Депонирование и рекультивирование сахарной свеклы в культуре in vitro тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.01.05, кандидат биологических наук Цупикова, Людмила Анатольевна

• Цупикова, Людмила Анатольевна
• кандидат биологических наук
• 2002

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Цупикова, Людмила Анатольевна

ВВЕДЕНИЕ.

1. МЕТОДЫ СОХРАНЕНИЯ И ПОДДЕРЖАНИЯ КОЛЛЕКЦИОННОГО МАТЕРИАЛА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ КУЛЬТУР.

1.1. Влияние регуляторов роста различной химической природы на рост и развитие растений.

1.2. Влияние состава питательных сред на физиологические процессы растений.

2. МАТЕРИАЛ, МЕТОДИКА И УСЛОВИЯ ПРОВЕДЕНИЯ ОПЫТОВ.

2.1. Исходный материал.

2.2. Условия и методика проведения опытов.

3. ДЕПОНИРОВАНИЕ МИКРОКЛОНОВ САХАРНОЙ СВЕКЛЫ В КУЛЬТУРЕ IN VITRO.

3.1. Влияние химических ингибиторов роста на длительность беспересадочного культивирования.

3.2. Влияние состава питательных сред на длительность беспересадочного культивирования.

4. РЕАКЦИЯ РАЗЛИЧНЫХ ГЕНОТИПОВ САХАРНОЙ СВЕКЛЫ НА УСЛОВИЯ ДЕПОНИРОВАНИЯ.

5. ГИСТОХИМИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ДЛИТЕЛЬНО КУЛЬТИВИРУЕМОГО МАТЕРИАЛА.

5.1. Особенности морфологического развития сахарной свеклы в культуре in vitro.

5.2. Гистохимические исследования сахарной свеклы в условиях депонирования

6. РЕКУЛЬТИВИРОВАНИЕ СЕЛЕКЦИОННОГО МАТЕРИАЛА САХАРНОЙ СВЕКЛЫ.

6.1. Последействие условий депонирования на рост эксплантов в процессе их микроклонирования in vitro.

6.2. Развитие эксплантов сахарной свеклы после депонирования в условиях закрытого грунта.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Депонирование и рекультивирование сахарной свеклы в культуре in vitro»

Актуальность проблемы

Успешное решение селекционных программ по созданию высокогетеро-зисных гибридов сахарной свеклы зависит от подбора и использования в качестве компонентов исходного материала с ценными селекционно-генетическими признаками. Привлечение методов биотехнологии в селекцию сахарной свеклы позволяет не только ускорить получение исходного материала в 2 - 3 раза, а время создания сортов и гибридов сократить до 6 - 8 лет, но и сохранить материал, идентичный исходной форме на протяжении 2-3 лет. Так как свекла относится к перекрестноопыляющимся растениям, то сохранение исходного материала в "чистоте" традиционным методом в обычных условиях поля или теплиц крайне затруднительно.

Согласно литературным данным исследования, проведенные на многих видах растений: картофеле (Трускинов, Оглуздин, 1982), землянике (Ульянова, 1990), томатах (Полевая, Яшина, Олейникова, 1988), яблоне (Катаева, 1986) и др., показали возможность сохранения пробирочных культур на беспересадочном режиме в течение 12 и более месяцев при использовании модифицированных питательных сред (Withers, 1979). Однако возможности этих технологий не могут быть реализованы на сахарной свекле, так как они специфичны для каждого вида и конкретных условий. Поэтому по сахарной свекле имеются лишь единичные сообщения зарубежных авторов (Alleweldt, 1987; Lohmann, Kaiser, 1989), освещающих только отдельные этапы депонирования.

В связи с этим разработка режимов депонирования селекционно-ценных форм сахарной свеклы в искусственных условиях, представляющих собой потомство апикальных и пазушных меристем, без пересадки в течение 8-12 месяцев, с сохранением жизнеспособности является актуальным.

Использование метода депонирования позволит с минимальными затратами сохранить селекционно-ценный исходный материал в неизменном виде, сократить продолжительность и увеличить эффективность селекционного цикла.

Цель и задачи исследований

Основная цель исследований заключалась в установлении факторов, лимитирующих ростовые процессы эксплантов сахарной свеклы и разработке метода длительного сохранения и рекультивирования селекционного материала в культуре in vitro.

В процессе работы были определены следующие задачи:

1. Выявить влияние минерального и углеводного состава питательных сред на рост и развитие эксплантов в процессе длительного культивирования сахарной свеклы.

2. Изучить реакцию различных генотипов сахарной свеклы на условия длительного культивирования in vitro.

3. Выявить характер локализации запасных и физиологически активных веществ в тканях микроклонов при культивировании на искусственных питательных средах.

4. Определить последействие депонирования на рост и развитие растений.

5. Разработать метод длительного культивирования и рекультивирования сахарной свеклы в меристемной культуре.

Научная новизна

Впервые модифицированы и оптимизированы питательные среды для депонирования меристемной культуры применительно к сахарной свекле, посредством уменьшения углеводного уровня, увеличения плотности питательной среды и добавления ингибиторов.

Впервые выявлены морфогенетические особенности меристемной культуры сахарной свеклы при длительном беспересадочном культивировании эксплантов, выражающиеся в разрастании укороченного побега, измельчении вновь отрастающих листьев, одревеснении механических тканей. В тканях микроклонов выявлены особенности локализации крахмала, лигнина, белка, а также физиологически-активных веществ и ферментов в зависимости от условий выращивания.

