Экспериментальная оценка цитогенетического и цитотоксического действия акриламида на клетки щитовидной железы тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.02.01, кандидат медицинских наук Алтаева, Александра Андреевна

• Алтаева, Александра Андреевна
• кандидат медицинских наук
• 2011

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Алтаева, Александра Андреевна

Введение.

Глава 1. Оценка мутагенного действия факторов окружающей среды на щитовидную железу (обзор литературы).

Глава 2. Материалы и методы исследования

2.1. Объекты исследования.

1 ' ' !

I I I

2.2. Методы исследования.

2.2.1. Цитогенетические исследования

-Разработка методов приготовления суспензионных препаратов клеток щитовидной железы экспериментальных животных.

-Кариологический анализ препарата щитовидной железы.

-Оценка результатов кариологического анализа на клетках щитовидной железы с учетом интегральных показателей.

2.2.2. Морфологический анализ щитовидной железы

-Методика фиксации, приготовления препарата.

-Анализ, оценка результатов исследования морфологического препарата.

Собственные исследования

Глава 3. Исследование кариологических и морфологических показателей щитовидной железы у экспериментальных животных

3.1 Морфологический анализ щитовидной железы у интактных животных.

3.2 Кариологический анализ щитовидной железы у интактных животных.

3.3 Влияние гемитиреоидэктомии на клетки щитовидной железы крыс.

Глава 4. Оценка цитогенетического и цитотоксического эффектов акриламида в клетках щитовидной железы экспериментальных животных

4.1 Зависимость «доза-эффект» цитогенетического и цитотоксического эффектов акриламида на фолликулярные тироциты (А-клетки) экспериментальных животных.

4.2 Зависимость «доза-эффект» цитогенетического и цитотоксического эффектов акриламида на другие клеточные популяции щитовидной железы крыс.

4.3 Зависимость выраженности цитогенетического и цитотоксического эффектов акриламида на фолликулярные тироциты (А-клетки) крыс при разных режимах введения.

4.4. Зависимость действия акриламида на другие клеточные популяции ЩЖ экспериментальных животных при разных режимах введения.

4.5. Цитогенетическое и цитотоксическое действие акриламида на фолликулярные тироциты (А-клетки) при его введении до и после гемитиреодэктомии у крыс.

4.6. Цитогенетическое и цитотоксическое действие акриламида на другие клеточные популяции щитовидной железы крыс при его введении до и после гемитиреодэктомии.

4.7. Анализ корр е ляций между цитогенетическими показателями, показателями пролиферации и деструкции ядра при действии акриламида на клетки щитовидной железы крыс.

Глава 5. Оценка патоморфологического действия акриламида на щитовидную железу экспериментальных животных.

5.1. Зависимость «доза-эффект» выраженности морфологических изменений в ЩЖ экспериментальных животных при воздействии акриламида.

5.2. Эффект выраженности морфологических изменений в ЩЖ экспериментальных животных при действии акриламида в зависимости от кратности его введения.

5.3. Зависимость выраженности морфологических изменений в ЩЖ экспериментальных животных при воздействии акриламида от времени проведения гемитиреоидэктомии.

Глава 6. Обсуждение результатов

6.1 Кариологический анализ на клетках щитовидной железы.

6.2 Оценка влияния мутагенов на клетки щитовидной железы на примере акриламида.

6.3 Значение краткосрочных тестов (кариологический анализ) для прогноза канцерогенного действия ФОС на клетки щитовидной железы.

Выводы.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Экспериментальная оценка цитогенетического и цитотоксического действия акриламида на клетки щитовидной железы»

Оценка безопасности факторов окружающей среды (ФОС) для человека включает в себя изучение генотоксического, цитотоксического и мутагенного действия этих факторов на различных биологических объектах. Мутагенные свойства ФОС изучают с использованием стандартной тест-системы, включающей в качестве обязательных, два теста: тест Эймса на Salmonella typhimurium для выявления генных мутаций и учет хромосомных аберраций или микроядер в клетках костного мозга мышей или крыс in vivo [43, 129]. В настоящее время рекомендуется оценка мутагенного эффекта в клетках других органах млекопитающих [28, 85]. Одним из таких методов исследования является разработанный в НИИ экологии человека и гигиены окружающей среды им. А.Н.Сысина полиорганный микроядерный тест, включающий цитогенетический анализ клеток органов желудочно-кишечного тракта, дыхания, выделения, сперматид [23, 28, 41, 42, 48, 49, 57, 61]. В настоящее время он дополнен большим набором показателей состояния ядра клетки и применяется в виде более информативного полиорганнош кариологического анализа [40, 47].

Щитовидная железа (ЩЖ) является одним из основных органов поддержания внутреннего гомеостаза организма и реагирует на любые изменения в организме, как эндогенного, так и экзогенного характера.

Ввиду интенсивного роста техногенной нагрузки неуклонно увеличивается частота заболеваний ЩЖ. Распространенность рака данного органа по данным ВОЗ увеличилась за последние 20 лет более чем в два раза [51]. По прогнозам ученых, при сложившейся неблагоприятной экологической ситуации рост числа заболеваний ЩЖ будет прогрессировать и далее за счет узловых форм зоба, рака ЩЖ, а также аутоиммунных заболеваний [45]. Показано, что загрязнение окружающей среды вызывает изменение цитологического статуса ЩЖ [5, 12, 94].

Огромное количество химических веществ, с которыми контактирует человек в промышленности, быту, и других факторов являются известными индукторами тиреоидной патологии, среди них: 4,4-метилендианилин, флуориды, 2,4- диаминоанизол, пропилтиоурацил, 4,4-тиодианилин, нитробензол, метимазол, диэтилтиомочевина, этилентиомочевина, метилнитрозомочевина и др. Одним из таких соединений является акрил амид, повсеместно распространенный в окружающей среде.

Акриламид используется для приготовления клеев, красок, тканей; в парфюмерно-косметической продукции; на полимерном производстве (стойматериалы, упаковка); в виде полимера - поли акр ил амида для осветления питьевой воды, для обработки муниципальных и промышленных отходов; как изолятор при строительстве дамб, туннелей и резервуаров для воды. Полиакриламидные гели применяют также в качестве имплантов в пластической хирургии [32, 34, 101].

