Белки NF-kB в опухолях больных раком молочной железы: клинико-морфологические корреляции тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.12, кандидат медицинских наук Платова, Алевтина Михайловна

• Платова, Алевтина Михайловна
• кандидат медицинских наук
• 2012

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Платова, Алевтина Михайловна

СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОСОБАЯ РОЛЬ ЯДЕРНОГО ТРАНСКРИПЦИОННОГО ФАКТОРА №карра В В ЭТИОЛОГИИ, ПАТОГЕНЕЗЕ И КЛИНИЧЕСКОМ ТЕЧЕНИИ РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ (обзор литературы).

1.1. Молекулярно-биологические исследования опухолевых маркеров при раке молочной железы.

1.2. Ядерный транскрипционный фактор №-карра В в этиологии, пантогенезе и клиническом течении рака молочной железы.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Общая характеристика обследованных больных раком молочной железы.

2.2. Специальные лабораторные методы исследования.

2.3. Статистический анализ результатов исследования.

Глава 3. ИССЛЕДОВАНИЕ ЯДЕРНОГО ТРАНСКРИПЦИОННОГО ФАКТОРА №-кВ У БОЛЬНЫХ РАКОМ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ).

3.1. Содержание биохимических показателей в неизмененной ткани и опухоли у больных раком молочной железы.

3.2. Содержание и ДНК-связывающая активность МР-кВр65 в опухоли больных раком молочной железы с учетом основных клинических характеристик заболевания.

3.3. Показатели ДНК-связывающая активность 1\ГР-кВр50 в неизмененной ткани и опухоли больных раком молочной железы.

3.4. ДНК-связывающая активность МР-кВр50 в опухоли больных раком молочной железы с учетом основных клинических характеристик заболевания.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Белки NF-kB в опухолях больных раком молочной железы: клинико-морфологические корреляции»

Заболеваемость раком молочной железы (РМЖ) в последнее время неуклонно растет: за период с 2004 по 2009 гг. прирост стандартизованных показателей по России составил 16% [Давыдов М.И. и Аксель Е.М., 2009]. Наряду с этим повышается осведомленность женского населения о необходимости самообследования и диспансеризации, происходит усовершенствование диагностического оборудования, разрабатываются оптимальные алгоритмы диагностики и лечения [Давыдов М.И. и Летягин В.П., 2007; Чиссов В.И. и Давыдов М.И., 2008; Aebi S. et al, 2010].

Следует отметить, что этиология РМЖ, как и большинства опухолей не известна, патогенез и факторы риска изучены не до конца [Пальцев М.А., 2004; Ашрафян JI.A. и соавт., 2007; Лихтенштейн A.B., 2009; Linos S. et al., 2008; Saarinen N.M. et al., 2009; Maillard V. et al., 2010], а программы скрининга, диагностики, мониторинга и лечения совершенствуются [Корман Д.Б., 2006, 2010; Медведев Ф.В. и соавт., 2009; Фомин Д.К. и соавт., 2009], при этом, большинство исследователей, полагают, что в основе этого процесса лежат генетические нарушения [Копнин Б.П., 2000; Попов Л.С. и совт., 2004; Абелев Г.И. и соавт., 2008; Abel G.-G., 2009].

Несмотря на существующий прогресс в лечении РМЖ, особенно его ранних стадий, сохраняются существенные проблемы: определенные формы РМЖ лечить сложно, например местнораспространенные формы или тройной негативный рак молочной железы; некоторые женщины не переносят побочных эффектов стандартной терапии, а успехи в лечении метастатического РМЖ, к сожалению невелики [Корман Д.Б., 2006; Petrel Ii N.J. et al., 2010].

Стандартными прогностическими факторами, позволяющими планировать лечение, а также прогнозировать клиническое течение РМЖ по настоящее время остаются такие параметры как: размер опухоли, поражение периферических лимфатических коллекторов, гистологическая форма, степень злокачественности, наличие рецепторов эстрогенов и прогестерона, а с недавнего времени - также экспрессия белка Her-2/neu [Божок A.A. и соавт., 2005; Кушлинский Н.Е. и Герштейн Е.С., 2008; Aebi S. et al., 2010; Pet-relli N.J. et al., 2010].

Проведение как неоадьювантной, так и адьювантной системной и местной терапии не безразлично для больной, и ее применение должно быть четко определено [Muss H.B. et al., 2009; Aebi S. et al., 2010]. В этой связи, а также благодаря появлению новых препаратов направленного действия, в последнее время усиливается роль исследования молекулярно-биологических маркеров для определения тактики лекарственной терапии и прогноза течения РМЖ [Тупицын H.H. и соавт., 2001; Георгиев Г.П., 2004; Герштейн Е.С. и соавт., 2005; Имянитов E.H., 2008; Мирошниченко И.И. и соавт., 2009; Sleifer S. Et al., 2008; O'Shaughness J. et al., 2009; Tutt A. et al., 2009].

Среди таких маркеров при РМЖ особо следует выделить рецепторы половых стероидных гормонов [Бассалык Л.С. и соавт., 1987; Chu R. et al., 2009] и наличие экспрессии Her-2/neu в опухоли [Кушлинский и соавт., 2007; Саво-стикова М.В., 2010; Ozols R.F. et al., 2007; Fischgrabe J. et al., 2009], матрикс-ные металлопротеиназы и их ингибиторы [Давыдов М.И. и соавт., 2009; Woessner J.F. et al., 2000; McGowan P.M. et al., 2008; Bornstein P. et al., 2009; Chiodoni C. et al., 2010], активатор плазминогена урокиназного типа (uPA) и его ингибитор (PAI-1) [Герштейн Е.С. и соавт., 1999; 2007; Duffy M.J., 2004; Duffy M.J. et al., 2004; Harbeck N. et al., 2009; Li Ch. et al., 2010] в опухоли; наличие экспрессии рецептора эпидермального фактора роста в опухоли [Berns P.M.J.J. et al., 2008]; растворимый Fas [Аббасова С.Г. и соавт., 2009] и Нег-2/neu в сыворотке крови [Кушлинский Н.Е. и соавт., 2008]; фактор роста эндотелия сосудов, его рецепторы, а также ряд активаторов и ингибиторов нео-ангиогенеза в опухоли и сыворотке крови [Луценко С.В. и соавт., 2004; Ким Е.А. и соавт., 2008; Березов Т.Т. и соавт., 2010; Deprimo S.E. е al., 2006; Michael А. et al., 2010]; интерлейкин 6 [Вищипанова Н.Л. и соавт., 2004]; ИФР и их транспортные белки [Mccarthy К. et al., 2009; Verheus М. et al., 2009]; p53

Dookeran К.A. et al., 2010]; PI3K [Markman В. et al., 2010]; II тип рецептора TGF-p [Paiva C.E. et al., 2010]; циклин B1 [Nimeus-Malmstrom E. et al., 2009]; ген CCND1 [Roy P.G. et al., 2010]; RACK1 [Cao Xi-Xi et al., 2009]; топоизоме-раза 2a [Glynn R.W. et al., 2010]; экспрессия HLA-G [Не X. et al., 2010].

В последние годы пристальное внимание исследователей привлекает ядерный транскрипционный фактор NF-карра В (NF-кВ), который играет важную роль в клеточной пролиферации, апоптозе, воспалительной и аутоиммунной реакциях, поскольку он регулирует экспрессию генов, вовлеченных в эти процессы [Герштейн Е.С. и соавт., 2009; Biswas D.K., Iglehart J.D., 2006]. Идентифицировано пять белков семейства NF-kB, содержащих общий Д1Ж-связывающий домен: NF-kB 1 (р50/р105), NF-kB2 (р52/р100), RelA (р65), RelB и c-Rel [Haffner М.С. et al., 2006; Kim H.J. et al., 2006]. Основной формой существования этих белков в большинстве типов клеток является гетеродимер p50/RelA(p65). Активность NF-kB регулируется посредством их взаимодействия с ингибиторными белками 1кВ [Kim H.J. et al., 2006]. В большинстве покоящихся клеток NF-kB неактивен и находится в цитоплазме в комплексе с одним из ингибиторов. При поступлении в клетку регуляторного стимула сигнальный каскад NF-kB активируется, происходит фосфорилирование, а затем полная деградация ингибиторного белка, и свободный активный NF-kB поступает в ядро.

