Дифференциальная экспрессия онкозначимых генов при светлоклеточном раке почки тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.03, кандидат биологических наук Кудрявцева, Анна Викторовна

• Кудрявцева, Анна Викторовна
• кандидат биологических наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Кудрявцева, Анна Викторовна

----------------------------------------------------------------------------------------Стр.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ОБОЗНАЧЕНИЯ ГЕНОВ

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Классификация рака почки

1.2. Наследственный и спорадический светлоклеточный рак почки

1.3. Молекулярно-генетические нарушения при карциномах почки

1.4. Роль хромосомы 3 в развитии светлоклеточного рака почки

1.5. Методы оценки экспрессии генов

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1. Материалы

2.1.1. Образцы тканей и клеточных линий

2.1.2. Образцы ДНК и кДНК из опухолевых и нормальных тканей почки и клеточных линий-----------------------------------------------.

2.2. Методы исследований

2.2.1. Выделение РНК

2.2.2. Выделение ДНК

2.2.3. Реакция обратной транскрипции

2.2.4. Полимеразная цепная реакция в реальном времени

2.2.5. Анализ метилирования

2.2.6. Статистический анализ данных

2.2.7. Иммуногистохимический анализ

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Разработка методической базы для ПЦР

3.1.1. Выбор контрольных генов для ПЦР-РВ

3.1.2. Выбор образцов сравнения для ПЦР-РВ

3.2. Количественная оценка содержания мРНК генов при СРП

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Дифференциальная экспрессия онкозначимых генов при светлоклеточном раке почки»

Рак почки (РП) - распространенное злокачественное новообразование, возникающее примерно с одинаковой частотой, как у мужчин, так и у женщин. РП часто встречается у детей (нефробластома), причем большинство случаев заканчивается летальным исходом [Fear et al., 2009]. Обычно РП взрослых людей имеет эпителиальное происхождение, то есть является карциномой. Основными причинами, увеличивающими риск возникновения карцином почки, считаются наследственность, гормональный дисбаланс, иммунодефицитные состояния, ионизирующие излучения и курение. Согласно данным статистики, при первом обращении за врачебной помощью примерно у 25% больных имеются симптомы отдаленных метастазов, поскольку в начальном периоде развития опухоли клинические симптомы скудны или отсутствуют. Поэтому большинство случаев выявления заболевания на ранней стадии, когда условия для ее лечения наиболее благоприятны, являются случайными находками при плановом обследовании. Между тем, при диагностике РП на 1-ой стадии развития заболевания выживаемость больных достигает 70%. Все это обуславливает необходимость разработки новых, более надежных, быстрых и доступных широкому кругу пациентов методов ранней диагностики РП, послеоперационного мониторинга и раннего выявления метастазов.

Развитие злокачественных опухолей почки - многофакторный и многостадийный процесс, в основе которого лежит накопление клетками различных изменений, затрагивающих многие гены. Для каждого гистологического типа РП характерны изменения в разных хромосомах. К ранним событиям при развитии наиболее распространенного гистологического типа РП — светлоклеточной почечноклеточной карциномы (далее — светлоклеточный рак почки - СРП) - относят аллельные потери, геми- и гомозиготные делеции короткого плеча хромосомы 3 (Зр). Изменения в районе Зр были впервые открыты при раке легкого и в дальнейшем выявлены при многих типах карцином [Ji et al., 2005]. Еще в 1997 г. показано, что введение субхромосомных фрагментов Зр в опухолевые клеточные линии приводит к подавлению их роста [Kok et al., 1997]. Это позволило предположить возможное присутствие генов-супрессоров опухолевого роста (TSG - Tumor Suppressor Genes) в этом районе генома. Долгое время на хромосоме 3 человека были известны лишь несколько TSG: FHIT, MLH1, VHL [Kok et al., 1997]. К настоящему времени, благодаря использованию микросателлитных маркеров, и картированию гомозиготных делеций в первичных опухолях и клеточных линиях, идентифицировано более 50 новых генов - потенциальных супрессоров опухолевого роста, значительную часть которых представляют гены, локализованные в районе Зр21 [Angeloni, 2007]. Белковые продукты генов из этой области выполняют в клетке разнообразные ключевые функции: регуляция клеточного цикла и адгезии, инициация апоптоза, репарация ДНК и др. Для некоторых из них доказана принадлежность к супрессорам опухолевого роста (например, RBSP3, NPRL2, SEMA3B, RASSF1 (изоформы А и С) и др.). Однако для большинства генов Зр роль в канцерогенезе до сих пор не ясна. Исследования TSG в основном посвящены структурным и функциональным изменениям кодируемых ими белков в различных опухолях. На сегодняшний день практически отсутствуют данные об изменениях экспрессии на уровне транскрипции в опухолях большинства TSG и кандидатов в супрессоры. Отсутствие и/или снижение количества мРНК гена в клетке с большой долей вероятности свидетельствует о снижении содержания или отсутствии соответствующего белка, однако при сохранении содержания мРНК, количество белкового продукта также может быть иногда существенно снижено. Более того, для многих TSG существует несколько изоформ мРНК, некоторые из которых кодируют белковые продукты, а некоторые, по-видимому, принимают участие в регуляции экспрессии, механизмы которой в большинстве случаев до конца не изучены. Выбранные гены изучены в различной степени, для некоторых известны функции белковых продуктов, для VHL, RBSP3, NPRL2, SEMA3B, HYAL1 и HYAL2 рядом авторов показана способность подавлять опухолевый рост. Также изучали изменение экспрессии некторых генов на уровне мРНК и/или белка, в основном, на клеточных линиях и, реже, в единичных опухолях различных карцином, с использованием качественных и полуколичественных методов. В случае генов NPRL2, HYAL1 и HYAL2 исследовали роль метилирования в подавлении их транскрипции.

