Аспекты применения методов биотехнологии в селекции ярового рапса (Brassica napus L.) тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.01.05, кандидат наук Котлярова, Екатерина Борисовна

• Котлярова, Екатерина Борисовна
• кандидат наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат наук Котлярова, Екатерина Борисовна

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Биотехнологические методы в селекции ярового рапса

1.2. Значение гаплоидии и её использование в селекции рапса

1.3. Применение методов in vitro в получении отдаленных

гибридов у растений семейства Brassicaceae

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЙ

3. ИНДУЦИРОВАНИЕ ГАПЛОИДИИ ИЗ НЕОПЛОДОТВОРЁННЫХ СЕМЯЗАЧАТКОВ ЯРОВОГО РАПСА В УСЛОВИЯХ IN VITRO

3.1. Влияние эндогенных факторов на индукцию гаплоидии

3.1.1. Влияние генотипа на индукцию гаплоидов

3.1.2. Маркерные признаки растений-доноров

3.1.3 Зависимость регенерационной способности семязачатков от расположения ветвей на побеге и длины бутона

3.2. Влияние экзогенных факторов на индукцию гаплоидии

3.2.1. Подбор оптимального стерилизующего агента

3.2.2. Влияние предобработки бутонов и сроков введения

в культуру на индукцию гаплоидии

3.2.3. Зависимость регенерационной способности неоплодотворённых семязачатков от условий культивирования

3.3. Гаплоидия как ускоренный метод создания гомозиготных

линий ярового рапса

3.3.1. Формирование гаплоидных линий

3.3.2. Процесс диплоидизации гаплоидов

3.3.3. Метод создания гомозиготных линий ярового рапса на основе индуцирования гаплоидии

3.3.4. Характеристика полученных реституционных линий

4. ЭМБРИОКУЛЬТУРА В УСЛОВИЯХ IN VITRO

4.1. Влияние направления скрещивания на выживаемость гибридных зародышей в условиях in vitro

4.2. Влияние возраста зародышей и условий культивирования на процесс регенерации

4.3. Характеристика полученных гибридов

ВЫВОДЫ

РЕКОМЕНДАЦИИ ДЛЯ ПРАКТИЧЕСКОГО ИСПОЛЬЗОВАНИЯ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Аспекты применения методов биотехнологии в селекции ярового рапса (Brassica napus L.)»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Рапс яровой (Brassica napus L.) - ценная масличная и кормовая культура, для которой характерна высокая пластичность и приспособленность к умеренному климату. В России рапс является одной из перспективных масличных культур, увеличение объемов производства семян которой позволит полнее обеспечить население растительным маслом, животноводство - кормовым белком, а промышленность - сырьем (Карпачев, 2006).

Создание новых сортов, соответствующих требованиям современного производства, во многом зависит от разнообразия исходного материала. Достижение этого возможно не только с помощью традиционных методов селекции, но и современными методами биотехнологии, которые позволяют ускорить процесс формирования новых сортов ярового рапса в 5-10 раз.

Широкое применение в сельскохозяйственной биотехнологии нашел метод индуцирования гаплоидии в культуре репродуктивных органов. У ярового рапса достаточно подробно разработан метод культуры изолированных пыльников (Муравлёв, Кривошеева, 1999; Keller, Armstrong, 1977). Однако, для гетерозисной селекции на основе цитоплазматической мужской стерильности необходимо сохранение материнской цитоплазмы, что возможно только с помощью культивирования in vitro неоплодотворённых семязачатков. Причем, растения, полученные данным методом, свободны от некоторых вирусов и нежелательных генов, передающихся по мужской линии (Бутенко, 1999).

Сведений о получении гаплоидных растений в культуре неоплодотворённых семязачатков ярового рапса в доступной нам литературе не выявлено.

Кроме того, немаловажную роль в селекции рапса играет отдаленная гибридизация, так как перенос ценных генов из других видов и родов

Brassicaceae расширяет его генетический потенциал, который отличается крайней узостью.

В связи с этим актуальным в селекции рапса является применение биотехнологических методов, в том числе эмбриокультуры и гаплоидии, позволяющих расширить генетический потенциал и ускорить создание новых сортов и гибридов.

Цель работы: обосновать приемы культивирования in vitro неоплодотворённых семязачатков и незрелых зародышей в процессе создания нового исходного материала ярового рапса.