Регуляция NF-kB сигнального каскада нарушена во многих опухолях человека, в том числе и при РМЖ. В большинстве опухолевых клеток NF-kB постоянно активирован и находится в ядре. Эта активация не только защищает клетки от апоптоза, но также увеличивает их пролиферативную активность. Установлено, NF-kB играет важную роль в этиологии, патогенезе и прогрессии РМЖ [Cao Y. et al., 2003; Huber М.А. et al., 2004; Biswas D.K. et al., 2004]. Особенно велико значение этого фактора в опухолях, отрицательных по рецепторам эстрогенов, но имеющих рецепторы эпидермального фактора роста или Her-2/neu [Biswas D.K. et al., 2006; Van Laere S.J. et al., 2007].

В последние годы показано, что гиперактивация NF-kB является одной из причин резистентности РМЖ к антиэстрогенам [Ю.С.Лобанова и соавт., 2007; Pratt М.А. et al., 2003; DeGraffenried L.A. et al., 2004; Zhou Y. et al., 2007], химиопрепаратам [Weldon C.B. et al., 2001; Hernandez-Vargas H. et al., 2007], лучевой терапии [Ahmed К.M. et al., 2007].

Предполагается, что создание противоопухолевых агентов, блокирующих NF-кВ сигнальный путь, позволит повысить чувствительность клеток к существующим видам терапии, а также может иметь самостоятельное терапевтическое значение [Wu J.T. et al., 2005; Ahmed K.M. et al., 2007].

В то же время, большинство доказательств определяющего значения NF-кВ сигнального каскада при РМЖ получено в экспериментальных системах, а данные об экспрессии этого фактора в опухолях человека, полученные на клиническом материале, лишь единичны [Liu С. et al., 2007; Van Laere S.J. et al., 2007] и требуют дальнейшего подтверждения.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

Изучить особенности и соотношение экспрессии и активности ключевых субъединиц транскрипционного фактора NF-кВ и его ингибитора 1кВ в различных клинико-морфологических подгруппах больных раком молочной железы и выявить их связь с рецепторным статусом опухоли и основными клинико-морфологическими характеристиками заболевания.

Для достижения указанной цели необходимо решить следующие задачи исследования:

1. Иммуноферментными методами определить суммарную концентрацию р65 субъединицы NF-кВ и ингибиторного белка 1кВ в лизатах опухолей и прилежащих гистологически неизмененных тканей больных раком молочной железы и сопоставить уровни и соотношение концентраций NF-кВ и IkB в опухолях и неизмененных тканях молочной железы.

2. Специфическим иммуноферментным методом оценить ДНК-свя-зывающую активность р65 и р50 субъединиц NF-кB в лизатах опухолей и прилежащих гистологически неизмененных тканей больных раком молочной железы и проанализировать их соотношение.

3. Проанализировать взаимосвязь исследованных показателей с клиническими и морфологическими (стадия заболевания, размер опухоли, статус лимфатических узлов, возраст и менопаузный статус больных) характеристиками больных раком молочной железы.

4. Сопоставить содержание и активность ЫР-кВр65, КР-кВр50 и 1кВ в опухолях со статусом рецепторов стероидных гормонов (рецепторы эстрогенов, рецепторы прогестерона).

5. Исследовать содержание 1\ПР-кВр65 и №-кВр50 в опухолях молочной железы, а также их ДНК-связывающую активность с учетом экспрессии рецепторов Нег-2/пеи в РМЖ.

6. Сравнить исследуемые показатели у больных раком молочной железы с ранним прогрессированием и больных соответствующих стадий с безрецидивным течением заболевания.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА ИССЛЕДОВАНИЯ

Впервые на клиническом материале исследовано количественными им-муноферментными методами содержание общего NF-кB и ингибиторного белка ПсВ, а также соотношение их концентраций в опухолях и гистологически неизмененной ткани молочной железы больных РМЖ различных стадий и изучена взаимосвязь этих показателей с основными клинико-морфологиче-скими особенностями опухолей, их рецепторным и Нег-2/пеи статусом.

Обнаружено достоверно высокое содержание р65 субъединицы ядерного транскрипционного фактора №-кВ в опухоли, по сравнению с окружающей гистологически неизмененной тканью у больных РМЖ. При этом, высокие уровни ЫР-кВр65 в опухоли больных РМЖ связаны с такими неблагоприятными морфологическими факторами прогноза как критерий местной распространенности процесса (Т), низкая степень дифференцировки опухоли и ее локализация в нижне-внутреннем квадранте молочной железы.

У преобладающего числа больных РМЖ ДНК-связывающая активность ]\ГР-кВр65 в первичной опухоли была выше, чем в неизмененной ткани, а ее достоверно более высокие уровни связаны со степенью дифференцировки и размером опухоли, с увеличением возраста пациенток, числом пораженных метастазами регионарных лимфатических узлов и постменопаузой. Кроме того, выявлена положительная корреляционная взаимосвязь между содержанием белка МР-кВр65 в опухоли молочной железы и его ДНК-связывающей активностью.

Впервые показано, что уровни белка ЫР-кВр65 достоверно выше в РЭ~ по сравнению с РЭ+ опухолями молочной железы и не зависели от экспрессии РП. При этом показатели ДНК-связывающей активности МР-кВр65 в РМЖ не зависели от рецепторного статуса опухоли.

Показано, что достоверно более высокие показатели ЫР-кВр65 обнаружены в опухолях, экспрессирующих Нег-2/пеи, тогда как ДНК-связывающая активность р65 не зависела от содержания этого рецептора в РМЖ.

Доказано, что у больных РМЖ уровни ДНК-связывающей активности р50 субъединицы ЫБ-кВ достоверно выше в опухоли, чем в неизмененной ткани молочной железы и не зависели от репродуктивного статуса пациенток, критерия Т, количества пораженных метастазами регионарных лимфатических узлов и рецепторного статуса опухоли. При этом, выявлена высоко достоверная прямая корреляционная взаимосвязь между ДНК-связывающими активностями МРкВр50 и №-кВр65 в ткани РМЖ и в неизмененной ткани молочной железы.

Обнаружено, что более чем в 90% опухолей больных РМЖ происходит координированное увеличение ДНК-связывающей активности р65 и р50 субъединиц ядерного транскрипционного фактора ЫР-кВ по сравнению с окружающей гистологически неизмененной тканью молочной железы, а также содержания белка КР-кВр65, при этом изменения более выражены у больных с неблагоприятными клинико-морфологическими показателями.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

В результате проведенного исследования обнаружено, что более чем в 90% опухолей больных РМЖ происходит координированное увеличение ДНК-связывающей активности р65 и р50 субъединиц ядерного транскрипционного фактора МБ-кВ по сравнению с окружающей гистологически неизмененной тканью молочной железы, а также содержания белка МР-кВр65, при этом изменения более выражены у больных с неблагоприятными клинико-морфологическими показателями, характеризующими заболевание.

Заключение диссертации по теме «Онкология», Платова, Алевтина Михайловна

выводы

1. Обнаружено достоверно более высокое содержание р65 субъединицы ядерного транскрипционного фактора М^-кВ в опухоли по сравнению с окружающей гистологически неизмененной тканью у больных РМЖ (медианы соответственно 10,9 и 2,5 нг/мг белка, р<0,0001).

2. Наиболее высокие показатели содержания №-кВр65 в опухоли больных РМЖ связаны с неблагоприятными морфологическими факторами прогноза: критерием местной распространенности процесса (Т), низкой степенью злокачественности опухоли. Обнаружена взаимосвязь высоких показателей содержания №"-кВр65 в опухоли с локализацией ее в нижневнутреннем квадранте молочной железы.

3. У преобладающего числа больных РМЖ (97%) ДНК-связывающая активность ЫР-кВр65 в первичной опухоли выше, чем в неизмененной ткани (медианы соответственно 192,0 и 21,6 Ед, р<0,0001), а ее достоверно более высокие уровни связаны со степенью злокачественности и размером опухоли, с увеличением возраста пациенток, числом пораженных метастазами регионарных лимфатических узлов и постменопаузой.

4. Выявлена положительная корреляционная взаимосвязь между содержанием белка №-кВр65 в ткани рака молочной железы и его ДНК-связывающей активностью (11=0,3 1; р<0,01).

5. Уровни белка №-кВр65 достоверно выше в РЭ (13,7 нг/мг белка) по сравнению с РЭ+ (9,0 нг/мг белка) опухолями молочной железы (р=0,04) и не зависят от экспрессии РП, при этом показатели ДНК-связывающей активности ЫР-кВр65 в РМЖ не зависят от рецепторного статуса опухоли.

