Экзоцитоз и транслокация на клеточную поверхность белков теплового шока 70 КДА в популяциях лимфоидных клеток тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.36, кандидат биологических наук Гусарова, Галина Алексеевна

• Гусарова, Галина Алексеевна
• кандидат биологических наук
• 2003

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Гусарова, Галина Алексеевна

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 1. СИСТЕМА БЕЛКОВ ТЕПЛОВОГО ШОКА

Функции БТШ.

Семейства белков теплового шока 70.

Шаперонные функции БТШ.

Протективные функции БТШ.

ГЛАВА 2. БТШ И АПОПТОЗ

ГЛАВА 3. БТШ И ИММУННЫЙ ОТВЕТ

Вовлеченность БТШ в процессы представления антигена.

Антигенность БТШ, представленных на поверхности микроорганизмов.

Поверхностные БТШ и иммунологический надзор.

БТШ и аутоиммунные патологи.

Экспрессия БТШ при опухолевых заболеваниях.

Использование БТШ для создания вакцин.

ГЛАВА 4. ВНЕКЛЕТОЧНЫЙ ПУЛ БТШ. ВОЗМОЖНЫЕ ПРОДУЦЕНТЫ ВНЕКЛЕТОЧНЫХ БТШ И ПРЕДПОЛАГАЕМЫЕ

ФУНКЦИИ ЭТИХ ПРОТЕИНОВ.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

ГЛАВА 5. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

ГЛАВА 6. ЭКСПРЕССИЯ БЕЖОВ ТЕПЛОВОГО ШОКА

ЛИМФОИДНЫМИ КЛЕТКАМИ.

Экспрессия БТШ в популяциях тимоцитов, спленоцитов, клеток лимфатических узлов и костного мозга мыши.

Экспрессия БТШ70 активированными Т-лимфоцитами.

Экспрессия БТШ линиями лимфоидных клеток.

Феномен транслокации БТШ на поверхность апоптозных клеток.

ГЛАВА 7. ВОЗМОЖНЫЕ МЕХАНИЗМЫ ТРАНСЛОКАЦИИ БЕЛКОВ ТЕПЛОВОГО ШОКА НА ПОВЕРХНОСТЬ ЛИМФОИДНЫХ КЛЕТОК

Влияние ингибиторов транспорта и секреции внутриклеточных протеинов на транслокацию БТШ70 на поверхность клеток лимфомы EL-4.

Экспрессия поверхностных БТШ70 в моделях гипертонического и гипотонического стресса клеток EL-4 и в условиях блокирования хлорных каналов плазматических мембран.

Экспрессия поверхностных БТШ70 клетками EL-4, стрессированными повреждающими значениями рН среды.

Возможные причины и механизмы транслокации БТШ70 на клеточную поверхность в процессе апоптоза лимфоидных клеток.

ГЛАВА 8. ФЕНОМЕН ЭКЗОЦИТОЗА БТШ70 В КУЛЬТУРАХ АКТИВИРОВАННЫХ ЛИМФОИДНЫХ КЛЕТОК

Присутствие БТШ70 в супернатанте культуры EL-4.

Внеклеточный пул БТШ70 в культуре КонА-активированных Тлимфоцитов мыши.

Влияние ингибиторов секреции протеинов на интенсивность экзоцитоза БТШ70 в культуре клеток лимфомы EL-4.

Возможные механизмы экзоцитоза БТШ70 лимфоидными клетками.

ГЛАВА 9. ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ ЭКЗОГЕННЫХ БТШ70 С ЛИМФОИДНЫМИ КЛЕТКАМИ

Взаимодействие БТШ70 с клеточной поверхностью и интернализация этих протеинов различными типами лимфоидных клеток.

Протективный эффект экзогенных БТШ70 в культурах лимфоидных клеток.

