Диагностическое значение обратно транскриптазной полимеразной цепной реакции в выявлении клеток рака предстательной железы в крови тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.40, кандидат медицинских наук Забежинская, Ольга Марковна

• Забежинская, Ольга Марковна
• кандидат медицинских наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Забежинская, Ольга Марковна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 .Характеристика ]эака предстательной железы.

1.2.Характеристика процесса метастазирования рака предстательной железы и методов его ранней диагностики.

1.3.Характеристика простатспецифических генов.

1.4.Характеристика методики выявления клеток рака простаты в периферической крови с помощью ОТ-ГТЦР.

1.5.Направления клинического использования методики выявления микрометастазов рака предстательной железы с помощью ОТ-ПЦР.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Диагностическое значение обратно транскриптазной полимеразной цепной реакции в выявлении клеток рака предстательной железы в крови»

Актуальность проблемы. Рак предстательной железы (РПЖ) относится к числу наиболее значимых и распространенных заболеваний нашего времени. Среди причин смерти мужчин от опухолей, РПЖ занимает второе место после рака легких [18]. Настораживающей является выраженная тенденция роста заболеваемости во многих странах, в том числе и России. Одновременно отмечается рост смертнос ти от этой болезни [1].

Для РПЖ характерно раннее метастаз11ровапие, чаще всего гематогенным путем в кости таза и позвоночник. Применяемые методики отбора больных, включающие пальцевое ректальное исследование, определение простатического специфического антигена (ПСА), трансректальное ультразвуковое исследование простаты, пункционную биопсию с гистологическим исследованием и определением степени злокачественности по Глиссону, в большом числе наблюдений не позволяют адекватно оценить стадию заболевания и биологический потенциал рака простаты, характеризующего способность опухоли к метастазированию. Раннее выявление процесса диссемынации её необходимо для правильного выбора лечебной тактики, в том числе при отборе пациентов на радикальное хирургическое лечение, при решении вопроса о назначении адъювантной терашш до и после него. Также это важно для мониторинга состояния больных.

С 1992 года разрабатывается методика применения обратно траискриптазной полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР) для определения циркулирующих в крови клеток опухоли предстательной железы, основанная на определении мРНК простатического специфического антигена [118]. В зарубежной литературе предложено называть обнаруженные в крови раковые клетки солидных опухолей гематогенными микрометасгазами [133]. Проведены исследования, подтверждающие возможность использования её как для предоперационной диагностики стадии процесса, так и послеоперационного выявления рецидива [98]. Имеются данные о применении реакции для первичной диагностики РПЖ [37]. Предложено использовать данную методику для изучения возможности гематогенной диссеминации клеток рака простаты после лечебно-диагностических процедур, проводимых на предстательной железе [39]. В России систематические исследования в этой области не проводились. Результаты опубликованных зарубежных исследований противоречивы. Для практического применения данной методики клиницистами необходимо продолжить исследования в этой области.

Целью настоящего исследования является изучение клинического значения выявления клеток рака простаты в периферической крови с помощью ОТ-ПЦР, специфичной мРНК ПСА, а также исследование возможности гематогенной диссеминацни при проведении лечебно-диагностических манипуляций на предстательной железе. Нами сформулированы следующие задачи исследования: провести экспериментальный анализ и оптимизацию имеющихся методик ПСА-специфичной ОТ-ПЦР периферической крови для использования их при дальнейших клинических исследованиях; изучить чувствительность и специфичность выбранного метода и взаимосвязь результатов ОТ-ПЦР с традиционными диагностическими и прогностическими критериями при исследовании пациентов без заболеваний простаты, с фоновыми и предраковыми заболеваниями, а также РПЖ; сопоставить динамику изменения результатов ОТ-ПЦР крови и уровня ПСА на фоне гормонального лечения и без него при динамическом наблюдении больных РПЖ; провести анализ влияния лечебно-диагностических процедур (биопсии простаты, массажа простаты, радикальной простатэктомии, трансуретральной резекции простаты) па результат ОТ-ПЦР исследуемых пациентов.

Научная новизна. Впервые в России проведено исследование по выявлению циркулирующих в крови клеток рака простаты с помощью ОТ-ПЦР для мРНК ПСА. Проведена оптимизация и анализ чувствительности нескольких методик ОТ-ПЦР с применением четырех групп ПСА-специфичных праймеров. Установлено, что выбранная методика обладает достаточно высокой чувствительностью и специфичностью, является сравнительно недорогостоющей и технически доступной.