В последние годы мировое сообщество обеспокоено обнаружением акрил амида в продуктах, подвергнутых высокотемпературной обработке -жареном картофеле (330 мкг/кг), картофельных (1343 мкг/кг) и кукурузных чипсах (167 мкг/кг) и др. Поступление акриламида с пшцей и водой, табачным дымом при обычном или пассивном курении значительно увеличивает его концентрацию в организме. Установлено, что в среднем человек потребляет 0,3-0,8 мкг/кг акриламида в день, а по данным ВОЗ ПДД поступления акриламида в организм человека вместе с продуктами питания -1 мкг/день.

Согласно руководству Европейской Комиссии (1988), акриламид относится: к группе 2А канцерогенов (МАИР) - «вероятно, вызывает рак у людей», ко 2-й группе мутагенов - «может вызывать генетические повреждения» и к 3-ему классу по токсичности - «возможен риск бесплодия».

ПДК акр и л амид а в воде водных объектов хозяйственно-питьевого и культурно-бытового водопользования (ГН 2.1.5.1315-03) - 0,0001мг/л, лимитирующий признак вредности установлен по санитарно-токсикологическому показателю. Но по данным ВОЗ содержание акриламида в питьевой воде не должно превышать 0,0005 мг/л.

Известны мутагенные свойства акриламида, определенные при оценке клеток костного мозга. Мутагенный эффект в костном мозге мышей в виде появления микроядер, хромосомных аберраций и ДНК повреждений выявлен только в дозах 4 мг/кг и выше. В костном мозге крыс цитогенетические эффекты не выявлены при действии акриламида в дозе 100 мг/кг [112, 132]. В результате проведения комплексных Международных исследований по оценке эффектов акриламида, показана его тропность к ЩЖ - индукция опухолей в этом органе при действии дозы 2 мг/кг/сут [106]. Зависимость «доза-время-эффект» при действии акриламида на ЩЖ почти не изучена, хотя в настоящее время данным исследованиям придается огромное значение [38, 44].

Исследования ЩЖ, проводимые в настоящее время в профилактической медицине для определения негативного влияния того или иного фактора окружающей среды (ФОС), не всегда дают объективную оценку. Изучение канцерогеннбго действия является длительным и дорогостоящим, и ЩЖ часто не включена в перечень исследуемых органов при тестировании канцерогенов [104].

Обобщающие руководства по морфологической диагностике разных состояний ЩЖ, отражающие современные подходы, в отечественной литературе немногочисленны [7, 52]. Исследования по изучению цитотоксического и генотоксического действия факторов окружающей среды на клетки ЩЖ единичны [6, 12, 19, 24, 25, 35, 77, 94, 114, 119-122]. Поэтому важной проблемой в эколого-гигиенических и токсикологических исследованиях является разработка адекватных, простых в исполнении, 7 экономически доступных и отвечающих современным диагностическим стандартам тест-систем для оценки генотоксического действия ФОС на клетки ЩЖ.

Методы оценки мутагенного эффекта различных факторов на клетках ЩЖ в эксперименте почти не разработаны. Решению этой задачи посвящены исследования, проводимые в Ярославском медицинском институте под руководством профессора A.B. Павлова. Но для постановки микроядерного теста на клетках ЩЖ авторы применяют дорогостоящий ферментный метод диссоциации клеток с исследованием ограниченного количества показателей [12, 24].

Мутагенное действие акр и л амида на клетки ЩЖ in vivo практически не изучено. Таким образом, хорошая общая изученность вещества, его тропность к ЩЖ, индукция опухолей в этом органе, выявленная мутагенность для других органов стали основанием для выбора акриламида в качестве модельного мутагена в нашем исследовании. Поэтому целью данного исследования явилась разработка метода оценки опасности химических веществ по цитогенетическим и цитотоксическим показателям действия на клетки ЩЖ и апробация его на примере акриламида.

Для достижения цели исследования сформулированы следующие задачи:

1. Разработать метод кариологического анализа клеток ЩЖ (расширенный микроядерный метод) в эксперименте in vivo для оценки цитогенетического и цитотоксического действия химических соединений.

2. Оценить цитогенетическое и цитотоксическое действие акриламида на клетки ЩЖ в опытах in vivo.

3. Изучить закономерности цитогенетического и цитотоксического действия акриламида на клетки ЩЖ «доза- эффект» и «время- эффект», а также от времени введения акриламида при гемитиреоидэктомии (ГТЭ).

4. Определить сопряженность наркологических и морфо-функциональных показателей состояния эпителия ЩЖ при действии акр ил амид а и возможность использования этих показателей при тестировании химических веществ, в том числе генотоксикантов и канцерогенов.

Научная новизна. Впервые:

1) разработан метод кариологического анализа клеток ЩЖ в эксперименте in vivo для оценки цитогенетического и цитотоксического действия химических соединений, отвечающий диагностическим стандартам и экономическим критериям;

2) на препаратах, полученных данным методом, проведена морфологическая классификация типов клеток ЩЖ крыс по форме и структуре клеточных компонентов;

3) установлены зависимости «доза- эффект» и «время- эффект» при действии акр ил амида на клетки ЩЖ во всем исследованном диапазоне доз. Определены цитогенетический и цитотоксический эффекты акриламида на клетки ЩЖ в эксперименте in vivo в дозах 0,004; 0,02 и 0,1LD50;

4) дано теоретическое обоснование полученной зависимости «доза-эффект», заключающееся в снижении цитогенетического эффекта при действии акриламида в средней дозе, соответствующей 0,02LDso, за счет его влияния на клеточную кинетику (изменения пролиферативной активности и апоптоза);

5) преимущество комплексного подхода к оценке действия акриламида на ЩЖ подтверждено выявленной сопряженностью цитогенетических, цитотоксических и морфо - функциональных показателей.

Практическая значимость. Разработанный метод подан как Евразийская заявка на изобретение № 201000068 от 18.11.2009 г. «Способ выявления цитогенетического и цитотоксического действия факторов окружающей среды в клетках щитовидной железы».

