Экспериментальное обоснование возможности применения комплексов трикарбонилтехнеция-99м и трикарбонилрения-188 в ядерной медицине тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.01, кандидат биологических наук Клементьева, Ольга Евгеньевна

• Клементьева, Ольга Евгеньевна
• кандидат биологических наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Клементьева, Ольга Евгеньевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРНЫХ ДАННЫХ

1.1 Ядерная медицина и основные тенденции в ее развитии

1.2 Классификация радионуклидов, используемых в ядерной 20 медицине

1.3 Область применения радиофармацевтических препаратов 21 диагностического назначения

1.4 Радионуклидная диагностика злокачественных 22 новообразований

1.5 Радиофармацевтические препараты терапевтического 24 назначения и области их применения

1.6 Диагностические радиофармацевтические препараты на основе 28 технеция-99т и стратегии их получения

1.7 Методы синтеза трикарбонилтехнеция и трикарбонилрения в 31 водных растворах

1.8 Биологическое поведение комплексов трикарбонилтехнеция

1.9 Биологическое поведение комплексов трикарбонилрения

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Радионуклиды технеций-99ш и рений-188 и их основные 56 ядерно-физические характеристики

2.2 Синтез 99шТс-трикарбонила и 188Яе-трикарбонила, получение 56 на их основе комплексов с цитратом и октреотидом и контроль качества полученных комплексов

2.3 Клеточные линии и методика in vitro экспериментов

2.4 Экспериментальные животные и методика экспериментов

2.5 Расчет дозовых нагрузок и поглощенных доз

2.6 Методы статистической обработки данных

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПЕРИМЕНТОВ

3.1 Биологическое поведение комплексов 99шТс-трикарбонил 70 цитрат и 99тТс-трикарбонил октреотид

3.2 Биологическое поведение комплексов 188Ке-трикарбонил 89 цитрат и 18811е-трикарбонил октреотид

3.3 Оценка поглощенных доз в монослое клеток и опухолевых 108 очагах

4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

4.1 Биологическое поведение и оценка функциональной пригодности комплексов 99тТс-трикарбонил цитрат и 99шТс-трикарбонил октреотид

4.2 Биологическое поведение и оценка функциональной пригодности комплексов Re-трикарбонил цитрат и Reтрикарбонил октреотид

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Экспериментальное обоснование возможности применения комплексов трикарбонилтехнеция-99м и трикарбонилрения-188 в ядерной медицине»

Актуальность проблемы.

Проблема своевременного и точного диагноза является одной из основных проблем клинической медицины. Для её решения используются достижения и конкретные результаты исследований в сфере многих фундаментальных наук. Именно таким симбиозом естественных и точных наук являются два направления ядерной медицины - радионуклидная диагностика и радионуклидная терапия. Важную роль технологии ядерной медицины играют в диагностике и терапии таких социально значимых заболеваний как онкологические. Своевременное и точное распознавание характера патологических изменений - результат использования комплекса диагностических процедур, не последнее место среди которых, занимают методы ядерной медицины. Чем больший выбор диагностических средств -радиофармацевтических диагностических препаратов — будет в арсенале врача, тем больше возможности у него оказать своевременную, адекватную и эффективную помощь пациенту.

В последние годы не менее интенсивно, чем радионуклидная диагностика, развивается лучевая терапия открытыми источниками радионуклидов, которая является эффективным средством как самостоятельного, так и комбинированного лечения больных. Методы радионуклидной терапии особенно эффективны при лечении злокачественных лимфом, рака щитовидной железы, гормонозависимых и нейроэндокринных опухолей, при метастатическом поражении скелета и лимфатической системы, ревматоидных артритах и др. Поэтому на повестке дня остается актуальным получение средств адресной доставки терапевтического радионуклида к патологическому очагу. И чем богаче будет арсенал таких лекарственных средств, тем в больших случаях они могут быть применимы, тем больше возможностей будет у специалистов ядерной медицины для лечения различных злокачественных новообразований.

Среди радионуклидов, используемых в ядерной медицине для диагностических исследований с помощью техники однофотонной эмиссионной компьютерной томографии (ОФЭКТ) лидирующее положение занимает радионуклид технеций-99м. К концу прошлого столетия ведущими радиофармацевтическими компаниями мира было создано и предложено к клиническому применению более 30 наименований диагностических радиофармпрепаратов на основе технеция-99м различного назначения. Однако, необходимость проведения диагностических процедур с максимальной специфичностью и чувствительностью, обуславливает интенсивный поиск соединений, которые будут служить основой диагностических радиофармацевтических препаратов нового поколения.

В радионуклидной терапии в настоящее время широко применяются бета-излучающие радионуклиды, одним из которых является радионуклид рений-188. По своим ядерно-физическим характеристикам он полностью отвечает требованиям, предъявляемым к радионуклиду терапевтического назначения. Поэтому наиболее актуальным является поиск "носителей" для терапевтических радионуклидов, которые обеспечат эффективное и специфическое связывание РФП с клетками-мишенями патологического очага. Два радионуклида 99тТс и 188К.е, являясь обладателями весьма привлекательных ядерно-физических характеристик для диагностики и терапии соответственно, обладают еще одним преимуществом - это генераторные радионуклиды, которые могут быть получены непосредственно в клинике из соответствующих промышленных генераторов. Именно этот факт во многом привлекает внимание к поиску, синтезу и изучению биологических свойств различных соединений, меченных этими радионуклидами, а затем и к разработке на их основе лекарственных форм радиофармацевтических препаратов диагностического или терапевтического назначения.

Определенные трудности в получении новых радиофармацевтических препаратов на основе 99шТс и 188Re вносит невозможность прямого введения этих радионуклидов в структуру большинства веществ (например аминокислот, пептидов, белков), которые могут стать "адресными носителями" в составе диагностического или лечебного РФП.