На клиническом материале показана высокая чувствительность и специфичность метода, взаимосвязь его результатов с уровепем ПСА, степенью дифференцировки первичной опухоли, её размером, наличием поражения регионарных лимфатических узлов и отдаленных метастазов.

Установлена возможность выявления циркулирующих в крови клеток рака простаты с помощью ОТ-ПЦР у пациентов с отсутствием метастазов по результатам традиционных методов исследования.

При обследовании пациентов с подозрением на рак простаты установлена возможность попадания простатических клеток в кровеносное русло при простатической интраэпителиалыюй неоплазии высокой степени (ПИН-2).

Впервые продемонстрирована возможность гематогенной диссеминации после массажа простаты, а также после биопсии простаты, радикальной простатэктомии (РПЭ), трансуретральной резекции простаты (ТУР) у пациентов с ПИН-2 и раковой трансформацией.

Практическая ценность работы. Апробирована и оптимизирована высоко чувствительная и специфичная методика выявления циркулирующих в крови клеток рака простаты с помощью ОТ-ПЦР, позволяющая установить процесс гематогенной диссеминации в более ранние сроки по сравнению с традиционными методами диагностики метастазов. Результаты исследования могут использоваться для индивидуальной оценки метастатического потенциала опухоли а также риска развития РПЖ при наличии ПИН-2. Показана возможность временной гематогенной диссеминации после проведения биопсии простаты, ТУР, масажа простаты и радикальной простатэктомии, что является обоснованием для более строгих показаний при планировании подобных процедур.

Апробация работы. Результаты исследований доложены на X Российском съезде урологов (Москва, 2002); III съезде биохимического общества (Санкт-Петербург, 2002); Научно-практическом симпозиуме «Технологии генодиагностики в практическом здравоохранении» в рамках Международной конференции «Геномика, протеомика и биоинформатика для медицины» (Москва, 2002); конференции «Онкологическая урология: от научных исследований к клинической практике (современные возможности диагностики и лечения опухолей предстательной железы, мочевого пузыря и почки» (Москва, 2004); III конференции молодых ученых с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины» (Москва, 2004); II Международной конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность» (Москва, 2005); XI съезде Российских урологов (Москва, 2007), а также неоднократно обсуждались на научно-практических конференциях кафедры биохимии и урологии ММА им. И.М.Сеченова. Апробация работы состоялась на совместном заседании кафедры биохимии ММА им. И.М.Сеченова и кафедры урологии ММА им. И.М.Сеченова ().

Публикации. По теме диссертации опубликовано 12 работ.

Заключение диссертации по теме «Урология», Забежинская, Ольга Марковна

выводы

1 .Выбранная и оптимизированная методика ПСА-специфичной ОТ-ПЦР крови обладает высокой чувствительностью в опытах со смесью культуры клеток РПЖ и мононуклеаров крови (1:106).

2. У пациентов без патологии простаты отрицательные результаты ОТ-ПЦР отмечены в 96,3% наблюдений, что свидетельствует о высокой специфичности метода.

3. В группе пациентов с фоновыми и предраковыми заболеваниями простаты положительные результаты ОТ-ПЦР выявлены в 23% наблюдений у больных с уровнем ПСА 8 нг/мл и выше. Это свидетельствует о возможности попадания простатических клеток в кровеносное русло уже при развитии диспластических изменений (ПИН-2).

4. Установлена корреляция положительных результатов ОТ-ПЦР у больных раком простаты с другими диагностическими критериями (в особенности с уровнем ПСА более 28 нг/мл и размером первичной опухоли Т3^), что указывает на возможность применения ОТ-ПЦР для установления гематогенной диссеминации ракового процесса.

5. В ряде наблюдений у больных РПЖ положительные результаты ОТ-ПЦР предшествовали клиническому выявлению отдаленных метастазов.

6. Массаж предстательной железы, РПЭ, ТУР и биопсия простаты могут стимулировать диссеминацию простатических клеток в кровеносное русло у пациентов с предраковыми заболеваниями простаты и РПЖ. Наибольшая частота такой диссеминации отмечена при биопсии простаты и ТУР у больных РПЖ. Повторные ОТ-ПЦР указывают на временный характер такой диссеминации.

7. Повторные ОТ-ПЦР крови позволяют мониторировать процесс гематогенной диссеминации у больных с предраковыми заболеваниями и РПЖ, в том числе на фоне гормонального лечения. Взаимосвязь между динамикой ОТ-ПЦР и динамикой ПСА в большинстве наблюдений не выявлена.