По материалам диссертационной работы подготовлены методические рекомендации «Оценка цитогенетического и цитотоксического действия факторов окружающей среды на клетки щитовидной железы экспериментальных животных in vivo», рекомендованные для учреждений, занимающихся гигиеническими и токсикологическими исследованиями. Утверждены председателем научного совета Российской Федерации по экологии человека и гигиене окружающей среды академиком РАМН Ю.А. Рахманиным 03.02.2011г.

Результаты диссертационной работы внедрены в практикум для студентов, проводимого Учебно-научным центром Учреждения Российской академии наук Института общей генетики им. Н.И. Вавилова РАН и кафедры генетики Биологического факультета Московского государственного университета им. М.В. Ломоносова (акт о внедрении № 12504-01-2115/66 от 31.01.2011г.), а также используются в учебном процессе на лекциях и семинарских занятиях Чеченского государственного университета (акт о внедрении № 1424-06-19 за 10.12.2010г.).

Работа выполнена в лабораториях цитогистологии и генетического мониторинга и НИИ экологии человека и гигиены окружающей среды им. А.Н. Сысина в рамках двух плановых тем НИР 080 и 090.

Апробация работы. Материалы диссертации апробированы на заседании Межотдельческой комиссии по апробации докторских и кандидатских диссертаций ФГБУ «НИИ ЭЧ и ГОС им. А.Н.Сысина» Минздравсоцразвития России 23 ноября 2010г.; представлены: на 2-й и 3-й Всероссийских научно-практических конференциях молодых ученых и специалистов «Окружающая среда и здоровье» (Рязань, 2007, Москва 2009); Научной сессии «Экологические риски здоровью населения на Крайнем Севере» (Надым, 2007); Международном экологическом форуме «Экофорум- 2008» (Санкт-Петербург, 2008); XX Международном Конгрессе Генетиков «Genetics- understanding living systems» (Берлин, Германия, 2008); Ш Съезде Токсикологов (Москва, 2008); V ю

Международной конференции «Донозоология-2009» (Москва, 2009); X Всероссийском Конгрессе диетологов и нутрициологов «Питание и здоровье» (Москва, 2009); Межвузовской научной конференции с международным участием «Современные проблемы гигиены, общественного здоровья и здравоохранения» (Москва, 8 декабря 2009); VI Съезде Российского общества медицинских генетиков (Ростов-на-Дону, 1418 мая 2010); VI Международном симпозиуме «Медико-биологические проблемы безопасности населения» (Греция, 2010); Пленуме Научного совета по экологии человека и гигиене окружающей среды и Научного совета по медико-экологическим проблемам здоровья работающих «Научно-методические и законодательные основы обеспечения генетической безопасности факторов и объектов окружающей и производственной среды в целях сохранения здоровья человека» (Москва, 15 - 16 декабря, 2010).

Публикации по теме диссертации. По материалам диссертации опубликовано 17 печатных работ, из них 2 - в журналах, рекомендуемых

ВАК.

Личный вклад автора в работу составил 80%.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, трех глав собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и списка литературы. Текст изложен на 155 страницах машинописи, иллюстрирован 30 таблицами, 39 рисунками. Указатель литературы содержит 155 источников, из них 62 отечественных и 93 иностранных авторов.

Заключение диссертации по теме «Гигиена», Алтаева, Александра Андреевна

выводы

1. Для гигиенических и токсикологических исследований разработаны метод, алгоритм и критерии оценки цитогенетического действия химических соединений на клетки ЩЖ экспериментальных животных in vivo. Метод заключается в проведении кариологического анализа, включает количественное определение частоты клеток с микроядрами, а также дополнительных показателей цитогенетического действия, пролиферации и деструкции ядра, что значительно расширяет объем получаемой информации, позволяя оценивать механизмы действия различных факторов. Ограничением данного метода служит необходимость проведения ГТЭ для стимуляции пролиферации тироцитов, поскольку они относятся к медленно обновляющимся клеточным популяциям.

2. Критериями обязательного проведения кариологического анализа на клетках ЩЖ являются: токсичность исследуемого фактора для ЩЖ у млекопитающих и человека; ДНК - повреждения в клетках ЩЖ в опытах in vivo и in vitro; канцерогенный эффект в ЩЖ; вредное действие на ЩЖ людей по данным эпидемиологических исследований.

3. Цитогенетическое действие акр ил амида на клетки ЩЖ крыс в эксперименте in vivo проявляется при действии всех исследованных доз, соответствующих 0,004LD50 (0,496 мг/кг), 0,02LD5o (2,48 мг/кг) и 0,1LD50 (12,4 мг/кг), не вызывающих эффекта в клетках костного мозга. Для установления максимальной недействующей дозы необходимо расширить диапазон исследуемых доз.

4. Установлено, что однократное и трехкратное воздействие акриламида в дозе 0,1LD5o вызывает приблизительно одинаковый уровень цитогенетических нарушений в клетках ЩЖ. Пролиферативная активность ткани достоверно снижается в 1,7 раза при однократном действии акриламида и повышается в 2,5 раза по отношению к контролю при трехкратном введении. Апоптический индекс достоверно повышается с кратностью воздействия в 2 и 4,7 раза по отношению к контролю.

5. При действии акр ил амид а на клетки ЩЖ проявилась сопряженность морфо-функциональных и кариологических показателей. Так, доля интерфолликулярной ткани коррелировала с долей клеток с микроядрами (1-0,8), с суммой цитогенетических нарушений (г=0,87), с долей суммарного показателя пролиферации (г =0,8), с долей А-клеток с кариопинозом (г =0,79) и с апоптическим индексом (г=0,8-0,84). Изменения в ЩЖ при действии акриламида сопровождались повышением функциональной активности, оцениваемой по увеличению доли коллоида с резорбцией. Полученные данные позволяют предположить, что акриламид, вызывая цитогенетические нарушения и изменение пролиферации клеток ЩЖ, приводит к развитию новообразований в этом органе.

