Продукция и эффекты внеклеточных БТШ70 в популяциях иммунокомпетентных клеток тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.36, кандидат биологических наук Алекперов, Эмин Акифович

• Алекперов, Эмин Акифович
• кандидат биологических наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Алекперов, Эмин Акифович

СОДЕРЖАНИЕ.

ВВЕДЕНИЕ.

ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

Глава 1. Общая характеристика БТШ.

Глава 2. Классификация БТШ.

Низкомолекулярные белки теплового шока.

Семейство белков теплового шока 40.

Семейство белков теплового шока 60.

Семейство белков теплового шока 70.

Семейство белков теплового шока 90.:.

Семейство белков теплового шока 110.

Глава 3. Регуляция экспрессии БТШ.

Глава 4. Локализация и функции БТШ.

Глава 5. Протективные функции БТШ.

Функции БТШ в межклеточном пространстве.

Причины и механизмы появления внеклеточного пула БТШ

Рецепторы белков теплового шока.

CD91.

CD40.

CD36.

LOX-1.

Другие рецепторы белков теплового шока.

Глава 6. Механизмы выхода белков в межклеточное пространство в эукариотических клетках.

Утечка через повреждения в мембране.

Классический экзоцитоз.

Типы классического экзоцитоза.

Этапы экзоцитоза.

Возможность секреции БТШ70 по классическому пути экзоцитоза.

Неклассические механизмы экзоцитоза.

Процесс апоптоза и секреция белков.

Эндолизосомальный путь.

Мультивезикулярные тельца.

Липидные рафты.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

Глава 7. Материалы и методы.

Животные.

Клеточные линии.

Приготовление клеточных суспензий.

Получение митоген-активированных Т-лимфоцитов.

Определение концентрации белка.

Цитофлуориметрический анализ апоптоза.

Измерение внутриклеточного уровня АФК.

Анализ содержания БТШ70 в супернатанте клеток.

Вестерн-блоттинг.

Окрашивание гелей.

Ингибирование аппарат Гольджи-зависимого транспорта протеинов.

Ингибирования эндолизосомального пути секреции.

Разрушение липидных рафтов.

Выделение БТШ70 с помощью аффинной хроматографии

Экзогенные БТШ.

Цитофлуориметрический анализ морфологии клеток и экспрессии белков теплового шока.

Моноклональные антитела.

Лазерная сканирующая конфокальная микроскопия.

Выделение экзосом.

Анализ уровня лактатдегидрогеназы.

Статистическая обработка экспериментальных данных.

Глава 8. Результаты и их обсуждение.

Присутствие БТШ70 в супернатанте культур различных клеточных линий.

Внеклеточный пул БТШ70 в культуре

КонА-активированных Т-лимфоцитов мыши.

Влияние ингибиторов классического экзоцитоза протеинов на интенсивность секреции БТШ70 в культуре клеток лимфомы EL-4.

Участие липидных рафтов в экзоцитозе БТШ70.

Возможность экзоцитоза БТШ70 через эндолизосомальный путь.

Анализ экзосом, выделенных из супернатантов EL-4.

Процесс апоптоза и секреция БТШ70.

Активация лимфоидных клеток сопровождается снижением внутриклеточного содержания БТШ70.

Влияние пероксида водорода на внутриклеточное содержание БТШ70.

Влияние БТШ70 на продукцию перекисных форм кислорода.

Взаимодействие БТШ70 с клеточной поверхностью и интернализация этих протеинов различными типами лимфоидных клеток.

Протективный эффект экзогенных БТШ70 в культурах лимфоидных клеток.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Продукция и эффекты внеклеточных БТШ70 в популяциях иммунокомпетентных клеток»