8. Не все попавшие в кровь раковые клетки выживают и формируют метастатический очаг, однако их наличие в крови (положительная ОТ-ПЦР) указывает на высокий метастатический потенциал опухоли. Для выявления прогностического значения этого показателя показаны повторные исследования с длительным сроком наблюдения больных.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Описанная методика ПСА-специфичиой ОТ-ПЦР рекомендована для исследования процесса гематогенного микрометастазирования рака простаты.

2. При фоновых и предраковых заболеваниях простаты у больных с ПСА более 8 нг/мл рекомендуется проведение ОТ-ПЦР крови для оценки риска развития РПЖ и диссеминации простатических клеток.

3. У больных РПЖ с невыясненным наличием отдаленных метастазов, а также больных без отдаленных метастазов с опухолью стадии Тз4 рекомендуется проведение ОТ-ПЦР для раннего выявления диссеминации и риска формирования отдаленных метастазов, особенно при уровне ПСА более 28 нг/мл.

4. В связи с риском временной гематогенной диссеминации простатических клеток вследствие проведения биопсии простаты рекомендуется проводить это вмешательство по строгим показаниям.

5. После хирургических вмешательств на предстательной железе рекомендуется ОТ-ПЦР исследование крови для своевременного выявления гематогенной диссеминации клеток рака простаты.

6. При динамическом наблюдении больных РПЖ, в том числе на фоне применения гормональной терапии, рекомендуется проводить повторные ОТ-ПЦР для контроля за процессом диссеминации.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Забежинская, Ольга Марковна, 2008 год

1. Бухаркин Б.В. Рак предстателыюй железы. // Современная онкология.- 2003. Т.5, №2. -С.62-64

2. Горбунова B.IL, Баранов B.C. Введение в молекулярную диагностику и генотерапию наследственных заболеваний. СПб: Специальная литература, 1997.- 286с.

3. Лоран О.Б., Пушкарь Д.Ю., Франк Г.А. Простат-специфический антиген и морфологическая характеристика рака предстательной железы. М.: Медпресс, 1999. — 143с,

4. Луценко С.В., Киселев С.М., Северин С.Е. Молекулярные механизмы опухолевого ангиогенеза // Биохимия. — 2003. 68(3). — С.349-365

5. Ю.Мазо Е.Б., Мешков В.В. Простатическая интраэпителиальная неоплазия. М.: Геотар-мед, 2001.-78с.11.0стерман Л.А. Хроматография белков и нуклеиновых кислот. М.: Наука, 1985. 536 с.

6. Платонов А.Е. Статистический анализ в медицине и биологии: задачи, терминология, логика, компьютерные методы. М.: Издательство РАМН, 2000. - 51с.

7. Пленум правления Российского общества урологов (Омск, 22-24 сентября 1999г.) — Материалы Москва - 1999

8. Резник М.И., Новик Э.К. Секреты урологии. М.: BinomPublishers, СПб, Невский диалект, 2000. - 344с.

9. Руководство по патологоанатомической диагностике опухолей человека. Под ред. Краевского Н.А., Смольянникова А.В. — М.: Медицина, 1976. с.

10. Тепперман Дж., Теппермап X. Физиология обмена веществ и эндокринной системы. М.: Мир, 1989. - 653с.17.0сновы биохимии. Том 3. / Уайт А., Хеидлер Ф., Смит Э. и др. М.: Мир, 1981. - 317с.

11. Урология. Под ред. акад.РАМН Лопаткина Н.А. М.: Гэотар-Мед, 2002. - 519 с.

12. Урология. Под ред. Аляева Ю.Г. — М.: Медицинское информационное агенство (МИА), 2005. 639 с

13. Гены и геномы.Том 1. / Сингер М., Берг П. М.: Мир, 1998. - 391с.

14. Ablin R.J. A retrospective and prospective overview of prostate-specific antigen// J. Cancer Res. Clin. Oncol. 1997. - Vol. 123. - P.583-594.

15. Albers P., Ко Y., Wardelmann E. et al. Limitations of detection of bone-marrow micrometastasis in prostate canrcinoma patients by CK18/PSA immunocytochemistry and PSA RT-PCR // Anticancer Res.-2000.-Vol.20, №3B.-P.2107-2111.

16. Alers J.C., Rochat J., Krijtenburg P.J. et al. Identification of genetic markers for prostatic cancer progression // Laboratory Investigation. — 2000. Vol.80 - P.931 -942.

17. Aquino A. A novel method for monitoring response to chemotherapy based on the detection of circulating cancer cells: a case report // J.Chemother. 2002.- Vol.14, №4. - P. 412-416.