Для решения этой задачи, в последние годы внимание исследователей, работающих в сфере ядерной медицины, привлекает металлоорганический фрагмент трикарбонилтехнеция-99м (рения-188), описываемый формулой

М{СО)з (М= 99mTc, 188Re). Этот фрагмент входит в состав водорастворимого комплекса М(С0)з(Н20)з+ и обладает рядом физико-химических параметров, которые позволяют использовать его для прямого мечения различных биологически активных молекул радионуклидами 99тТс и 188Re. Поэтому среди такого рода комплексов в настоящее время ведется активный поиск

99т-т \ перспективных соединении, предназначенных для диагностики ( Тс) или

1 ЙЙ для терапии ( Re) различных патологических состояний. Исходя из этого исследование биологического поведения различных комплексов трикарбонилтехнеция-99м (рения-188) как потенциальных диагностических или терапевтических агентов является чрезвычайно актуальным.

Цель работы

Цель настоящего исследования заключается в экспериментальной оценке возможности использования комплексов цитрата и октреотида с 99шТс-трикарбонилом и 18^е-трикарбонилом для получения диагностических и лечебных радиофармацевтических препаратов.

Основные задачи исследования:

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить специфичность и прочность связывания комплексов 99шТс-трикарбонил цитрат, 99тТс-трикарбонил октреотид, 188Ке-трикарбонил цитрат и 188Е.е-трикарбонил октреотид опухолевыми клетками in vitro;

2. Изучить фармакокинетику комплексов 99тТс-трикарбонил цитрат, 99тТс-трикарбонил октреотид в организме лабораторных животных — опухоленосителей;

3. Оценить возможность визуализации опухолевых очагов у лабораторных животных при использовании комплексов трикарбонилтехнеция-99м.

1 ЯЯ

4. Оценить эффективность воздействия комплексов Re-трикарбонил цитрат и 18811е-трикарбонил октреотид на культуры опухолевых клеток по показателю их выживаемости;

1 RR

5. Изучить биологическое поведение комплексов Re-трикарбонил цитрат и 188Ке-трикарбонил октреотид у животных-опухоленосителей и дать прогноз относительно возможности достижения терапевтической дозы бета-излучения в экспериментальном опухолевом очаге;

6. Оценить влияние замены радионуклида технеций-99м на рений-188 в трикарбонильных комплексах цитрата и октреотида на их биологические характеристики.

Научная новизна исследования.

Новизна исследования заключается в том, что впервые: - исследованы динамика и характер накопления, а также получены количественные данные о специфическом связывании комплексов 99тТс-трикарбонил цитрат, 99шТс-трикарбонил октреотид, 188Яе-трикарбонил цитрат и 188Яе-трикарбонил октреотид с клетками меланомы В16 и аденокарциномы молочной железы MCF 7;

- по критерию выживаемости in vitro показана эффективность воздействия

188 188 комплексов Re-трикарбонил цитрат и Re-трикарбонил октреотид на культуру опухолевых клеток меланомы В 16 и аденокарциномы молочной железы MCF 7. Для клеток меланомы В 16 и аденокарциномы молочной железы MCF 7 определены величины средней летальной концентрации изученых комплексов рения-188 и средней летальной дозы, создаваемой данными соединениями в монослое опухолевых клеток;

- исследована фармакокинетика комплексов 99тТс-трикарбонил цитрат и 99шТс-трикарбонил октреотид у животных с имплантированными меланомой и аденокарциномой молочной железы. Показана возможность визуализации данных опухолей при помощи ОФЭКТ;

188

- исследована фармакокинетика комплексов Re-трикарбонил цитрат и 188Ке-трикарбоиил октреотид у животных с имлантирова'нной меланомой и аденокарциномой молочной железы; оо

- показано значительное накопление комплексов Re-трикарбонил цитрат и

1 RR

Re-трикарбонил октреотид в экспериментальных опухолевых очагах, что свидетельствует о принципиальной возможности их использования в терапии злокачественных новообразований различного происхождения;

- по результатам проведенных экспериментов, показана возможность применения комплексов 99шТс-трикарбонил цитрат, 99тТс-трикарбонил октреотид, 188Ке-трикарбонил цитрат и 18^е-трикарбонил октреотид в ядерной медицине.

Научно-практическая значимость работы

Результаты проведенных исследований показывают, что комплексы 99тТс-трикарбонил цитрат, 99тТс-трикарбонил октреотид, 18^е-трикарбонил цитрат и 185^е-трикарбонил октреотид избирательно накапливаются клетками меланомы и аденокарциномы молочной железы in vitro и in vivo. Полученные экспериментальные данные свидетельствуют о возможности достижения терапевтической дозы бета-излучения в экспериментальном опухолевом

188 очаге при введении животным-опухоленосителям растворов Re

1 ЯЯ трикарбонил цитрат или Re-трикарбонил октреотид. Показана возможность визуализации экспериментальных опухолевых очагов после внутривенного введения 99тТс-трикарбонил цитрат или 99шТс-трикарбонил октреотид методом ОФЭКТ.

Вышеизложенное дает основание полагать, что в перспективе комплексы трикарбонилтехнеция-99м и трикарбонилрения-188 могут быть использованы для получения туморотропных радиофармацевтических препаратов диагностического и терапевтического назначения.

Принципиально важно отметить, что в процессе выполнения диссертационной работы для соединения 99тТс-трикарбонил цитрат был выполнен полный объем исследований, соответствующий требованиям, предъявляемым к доклиническим испытаниям диагностических РФП. Полученные экспериментальные данные дают основание полагать, что данное соединение может быть рекомендовано для клинического изучения.