6. Многофакторный анализ выявил достоверную связь между уровнями №7-кВр65 и экспрессией белка Нег-2/пеи в РМЖ: достоверно более высокие показатели МБ-кВр65 обнаружены в опухолях, экспрессирующих

Нег-2/пеи, тогда как ДНК-связывающая активность р65 не зависела от содержания этого рецептора в первичной опухоли.

7. У преобладающего числа больных (97%) РМЖ уровни ДНК-связывающей активности р50 субъединицы ИР-кВ достоверно выше в опухоли, чем в неизмененной ткани молочной железы, не зависят от репродуктивного статуса пациенток, критерия Т, количества пораженных метастазами регионарных лимфатических узлов и рецепторного статуса опухоли. При этом выявлена высоко достоверная прямая корреляционная взаимосвязь между ДНК-связывающими активностями №кВр50 и №"-кВр65 как в ткани РМЖ (11=0,80; р<0,0001), так и в неизмененной ткани (11=0,88; р<0,0001).

8. Более чем в 90% опухолей больных РМЖ происходит координированное увеличение ДНК-связывающей активности р65 и р50 субъединиц ядерного транскрипционного фактора ЫР-кВ по сравнению с окружающей гистологически неизмененной тканью молочной железы, а также содержания белка ЫР-кВр65, при этом изменения более выражены у больных с неблагоприятными клинико-морфологическими показателями.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В последние годы частота заболевания раком молочной железы неуклонно возрастает, и по темпам роста заболеваемости эта опухоль в России занимает первое место среди злокачественных новообразований различных локализаций у женщин [Давыдов М.И. и соавт., 2004]. Ежегодно в мире РМЖ заболевают около 1 млн. женщин [Мерабишвили В.М., 2004; Гарин A.M. и соавт., 2006]. Однако уровень заболеваемости колеблется в достаточно широких пределах. Так, по данным МАИР в издании «Рак на 5 континентах» (т.7) число случаев РМЖ увеличивается в каждой стране, прибавляя ежегодно 12%. Наибольший прирост заболеваемости РМЖ отмечен за последние годы в Канаде, США, Швеции, Испании, Финляндии (3-6%), а наименьший - в Дании, Норвегии (1,8%). Наиболее высокие показатели смертности отмечены в Бельгии, Франции, Германии, Италии, Португалии.

При этом, несмотря на успехи, достигнутые в диагностике, совершенствовании хирургических и лекарственных методов лечения, смертность от РМЖ остается довольно высокой [Давыдов М.И. и соавт., 2008; Chen W.Y. et al., 2009; Cardoso F. et al., 2010]. Многие исследователи дальнейший прогресс в повышении эффективности лечения этого тяжелого заболевания связывают не только с рациональным использованием комбинированных и комплексных методов лечения (Загрекова Е.И. и соавт., 2002; Корман Д.Б., 2010; Ciruelos Е.М. et al., 2010; Kozloff М. et al., 2010), но и с разработкой принципиально новых патогенетических методов терапии, основанных на современных достижениях в изучении биохимии и молекулярной биологии этих опухолей [Георгиев Г.П., 2004; Имянитов Е.Н., 2008; Liu S. et al., 2010].

Улучшение ранней диагностики и совершенствование методов терапии РМЖ, в том числе создание и успешное применение специфических молеку-лярно-направленных («таргетных») препаратов, существенно повысили эффективность лечения этого тяжелого и социально значимого заболевания [Жуков Н.В. и соавт., 2008; Имянитов E.H., 2008]. Однако проведение как неоадьювантной, так и адьювантной системной терапии не безразлично для больных, и ее применение должно быть четко определено.

Современный уровень знаний о молекулярных механизмах возникновения и развития опухолей, их чувствительности или резистентности к различным препаратам и воздействиям уже позволяет осуществить переход от усредненных стандартных схем терапии к так называемой «персонализированной медицине», т.е. назначению лечения в соответствии с индивидуальными особенностями больного и биологическими характеристиками опухоли [Имянитов E.H., 2008; Lee-Hoeflich S.T. et al., 2008; Mancl E.E. et al., 2009].

Стандартными прогностическими факторами, позволяющими планировать течение РМЖ, до сих пор остаются такие параметры как размер опухоли, поражение периферических лимфатических коллекторов, гистологическая форма и степень злокачественности РМЖ [Божок A.A. и соавт., 2005; Давыдов М.И. и соавт., 2007; Герштейн Е.С. и соавт., 2010; Cardozo F. et al., 2010].

Важнейшими этапами на пути к персонализированному лечению РМЖ стало внедрение в клиническую практику исследования статуса рецепторов половых стероидных гормонов (РЭ и РП) для определения показаний к назначению эндокринной терапии в 70-х г.г. [Бассалык JI.C. и соавт., 1987; Давыдов М.И. и соавт., 2009; Корман Д.Б., 2010] и обязательная оценка экспрессии мембранного рецептора Her-2/neu или амплификации его гена при решении вопроса о применении Герцептина, вошедшая в практику вместе с внедрением этого первого таргетного препарата для лечения РМЖ в конце 20 века [Герштейн Е.С. и соавт., 2010; Luftner D. et al., 2003; Goldhirsch A. et al., 2005; Plosker G.L. et al., 2006; Engel R.H. et al., 2007].

Тем не менее, остается еще очень много нерешенных вопросов в этой области науки и практики, в связи с чем в последнее время возрастает роль поиска и исследования новых биологических маркеров для определения тактики лекарственной терапии и прогноза течения РМЖ [Кушлинский Н.Е. и соавт., 2009; Chen W.Y. et al., 2009].

Одним из перспективных молекулярных маркеров РМЖ, по данным экспериментальных исследований, является полифункциональный ядерный транскрипционный фактор NF-кВ, играющий важную роль в клеточной пролиферации, апоптозе, воспалительной и аутоиммунной реакциях, регулируя экспрессию генов, вовлеченных в эти процессы [Гущин И.С., 2010; Biswas D.K. et al., 2000; Baldwin A.S. et al., 2001]. NF-кВ представляет собой гетеродимерный комплекс белков, которые в большинстве покоящихся клеток неактивны и находятся в цитоплазме в комплексе со специфическими ингибиторами - 1кВ [Haffner М.С. et al., 2006; Kim H.J. et al., 2006]. В большинстве нормальных клеток NF-kB/IkB комплексы находятся в цитоплазме в транскрипционно неактивном состоянии и активируются только при поступлении в клетку соответствующего регуляторного стимула. ДНК-связы-вающая активность NF-кВ стимулируется в ответ на целый ряд экзогенных стимулов, причем этот процесс не зависит от синтеза белка de novo.

Показано, что гиперактивация NF-кВ является одной из причин резистентности РМЖ к антиэстрогенам [Лобанова Ю.С. и соавт., 2007; Zhou Y. et al., 2007], химиопрепаратам [Hernandez-Vargas H. et al., 2007] и лучевой терапии [Baldwin A.S. et al., 2001; Haffner M.C. et al., 2006]. Эта активация не только защищает клетки от апоптоза, но также увеличивает их пролифератив-ную активность, инвазивный, метастатический и ангиогенный потенциал [Bhat-Nakshatri P. et al., 2002; Sliva D. et al., 2002; Helbig G. et al., 2003; Zhou Y. et al., 2005].

Предполагается, что создание противоопухолевых агентов, блокирующих NF-кВ сигнальный путь, позволит повысить чувствительность клеток к существующим видам терапии, а также может иметь самостоятельное терапевтическое значение. В настоящее время известно несколько десятков экзогенных и эндогенных агентов, способных подавить активность NF-кВ, большинство из которых пока отличаются низкой специфичностью. В любом случае, для успешного использования подобных препаратов потребуется индивидуальная оценка статуса NF-кВ и степени его активации в опухоли в сочетании с другими молекулярными маркерами [Plosker G.L. et al., 2006].

В связи с этим, нами была поставлена задача апробировать возможность использования при изучении клинического материала недавно разработанные количественные тест-системы для определения содержания и ДНК-связывающей активности NF-кВ и изучить особенности и соотношение этих показателей в различных клинико-морфологических подгруппах больных РМЖ.