Оценка содержания мРНК в опухолях - один из важных этапов в функциональных исследованиях TSG. При помощи к ДНК-микропанелей возможно исследовать изменение экспрессии сотен и тысяч генов, однако данный метод не позволяет количественно оценить содержание мРНК интересующих генов, для этих целей используют метод ПЦР в реальном времени (ПЦР-РВ).

Представленная работа посвящена количественной оценке содержания мРНК генов, расположенных на коротком плече хромосомы 3, которые могут проявлять себя как TSG в эпителиальных опухолях -VHL, RBSP3, SEMA3B, SEMA3F, HYALl, HYAL2, NPRL2, генов кандидатов в TSG - ITGA9, VILL, СНЫ, гена RB1, продукт которого является основной мишенью RBSP3, а также генов, кодирующих субъединицы ферритина - FTL и FTH в основном гистологическом типе рака почки - СРП, а также в культурах клеток почки, полученных от больных почечноклеточной карциномой. Помимо этого, в работе исследовали возможные механизмы выявленных изменений уровня мРНК: для некоторых генов изучали метилирование области промотора, для некоторых генов оценили изменение количества копий в опухолевых клетках по сравнению с нормальными. Полученные данные сопоставили с клиническими характеристиками исследуемых опухолей; провели сравнительный анализ изменения содержания мРНК генов в одних и тех же образцах СРП.

В работе впервые методом ПЦР-РВ выявлено частое снижение содержания мРНК гена РТЬ, кодирующего легкую цепь ферритина, в то время как изменения гена тяжелой цепи — РТН - не значительные. Показано отсутствие значимых изменений экспрессии двух изоформ классического супрессора при раке почки - гена УНЬ, в то время как экспрессия белка существенно подавлена. Заметное и частое снижение наблюдали у генов КВБРЗ, НУАЫ, БЕМАЗВ, СНЫ, дерегуляцию экспрессии (как случаи повышения, так и понижения) — у генов ИРКЬ2, НУАЬ2, 1ЮА9 и БЕМАЗР. Исследовали возможные причины, приводящие к изменению экспрессии некоторых генов в опухолях почки. Выявлено, что в подавлении экспрессии гена КВБРЗ могут принимать участие как делеции, так и метилирование, снижение содержания мРНК генов НУАЫ и НУАЫ вызвано метилированием Срв-островков промоторной области, а для известного гена-супрессора УНЬ обнаружены редкие случаи делеций и/или метилирования. Результаты для 4-х генов со значительным снижением могут быть использованы для разработки панели специфических маркеров ранней диагностики СРП и новых подходов в генотерапии этого заболевания.