Задачи исследований:

1. Изучить влияние экзогенных и эндогенных факторов на индукцию гаплоидных регенерантов из неоплодотворённых семязачатков и формирование реституционных линий ярового рапса.

2. Разработать способ получения нового исходного материала ярового рапса, в том числе восстановителей фертильности, с использованием метода культуры неоплодотворённых семязачатков.

3. Изучить влияние направления скрещиваний (генотипа материнской и отцовской формы) и условий культивирования на развитие зародышей отдаленных гибридов в условиях in vitro.

4. Выявить ценные и хозяйственно-полезные признаки полученных реституционных линий и гибридных растений.

Научная новизна. Впервые установлено, что при культивировании неоплодотворённых семязачатков ярового рапса тотипотентность клеток каллуса различается, и реализация морфогенеза происходит по пути гистогенеза и органогенеза, приводящего к формированию ростовых почек и корней. В культуре незрелых зародышей морфогенез осуществляется через прямую регенерацию, ведущую к формированию ростовых побегов. Данные наблюдения имеют теоретическое значение, так как расширяют научные представления о регуляции ростовых процессов у растений рапса при воздействии стрессовых условий культуры in vitro.

Впервые разработан метод получения гомозиготных линий рапса путем индуцирования гаплоидии в культуре неоплодотворенных семязачатков in vitro, позволяющий установить влияние эндо- и экзогенных факторов на индукцию гаплоидии, определить оптимальные стадии развития эксплантов, выявить состав и последовательность чередования питательных сред на этапах стабилизации и микроразмножения гаплоидных и реституционных линий ярового рапса. Установленные параметры культивирования неоплодотворенных семязачатков ярового рапса in vitro дали возможность впервые разработать способ, позволяющий ускоренно (в 5-10 раз) получать исходный материал для гетерозисной селекции, на который подана заявка на патент «Способ получения восстановителей фертильности ярового рапса».

Впервые модифицирован состав питательной среды для получения гибридов от межвидовых и межродовых скрещиваний путем прямой регенерации из незрелых зародышей в условиях in vitro. Установлен оптимальный срок введения зародышей изучаемых отдалённых гибридов семейства Brassicaceae в культуру. Использование метода эмбриокультуры позволило получить межродовые гибриды между рапсом яровым и горчицей белой при использовании последней в качестве опылителя, что представляет определенный теоретический интерес для отдаленной гибридизации рапса.

Практическая значимость результатов исследований. С помощью культуры неоплодотворенных семязачатков получено 5 реституционных линий ярового рапса, которые были переданы в лабораторию селекции рапса ВНИПТИР и включены в её научно-исследовательскую работу.

Данные линии представляют ценность для использования в гетерозисной селекции в качестве восстановителей фертильности и как перспективный исходный материал для селекции ярового рапса на скороспелость, качество семян и масла, устойчивость к полеганию и другие признаки.

Полученный в ходе применения эмбриокультуры гибридный материал может использоваться в практической селекции и дальнейших

фундаментальных и прикладных исследованиях. Среди полученных гибридов выявлены образцы, устойчивые к тле и с желтой семенной оболочкой.

Разработанные в процессе исследований методические подходы могут использоваться в различных областях биотехнологии, в учебных программах по биологии, цитологии, селекции в ВУЗах.

Апробация работы. Основные положения исследовательской работы доложены и обсуждены на школах-семинарах молодых учёных Липецкой области: «Актуальные проблемы современной науки» (Липецк, 2004), «Актуальные проблемы естественных наук и их преподавания» (Липецк, 2005, 2006); III и IV Международных конференциях молодых учёных и специалистов «Актуальные вопросы селекции, технологии и переработки масличных культур» (Краснодар, 2005, 2007), школе молодых учёных «Экологическая генетика культурных растений» (Краснодар, 2005), Международной научно-практической конференции «Рапс - культура XXI века: аспекты использования на продовольственные, кормовые и энергетические цели» (Липецк, 2005), Всероссийской научно-практической конференции «Проблемы преподавания молекулярной биологии, биотехнологии и вирусологии в высших педагогических учебных заведениях» (Орехово-Зуево, 2006), I (IX) Международной конференции молодых ботаников (Санкт-Петербург, 2006), Международной научной конференции «Проблемы биологии, экологии и образования: история и современность» (Санкт-Петербург, 2006), IX Международной научно-практической экологической конференции «Современные проблемы популяционной экологии» (Белгород, 2006), Всероссийской научной конференции «Актуальные проблемы естественных наук и их преподавания» (Липецк, 2006), на межвузовских научных конференциях преподавателей, аспирантов и студентов (Липецк, 2003 - 2006 гг.) и заседаниях Учёного совета ГНУ ВНИПТИР (Липецк, 2004 - 2007 гг.).