Положения, выносимые на защиту:

1. В условиях in vitro 99тТс-трикарбонил цитрат и 99тТс-трикарбонил октреотид обладают тропностью к клеткам меланомы В 16 и аденокарциномы молочной железы MCF 7;

2 99тТс-трикарбонил цитрат и 99тТс-трикарбонил октреотид проявляют выраженную туморотропность у животных с трансплантированными меланомой В 16 и аденокарциномой молочной железы Н^бЗб ; 3. С помощью 99шТс-трикарбонил цитрат и 99тТс-трикарбонил октреотид возможна визуализация экспериментальных опухолевых очагов у животных опухоленосителей методом однофотонной эмиссионной компьютерной томографии (ОФЭКТ);

4. Замена радионуклида технеций-99м на рений-188 в трикарбонильных комплексах не влияет на их тропность к клеткам злокачественных новообразований - меланомы В 16 и аденокарциномы молочной железы MCF 7 и фармакокинетику у животных-опухоленосителей;

1 XR

5. Количественная оценка цитотоксического действия Re-трикарбонил цитрат и 188Яе-трикарбонил октреотид на клетки меланомы В 16 и аденокарциномы молочной железы MCF 7;

6. Уровни поглощенных доз в монослое опухолевых клеток при воздействии

188 188 на них Re-трикарбонил цитрат и Re-трикарбонил октреотид, соответствующие 37% выживаемости в опухолевых очагах меланомы В 16 и аденокарциномы молочной железы Н^бЗб у животных - опухоленосителей после внутривенного введения указанных комплексов.

Апробация работы.

Основные положения диссертационной работы были представлены и обсуждены на: Всероссийской научно-технической конференции "Современные проблемы ядерной медицины и радиофармацевтики" (Обнинск, 2002), конгрессе Европейской ассоциации ядерной медицины (Амстердам, 2003 г.), IV Международной конференции по ядерной и радиационной физике (Алматы, 2003 г.), IV Российской конференции по радиохимии (Озерск, 2003 г.), Российской конференции "Современные проблемы ядерной медицины и радиофармацевтики" (Дубна, 2004 г.), 12-м Европейском симпозиуме по радиофармацевтике и радиофармацевтическим препаратам (Сопот, 2004 г.), Ш съезде Общества ядерной медицины( Дубна, 2004 г.), 5-ой Между-народной конференции "Ядерная и радиационная физика" (Алматы,2005), Международном симпозиуме по технецию (Оараи,

Япония, 2005 г.), Ill Всероссийском национальном конгрессе лучевых диагностов и терапевтов "Радиология-2009" (Москва, 2009 г.), 7-ой международной конференции "Ядерная и радиационная физика" (Алмааты, 2009 г.), конгрессе Европейской ассоциации ядерной медицины (Барселона, 2009 г.), VI Российской конференции по радиохимии "Радиохимия-2009" (Москва, 2009 г.).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 20 работ, из них 6 публикации в отечественных и зарубежных журналах, 14 - в материалах международных (8) и Российских (6) конференций, съездов и симпозиумов.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 144 страницах машинописного текста, состоит из введения, четырех глав, заключения и выводов, иллюстрирована 22 рисунками и 15 таблицами. Библиографический указатель включает 119 источников, из них 24 отечественных и 95 иностранных.

Заключение диссертации по теме «Радиобиология», Клементьева, Ольга Евгеньевна

ВЫВОДЫ

По результатам выполненных экспериментов, показана перспективность применения в ядерной медицине комплексов 99тТс-188 трикарбонил и Re-трикарбонил с цитратом и октреотидом в качестве основы для создания радиофармацевтических препаратов диагностического и терапевтического назначения, что подтверждается следующими выводами:

1. Комплексы 99гаТс-трикарбонил цитрат и 18811е-трикарбонил цитрат обладают неспецифической туморотропностью и прочно связываются со структурами опухолевых клеток в условиях in vitro. Комплексы 99тТс-трикарбонил октреотид, и 188Ке-трикарбонил октреотид проявляют рецептор-специфическую афинность к опухолевым клеткам, экспрессирующим соматостатиновые рецепторы.

2. 99шТс-трикарбонил цитрат и 99шТс-трикарбонил октреотид обладают выраженной туморотропностью у животных с перевитыми опухолями меланомы и аденокарциномы молочной железы. Подтвержден прогноз о степени удержания изученного соединения в экспериментальном опухолевом очаге, данный по значениям прочности связывания 99тТс-трикарбонил цитрат и 99тТс-трикарбонил октреотид с опухолевыми клетками в условиях in vitro.

3. Визуализация опухолевых очагов при использовании комплексов трикарбонилтехнеция-99м возможна в сроки, определенные по данным их фармакокинетики. 99тТс-трикарбонил цитрат может быть применен в диагностике недиф-ференцированных сарком с превалирующим сосудистым компонентом, а также дифференцированных ангиосарком. 99тТс-октреотид может быть применен в диагностике злокачественных новообразований, характеризующихся сверхэкспрессией соматостатиновых рецепторов.

4. Замена радионуклида 99шТс на 188Яе в комплексах трикарбонил цитрат и трикарбонил октреотид не изменяет их туморотропность и фармакокинетику.

5. В диапазоне объемных активностей 242 — 430 кБк/мл (доза бета-излучения на монослой 0,8 - 1,4 Гр) доказан выраженный цитотоксический эффект комплексов трикарбонилрения-188 для клеток меланомы В 16 и аденокарциномы молочной железы МСБ 7.

188 188

6. Комплексы 11е-трикарбонил цитрат и Яе-трикарбонил октреотид могут быть использованы в ядерной медицине в комплексной терапии ряда онкологических заболеваний, что подтвержается расчетом поглощенных доз, подведенных к экспериментальным опухолевым очагам.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Резюмируя результаты, полученные при выполнении экспериментальной части данной диссертационной работы и их обсуждение можно отметить следующее.

В преломлении к поставленной цели полученные данные позволили судить о возможности применения комплексов трикарбонилтехнеция и трикарбонилрения для создания лекарственных форм диагностических и терапевтических радиофармпрепаратов. В настоящей работе впервые был проведен всесторонний анализ биологического поведения соединений, представляющих собой "функциональные пары", выстроенные по принципу диагностика — терапия и обладающие как неспецифической, так и специфической туморотропностью. Получены радиобиологические характеристики соединений трикарбонилрения-18 8, которые позволили судить о возможности их применения в радионуклидной терапии.