Установлено, что при длительном культивировании наблюдается зависимость роста и развития микроклонов сахарной свеклы от генотипа родительской формы, что позволяет сохранять до 100% исходных форм

Разработан метод сохранения ценных генотипов сахарной свеклы путем длительного беспересадочного культивирования апикальных и пазушных меристем в условиях in vitro.

Определены методические подходы к выводу микроклонов свеклы из состояния покоя, включающие процессы рекультивирования и перевода их в грунт теплицы.

Практическая ценность и реализация результатов исследований

Разработанный метод депонирования in vitro может быть рекомендован для создания меристемных коллекций ценного селекционного материала сахарной свеклы.

Меристемная коллекция сахарной свеклы в количестве 22 номеров, включающая О-типы, МС-линии, фертильные линии, опылители, характеризующиеся ценными селекционно-генетическими признаками, может быть широко использована в селекционной работе при создании нового исходного материала и гетерозисных гибридов.

Увеличение в питательной среде количества агара до 13 г/л, позволяющее ее уплотнить, может найти применение в биотехнологии как эффективный прием беспересадочного культивирования эксплантов растений в течение 12 месяцев, вместо 1-2 месяцев по существующим прописям.

Показатели гистохимического анализа запасных веществ и ФАВ, характеризующие жизнеспособность эксплантов сахарной свеклы, рекомендуются для контроля ростовых процессов в период длительного культивирования in vitro.

На защиту выносятся следующие положения:

1. Продолжительность субкультивирования эксплантов сахарной свеклы можно увеличить за счет изменения основных режимов культивирования путем модифицирования состава питательных сред включением ингибиторов: салициловой кислоты, хлорхолинхлорида (ССС) и других веществ, а также изменением минерального и углеводного уровня питательной среды.

2. Реакция генотипа материнского растения-донора на условия депонирования in vitro проявляется в виде морфологических изменений в росте, развитии, жизнеспособности эксплантов, зависит от происхождения растения донора и требует корректирования состава питательных сред.

3. Метод длительного беспересадочного культивирования меристемной культуры сахарной свеклы основан на значительном снижении скорости роста растений, когда физиологическое состояние приближается к состоянию покоя и позволяет сохранять ценный селекционный материал в чистоте длительное время (2-5 лет) в виде коллекций и получать идентичные исходной форме клоны независимо от времени года практически в неограниченном количестве.

Заключение диссертации по теме «Селекция и семеноводство», Цупикова, Людмила Анатольевна

ВЫВОДЫ

1. Оптимальной питательной средой, наиболее полно отвечающей условиям депонирования, является среда В5, с увеличенным содержанием агара до 13 г/л, позволяющая сохранить высокую выживаемость микроклонов - 80 - 100% и до 70% листового аппарата, с хорошим тургором и интенсивно-зеленой окраской.

2. Установлено, что основным фактором, задерживающим развитие эксплантов сахарной свеклы при сохранении их жизнеспособности является добавление в питательную среду ингибиторов роста салициловой кислоты и хлорхолинхлорида. Салициловая кислота (0,2 мг/л) и ССС (2,5 мг/л) задерживают развитие растений и увеличивают длительность культивирования до 1 года с выживаемостью эксплантов от 60 до 90 %. При этом листовой аппарат после 12 месяцев беспересадочного культивирования сохраняется в живом виде от 40 до 68%, соответственно.

3. Выявлено, что способность растений к длительному беспересадочному культивированию определяется генотипическими особенностями растения-донора. Выживаемость эксплантов, изолированных из МС-форм и тетраплоидных форм, составила 85 - 90 % (среда с 13 г/л агара) и 75 % (среда с ССС), из фертильных форм 90 - 100% (среда с 13 г/л агара) и 80 % (среда с ССС), соответственно. Таким образом, реализация морфогенетического потенциала несколько выше оказалась у микроклонов, полученных из фертильных форм.

4. Показано, что в период длительного беспересадочного культивирования активность дыхательных ферментов (цитохромоксидазы и пероксидазы) и аскорбиновой кислоты, а также увеличение содержания аминокислот и углеводов (глюкозы), совпадает с периодом интенсивного роста растений, максимум которого отмечается к б(контроль) - 9 месяцам.

Присутствие в питательной среде ингибиторов роста снижает активность ФАВ и ферментов и замедляет ростовые процессы.

5. Успешному депонированию культивируемых растений способствует накопление в них таких веществ, как белки, крахмал, лигнин. Определение накопления этих веществ в тканях может служить контролем жизнеспособности эксплантов в период депонирования.

6. Выявлено, что последействие ингибиторов роста в процессе рекультивирования эксплантов наблюдается лишь в Iм пассаже и проявляется в угнетении развития и роста микроклонов, в формировании боковых побегов с узкими листовыми пластинками и другими нарушениями. Коэффициент размножения на всех вариантах сред составляет 8-13, при 10 на контроле.

7. Показано, что высаженные в грунт микроклоны после депонирования на питательных средах, содержащих химические ингибиторы роста, характеризуются образованием более удлиненной головки корнеплода, возникновением многоголовчатости, появлением большого количества упрямцев (13%), и способностью к многолетней вегетации.

8. Разработан метод длительного сохранения меристемной культуры сахарной свеклы in vitro, включающий: введение в культуру in vitro с размножением (до 20 - 30 шт.); культивирование микроклонов на модифицированной питательной среде до 12 месяцев; рекультивирование и размножение эксплантов с последующим укоренением и перевод в грунт. Лимитирующим фактором при депонировании является высокая плотность питательной среды, создаваемая повышенным содержанием агар-агара.