18. Arif H.Agha Prostate cancer. Brief summary of staging and grading of prostate cancer 11 http://www.dialogmedical.com

19. Balk S.P., Ко Y.-J., Bubley GJ. Biology of prostate-specific antigen // J. of Clinical Oncology.-2003.- Vol.21, №2.-P.383-391.

20. Begueret H. Vergier В., Begueret J. et al. Detection of circulating cells expressing chromogranin A gene transcripts in patients with lung neuroendocrine carcinoma // European J. of Cancer. 2002. - Vol.38, №17. - P.2325-2330.

21. Berteau P., Dumas F., Gala J.-L. et al. Influence of blood storage and sample processing on molecular detection of circulating prostate cells in cancer // Clinical Chemistry. 1998. - Vol.44, №3. — P.677-679.

22. Berteau P., Dumas F., Gala J.-L. et al. Molecular detection of circulating prostate cells in cancer II: comparison of prostate epithelial cells isolation procedures // Clinical Chemistry. — 1998. — Vol.44, №8-P. 1750-1753.

23. Beverage JN., Figg WD. The quantification of PSA mRNA copies in pathologically normal pelvic lymph nodes is a viable prognostic indicator // J. Cancer Biol. Ther. 2006. — Vol.5, №9. — P.1257-1260

24. Bianco F.J.Jr., Powell I J., Cher M.L. et al. Presence of circulating prostate cancer cells in African American males adversely affects survival // Urol. Oncol. 2002. - Vol.7, №4. — P. 147152.

25. Bianco F.J.Jr., Wood D.P.Jr., Gomes de Oliveira J. et al. Prolifiration of prostate cancer cells in the bone marrow predicts recurrence in patients with localized prostate cancer // Prostate. — 2001. — Vol.49, №4 P.235-242. .

26. B6ckmann В., Grill H.J., Giesing M. Molecular characterization of minimal residual cancer cells in patients with solid tumors // Biomol.Eng. 2001. - №17. - P.95-111.

27. Bostwick D.G., Pacelli A., Blute M. et al. Prostate-specific membrane antigen expression in prostatic intraepithelial neoplasia and adenocarcinoma: a study of 184 cases / Cancer. 1998. -Vol.82, №11. — P.2256-2261.

28. Burger M.J., Tebay M.A., Keith P.A. et al. Expression analysis of delta-catenin and prostate-specific membrane antigen: their potential as diagnostic markers for prostate cancer / Int. J. Cancer. 2002. - Vol.100, №2. - P.228-37.

29. Cama C, Olsson CA, Buttyan R et al. Molecular staging of prostate cancer 1П. Effects of cystoscopy and needle biopsy on the enhanced reverse transcriptase polymerase chain reaction assay // J.Urology. -1997. Vol.157 - P.1748-1751.

30. Carter R.E., Feldman A.R., Coyle J.T. Prostate-specific membrane antigen is a hydrolase with substrate and pharmacologic characteristics of a neuropeptidase // PNAS. — 1996. — Vol.93, №2 — P.749-753.

31. Castaldo G., Cecere G., di Fusco V. et al. Prostate specific antigen ( protein and mRNA) analysis in the differential diagnosis and staging of prostate cancer // Clinica Chimica Acta. 1997. -Vol.265.-P.63-76.

32. Chang S.S., Gaudin P.B., Reuter V.E. et al. Prostate-specific membrane antigen: present and future applications // J.Urology. 2000. - Vol.55. - P.622-629.

33. Chang S.S., Reuter V.E., Heston W.D.W. et al. Five different anti-prostate-specific membrane antigen (PSMA) antibodies confirm PSMA expression in tumor-associated neovascularity // Cancer Research. 1999. - Vol.59. - P.3192-3198.

34. Chomczynski P., Sacchi N. Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction // Anal.Biochem. 1987. - Vol. 162. - P.156-159.

35. Clements J .A., Rohde P., Allen V. Molecular detection of prostate cells in ejaculate and urethral washings in men with suspected prostate cancer // J.Urol. 1999 - Vol.161, №4. - P.1337-1343.

36. Corey E., Corey M. J. Detection of disseminated prostate cells by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR): technical and clinical aspects // Int. J. Cancer. 1998. — Vol. 77. — P.655-673.

37. Cui WG., Zhao H., Song YZ. et al. Clinical significance of expression of PSA, hK2, PSMA in ' the peripheral blood of patients with prostate cancer // Zhonghua Zhong Liu Za Zhi. 2004. -Vol.26, №8. — P.479-481. -abstract

38. Darson M.F., Pacelli A., Roche P. et al. Human glandular kallikrein 2 expression in prostate adenocarcinoma and lymph node metastases // Urology. — 1999. Vol.53, №5. — P.939-944.