Отмечена неспецифическая туморотропность комплекса 99шТс-трикарбонил цитрат, которая вероятнее всего определяется туморотропными свойствами комплексообразующей функциональной группы трикарбонил технеция. Это подтвержадается различием биологического поведения цитратного комплекса, полученного путем восстановления технеция-99м двухвалетным оловом и комплекса 99mTc-TK Cit.

Специфическое связывание 99тТс-трикарбонил октреотид с опухолевыми клетками и его туморотропность связаны, прежде всего, с сохранением рецепторной специфичности изученного комплекса. Это подтвержено характером накопления и вымывания 99шТс-ТК Окт в экспериментах in vitro, а также поведением 99тТс-ТК Окт в организме животных-опухоленосителей.

Некоторое несоответствие биологического поведения в условиях in vitro и in vivo комплексов 99mTc-TK Cit и 99шТс-ТК Окт, отмеченное для аденокарциномы молочной железы, может быть объяснимо морфологическими особенностями конкретной трансплантированной опухоли молочной железы. Известно, что спонтанные аденокарциномы, как и другие стромальные опухоли, характеризуются недостаточной васкуляризацией. Экспериментальная опухоль, полученная при трансплантации опухолевых клеток по своим морфо-физиологическим характеристикам является не вполне адектватной моделью. Поэтому однозначно отвергать возможность получения корректной диагностической информации при диагностике опухолей молочной железы с помощью изученных комплексов было бы несколько преждевременно.

При анализе данных получено четкое понимание, что ни один из изученных нами комплексов не представляет собой универсального средства для диагностики злокачественных новообразований. Так же- как и использование in vitro методов для оценки функциональной пригодности соединения не отменяет его изучения в условиях in vivo.

Вероятнее всего ни 188Re-TK Cit ни 188Re-TK Окт не найдут применения в ядерной онкологии как моно-терапевтические средства. Однако их применение может быть обосновано в качестве компонента комплексной или комбинированной терапии.

Так 99mTc-TK Cit может быть применен в диагностике, a 188Re-TK Cit в терапии недифференцированных сарком с превалирующим сосудистым компонентом, а также дифференцированных ангиосарком (ангиоэндотелиом, ангиоперицитом, ангиолейомиобластом кровеносных или лимфатических сосудов).

Октреотид, меченный технецием-99м несомненно предназначен для диагностики злокачественных новообразований, характеризующихся сверхэкспрессией соматостатиновых рецепторов. Комплекс 99шТс-ТК Окт показал высокую афинность к малигнизированным клеткам с высоким уровнем экспрессии соматостатиновых рецепторов (MCF 7) в условиях in vitro. Подтверждение его диагностической ценности является предметом продолжения работ по получению лекарственной формы РФП с использованием расширенного ряда экспериментальных моделей различных злокачественных новообразований.

Расчетные данные о дозах бета-излучения рения-188, создаваемых в экспериментальных опухолевых очагах дают основание полагать, что

188 комплексы Re-трикарбонил цитрата и октреотида перспективны в плане дальнейшей разработки терапевтических РФП.

Высокие показатели аккумулированной активности после внутривенного введения трикарбонильных комплексов рения-188 в мочевом пузыре, кишечнике и печени свидетельствуют о преимущественной роли этих органов в выведении. Однако хорошо известно, что гастроэнтероколиты и лучевые циститы, возникающие при введении радионуклидов с целью диагностики или терапии новообразований, не являются факторами, ограничивающими применение радионуклидной диагностики или радионуклидной терапии [119]. Учитывая, что основной вклад в облучение органов ЖКТ и мочевого пузыря вносит излучение рения-188, находящегося в содержимом этих органов, для уменьшения дозовой нагрузки при введении комплексов можно рекомендовать меры, направленные на усиление диуреза.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Клементьева, Ольга Евгеньевна, 2010 год

1. Ядерная медицина, ч.1: Учебное пособие. / Schicha G., Schober О. "Neklearmedizin"/ Перевод с нем. под ред. Шлыгиной O.E., Борисенко А.Р.- Алматы: "Sansam" 2003 - 136 с.

2. Радионуклидная диагностика для практических врачей, /под ред. Лишманов Ю.Б., Чернов В.И. Томск: STT - 2004 - 394 с.

3. Anger Н.О. Radionuclide imading in Medicine. Theory and Practice. ISA Trans. 1966-5 -P. 311-334.

4. Терехов В.И. Современное состояние ядерной медицины. //Новости лучевой диагностики — 1999 — №2 — С. 30-32

5. Стивен Дж. Матер Новые горизонты в применении радиофармацевтических препаратов. Технический обзор. // Бюллетень МАГАТЭ 45/1 - июнь 2003 г. - С. 62 - 65

6. Кодина Г.Е. Методы получения радиофармацевтических препаратов и радионуклидных генераторов для медицины. "Изотопы"/ под ред. Баранов В.Ю. Москва: ИздАТ - 2000 - С. 642 - 664.

7. Münze R. // Proc. Int. Seminar on "Radioisotopes in Life Sciences".-Archamps. ESI 1996 - V. 42.

8. Adelstein S. J., Manning F.D. (Ed.) // Isotopes for Medicine and the Life Sciences Washington: D.C. National Academy Press - 1995 -p.132.

9. Reisinger I., Bouslavitozki K.N., Brenner W. et al. Somatostatin receptor scintigraphy in small-cell lung cancer: results of multicenter study.// J.Nucl.Med. 1998 -V. 39 - P. 224-227

10. United States Pharmacopoeia // USP 24 P. 1327

11. Цыб А.Ф., Дроздовский Б.Я. Радионуклидная терапия. Опыт, проблемы, перспективы. Атомная стратегия XXI — 2003 - декабрь, С. 14

12. Наркевич Б.Я., Ширяев С.В. Методические основы радионуклидной терапии. // Мед. радиол, рад. безопасность 2003 - 49- № 5 — С. 35 -44

13. Jurisson, S., Berning, D., Wei, J., and Dangshe, M. Coordination Compounds in Nuclear Medicine // Chem. Rev. 1993 - 93 - P. 1137-1156.