Заключение диссертации по теме «Молекулярная биология», Кудрявцева, Анна Викторовна

выводы

1. Методом ПЦР в реальном времени (ПЦР-РВ) в 50-ти образцах светлоклеточного рака почки (СРП) 1-Ш стадий впервые обнаружены различные профили экспрессии 10-ти генов-супрессоров опухолевого роста и генов-кандидатов, расположенных на хромосоме 3 (Зр21-26). Сильное снижение выявлено у генов ЯВЗРЗ (50%), НУАЫ (74%), 8ЕМАЗ В (82%), СНЫ (87%), дерегуляция (как случаи понижения, так и повышения) - БЕМАЗР, ЫРЯ12, НУАЬ2, 1ТвА9, отсутствие изменений - УНЬ и VIЬЬ.

2. Выявлено увеличение частоты и степени снижения содержания мРНК генов ЯВБРЗ1ТОА9 НУА12 и БЕМАЗР в образцах III-ей клинической стадии по сравнению с образцами 1-ой и П-ой стадий (Р<0,05), что свидетельствует о связи этих изменений с прогрессией заболевания.

3. Метилирование промоторной области гена ЯВБРЗ обнаружено в 28% образцов (метод бисульфитного секвенирования), делеции - в 37% (ПЦР-РВ).

4. Показано, что снижение содержания мРНК генов НУАЫ и НУАЬ2 вызвано метилированием СрО-островков промоторной области.

5. Для известного гена-супрессора УНЬ обнаружены редкие случаи делеций и/или метилирования (гибридизация на N01:1-микропанелях), преимущественное (>70%) сохранение содержания мРНК двух изоформ в опухоли по сравнению с нормой (ПЦР-РВ) при подавленной экспрессии белка (иммуногистохимия). Эти результаты свидетельствуют, что изменение содержания мРНК не вносит значительный вклад в снижение количества белка УНЬ в опухоли.

6. Значительное и частое снижение экспрессии генов ЯВ8РЗ, НУАЫ, БЕМАЗВ и СНЫ уже на начальных стадиях заболевания свидетельствует о функциональной важности кодируемых ими белков в предотвращении возникновения и/или развития опухолей почки, а также позволяет рассматривать их в качестве перспективных молекулярных маркеров для диагностики и генотерапии.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Впервые проведена количественная оценка содержания мРНК 13-ти генов методом ПЦР-РВ при основном гистологическом типе рака почки — СРП, а также в клеточных линиях почки. Большинство генов расположены на коротком плече хромосомы 3, многие - в районе Зр21, в котором обнаружены группы генов с опухоль-подавляющей активностью. Известно, что при эпителиальных опухолях различной локализации часто происходят геномные и эпигеномные нарушения в этой области ^аЬагоуяку е1 а1., 2002].

Обнаруженный характер изменений экспрессионных профилей исследованных в работе генов, расположенных на Зр, позволяет условно разделить их на три группы (таблица 12).

К первой группе отнесены гены ЯВЗРЗ, НУАЫ БЕМАЗВ и СНЫ, содержание мРНК которых часто и значительно снижено на всех стадиях заболевания. Эти гены, по-видимому, вовлечены в процесс возникновения и развития СРП и могут быть потенциальными онкомаркерами для диагностики заболевания. Снижение уровня мРНК гена СНЫ (87%, до 302 раз) описано нами впервые и получен патент (№2009105812/15(007776).

Ко второй группе отнесены гены ЗЕМАЗР, НРЯЬ2, НУАЬ2 и 1ЮА9, у которых происходит дерегуляция экспрессии - случаи как повышения, так и снижения.

Уровень мРНК остальных генов - У1ЬЬ и ¥НЬ, не изменен (третья группа). Экспрессия белковых продуктов генов не всегда коррелирует с уровнем их мРНК, что обусловлено существованием различных механизмов регуляции, например, в случае УНЬ - посредством возникновения онко-ассоциированных мутаций, или посредством связывания с регуляторной микро-РНК.

Обнаружение активации и инактивации транскрипции генов при патологических процессах имеет фундаментальное и практическое значение для биологии и медицины.

90

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Кудрявцева, Анна Викторовна, 2010 год

1. Блинов H.H. TNM: Классификация злокачественных опухолей. 2003. 6-е изд. СПб.: Эскулап. С. 192-196.

2. Брага Э.А., Киселев Л.Л., Забаровский Е.Р. От идентификации геномного полиморфизма к диагностическим и прогностическим маркерам эпителиальных опухолей. Молекулярная биология. 2004. 38. С. 145-154.