Идентифицировано пять различных белков семейства NF-кВ, содержащих общий ДРПС-связывающий домен, однако основной формой существования NF-кВ в большинстве клеток млекопитающих является гетеродимер p50/RelA(p65) [Гущин И.С., 2010]. Именно эти две ключевые субъединицы и были исследованы нами в ядерно-цитоплазматических экстрактах опухолевой и гистологически неизмененной ткани больных РМЖ, проходивших обследование и лечение в хирургическом отделении опухолей молочных желез РШИ клинической онкологии Российского онкологического научного центра им. Н.Н.Блохина РАМН в период с ноября 2008 г. по март 2010 г.

В процессе исследования удалось определить суммарное содержание и ДЬЖ-связывающую активность р65 субъединицы NF-кВ в тканях 119 и 99 больных, соответственно. У 43 больных была измерена также ДНК-связыва-ющая активность р50 субъединицы.

Особый интерес представляло определение NF-KBp65 или NF-KBp50 с помощью оригинальных иммуноферментных систем серии «TransAM™» (Active Motif, США), в которых на плашки для первоначальной экстракции определяемого белка из клеточного лизата нанесены не специфические антитела, а оли гону клеотид, содержащий консесусную последовательность 5'-GGGACTTTCC-3', специфичную для ядерного связывания всех субъединиц NF-кВ. После этого проводили стандартное прямое иммуноферментное определение количества связавшегося белка с использованием специфических антител к р65 или р50, соответственно. Результаты этих определений, рассчитанные в условных единицах в пересчете на 1 мг клеточного белка, мы обозначили как «ДНК-связывающую активность» NF-кВ, в отличие от суммарного содержания NF-icBp65, оцененного классическим ELISA тестом.

На первом этапе анализа оценили соотношение уровня исследованных маркеров в опухолях и гистологически неизмененных тканях молочной железы и их возможные взаимосвязи между собой. Измеримые количества общего белка NF-KBp65 были обнаружены в 118 образцах опухолей (99%) и в 96 образцах (81%о) гистологически неизмененной ткани молочной железы. Содержание NF-KBp65 в опухоли было достоверно выше, чем в окружающей ткани у 86%о больных РМЖ (р<0,0001). У 99% больных выявлена измеримая ДНК-связывающая активность NF-KBp65 в опухоли и у 81%о - в окружающей опухоль ткани, причем этот показатель был достоверно повышен в опухоли по сравнению с окружающей тканью в 97% случаев (р<0,0001). Содержание и ДНК-связывающая активность NF-KBp65 в опухоли не коррелировали с соответствующими показателями в образцах неизмененной ткани молочной железы. В то же время, как в опухоли, так и в нормальной ткани отмечена слабая, но достоверная положительная корреляционная взаимосвязь между общим уровнем белка NF-KBp65 и его ДНК-связывающей активностью (R=0,31, р<0,01 и R=0,26, р<0,05 соответственно).

Таким образом, практически во всех РМЖ наблюдали усиление ДНК-связывающей активности NF-KBp65, в большинстве случаев сопровождавшееся также увеличением количества общего белка этой субъединицы. Однако увеличение активности NF-KBp65 носило более выраженный характер, чем увеличение количества общего белка: ДНК-связывающая активность превышала верхнюю 95%> границу нормальных значений (118 Ед/мг белка) в 81% случаев, а содержание общего белка - только в 18%о (95% граница нормы

26,7 нг/мг белка). Это наблюдение соответствует представлению об относительной независимости активации транскрипционного фактора NF-кВ в опухолях от синтеза этого белка de novo.

В 97% опухолей и во всех образцах неизмененной молочной железы выявлена также ДНК-связывающая активность NF-KBp50. Активность этой субъединицы также была повышена в опухолях 91% больных РМЖ (р<0,0001). Так же, как и для NP-KBp65, ДНК-связывающая активность NF-кВр50 в опухоли не коррелировала с соответствующими показателями в неизмененной ткани молочной железы. Отмечена высоко достоверная (р<0,0001) положительная корреляционная взаимосвязь ДНК-связывающих активностей двух субъединиц NF-кВ как в опухоли (R=0,80), так и в окружающей ткани (R=0,88) молочной железы. При этом активность р50 в обеих тканях была достоверно выше (р<0,0001), чем активность р65. В опухоли превышение составило от 10 до 574 раз (медиана - 77 раз). Это наблюдение согласуется с данными Y.Zhou et al. (2005) - единственного исследования, выполненного тем же количественным методом определения ДНК-связывающей активности NF-кВ, который был использован в настоящей работе.

Следует отметить, что по данным Y.Zhou et al. (2005), высокий уровень ДНК-связывающей активности NF-кВ, в первую очередь, его р50 субъединицы, у больных РМЖ с относительно низким (21-87 фмоль/мг белка) содержанием РЭ в опухоли, получавших адъювантно тамоксифен, приводит к более раннему прогрессированию заболевания. Таким образом, повышенный уровень ДНК-связывающей активности NF-кВ является потенциальным маркером гормонорезистентности РЭ-положительного РМЖ.

В целом, первый этап статистического анализа продемонстрировал координированное увеличение ДНК-связывающей активности р65 и р50 субъединиц ядерного транскрипционного фактора NF-кВ по сравнению с окружающей гистологически неизмененной тканью молочной железы в опухолях более 90% больных РМЖ. В случае NF-icBp65 это изменение было в определенной степени связано с увеличением экспрессии суммарного белка этой субъединицы.

Далее была проанализирована взаимосвязь исследованных показателей с клинико-морфологическими особенностями РМЖ. На этой стадии помимо основных параметров, проведен анализ еще 3 расчетных показателей: увеличение содержания белка р65 и увеличение его активности в опухоли по сравнению с окружающей тканью, а также соотношение активности и общего содержания (удельную активность) NF-icBp65 в опухоли.

Обследованная группа из 119 больных РМЖ имела достаточно вариабельный возрастной состав (от 23 до 77 лет; медиана составила 54 года). Репродуктивная функция была сохранена у 37 больных, 18 находились в состоянии пременопаузы, и 64 женщины были в постменопаузе различной длительности. Больные распределялись по стадиям заболевания следующим образом: 1ГА - 37, IIB - 28, по 20 больных I и 111А стадии, и у 14 больных был распространенный процесс ШВ - II1C стадии.

По гистологическому строению 95 опухолей молочной железы представляли собой протоковый инфильтративный рак, 14 - дольковый ин-фильтративный рак. Большинство опухолей имели II, 28 - 1Г1, и 7 -1 степень злокачественности. Таким образом, размер и состав обследованной группы позволяли провести достаточно детальный и статистически значимый анализ, по крайней мере, для двух показателей - содержания и ДНК-связывающей активности р65 субъединицы NF-kB.

Достоверной взаимосвязи с такими клинико-морфологическими факторами как стадия заболевания, размер (индекс Т) и гистологическое строение опухоли, степень поражения лимфатических узлов (индекс N) ни для одного из показателей не обнаружено. Однако выявлены тенденции к увеличению содержания и/или активности NF-KBp65 при большей местной распространенности процесса, увеличении количества пораженных лимфатических узлов, локализации опухоли в нижне-грудном квадранте молочной железы, а также у больных старшей возрастной группы, находящихся в постменопаузе. Важно, что содержание общего белка NF-KBp65 в низкодифференцированных опухолях III степени злокачественности было достоверно выше, чем в уме-реннодифференцированных опухолях II степени злокачественности (р<0,05). Для NF-KBp50 значимой взаимосвязи с классическими клиническими и морфологическими факторами прогноза РМЖ не выявлено.

Отсутствие четкой взаимосвязи экспрессии и активности ключевых субъединиц NF-кВ с большинством клинически значимых прогностических факторов, наряду со значительным и практически универсальным увеличением всех исследованных показателей в ткани РМЖ по сравнению с окружающей неизмененной молочной железой, свидетельствует о том, что при дальнейшем наблюдении за обследованными больными, данные биомаркеры смогут приобрести значение в качестве независимых прогностических факторов, определяющих как течение заболевания в целом, так и его чувствительность к отдельным видам лечения.