Возможные функции внеклеточного пула БТШ70.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Экзоцитоз и транслокация на клеточную поверхность белков теплового шока 70 КДА в популяциях лимфоидных клеток»

Белки теплового шока (БТШ) являются внутриклеточными протеинами, обладающими обслуживающими и протективными функциями по отношению к другим протеинам, функционирующим в клетках. Однако в ряде случаев, БТШ локализуются на клеточной поверхности и присутствуют в межклеточном пространстве. В последние годы было установлено, что внеклеточные формы БТШ обладают уникальными иммуномодулирующими свойствами. Использование препаратов БТШ в экспериментальных моделях позволяет направленно и эффективно усиливать иммунный ответ на опухолевые антигены и различные патогены, или наоборот, подавлять нежелательные аутоиммунные реакции. Известно также, что экзогенные, внеклеточные БТШ способны взаимодействовать с клеточной поверхностью и проникать в клетки. Причем интернализованные БТШ сохраняют свои протективные функции и защищают клетки от гибели. В связи с этим очевидно, что наряду с внутриклеточными и поверхностными БТШ, внеклеточная форма этих протеинов также может оказывать влияние на функционирование популяций иммунокомпетентных клеток. Иммуномодулирующее действие экзогенных БТШ в настоящее время интенсивно изучается в связи с обнаружением у этих протеинов выраженных адъювантных и иммуностимулирующих свойств. Установлено, что один из механизмов данного эффекта БТШ связан с их активацией антигенпредставляющих клеток. В то же время, с большой вероятнстью можно предположить, что зарегистрированные иммуномодулирующие свойства экзогенных БТШ связаны с действием этих протеинов не только на антигенпредставляющие клетки, но и на популяции лимфоцитов. Существуют также данные об активных иммунных реакциях на БТШ, представленных на поверхности инфицированных и опухолевых клеток. Очевидно, что для успешного практического использования таких уникальных свойств БТШ необходимы исследования механизмов их взаимодействия с иммунной системой. В настоящее время охарактеризовано взаимодействие БТШ лишь с одной из популяций иммунокомпетентных клеток - антигенпредставляющими клетками, и практически не изучена роль БТШ в функционировании лимфоидных клеток. Наряду с этим, до сих пор неизвестны причины и механизмы иммунологически значимой поверхностной локализации БТШ и остается спорным вопрос о происхождении внеклеточного пула БТШ, способного проявлять выраженные иммуномодулирующие свойства. Недостаток сведений о роли БТШ в функционировании иммунной системы, и в частности популяций лимфоидных клеток, сдерживает разработку подходов к иммунотерапевтическому и диагностическому применению БТШ.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

Целью работы является исследование закономерностей экспрессии основного представителя семейства белков теплового шока - БТШ70 (с молекулярной массой 70 кДа) различными лимфоидными клетками, анализ процесса транслокации этих протеинов на клеточную поверхность и процесса их экзоцитоза в межклеточное пространство в популяциях Т-лимфоцитов. Существенной составляющей цели данного исследования является также изучение взаимодействия экзогенных БТШ70 с Т-лимфоцитами.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Характеристика уровня экспрессии БТШ70 в различных популяциях лимфоидных клеток.

2. Анализ феномена транслокации БТШ70 на поверхность лимфоидных клеток.

3. Исследование процесса экзоцитоза БТШ70 в культурах лимфоидных клеток in vitro.

4. Анализ процесса взаимодействия экзогенных БТШ70 с различными лимфоидными клетками.

5. Тестирование протективных функций внеклеточного пула БТШ70.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Проблема взаимодействия БТШ с иммунной системой привлекла интерес исследователей сравнительно недавно и в настоящее время достаточно полно охарактеризована лишь роль эндогенных и экзогенных БТШ в функционировании антигенпредставляющих клеток. Роль БТШ в функционировании популяций лимфоидных клеток практически не исследована. Поэтому все основные результаты данного исследования обладают высокой степенью научной новизны. В частности, впервые было продемонстрировано различие уровня экспрессии БТШ70 в популяциях лимфоидных клеток различного органного происхождения. Проанализирован процесс транслокации цитоплазматических БТШ70 на клеточную поверхность лимфоцитов. Охарактеризовано влияние ингибиторов аппарат Гольджи зависимой секреции протеинов на экспрессию БТШ70 и их транспорт на поверхность лимфоидных клеток. Наряду с перечисленными данными, характеризующими внутриклеточный и поверхностный пулы БТШ, были получены свидетельства об экзоцитозе БТШ70 в культуре активированных Т-лимфоцитов и влиянии на этот процесс ингибиторов секреции протеинов. Впервые продемонстрировано также взаимодействие внеклеточных экзогенных БТШ70 с лимфоцитами различного органного происхождения, заключающееся в адсорбции этих протеинов на клеточной поверхности и в последующем эндоцитозе адсорбированных молекул живыми клетками.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ

Белки теплового шока обладают уникальными иммуностимулирующими и адъювантными свойствами, которые позволяют создавать на основе БТШ эффективные противоопухолевые и противоинфекционные вакцины. В настоящее время проводятся клинические испытания некоторых разновидностей таких вакцин. В то же время, иммунизация экспериментальных животных препаратами БТШ позволяет предотвратить патологические аутоиммунные реакции. Известно также, что появление в сыворотке крови БТШ и антител к ним является характерным диагностическим признаком определенных этапов развития ряда патологий. Все это свидетельствует о значительных потенциальных возможностях применения БТШ в клинической практике. Очевидно, что для реализации таких возможностей необходимо изучение процессов взаимодействия БТШ с иммунной системой. Исходя из этого, данная работа, посвященная исследованию роли БТШ в функционировании лимфоидных клеток, обладает существенной практической значимостью. Значительный интерес для возможного практического применения имеют полученные в работе данные о секреции БТШ лимфоцитами. Они проливают свет на источник внеклеточного пула БТШ, обладающего выраженным влиянием на развитие иммунных реакций. Можно предположить, что направленный контроль экзоцитоза БТШ лимфоидными клетками может служить основой для разработки нового подхода к проблеме иммунорегуляции.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

Материалы диссертации представлены на международном иммунологическом конгрессе (Нью-Дели, 1998), на четвертой научной конференции с международным участием "Дни иммунологии в Санкт-Петербурге" (Санкт-Петербург,2000), на пятой международной иммунологической летней школе им. Дж. Хэмфри (Пущино, 2000), на пятой научной конференции с международным участием "Дни иммунологии в Санкт-Петербурге" (Санкт-Петербург,2001), на четырнадцатой международной зимней молодежной научной школе "Перспективные направления физико-химической биологии и биотехнологии" (Москва,2002), на шестой международной иммунологической летней школе им. Дж. Хэмфри (Пущино, 2002).

ПУБЛИКАЦИИ

По теме диссертации опубликовано 18 печатных работ.

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ

Диссертация состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы (глава 1, 2, 3 и 4), материалов и методов (глава 5), результатов исследований и обсуждения (глава 6, 7, 8 и 9), выводов и списка литературы. Работа изложена на 121 страницах машинописного текста, содержит 24 рисунков, 2 таблицы. Список литературы включает 131 источник, из которых 127 иностранных.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Аллергология и иммулология», Гусарова, Галина Алексеевна

выводы

1. Уровень экспрессии белков теплового шока с молекулярной массой 70 кДа (БТШ70) существенно варьирует в лимфоидных клетках мышей одного и того же пула, однако достоверно различается у лимфоцитов различного органного происхождения. У мышей линий C57BL/6, BALB/c, СВА интенсивность экспрессии БТШ70 в различных лимфоидных органах убывает в ряду: лимфоциты костного мозга > лимфатические узлы > спленоциты > тимоциты. Содержание внутриклеточных БТШ70 у Т-лимфоцитов увеличивается под действием их митоген-индуцированной активации.

2. Ингибиторы транспорта протеинов усиливают интенсивность транслокации цитоплазматических БТШ70 на поверхность лимфоидных клеток, что свидетельствует о неклассическом механизме транспорта БТШ70 на клеточную поверхность.

3. Активированные in vitro Т-лимфоциты мыши, как и клетки лимфомы EL-4 секретируют растворимый пул БТШ70 в межклеточное пространство. Уровень продукции этих протеинов в культуре клеток EL-4 составляет около 5-10 мкг на 1 млн. клеток за 24 часа инкубации.

4. Ингибиторы секреции протеинов моненсин и брефелдин А не препятствуют, а стимулируют экзоцитоз БТШ70 в культурах активированных лимфоидных клеток, что указывает на независимость секреции БТШ70 от аппарата Гольджи.

5. Механизм секреции активированными лимфоидными клетками БТШ70 связан с формированием экзосом и их продукцией в межклеточное пространство.

6. Экзогенные БТШ70 взаимодействуют с тимоцитами, спленоцитами, клетками лимфатических узлов и костного мозга мышей, а также с КонА-активированными Т-лимфоцитами и клетками лимфомы EL-4. Это выражается в связывании БТШ70 с клеточной поверхностью и в их последующей интернализации.

7. Внеклеточный пул БТШ70 обладает протективными свойствами по отношению к популяции культивируемых лимфоцитов. Присутствие экзогенных БТШ70 противодействует апоптозу этих клеток и предотвращает их гибель в условиях дефицита аутокринных факторов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Гусарова, Галина Алексеевна, 2003 год

1. Луценко Г.В., Дьячкова Л.Г. (2003) Роль энергетического метаболизма клеток цитотоксической линии CTLL-2 в механизме контроля их выживания аутокринными факторами. Биол. Мембраны, Т.20, N 5,402409.