3. Киселев Л.Л., Сенченко В.Н., Опарина Н.Ю., Брага Э.А., Забаровский Е.Р. Гены-супрессоры-опухолевого роста, локализованные на коротком плече хромосомы 3 человека. Молекулярная медицина 2005. 3. С. 17-28.

4. Коваленко H.A., Головченко К.В., Лесничук С.А. и др. Определение активности теломеразы в новообразованиях почки и простаты. Вопр. биол.,мед. и фармац. химии. 2003. 1. С. 21—25.

5. Копнин Б.П. Мишени действия онкогенов и опухолевых супрессоров: ключ к пониманию базовых механизмов канцерогенеза. Биохимия. 2000. 65(1). С. 5-33.

6. Лукьянов К.А., Гурская Н.Г., Богданова Е.А., Лукьянов С.А. Селективная супрессия полимеразной цепной реакции. Биоорганическая химия. 1999. (25)3. С. 163-170.

7. Татосян А.Г. Онкогены. Сборник обзорных статей «Канцерогенез». 2000. под ред. Д.Г. Заридзе, М: Научн. Мир, стр. 57-74.

8. Чумаков П.М. Функция гена р53: выбор между жизнью и смертью. Биохимия. 2000. 65(1). С. 34-47.

9. RASSF1A, ITGA9, HYAL1 and HYAL2 genes in non-small cell lung cancer. Mol Biol (Mosk). 2008. 42(6). P. 965-976.

10. Angeloni D. Molecular analysis of deletions in human chromosome 3p21 and the role of resident cancer genes in disease. Brief Funct Genomic Proteomic. 2007. 6(1). P. 19-39.

11. Albelda S.M. Endothelial and epithelial cell adhesion molecules. Am J Respir Cell Mol Biol. 1991. 3. P. 195-203.

12. H.Bernard P.S., Wittwer C.T. Real-time PCR technology for cancer diagnostics. Clin Chem. 2002. 48(8). P.l 178-1185.

13. Bertrand P., Courel M.N., Maingonnat C., Jardin F., Tilly H., Bastard C. Expression of HYAL2 mRNA, hyaluronan and hyaluronidase in B-cell non-Hodgkin lymphoma: relationship with tumor aggressiveness. Int J Cancer. 2005. 113(2). P. 207-212.

14. Brambilla E., Constantin B., Drabkin H., Roche J. Semaphorin SEMA3F localization in malignant human lung and cell lines: Asuggested role in cell adhesion and cell migration. Am J Pathol. 2000. 156(3). 939-950.

15. Bustin S.A. Absolute quantification of mRNA using real-time reverse transcription polymerase chain reaction assays. J Mol Endocrinol. 2000. 25(2). P. 169-193.

16. Bustin S.A. Quantification of mRNA using real-time reverse transcription PCR (RT-PCR): trends and problms. J Mol Endocrinol. 2002. 29(1). P. 23-39.

17. Cowey C.L., Hutson T.E. Molecularly targeted agents for renal cell carcinoma: the next generation. Clin Adv Hematol Oncol. 2010. 8(5). P. 357-64.

18. Csoka A.B., Frost G.I., Stern R. The six hyaluronidase-like genes in the human and mouse genomes. Matrix Biol. 2001. 20(8). P. 499-508.

19. Dacic S. Molecular profiling of lung carcinoma: identifying clinically useful tumor markers for diagnosis and prognosis. Expert Rev. Mol. Diagn. 2007. 7(1). P. 77-86.

20. Dheda K., Huggett J.F., Bustin S.A., Johnson M.A., Rook G., Zumla A. Validation of housekeeping genes for normalizing RNA expression in real-time PCR. Biotechniques. 2004. 37(1). P. 112-114, 116, 118-119.

21. Duan D.R., Pause A., Burgess W.H., Aso T., Chen D.Y., Garrett K.P., Conaway R.C., Conaway J.W., Linehan W.M., Klausner R.D. Inhibition of transcription elongation by the VHL tumor suppressor protein. Science. 1995. 269(5229). P. 1402-1406.

22. Essen A., Ozen H., Ayhan A., Ergen A., Tasar C., Remzi F. Serum ferritin: a tumor marker for renal cell carcinoma. J. Urol. 1991. 145(6). P. 1134-1137.