Учитывая роль активации NF-кВ-сигнального пути в регуляции гормональной и лекарственной чувствительности РМЖ, особый интерес представляла оценка взаимосвязи экспрессии и активности NF-кВ с рецепторным статусом опухоли. Наиболее детальный анализ был проведен для показателей содержания и ДНК-связывающей активности NF-кВрбЗ, поскольку они были измерены у достаточно большого числа больных, позволившего сформировать подгруппы с различными сочетаниями трех рецепторов (РЭ, РП и H£R2/neu). Выраженных различий в зависимости от статуса рецепторов половых стероидных гормонов ни для одного из показателей не обнаружено. Однако можно отметить значимую тенденцию к увеличению содержания и ДНК-связывающей активности NF-кВрбЗ в РЭ-отрицательных опухолях молочной железы по сравнению с РЭ-положительными. В то же время достоверное увеличение содержания общего белка NF-KBp65 (р<0,01) и его изменения по отношению к норме (р<0,01), а также снижение удельной активности МР-кВр65 (р<0,05) наблюдали в НЕ112-положительных опухолях по сравнению с НЕК2-отрицательными.

При анализе сочетаний из трех видов рецепторов выявлены следующие закономерности: 1) значительное снижение удельной активности №-кВр65 в РЭ~РП"НЕ112+ опухолях, высоко достоверное по сравнению с РЭ~РП"НЕК2" (р<0,01); 2) наибольшее увеличение ДНК-связывающей активности кВр65 по сравнению с окружающей тканью в опухолях, отрицательных по трем видам рецепторов (р<0,05 по отношению к РЭ+РП+НЕК2~ опухолям); 3) наконец, при сравнении опухолей с двумя классическими сочетаниями рецепторов - РЭ~РП~НЕК2+ и РЭ+РП+НЕ]Я2~ - обнаружено достоверное увеличение суммарного содержания и прироста общего белка ЫР-кВр65 в первой подгруппе по сравнению со второй (р<0,05). Значимых взаимосвязей с рецептор-ным статусом РМЖ для ДНК-связывающей активности ЫР-кВр50 не обнаружено, однако это может быть связано с меньшим числом больных, обследованных по данному показателю.

Таким образом, по данным представленного исследования, в НЕ112-по-ложительных опухолях молочной железы происходит увеличение общей экспрессии белка ЫР-кВр65, не зависящее от статуса рецепторов половых стероидных гормонов и не сопровождается увеличением ДНК-связывающей активности. В то же время, удельная ДНК-связывающая активность МР-кВр65 наиболее высока в опухолях с так называемым «тройным отрицательным» рецепторным статусом, не поддающихся ни эндокринной, ни молекулярно-направленной терапии, поэтому возможно, что именно эта подгруппа больных РМЖ получит преимущество от использования селективных ингибиторов №-кВ.

Исходя из проведенного анализа, можно констатировать, что настоящее исследование дает в руки врача-онколога еще один шанс для оценки эффективности лечения и прогноза у каждого конкретного пациента.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Платова, Алевтина Михайловна, 2012 год

1. Абелев, Г.И. На пути к пониманию природы рака / Г.И.Абелев, Т.Д. Эрайзер // Биохимия. 2008. - Т. 73, №5. - С.605-617.

2. Ашрафян, Л.А. Опухоли репродуктивных органов (этиология и патогенез) / Л.А. Ашрафян, В.И. Киселев. М.: Издательство «Династия», 2007.- 208с.

3. Бассалык, Л.С. Рецепторы стероидных гормонов в опухолях человека/ Под ред. Л.С. Бассалык. М.: Медицина, 1987.

4. Берштейн, Л.М. Гормоны, возраст и рак / под ред. Л.М. Берштейн. -С.-Пб.: Наука, 2005.- 254с.

5. Божок, A.A. Факторы прогноза при раке молочной железы / A.A. Божок, В.Ф. Семиглазов, В.В. Семиглазов, A.C. Арзуманов, А.Е. Клетсель // Современная онкология. 2005. - Т. 7, №1. - С.4-9.

6. Гарин, A.M. Эндокринная терапия и гормонозависимые опухоли / A.M. Гарин. М.: Триада, 2005. - 238с.

7. Георгиев, Г.П. Молекулярные подходы к терапии рака / Г.П. Георгиев // I Международной конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность» (Москва, 26-28 октября 2004г.). М., 2004. - С.52-53.

8. Герштейн, Е.С. Клинические перспективы исследования системы активации плазминогена при раке молочной железы / Е.С.Герштейн, Н.Е. Кушлинский // Вестник РАМН. 1999. - №8. - С.58-61.

9. Герштейн, Е.С. Тканевые маркеры как факторы прогноза при раке молочной железы / Е.С.Герштейн, Н.Е. Кушлинский // Практическая онкология. 2002. - Т. 3, №1. - С.38-44.

10. Герштейн, Е.С. Рецепторы семейства с-егЬВ как мишени молекулярно-направленной противоопухолевой терапии: достижения, проблемы, перспективы / Е.С. Герштейн, Н.Е. Кушлинский, М.И. Давыдов // Молекулярная медицина. 2010. - №4. - С.5-10.

11. Герштейн, Е.С. Клиническая роль системы активации плазминогена в опухолях человека / Е.С. Герштейн, Ш.Ж. Талаева, М.Н. Сандыбаев, Н.Е. Кушлинский // Молекулярная медицина. 2007. - №1. - С.4-8.

12. Гущин, И.С. Обратные агонисты HI-рецепторов как перспективные противоаллергические средства / И.С. Гущин // Химио-фармацевтиче-ский журнал. 2010. - Т. 44, №1. - С.3-8.

13. Давыдов, М.И. Статистика злокачественных новообразований в России и странах СНГ в 2007г. / Под ред. М.И. Давыдов, Е.М. Аксель // Вестник РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН. 2009. - Т. 20, №3 (Приложение 1). -С.1-158.

14. Давыдов, М.И. Практическая маммология / Под ред. М.И.Давыдов, В.П. Летягин. М.: Практическая медицина, 2007. - 272с.

15. Жуков, Н.В. Целевая терапия в лечении солидных опухолей: практика противоречит теории / Н.В. Жуков, С.А. Тюляндин // Биохимия. 2008. -Т. 73, №5. - С.751-768.

16. Загрекова, Е.И. Лекарственное лечение рака молочной железы / Е.И.Загрекова, A.A. Мещеряков // Русский медицинский журнал. -2002. Т. 10, №14. - С.605-608.

17. Имянитов, E.H. Молекулярная диагностика в онкологии / E.H. Имяни-тов // Мол. Биол. 2008. - Т. 42, №4. - С.772-785.

18. Имянитов, E.H. Молекулярная онкология: клинические аспекты / E.H. Имянитов, К.П. Хансон. С.-Пб.: Издательский дом СПбМАПО, 2007. -211с.

19. Ким, Е.А. Экспрессия VEGF и VEGFR2 в опухолях в процессе неоадъ-юваитиого лечения больных раком молочной железы / Е.А. Ким, Е.С. Герштейн, И.В. Высоцкая, Н.Е. Кушлинский // Бюлл. Эксп. Биол. Мед. 2008а. - Т. 145, №2. - с.206-209.

20. Ким, Е.А. Влияние неоадъювантной терапии на уровни VEGF и VEGFR-2 в опухолях и сыворотке крови больных раком молочной железы / Е.А. Ким, Е.С. Герштейн, A.M. Щербаков, И.В. Высоцкая,

21. B.П. Летягин, Н.Е. Кушлинский // Вопр. Онкологии. 20086. - Т. 54, №3. - С.287-293.

22. Киселев, Ф.Л. Новые подходы в молекулярной диагностике рака / Ф.Л. Киселев // II Международная конференция «Молекулярная медицина и биобезопасность» (Москва, 20-21 октября 2005г.). М., 2005.1. C.156.

23. Копнин, Б.П. Мишени действия онкогенов и опухолевых супрессоров: ключ к пониманию базовых механизмов канцерогенеза / Б.П. Копнин // Биохимия. 2000. - Т. 65. - С.5-33.

24. Корман, Д.Б. Основы противоопухолевой химиотерапии / Д.Б. Кор-ман. -М.: Практическая медицина, 2006. 512с.

25. Корман Д.Б. Эндокринная терапия злокачественных опухолей / Д.Б. Корман. -М.: Практическая медицина, 2010. -400с.

26. Кушлинский, Н.Е. Биологические маркеры опухолей в клинике достижения, проблемы, перспективы / Н.Е. Кушлинский, Е.С. Герштейн // Молекулярная медицина. - 2008. - №3. - С.48-55.

27. Кушлинский, Н.Е. Рецепторы эпидермального фактора роста при раке молочной железы: от эксперимента к клинике // Н.Е. Кушлинский, Е.С. Герштейн // Бюлл. Эксп. Биол. Мед. 1998. - Т. 129. - С.485-496.