На защиту выносятся следующие положения:

1. Экспериментальное обоснование влияния эндогенных и экзогенных факторов на индукцию гаплоидии в культуре неоплодотворенных семязачатков в условиях in vitro, позволяющее ускоренно получать новый исходный материал ярового рапса.

2. Способ создания реституционных линий рапса, основанный на индукции гаплоидии из неоплодотворенных семязачатков, стабилизации, микроразмножении и диплоидизации полученных регенерантов.

3. Параметры эмбриокультуры, заключающиеся в определении влияния направления скрещиваний и оптимизации условий культивирования зародышей отдаленных гибридов.

4 Ценные признаки полученных гибридных растений и реституционных линий.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 128 страницах и состоит из введения, 4 глав, выводов и рекомендаций для практического использования. Работа иллюстрирована 52 рисунками, включая фотоснимки, и содержит 19 таблиц. Библиография включает 222 литературных источника, из которых 135 на иностранных языках.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1. Биотехнологические методы в селекции ярового рапса

Рапс яровой (Brassica napus L. subsp. oleífera annua Metzg.) возделывается во многих странах мира, в том числе и в России, главным образом как масличная культура. В мировом сельскохозяйственном производстве на долю рапса приходится 12 % (24-26 млн. га) общей площади посевов масличных культур. По валовому сбору семян, достигшему 44-46 млн. тонн в 2004-2005 гг., рапс занял вторую позицию после сои. Объем производства рапсового масла составляет более 15 % в совокупном мировом производстве растительных масел (Горлов и др., 2006).

В состав рапсового масла входит большое количество ненасыщенных жирных кислот (олеиновая, линолевая, линоленовая), которые являются незаменимыми в питании человека (Осипова, 1998). По вкусовым качествам рапсовое масло канольных сортов (низкоэруковых, низкоглюкозинолатных, с высоким качеством пищевого масла и белкового шрота) приравнивается к оливковому и считается одним из лучших растительных масел.

Рапс используют также в качестве кормовой, технической культуры, как зелёное удобрение и хороший медонос. Широкое применение продукция из рапса находит в химической, металлургической, перерабатывающей и других отраслях промышленности. По пищевым и кормовым достоинствам он значительно превосходит многие сельскохозяйственные культуры. В его семенах и рапсовой муке содержится 40-48 % жира и 22-24 % переваримого протеина, что в 1,9-4,0 раза больше, чем в гороховой, пшеничной, ячменной муке (Артемов, Карпачев, 2006). Кроме этого, интерес к яровому рапсу обусловлен также хорошей приспособленностью этого растения к умеренному климату (Рапс озимый и яровой, 1988).

По мере усложнения селекционных задач возрастают требования к исходному материалу ярового рапса. В последнее время развивается новое направление селекции - создание желтосемянных безэруковых и низкоглюкозинолатных «000» сортов рапса (Осипова, 1998).

В целях ускорения селекционного процесса, создания принципиально новых форм, улучшения существующих, массового их размножения, хранения, более точной оценки и отбора селекционного материала в селекции рапса используются биотехнологические методы. Методам культуры клеток и тканей в решении этих вопросов отводится значительное место.

Выбор растительного объекта при использовании метода культуры ткани имеет решающее значение. Для растений семейства Brassicaceae наиболее характерно в качестве эксплантов в работах по регенерации растений использовать семядоли, гипокотиль, части соцветий и листьев (Использование биотехнологических методов для получения исходного селекционного материала капусты, 2004).

Использование в качестве экспланта частей бутона позволило клонально размножить стерильные или самонесовместимые растения капусты с низкой завязываемостью семян, выделенные в период цветения растений. Эффективность такой методики была показана также при размножении стерильных растений сурепицы яровой {Brassica campestris L.) (Yang et al., 2000).

Для рапса отмечалась успешная регенерация растений из каллуса, индуцированного практически из всех видов эксплантов: корней, стеблей, листьев, семядолей (Jain at al., 1988; Sharma, Thorpe, 1989).