129

РЕКОМЕНДАЦИИ ДЛЯ ПРАКТИЧЕСКОГО ИСПОЛЬЗОВАНИЯ

1. Для создания меристемных коллекций ценного селекционного материала сахарной свеклы рекомендовать разработанный метод депонирования в культуре in vitro, основанный на использовании питательной среды без химических ингибиторов роста, с увеличенным содержанием агара (до 13 г/л). Метод позволяет длительно культивировать микроклоны уникальных генотипов, без угнетения физиологических процессов и получать идентичные исходной форме клоны в значительном количестве независимо от времени года.

2. Широко использовать в селекционных схемах при создании сортов и гибридов перспективные селекционные номера и линии из меристемных коллекций, обладающие ценными селекционно-генетическими и хозяйственно полезными свойствами.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Как известно, все ростовые процессы растений в значительной мере детерминированы внутренними факторами, среди которых особое место занимает генетическая и гормональная регуляция (Шевелуха, 1992). Вместе с тем, привлекая для растительных клеток такие экзогенные факторы, как элементы минерального и углеводного питания, гормоны или ингибиторы в различных сочетаниях и концентрациях, можно искусственно изменять эти процессы в нужном для экспериментатора направлении.

Проведенные нами исследования показали, что с помощью использования факторов питательной среды, тормозящих рост и развитие эксплантов в процессе микроклонирования (более плотная питательная среда), можно увеличить период одного пассажа до одного года и более, с сохранением высокой жизнеспособности и выживаемости (Подвигина, Знаменская, Цупикова, 1997, Podvigina, Snamenskaja, Zupikova, 2001).

Это позволило разработать метод депонирования, включающий в себя: введение в культуру in vitro с размножением (до 20 - 30 шт.); культивирование микроклонов на модифицированной питательной среде до 12 месяцев; рекультивирование и размножение эксплантов с последующим укоренением и перевод в грунт. Лимитирующим фактором при депонировании является высокая плотность питательной среды, создаваемая повышенным содержанием агар-агара.

На первом этапе отбирают ценный исходный селекционный материал и вводят в культуру in vitro. Из размноженного материала отбирают 20 - 30 самых развитых, неинфицированных черенков каждого номера и пересаживают на модифицированную питательную среду для длительного беспересадочного культивирования (рис.1).

M M M размножение подбор введение в культуру in исходного материала vitro

12 месяцев ДЕПОНИРОВАНИЕ

-► Ad

V w

РЕКУЛЬТИВИРОВАНИЕ X ywy высадка в грунт укоренение селекционный процесс

Рис. 49. Схема длительного беспересадочного культивирования сахарной свеклы

Используемая в нашем методе питательная среда с повышенным почти вдвое содержанием агара (до 13 г/л при норме 7 г/л) увеличивает период одного субкультивирования до 12 месяцев, без угнетения физиологических процессов. Отсутствие в среде гормонов и ингибиторов предотвращает накопление этих веществ в тканях, поэтому предлагаемый состав среды может многократно использоваться, при более длительном поддержании коллекции (10 лет и более).

В процессе депонирования (в 6 и 12 месяцев культивирования) проводят гистохимический контроль, позволяющий точнее оценить физиологическое состояние эксплантов. Наиболее простой для использования является качественная реакция на крахмал с реактивом Люголя, которую можно проводить на укороченном стебле сахарной свеклы (а также листьях). При оптимальном развитии экспланта к 6 месяцам культивирования появляются лишь следы крахмала, выраженные в виде простых мелких зерен, окрашенных в синий цвет. К 12 месяцам депонирования реакция усиливается, что выражается в увеличении количества зерен и их размеров.

После 12 месяцев беспересадочного культивирования необходимо проводить рекультивирование растительного материала для его омоложения и размножения.

При необходимости передачи коллекционного материала селекционерам, одну часть его вегетативно размножают, а другую часть в количестве 20 - 30 штук каждого номера снова пересаживают на депонирование.

Материал, отобранный для селекционной работы, размножают до нужного объема и помещают на питательную среду с добавлением стимуляторов ризогенеза (ИМК, ИУК, ИМК) для формирования корней.

126

В дальнейшем микроклоны с корневой системой переводят в условия грунта, где они формируют взрослое растение и в период цветения могут быть включены в схему селекционного процесса. С помощью разработанного метода нам удалось создать меристемную коллекцию сахарной свеклы в количестве 22 номеров, включающую О-типы, МС-линии, фертильные линии, опылители, характеризующихся ценными селекционно-генетическими признаками.

Метод может также найти широкое применение не только в селекции, но и при интродукции новых растений и сохранении редких и исчезающих видов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Цупикова, Людмила Анатольевна, 2002 год

1. Агрохимия / Под ред. В.М. Кпечковского, A.B. Петербургского. М.: Колос, 1967. С. 186.

2. Авуиджяи Э.С., Широкян Э.Х. Влияние хлорхолинхлорида на рост и обмен азотистых веществ в проростках пшеницы // Физиология растений. -1973.-Т.20, №5.-С. 936-941.

3. Альберт Э. Избирательная токсичность. М.: ИЛ, 1953. С 39.

4. Андреева Т.Ф. Фотосинтез и азотный обмен листьев. М.: Наука, 1969. - 162 с.

5. Андреева Т.Ф., Строгонова Л.Е., Воевудская С.Ю., Маевская С.Н., Черканова H.H. Влияние повышенной концентрации СО2 на фотосинтез, углеводный и азотный обмен и ростовые процессы растений горчицы // Физиология растений. 1989. - Т.36. - С. 40 - 47.

6. Андреева Т.Ф., Маевская С.Н., Воевудская С.Ю. Взаимосвязь фотосинтеза и азотного обмена в различных условиях фосфорного и азотного питания растений горчицы // Физиология растений. 1992. - Т.39. - С. 680 - 686.