Актуальность проблемы Белками теплового шока (БТШ) называют обширную группу клеточных протеинов, синтез которых значительно возрастает при клеточном стрессе. БТШ присутствуют во всех клетках и организмах, изученных на сегодняшний день, и обладают очень высоким уровнем гомологии в широком спектре охарактеризованных организмов, что свидетельствует о консервативности этих протеинов. Наряду с консервативностью структуры БТШ, разнообразие стрессирующих факторов, вызывающих индукцию экспрессии белков теплового шока, говорит об универсальности этого клеточного ответа на стресс. Важно отметить, что БТШ присутствуют в клетках, как в условиях стресса, так и в нормальных физиологических условиях, участвуя во многих внутриклеточных процессах [1]. Длительное время считалось, что БТШ являются только внутриклеточными протеинами.Этому представлению соответствовало отсутствие в структуре молекул БТШ сигнальной последовательности необходимой для их секреции по классическому пути. Однако в дальнейшем присутствие БТШ было обнаружено в культуральной жидкости различных клеточных линий, а также в сыворотке крови ряда млекопитающих. Кроме того, появились данные об альтернативных путях высвобождения белков из клеток разных типов.Изучение возможных функций внеклеточных форм БТШ показало, что эти протеины обладают уникальными иммуномодулирующими свойствами [2, 3, 4]. Использование препаратов БТШ в экспериментальных моделях позволяет направленно и эффективно усиливать иммунный ответ на опухолевые антигены и различные патогены, или наоборот, подавлять нежелательные аутоиммунные реакции. Известно также, что экзогенные БТШ способны взаимодействовать с клеточной поверхностью и проникать в клетки. Причём интернализованные БТШ сохраняют свои протективные функции и защищают клетки от гибели. В связи с этим очевидно, что наряду с внутриклеточными БТШ, внеклеточная форма этих протеинов также может оказывать влияние на функционирование организма. В настоящее время причины и механизмы продукции БТШ в межклеточное пространство практически не изучены. Очень мало известно и о механизмах иммуномодулирующих эффектов внеклеточной формы БТШ. Цель исследования Целью данной работы является анализ характеристик и механизмов формирования внеклеточного пула БТШ с молекулярной массой 70 кДа (БТШ70) в популяциях лимфоидных клеток и исследование иммуномодулирующих эффектов внеклеточных БТШ70.Задачи исследования 1. Изучение феномена и характеристик продукции внеклеточных БТШ70 в популяциях лимфоидных клеток различного типа.2. Анализ механизмов экзоцитоза БТШ70 лимфоидными клетками.3. Исследование влияния процесса апоптоза лимфоидных клеток на формирование внеклеточного пула БТШ70.4. Изучение влияние стрессирующих факторов на экзоцитоз БТШ70 в популяциях лимфоидных клеток.5. Анализ иммуномодулирующих эффектов внеклеточного пула БТШ70.Научная новизна Проблема взаимодействия БТШ70 с иммунной системой привлекает интерес исследователей более двух десятилетий. Однако к настоящему времени достаточно полно охарактеризована лишь роль эндогенных и экзогенных БТШ70 в функционировании антигенпредставляющих клеток. В отличие от этого вовлеченность внеклеточных БТШ70 в процессы, б протекающие в популяциях лимфоидных клеток, находится на самой начальной стадии изучения. К наименее охарактеризованным относятся вопросы, связанные с механизмами формирования внеклеточного пула БТШ70 в популяциях лимфоцитов. Поэтому все основные результаты данного исследования обладают высокой степенью научной новизны. В частности, был осуществлён комплексный анализ механизмов секреции БТШ70 для клеток лимфоидного происхождения: было охарактеризовано влияние ингибиторов аппарат Гольджи-зависимой секреции протеинов на экзоцитоз БТШ70, а также ингибиторов эндолизосомального и рафтзависимого путей экзоцитоза. Была проверена возможность высвобождения данного протеина в составе экзосом. Впервые было продемонстрировано, что апоптоз лимфоидных клеток сопровождается увеличением пула внеклеточной формы БТШ70. Кроме того, был выявлен парадоксальный эффект снижения концентрации внутриклеточных БТШ70 на начальных этапах реакции лимфоцитов на стрессирующие воздействия, что указывает на ранее ^охарактеризованный стресс-индуцированный выброс цитоплазматических БТШ70 в окружающую среду.Практическая значимость работы Белки теплового шока обладают уникальными иммуностимулирующими и адъювантными свойствами, которые позволяют создавать на основе БТШ эффективные противоопухолевые и противоинфекционные вакцины. В настоящее время проводятся клинические испытания некоторых разновидностей таких вакцин. В то же время, иммунизация экспериментальных животных препаратами БТШ70 позволяет предотвратить патологические аутоиммунные реакции. Известно также, что появление в сыворотке крови БТШ70 и антител к ним является характерным диагностическим признаком определенных этапов развития ряда патологий.Все это свидетельствует о значительных потенциальных возможностях применения БТШ70 в клинической практике. Очевидно, что для реализации таких возможностей необходимо изучение процессов формирования внеклеточной формы данных протеинов и механизмов их взаимодействия с иммунной системой. Исходя из этого, данная работа, посвященная исследованию явления экзоцитоза БТШ70 и роли их внеклеточной формы в функционировании лимфоидных клеток, обладает существенной практической значимостью. Значительный интерес для возможного практического применения имеют полученные в работе данные о секреции БТШ70 лимфоцитами. Они проливают свет на источник циркулирующего в организме сывороточного пула БТШ70, обладающего выраженным влиянием на развитие иммунных реакций. Можно предположить, что направленный контроль экзоцитоза БТШ70 лимфоидными клетками может служить основой для разработки нового подхода к проблеме иммунорегуляции.Кроме того, полученные результаты свидетельствуют об информативности анализа уровня циркулирующей внеклеточной формы БТШ70 в качестве дополнительной физиологической характеристики организма и, в частности, иммунной системы.Апробация работы Материалы диссертации представлены на 17-ой - 20-ой международных зимних молодежных научных школах «Перспективные направления физико-химической биологии и биотехнологии» (Москва, 2005-2008); на седьмой и восьмой международной иммунологической летней школе им. Дж. Хэмфри (Москва, 2005, 2007); на десятой и одиннадцатой научных конференциях с международным участием «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, 2006, 2007); на конференции - VIII чтения, посвященные памяти акад. Ю.А. Овчинникова (Москва, 2006); на 5-ом международном конгрессе по аутоиммунитету (Италия, 2006); на втором мировом конгрессе по стрессу (Венгрия, 2007); на 51-ой научной конференции МФТИ «Современные проблемы фундаментальных и прикладных наук» (Москва, 2008); на 2-ой международной конференции «Современные информационные и телемедицинские технологии для здравоохранения» (Минск, 2008).Публикации По теме диссертации опубликовано 16 печатных работ.Структура и объём диссертации Диссертация состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы (главы 1, 2, 3, 4, 5 и 6), экспериментальной части (главы 7 и 8), выводов и списка литературы. Работа изложена на 124 страницах машинописного текста, содержит 30 рисунков, 3 таблицы. Список литературы включает 132 источника, из которых 127 иностранных.ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