23. Eymin B., Gazzeri S., Brambilla C., Brambilla E. Distinct pattern of E2F1 expression in human lung tumours: E2F1 is upregulated in small cell lung carcinoma./ Oncogene. 2001. 20(14). P. 1678-1687.

24. Eymin B., Gazzeri S., Brambilla C., Brambilla E. Mdm2 overexpression and pl4(ARF) inactivation are two mutually exclusive events in primary human lung tumors. Oncogene. 2002. 21(17). P. 2750-2761.

25. Fear N.T., Vincent T.J., King J.C., MacCarthy A., Bunch K.J., Murphy M.F. Wilms tumour and paternal occupation: an analysis of data from the National Registry of Childhood Tumours. Pediatr Blood Cancer. 2009. 53(1). P. 28-32.

26. Franzmann E.J , Schroeder G.L., Goodwin W.J., Weed D.T., Fisher P. Lokeshwar V.B. Expression of tumor markers hyaluronic acid and hyaluronidase (HYAL1) in head and neck tumors. Int J Cancer. 2003. 106(3). P. 438-445.

27. Fujisawa H, Kitsukawa T. Receptors for collapsin/semaphorins. Curr Opin Neurobiol. 1998. 8(5). 587-592.

28. Gao W., Keohavong P. Analysis of K-RAS and P53 mutations in sputum samples. Methods Mol Biol. 2005. 291. P. 217-233.

29. GeneCards database, http://bioinformatics.weizmann. ac.il/cards/

30. Gibson U.E., Heid C.A., Williams P.M. A novel method for real time quantitative RT-PCR. Genome Res. 1996. 6(10). P. 995-1001.

31. Grail A, Hancock B.W, Harrison P. 1992. Serum ferritin in normal individuals and in patients with malignant lymphoma and chronic renal failure measured with seven different commercial immunoassay techniques. J Clin Pathol. 35, 1204—1212.

32. Groulx I., Lee S. Oxygen-dependent ubiquitination and degradation of hypoxia-inducible factor requires nuclear-cytoplasmic trafficking of the von Hippel-Lindau tumor suppressor protein. Mol Cell Biol. 2002. 22(15). P. 5319-5336.

33. Hanahan D., Weinberg R.A. The hallmarks of cancer. Cell. 2000. 100(1). P. 57-70.

34. Hahn W.C., Weinberg R.A. Rules for making human tumor cells. N Engl J Med. 2002. 347(20). P. 1593-1603.

35. Heid C.A., Stevens J., Livak K.J., Williams P.M. Real time quantitative PCR. Genome Res. 1996. 6(10). P. 986-994.

36. Hesson L.B., Cooper W.N., Latif F. Evaluation of the 3p21.3 tumour-suppressor gene cluster. Oncogene. 2007. 26. P. 7283-7301.

37. Jacobson A., Rahmanian M., Rubin K., Heldin P. Expression of hyaluronan synthase 2 or hyaluronidase 1 differentially affect the growth rate of transplantable colon carcinoma cell tumors. Int J Cancer. 2002. 102(3). P. 212-219.

38. Ji L., Minna J.D., Roth J.A., 3p21.3 tumor suppressor cluster: prospects for translational applications. Future Oncol. 2005. 1(1). P. 79-92.

39. Kibel A., Iliopoulos O., DeCaprio J.A., Kaelin W.G. Jr. Binding of the von Hippel-Lindau tumor suppressor protein to Elongin B and C. Science. 1995. 269(5229). P.1444-1446.

40. Klatte T., Pantuck A.J. Molecular biology of renal cortical tumors. Urol Clin North Am. 2008. 35(4). P. 573-580.

41. Knudson A.G. Hereditary cancer, oncogenes, and antioncogenes. Cancer Res. 1985. 45. P. 1437-1443.

42. Ko J.L., Cheng Y.W., Chang S.L., Su J.M., Chen C.Y., Lee H. MDM2 mRNA expression is a favorable prognostic factor in non-small-cell lung cancer. Int J Cancer. 2000. 89(3). P. 265-270.

43. Koorts A.M., Viljoen M. Ferritin and ferritin isoforms II: protection against uncontrolled cellular proliferation, oxidative damage and inflammatory processes. Arch Physiol Biochem. 2007 (1). 113(2). P. 55-64.