28. Кушлинский, Н.Е. Роль фактора роста эндотелия сосудов при раке молочной железы / Н.Е. Кушлинский, Е.С. Герштейн // Бюлл. Экспер. Биол. Мед. 2002. - Т. 133, №6. - С.604-612.

29. Кушлинский, Н.Е. Современные возможности молекулярно-биохимиче-ских методов оценки биологического «поведения» рака молочной железы // Н.Е. Кушлинский, Е.С. Герштейн // Вестник РАМН. 2001. — №9.-С.65-70.

30. Кушлинский, Н.Е. Молекулярные маркеры опухолей / Н.Е. Кушлинский, Е.С. Герштейн, Л .К. Овчинникова, М.А. Дигаева // Бюлл. Экспер. Биол. Мед. 2009. - Т. 148, №8. - С.208-217.

31. Лихтенштейн, A.B. Канцерогенез: эволюция представлений / A.B. Лихтенштейн // Биохимия. -2009. Т. 74. - С.437-447.

32. Личиницер, М.Р. Рациональная фармакотерапия рака молочной железы / М.Р. Личиницер, И.П. Ганыиина // Здравоохр. и мед. техн. 2004. -№9. - С.38-40.

33. Лобанова, Ю.С. Эстроген-зависимый апоптоз в клетках рака молочной железы: роль сигнального пути, регулируемого NF-kB / Ю.С.Лобанова, A.M. Щербаков, В.А. Шатская, М.А. Красильников// Биохимия.-2007.-Т. 72, №3. С.392-401.

34. Луценко, C.B. Молекулярные механизмы ангиогенеза в физиологических и патологических процесса: Введение в молекулярную медицину / C.B. Луценко, С.М. Киселев, Н.Б. Фельдман, С.Е. Северин; ред. М.А.Пальцев. М.: Медицина, 2004. - С.446-495.

35. Медведев, Ф.В. Интраоперационная лучевая терапия в комбинированном лечении рака молочной железы / Ф.В. Медведев, И.А. Гулидов, И.А. Смирнова // Радиация и риск. 2009. - Т. 18, №2. - С.81-88.

36. Мирошниченко, И.И. Биомаркеры в современной медико-биологической практике / И.И. Мирошниченко, С.Н. Птицина // Биомедицинская химия. 2009. - Т. 55. - Вып.4. - С.425-440.

37. Моисеенко, В.М. «Естественная история» роста рака молочной железы / В.М. Моисеенко// Практическая онкология. 2002. - Т. 3, №1. - С.6-14.

38. Пальцев, М.А. Введение в молекулярную медицину / М.А. Пальцев. -М.: Медицина, 2004. 496с.

39. Переводчикова, Н.И. Место химиотерапии в системе лечения онкологических больных и выбор терапевтической тактики / Н.И. Переводчикова // Современная онкология. 2001. - Т. 3, №2. - С.66-69.

40. Петров, С.В. Руководство по иммуногистохимической диагностике опухолей человека / С.В. Петров; Под ред. Н.Т. Райхлин. 3-е издание. -Казань: Титул, 2004. - 456с.

41. Попов, Л.С. Генетически программированная смерть клеток (апоптоз) / Л.С. Попов, Л.И. Корочкин // Генетика. 2004. - Т.40, №2. - С. 149-166.

42. Рукерт, С. Моноклональные антитела в лечении рака молочной железы: транстузумаб / С. Рукерт, И. Руел, С. Калерт, Дж. Конекни, М. Унхт //

43. Русский медицинский журнал (онкология). 2005. - Т. 13, №23 (247). -С.1557-1566.

44. Семиглазов, В.Ф. Опухоли молочной железы (лечение и профилактика) / В.Ф. Семиглазов, К.Ш. Нургазиев, A.C. Арзуманов // Алматы. 2001.

45. Сергеева, Н.С. Опухолеассоциированные маркеры в скрининговых программах, направленных на активное выявление рака яичников: реальность, проблемы и перспективы / Н.С. Сергеева, Н.В. Маршутина // Практическая онкология. 2010. - Т. 11, №2. - С. 110-119.

46. Стенина, М.Б. Рак молочной железы: некоторые важные научные события и выводы последних лет / М.Б. Стенина // Практическая онкология. 2005. - Т. 6, №1.-С.26-32.

47. Фомин, Д.К. Электрофизиологические и радионуклидные методы диагностики в выявлении патологических состояний молочных желез / Д.К. Фомин, A.A. Назаров, О.Э. Як обе // Урал. Мед. Журн. 2009. -№10. -С.190-193.

48. Чиссов, В.И. Онкология. Национальное руководство / В.И. Чиссов; под ред. М.И. Давыдов. М.: ГЕОТАР Медиа, 2008.

49. Щербаков, A.M. Активированная протеинкиназа В при раке молочной железы / A.M. Щербаков, Е.С. Герштейн, О.А. Анурова, Н.Е. Ку-шлинский // Бюлл. Эксп. Биол. Мед. 2005. - Т. 139, №5. - С.570-572.

50. Abel, G.-G. Is cancer a genetic program with an unknown function? / G.-G. Abel // Med. Hypotheses. 2009. - Vol.72, N.4. - P.407-408.

51. Adli, M. IKfC-i/lKKepsilon controls constitutive, cancer cell-associated NF-kappaB activity via regulation of Ser-536 p65/RelA phosphorylation / M. Adli, A.S. Baldwin // J. Biol. Chem. 2006. - Vol.281. - P.26976-26984.

52. Aebi, S. Primery breast cancer: ESMO clinical practice guidelines for diagnosis, treatment and follow-up / S. Aebi, T. Davidson, G. Gruber, M. Cas-tiglione // Annals of Oncology. 2010. - Vol.21 (Suppl. 5).-P.9-14.

53. Ahmed, K.M. HER-2 and NF-kappaB as the targets for therapy-resistant breast cancer / K.M. Ahmed, N. Cao, J.J. Li // Anticancer Res. 2007. -Vol.26, N.6B. - P.4235-4243.

54. Arteaga, C.L. Chellenges in the development of anti-epidermal growth factor receptor therapies in breast cancer / C.L. Arteaga, C.I. Truica // Semin. Oncol. 2004. - Vol.31 (1 Suppl. 3). - P.3-8.

55. Baldwin, A.S. Control of oncogenesis and cancer therapy resistance by the transcription factor NF-kappaB /A.S. Baldwin // J. Clin. Invest. 2001. -Vol.107, N.3.-P.241-246.

56. Baselga, J. New treatment concepts in breast cancer / J. Baselga; eds. J.-J. Body // Seminars in oncology. 2004. - Vol.31, N.5 (Suppl. 10). - 9 IP.

57. Berns, P.M.J.J. Prognosis and prediction in breast cancer: from forest plots to pathways / P.M.J.J. Berns, J.W. Martens, M.P.H.M. Jansen, J.A. Foekense // Erasmus MC Oncology Magazine. 2008. - Issue 1. - P. 15-18.

58. Bhat-Nakshatri, P. Identification of signal transduction pathways involved in constitutive NF-kappaB activation in breast cancer cells / P.Bhat-Nakshatri, C.J. Sweeney, H. Nakshatri // Oncogene. 2002. - Vol.21, N. 13. - P.2066-2078.

59. Biswas, D.K. Linkage between EGFR family receptors and nuclear factor kappaB (NF-kappaB) signaling in breast cancer / D.K. Biswas, J.D. Iglehart // J. Cell Physiol. 2006. - Vol.209, N.3. - P.645-652.

60. Bornstein, P. Matrisellular proteins: an overview / P. Bornstein // J. Cell Communication Signal. 2009. - Vol.3 (3-3). - P. 163-165.

61. Cao, Xi-Xi. RACK1: a superior independent predictor for poor clinical outcome in breast cancer / Xi-Xi. Cao, J.-D. Xu, X.-L. Liu, J.-W. Xu, W.-J. Wang, Q.-Q. Li, Qi. Chen, Zu-De. Xu, X.-P. Liu // Int. J. Cancer. 2009. -Vol.127, N.5. -P.l 172-1179.

62. Сао, У. NF-kappaB in mammary gland development and breast cancer / Y.-Cao, M. Karin // J. Mammary Gland. Biol. Neoplasia. 2003.- Vol.8, N.2. -P.215-223.