7. Андреева Т.Ф., Маевская С.Н., Воевудская С.Ю., Черканова H.H. Взаимосвязь фотосинтеза с ассимиляцией азота у растений горчицы при воздействии возрастающих доз нитрата в питательном растворе // Физиология растений. 1998. - Т.45, № 6. - С. 813 - 816.

8. Анисимов A.A., Каманина М.С. Влияние условий минерального пи-татния на метаболизацию ассимилятов в проводящих тканях // Физиология растений. 1982. - Т. 29, № 4. - С. 667 - 673.

9. Бардинская М.С., Прусакова Л.Д., Шуберт Т.А. К вопросу о взаимодействии феруловой кислоты с гиббереллином и ИУК в процессе роста растений // Докл. АН СССР. 1962. - Т.146, №6. - С. 1445.

10. Батыгина Т.Б. Эмбриология цветковых растений. Т.З.-СПб, 2000. С. 39-62.

11. Белянская С.М., Исханов С.К., Шамина З.Б. Влияние стрессовых факторов на культуру клеток и проростков риса // Физиология растений. -1991. Т.38, №6. - С. 1218 - 1226.

12. Боннер Д. Изопреноиды // Биохимия растений. М.: Мир, 1968.154с.

13. Биология и селекция сахарной свеклы / Под ред. И.Ф. Бузанова. -М.: Колос, 1968. С. 47-60.

14. Бургутин А.Б. Микроклональное размножение винограда / Биология культивируемых клеток и биотехнология растений. М.: Наука, 1991. - С. 216-219.

15. Бутенко Р. Культура изолированных тканей и клеток растений // Вестник АН СССР. 1963. - №2. - С.2.

16. Бутенко Р.Г., Володарский А.Д. Специфика антигенов в цикле клеточных превращений в культуре тканей табака // Физиология растений. -1967.-Т. 14.-С. 965.

17. Бутенко Р.Г. Экспериментальный морфогенез и дифференциация в культуре клеток растений // XXXV Тимирязевское чтение. М., 1975. - 51с.

18. Бутенко Р.Г. Биология клеток высших растений in vitro и биотехнология на их основе. М.: ФБК - ПРЕСС, 1999.- 160 с.

19. Верзилов В.Ф. Регуляторы роста и их применение в растениеводстве. М.: Наука, 1971.-С. 23.

20. Власов П.В. Анализ природных фенольных ингибиторов роста // Рост растений и природные регуляторы. М.: Наука, 1977. - С. 142 - 154.

21. Внучкова В.А. Разработка метода получения растений регенерантов томата в условиях культуры ткани // Физиология растений. 1977. - Т. 24, №5.-С. 1094- 1100.

22. Высоцкая О.Н. Длительное сохранение in vitro коллекции растений земляники // Физиология растений. 1994. - Т. 41, № 6. - С. 935 - 941.

23. Высоцкий В.А. Действие неоторых регуляторов роста на изолированные меристематические верхушки черной смородины / Плодоводство и ягодоводство Нечерноземной полосы. М, 1976. - С. 101 - 107.

24. Высоцкий В.А. Культура изолированных тканей и органов плодовых растений : оздоровление и микроклональное размножение // Сельскохо-зяйственая биология. 1983. - № 7. - С. 42 - 47.

25. Гавелене В.А., Новицкина M.JI. Регулирование роста и формирование механических тканей стебля пшеницы производными ДМС. Регулятор-ные механизмы физиологических процессов у растений. Киев: Наукова Думка, 1985. - С 54.

26. Гамбург К.З., Кулаева О.Н., Муромцев Г.С., Прусакова Л.Д., Чкани-ков Д.И. Регуляторы роста растений. М.: Колос, 1979. - 246 с.

27. Гудвин Б. Временная организация клетки. Динамическая теория внутренних процессов. М.: Мир, 1966. - С. 25 - 33.

28. Давоян Э.И., Ефремова H.H., Болонкина Ю.В., Ахмед Махталат. Оптимизация условий оздоровления и хранения генбанка картофеля методом культуры изолированной меристемы // Сельскохозяйственная биология. -1995.-№5.-С. 52 -55.

29. Деева В.П. Ретарданты регуляторы роста растений. М., 1980. - С. 16-19.

30. Дмитриев A.M., Страцкевич Л.К. Стимуляция роста растений. -Минск.: Ураджай, 1986. С.24.

31. Драницына Ю., Денисов Г. Динамика накопления кумариновых соединений и эфирных масел в плодах Archangelica decurens // Химия природных соединений. 1965. - серия 5. - вып. 12. - С. 44.

32. Жужжалова Т.П., Знаменская В.В., Мазепин К.Г. Рост и развитие микроклонов сахарной свеклы в разных условиях культивирования / Биотехнологические методы в селекции сахарной свеклы. -М. 1989. - С.7 -11.

33. Зайцев Г.Н. Методика биометрических расчетов. М.: Наука, 1973. -С. 178.

34. Запрометов М.Н. Основы биохимии фенольных соединений. М.: Высшая школа, 1974. - 213с.

35. Знаменская В.В., Жужжалова Т.П. Микроклональное размножение сахарной свеклы (методические рекомендации). Воронеж, 1995. - 23 с.

36. Знаменская В.В. Принципы и методы создания и поддержания исходного материала на современном этапе селекции сахарной свеклы: Авто-реф. дис. . д.с.-х.н. Рамонь, 1999. - 40 с.