44. Koorts A.M., Viljoen M. Ferritin and ferritin isoforms I: Structure-function relationships, synthesis, degradation and secretion. Arch Physiol Biochem. 2007 (2). 113(1). P. 30-54.

45. Kovar J.L., Johnson M.A., Volcheck W.M., Chen J., Simpson M.A. Hyaluronidase expression induces prostate tumor metastasis in an orthotopic mouse model. Am J Pathol. 2006. 169(4). P. 1415-1426.

46. Kuroki ,T., Trapasso F., Yendamuri S., Matsuyama A., Alder H., Williams N.N., Kaiser L.R., Croce C.M. Allelic loss on chromosome 3p21.3 and promoter hypermethylation of semaphorin 3B in non-small cell lung cancer. Cancer Res. 2003. 63(12). P.3352-3355.

47. Lee S., Chen D.Y., Humphrey J.S., Gnarra J.R., Linehan W.M., Klausner R.D. Nuclear/cytoplasmic localization of the von Hippel-Lindau tumor suppressor gene product is determined by cell density. Proc Natl Acad Sci USA. 1996. 93(5). P. 1770-1775.

48. Lepperdinger G., Strobl B., Kreil G. HYAL2, a human gene expressed in many cells, encodes a lysosomal hyaluronidase with a novel type of specificity. J Biol Chem. 1998. 273(35). P. 22466-22470

49. Li J., Wang F., Haraldson K., Protopopov A., Duh F.M., Geil L., Kuzmin I., Minna J.D., Stanbridge E., Braga E., Kashuba V.I., Klein

50. G., Lerman M.I., Zabarovsky E.R. Functional characterization of the candidate tumor suppressor gene NPRL2 located in 3p21.3C. Cancer Res. 2004. 64. P. 6438-6443.

51. Li R., Todd N.W., Qiu Q., Fan T., Zhao R.Y., Rodgers W.H., Fang

52. H.B., Katz R.L., Stass S.A., Jiang F. Genetic deletions in sputum asdiagnostic markers for early detection of stage I non-small cell lung cancer. Clin Cancer Res. 2007. 13(2). P. 482-487.

53. Liu D.W., Chen S.T., Liu H.P. Choice of endogenous control for gene expression in nonsmall cell lung cancer. Eur Respir J. 2005. 26(6). P. 1002-1008.

54. Lokeshwar V.B., Cerwinka W.H., Lokeshwar B.L. HYAL1 hyaluronidase: a molecular determinant of bladder tumor growth and invasion. Cancer Res. 2005 (a). 65(6). P. 2243-2250.

55. Lokeshwar V.B., Cerwinka W.H., Isoyama T., Lokeshwar B.L. HYAL1 hyaluronidase in prostate cancer: a tumor promoter and suppressor. Cancer Res. 2005 (b). 65(17). P. 7782-7789.

56. Madan A.K., Yu K., Dhurandhar N., Cullinane C., Pang Y., Beech D.J. Association of hyaluronidase and breast adenocarcinoma invasiveness. Oncol Rep. 1999. 6(3). P. 607-609.

57. Mertz J.R., Theil E.C. Subunit dimers in sheep spleen apoferritin. The effect on iron storage. J Biol Chem. 1983. 258(19). P. 11719-11726.

58. Milman N, Pedersen L. 2002. The serum ferritin concentration is a significant prognostic indicator of survival in primary lung cancer. Oncology reports. 9, 193—198.

59. Miyata Y., Koga S., Nishikido M., Hayashi T., Kanetake H. Relationship between serum ferritin levels and tumour status in patients with renal cell carcinoma. BJU Int. 2001. 88(9), P. 974-977.

60. Palmer E.L., Ruegg C., Ferrando R., Pytela R., Sheppard D. Sequence and tissue distribution of the integrin alpha-9 subunit, a novel partner of beta-1 that is widely distributed in epithelia and muscle. J. Cell Biol. 1993. 123. P. 1289-1297.

61. Pennacchietti S., Michieli P., Galluzzo M., Mazzone M., Giordano S., Comoglio P.M. Hypoxia promotes invasive growth by transcriptional activation of the met protooncogene. Cancer Cell. 2003. 3(4). P. 34761.

62. Radonic A., Thulke S., Mackay I.M., Landt O., Siegert W., Nitsche A. Guideline to reference gene selection for quantitative real-time PCR. Biochem. Biophys. Res. Commun. 2004. 313. P. 856-862.