63. Cardoso, F. Targeting the ubiquitin-proteasome pathway in breast cancer / F.Cardoso, J.S. Ross, M.J. Picart, C. Sotiriou, V. Durbecq // Clin. Breast Cancer. 2004. - Vol.5. - P. 148-157.

64. Chen, F. Endogenous inhibitors of nuclear factor-lcappaB, an opportunity for cancer control / F. Chen // Cancer Res. 2004. - Vol.64, N.22. - P.8135-8138.

65. Chen, W.Y. Breast cancer: Dana-Farber Cancer Institute Handbook /Eds. W.Y.Chen, A.Wardley; редактор серии Arthur T.Skarin. Перевод иа русский язык и оформление русского издания ООО «Рид Элсивер». 2009. - 205с.

66. Chiodoni, С. Matricellular proteins: from homeostasis to inflammation, cancer, and metastasis / C. Chiodoni, M.P. Colombo, S. Sangaletti // Cancer Metastasis Rev. 2010. - Vol.29, N.2. - P.295-307.

67. Clarkson, R.W. NF-kappaB and apoptosis in mammary epithelial cells / R.W. Clarkson, C.J. Watson // J. Mammary Gland. Biol. Neoplasia. -1999.-Vol.4, N.2. -P.165-175.

68. Cogswell, P.C. Selective activation of NF-kappa B subunits in human breast cancer: potential roles for NF-kappa B2/p52 and for Bcl-3 / P.C. Cogswell, D.C. Guttridge, W.K. Funkhouser, A.S.Jr. Baldwin // Oncogene. 2000. -Vol.19, N.9. - PI 123-1131.

69. Collee, J.M. Clinical genetic aspects of breast cancer / J.M. Collee, R.A.Oldenburg // Erasmus MC Oncology Magazine. 2008.- Issue 1.-P.25-27.

70. Connelly, L. A transgenic model reveals important roles for the NF-kappa B alternative pathway (pl00/p52) in mammary development and links to tum-origenesis / L. Connelly, C. Robinson-Benion, M. Chont, L. Saint-Jean,

71. H.Li, V.V. Polosukhin, T.S. Blackwell, F.E. Yull // J. Biol. Chem. 287,-Vol.282. - P.10028-10035.

72. Crnic, I. Novel technologies and recent advances in metastasis research /

73. Crnic, G. Christofori // Int. J. Dev. Biol. 2004. - Vol.48, N.5-6. - P.573-581.

74. Dan, H.C. Akt-dependent regulation of NF-{kappa}B is controlled by mTOR and Raptor in association with IKK / H.C. Dan, M.J. Cooper, P.C. Cogswell, J.A. Duncan, J.P. Ting, A.S. Baldwin // Genes Dev. 2008. -Vol.22, N. 11.-P. 1490-1500.

75. De Laurentiis, M. Targeting HER2 as a therapeutic strategy for breast cancer: a paradigmatic shift of drug development in oncology / M. De Laurentiis, G. Cancello, L. Zinno et al. // Ann. Oncol. 2005. - Vol.16, Sup-pl.4. -P.7-13.

76. DeGraffenried, L.A. NF-kappa B inhibition markedly enhances sensitivity of resistant breast cancer tumor cells to tamoxifen / L.A. DeGraffenried,

77. B.Chandrasekar, W.E. Friedrichs, E. Donzis, J. Silva, M. Hidalgo, J.W.Free-man, G.R. Weiss // Ann Oncol. 2004. - Vol.15, N.6. - P.885-890.

78. C. Baum, A.D. Elias, H.J. Burstein // ASCO Annu Meeting Proc. -2006:578.

79. Dietel, M. Tissue biomarkers for prognosis and treatment stratification / M. Dietel // Tumor Biology. 2010. - Vol.31, Suppl. 1. - P.8.

80. Dookeran, K.A. p53 as a marker of prognosis in African-American women with breast cancer / K.A. Dookeran, J.J. Dignam, K. Ferrer, M. Sekosan, W. McCaskill-Stevens, S. Gehlert // Ann. Surg. Oncol. 2010,- Vol.17, N.5. - P.1398-1405.

81. Duffy, M.J. Evidence for the clinical use of tumour markers / M.J. Duffy // Ann. Clin. Biochem.-2004.-Vol.41.-P.370-377.

82. Duffy, M.J. Predictive markers in breast and other cancers: a review / M.J. Duffy // Clinical Chemistry. 2005. - Vol.51, N.3. - P.494-503.

83. Duffy, M.J. The urokinase plasminogen activator system: role in malignancy / M.J. Duffy // Curr. Pharm. Des. 2004. - Vol. 10, N. 1. - P.39-49.

84. Duffy, M.J. The urokinase plasminogen activator system: a rich source of tumour markers for the individualised management of patients with cancer / M.J. Duffy, C. Duggan // Clin. Biochem. 2004. Vol. 37, N 7. P. 541-548.

85. Engel, R.H. HER2-positive breast cancer: current and future treatment strategies / R.H. Engel, V.G. Kaklamani // Drugs. 2007. - Vol.67, N.9. -P. 1329-1341.

86. Ferrara, N. The biology of VEGF and its receptors / N. Ferrara, H.P. Gerber, J. LeCouter // Nat. Med. 2003. - Vol.9, N.6. - P.669-676.

87. Gasparini, G. Therapy of breast cancer with molecular targeting agents / G.-Gasparini, R. Longo, F. Torino, A. Morabito // Ann. Oncol. 2005. - Vol.16 (Suppl. 4). - P.28-36.

88. Gershtein, E.S. Phosphatidylinositol 3-kinase expression in human breast cancer / E.S. Gershtein, V.A. Shatskaya, N.E. Kushlinsky et al. // Clin. Chim. Acta. 1999. - Vol.287. - P.59-67.

89. Gershtein, E.S. Phospatidylinositol 3-kinase expression in human breast cancer / E.S. Gershtein, V.A. Shatskaya, V.D. Ermilova et al. // Clin. Chim. Acta. 1999.-Vol.287, N.l-2.-P.59-67.

90. Glynn, R.W. Topoisomerase 2 alpha and the case for individualized breast cancer therapy / R.W. Glynn, N. Miller, M.C. Whelan, M.J. Kerin // Ann. Surg. Oncol. 2010. - Vol.17, N.5. - P. 1392-1397.

91. Goldhirsch, A.Panel Members Meeting Highlights: International Expert Consensus on the Primary Therapy of Early Breast Cancer 2005 / A. Goldhirsch, J.H. Glick, R.D. Gelber // Ann. Oncol. 2005. - Vol.16. - P. 15691583.

92. Haffner, M.C. Exploiting our knowledge of NF-kappaB signaling for the treatment of mammary cancer / M.C. Haffner, C. Berlato, W. Doppler // J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 2006. - Vol.11, N.l. -P.63-73.

93. Harbeck, N. Criteria for treatment decisions in early breast cancer / N. Harbeck // Tumor Biology. 2010. - Vol.31, Suppl. 1. - P.8-9.

94. Imyanitov, E.N. Mechanisms of breast cancer / E.N. Imyanitov, K.P. Hanson // В материалах II Международной ежегодной конференции «Проблемы диагностики и лечения рака молочной железы» (Санкт-Петербург, 22-24 июня 2005г.). С.-Пб., 2005. - С.20-29.

95. Jung, A. Testing of predictive biomarkers in molecular pathology for targeted / A. Jung, T. Kirchner // Tumor Biology. 2010. - Vol.31, Suppl.l. -P.25.

96. Kim, H.J. NF-kappaB and IKK as therapeutic targets in cancer / H.J. Kim, N. Hawke, A.S. Baldwin // Cell Death Differ. 2006. - Vol.13, N.5. - P.738-747.

97. Lee-Hoeflich, S.T. A central role for HER3 in HER2-amplified breast cancer: implications for targeted therapy / S.T. Lee-Hoeflich, L. Crocker, E. Yao et al. // Cancer Res. 2008. - Vol.68, N.14. - P.5878-5887.

98. Li, Ch. RNAi-mediated downregulation of uPAR synergizes with targeting of FIER2 through the ERK pathway in breast cancer cells / Ch. Li, Sh. Cao, Zh. Liu, X. Ye, L. Chen, S. Meng // Int. J. Cancer. 2010. - Vol.127, N.7. -P. 1507-1516.