37. Ильенко И.И. Микроклональное размножение и сохранение селекционного материала сахарной свеклы в культуре in vitro // Физиология и биохимия культурных растений. 1983. - Т. 15, № 4. - С. 351 - 355.

38. Калачева Г.С., Сущик H.H. Состав жирных кислот Spirulina platensis в зависимости от возраста и минерального питания культуры // Физиология растений. 1994. - Т. 41, №2. - С. 275 - 282.

39. Калинин Ф.Л., Мережинский Ю.Т. Регуляторы роста растений. -Киев: Наукова Думка, 1965. 406 с.

40. Калинин Ф.Л. Биологически активные вещества в растениеводстве. Киев.: Наукова Думка, 1984. - 320 с.

41. Катаева Н.В., Бутенко Р.Г. Клональное микроразмножение растений. М.: Наука, 1983. - 96 с.

42. Катаева H.B. Особенности микроразмножения трудноукореняемых сортов яблони // Сельскохозяйственная биология. 1986. - №4. - С. 18-22.

43. Кефели В.И., Турецкая Р.Х. Участие фенольных соединений в ин-гибировании активности ауксинов и в подавлении роста побегов ивы // Физиология растений. 1965. - Т.12, вып. 4. - С. 638 - 645.

44. Кефели В.И. Природные ингибиторы роста и фитогормоны. М.: Наука, 1974. - 254 с.

45. Кирьян И.Г., Мазин В.В., Шаин A.C. К методике клонального микроразмножения клевера лугового в культуре латеральных почек // Сельскохозяйственная биология. 1990. - №5. - С. 94 - 97.

46. Книпл Я.С., Кулаева О.Н. Влияние кумарина и синтетических ретардантов роста на синтез РЕК и белка в срезанных листьях ячменя в темноте и на свету // Физиология растений. 1970. - Т. 17, №3. - С. 549 - 557.

47. Кудоярова Г.Р., Усманов И.Ю., Гюли-Заде В.З., Иванов И.И.,Трапезников В.К. Влияние уровня минерального питания на рост, концентрацию цитокининов и ауксинов в поростках пшеницы // Физиология растений. 1989. - Т. 36, вып.5. - С. 1012.

48. Куперман Ф.М. Биологический контроль в сельском хозяйстве. М.: Издательство Московского университета, 1962. 276 с.

49. Курсанов А.Л., Павлинова O.A. Сахаронакопление как функция ростовых процессов в корне сахарной свеклы // Физиология растений. 1967. - Т.14, №1. - С.21 - 25.

50. Кучеренко Л.А. Репродуцирование невсхожих семян с помощью культуры тканей // Сельскохозяйственная биология. 1986. - №3. - С. 14 - 17.

51. Лясковский И.И., Калинин Ф.Л. Влияние хлорхолинхлорида на формирование стебля озимой пшеницы и ее устойчивость к полеганию // Физиология и биохимия культурных растений. 1976. Т 8, №1. - С. 36 - 53.

52. Маевская С.Н., Андреева Т.Ф., Воевудская С.Ю., Черканова H.H. Влияние повышенной концентрации СО2 на фотосинтез и азотный обмен растений горчицы // Физиология растений. 1990. - Т. 37, №5. - С. 921- 927.

53. Макарова Р.В., Хуссейки Ю.М., Хуссейки М.М., Борисова Т.А., Кефели В.И. Влияние состава питательной среды на вегетативный рост культуры спироделы in vitro // Физиология растений. 1995. - Т. 42, №3. - С. 427 -431.

54. Маштаков С.М., Вонийло В.А., Деева В.П. Измерение окислительного фосфорилирования и структуры дыхательной цепи митохондрий гороха под воздействием различных физиологически активных соединений // Физиология растений. 1969. - Т. 16, №1. - С. 111 - 119.

55. Метлицкий JI.B., Кораблева Н.П. Биохимия покоя запасающих органов растений. М.: Наука, 1965. - 91с.

56. Мошков Б.С. Современные субтропики // Физиология растений. -1934. Т. 19, вып. 2. - С. 375 - 384.

57. Миляева Э.Л. Азизбекова Н.Ш., Комарова Э.Н., Ахундова Д.Д. Формирование клубнелуковиц регенерантов шафрана посевного в культуре in vitro // Физиология растений. - 1995. - Т. 42, №1. - С. 127 - 134.

58. Муромцев Г.С., Бутенко Р.Г., Тихоненко И.Т., Прокофьев И.М. Основы сельскохозяйственной биотехнологии. М.: Агропромиздат, 1990. - С. 187.

59. Мясоедов H.A., Шамина З.Б., Бутенко Р.Г. Оптимизация питательной среды и выделение новых штаммов для культуры тканей женьшеня // Физиология растений. 1985. - Т. 32, №4. - С. 800 - 806.

60. Никелл Л.Д. Регуляторы роста растений . Применение в сельском хозяйстве. М.: Колос, 1984. С. 56.

61. Нуждина В.В. Изучение и разработка новых способов создания закрепителей стерильности у сахарной свеклы: Автореф. дис. к.с.-х.н. Киев, 1992. - 24с.

62. Паламарчук И.А., Веселова Т.Д. Учебное пособие по гистохимии. -М.: МГУ, 1965. 108 с.

63. Перк А.Д. Роль воды в периоде покоя растений: Автореф. дис. к.б.-х.н. Тарту, 1953. - 22с.

64. Поволоцкая К.Л. О механизме действия гидразида малеиновой кислоты в растениях // Известия АН СССР. -1961. №2. - С. 250 - 255.

65. Поволоцкая К.Л., Хованская И.В. О механизме действия и детокси-кации ГМК в растениях // Гидразид малеиновой кислоты как регулятор роста растений. М.: Наука, 1973. - С. 234 - 246.