63. Richards F,M„ Schofield P,N„ Fleming S„ Maher E,R. Expression of the von Hippel-Lindau disease tumour suppressor gene during human embryogenesis. Hum Mol Genet. 1996. 5(5). P.639-644.

64. Ronai Z., Yabubovskaya M.S., Zhang E., Belitsky G.A. K-ras mutation in sputum of patients with or without lung cancer. J Cell Biochem Suppl. 1996. 25. P. 172-176.

65. Sammarco M.C., Ditch S., Banerjee A., Grabczyk E. Ferritin L and H subunits are differentially regulated on a post-transcriptional level. J Biol Chem. 2008. 283(8). 4578-4587.

66. Schlessinger J. Cell signaling by receptor tyrosine kinases. Cell. 2000. 103(2). P. 211-225.

67. Shu J., Jelinek J., Chang H., Shen L., Qin T., Chung W., Oki Y., Issa J.P. Silencing of bidirectional promoters by DNA methylation in tumorigenesis. Cancer Res. 2006. 66(10). P. 5077-5084.

68. Simpson M.A. Concurrent expression of hyaluronan biosynthetic and processing enzymes promotes growth and vascularization of prostate tumors in mice. Am J Pathol. 2006. 169(1). P. 247-257.

69. Takagi Y., Pause A., Conaway R.C., Conaway J.W. Identification of elongin C sequences required for interaction with the von Hippel-Lindau tumor suppressor protein. J Biol Chem. 1997. 272(43). P. 27444-27449.

70. Toole BP. Hyaluronan: from extracellular glue to pericellular cue. Nat. Rev. Cancer. 2004. 4. P. 528-539.

71. Tse C., Xiang R.H., Bracht T., Naylor S.L. Human Semaphorin 3B (SEMA3B) located at chromosome 3p21.3 suppresses tumor formation in an adenocarcinoma cell line. Cancer Res. 2002. 62(2). P. 542-546.

72. Virmani AK., Gazdar A.F. Tumor suppressor genes in Lung cancer. Methods Mol. Biol. 2003. 222. P. 97-115.

73. Wang J., Xie L.Y., Allan S., Beach D., Hannon G.J. Myc activates telomerase. Genes Dev. 1998. 12(12). P. 1769-1774.

74. Weinberg R.A. The retinoblastoma protein and cell cycle control. Cell. 1995. 81. P. 323-330.

75. Wistuba I.I., Lam S., Behrens C., Virmani A.K., Fong K.M., LeRiche J., Samet J.M., Srivastava S., Minna J.D., Gazdar A.F. Molecular damage in the bronchial epithelium of current and former smokers. J Natl Cancer Inst. 1997. 89(18). P. 1366-1373.

76. Wong M.L., Medrano J.F. Real-time PCR for mRNA quantification. BioTechniques. 2005. 39. P. 1-11.

77. Xiang R., Davalos A.R., Hensel C.H., Zhou X.J., Tse C., Naylor S.L. Semaphorin 3F gene from human 3p21.3 suppresses tumor formation in nude mice. Cancer Res. 2002. 62(9). P. 2637-2643.

78. Yarden Y., Sliwkowski M.X. Untangling the ErbB signalling network. Nature Rev. Mol. Cell Biol. 2001. 2. P. 127- 137.

79. Ye Y., Vasavada S., Kuzmin I., Stackhouse T., Zbar B., Williams B.R. Subcellular localization of the von Hippel-Lindau disease gene product is cell cycle-dependent. Int J Cancer. 1998. 78(1). P. 62-69.

80. Yeo M., Lin P.S., Dahmus M.E., Gill G.N. A novel RNA polymerase II C-terminal domain phosphatase that preferentially dephosphorylates serine 5. J Biol Chem. 2003. 278(28) P. 26078-26085

81. Zabarovsky E.R., Lerman M.I., Minna J.D. Tumor suppressor genes on chromosome 3p involved in the pathogenesis of lung and other cancers. Oncogene. 2002. 21(45). P.6915-6935.

82. Zabarovsky et al. Lung cancer principles and practice, third edition, 2005. P. 118-133.

83. Zhang L., Underhill C.B., Chen L. Hyaluronan on the surface of tumor cells is correlated with metastatic behavior. Cancer Res. 1995. 55(2). P. 428-433.1. БЛАГОДАРНОСТИ