14. Reichert, D. E., Lewis, J. S., and Anderson, C. J. Metal complexes as diagnostic tools. // Coord. Chem. Rev. 1999 - 184 - P. 3 - 66.

15. Volkert, W. A., and Jurisson, S. Technetium-99m Chelates as Radiopharmaceuticals.// Topics in Current Chemistry 1996 - Vol. 176, P. 123148. Springer-Verlag Berlin, Heidelberg,.

16. Schubiger, P. A., Alberto, R., and Smith, A. Vehicles, Chelators, and Radionuclides: Choosing the "Building Blocks" of an Effective Therapeutic Radioimmunoconjugate.// Bioconjugate Chem. 1996 - 7 (2) - P.165-179.

17. Horn, R., and Katzenellenbogen, J. Technetium-99m labeled receptor-specific small-molecule radiopharmaceuticals: recent developments and encouraging results. // Nucl. Med. Biol. 1997 - 24 - P. 485-498.

18. Dilworth, J. R., and Parrott, S. The biomedical chemistry of technetium and rhenium. // Chem. Soc. Rev. 1998 - 27(Suppl.) - P. 43-55.

19. Олейник H.A., Румянцев П.О., Ильин A.A. и др. Применение технетрила (МИБИ) в диагностике опухолей щитовидной железы и метастазов папиллярного рака щитовидной железы в лимфоузлы шеи.// Мед. радиология и рад. безопасность 1999 - 44(1) - С. 35 - 43.

20. Сысоева Е.М., Волженин В.Е., Ковтун Н.Н. Применение маммо-сцинтиграфии в комплексной лучевой диагностике заболеваниймолочных желёз.// Материалы Всероссийского конгресса лучевых диагностов Москва 2007 - С. 363.

21. Baldari S. et al. 99mTc-MIBI SPET in brain tumors // Q J Nucl Med. -2002 -46.-P. 336-45.

22. Sathekge M.M., Mageza R.B. et al. Evaluation of thyroid nodules with technetmm-99m MIBI and technetium-99m pertechnetate// Head Neck.-2001 -V. 23, №4-p. 305-10.

23. Torregnosa J.V., Fernandez-Cruz L., Canalejo A., et al. 99mTc-sestamibi scintigraphy and cell cycle in parathyroid glands of secondary hyperparathyroidism// World J. Surgery 2000 - 24 (11) - P. 1386 - 1390.

24. Alberto R., Schibli R., Waibel R. Abram U, Schubiger AP. Basic aqueous chemistry of M(OH2)3(CO)3.+ (M=Re, Tc) directed towards radiopharmaceutical application.// Coordination Chemistry Rev. 1999 - P. 901919.

25. Alberto R., Schibli R. // Patent WO 98/48848 of 05.11.98, A61K 51/04.

26. Alberto R., Ortner K., Wheatley N, Schibli R, Schubiger AP. Synthesis and properties of boranocarbonate: a convenient in situ CO source for the aqueous preparation of 99тТс(ОН2)з(СО)з.+. //J. Am. Chem. Soc. 2001 -123 - P. 3135-3136.

27. Горшков Н.И., Лумпов A.A., Мирославов A.C., Суглобов Д.Н. Синтез иона Тс(С0)з(Н20)з.+ и изучение его взаимодействия с гидроксил-ионом в водных растворах// Радиохимия — 2000 — Т.42, №3 — С. 213217

28. Miroslavov A.E., Gorshkov N.I., Lumpov A.A. et al. Synthesis of Aqueous Technetium Tricarbonyl Halides. First Data on Their Pharmakokinetics // Quot. J. Nucl. Med. 1998 - V. 42, No. 3 - p. 19.

29. Горшков Н.И., Мирославов А.Е., Лумпов А.А., Суглобов Д.Н. RF Патент 2125017.

30. Alberto, R., Schibli, R., Waibel, R., Abram, U., and Schubiger, A. Basic aqueous chemistry of М(ОН2)з(СО)з.+(М ) Re, Tc) directed towards radiopharmaceutical application.// Coord. Chem. Rev. 1999 - P. 901-919.

31. Sang Hyun Park, Sepp Seifert, Hans-Jurgen Pietzsch Novel and Efficient Preparation of Precursor 188Re(OH2)3(CO)3.+ for the Labeling of Biomolecules// Bioconjugate Chem. 2006 — 17 - P. 223-225.

32. J.R.Ballinger, M.S. Cooper, S.J. Mather. Tc(CO)3.+ chemistry: a promising new concept for SPECT? Eur. J. Nucl. Med. Imaging, 31, 304 -305 (2004).

33. M.J. Welch, J.S.Lewis. Tc(CO)3.+ chemistry: a promising new concept for SPECT? // Eur. J. Nucl. Med. Imaging 2003 - 30 - P. 1302.

34. M. Lipowska, R. Cini, G. Tamasi et al. Complexes Having the fac-{M(CO)3}+ Core (M ) Tc, Re) Useful in Radiopharmaceuticals: X-ray and NMR Structural Characterization and Density Functional Calculations of

35. Species Containing Two sp3 N Donors and One sp3 О Donor // Inorg. Chem. 2004 - 43 - P. 7774 - 7783.

36. Schibli R., Schubiqer P.A. Current use and future potential of organometallic radiopharmaceuticals. //Eur. J. Nucl. Med. 2002 - V.29, №11-P. 1529-1542.

37. Egli A., Alberto R., Taunahill L. et al. Organometallic 99mTc-aquaion labels peptide to an unprecedented high specific activity. //J. Nucl. Med. 1999 -V.40-P. 1913 - 1917.