6. Установленная в наших исследованиях высокая тропность акриламида к ЩЖ крыс сопоставима с данными литературы. Минимальная из исследованных нами действующая доза составила 0,5 мг/кг, что в 8 раз ниже, чем МДДмуг для сперматид мышей; в 100 раз ниже МДДмуг для сперматид крыс, при отсутствии эффекта в костном мозге крыс даже при действии акриламида в дозе 100мг/кг. Доза акриламида, соответствующая 0,004Ь050, сопоставима с минимальными дозами, индуцирующими опухоли у крыс: 0,5 мг/кг- опухоли мошонки, 2 мг/кг- опухоли ЩЖ. В связи с этим предлагаемый метод рекомендуется как краткосрочный тест для прогноза канцерогенного эффекта исследуемых факторов в ЩЖ.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Алтаева, Александра Андреевна, 2011 год

1. Аксель Е. М., Горбачева И. А. Заболеваемость детей злокачественными новообразованиями и смертность от них в России и странах СНГ.// Вестник РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН.-2009.- Т.19.- №2 (прил.1).-С.135-136

2. Александров Ю.К., Павлов A.B., Беляков И.Е., Кораблева Т.В. Морфологический анализ генетически поврежденных тироцитов при узловой патологии щитовидной железы.// Вестник хирургии им. И. И. Грекова. -2007.-№2.-С.58-61.

3. Александров Ю.К., Павлов A.B., Беляков И.Е., Кораблева Т.В. Формирование тироцитов с микроядрами при раке щитовидной железы.// Анналы хирургии.-2007.-№ 3.-С.38-41.

4. Беляева H.H. Клеточная восстановительная регенерация как биомаркер вредного действия при гигиенической оценке факторов окружающей среды. //Автореф. дис. докт. биол. наук. М. 1997.-47с.

5. Беляева H.H. Морфологические критерии риска вредного воздействия факторов окружающей среды на организм.// Гигиена и санитария.-2002.-№6.-С. 75-76.

6. Бомаш Н.Ю. Морфологическая диагностика заболеваний щитовидной железы. М.: Медицина. - 1981. - 176 с.

7. Бочков Н.П. Клиническая генетика.- М.: Геотар- Медиа,- 2006, 480с.

8. Бочков Н.П., Чеботарев А.Н. Наследственность человека и мутагены окружающей среды.- М.: Медицина.-1989.- 272с.

9. Бузиашвили И.И., Фадеев B.B. Щитовидная железа и ее заболевания. //Интернет-портал «Тиронет» http:// (thyronet.rusmedserv.com/thspec/ index.htm)

10. Быков В. JI. Частная гистология человека. // Сотис: Санкт-Петербург. -2002.- С. 47-50.

11. Гансбургский М.А. Анализ клеток с микроядрами в оценке пролиферации эпителия щитовидной железы// Дисс. канд. мед. наук,-М.- 2005.-77с.

12. Давыдов М.И., Аксель Е.М.Заболеваемостъ злокачественными новообразованиями населения России и стран СНГ в 2006г.// Вестник РОНЦ им.Н.Н.Блохина РАМН.- 2009.- Т.19, №2 (прил.1).- С. 56

13. Дедов В. И., Дедов И. И., Степаненко В. Ф. Радиационная эндокринология // М.: Медицина.-! 993,- 208 е.,

14. Дедов И.И., Трошина Е.А., Александрова Г.Ф. Диагностика, лечение и профилактика узловых форм заболеваний щитовидной железы. // Руководство для врачей.- М.- 1999.- 322с

15. Джумбаев А., Рыспекова Ч., Самиева Н., Мамашов Н., Осумбеков Б. Рак щитовидной железы и эндемический узловой зоб. // Вестник РОНЦ им.Н.Н.Блохина РАМН.- 2009.- Т.20.- №2 (прил.1).- С. 12

16. Дурнев А.Д., Середенин С.Б. Мутагены (скрининг и фармакологическая профилактика воздействий).// М.: Медицина. -1998.-328 с.

17. Ермакова О.В. Структурные перестройки периферических эндокринных желез мышевидных грызунов в условиях хронического облучения в малых дозах. // Автореф. дисс. докт.' биол. наук,- М.-2008.-45С.

18. Ермакова О.В., Павлов A.B., Кораблева Т.В. Цитогенетическиеэффекты в фолликулярном эпителии щитовидной железы крыс придлительном воздействии гамма-излучения в малых дозах.//134

19. Радиационная биология. Радиоэкология,- 2008,- Т. 48.- №2.- С. 160167.

20. Ефремов JI. Рак щитовидной железы.// Медицинская газета.-2010,-№19/19/3- С.9-10

21. Имянитов E.H. Фундаментальные закономерности опухолевого роста. // Вестник РОНЦ им.НЛ.Блохина РАМН.- 2009.- Т.20.- №1,- С.89

22. Князев Ю.А., Таболин В.А., Тихонов В.В. Влияние гипоксии на функциональное состояние щитовидной железы у недоношенных детей разного гестационного возраста.// Педиатрия,- 1989.- № 10.- С. 24-48

23. Коваленко М.А. Оценка цитогенетического эффекта факторов окружающей среды в клетках органов дыхательной системы экспериментальных животных и человека.// Автореф. дис. канд. биол. наук,- М,- 2005.-22с.

24. Кораблева Т.В. Изучение клеток с микроядрами в оценке возрастных закономерностей пролиферации эпителия щитовидной железы.// Автореф. дис. канд. мед. наук.- М.-2007.-27с.

25. Краевский H.A., Райхлин Н.Т. Гистологические основы классификации опухолей щитовидной железы в свете современных представлений о строении и функции этого органа.// Арх. пат.- 1975.-№1.-С.22-28.

26. Лилли Р. Патогисто логическая техника и практическая гистохимия.// М.: Мир.- 1969.- 647 с.

27. Методические указания по оценки мутагенной активности факторов окружающей среды в клетках разных органов млекопитающих микроядерным методом. — М.-2001.-22с.

28. Методические указания по оценке мутагенных свойств фармакологических веществ.// Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М.: Минздрав РФ, ЗАО «ИИА «Ремедиум» - 2000г.-С.47-60.

29. Методические указания по изучению мутагенной активности химических веществ при обосновании их ПДК в воде. М.: Минздрав CCCP.-1986.-23c.