С разработкой техники получения растений-регенерантов из каллусной ткани появилась возможность получать новые формы растений, отличающиеся как по фенотипическим, так и по генетическим признакам от исходных растений. Такое разнообразие среди клеточных линий и растений-регенерантов называют «сомаклоны».

Отбор и испытание генотипов из сомаклонов с целью использования этого метода в селекции на устойчивость проводят на селективных средах in vitro. Так, через каллусную культуру были выделены солеустойчивые растения из протопластов и полученных из них каллусов (Ролдугина,

Пескова, 1988). Из культуры протопластов (Bundgaard, Buchwaldt, 1989) и из гаплоидного каллуса (MacDonald et al., 1989) также были получены растения рапса, устойчивые к альтернариозу (Alternaría brassica).

Кроме этого, важными предпосылками экономически выгодного использования метода культуры тканей ярового рапса являются высокие коэффициенты размножения при сохранении генетической стабильности, а также экономия времени при размножении in vitro, что дает возможность эффективно включать его в селекционный процесс.

Большие перспективы в селекции рапса открывает и соматическая гибридизация - слияние изолированных протопластов соматических клеток. В результате объединения растительных геномов (ядер и цитоплазмы) создаются уникальные возможности для получения новых комбинаций генов, которые очень трудно получить с применением классических методов генетики и селекции, но они могут представлять практический интерес для селекции (Атанасов, 1993). Например, перенос цитоплазматических генов ЦМС и генов восстановления фертильности от Moricandia arvensis к Brassica júncea L., стал возможен с помощью соматической гибридизации (Prakash, 1998). Кроме этого, применение метода слияния протопластов позволило получить жизнеспособные межродовые гибриды между горчицей белой (Sinapis alba L.) и рапсом (Brassica napus L.), резистентные к вредителям и болезням, которые трудно получить посредством половой гибридизации (Primard et al., 1988; Lelivelt et al., 1993; Chèvre et al., 1994; Plümper, Sacristán, 1995). Также в результате соматической гибридизации были получены гибриды Brassica napus L. и Brassica nigra L., устойчивые к Phoma lingam (Sjodin, Glimelius, 1989; Gerdemann-Knoerck et al., 1994), Sinapis alba L. и Brassica oleracea, устойчивые к альтернариозу (Hansen, Earle, 1997; Sigareva et al., 1999), Brassica napus L. и Raphanus sativus, устойчивые к поражению нематодами (Heterodera schachtii Schm.) (Lelivelt, Krens, 1992) и т. д.

Помимо этого, при слиянии протопластов рапса, изолированных из гаплоидной цитоплазматической атразиноустойчивой линии и гаплоидной

линии с ЦМС, были получены диплоидные гибриды, характеризующиеся ЦМС и устойчивостью к гербициду атразину (Chuong at al., 1988).

1.2. Значение гаплоидии и её использование в селекции рапса

О гаплоидах и возможностях их использования в селекции и теоретических исследованиях было известно ещё в 20-х гг. XX в.. Явление гаплоидии было впервые обнаружено и описано в 1922 г. у Datura stramonium (Blakeslee et al., 1922). Главными преимуществами метода являются быстрое достижение гомозиготности у линий и возможность отбора рекомбинантных генотипов (несущих желаемые признаки) на ранних этапах селекционного процесса (Рахимбаев и др., 1990). Известно, что применение метода гаплоидии сокращает сроки селекции ярового рапса не менее, чем на 4-6 лет (Darrorez, 1981).

Накопленный к настоящему времени опыт свидетельствует о том, что теоретические и прикладные возможности гаплоидной технологии могут быть успешно реализованы в сочетании с традиционными методами генетико-селекционной работы (Рахимбаев и др., 1990).

У рода Brassica спонтанные гаплоиды были обнаружены для таких видов как В. napus, В. carinata, В. campestris и В. oleracea (Morinaga, Fukushima, 1933; Komatsu, 1936; Ramanujam, 1941; Kuriyama, Watanabe, 1955; Thompson, 1956). Из спонтанно возникших гаплоидов в естественных условиях были получены сорт Мерис Гаплона и гомозиготная линия RD 49, которая используется в качестве родительской формы в селекции как озимого, так и ярового рапса (Муравлев, 2000). Спонтанные гаплоиды встречаются с довольно низкой частотой - от 0,005 до 1,94 % (Thompson, 1969; Banga, Labana, 1986). Кроме того, партеногенетические гаплоиды были обнаружены у Brassica в результате межвидовых скрещиваний, однако частота их возникновения также была небольшой (Prakash, 1973; 1974).