38. Soukhov V., Fadeev N., Suglobov D., Kodina G. 99mTc-Carbonil Halides: The new agent for Nuclear Medicine // Eur. J. Nucl. Med. 1999 - 9 - P. 990.

39. Д.Н. Суглобов, A.E. Мирославов, E.M. Левицкая и др. Высшие карбонилы технеция (I). Перспективы применения в радиофармацевтике.// Тезисы Пятой Российской конференции по радиохимии "Радиохимия 2006" Дубна, 23-27 октября 2006 г.

40. Zhang X. Zh., Wang X. В., Wen Н.Т. Technetium, Rhenium and other metals in Chemistry and Nuclear Medicine. Ed. Nicolini M., Mazzi A. // SGEditorial Padova - 2002 - P. 439 - 442.

41. Hao G.Y., Zang J.Y., Jia F et al. // IsoLink mini-symposium (2003) -August 23, 2003 Amsterdam, The Netherlands - P. 527 - 530.

42. Guiyang Hao, Jianying Zangi, Boli Lilu Preparation and biodistribution of novel "mTc(CO)3-CNR complexes for myocardial imaging// Journal of Labelled Compounds and Radiopharmaceuticals 2007 — 50 - P. 13-18.

43. Kothari KK, Satpati D, Joshi S et all. 99mTc carbonyl t-butyl isonitrile: a potential new agent for myocardial perfusion imaging // Nucl Med Commun.-2005 Feb;26(2)-P.155 - 161.

44. M. Dyszlewski, H. M. Blake, J. L. Dahlheimer, C. M. Pica, D. Piwnica-Worms. Characterization of a novel 99mTc-carbonyl complex as a functional probe of MDR1 P-glycoprotein transport activity.// Molecular Imaging -2002 1 - P.24.

45. Guiyang Hao, Jianying Zangi, Boli Lilu. Preparation and biodistribution of novel 99mTc(CO)3-CNR complexes for myocardial imaging. //J Label Compd Radiopharm -2007 50-P. 13-18.

46. Hao G.Y., Zang J.Y., Jia F et al. // IsoLink mini-symposium (2003) -August 23, 2003 Amsterdam, The Netherlands - P. 527 - 530.

47. P.Blauenstein, E.Garcia Garayoa, D.Ruegg et al. Experience with biomolecule-labeling using the Tc(I) tricarbonyl moiety // IsoLink minisymposium (2003) August 23, 2003 Amsterdam, The Netherlands, p. 527 - 530.

48. R.I.J.Feitsma Labeling of thyroid stimulating hormone// IsoLink minisymposium (2003) August 23, 2003 - Amsterdam, The Netherlands - P. 110-113

49. M.Lipowska, E.Malveaux, H.He et al. Synthesis, characterization and evaluation of a novel Tc-99m tricarbonyl complex as a potential renal imaging agent//J.Nucl.Med. 2003 -44 -P.1134-SNM.

50. L.Aloj, M.R.Panico, L.D. D'Andréa et al. In vivo and in vitro characterization of histidine tagged CCK8 labeled with 99mTc-tricarbonyl //Eur.J.NucLMed and Molecular Imaging 2003 -30, Suppl.2 - S183.

51. K. K. Kothari, N. K. Pillarsetty, K. V. Katti, Volkert, W. A. Characterization of complexation reactions of mono- and bidentate-hydroxymethyl phosphine ligands with the organometallic "mTc(I)(OH2)3 (CO)3+ synthon.// Radiochim. Acta 2003 - 91-P.53-57.

52. K.K. Kothari, K. Raghuramanb, N.K. Pillarsetty et al. Syntheses, in vitro and in vivo characterization of a 99mTc-(I)-tricarbonyl-benzylaminodihydro-xymethyl phosphine (NP2) chelate.// Applied Radiation and Isotopes — 2003 58 - P.543-549.

53. T. Chu, J. Xie, and X. Wang. // Hejishu- 2002 25 - P.361.

54. K. Kothari, S. Joshi, M. Venkatesh et all. Synthesis of 99mTc(CO)3-mebrofenin via 99mTc(OH2)3(CO)3.+ precursor and comparative pharmacokinetics studies with 99mTc-mebrofenin.//J. Label. Compd. Radiopharm. 2003 - 46 - P. 633-644.

55. D. Djokic, D. Jankovic. Biological evaluation and comparison of three different procedures for labelling of amino acids tyrosine and lysine with technetium-99m. // J. Label. Compd. Radiopharm. 2007 - 50 - P. 155163.

56. Decristoforo C., Santos I., Pietzsch H. J. et al. Comparison of in vitro and in vivo properties of 99mTc.cRGD peptides labeled using different novel Tc-cores//Q. J.Nucl. Med. Mol. Imaging 2007 - 51- P.33-41.

57. J. F. Tait, C. Smith, and D. F. Gibson. Development of Annexin V Mutants Complex Suitable for Labeling with Tc(I)-Carbonyl Complex.// Bioconjugate Chem. 2002 -13 - P. 1119-1123.

58. Mukheijeea A., Kothari K., To'th G. et all. 99mTc-labeled annexin V fragments: a potential SPECT radiopharmaceutical for imaging cell death. Nuclear Medicine and Biology 33 (2006) 635-643

59. S.R. Banerjee, M.K. Levadala, N. Lazarova et al., Bifunctional single amino acid chelates for labeling of biomolecules with the Tc(CO)3.+ and [Re(CO)3]+ cores // Inorg. Chem. 2002 - 41 - P.6417-6425.

60. La Bella R, Garcia-Garayoa E, Langer M, et al. In vitro and in vivo evaluation of a 99mTc(I)-labeled bombesin analogue for imaging of gastrin releasing peptide receptor-positive tumors.// Nucl. Med. Biol. 2002 -29 -P.553- 560.