99. Liu, C. Activation and prognostic significance of AKT, NF-kappaB and STAT3 in breast cancer with lymph node metastasis and estrogen receptor expression / C. Liu, S. Zhou, C.S. Ke, N.P. Li, R.L. Wu // Ai Zheng. -2007. Vol.26, N.9. - P.929-936.

100. Liu, S. Targeting breast cancer stem cells / S. Liu, M.S. Wicha // J. Clin. Oncol. -2010. -Vol.28, N.25. P.4006-4012.

101. Look, M.P. Clinical relevance of the urokinase plasminogen activator system in breast cancer / M.P. Look, J.A. Foekens // APMIS. 1999. - Vol.107. -P.150-159.

102. Look, M.P. Pooled analysis of prognostic impact of tumor biological factors uPA and PAI-1 in 8377 breast cancer patients / M.P. Look, W.L.J, van Putten, M.J. Duffy et al. // J. Natl. Cancer Instit. 2002. - Vol.94. - P. 116128.

103. Luftner, D. Serum HER-2/neu in the management of breast cancer patients / D. Luftner, C. Luke, K. Possinger // Clin. Biochem. 2003. - Vol.36, N.4. -P.233-240.

104. Mancl, E.E. Clinical and economic value of screening for Kras mutations as predictors of response to epidermal growth factor receptor inhibitors / E.E.

105. Mancl, J.M. Kolesar, L.C. Vermeulen // Am. J. Hlth. Syst. Pharm. 2009. -Vol.66, N.23. - P.2105-2112.

106. Markman, B. Status of PI3K inhibition and biomarker development in cancer therapeutics / B. Markman, F. Atzori, J. Perez-Garcia, J. Tabernero, J. Baselga //Annals of Oncology. 2010. - Vol.21, N.4. - P.683-691.

107. Mass, R.D. The HER receptor family: a rich target for therapeutic development / R.D. Mass // Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. 2004,- Vol.58.-P.932-940.

108. Mayo, M.W. The transcription factor NF-kappaB: control of oncogenesis and cancer therapy resistance / M.W. Mayo, A.S. Baldwin // Biochim. Bio-phys. Acta. 2000. - Vol.1470, N.2. - P.55-62.

109. Mccarthy, K. The expression and function of IGFBP-3 in normal and malignant breast tissue / K. Mccarthy, C. Laban, C.J. Mcvittie, W. Ogunkolade, S. Khalaf, S. Bustin, R. Carpenter, P.J. Jenkins // Anticancer Res. 2009. -Vol.29, N. 10.-P.3785-3790.

110. McGowan, P.M. Matrix metalloproteinase expression and outcome in patients with breast cancer: analysis of a published database / P.M. McGowan, M.J. Duffy // Ann. Oncol. 2008. - Vol. 19. - P. 1566-1572.

111. Michael, A. Emergence of potential biomarkers of response to anti-an-giogenic anti-tumour agents / A. Michael, K. Relph, H. Pandha // Int. J. Cancer. 2010.-Vol.127, N.6. - P. 1251-125 8.

112. Moghal, N. Multiple positive and negative regulators of signaling by the EGF-receptor / N. Moghal, P.W. Sternberg // Current Opinion on Cell Biology. 1999. - Vol. 11. - P. 190-196.

113. Murray, S. Trastuzumab (Herceptin) and HER2-positive breast cancer / S. Murray // Cmaj. 2006. - Vol.174, N.l. - P.36-37.

114. Oldenburg, R.A. Genetic susceptibility for breast cancer: how many more genes to be found? / R.A. Oldenburg, H. Meijers-Heijboer, C.J. Cornelisse, P. Devilee // Crit. Rev. Oncol. Hematol. 2007. - Vol.63. - P. 125-149.

115. Orlowski, R.Z. NF-kappaB as a therapeutic target in cancer / R.Z.Orlowski, A.S.Jr. Baldwin // Trends Mol. Med. 2002. - Vol.8, N.8. - P.385-389.

116. Paiva, C.E. Absence of transforming growth factor-P II receptor is associated with poorer prognosis in HER2-negative breast tumours / C.E. Paiva,

117. S.A. Drigo, F.E. Rosa, F.A. Moraes Neto, J.R.F. Caldeira, F.A. Soares, M.A.C. Domingues, S.R. Rogatto // Annals of Oncology. 2010. - Vol.21, N.4.-P.734-740.

118. Pajak, B. Molecular basis of parthenolide-dependent proapoptotic activity in cancer cells / B. Pajak, B. Gajkowska, A. Orzechowski // Folia Histo-chem. Cytobiol. 2008. - Vol.46, N.2. - P.129-135.

119. Plosker, G.L. Trastuzumab: A Review of its Use in the Management of HER2-Positive Metastatic and Early-Stage Breast Cancer / G.L. Plosker, S.J. Keam // Drugs. 2006. - Vol.66, N.4. - P.449-475.

120. Rosell, R. Epidermal growth factor receptor activation: how exon 19 and 21 mutations changed our understanding of the pathway / R. Rosell, M. Taron, N. Reguart et al. // Clin. Cancer Res. 2006. - Vol. 12, N.24. - P.7222-7231.

121. Ross, J.S. The Her-2/neu gene and protein in breast cancer 2003: biomarker and target of therapy / J.S. Ross, J.A. Fletcher, G.P. Linette et al. // Oncologist. 2003. - Vol.8, N.4. - P.307-325.

122. Sen, R. Inducibility of kappa immunoglobulin enhancer-binding protein Nf-kappa B by a posttranslational mechanism / R. Sen, D. Baltimore // Cell. -1986. Vol.47, N.6. - P.921-928.

123. Sleifer, S. Target treatment of breast cancer / S. Sleifer, J.G.M. Klijn // Erasmus MC Oncology Magazine. -2008. Issue 1. - P. 19-21.

124. Tol, J. Chemotherapy, bevacizumab, and cetuximab in metastatic colorectal cancer / J. Tol, M. Koopman, A. Cats et al. // New Engl. J. Med. 2009. -Vol.360, N.6.-P.563-572.

125. Tutt, A. Phase II trial of the oral PARP inhibitor olaparib in BRCAdeficient advanced breast cancer / A. Tutt, M. Robson, J.E. Garber et al. // J. Clin. Oncol. 2009. - 27:18s (Suppl; abstr. CRA501).

126. Veronesi, U. Chenging therapeutics in breast cancer / U. Veronesi // 9th International Conference. Abstract book. 2005. - Vol.14, Suppl. 1. - SI.

127. Weidemann, H. Prognostic significance of steroidal hormones, cytokines and tumor markers at diagnosis of breast cancer / H. Weidemann, T.Alweis, D. Lichtstein, T. Peretz, V.Barak // Tumor Biology. 2010,- Vol.31, Suppl. 1. - P.68.

128. Weldon, C.B. NF-kappa B-mediated chemoresistance in breast cancer cells / C.B. Weldon, M.E. Burow, K.W. Rolfe, J.L. Clayton, B.M. Jaffe, B.S. Beck-man // Surgery. 2001. - Vol. 130, N.2. - P. 143-150.

129. Wirtz, R.M. Biomarkers for prognosis and prediction the misjudged role of hormone receptors / R.M. Wirtz, S. Darb-Esfahani, B. Sinn, C. Denkert, C. Zamagni, S. Eidt // Tumor Biology. - 2010. - Vol.31, Suppl. 1. - P.22.

130. Woessner, J.F. Matrix Metalloproteinases and TIMPs / J.F. Woessner, H. Na-gase. Oxford, UK: Oxford University Press, 2000.

131. Wu, J.T. The NF-kappaB/IkappaB signaling system: a molecular target in breast cancer therapy / J.T. Wu, J.G. Krai // J Surg Res. 2005. - Vol.123, N.l. - P. 158-169.

132. Xu, J. NF-kappaB modulators in osteolytic bone diseases / J. Xu, H.F. Wu, E.S. Ang, K. Yip, M. Woloszyn, M.H. Zheng, R.X. Tan // Cytokine Growth Factor Rev. -2008.

133. Yotsumoto, F. Identification of genes regulated by HB-EGF as a target for breast cancer therapy / F. Yotsumoto, M. Kuroki, S. Miyamoto // Tumor Biology. 2010. - Vol.31, Suppl. 1. - P.71.

134. Zhou, Y. The NFkappaB pathway and endocrine-resistant breast cancer / Y. Zhou, S. Eppenberger-Castori, U. Eppenberger, C.C. Benz // Endocr Relat Cancer.-2005.-Vol. 12, Suppl 1.-P.37-46.