С развитием современных методов биотехнологии получение гаплоидных растений стало возможным из репродуктивных клеток при

культивировании изолированных пыльников или неоплодотворённых семязачатков на искусственных питательных средах. Впервые гаплоидные растения и каллус из культивируемых in vitro пыльников рода Brassica были получены и описаны для Brassica oleracea (Kameya, Hinata, 1970). Позже появилась информация о проведении аналогичных работ с В. campestris (Keller et al., 1975), В. napus (Thomas, Wenzel, 1975), В. hirta (Klimaszewska, Keller, 1983), В. nigra (Leelavathi at al., 1987), В. juncea (Sharma, Bhojwani, 1985) и многих других видов Brassica (Palmer et al., 1996). У многих регенерантов при цитологическом анализе клеток меристемы корней и побегов выявлен гаплоидный набор хромосом (Toriyama et al., 1987).

Было установлено, что на выход растений-регенерантов в культуре изолированных пыльников и микроспор ярового рапса влияют такие факторы, как условия выращивания донорского материала (Dunwell at al., 1985), генотип растения (Thurling, Chay, 1984; Dunwell at al., 1985), стадия развития пыльцы (Никитина и др., 1989; Vivadilova et al., 1987), предобработка бутонов (Keller, Armstrong, 1979; Dunwell, Cornish, 1985; Naleczynska, Cegielska, 1985) и состав питательной среды (Lichter, 1981 ; Lillo, Hansen, 1987).

Следует заметить, что метод культивирования пыльников и пыльцы имеет и свои недостатки: низкий выход эмбриоидов и растений, которые к тому же не все являются гаплоидами (Ницше, Венцель, 1980).

В настоящее время с помощью метода культуры неоплодотворённых семязачатков получены гаплоиды у многих важных сельскохозяйственных культур: кукурузы (Ао et al., 1982), риса (Давоян, 1985; Zhou, Yang, 1981), пшеницы (Zenkteler, Nitzsche, 1985), сахарной свёклы (Hosemans, Bossoutrot, 1983), лука (Campion, Alloni, 1990), моркови (Тюкавин, Шмыкова, 2000; Домблидес, 2001) и т. д.

Сведений о получении гаплоидных растений из женского гаметофита ярового рапса в условиях in vitro в доступной нам литературе не выявлено. В связи с этим наши исследования были направлены на изучение факторов,

индуцирующих гаплоидию в культуре неоплодотворённых семязачатков ярового рапса.

1.3. Использование методов in vitro в получении отдаленных гибридов у

растений семейства Brassicaceae

Основой любой селекционной программы является расширение диапазона генетической изменчивости с целью отбора желаемых признаков для улучшения возделываемых сортов сельскохозяйственных культур. Одним из методов решения данной задачи является отдаленная гибридизация. Этот вопрос особенно актуален для селекции рапса, так как большинство современных сортов ярового рапса, созданных к концу XX века, имеют узкую генетическую основу в связи с тем, что получены на основе безэрукового сорта Ого и низкоглюкозинолатного сорта Bronowski (Жидкова, Карпачёв, 1996).

С помощью отдалённой гибридизации для данной культуры возможно повысить урожайность, устойчивость к вредителям и болезням, улучшить жирнокислотный состав масла семян, увеличивая содержание олеиновой и линолевой кислот и уменьшая содержание линоленовой кислоты, получить семена с жёлтой семенной оболочкой, характеризующихся улучшенным качеством масла (в отличие от тёмноокрашенных) и т. д. Однако лишь ограниченное число межвидовых и межродовых скрещиваний в семействе Brassicaceae может привести к получению полноценных гибридных растений. Трудности создания отдалённых гибридов обусловлены барьерами несовместимости, которые выражены между растениями разных таксономических групп с момента опыления, а затем проявляются на протяжении всего онтогенеза гибридных растений.