Заключение диссертации по теме «Аллергология и иммулология», Алекперов, Эмин Акифович

выводы

1. Лимфоидные клетки различного происхождения способны секретировать БТШ70 во внеклеточное пространство. Интенсивность продукции этих протеинов разными типами клеток существенно различается.

2. Секреция БТШ70 в популяциях лимфоидных клеток осуществляется по неклассическому, аппарат Гольджи независимому механизму.

3. Один из механизмов секреции БТШ70 лимфоидными клетками связан с продукцией экзосом.

4. Формирование внеклеточного пула БТШ70 в популяциях лимфоидных клеток происходит, в частности, процессе апоптоза лимфоцитов.

5. Воздействие стрессирующих факторов на лимфоидные клетки приводит к усиленному выбросу цитоплазматических БТШ70 в окружающую среду на первых этапах клеточной реакции на стресс.

6. Внеклеточные БТШ70 интернализуются различными типами лимфоидных клеток и препятствуют развитию процесса апоптоза лимфоцитов. Один из механизмов указанного протективного эффекта связан с ингибирующим действием БТШ70 на продукцию клетками активных форм кислорода.

Практические рекомендации

При проведении измерений содержания БТШ70 в биологических образцах в исследовательской и диагностической практике следует учитывать, что многие типы клеток способны секретировать эти протеины в межклеточное пространство. Поэтому для получения корректных данных, соответствующих уровню общей продукции БТШ70 в анализируемых образцах, необходимо тестирование как внутриклеточной, так и внеклеточной форм данного белка.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Алекперов, Эмин Акифович, 2009 год

1. Маргулис Б.А., Гужова И.В. Белки стресса в эукариотической клетке. Цитология, 2000, т. 42, № 4, стр. 323-342.

2. Chen D.-X., Su Y.-R., Shao G.-Z., Qian Z.-C. Purification of heat shock protein 70-associated tumor peptides and its antitumor immunity on hepatoma in mice. World J Gastroenterol, 2004, vol. 10, № 3, pp. 361-365.

3. Berwin В., Hart J. P., Rice S., Gass C., Pizzo S. V., Post S. R., Nicchitta C. V. Scavenger receptor-A mediates gp96/GRP94 and calreticulin internalization by antigen-presenting cells. EMBO J., 2003, vol. 22, № 22, pp. 6127-6136.

4. Zhang Z.Y., Zhang Z., Schluesener HJ. Toll-like receptor-2, CD 14 and heat-shock protein 70 in inflammatory lesions of rat experimental autoimmune neuritis. Neuroscience, 2009, vol. 159, № 1, pp. 136-142.

5. Ritossa F. A new puffing pattern induced by temperature shock and DNP in drosophila. Cellular and Molecular Life Sciences (CMLS), 1962, vol. 18, № 12, pp. 571-573.

