pathway: Activation of Jun kinase by v-Crk through the guanine nucleotide exchange protein C3G. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1997, v.94, pp.23562361.

109. Thakker G.D., Hajjar D.P., Muller W.A., Rosengart Т.К. The role of phosphatidylinositol 3-kinase in vascular growth factor signaling. // J. Biol. Chem., 1999, v.274, pp. 10002-10007.

110. Thurston G., Suri C., Smith K., McClain J., Sato T.N., Yancopoulos G.D., McDonald D. Angiopoietin-1 makes blood vessels resistant to plasma leakage. // Science, 2000, v.286, pp.2511-2514.

111. Tischer E., Mitchell R., Hartman Т., Silva M., Gospodarowicz D., Fiddes J.C., Abraham J.A. The human gene for vascular endothelial growth factor. //J. Biol. Chem., 1991, v.266, pp. 11947-11954.

112. Toi M., Hoshina S., Takayanagi Т., Tominaga T. Association of vascular endothelial growth factor expression with tumor angiogenesis and with early relapse in primary breast cancer. // Jpn. J. Cancer Res., 1994, v.85, pp. 1045-1049.

113. Toi M., Inada fL, Suzuki H., Tominaga T. Tumor angiogenesis in breast cancer: Its importance as a prognostic indicator and the association with vascular endothelial growth factor expression. // Breast Cancer Res. Treat., 1995, v.36, pp. 193-204.

114. Ullrich A., Schlessinger J. Signal transduction by receptors with tyrosine kinase activity. // Cell, 1990, v.61, pp.203-212.

115. Waltenberger J., Claesson-Welsh L., Siegbahn A., Shibuya M., Heldin C.H. Different signal transduction properties of KDR and FLT1, two receptors for vascular endothelial growth factor. // J. Biol. Chem., 1994, v.269, pp.26988-26995.

116. Wang J.F., Ganju R.K., Liu Z.Y., Avraham H., Avraham S., Groopman J.E. Signal trandsuction in human hematopoietic cells by vascular endothelial growth factor related protein, a novel ligand for the FLT4 receptor. // Blood, 1997, v.90, pp.3507-3515.

117. Weidner N., Carroll P.R., Flax J., Blumenfeld W., Folkman J. Tumor angiogenesis correlates with metastasis in invasive prostate carcinoma. // Am. J. Pathol., 1991, v. 143, pp.401-409.

118. Weidner N., Semple J.P., Welch W.R., Folkman J. Tumor angiogenesis and metastasis correlation in invasive breast carcinoma. // N. Engl. J. Med., 1991, v.324, pp. 1-8.

119. Witzenbichler В., Maisonpierre P.C., Jones P., Yancopoulos G.D., Isner J.M. Chemotactic properties of angiopoietin-1 and -2, ligands for the endothelial-specific receptor tyrosine kinase Tie2. // J. Biol. Chem., 1998, v.273, pp.l8514-18521.

120. Yamada Y., Nezu J., Shimane M., Hirata Y. Molecular cloning of a novel vascular endothelial growth factor, VEGF-D. // Genomics, 1997, v.42, pp.483-488.

121. Я очень признательна проф. Марии Ильиничне Бронштейн

122. Эндокринологический научный центр РАМН, г.Москва) за патоморфологическую характеристику исследованных в нашей работе образцов ткани с различной патологией щитовидной железы человека и за оказанную помощь в сборе этих образцов.

123. Я чрезвычайно благодарна ведущему научному сотруднику лаборатории механизмов канцерогенеза к.б.н. Тамаре Адольфовне Чипышевой за предоставление криосрезов опухолей щитовидной железы человека и за помощь в освоении метода иммуногистохимии.

124. Огромное спасибо всем сотрудникам лаборатории генетики опухолевых клеток и многим другим сотрудникам НИИ канцерогенеза и НИИ ЭДиТО, постоянное внимание и поддержку которых я ощущала во время подготовки этой работы.