30. Надь Ю. Выявление злокачественных новообразований щитовидной железы в поликлинических условиях.// Вестник РОНЦ им.Н.Н.Блохина РАМН,- 2009.-Т.20, №2 (прил.1).- С. 15-16

31. Неробеев А.И. Осипов Г.И. Малаховская В.И., Ищенко A.JI. Опыт применения полиакриламидного геля для контурной пластики мягких тканей // Анналы пластич., реконстр. и эстетич. хирургии. — 1997. №2. -С.22-29

32. Нерсесян А.К. Микроядерный тест в эксфолиативных клетках человека как метод изучения действия мутагенов/канцерогенов.// Цитология и генетика.- 1996.- Т.ЗО, №5.- С.91-96

33. Острецова Н.И., Адамян A.A., Копыльцов A.A., Николаева-Федорова A.B. Поли акр иламидные гели, их безопасность и эффективность (обзор).// Анналы пластич., реконстр. и эстетич. хирургии. 2003. - №3.-С. 72-87.

34. Павлов A.B., Гансбургский А.Н. X Конгресс международной ассоциации морфологов.// Морфология.- 2010.- Т. 138.- №6.- С.81-84

35. Паршин B.C., Тарасова Г.П., Глотов П.И. Ультразвуковой скрининг в диагностике заболеваний щитовидной железы.// Методические аспекты и эффективность. Визуализация в клинике,- 1999.-14-15.-С.1-7.

36. Паршин B.C., Терентъев P.O., Цыб А.Ф. Роль эхографии в диагностике малого рака щитовидной железы (Т1) на дооперационном этапе. // Российский онкологический журнал.- 1998.-№ 4.-С. 35-38.

37. Пинигин М.А. Лаборатория гигиены атмосферного воздуха.// Сборник трудов НИИ ЭЧ и ГОС к 70-ти летаю,- М.- 2001.- С.57-69.

38. Подвязников С.О. Рак щитовидной железы.// Русский медицинский журнал. Онкология.- 1998.- Т. 6, № 10.

39. Полиорганный микроядерный тест в эколого-гигиенических исследованиях/Под ред. Рахманина Ю.А., Сычевой Л.П.- М.: Гениус.-2007.-312с.

40. Рахманин Ю.А., Журков B.C., Ревазова Ю.А., Сычева Л.П. Роль генетических исследований при оценке влияния факторов окружающей среды на здоровье человека //Гигиена и санитария.-2005.-№ 6.-С.59-62

41. Ревазова Ю.А., Журков B.C. Генетические подходы к оценке безопасности факторов среды обитания человека.// Вестник РАМН.-2001.-№ 10.-С.77-80

42. Руководство по краткосрочным тестам для выявления мутагенных и канцерогенных химических веществ.//ВОЗ. Женева.- 1989.-212 с.

43. Синицына О.О., Жолдакова З.И., Рахманин Ю.А. Обоснование принципов установления коэффициентов запаса при определении допустимой суточной дозы химических веществ.// Сборник трудов НИИ ЭЧ и ГОС.- М.- 2002.- С.82-97.

44. Сошникова Н.В. Распространенность тиреоидной патологии у железнодорожников Западной Сибири, узловой зоб и ассоциируемыефакторы риска,// Автореферат дис. канд. мед. наук,- Новосибирск.-2008. 28 с.

45. Старинский В.В., Сотникова Е.П., Кашулина А.П. и др. Использование автоматизированного клинико-лабораторного скрининга для выявления группы онкологического риска и ранних стадий онкологического процесса.// Методические рекомендации. М. 1995.11 с.

46. Сычева Л.П. Биологическое значение, критерии определения и пределы варьирования полного спектра кариологических показателей при оценке цитогенетического статуса человека.// Медицинская генетика.- 2007,-Том 6.-№ 11(65).- С. 3-12.

47. Сычева Л.П. Научное обоснование и разработка системы мутагенного эффекта химических загрязнений окружающей среды у млекопитающих in vivo с учетом органной специфичности.// Автореф. дис. .д-ра биол. наук. М. 2002.-46с.

48. Сычева Л.П., Журков B.C. Применение микроядерных тестов для выявление мутагенов и канцерогенов.//Вестник РАМН.- 1997.-№7,-С. 147-18

49. Тарасевич И., Антоненко В., Ульянченко В., Лшценко А. Вопросы диагностики онкоцитарных новообразований щитовидной железы в рамках оптимизированного протокола обследования.// Новая медицина тысячелетия.-2008.-№3.-С. 24-31.

50. Фадеев В.В. Йод, эндемический зоб и йоддефицитные заболевания. // Интернет- портал «Тиронет» (http://thyronet.rusmedserv.com/thpati/iod-patient.htm)

51. Хмельницкий O.K. Цитологическая и гистологическая диагностика заболеваний щитовидной железы. Руководство.- СПб: СОТИС.- 2002.-288с.

52. Хэм А., Кормак Д. Гистология. //Москва. Мир.- 1983,- Т.5.- С. 77-91

53. Цыб А.Ф., Иванов В. К. Чернобыль, 20 лет спустя. //Союз. Беларусь-Россия. 09.02.2006.- №249.

54. Чиссов В.И., Старинский В.В. Состояние онкологической помощи населению России в 1999 году. // М.: "Ранко-пресс". 2000.- 176 с.

55. Шапиро H.A., Камнева Т.Н. Цитологическая диагностика заболеваний щитовидной железы. Цветной атлас.// М.: Репроцентр,- 2003,- 172с.

56. Шереметьева С.М. Оценка мутагенного действия факторов окружающей среды микроядерным методом на клетках выделительной системы.// Автореф. дис. .канд. биол. наук. М.- 2006.

57. Шефтель В.О. Токсические свойства акриламида (обзор).// Гигиена и санитария,- 1990.-№8.-С.48-50

58. Шойхет Я.Н. Баженова Е.А., Баженов A.A. Диагностика микрокарцином щитовидной железы.// Проблемы клинической медицины,- 2005.-№2.- С.126-132.

59. Юрченко В.В., Сычева Л.П., Ревазова Ю.А., Ревич Б.А., Журков B.C. Анализ частоты микроядер и ядерных аномалий в эпителиальных клетках слизистой щеки у женщин, контактирующих с диоксинами.// Токсикологический вестник.- 2000.- №3,- С.2-6

60. Яблоков А. В., Нестеренко В. Б., Нестеренко А. В.Чернобыль: последствия катастрофы для человека и природы.// СПб.- 2007. — 376 с.