6. Tissieres A., Herschel K. Mitchell, Ursula M.T. Protein synthesis in salivary glands of Drosophila melanogaster: Relation to chromosome puffs. Journal of Molecular Biology, 1974, vol. 84, № 3, pp. 389-392.

7. Grasso S., Scifo C., Cardile V., Gulino R., Renis M. Adaptive Responses to the Stress Induced by Hyperthermia or Hydrogen Peroxide in Human Fibroblasts. Experimental Biology and Medicine, 2003, vol. 228, pp. 491-498.

8. Fauconneau B, Petegnief V, Sanfeliu C, Piriou A, Planas AM. Induction of heat shock proteins (HSPs) by sodium arsenite in cultured astrocytes and reduction of hydrogen peroxide-induced cell death. J. Neurochem., 2002, vol. 83, №6, pp. 1338-1348.

9. Bonaventura R, Poma V, Costa C, Matranga V. UVB radiation prevents skeleton growth and stimulates the expression of stress markers in sea urchin embryos. Biochem. Biophys. Res. Commun., 2005, vol. 328, № 1, pp. 150-157.

10. Kemp TJ, Causton HC, Clerk A. Changes in gene expression induced by H(2)0(2) in cardiac myocytes. Biochem. Biophys. Res. Commun., 2003, vol. 307, №2, pp. 416-421.

11. Dowling RJ, Bienzle D. Gene-expression changes induced by Feline immunodeficiency virus infection differ in epithelial cells and lymphocytes. J. Gen. Virol., 2005, vol. 86, № 8, pp. 2239-2248.

12. Bausero MA, Gastpar R, Multhoff G, Asea A. Alternative mechanism by which IFN-gamma enhances tumor recognition: active release of heat shock protein 72. J. Immunol., 2005, vol. 175, № 5, pp. 2900-2912.

13. Morange M. What history tells us II. The discovery of chaperone function. J. Biosci., 2005, vol. 30, № 4, pp. 461-464.

14. Fink A. L. Chaperone-Mediated Protein Folding. Physiological Reviews,1999, vol. 79, № 2, pp. 425-449.

15. Beck F.-X., Neuhofer W., Muller E. Molecular chaperones in the kidney: distribution, putative roles, and regulation. Am J Physiol Renal Physiol,2000, vol. 279, pp. 203-215

16. Garrido C., Gurbuxani S., Ravagnan L., Kroemer G. Breakthroughs and views Heat shock proteins: Endogenous Modulators of apoptotic cell death. Bioch &Biophis. Research Commun., 2001, vol. 286, pp. 433-442.

17. Hernendez M.P., Chadli A., Toft D.O. HSP40 Binding Is the First Step in the HSP90 Chaperoning Pathway for the Progesterone Receptor. J. Biol. Chem., 2002, vol. 277, № 14, pp. 11873-11881.

18. Ohnishi S., Kigawa Т., Sato M., Koshiba S., Inoue M., Yokoyama S. Solution structure of the J domain of the pseudo DnaJ protein, mouse hypothetical mKIAA0962. RCSB PDB, 2005.

19. Sha В., Lee S., Cyr D. Purification, crystallization and preliminary X-ray crystallographic studies of S. cerevisiae Hsp40 Sisl. Acta Crystallogr., 1999, vol. 55, pp. 1234-1236.

20. Agashe V.R., Hartl F.U. Roles of molecular chaperones in cytoplasmic protein folding. Semin. Cell Dev. Biol., 2000, vol. 11, № 1, pp. 15-25.

21. Kusmierczyk A.R, Martin J. Chaperonins keeping a lid on folding proteins. FEBS Letters, 2001, vol. 505, pp. 343-347.

22. Chaudhry C., Horwich A.L., Brunger A.T., Adams P.D. Exploring the structural dynamics of the E.coli chaperonin GroEL using translation-libration-screw crystallographic refinement of intermediate states. J. Mol. Biol., 2004, vol. 342, pp. 229-245.

23. Ditzel L., Lowe J., Stock D., Stetter K.O., Huber H., Huber R., Steinbacher S. Crystal structure of the thermosome, the archaeal chaperonin and homolog of CCT. Cell, 1998, vol. 93, pp. 125-138.

24. Hernendez M.P., Chadli A., Toft D.O. HSP40 Binding Is the First Step in the HSP90 Chaperoning Pathway for the Progesterone Receptor. J. Biol. Chem., 2002, vol. 277, № 14, pp. 11873-11881.

25. Wu X., Yano M., Washida H., Kido H. The second metal-binding site of 70 kDa heat-shock protein is essential for ADP binding, ATP hydrolysis and ATP synthesis. Biochemical Journal, 2004, vol. 378, pp. 793-799.