66. Подвигина O.A., Знаменская В.В., Цупикова Л.А. Депонирование сахарной свеклы в культуре in vitro // Биология клеток растений in vitro, биотехнология и сохранение генофонда. Тез. докл. М.:,1997. - С.529.

67. Подвигина O.A., Знаменская В.В., Цупикова Л.А. Депонирование селекционного материала на искусственных питательных средах // Сахарная свекла. 2000, № 12. - С. 18 -19.

68. Полевая B.C., Яшина С.Г., Олейникова Т.А. Размножение in vitro регенерантов томата из изолированных меристем // Физиология растений. -1988. Т.35, вып.З. - С. 612 - 617.

69. Попов Ю.Г. Культура in vitro меристематических верхушек стебля как метод оздоровления и размножения растений // Биологические науки. -1976. -№ 6. С. 13-24.

70. Попов В.И., Высоцкий В.А., Туктагулов И.М. Условия культивирования изолированных апексов хмеля для клонального микроразмножения // Физиология растений. 1985. - Т.32, вып.6. - С. 1191 -1195.

71. Прусакова Л.Д. Физиологическое обоснование применения хлорхо-линхлорида // Химия в сельском хозяйстве. 1967. - Т.5, №9. - С. 31 - 36.

72. Радцева Г.Е., Радцев B.C. Физиологические аспекты действия химических регуляторов роста на растения. М.: Наука, 1982. - 148 с.

73. Ракитин Ю.В. Ускорение созревания плодов. М.: Изд-во АН СССР, 1955. - С. 27.

74. Ракитин Ю.В. Использование стимуляторов и гербицидов в растениеводстве. М.: Знание, 1957. - С. 67.

75. Ракитин Ю.В., Поволоцкая К.Л., Гейден Т.М., Гараева К.Г., Хованская И.В., Калиберная З.В. Природа ингибирующего действия гидразида малеиновой кислоты на рост растений // Физиология растений. 1971. - Т. 18, вып.З. - С. 608.

76. Ракитин Ю.В. Гидразид малеиновой кислоты как регулятор роста растений / Гидразид малеиновой кислоты как регулятор роста растений. М.: Наука, 1973. - С. 5-39.

77. Ралдугина Г.Н., Смоленская И.Н. Анализ роста культуры клеток сахарной свеклы семядольного происхождения в жидкой питательной среде // Физиология растений. 1983. - Т. 30, вып. 6. - С. 1156.

78. Редько В.И., Редько Л.А., Сахно Л.А. Реакция меристем сахарной свеклы на солевой стресс // Биотехнологические методы в селекции сахарной свеклы. М., 1989. - С. 27 - 32.

79. Рубин Б.А. Курс физиологии растений. М.: Высшая школа, 1976.576с.

80. Сарсенбаев К.Н., Полимбетова Ф.А. Роль ферментов в устойчивости растений. Алма-Ата.: Наука, 1986. - 180с.

81. Сафразбекян С.А., Урманцева В.В., Катаева Н.В. Роль сахарозы в регуляции морфогенеза каперса in vitro // Биология культивируемых клеток и биотехнология растений. -М.: Наука, 1991. С. 192 - 197.

82. Семенов И.Л., Пузанов В.И. Влияние осмотически активных веществ на поглощение и метаболизацию сахарозы тканями корня сахарной свеклы // Физиология растений. 1985. - Т. 32, вып.5. - С. 876 - 883.

83. Синнот Э. Морфогенез растений. М.: Иностр. лит., 1963. - 603с.

84. Синягин И.И., Морозова Н.П. Некоторые особенности развития сахарной свеклы в третьем году жизни. ДАН СССР, 1953. - № 3. - С.37.

85. Сказкин Ф.Д. Критический период у растений к недостаточному водоснабжению. М.: АН СССР, 1961. - 50 с.

86. Смолов А.П., Игнатьев А.Р., Полевая B.C. Становление функций фотосинтетического аппарата в культуре ткани in vitro // Физиология растений. 1975. - Т.22, №2. - С. 428.

87. Таратонов Н.А. Влияние экзогенных факторов на рост и развитие регенерантов в процессе формирования дигаплоидных форм сахарной свеклы: Автореф. дис. к.с.-х.н. Рамонь, 1999. - 23с.

88. Тарчевский И.А., Максютова Н.Н., Яковлева В.Г., Гречкин А.Н. Янтарная кислота миметик салициловой кислоты // Физиология растений. -1999.-Т.46,№1.-С. 23 -28.

89. Трускинов Э.В., Оглуздин Н.С. Поддержание коллекционных образцов в культуре in vitro картофеля // Тр. по прикл. ботан., генет. и селекции. ВНИИ растениеводства. 1982. - Т.73, №2. - С. 73 - 79.

90. Турецкая Р.Х. Физиология корнеобразования у черенков и стимуляторы роста. М.: АН СССР, 1961,- С. 67.

91. Турецкая Р.Х., Кефели В.И., Коф Э.М. Роль природных регуляторов роста в органобразовании у черенков вишни и винограда // Физиология растений. 1966. - Т. 13. - С. 29.

92. Турецкая Р.Х., Кефели В.И., Коф Э.М. Действие метаболических ингибиторов на системы, участвующие в росте растягивающихся клеток и в корнеобразовании // Физиология растений. 1968. - Т. 15. - С. 958.

93. Тутаюк В.Х., Алиев С.Д. Изучение онтогенеза и наследования процесса формирования надземных корнеплодов у сахарной свеклы // Проблемы онкологии и тератологии растений. JL: Наука, 1975. - С. 144 - 145.