Для преодоления естественных барьеров несовместимости разработаны биотехнологические методы изолирования и выращивания в условиях in vitro незрелых и зрелых зародышей, завязей и семязачатков, что позволило получить фертильные растения межвидовых и межродовых гибридов многих

важных сельскохозяйственных культур: озимой пшеницы (Барабанова и др., 1988), ржи (Першина и др., 2003), хлопчатника (Азизходжаев, Даминова, 1988), сахарной свеклы (Васильченко, Подвигина, 2005), кукурузы (Прасад и др., 1988), томата (Тодераш, 1988), лука (Титова, 1988) и многих других.

Первый фертильный аллополиплоидный капустно-редечный гибрид получен Г. Д. Карпеченко в 1927 году, и им же показаны причины нескрещиваемости разных видов и пути ее преодоления (Карпеченко, 1927).

Большие перспективы при неспособности пыльцы к прорастанию открывает метод опыления рыльца, верхушки завязи (после удаления рыльца или столбика) или непосредственно изолированной завязи в условиях in vitro. Этот метод используется для преодоления прогамной несовместимости, выражающейся в неспособности пыльцы прорастать на рыльце пестика, а пыльцевых трубок достигать семязачатка из-за чрезмерной длины столбика, медленного роста пыльцевых трубок или разрывов пыльцевых трубок в столбике. Возможность оплодотворения в условиях культивирования изолированных семязачатков возрастает при удалении рыльца, столбика, стенок завязи (Першина, Шумный, 1991).

Опыление и оплодотворение in vitro оказалось необходимым для создания отдалённых гибридов между рапсом (Brassica napusj и другими представителями семейства Brassicaceae: В. oleracea, Arabis caucasica, Diplotaxis tenuifolia, Moricandia arvensis, Sysymbrium loeselli и Sinapis alba. Оплодотворённые завязи и развивающиеся зародыши культивировали на питательной среде MS с добавлением никотиновой кислоты и миоинозитола (Zenkteler, 1990).

Успех оплодотворения определяется совместимостью мужского и женского растений, в то время как выживание образовавшегося в результате оплодотворения зародыша обусловлено как нарушениями в клетках самого зародыша, так и отрицательным влиянием на их формирование аномально развивающихся эндоспермов и тканей, окружающих зародышевый мешок.

Постгамная несовместимость, вызванная разновременным развитием зародыша и эндосперма, служит значительным препятствием во многих гибридных комбинациях скрещивания (Егорова, 2003). С целью её преодоления во многих экспериментах по созданию отдалённых гибридов растений успешно используется метод культивирования зародышей. Данный метод для получения межвидовых гибридов растений семейства Brassicaceae первым использовал в 1959 году Nishi S. (цит. по Gowers at al., 1999).

Барьер несовместимости при развитии гибридного зародыша часто возникает на средних и поздних стадиях эмбриогенеза. Обычно это проявляется в нарушении развития эндосперма или полном его отсутствии, что приводит к гибели зародышей. Специально подобранный состав компонентов питательных сред для культивирования незрелых зародышей предоставляет все необходимые вещества для нормального развития зародыша и, таким образом, заменяет эндосперм. Несмотря на то, что состав питательных сред варьирует в зависимости от вида культивируемых зародышей, очевидно, что чем менее развит зародыш, тем выше требования к составу питательных сред. Например, если относительно зрелые зародыши можно выращивать на средах только с добавлением солей и сахарозы, то для нормального развития зародышей, изолированных на ранних стадиях, необходимы витамины, аминокислоты, фитогормоны, а также сложные комплексные добавки в виде экстракта дрожжей, гидролизата казеина, кокосового молока и др. Полученные гибридные растения доращивают в условиях теплиц (Атанасов, 1993).

Для увеличения генетического разнообразия внутри рода Brassica были получены гибриды от скрещивания горчицы абиссинской (В. carinata) с сурепицей яровой (В. campestris) с использованием метода эмбриокультуры (Starzycki, Krzymanski, 1987), дикого вида Diplotaxis siifolia и культивируемых видов Brassica: В. juncea и В. napus (Batra et al., 1990). Аналогично были получены гибриды в комбинациях скрещивания видов рода Brassica и Raphanus (Tang, Williams, 1988), видов рода Sinapis и Brassica napus (Mathias, 1991;

Momotaz et al., 1998), Eruca sativa x B. rapa (Robers et al., 1999), B. oleracea x Raphanus sativus (Sarashima et al., 1980), Diplotaxis tenuisiliqua x B. campestris (Sarmah, Sarla, 1998), В. парт и В. juncea (Bajaj et al., 1986; Zhang et al., 2003).