39. De la Taille A., Olsson C.A., Katz A.E. Molecular staging of prostate cancer: dream or reality? // Oncology. 1999. - Vol.13, №2. - P. 187-194.

40. Degu.chi Т., Yang М., Ehara Н. et al. Detection of micrometastatic prostate cancer cells in bone marrow of patients with prostate cancer // British Journal of Cancer. 1997. - Vol.75, №5. -P.634-638.

41. Diamandis E.P. Prostate-specific antigen: a cancer fighter and a valuable messenger? // Clinical Chemistry. -2000. Vol.46. - P.896-900.

42. Diamandis E.P., Okui A., Mitsui S. et al. Human kallilrein 11// Cancer Research. — 2002. — Vol.62. P.295-300.

43. Dumas F., Eschwege P., Loric S. Acute bacterial prostatitis induces hematogenous dissemination of prostate epithelial cells // Clinical Chemistry. 1997. - Vol.43, №10. - P.2007-2008.

44. Eschwege P., Dumas F., Blanchet P. et al. Haematogenous dissemination of prostate epithelial cells during radical prostatectomy // Lancet. 1995. - Vol. 346, №8689. - P. 1258-1230.

45. Galvan В., Christopoulos Т.К., Diamandis E.P. Detection of prostate-specific antigen mRNA by reverse transcription polymerase chain reaction and time-resolved fluorometry // Clinical Chemistry. 1995. - Vol.41, №12. -P.1705-1709.

46. Gao C.L., Maheshwari S., Dean R.C. et al. Blinded evaluation of reverse transcriptase-polymerase chain reaction prostate-specific antigen peripheral blood assay for molecular saging of prostate cancer // Urology. 1999. - Vol.53, №4. - P.714-721.

47. Gewanter R.M., Katz A.E., Olsson C.A. et al. RT-PCR for PSA as a prognostic factor for patients with clinically localized prostate cancer treated with radiotherapy III. Urology. 2003. -Vol. 61. — P.967-971.

48. Ghossein R.A., Rosai J. PCR in the detection of micrometastases and circulating tumor cells // Cancer. 1996. - Vol.78, №1. - P. 10-16.

49. Goldman HB, Israeli RS, Lerner JL et al. Effect of prostate biopsy on the results of the PSA RT-PCR test // J.Urology. 1998. - Vol.52, №6. - P.1073-1078.

50. Gomella L.G., Raj G.V., Moreno J.G. Reverse transcriptase polymerase chain reaction for prostate specific antigen in the management of prostate cancer // J.Urology. 1997. — Vol.158. -P.326-337.

51. Grosh A., Heston WD. Tumor target prostate specific membrane antigen (PSMA) and its regulation in prostate cancer // J. Cell Biochem. 2004. - Vol.91, №3. - P.528-539.

52. Grosh A., Wang X., Klein E., Heston WD. Novel role of prostate-specific membrane antigen in suppressing prostate cancer invasiveness // J. Cancer Res. — 2005. — Vol.65, №3. — P.727-731.

53. Halsted C.H., Ling E.-H., Luthi-Carter R. et al. Folylpoly-y-glutamate carboxypeptidase from pig jejunum // J.Biol.Chem. 1998. - Vol.273, №32. - P.20417-20424.

54. Hamdy FC. Prognostic and predictive factors in prostate cancer. // Cancer Treat. Rev. — 2001. — Vol.3.-P.143-151.

55. Hara N., Kasahara Т., Kawasaki T. et al. Frequency of PSA mRNA-bearing cells in the peripheral blood of patients after prostate biopsy // British J. Cancer. 2001. - Vol. 85, №4. -P.557-562.

56. Henke W., Loening S. Detection of illegitimate transcripts of PSA mRNA in blood by reverse transcription polymerase chain reaction // Int. J. Cancer. — 1998. — Vol.77. — P.164-165.

57. Herrala A., Kurkela R., Porvari K. et al. Human prostate-specific glandular kallikrein is expressed as an active and an inactive protein // Clinical Chemistry. 1997. — Vol.43. — P.279-284.

58. Heston W.D.W. Detection of hematogenous dissemination of prostatic cancer by RT-PCR with primers specific for prostate-specific membrane antigen // Clin. Chem. 1995. - Vol.41, №12. — P.l 687-1688.

59. Heston W.D.W. Potential uses of prostate specific membrane antigen (PSMA): a neurocarboxypeptidase and membrane folate hydrolase // Der Urologe A. — 1996. — Vol.35, №5. — P.400-407. abstract

60. Heuze-Vourc'h N., Leblond V., Olayat S. et al. Characterization of PSA-RP2, a protein related to prostate- specific antigen and encoded by alternative hKLK3 transcripts // Eur.J.Biochem. — 2001. -Vol. 268. — P.4408-4413.