2. Петров Р.В. //Иммунология. 1982. - Медицина, М.

3. Сапожников A.M. (1987) Исследование связи иммуномодулирующих свойств поликатионов с параметрами их адсорбции на поверхности иммунокомпетентных клеток" Дисс. на соиск. уч. ст. к.б.н., М.

4. Ярилин А.А. (1996) Апоптоз и его место в иммунных процессах. Иммунология 2,10.

5. Anderson К., and Cresswell P. (1994) A role of calnexin (IP90) in the assembly of class IIMHC molecules. EMBO J. 13: 675-682.

6. Anderton S.M, van der Zee R, Noordzij A, van Aden W. (1994) Differential mycobacterial 65-kDa heat shock protein T cell epitope recognition after adjuvant arthritis-inducing or protective immunization protocols J. Immunol. 152:3656

7. Arata S, Hamaguchi S, Nose K. (1995) Effects of the overexpression of the small heat shock protein, HSP27, on the sensitivity of human fibroblast cells exposed to oxidative stress. J Cell. Physiol. 163,458.

8. Arnold D., Wahl C., Faath S., Rammensee H., Shild H. (1997) Influences of transporter associated with antigen processing (TAP) on the repertoire of peptides associated with the endoplasmic reticulum-resident stress protein gp96. J Exp Med 186: 461-466.

9. Arnold-Schild D., Hanau D., Spehner D., Schmid C., Rammensee H-G., de la Salle H., Schild H. (1999) Receptor-mediated Endocytosis of Heat-Shock Proteins by Professional Antigen-Presenting Cells. J. Immunol. 162: 37573760.

10. Baki K.,Hutter E.,Gonchoroff N.J., Perl A. (1999) Elevation of Mitochondrial Transmembrane potential and Reactive Oxygen Intermediate levels are early events and occur independently from activation of caspases and Fas signaling. J. Immunol., 162, 1466.

11. Banki K, Hutter E, Gonchoroff NJ, Perl A (1999) Elevation of mitochondrial transmembrane potential and reactive oxygen intermediate levels are early events and occur independently from activation of caspases in Fas signaling. J Immunol. 162, 1466.

12. Basu S., Binger R., Ramalingam Т., Srivastava P. (2001) CD91 is a common receptor for heat shock protein gp96, hsp90, hsp70, and calreticulin. Immunity 14: 303-313.

13. BeckS., De Maio A. (1994) Stabilization of protein synthesis in termotolerant cells during heat shock.Association of heat shock protein-72 with ribosomal subunits of polysomes. J.Biol.Chem. 269: 21803-21811.

14. Beere H. (2001) Stressed to death: regulation of apoptotic signaling pathways by heat shock proteins. Science's stke, 2001,93.

15. Beere H., Wolf В., Cain K., Mosser D., Mahboubi A., Kuwana Т., Tailor P., Morimoto R., Cohen G., Green D. (2000) Heat shock protein 70 inhibits apoptosis by preventing recruitment of procaspase-9 to Apaf-1 apoptosome. Nat.Cell.Biol. 2,469-475.

16. Beere HM, Hickman JA, Morimoto RI, Parmar R, Newbould R, Waters CM. (1993) Changes in hsc70 and c-myc in HL-60 cells engaging differentiation or apoptosis. Mol.Cell.Diff. 1,323.

17. Bharadwaj S., Ali A., Ovsenek N.(1999) Multiple components of the HSP90 chaperone complex function in regulation of heat shock factor 1 in vivo. Mol Cell Biol. 19:8033-8041.

18. Binger R., Blanchere N., Srivastava P (2001) Heat-shock protein-chaperoned peptides but not free peptides introduced into the cytosol are presentedefficiently by major histocompatibility complex I molecules. J. Biol. Chem. 276:20, 17163-17171.

19. Binger R.,Han D.,Srivastava P. (2000) CD91: a receptor for heat shock protein gp96. Nat. Immunol. 1: 151-155.

20. Bonnerot C., Marks M., Cosson P., Robertson E., Bikof E., Germain R., Bonifacino J. (1994) Association with Bip and agregation of class II MHC molecules synthesized in the absence of invariant chain. EMBO J. 13: 934944.