26. Stevens S.Y., Cai S., Pellecchia M., Zuiderweg E.R.P. The solution structure of the bacterial HSP70 chaperone protein domain DnaK (393-507) in complex with the peptide NRLLLTG. Protein Science, 2003, vol. 12, pp. 2588-2596.

27. Jiang J., Prasad K., Lafer E.M., Sousa R. Structural basis of interdomain communication in the Hsc70 chaperone. Mol. Cell., 2005, vol. 20, pp. 513-524.

28. Richter K, Buchner J. Hsp90: chaperoning signal transduction. J. Cell Physiol., 2001, vol. 188, № 3, pp. 281-290.

29. Young J.C., Moarefi I., Hartl F. U. Hsp90: a specialized but essential protein-folding tool. The Journal of Cell Biology, 2001, vol. 154, № 2, pp. 267-273

30. Dollins D.E., Immormino R.M., Gewirth D.T. Structure of Unliganded GRP94, the Endoplasmic Reticulum Hsp90: BASIS FOR NUCLEOTIDE-INDUCED CONFORMATIONAL CHANGE. J. Biol. Chem., 2005, vol. 280, pp. 30438-30447

31. Harris S.F., Shiau A.K., Agard D.A. The Crystal Structure of the Carboxy-terminal Dimerization Domain of htpG, the Escherichia coli Hsp90, Reveals a Potential Substrate Binding Site. Structure, 2004, vol. 12, pp. 1086-1096

32. Lee S., Sowa M.E., Choi J.M., Tsai F.T. The ClpB/Hspl04 molecular chaperone-a protein disaggregating machine. J. Struct. Biol., 2004, vol. 146, № 1-2, pp. 99-105

33. Lee S., Sowa M.E., Watanabe Y., Sigler P.B., Chiu W., Yoshida M., Tsai F.T.F. The Structure of ClpB: A Molecular Chaperone that Rescues Proteins from an Aggregated State Cell. Cambridge, Mass., 2003, vol. 115, pp. 229-240

34. Xia D., Esser L., Singh S.K., Guo F., Maurizi M.R. Crystallographic investigation of peptide binding sites in the N-domain of the ClpA chaperone. J. Struct. Biol., 2004, vol. 146, pp. 166-179

35. Kim D.Y., Kim K.K. Crystal Structure of ClpX Molecular Chaperone from Helicobacter pylori. J. Biol. Chem., 2003, vol. 278, pp. 50664-50670

36. Santoro M.G. Heat Shock Factors and the Control of the Stress Response. Biochemical Pharmacology, 2000, vol. 59, pp. 55-63

37. Vilaboa N.E., Galan A., Troyano A., de Bias E., Aller P. Regulation of multidrug resistance 1 (MDRl)/P-glycoprotein gene expression and activity by heat-shock transcription factor 1 (HSF1). J. Biol. Chem., 2000, vol. 275, № 32, pp. 24970-24976

38. Klein S.D., Brune B. Heat-shock protein 70 attenuates nitric oxide-induced apoptosis in RAW macrophages by preventing cytochrome с release. Biochem. J., 2002, vol. 362, № 3, pp. 635-641

39. Menoret A. Purification of recombinant and endogenous HSP70s. Methods, 2004, vol. 32, № 1, pp. 7-12

40. Peng P., Menoret A., Srivastava P.K. Purification of immunogenic heat shock protein 70-peptide complexes by ADP-affinity chromatography. J. Immunol. Methods, 1997, vol. 204, № 1, pp. 13-21

41. Chen D.-X., Su Y.-R., Shao G.-Z., Qian Z.-C. Purification of heat shock protein 70-associated tumor peptides and its antitumor immunity on hepatoma in mice. World J. Gastroenterol., 2004, vol. 10, № 3, pp. 361-365

42. Lancaster G.I., Febbraio M.A. Mechanisms of stress-induced cellular HSP72 release: implications for exercise-induced increases in extracellular HSP72. Exerc. Immunol. Rev., 2005, vol. 11, pp. 46-52

43. Basu S., Binder R.J., Ramalingam Т., Srivastava P.K. CD91 is a common receptor for heat shock proteins gp96, hsp90, hsp70, and calreticulin. Immunity, 2001, vol. 14, № 3, pp. 303-313

44. Habich C., Baumgart K., Kolb H., Burkart V. The Receptor for Heat Shock Protein 60 on Macrophages Is Saturable, Specific, and Distinct from Receptors for Other Heat Shock Proteins. The Journal of Immunology, 2002, vol. 168, pp. 569-576