61. Horoszewicz j.S., Kawinski E., Murphy G.P. Monoclonal antibodies to a new antigenic marker in epithelial prostatic cells and serum of prostatic cancer patients // Anticancer Resear ch. — 1987. -Vol.7, №5B.-P.927-935.

62. Joniau S., Goeman L., Pennings J. et al. Prostatic Intraepithelial Neoplasia (PIN): importance and clinical management // European Urology. — 2005. — Vol.48. P.379-385.

63. Jung Y.-S., Lee K.-J., Kim H.-J. et al. Clinical signgficance of bone marrow micrometastasis detected by nested RT-PCR for Keratin-19 in breast cancer patients // Japanese J. of Clinical Oncology. 2003. - Vol.33. - P. 167-172.

64. Katz AE, de Vries GM, Begg MD et al. Enhanced reverse transcriptase-polymerase chain reaction for prostate specific antigen as an indicator of true pathological stage in patients with prostate cancer // J.Cancer. 1995 - Vol.75, №7. - P. 1642-1648.

65. Kawakami M., Nakayama J. Enhanced expression of prostate-specific membrane antigen gene in prostate cancer as revealed by in situ hybridization / Cancer Research. — 1997. — Vol.57, №12. -P.2321-2324.

66. Kim J., palmer J.L., Finn L. et al. The pattern of serum markers in patients with androgen-independent adenocarcinoma of the prostate // J.Urologic Oncology. — 1999. — Vol.5, №3. — P.97-1

67. Kurek R., Heidenreich A., Hoffman R. et al. PSA, HK2 and PSM mRNA in blood and lymph nodes of prostate cancer patients value of a combined RT-PCR analysis // J.Eur. Urol. — 2001. -Vol.39,suppl.5. - P.101.

68. Kurek R., Ylikoski A., Renneberg H. et al. Quantitative RT-PCR for PSA mRNA and its use in preoperative staging of prostate cancer // J. Eur. Urol. 2001. - Vol.39(suppl.5). - P. 101.

69. Kurek R., Ylikosky A., Renneberg H. et al. Quantitative PSA RT-PSR for preoperative staging of prostate cancer // J. Prostate. 2003. - Vol.56, №4. - P.263-269.

70. Leek J., Lench N., Maraj B. et al. Prostate-specific membrane antigen: evidence for the existatnce of a second related human gene // British J. of Cancer. 1995. - Vol.72. - P.583-588.

71. Liu H., Moy P., Kim S. et al. Monoclonal antibodies to the extracellular domain of prostate-specific membrane antigen also react with tumor vascular endothelium // Cancer Research. — 1997. Vol.57, №17. - P.3629-3634.

72. Llanes L., Paez A., Ferruelo A. et al. Detecting circulating prostate cells in patients with clinically localized prostate cancer: clinical implications for molecular staging // British J. of Urology. 2000. - Vol.86, №9. - P. 1023-1027.

73. Loric S, Paradis V, Gala JL et al. Abnormal E-cadherin expression and prostate cell blood dissemination as marcers of biological reccurence in cancer // Eur J Cancer. — 2001. — Vol.37, №12. — P.1475-1481.

74. Luthi-Carter R., Barczak A.K., Speno H. et al. Molecular characterization of human brain N-acetylated a-linked acidic dipeptidase (NAALADase) // J. of Pharmacology and experimental therapeutics. 1998. - Vol.286, №2. - P.1020-1025.

75. McIntyre I.G., Clarke R.B., Anderson E. et al. Molecular prediction of progression in patients with conservatively managed cancer // Urology. — 2001. — Vol. 8, №5. — P.762-766.

76. Medeiros R., Morais A., Vasconcelos A. et al. Endothelial nitric oxide synthase gene polymorphisms and the shedding of circulating tumour cells in the blood of prostate cancer patients // Cancer Letters. 2002. - Vol.189, №1. - P.85-90.

77. Mejean A., Vona G., Naplas B. Detection of circulating prostate derived cells in patients with prostate adenocarconoma is an independent factor for tumor recurrence // J.Urology. 2000. — Vol.163, №6. - P.2022-2029.

78. Moreno J.G., Gomella L.G. Circulating prostate cancer cells detected by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR): what do they mean? // Cancer Control J. — 1999. Vol.5, №6.-P. 1214-1219.