61. Abramsson-Zetterberg L. The dose-response relationship at very low doses of acrylamide is linear in the flow cytometer- based mouse micronucleus assay.// Mutat. Res. 2003.-№ 535,- P.215-222.

62. Adler I.D., Ingwersen I., Kliesch U., el Tarras A. Clastogenic effects of acrylamide in mouse bone marrow cells.// Mutat. Res. 1988.-№206(3).-P.379-85

63. Adler I.D., Zouh R., Schmid E. Perturbation of cell division by acrylamide in vitro and in vivo. // Mutat Res. 1993.-№ 301(4).-P.249-254.

64. Andrieu J.M., Baldet L., Jaffiol C. Thyroid cancer: pathological anatomy, diagnosis. // Rev. Prat. 1998.- №15;48(8).- P.875-879.

65. Arocena M. Effect of aciylamide on the cytoskeleton and apoptosis of bovine lens epithelial cells.// Cell. Biol. Int. 2006.-№ 30(12).-P. 1007-1012.

66. Backer L.C., Dearfield K.L., Erexson G.L., Campbell J.A., Westbrook-Collins B., Allen J.W. Tlie effects of acrylamide on mouse germ-line and somatic cell chromosomes. // Environ Mol Mutagen. 1989.-№ 13(3).P. 218226.

67. Barry H., Margolin and Kenneth J. Risko. The statistical analysis of in vivo genotoxicity data: casestudies of the rat hepatocyte UDS and mouse bone marrow micronucleus assays.// Evaluation of short-term tests for carcinogens. 1988.-P. 1.29-1.42

68. Besaratinia A., Pfeifer G.P. A review of mechanisms of acrylamide carcinogenicity// Carcinogenesis. 2007.-V. 28.- №3.-P.519-528

69. Boas M., Feldt-Rasmussen U., Skakkebaek N.E., Main K.M. Environmental chemicals and thyroid function (review). // Eur J Endocrinol. 2006. №154(5).-P.599-611

70. Burek C.L., Talor M.V. Environmental triggers of autoimmune thyroiditis. //J. Autoimmun. 2009.- № 33 (3-4).-P.183-189.

71. Carere A. Genotoxicity and carcinogenicity of aciylamide: a critical review// Ann. 1st. Super Sanita 2006.- V. 42.-№. 2.-P. 144-155.

72. Chen J.H., Wu K.Y., Chiu I.M., Tsou T.C., Chou G.C. Acrylamide-induced astrogliotic and apoptotic responses in human astrocytoma cells.// Toxicol In Vitro. 2009.- № 23(5).-P.855-861.

73. Cihak R., Vontorkova M. Activity of acrylamide in single-, double-, and triple-dose mouse bone marrow micronucleus assays.// Mutat. Res. 1990.-№3-4.-P. 125-127.

74. Cihak R., Vontorkova M. Cytogenetic effects of acrylamide in the bone marrow of mice.// Mutat Res. 1988.-№ 209(l-2).-P.91-94.

75. Collins B.W., Howard D.R., Allen J.W. Kinetochore-staining of spermatid micronuclei: studies of mice treated with X-radiation or acrylamide. // Mutat Res. 1992.-№ 281(4).-P.287-294.

76. Dearfield K.L., Douglas G.R., Ehling U.H., Moore M.M., Sega G.A., Brusick D J. Aciylamide: a review of its genotoxicity and an assessment of heritable genetic risk. // Mutat Res.l995.-№ 330(l-2).-P.71-99.

77. Dearfield K.L., Abernathy C.O., Ottley M.S., Brantner J.H., Hayes P.F. Acrylamide: its metabolism, developmental« and reproductive effects, genotoxicity, and carcinogenicity. //Mutat. Res. 1988.-№195(1).-P.45-77.

78. Draft Toxicological Profile for Acrylamide. // Comment Period Ends: Februaiy 26, 2010. U.S. Department of health & Human Servises.- 2009, P.247

79. Eastmond D.A., Hartwig A., Anderson D. et al. Mutagenicity testing for chemical risk assessment: update of the WHO/IPCS Harmonized Scheme. //Mutagenesis.- 2009.- V.' 24, №4.-P. 341-349.

80. In: Evaluation of short-term tests for carcinogens. Eds: J. Ashby, de Serres F.J., Shelby M.D., Margolin B.H., Ishidate M., Becking G.C., Cambridge University Press, Cambridge, UK, (1988)

81. Francesconi A., Del Terra E., Meli A., Ambesi-Impiombato F.S. Standardization of the comet assay technique on FRTL5 cells. // Phys Med. 2001.-№17 (Supp.l).-P.232-234.

82. Friedman M. Chemistry, biochemistry, and safety of aciylamide. A review.// J. Agr. Food Chem. 2003.-№ 51(16).-P. 4504-4526.

83. GENETOX // (http://www.nlm.nih.gov/pubs/factsheets/genetxfs.html)

84. Ghanayem B.I., McDaniel L.P., Churchwell M.I., Twaddle N.C., Snyder R., Fennell T.R., Doerge D.R. Role of CYP2E1 in the epoxidation of acrylamide to glycidamide and formation of DNA and hemoglobin adducts.// Toxicol. Sci. 2005.-№88(2).-P.311-318.

85. Granath F., Ehrenberg L., Paulsson B., Tornqvist M. Cancer risk from exposure to occupational aciylamide. // Occup. Environ. Med. 2001.-№58,-P.608.

86. Hanahan D., Weinberg R.A. The Hallmarks of Cancer.// Cell. 2000,-V.100.-P.57-70.

87. Hazard J.B. The C Cells (Parafollicular Cells) of the Thyroid Gland and Medullary Thyroid Carcinoma. A critical rewue.// Am. J. Pathol. 1977.-№88(l).-P.213-250.

88. Hogervorst J. G., Schouten L. J., Konings E. J., Goldbohm R. A., Van den Brandt P. A. Dietary aciylamide intake and the risk of renal cell, bladder, and prostate cancer.// Am. J. Clin. Nutr. 2008.-№87.-P. 1428 -1438.