21. Bruey J., Ducasse C., Bonniaud P., Ravagnan L., Susin S., Diaz-Latoud C., Gurbuxani S., Arrigo A., Kroemer G., Solary E., Garrido C. (2000) Hsp27 negatively regulates cell death by interacting with cytochrome c. Nat.Cell.Biol. 2, 645-652.

22. Bucher J. (1999) HSP90 and Co.-a holding for folding. TIBS, 24,136-141.

23. Burnette W.N. (1981) Western blotting: electrophoretic transfer of proteins from sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gels to unmodified nitrocellulose and radiographic detection with antibody and radioiodinated protein A. Anal.Biochem. 12, 195-203.

24. Chen D., Androlewicz M. (2001) Heat shock protein 70 moderately enhances peptide binding and transport by the transporter associated with antigen processing. Immunol Lett. 75: 143-148.

25. Craig EA, Weissman JS, Horwich AL (1994) Heat shock proteins and molecular chaperones: mediators of protein conformation and turnover in the cell. Cell 78,365.

26. Creagh E., Cotter T. (1999) Selective protection by Hsp 70 against cytotoxic drug- but not Fas-induced T-cell apoptosis. Immunology 97,36-44.

27. Demand J et al. (1998) The carboxy-terminal domain of Hsc70 provides binding sites for a distinct set of chaperone cofactors. Mol.Cell.Biol. 18, 2023-2028.

28. Dukan S., Farewell A., Ballesteros M., Taddei F., Radman M., Nystrom T. (2000) Protein oxidation in response to increased transcriptional or translational errors. PNAS 97: 5746-5749.

29. Ellis J. (1987) Proteins as molecular chaperones. Nature, 328: 378-379.

30. Erkeller-Yeksel F, Isenberg D, Dhillon V, Latchman D, Lydyard P (1992) Surface expression of heat shock protein 90 by blood mononuclear cells from patients with systemic lupus erythematosus. J.Autoimmun. 5,803-14.

31. Erkeller-Yueksel F., Isenberg D., Dhillon V., Latchman D., Lydyard P. (1992) Surface expression of heat-shock protein 90 by blood mononuclear cells from patients with systemic lupus erythematosus. J.Autoimmun. 5: 803-814.

32. Ernani F., Teale J. (1993) Release of stress proteins from Mesocestoides corti is a brefeldin-A inhibitable process: evidence for active export of stress proteins. Infect Immunol. 61: 2596-601.

33. Fadok V. A., Voelker D. R., Capbell P. A. Cohen J. J., Bratton D. L., Henson P. M. (1992) xposure of phosphatidylserine on the surface ofapoptotic lymphocytes triggers specific recognition and removal by macrophages J. Immunol., 148, 2207.

34. Feder M.E., Hofmann G.E. (1999) Heat-shock proteins, molecular chaperones, and the stress response: evolutionary and ecological physiology. Annu. Rev. Physiol., 61, 243-282.

35. Ferranini M.,Heltai S„ Zocchi M.R. and Rugarli C. (1992) Unusial expression and localization of heat shock proteins. Int.J.Cancer, 51,613.

36. Ferrarini M, Heltai S, Zocchi MR, Rugarli С (1992) Unusual expression and localization of heat-shock proteins in human tumor cells. Int J. Cancer 51, 613.

37. Ferrero R., Thiberge J-M., Kansau I., Wuscher N., Huerre M., Labigne A. (1995) The groES homolog of Helicobacter pylori confers protective immunity against mucosal infection in mice. PNAS 92: 6499-6503.

38. Finkel Т., Holbrook N. (2000) Oxidants, oxidative stress and the biology of ageing. Nature 408: 239-247.

39. Freedman M., Buu N., Ruijs Т., Williams K., Antel J. (1992) Differential expression of heat shock proteins by human glial cells. J. Neuroimmunol. 41, 231-238.

40. Fujihara S., Nadler S. (1999) Intranuclear targeted delivery of functional NF-kB by 70kDa heat shock protein. EMBO J., 18, 2,411-419.

41. Gabai V, Meriin A, Mosser D, Caron A, Rits S, Shifrin V, Sherman M (1997) HSP 70 prevents activation of stress kinases . A novel pathway of cellular thermotolerance. J. Biol.Chem.,.272: 29, 18033-18037

42. Garrido C., Gurbuxani S., Ravagnan L., Kroemer G. (2001) Breakthroughs and views Heat shock proteins: Endogenous Modulators of apoptotic cell death. Bioch &Biophis. Research Commun. 286,433-442.