94. Уизерс JT.A. Хранение ткани при биотехнологии растений // Биотехнология сельскохозяйственных растений. М.: Агропромиздат, 1987. - С. 176 -205.

95. Ульянова Е.К. Длительность хранения земляники in vitro // Научно-техн. бюл. ВНИИ растениевод. 1990. - № 197 - С. 57 - 58.

96. Упадышев М.Т., Высоцкий В.А. Регенерационная способность экс-плантов рода Rubus в зависимости от длительности культивирования in vitro // Сельскохозяйственная биология. 1995. - №1. - С. 35.

97. Фаулер М.В. Экономические аспекты промышленного культивирования клеток растений // Биотехнология сельскохозяйственных растений. -М.: Агропромиздат, 1987. С. 9 - 42.

98. Фенина H.A. Поддержание коллекции оздоровленных сортов картофеля in vitro // Биотехнология в картофелеводстве: Научн. тр. Рос. с.-х. акад. НИИ картофел. хоз-ва. М.: НИИКХ, 1991. - С. 22 - 24.

99. Хасси .Г. Размножение сельскохозяйственных культур in vitro // Биотехнология сельскохозяйственных растений. М.: Агропромиздат, 1987. -С.105 - 134.

100. Хеншоу Г.Г., О'Хара Д.Ф. Методы in vitro для сохранения и использования мирового генофонда растений // Биотехнология сельскохозяйственных растений. М.: Агропромиздат, 1987. - С. 205 - 225.

101. Хромова JI.M., Седнина Г.В., Бутенко Р.Г. Влияние условий выращивания исходных растений картофеля на возделывание протопластов и их жизнеспособность // Сельскохозяйственная биология. -1984.-№11.-С.41.

102. Цоглин Л.Н., Мелик-Саркисов О.С., Андреенко Т.И., Розанов В.В. Газообмен и фотосинтез растений картофеля в условиях in vitro // Докл. АН СССР, 1991. Т.316, №4. - С.1020.

103. Цоглин Л.Н., Габель Б.В. Автоселекционые процессы при микло-клонировании растений. Фототрофное размножение картофеля in vitro // Физиология растений. 1994. - Т.41, №3. - С. 436 - 439.

104. Чайлахян М.Х. Регуляция цветения высших растений. М.: Наука, 1988.-559 с.

105. Чемерис Ю.К., Попова A.B., Арутюнян A.A., Венедиктов П.С. Влияние недостатка минерального питания на фотосинтетический аппарат хлореллы // Физиология растений. 1989. - Т. 36, вып.1. - С.57 - 67.

106. Чернобровкина М.А., Чернобровкин С.Л., Мартиросян Ю.Ц., Розанов В.В., Мелик-Саркисов О.С. Особенности выращивания миниклубней картофеля в биотехнологической системе // Сельскохозяйственная биология. 1994.-№3,-С. 65-71.

107. Шамсутдинов З.Ш., Мазин В.В., Козлов H.H. Концепция и методы формирования отраслевого генофонда кормовых культур // Сельскохозяйственная биология. 1995. - №3. - С. 32 - 41.

108. Шевелуха B.C. Периодичность роста сельскохозяйственных растений и пути ее регулирования. М.: Колос, 1980. - 455 с.

109. Шевелуха B.C. Рост растений и его регуляция в онтогенезе. М.: Наука, 1992. - 599с.

110. Ширяева Э.И. Гистохимическое и биохимическое изучение эмбриологии сахарной свеклы: Автореф. дис. . канд. б. н. Киев, 1970. - 23 с.

111. Эзау К. Анатомия семенных растений. М.: Иностр. лит., 1963.603с.

112. Adams A.N. Elimination of viruses from the hop by heat therapy and meristem culture // Horticult. Sei. 1975. - V. 50, №2. - P. 151.

113. Alleweldt'G. Der Einfluß von Wachstumsinhibitoren auf die Langzeitlagerung von in vitro Kulturen der Rebe. - Harst-Langebucher Margit.: Vitis, 1987. - V. 26, № 2. - S. 57 - 64.

114. Bonner J. Limiting faktors and growth inhibitors in the growth of the Avena coleoptile. Amer. J. Bot. - 1968. - V. 36. - P. 323.

115. Boswell J.G. Plant Polyphend oxidases and their relation to the oxidase systems in plants Enzyme Chem. Phenol. Compound Oxford - London - New York - Paris.: Pergamon Press, 1963. - P. 25 - 32.

116. Botrill D.E., Possingham J.M., Kriedeman P.E. The effects of nutrient deficiensies on photosynthesis and respiration in spinach PI. // Soil. 1970. - V.32, №2. - P. 424.

117. Bradley D., Kjellbom P., Lamb C. Elicitor and wound-induces Oxidative Cross-linking of a proline-rich plant cell wall protein // Cell. - 1992. -V.92,№l.-P. 21-30.

118. Debergh P.C. & Maene L.J. A scheme for commercial propagation of ornamental plants by tissue culture // Scientia Horticulturae. -1981. V.14, №4. - P. 335 -345.

119. Dostal K. Cytokinin effects in intergating Bryophyllun shoots. Ber. Biol. Plauz. - 1971. - № 47. - P. 259.

120. Chen Z., Silva H., Klessig D. Active oxigen species in the induktion of plant systemic acguired resistance by Salicylic Acid // Sei. 1993. - V. 262, №10. -P. 1883-1886.