61. La Bella R, Garcia-Garayoa E, Bahler M, Blauenstein P, et al. 99mTc(I)-postlabeled high affinity bombesin analogue as a potential tumor imaging agent. //Bioconjug. Chem. -2002 -13 P.599- 604.

62. Garci'a-Garayoa E, Allemann-Tannahill L, Blauenstein P, et al. In vitro and in vivo evaluation of new radiolabeled neurotensin (8-13) analogues with high affinity for NT1 receptors.// Nucl. Med. Biol. 2001- 28 - P.75-84.

63. Garci'a-Garayoa E, Blauenstein P, Bruehlmeier M, et al. Preclinical evaluation of a new, stabilized neurotensin (8-13) pseudopeptide radiolabeled with 99mTc. // J. Nucl. Med. 2002 - 43- P.374- 383.

64. E. G. Garayoa, D. Riiegg, P. Blauenstein, et al. Improving the Tumor Uptake of 99mTc-Labeled Neuropeptides Using Stabilized Peptide Analogues. // Cancer Biotherapy & Radiopharmaceuticals 2004 - V. 19, № 2 - P. 181-188.

65. Garci'a-Garayoa E, Maes V, Blauenstein P, Blanc A, et al. Double-stabilized neurotensin analogues as potential radiopharmaceuticals for NT receptor-positive tumors. // Nucl. Med. Biol. -2006 -33 P. 495-503.

66. E. G. Garayoa, D. Riiegg, P. Blauenstein, et al. Chemical and biological characterization of new Re(CO)3/"mTc.(CO)3 bombesin analogues. //Nucl. Med. and Biol. 2007 - 34 - P. 17-28.

67. C. Mtiller, A. Hohn, P. A. Schubiger, R. Schiblil. Preclinical evaluation of novel organometallic 99mTc-folate and 99mTc-pteroate radiotracers for folate receptor-positive tumour targeting. //Eur. J. Nucl. Med. Mol. Imaging -2006-33-P.1007-1016.

68. Labelling of small biomolecules using novel Technetium-99m cores // Technical reports ser. N 459. Viena, IAEA - 2007- P. 129 -140.

69. Byung Chul Lee, Dong Hyun Kim, Jae Hak Lee et al. 99mTc(CO)3-15-N-(Acetyloxy)-2-picolylamino.pentadecanoic Acid: A Potential Radiotracer for Evaluation of Fatty Acid Metabolism// Bioconjugate Chem. 2007 - 18 -P.1332-1337.

70. Y. Yang, J. X. Zhang, J. J. Wang, L. Zhu. Two novel procedures of preparation for Tc(CO)2(NO).2+ labeled by EHIDA and its biodistribution. //Journal of Radioanalytical and Nuclear Chemistry 2007 -Vol. 273, No.l -P.31-36 .

71. Zhang Xiaobo, Zhu Lin, Ding Shaoke & Liu Boli. Primary study of a novel Tc-tricarbonyl cocaine analogue as the potential DAT imaging agent // Chinese Science Bulletin 2005 -Vol. 50 No. 8 - P.761—764.

72. R. Schibli, P. A. Schubiger Review article Current use and future potential of organometallic Radiopharmaceuticals. // Eur. J. of Nucl. Med. 2002 -Vol. 29, No. 11 - P. 1529 - 15421 oo

73. J.He, C.Liu, J.L.Venderheyden et al. Radiolabeling morpholinos with Re carbonyl provides improved in vitro and in vivo stability to Re-oxidation // J. Nucl. Med. 2003 - 44 - P.326-SNM.

74. C. Miiller, P. A. Schubiger, R. Schibli. Isostructural folate conjugates radiolabeled with the matched pair 99mTc/188 Re: a potential strategy fordiagnosis and therapy of folate receptor-positive tumors // Nucl. Med. and Biol. 2007 - 34 - P.595-601.

75. Jiaoyun Xia, Yongxian Wang, Junfeng Yu et all. Synthesis, in vitro and in1 R8vivo behavior of Re(I)-tricarbonyl complexes for the future functionalization of biomolecules. // J. of Radioanalytical and Nucl. Chem. -2008 Vol. 275, No.2 - P.325-330.

76. Kanchan Kothari, Ketaki Bapat, Aruna Korde et all. Radiochemical and Biological Studies of 188Re Labeled Monoclonal Antibody- CAMA3C8 Specific for Breast Cancer. // Indian J. of Nucl. Med. 2004 - Vol. 19, No. 1, March-P. 47-50.

77. A. Antoccia, G. Baldazzi, M. Bello et al. Simulations and tests for metabolic radiotherapy with l88Re. // Nucl. Phys. Biol. (Proc. Suppl.) 2007 - 172 -P. 303-307.

78. A. Antoccia, G. Baldazzi, A. Banzato et al. 188Rhenium induced cell death and apoptosis in a panel of tumor cell lines. // Nucl. Instrum. Meth. 2007 -571 -Nl-2 SPEC. ISS. - P. 471-474.

79. Kim De Ruyck, Bieke Lambert, Klaus Bacher et al. // Biologic Dosimetry1 OO 1 O 1of Re-HDD Lipiodol Versus ,JT-Lipiodol Therapy in Patients with Hepatocellular Carcinoma.// J. of Nucl. Med. 2004 - Vol. 45, No. 4 - P.

80. Bayly, S. R., Fisher, C. L., Storr, T., et al. Carbohydrate conjugates forf\f) 1 OOmolecular imaging and radiotherapy: Tc(I) and Re(I) tricarbonyl complexes of Ar-(2-hydroxybenzyl)-2-amino-2-deoxy-D-glucose.// Bioconjugate Chem. 2004 - 15 - P.923-926.

81. P. D. Raposinho, J. D.G. Correia, S. Alves et all. A 99mTc(CO)3-labeled pyrazolyl- a-melanocyte-stimulating hormone analog conjugate for melanoma targeting // Nuclear Medicine and Biology. 2008 — 35 - P. 91- 99.