89. Huo M., Huang J. O. Experimental study on the toxic effects of hydropliilic polyacrylamide gel. // Zhonghua Zheng Xing Wai Ke Za Zhi .2002.- V.18.-№2.- P.79-80.

90. International Agency for Research on Cancer. Some industrial chemicals. // Lyon: IARC. 1994. (IARC Monographs on the evaluationof carcinogenic risks to human.-V.60.-P. 389-433.

91. Jin L., Chico-Galdo V., Massart C., Gervy C., De Maertelaere V., Friedman M., Van Sande J. Aciylamide does not induce tumorigenesis or major defects in mice in vivo.// J. Endocrinol. 2008.-№198(2).-P.301-307.

92. Klaunig J.E., Kamendulis L.M. Mechanisms of acrylamide induced rodent carcinogenesis.//Adv. Exp. Med. Biol. 2005.-№561.-P.49-62.

93. Kligerman A.D., Atwater A.L., Biyant M.F., Erexson G.L., Kwanyuen P., Deaifield K.L. Cytogenetic studies of ethyl acrylate using C57BL/6 mice.// Mutagenesis. 1991.-№ 6(2).-P. 137-141.

94. Knaap A.G., Kramers P.G., Voogd C.E., Bergkamp W.G., Groot M.G., Langebroek P.G., Mout H.C., van der Stel J.J., Verharen H.W. Mutagenic activity of acrylamide in eukaiyotic systems but not in bacteria. Mutagenesis. 1988.-Jf«3(3).-P.263-268.

95. Krishna G., Theiss J.C. Concurrent analysis of cytogenetic damage in vivo: a multiple endpoint-multiple tissue approach.// Environ. Mol. Mutagen, 1995.-№25(4).-P.314-320.

96. Lahdetie J., Suutari A., Sjoblom T. The spermatid micronucleus test with the dissection technique detects the germ cell mutagenicity of acrylamide in ratmeiotic cells.//Mutat. Res. 1994.- 309(2).-P.255-262.

97. Lope V., Pérez-Gómez B., Aragonés N., López-Abente G., Gustavsson P., Plato N., Silva-Mato A., Pollán M. Occupational exposure to chemicals and risk of thyroid cancer in Sweden.// Int. Arch. Occup. Environ. Health. 2009.-№82(2).-P.267-274.

98. Mallin K., McCann K., D'Aloisio A., Freels S., Piorkowski J., Dimos J., Persky V. Cohort mortality study of capacitor manufacturing workers, 1944-2000.//J. Occup. Environ. Med. 2004.-№46(6).-P.565-576.

99. Mammalian Erythrocyte Micronucleus Test.// OECD Guideline for the testing of chemicals.-№474. -1997.

100. Marsh G.M., Youk A.O., Lucas L.J., Schall L.C. Dose-response relation between acrylamide and pancreatic cancer// Occup. Environ. Med. 2001.-№58.-P.609.

101. Martelli A., Carrozzino R., Mattioli F., Brambilla G. DNA damage induced by 4,4'-methylenediamline in primary cultures of hepatocytes and thyreocytes from rats and humans.// Toxicol. Appl. Pharmacol. 2002.-№182(3).-P.219-225.

102. Martelli A., Carrozzino R., Mattioli F., Bucci G., Lamarino G., Brambilla G. DNA damage in tissues of rat treated with potassium canrenoate.// Toxicology. 2002.-№171(2-3): 95-103.

103. Montone K.T., Baloch Z.W., LiVolsi V.A. The thyroid Hiirthle (oncocytic) cell and its associated pathologic conditions: a surgical pathology and cytopathology review. Arch. Pathol. Lab. Med. 2008.-№132(8).-P.1241-1250.

104. Mucci L.A., Dickman P.W., Steineck G., Adami H-O., Augustsson K. Dietary aciylamide and cancer of the large bowel, kidney, and bladder: Absence of an association in a population-based study in Sweden.// British Journal of Cancer. 2003 .-№88.-P.84 89

105. Mucci L.A., Lindblad P., Steineck G., Adami H-O. Dietary acrilamide and risk of renal cell cancer.//Int. J. Cancer. 2004.-№109.-P.774-776.

106. Mucci L.A., Adami H-O., Wolk A. Prospective study of dietary acrylamide and risk of colorectal cancer among women.// Int. J. Cancer. 2006.-№118.-P. 169-173.

107. Nilsson G. Micronuclei studied in fine needle goitre aspirates.// Acta. Pathol. Microbiol. Scand. A. 1978.-№86(3).-P.201-204.

108. OECD Guideline for the testing of chemicals, 1997

109. Olesen P.T., Olsen A., Frandsen H., Frederiksen K., Overvad K., Tjonneland A. Acrylamide exposure and incidence of breast cancer among postmenopausal women in the Danish Diet, Cancer and Health study.// Int. J. Cancer. 2008.-№122.-P.2094^2100.

110. Pacchierotti F., Tiverson C., D'Archivio M., Bassani B., Cordelli E., Leter G., Spano M. Aciylamide-induced chromosomal damage in male mouse germ cells detected by cytogenetic analysis of one-cell zygotes.// Mutat. Res. 1994.-№309.-P.273-84.

111. Paulsson B., Grawé J., Tornqvist M. Hemoglobin adducts and micronucleus frequencies in mouse and rat after acrylamide or N-methylolaciylamide treatment.//Mutat Res. 2002.-№516(l-2).-P. 101-111.

112. Paulsson B., Kotova N., Grawè J., Henderson A., Granath F., Golding B., Tornqvist M. Induction of micronuclei in mouse and rat by glycidamide, genotoxic metabolite of acrylamide.// Mutat. Res. 2003.-№535.-P.15-24.

113. Pelucci C., Galeone C., Dal Maso L., Talamini R., Montella M., Ramazzotti V., Negri E., Franceschi S., La Vecchia C. Dietary acrylamide and Renal Cell Cancer.//Int. J. Cancer. 2007.-№120.-P.1376-1377.

114. Pelucci C., Galeone C., Levi F., Negri E., Franceschi S., Talamini R., Bosetti C., Giacosa A., La Vecchia C. Dietary acrylamide and human cancer.//Int. J. Cancer. 2005.-№118.-P.467-471.