79. Moreno J.G., O'Hara S.M., Long J.P. et al. Transrectal ultrasound guided biopsy causes haematogenous dissemination of prostate cells as determined by RT-PCR // J. Urology. 1997. — Vol. 49.-P. 515-520.

80. Moul J.W., Kane C.J., Malkowicz S.B. The role of imaging studies and molecular markers for selection candidates for radical prostatectomy // Urol.Clin.North Am. — 2001. Vol.28,№3. — P.459-472.

81. Nagao K., Hisatomi II., Hirata H. et al. Expression of molecular marker genes in various types of normal tissue: implication for detection of micrometastases // Int. J. of Mol. Med. — 2002. -VoU0.-P.37-10.

82. Nam R.K., Diamandis E.P., Toi A. et al. Serum human glandular kallikrein-2 protease levels predict the presence of prostate cancer among men with elevated prostate-specific antigen // J. Clinical Oncology. -2000. Vol.18. №5. -P. 1036. -abstract

83. Nelson P.S. et al. Molecular cloning and characterization of prostase, an androgen-regulated serine protease with prostate-restricted expression // PNAS. — 1999. Vol.96, №6. - P.3114-3119.

84. Pelkey T.J. Molecular and immunological detection of circulating tumor cells and micrometastases from solid tumors //J. Clin. Chem. 1996. - Vol.42, №9. - P. 1369-1381.

85. Pinto J.T., Suffoletto B.P., Berzin T.M. et al. Prostate-specific membrane antigen: a novel folate hydrolase in human prostatic carcinoma cells // J. Clinical Cancer Research. — 1996. — Vol.2, №9.-P. 1445-1451.

86. Prakash S., Robbins P.W. Glycotyping of prostate specific antigen // J.Glycobiology. — 2000. -Vol.10, №2.-P. 173-176.

87. Prostate cancer / editors Muphy G., Khoury S.,Partin A., Denis L. 2nd International Consultation on prostate cancer — June 27-29,1999, Paris

88. Prostate Cancer: a multidisciplinary guide. / Edited by Kantoff P.W., Wishnow K.I., Loughlin K.R. USA: Blackwell Science, 1997. - 56 p.

89. Ravery V. The significance of recurrent PSA after radical prostatectomy : benign versus malignant sources // Semin. Urol. Oncol. J. 1999. - №3. - P.127-129.

90. Repiska V. Zummerova A., Miklosi M. et al. Use of RT-PCR in the detection of circulating micrometastases // Rozhl. Chir. 2003. - Vol.82. - P.95-102. - abstract

91. Rinker-Schaeffer C.W., Hawkins A.L., Su S.L. et al localization and physical mapping of the prostate-specific membrane antigen (PSM) gene to human chromosome 11 // J.Genomics. — 1995.- Vol.30, №1.-P.105-108.

92. Siddiqua A., Chendil D., Rowland R. et al. Increased expression of PSA mRNA during brachytherapy in peripheral blood of patients with prostate cancer // J. Urology. — 2002. Vol.60, №2. — P.270-275.

93. Smith M.R., Biggar S., Hussain M. Prostate-specific antigen messenger RNA is expressed in non-prostate cells: implications for detection of micrometastases // J.Cancer Research. — 1995. -Vol.55.-P.2640-2644.

94. Sokoloff H., Patel A., Tso G.-L. et al. Surgical manipulation does not result in hematogenous dissemination of prostate cancer (PC) cells // J. Urology. — 1996. Part 2, Vol.155. — P.528A. — abstract 869

95. Sokoloff M.H., Tso C-L., Kaboo R. et al. Quantitative polymerase chain reaction does not improve preoperative prostate cancer staging: a clinicopathological molecular analysis of 121 patients 11 J. Urology.-1996. Vol.156. -P.1560-1566.

96. Stamey T.A. Preoperative serum prostate-specific antigen (PSA) below lOpg/L predicts neither the presence of prostate cancer nor the rate of postoperative PSA failure // J.Clinical Chemistry. 2001. - Vol.47. - P.631—634.

97. Starz H., Haas C.J., Schulz G.-M. et al. Tyrosinase RT-PCR as a supplement to histology for detecting melanoma and nevus cells in paraffin sections of sentinel lymph nodes // J.Modern Pathology. 2003. - №16. - P.920-929.

98. Su S.L., Huang I.P., Fair W.R. et al. Alternatively spliccd variants of prostate-specific membrane antigen RNA: ratio of expression as a potential measurement of progression // J.Cancer Research. 1995.- Vol.55, №7. - P.1441-1443.