43. Gordon S., Hoffman R., Simmons R. (1997) Induction of Heat Shock Protein 70 protects Thymocytes Against Radiation-Induced Apoptosis. Arch Surg 132:1277-1282.

44. Guppy M, Greiner E, Brand K. (1993) The role of the Crabtree effect and an endogenous fuel in the energy metabolism of resting and proliferating thymocytes. Eur J Biochem Feb 15;212(l):95-9

45. Hightower L., Guidon P. (1989) Selective release from cultured mammalian cells of heat -shock(stress) proteins that resemble glia-axon transfer proteins. J Cell Physiol 138(2): 257-66.

46. Hiromatsu K., Yoshikai Y., Matsuzaki G., Ohga S., Muramatori K., Matsumoto K., Bluestone J., Nomoto K. (1992) A protective role of yS T cells in primary infection with Listeria monocytogenes in mice. J.Exp.Med. 175:49-56.

47. Hoeger P., Tepper M„ Faith A., Higgins J., Lamb J., Geha R. (1994) Immunosupressant deoxyspergualin inhibits antigen processing in monocytes. J Immunol. 153: 3908-3916.

48. Houenou L., Li L., Kent C., Tytel M. (1996) Exogenous heat shock cognate protein Hsc70 prevents axotomy-induced death of spinal sensory neurons. Cell Stress Chap. 1, 161-166.

49. Jaatela M (1999) Heat shock proteins as cellular lifeguards. Ann Med 32:261-271.

50. Jaattela M., Wissing D., Kokholm K., Kallunki Т., Egeblad M. (1998) Hsp70 exerts its anti-apoptotic function downstream of caspase-3-like proteases. EMBO J. 17:21,6124-6134.

51. Jin Т., Gu Y., Zanusso G., Sy M., Kumar A., Cohen M.,Gambetti P., Singh N. (2000) The chaperone protein BiP binds to a mutant prion protein and mediates its degradation by the proteasome. J Biol Chem 275: 38699-38704.

52. Jolly C., Morimoto R. (2000) Role of heat shock response and molecular chaperones in oncogenesis and cell death. J Natl Cancer Inst 92:1564-1572.

53. Kaufmann S (1990) Heat shock proteins and the immune response. Immunol Today 11:129-136.

54. Kaufmann S., Vath U., Thole J., van Embden J., Emmrich F (1987) Enumeration of "T-cells reactive with Mycobacterium tuberculosis organisms and specific for recombinant mycobacterial 64-kDa protein. Eur J Immunol 17:351-357.

55. Kerr J.F., Wyllie A.H., Curric A.R. (1972) Apoptosis: a basic biological phenomenon with wide-ranging implications in tissue kinetics. Br.J.Cancer, 26, 239.

56. Keyse S., Tyrell R. (1989) Heme oxygenase is the major 32-kDa stress protein induced in human skin fibroblasts by UVA radiation, hydrogen peroxide and sodium arsenite PNAS 86: 99-103.

57. Kim D., Li G. (1999) Proteasome inhibitors lactacystin and MG132 inhibit the dephosphorylation of HSF1 after heat shock and suppress thermal induction of heat shock gene expression. Biochem Biophys Res Commun. 264:352-358.

58. Kol A, Lichtman A.H., Finberg R.W., Libby P., Kurt-Jones E.A. 2000, Gutting Edge: Heat Shock Protein (HSP) 60 Activates the Innate Immune Response: CD 14 Is an Essential Receptor for HSP60 Activation of Mononuclear Cells. J. Immunol. 164: 13-17.

59. Lactose A., De Cian M.C., Cueff A., Poulet S.A. (2001) Noradrenaline and alpha-adrenergic signaling induce the hsp70 gene promoter in mollusc immune cells. J. Cell Sci., 114, 3557-3564.

60. Lactose A., De Cian M.C., Cueff A., Poulet S.A. (2001) Noradrenaline and alpha-adrenergic signaling induce the hsp70 gene promoter in mollusc immune cells. J. Cell Sci., 114,3557-3564.

61. Lammert E., Arnold D., Nijenhuis M., Momburg F., Hammerling G., Brunner J., Stefanovic S., Rammensee H., Schild H. (1997) The endoplasmic reticulum-resident stress protein gp96 binds peptides translocated by TAP. Eur.J.Immunol. 27: 923-927.