45. Becker Т., Hartl F.U., Wieland F. CD40, an extracellular receptor for binding and uptake of Hsp70-peptide complexes. J. Cell Biol., 2002, vol. 158, №7, pp. 1277-1285

46. Lazarevic V., Myers A.J., Scanga C.A., Flynn J.L. CD40, but not CD40L, is required for the optimal priming of T cells and control of aerosol M. tuberculosis infection. Immunity, 2003, vol. 19, № 6, pp. 823-35

47. Binder R.J., Vatner R., Srivastava P. The heat-shock protein receptors: some answers and more questions. Tissue Antigens, 2004, vol. 64, № 4, pp. 442-451

48. Salamatu S. Mambula, Mary Ann Stevenson, Kishiko Ogawa, Stuart K. Calderwood Mechanisms for Hsp70 secretion: Crossing membranes without a leader. Methods, 2007, vol. 43, pp. 168-175

49. Walter N. The mystery of nonclassical protein secretion. A current view on cargo proteins and potential export routes. Eur. J. Biochem., 2003, vol. 270, pp. 2109-2119

50. Srivastava P.K., Maki R.G. Stress-induced proteins in immune response to cancer. Curr. Top. Microbiol. Immunol., 1991, vol. 167, pp. 109-123

51. Udono H., Srivastava P. K. Heat shock protein 70-associated peptides elicit specific cancer immunity. J. Exp. Med., 1993, vaol. 178, № 4, pp. 1391-1396

52. Dybdahl В., Slordahl S. A., Waage A., Kierulf P., Espevik Т., Sundan A. Myocardial ischaemia and the inflammatory response: release of heat shock protein 70 after myocardial infarction. Heart, 2005, vol. 91, pp. 299-304

53. Kocsis J., Madaras В., Toth E. K., Fust G., Prohaszka Z. Serum level of soluble 70-kD heat shock protein is associated with high mortality in patients with colorectal cancer without distant metastasis. Cell Stress and Chaperones, 4 июля 2009 он-лайн

54. Pockley A. G., Shepherd J., Corton J. M. Detection of heat shock protein 70 (Hsp70) and anti-Hsp70 antibodies in the serum of normal individuals. Immunol. Invest., 1998, vol. 27, № 6, pp. 367-77

55. Febbraio M. A., Ott P., Nielsen H. В., Steensberg A., Keller C., Krustrup P., Secher N. H., Pedersen В. K. Exercise induces hepatosplanchnic release of heat shock protein 72 in humans. J. Physiol., 2002, vol. 544, № 3, pp. 957-962

56. Маргулис Б. А., Гужова И. В. Двойная роль шаперонов в ответе клетки и всего организма на стресс. Цитология, т. 51, № 3, стр. 219-228

57. Авдонин A. JL, Медведева H. Д. Внеклеточный белок теплового шока 70 и его функции. Цитология, т. 51, № 2, стр. 130-137

58. Ireland H.E., Leoni F., Altaie O., Birch C.S., Coleman R.C., Hunter-Lavin C., Williams J.H. Measuring the secretion of heat shock proteins from cells. Methods, 2007, vol. 43, pp. 176-183

59. Thery С., Clayton A., Amigorena S. and Raposo G. Isolation and Characterization of Exosomes from Cell Culture Supernatants and Biological Fluids. Current. Protocols in Cell Biology, 2006, 3.22.1-3.22.29

60. Hunter-Lavina C., Daviesa E.L., Bacelara M.M.F.V.G., Marshallb M.J., Andrewa S.M., Williams J.H.H. Hsp70 release from peripheral blood mononuclear cells. Biochemical and Biophysical Research Communications, 2004, vol. 324, pp. 511-517

61. Mambula S.S. and Calderwood S.K. Heat Shock Protein 70 Is Secreted from Tumor Cells by a Nonclassical Pathway Involving Lysosomal Endosomes. J. Immunol., 2006, vol. 177, № 11, pp. 7849-7857

62. Mitchell J.P., Court J., Mason M.D., Tabi Z., Clayton A. Increased exosome production from tumour cell cultures using the Integra CELLine Culture System. Journal of Immunological Methods, 2008, vol. 335, pp. 98-105

63. Giffard R.G., Han R.-Q., Emery J.F., Duan M. and Pittet J.F. Regulation of apoptotic and inflammatory cell signaling in cerebral ischemia the complex roles of Heat Shock Protein 70. Anesthesiology, 2008, vol. 109, № 2, pp. 339-348