Получение отдалённых гибридов с помощью культивирования зародышей in vitro играет немалую роль для повышения устойчивости к биотическим и абиотическим факторам. Например, реципрокные скрещивания горчицы белой (Sinapis alba L.) с рапсом (Brassica napus L.) проводили для повышения устойчивости к Alternaria (Ripley, Arnison, 1990; Brown et al., 1997), B. napus с В. oleracea с целью переноса устойчивости к триазину (Ayotte et al., 1987), B.napus с В. juncea и В. carinata для переноса устойчивости к Phoma Ungarn (Sacristan, Gerdemann, 1986). Гибриды Brassica napus x Brassica oleracea характеризовались устойчивостью к тле (Quazi, 1988; Gowers, Christey, 1999), а гибриды от скрещивания Eruca sativa и В. campestris - не только устойчивостью к тле, но и высокоурожайностью (Agnihotri et al., 1990). Помимо этих признаков, гибриды от комбинации скрещивания В. juncea х В. tournefortii проявили также устойчивость к засухе (Goyal et al., 1997; Kumar et al., 2001), а гибриды В. oleracea и В. campestris -холодоустойчивость (Kudou et al., 1995).

Кроме того, в Германии разработана система успешного переноса ЦМС от редиса к рапсу методом культуры зародышей. Исследователи Paulmann W., Robbelen G. (1988) не только перенесли гены восстановления фертильности редиса в рапс, но получили линии с мужской стерильностью, имеющие зеленые хлоропласта при низких температурах (Paulmann, Robbelen, 1988).

При цитологическом изучении образования бивалентов у разногеномных гибридов доказана близкородственная связь генома А {Brassica campestris, 2п=20) и генома С {Brassica oleracea, 2п=18) (рис. 1).

Brassica napus является амфидиплоидным видом, образованным при спонтанной гибридизации этих двух диплоидных видов (U, 1935). В связи с этим само его эволюционное происхождение позволяет осуществлять

ресинтез, способствующий повышению генетического потенциала этой культуры (Frandsen, 1947; Rudorf, 1950; Olsson, 1953,1960; Akbar, 1987).

В

В. nigra (n = 8)

ВС BA

В. carinata (n = 17) B. juncea (n = 17)

С AC А

В. oleracea (n = 9) * В. napus (n = 9) 4 В. campes tris (n= 10)

Рис. 1. Схема происхождения амфидиплоидных видов Brassica (по U N., 1935)

Ресинтезированные формы рапса были созданы посредством скрещивания Brassica campestris и В. oleracea и последующей культуры зародышей in vitro во многих странах: в Японии с целью получения кочанного типа рапса (Nishi et al., 1970), Германии - для изменения биохимического состава масла (Gland, 1982), Польше (Barcicowska et al., 1987), США (Ozminkowski, Jourdan, 1994), Венгрии (Gyulai, 1992), Китае (Zhang at al., 2004) - для получения желтоокрашенных семян и т. д.

Заключение диссертации по теме «Селекция и семеноводство», Котлярова, Екатерина Борисовна

выводы

1. Выявлено, что генотип растения-донора определяет способность неоплодотворённых семязачатков ярового рапса к дальнейшему развитию. Более отзывчивы к индуцированию гаплоидов материалы гибридного и линейного происхождения (в среднем 4,72 и 3,85 %) по сравнению с сортами (1,67 %).

Морфологические изменения формы цветка, а также качественные признаки пыльцевых зерен можно использовать как маркерные признаки при отборе донорских генотипов для индуцирования гаплоидов рапса. Установлена прямая зависимость регенерационной способности селекционного материала от количества аномальных пыльцевых зерен. Наибольшей способностью к регенерации (1,3 %) обладают семязачатки, эксплантированные с бутонов центральной кисти основного побега ярового рапса длиной 2-4 мм.

2. Показано, что смесь анолита с католитом (рН=7) ускоряет развитие неоплодотворённых семязачатков ярового рапса в культуре in vitro на 7 - 10 дней. Предобработка бутонов холодом в течение суток повышает морфогенную способность семязачатков до 3,1 %.

3. Гормональный состав питательных сред определяет пути морфогенеза женского гаметофита и образование морфологических структур при культивировании неоплодотворённых семязачатков ярового рапса. Установлено, что тотипотентность клеток каллуса различается, и реализация морфогенеза происходит по пути гистогенеза и органогенеза, приводящего к формированию ростовых почек и корней.