62. Li.Z., Menoret A., Srivastava P. (2002) Roles of heat shock proteines in antigen presentation and cross-presentation. Cur.Opin in immunol. 14: 4551.

63. Mathew A., Mathur S., Morimoto R. (1998) Heat shock response and protein degradation: regulation of HSF2 by the ubiquitin-proteasome pathway. Moll. Cell. Biol. 18:5091-5098.

64. McLennan N., Masters M. (1998) GroE is vital for cell-wall synthesis. Nature 392: 139.

65. Mehlen P, Schulze-Osthoff K, Arrido AP (1996) Small stress proteins as novel regulators of apoptosis. J. Biol.Chem. 271,16510.

66. Melnick J., Argon Y. (1995) Molecular chaperones and the biosynthesis of antigen receptors. Immunol Today 16: 243-250.

67. Mizzen L (1998) Immune responses to stress proteins: Applications to infectious disease and cancer. Biotherapy 10:173-189.

68. Morimoto R (1998) Regulation of the heat shock transcriptional response: cross talk between a family of heat shock factors, molecular chaperones, and negative regulators. Genes Dev 12: 3788-3796.

69. Multhoff G., Botzler C., Issels R. (1998) The role of heat shock proteins in the stimulation of an immune response. Biol. Chem., 379, 295-300.

70. Multhoff G., Botzler C., Jennen L., Schmidt J., Ellwart J., Issels R. (1997) Heat shock protein 72 on tumor cells: a recognition structure for natural killer cells. J. Immunol. 158: 4341-4350.

71. Multhoff G., Hightower L. (1996) Cell surface expression of heat shock proteins and immune response. Cell stress & chaperon 1(3) 167-176.

72. Munk M., Schoel В., Modrow S., Karr R., Youhg R„ Kaufmann S. (1989) T lymphocytes from healthy individuals with specificity to self epitopes shared by the mycobacterial and human 65-kilodalton heat shock protein. J Immunol 143: 2844-2849.

73. Poccia F., Piselli P., Vendetti S., Bach S., Amendola A., Placido R., Colizzi V. (1996) Heat-shock protein expression on membrane of T cells undergoing apoptosis Immunology 88: 6-12

74. Pockley A.G., Shepherd J., Corton J.M. (1998) Detection of heat shock protein 70 (HSP70) and anti-HSP70 antibodies in the serum of normal individuals. Immunol. Inevst, 27, 367-377.

75. Ponomarev E.D., Tarasenko T.N., Sapozhnikov A.M. (2000) Splenic murine cytotoxic cells recognize surface HSP70 on culture-adapted EL-4 lymphoma cells. Immunol. Lett., 74, 133-139.

76. Rallu M. Loones M., Lallemand Y., Morimoto R., Morange M., Mezger V. (1997) Function and regulation of heat shock factor 2 during mouse embryogenesis. PNAS 94: 2392-2397.

77. Ritossa F.(1962) A new puffing pattern indused by heat shock and DNA in Drosophila Experientia 18: 571-573.

78. Roman E., Moreno C. (1997) Delayed-type hypersensitivity elicited by synthetic peptides complexed with Mycobacterium tuberculosis hsp 70. Immunology 90:52-56.

79. Saleh A., Srinivasula S., Balkir L., Robbins P., Alnemri.E. (2000) Negative regulation of Apaf-1 apoptosome by Hsp70. Nat.Cell.Biol. 2,476-483.

80. Samali A, Cotter TG (1996) Heat shock proteins increase resistance to apoptosis. Exp.Cell Res. 223, 163.

81. Santoro M.(2000) Heat shock factors and the control of the stress response. Biochem. Pharmacol. 59: 55-63.

82. Sapozhnikov A.M., Ponomarev E.D.; Tarasenko T.N., Telford W.G. (1999) Spontaneous apoptosis and expression of cell surface heat-shock proteins in cultured EL-4 lymphoma cells. Cell Prolif., 32, 363-378.

83. Sato S., Fujita N., Tsuruo T. (2000) Modulation of Akt kinase activity by binding to Hsp90. PNAS 97:10832-10837.

84. Schild H., Arnold-Schild D., Lammert E. and Rammensee H-G. Stress proteins and immunity mediated by cytotoxic T lymphocytes 1999, Curr Opin Immunol, 11:109-113

85. Schirmbeck R., and Reimann J. (1994) Peptide transporter-independent stress protein-mediated endosomal processing of endogenous protein antigens for major histocompatibility complex class I presentation. EurJ. Immunol. 24: 1478-1486.