64. Schmitt E., Gehrmann M., Brunet M., Multhoff G. and Garrido C. Intracellular and extracellular functions of heat shock proteins: repercussions in cancer therapy. Journal of Leukocyte Biology, 2007, vol. 81, pp. 15-27

65. Fader C.M. and Colombo M.I. Autophagy and multivesicular bodies: two closely related partners. Cell Death and Differentiation, 2009, vol. 16, pp. 70-78

66. Togo Т. Disruption of the plasma membrane stimulates rearrangement of microtubules and lipid traffic toward the wound site. J. Cell Sci., 2006, vol. 119, № 13, pp. 2780-2786

67. SugitaS. Mechanisms of exocytosis. Acta Physiol., 2008, vol. 192, pp. 185-193

68. Pickett J.A. and Edwardson J.M. Compound Exocytosis: Mechanisms and Functional Significance. Traffic, 2006, vol. 7, pp. 109-116

69. Лузиков В. H. Экзоцитоз белков. «Академкнига», Москва, 2006

70. Капо R., Abe К., Hasegawa A. cDNA of canine heat shock protein 70 (HSP70). Vet. Res. Commun., 2004, vol. 28, № 5 ? pp. 395-405

71. Bausero M. A., Gastpar R., Multhoff G., Asea A. Alternative mechanism by which IFN-gamma enhances tumor recognition: active release of heat shock protein 72. J. Immunol., 2005, vol. 175, № 5, pp. 2900-2912

72. Mollenhauer H.H., Morre D.J. and Rowe L.D. Alteration of intracellular traffic by monensin; mechanism, specificity and relationship to toxicity. Biochim. Biophys. Acta., 1990, vol. 1031, № 2, pp. 225-246

73. Nebenfuhr A., Ritzenthaler C. and Robinson D.G. Brefeldin A: Deciphering an Enigmatic Inhibitor of Secretion. Plant Physiol., 2002, vol. 130, pp.1102-1108

74. Oh Y.J., Youn J.H., Л Y., Lee S.E., Lim K.J., Choi J.E., Shin J.S. HMGB1 is phosphorylated by classical protein kinase С and is secreted by a calcium-dependent mechanism. J. Immunol., 2009, vol. 182, № 9, pp. 5800-5809

75. Ogawa Y., Kanai-Azuma M., Akimoto Y., Kawakami H., Yanoshita R. Exosome-like vesicles with dipeptidyl peptidase IV in human saliva. Biol. Pharm. Bull., 2008, vol. 31, № 6, pp. 1059-1062

76. Prudovsky I., Tarantini F., Landriscina M., Neivandt D., Soldi R., Kirov A., Small D., Kathir К. M., Rajalingam D., Kumar Т. K. Secretion without Golgi. J. Cell Biochem., 2008, vol. 103, № 5, pp. 1327-1343

77. Sapozhnikov A.M., Gusarova G.A., Ponomarev E.D., Telford W.G. Translocation of cytoplasmic HSP70 onto the surface of EL-4 cells during apoptosis. Cell Prolif., 2002, vol. 35, № 4, pp. 193-206

78. Fackler O.T. and Grosse R. Cell motility through plasma membrane blebbing. J. Cell Biol., vol. 181, № 6, pp. 879-884

79. Arispe N., Doh M., Simakova O., Kurganov В., and de Maio A. Hsc70 and Hsp70 interact with phosphatidylserine on the surface of PC 12 cells resulting in a decrease of viability. The FASEB Journal., 2004, vol. 18, pp. 1636-1645

80. Zhou F, Xing D., Chen W.R. Regulation of HSP70 on activating macrophages using PDT-induced apoptotic cells. Int. J. Cancer., 2009, vol. 125, № 6, pp. 1380-1389

81. Kaushik S., Cuervo A.M. Methods to Monitor Chaperone-Mediated Autophagy. Methods Enzymol., 2009; vol. 452, pp. 297-324

82. Panjwani N., Akbari O., Garcia S., Brazil M., Stockinger B. The HSC73 molecular chaperone: involvement in MHC class II antigen presentation. J. Immunol., 1999, vol. 163, № 4, pp. 1936-1942

83. Theriault J.R., Adachi H., Calderwood S.K. Role of scavenger receptors in the binding and internalization of heat shock protein 70. J. Immunol., 2006, vol. 177, № 12, 8604-8611

84. Serrano-Martin X., Payares G., Mendoza-Leon A. Glibenclamide, a Blocker of K+ATP Channels, Shows Antileishmanial Activity in Experimental Murine Cutaneous Leishmaniasis. Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 2006, vol. 50, № 12, pp. 4214-4216