115. Popova L., Hadjidekova V., Hadjieva T., Agova S., Vasilev I. Cytokinesis-block micronucleus test in patients undergoing radioiodine therapy for differentiated thyroid carcinoma.// Hell. J. Nucl. Med. 2005.-№8(l).-P.54-57.

116. Porterfield S.P. Thyroidal dysfunction and environmental chemicals-potential impact on brain development. Environ. Health. Perspect. 2000.-№108 (Suppl 3).-P.433-438.

117. Reynolds T. Acrylamide and cancer: tunnel leak in Sweden prompted studies.// J. Natl. Cancer Inst 2002.-№94.-P.876-878.

118. Russo A., Gabbani G., Simoncini B. Weak genotoxicity of acrylamide on premeiotic and somatic cells of the mouse.// Mutat Res. 1994.- №309(2).-P.263-272.

119. Serna A., Alcaraz M., Navarro J.L., Acevedo C., Vicente V., Canteras M. Biological dosimetry and Bayesian analysis of chromosomal damage in thyroid cancer patients.// Radiat. Prot. Dosimetry. 2008.-№129(4).-P.372-380.

120. Sumizawa T., Igisu H. Apoptosis induced by acrylamide in SH-SY5Y cells.//Arch. Toxicol. 2007.-№81(4).-P.279-282.

121. Tomqvist M. et al. Leakage of Acrylamides from a Timnel Construction Work: Exposure Monitoring and Health Effects to Humans and Animals.// MS for European ALARA Network workshop. Antwerp, Belgium. 2000.-P. 1-8.

122. Volpato C.B., Martinez-Alfaro M., Corvi R., Gabus C., Sauvaigo S., Ferrari P., Bonora E., De Grandi A., Romeo G. Enhanced sensitivity of the RET proto-oncogene to ionizing radiation in vitro.// Cancer Res. 2008.-№68(21).-P.8986-8992.

123. Wendisch M., Drechsel J., Freudenberg R,, Runge R., Wunderlich G., Kotzerke J. Cellular damage in vitro.// Nuklearmedizin. 2009.-№48(5).-P.208-14.

124. World Health Organization. Acrylamide. Guidelines for drinking- water quality.// Geneva: WHO. 1996.-V. 2.2. ed.-P.541-547.

125. Wong O., Harris F. Cancer mortality study of employees at lead battery plants and lead smelters, 1947-1995.// Am. J. Ind. Med. 2000.-№38(3).-P.255-270.

126. Xiao Y., Tates A.D. Increased frequencies of micronuclei in early spermatids of rats following exposure of young primary spermatocytes to acrylamide.// Mutat. Res. 1994.-№ 309(2).-P.24S-253.

127. Xu J., Wang R, Liu J., Qian Q., Li Q., Liu X. Study on DNA damage in L-02 cell induced by acrylamide.- 2009.-№38(5).-P.589-591.

128. Yang H.J., Lee S.H., Jin Y., Choi J.H., Han D.U., Chae C., Lee M.H., Han C.H. Toxicological effects of acrylamide on rat testicular gene expression profile.// Reprod. Toxicol. 2005.-№19(4).-P.527-34.

129. Yousef M.I., El-Demerdash F.M. Aciylamide-induced oxidative stress and biochemical perturbations in rats.// Toxicology. 2006.-№219(l -3).-P.133-141.

130. Zeiger E., Recio L., Fennell T.R., Haseman J.K., Snyder R.W., Friedman M. Investigation of the low-dose response in the in vivo induction of micronuclei and adducts by acrylamide.// Toxicol. Sci. 2009.-№107(1).-P.247-57.

131. Zhang X., Chen F., Huang Z. Apoptosis induced by acrylamide is suppressed in a 21.5% fat diet through caspase-3-independent pathway in mice testis.// Toxicol. Mech. Methods. 2009.-№19(3).-P.219-224.

132. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

133. В изданиях, рекомендованных ВАК

134. Алтаева А.А Влияние разных режимов введения акриламида на цитогенетические и структурно-функциональные показатели щитовидной железы крыс. //Токсикологический вестник 20Ю.-№ 5.-С. 46-49.1. В журналах:

135. Беляева H.H., Сычева Л.П., Алтаева A.A. Микроядерный тест на клетках щитовидной железы как скрининговый метод в эко л ого-гигиенических исследованиях. //Вестник Военно-Медицинской Академии. Приложение 2, часть-1.-2008.-С.81-82.

136. Алтаева A.A., Беляева H.H., Сычева Л.П. Оценка эффекта мутагенов на клетках щитовидной железы на примере акриламида.// Медицинская генетика. Материалы VI Съезда Российского общества медицинских генетиков. Ростов-на-Дону, 14-18 мая 2010.- С. 7-8.

137. В материалах международных и российских конгрессов, съезда, пленумов, конференций, симпозиума, научной сессии.

138. Алтаева A.A., Беляева H.H., Сычева Л.П. Влияние акриламида на щитовидную железу.// XI Всероссийский Конгресс диетологов инутрициологов «Питание и здоровье», сборник материалов, Москва, 30 ноября 2 декабря, 2009.- С.2.

139. Беляева H.H., Сычева Л.П., Журков B.C., Алтаева A.A., Пономарева О.Ю. Сопряженность изменений морфофункциональных, цитогенетических и цитотоксических показателей при оценке воздействия на организм факторов окружающей среды.// Там же. С.39-41.

140. Алтаева A.A., Сычева Л.П., Беляева H.H. Кариологический анализ действия акриламида на клетки щитовидной железы.// Материалы межвузовской научной конференции с международным участием:152

141. Современные проблемы гигиены, общественного здоровья и здравоохранения», Москва, 8 декабря 2009.- С.99-101.

142. Алтаева А.А Разработка расширенного микроядерного теста на клетках щитовидной железы.// II Всероссийская научно-практическая конференция молодых ученых и специалистов «Окружающая среда и здоровье» Рязань, 2007.-. С. 202-203.

143. Алтаева A.A., Рахманин Ю.А., Сычева Л.П., Беляева H.H. Способ выявления цитогенетического и цитотоксического действия факторов окружающей среды в клетках щитовидной железы. Подана Евразийская заявка на изобретение № 201000068 от 18.11.2009 г.