86. Schlesinger M. (1990) Heat shock proteins. J.Biol. Chem. 265:1211112114.

87. Shi Y., Mosser D., Morimoto R. (1998) Molecular chaperones as HSF1 -specific transcriptional repressors. Genes Dev. 12: 654-666.

88. Shinnick T. (1991) Heat shock proteins as antigens of bacterial and parasitic pathogens. Curr.Top.Microbiol.Immunol. 167:145-160.

89. Silva C., Silva R., Pietro R., Lowrie D. (1996) Characterization of T cells that confer a high degree of protective immunity against tuberculosis in mice after vaccination with tumor cells expressing mycobacterial hsp65. Infect.Immun. 64: 2400-2407.

90. Srivastava P. (1994) Heat shock proteins in immune response to cancer: the Fourth Paradigm. Experientia 50, 1054-1060.

91. Srivastava P.(2000) Roles of heat-shock proteins in innate and adaptive immunity. Nature Reviews 2, 185-194.

92. Steinhoff U., Zugel U., Hengel H., Rosch R., Munk M., Kaufmann S.H. (1994) Prevention of autoimmune lysis by T cells with specificity for a heat shock protein by anti-sense oligonucleotide treatment. Proc. Natl. Acad. Sci.USA 91:5085-5088.

93. Suto R., Srivastava P. (1995) A mechanism of a specific immunogenicity of heat shock protein-chaperoned peptides. Science 269: 1585-1588.

94. Suzue K., Young R. (1996) Adjuvant-free hsp70 fusion protein system elicits humoral and cellular immune responses to HIV-1 p24. J. Immunol. 156:873-879.

95. Swat W., Ignatowicz L., von Boehmer H., Kisielow P. (1991) Clonal deletion of immature CD4+8+ thymocytes in suspension culture by extrathymic antigen-presenting cells. Nature, May 9, 351 (6322), 150-3.

96. Terlecky S.(1994) Hsp 70s and lysosomal proteolysis. Experientia 50: 1021-1025.

97. Van Noort J., Van Sechel A., Bajramovic J., Ouagmiri M., Polman C., Lassmann H., Ravid R. (1995) The small heat shock protein alpha rystallin as a candidate autoantigen in multiple sclerosis. Nature 375: 798-801.

98. Vanbuskirk A., Crump В., Margoliash E., Pierce S. (1989) A peptide binding protein having a role in antigen presentation is a member of the hsp70 heat shock family. J.Exp.Med. 170:p 1799-1809.

99. Verbeke P., Fonager J., Clark В., Rattan S. (2001) Heat shock response and aging: mechanisms and applications. Review Cell Biol. Internat. 25:9, 845-857.

100. Vigh L., Maresca B. and Harwood J.L. (1998) Does the membrane's physical state ontrol the expression of heat shock and other genes? TIBS, 23,369-374.

101. Wadekar S.A., Li D., Periyasamy S., Sanchez E.R. (2001) Inhibition of heat shock transcription factor by GR. Mol. Endocrinol., 15, 1396-1410.

102. Wand-Wurttenberger A., Schoel В., Ivanyi J., Kaufmann S. (1991) Surface expression by mononuclear phagocytes of an epitope shared with mycobacterial heat shock protein 60. Eur.J. Immunol. 21, 1089-1092.

103. Welch W.J. (1992) Mammalian stress response: cell physiology, structure/ function of stress proteins, and implications for medicine and disease. Physiol. Rev., 72(4), 1063-1081.

104. Wells A., Rai S., Salvato M., Band H., Malkovsky M. (1998) Hsp72-mediated augmentation of MHC class I surface expression and endogenous antigen presentation. Int Immunol 10:609-617.

105. White F. (1980) The synthesis and possible transport of specific proteins by cells associated with brain capillaries. J. Neurochem. 35: 88-94.

106. Wu Y., Lee L., Rollins D., Ching W. (1994) Heat shock- and alkaline pH-induced proteins of Campylobacter jejuni: characterization and immunological properties. Infect Immun. 62: 4256-60.

107. Xanthoudakis S., Nicholson D. (2000) Heat-shock proteins as death determinants. Nat.Cell.Biol. 2, E163-165.

108. Xu Q., Wick G. (1993) Surface expression of heat shock protein 60 on endotelial cells.