85. Savina, M. Furla, M. Vidal, M. I. Colombo. Exosome Release Is Regulated by a Calcium-dependent Mechanism in K562 Cells. The Journal Of Biological Chemistry Vol. 278, No. 22, Issue of May 30, pp. 20083-20090, 2003

86. Savina A., Vidal M., Colombo M.I. The exosome pathway in K562 cells is regulated by Rabl 1. Journal of Cell Science, 2002, vol. 115, pp. 2505-2515

87. Mollenhauer H.H., Morre D.J., Rowe L. D. Alteration of intracellular traffic by monensin; mechanism, specificity and relationship to toxicity. Biochimica et Biophysica Acta (BBA) Reviews on Biomembranes, 1990, vol. 1031, №2, pp. 225-246

88. Chaput N., Taieb J., Andre F., Zitvogel L. The potential of exosomes in immunotherapy. Expert Opin. Biol. Ther., 2005, vol. 5, № 6

89. Caby M.-P., Lankar D., Vincendeau-Scherrer C., Raposo G., Bonnerot C. Exosomal-like vesicles are present in human blood plasma. International Immunology, vol. 17, № 7, pp. 879-887

90. Clayton A., Turkes A., Navabi H., Mason M.D., Tabi Z. Induction of heat shock proteins in B-cell exosomes. Journal of Cell Science, 2005, vol. 118, pp. 3631-3638

91. Lancaster G.I., Febbraio M.A. Exosome-dependent Trafficking of HSP70. A Novel Secretory Pathway For Cellular Stress Proteins. The Journal Of Biological Chemistry, 2005, vol. 280, № 24, pp. 23349-23355

92. Mathew, A. Bell, R. M. Johnstone. Hsp-70 is closely associated with the transferrin receptor in exosomes from maturing reticulocytes. Biochem. J., 1995, vol. 308, pp. 823-830

93. Hromadnikova I., Sedlackova L. Analysis of cell surface and relative gene expression of heat shock protein 70 in human leukemia cell lines. Leuk. Lymphoma., 2008, vol. 49, № 3, pp. 570-576

94. Multhoff G. Hyperthermia classic commentary: Activation of natural killer (NK) cells by heat shock. Int. J. Hyperthermia., 2009, vol. 25 № 3, pp. 176-179

95. Chen S., Bawa D., Besshoh S., Gurd J.W., Brown I.R. Association of heat shock proteins and neuronal membrane components with lipid rafts from the rat brain. J. Neurosci. Res., 2005, vol. 81, № 4, pp. 522-529

96. Frost V., Al-Mehairi S., Sinclair A.J. Exploitation of a non-apoptotic caspase to regulate the abundance of the cdkl p27(KIPl) in transformed lymphoid cells. Oncogene., 2001, vol. 20, pp. 2737-2748

97. Robinson M.B., Tidwell J.L., Gould Т., Taylor A.R., Newbern J.M., Graves J., Tytell M., Milligan C.E. Extracellular heat shock protein 70: a critical component for motoneuron survival. J. Neurosci., 2005, vol. 25, № 42, pp. 9735-9745.

98. Hunter-Lavin C., Davies E.L., Bacelar M.M., Marshall M.J., Andrew S.M., Williams J.H. Hsp70 release from peripheral blood mononuclear cells. Biochem. Biophys. Res. Commun., 2004, vol. 324, № 2, pp. 511-517.

99. Bausero M.A., Gastpar R., Multhoff G., Asea A. Alternative mechanism by which IFN-gamma enhances tumor recognition: active release of heat shock protein 72. J. Immunol., 2005, vol. 175, № 5, pp. 2900-2912.

100. Ройт А., Бростофф Дж., Мэйл Д. Иммунология, «Мир», Москва, 2000, стр. 184-187

101. Dybdahl В., Slordahl S.A., Waage A., Kierulf P., Espevik Т., Sundan A. Myocardial ischaemia and the inflammatory response: release of heat shock protein 70 after myocardial infarction. Heart, 2005, vol. 91, № 35 pp. 299-304.

102. Korade Z, Kenworthy A. K. Lipid rafts, cholesterol, and the brain. Neuropharmacology, 2008, vol. 55, № 8, pp. 1265-1273

103. Lajoie P., Goetz J.G., Dennis J.W., Nabi I.R. Lattices, rafts, and scaffolds: domain regulation of receptor signaling at the plasma membrane. J. Cell Biol., 2009, vol. 185, № 3, pp. 381-385

104. Yamada P, Amorim F, Moseley P, Schneider S. Heat shock protein 72 response to exercise in humans. Sports Med., 2008, vol. 38 № 9, pp. 715-733