82. V.Cortez-Retamozo, T. Lahoutte, V. Caveliers et all. 99mTc-Labeled Nanobodies: A New Type of Targeted Probes for Imaging Antigen Expression // Current Radiopharmaceuticals 2008 - 1 - P. 37-41.

83. Zhang X. Zh., Wang X. В., Wen H.T. Technetium, Rhenium and other metals in Chemistry and Nuclear Medicine. /Ed. Nicolini M., Mazzi A. -SGEditorial, Padova 2002- P. 439 - 442.

84. E. Garci'a Garayoa, D. Riiegg, P. Blauenstein et all. Chemical and biological characterization of new Re(CO)3/99mTc.(CO)3 bombesin analogues// Nuclear Medicine and Biology- 2007-34 P. 17-28.

85. J. Du, J. Hiltunen, M. Marquez, S. Nilson, and A. R. Holmberg, Technetium-99m labelling of glycosylated somatostatin-14//Appl. Radiat. Isot. 2001 - V. 55, №2 - P. 181-187.

86. Лабораторный регламент "Набор для получения цитратного комплекса технеция-99м для инъекций по упрощенному методу" 107/98. -Институт биофизики МЗ СССР. М. - 1974 - 20 с.

87. Puck ТТ, Marcus PI. Action of x-rays on mammalian cells.// J. Exp. Med. -1956-103-P. 653-666.

88. Культура животных клеток. Методы/ под ред. Р. Фрешни. Москва: Мир- 1989-333 с.

89. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Шахов В.П. Методы культуры ткани в гематологии. Томск: ТГУ — 1992— с. 237.

90. Эмануэль H.H. Кинетика экспериментальных опухолевых процессов. М.: Наука-1977-416 С.

91. Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных (Приказ Минздрава СССР №755) М. - 1977.

92. Эвтаназия экспериментальных животных. Методические рекомендации. — М. — 1985.

93. Извлечение из "Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других научных целей" ЕЭС, Страсбург — Ланималогия — 1993 — №1, С.29

94. Бесядовский Р.А, Иванов К.В., Козюра А.К. Справочное руководство для радиобиологов // М.: Атомиздат -1978-С.90-91.

95. Loeviger R., Büdingen Т., Watson Е. MIRD Primer for Absorbed Dose Calculations.// Soc. OfNucl. Med. 1988.

96. Spaic R., Petrovic В., Dragovic M., Toskovic F. Referent 3D solid tumour model and absorbed dose calculation at cellular level in radionuclide therapy.// World Journal of Niclear Medicine 2007 - V. 6, №1- P. 45 - 51.

97. Тюбиана M., Дютрекс Ж., Жокее П. Физические основы лучевой терапии и радиобиологии. М.: Медицина — 1969 — С. 450 — 460.

98. Е. Dadachova, J. D. Nosanchuk, Li Shi. Dead cells in melanoma tumors provide abundant antigen for targeted delivery of ionizing radiation by a mAb to melanin//PNAS 2004 - vol. 101, No. 41- P. 14865 - 14870.

99. G. Keller, A. V. Schally, A. Nagy et al. Effective therapy of experimenttal human malignant melanomas with a targeted cytotoxic somatostatin analogue without induction of multi-drug resistance proteins// Int. Journal of Oncology- 2006-28-P. 1507-1513,

100. P. M. Smith-Jones, С. Bischof, M. Leimer et al. DOTA-Lanreotide: А Novel Somatostatin Analog for Tumor Diagnosis and Therapy// Endocrinology-1999-Vol. 140, No. 11 P. 5136-5148.

101. R. Freudenberg; M. Andreeff; L. Oehme; J. Kotzerke. Dosimetry of cell-monolayers in multiwell plates // Nuklearmedizin Schattauer 2009 -3 - P. 120 - 126.

102. Кронгауз A.H., Ляпидевский B.K., Фролова A.B. Физические основы клинической дозиметрии. М.: Атомиздат - 1969 - С. 278 - 279.

103. Шмакова Н.М., Куцало П.В., Норсеев Ю.В. и др. // Мед. радиология и рад. безопасность, 2002, № 3, с. 5 — 9

104. Murugesan S., Shetty S.J., Noronha О.Р. et al. Technetium-99m-cyclam AK 2123: a novel marker for tumor hypoxia //Appl. Radiat. Isot. 2001 -Vol. 54 - P. 81-88.

105. Разработка технологий диагностических и терапевтических препаратов для ядерной медицины на основе специфических к рецепторам соединений и оптимизация нейтрон- и фотон-захватной терапии // Отчет о НИР, приложение Б 2007- Москва ГНЦ — ИБФ.

106. Kjerstin Bruus-Jensen, Methoden zur radiomarkierung peptidischer tracer18 99mmit F und Tc fur die nuklearmedizinische diagnostik.// Dissertation -Institut für radiochemie der technischen Universität, München 2006 — 166 P.

107. T. Urashima, H. Nagasawa, K. Wang et al. Induction of Apoptosis in Human Tumor Cells after Exposure to Auger Electrons: Comparison with

108. Gamma-Ray Exposure.// Nucl Med Biol. 2006 November - 33(8) - P. 1055 -1063.

109. E.Kinnaert, R. Morandini, S. Simon et all. The Degree of Pigmentation Modulates the Radiosensitivity of Human Melanoma Cells // Radiat. Res. -2000-V. 154-P. 497-502.1 ЙЯ

110. Liepe К., Kropp J., Hliscs R. Et al. Dosimetry of Re-hydroxyethylidene Diphosphonate in human prostate cancer skeletal metastases // J. Nucl. Med. 2003 - V. 44 - P. 953 - 960.

111. Касаткин Ю.Н., Пурижанский И.И. Двадцатилетний опыт радиойод-терапии больных токсическим зобом // Московский медицинский журнал -1999 -№ 1 С. 17-19.