99. Troyer J.K., Beckett M.L., Wright G.L.Jr. Location of prostate-specific membrane antigen in the LNCaP prostate carcinoma cell line // J.Prostate. 1997. - Vol.30, №4. - P.232-242.

100. Verkaik N.S., Schroder F.H., Romijn J.C. Clinical usefulness of RT-PCR detection of hematogenous prostate cancer spread // J.Urol. Res. — 1997. — Vol.25. P.373-384.

101. Vessella R.L., Corey E. Detection of prostate-cancer cells in blood and bone marrow by RT-PCR // Methods in Molecular Medicine: Tumor Marcer Protocols / Edited by M .Hanausek, Z. Walaszek. Humana Press Inc. Totowa, NJ, 1996. - Vol.14. - P.2762-2766

102. Wechermann D., Muller P., Wawroschek F. et al. Micrometastases of bone marrow in localized prostate cancer: correlation with established risk factors // J.Clin Oncol. — 1999. — Vol.17, №11.-P.3438-3443.

103. Widner N., Carrol P., Flax J. et al. Tumor angiogenesis correlates with metastasis in invasive prostate carcinoma // American J. of Pathology. 1993. - Vol.143. - P.401-409.

104. Wood D.P., Banks E.R., Humphreys S. et al. Identification of bone marrow micrometastases in patients with prostate cancer // J.Cancer. 1994. - Vol.74, №9. - P.2533-2540.

105. Wright G.L., Grab B.M., Haley C. et al. Upregulation of prostate-specific membrane antigen after androgen-deprivation therapy // J.Urology. 1996. — Vol.48, №2. - P.326-334.

106. Wu P., Leinonen J., Koivunen E. et al. Identification of novel prostate-specific abtigen-binding peptides modulating its enzyme activity // Eur.J.Biochem. 2000. - Vol.267. - P.6212-6220.

107. Xiao Z., Adam B.-L., Cazares L.H. et al. Quantification of serum prostate-specific membrane antigen by a novel protein biochip immunoassay discriminates benign from malignant prostate disease // J.Cancer Research. 2001. - Vol.61. - P.6029-6033.

108. Xu Т., Chen X., Wang XF. et al. Study of PSA, PSMA and hK2 mRNA in peripheral blood of prostate cancer patients and its clinical implications // Beijing Da Xue Xue Bao. 2004. - Vol.36, №2. -P. 164-168

109. Yang Q.-F., Sakurai Т., Shan L. et al. Novel polymorphisms of prostate-specific antigen (PSA) gene assotiated with PSA mRNA expression in breast cancer // J.Hum. Genet. — 2000. Vol.45. — P.363-366.

110. Yao V., Bacich DJ. Prostate specific membrane antigen (PSMA) expression gives prostate cancer cells a growth advantage in a physiologically relevant folate environment in vitro // J. Prostate. 2006. - Vol.66, №8. - P.867-875.

111. Yeung F., Li X., Ellett J. et al. Regions of prostate-specific antigen (PSA) promoter confer androgen-independent expression of PSA in prostate cancer cells // J. of Biol. Chem. — 2000. -Vol.275, №52. P.40846-40855.

112. Ylikoski A., Matti K., Hans L. et al. RT-PCR quantification of human glandular kallikrein 2 (HK2) and prostate specific antigen (PSA) mRNA in peripheral blood of prostate cancer patients 11 J.Eur. Urology. 2001. - Vol.39, suppl.5. - P. 167.

113. Ylikoski A., Sjoroos M., Lundwall A., et al. Quantitative reverse transcription-PCR assay with an internal standard for the detection of prostate-specific antigen mRNA // Clin. Chem. 1999. — Vol.45, №9. - P. 1397-1407.

114. Yousef G.M., Diamandis E.P. The new human tissue kallikrein gene family: structure, function and association to disease // Endocrine Reviews. — 2001, — Vol.22, №2. — P. 184-204.

115. Yuan J.J.J., Coplen D.E., Petros J.A. et al. Effects of rectal examination, prostatic massage, ultrasonography and needle biopsy on serum prostate specific antigen levels // J. Urology. — 1992. Part 2, Vol.147. - P.810. - abstract

116. Zarghami N., Grass L., Sauter E.R. et al. Prostate-specific antigen in serum during the menstrual cycle // J.Clinical Chemistry. 1997. - Vol.43, №10. - P. 1862-1867.

117. Zisman A., Lindner A., Zisman E. et al. Prostate-specific antigen induces proliferation of peripheral blood lymphocytes and cytokine secretion in benign prostate hypertrophy patients // J.Eur. Urology. 1999. - Vol.36, №3. - P.258-265.