121. Cheyne V.A., Dale P.J. Shoot tip culture in vorage legumes // Plant SCI. Lett. 1980. - V. 19, №4. - P 303 - 309.

122. Conder B.V. Cloning agricultural plants via in vitro technigues. Boca Raton.: Florida. - 1981. - 276 p.

123. Evans J.R. Photosynthesis and nitrogen relationships in leaves of C3 Plants // Oecologia. 1989. - V.78. - P. 9 -19.

124. Gadgil V.H. Effekts of change of medium, agar concentration and tissue distrirbance on the growth of hollyhock crown gall tummor tissue // Plant tissue and organ culture. Symp. Intern. Soc. Plant Morphol. Univ. Delhi, 1963. - P. 108.

125. Gamborg O.L., Evelegh D. Culture methods and detection of gluconate in suspension cultures of wheat and parleys // Can. J. Biochem. 1968. - 46. - P. 417-421.

126. Hammerschlag F. Factors Affecting Establisment and growth of peach Shoots in vitro // Hort. Sei. 1982. - V. 17, №1. - P.85.

127. Kartha K.K., Gamborg O.L., Constabel F. Shylik Regeneration of cassava plants from apical meristems // Plant Science Leffers. 1982. - №2. - P. 107.

128. Kauss H., Jeblick W. Pretreatment of parsley suspension cultures with salicelic acid enehaces spontaneous and elicited production of H2 02 // Plant Phisiol.- 1995. V. 108, №3. - P. 1171 -1178.

129. Lee T., Skoog F. Effekts of substituted plenols on bud formation and growth of tobacco tissue cultures // Physiol, plantarum. 1965. - № 18. - 386 p.

130. Linser H., Bohring J. Die Aufnahme von CCC durch verschiedene Getreidearten // Agrochimica. 1967. - V. 11, № 415. - P. 396 - 404.

131. Lohmann K., Kaiser A. Verfahren zur Langzeitlagerung bei Beta-Ruben in vitro // Oehme Johannes, Akademie der Landwirtschaftswissenschaften der DDR.- Jnstitut für Rubenforschung, 1989. №4. - S. 29.

132. Lundergan C., Janick. Low temperature storage of in vitro apple shoots. -Hort. Sei., 1979. -V.14. P.4.

133. Mayer A.M., Poljakoff-Mayer L. The germination seeds // Oxford.: PergamonPress, 1963. P. 167.

134. Miller C.O. Kinetin and kinetin-like compounds // Modern methods of plant analyses. 1963. - № 6. - P 194.

135. Murashige T. & Skoog F. A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures // Physiol plantarum. 1962. - V15.-P. 473 - 497.

136. Nickell L.G. Plant tissue culture as a source of biochemicals / Ed E.J. Staba . Florida.: GRS Press, 1980. - P. 256 - 269.

137. Phillips R., Henshaw G.G. The regulation of synthesis of phenolics in stationary phase cell cultures of aced pseudoplatanus // Exptl. Bot. 1977. - №28. -P. 785.

138. Pierik R.L.M., Steegmans H.H.M. Vegetative propagation of Freesia through the isolation of shoots in vitro // Neth. J, Agr. Sci. 1976. - V.4, № 3. - P. 291 - 292.

139. Sachs R.N., Lang A. Shoot Histogenesis and the subapical meristem // Conf. on Plant Growth Regulat. Jowa Press. -1961. - th.4. - 567 s.

140. Seibert M. Shoot initiation from carnation shoot apices frozen // Plant Physiology. 1976. -№ 191. - P. 1178 - 1179.

141. Sommer H.E. & Brown C.L. Application of tissue culture to forest tree improvement // Plant Cell and Tissue Culture. 1977. - №5. - P. 461 - 491.

142. Smith C.W. A studu of the growth of excised embrio shoot apices of wheat in vitro // Ann. Bot. 1967. - V. 31, № 124. - P. 39 - 42.

143. Smith S.M., Street H.E. The decline of embryogenic potential as callusand suspension cultures of carrot (Daucus carota L) are serially subcultured // Ann. Bot. 1974. - V.38. - № 155. - P. 223 - 241.

144. Stanzel M., Sjolung R.D., Komor E. Transport of glucose, fructose and sucrose by Steptanthus torluosus // Planta. 1988. - V.174. - №2. - P. 201 - 210.

145. Fukai Seiichi, Morii Masaharu. Storage of chrusanthemum grandiflorum Kitamural plantiets in vitro // Plant Tissue Cult. Lett. 1988. - V.5. - № 1. - P. 20 -25.

146. Tomaszewski M. The occurence of p-hydroxybenzoic acid and other simple phenols // Bull. Acad, polon. sci. cl. 1960. - V. 2, № 8. - P. 65.

147. Varga M. Correlations between the phend content polyphenolase and peroxidase activity and the growth of rice seedeings. Riso, 1970. - № 19. - 352p.

148. Vietez E., Pena J. Seasonal rhythm of rooting of Salix atrocinerea cuttings // Physiol, plantarum. 1978. - № 21. - P. 544.

149. Wareing P.F. Endogenous inhibitors in seed germination and dormancy // Handbuch der Pflazenphysiologie. 1965. - T. 15, № 2. - S. 909.

150. Westcott R. Tissue culture storage of potato germplasm // Potato Res. -1981.-V. 24, №3,-P. 331 -352.

151. Withers L.A. Freeze preservation of somatic embryos and clonal plantiets of carrot (Daucus carota L.) // Plant Physiology. - 1979. - № 63. - P. 460 -467.

152. Yazawa S., Asahira T. Bulbil formation of Dioscorea opposita cultured in vitro // Mem. Coll. Agr. Kyoto Univ. 1979. - №113. - P. 39 - 53.