Максимальный выход морфогенного каллуса достигается путём культивирования неоплодотворённых семязачатков ярового рапса на среде, содержащей 1 мг/л кинетина, 0,1 мг/л ИУК, 1 мг/л ГК и 10 мг/л гидролизата казеина. Наличие в среде 0,1 мг/л 2,4-Д, 0,5 мг/л БАП, ИУК, ГК и 1 мг/л кинетина способствует образованию максимального количества ростовых почек (71,4 %) и регенерантов (58,8 %). Культивирование неоплодотворённых семязачатков на свету более чем в 2 раза по сравнению с условиями темноты стимулирует появление проростков.

4. Определены параметры стабилизации гаплоидных форм в зависимости от морфологического развития регенерантов. Стабилизацию гаплоидов проводят одновременно с микроразмножением в течение 3-4 пассажей с чередованием ростовой (ГК, кинетин, 6-БАП по 0,2 мг/л) -безгормональной - ростовой сред для нормально развитых регенерантов, и безгормональной - ростовой - безгормональной для слабо развитых регенерантов.

Диплоидизация гаплоидного материала осуществляется путём добавления в питательную среду 0,005 % колхицина и выдержке на ней эксплантов в течение 48 часов при последующем культивировании на питательной среде, содержащей 0,25 мг/л кинетина в течение месяца.

5. Разработан метод получения гомозиготных линий ярового рапса путем индукции гаплоидии из неоплодотворённых семязачатков, включающий следующие этапы: введение в культуру донорского материала с ценными признаками; индукция гаплоидии; стабилизация и микроразмножение гаплоидов; диплоидизация и стабилизация реституционных диплоидов; микроразмножение; корнеобразование in vitro и пересадка в грунт. На основе данного метода разработан способ получения восстановителей фертильности ярового рапса, при котором проводят гибридизацию реституционных линий с растениями-донорами для преодоления стерильности, получение семян второго поколения гомозиготных линий, опыление форм с ЦМС пыльцой полученных реституционных линий, получение семян, посев их в почву и анализ фертильности пыльцевых зерен.

6. В культуре незрелых зародышей морфогенез осуществляется через прямую регенерацию, ведущую к формированию ростовых побегов. Установлены основные параметры культивирования незрелых зародышей. Лимитирующими факторами, обеспечивающими максимальный уровень регенерации, являются подбор донорских растений с ценными признаками, выбор оптимального направления скрещивания, 13-17-дневный возраст зародыша, культивирование на среде, содержащей 0,2 мг/л 6-БАП, 0,1 мг/л НУК и 0,2 мг/л ГК.

7. Среди полученного в ходе применения эмбриокультуры гибридного материала выделены образцы, устойчивые к тле и с желтой семенной оболочкой, которые могут использоваться в селекции ярового рапса.

РЕКОМЕНДАЦИИ ДЛЯ ПРАКТИЧЕСКОГО ИСПОЛЬЗОВАНИЯ

1. Разработанный метод получения реституционных линий ярового рапса рекомендуется широко использовать в селекции для создания нового исходного гомозиготного материала. В течение 1-1,5 лет он может обеспечить получение необходимого объема исходных форм ярового рапса с материнской цитоплазмой. Полученные в результате исследований линии рекомендуются для включения в селекционный процесс.

2. Разработанный способ ускоренного получения восстановителей фертильности ярового рапса рекомендовать для использования в гетерозисной селекции ярового рапса.

3. Установленные параметры культивирования незрелых зародышей, позволяющие расширить генетическую изменчивость и создать новый исходный материал с желтой семенной оболочкой, следует использовать в отдаленной гибридизации ярового рапса.

4. При разработке новых селекционных программ по ускоренному созданию нового исходного материала и высокопродуктивных гибридов рекомендуется применение разработанных для ярового рапса методов биотехнологии: эмбриокультуры и получения гомозиготных линий путем культивирования неоплодотворённых семязачатков.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Котлярова, Екатерина Борисовна, 2007 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Азизходжаев А. Пути получения гибридных растений и семян при отдалённой межвидовой гибридизации хлопчатника / А. Азизходжаев, Д.М. Даминова // Биология культивируемых клеток и биотехнология: Тезисы докл. межд. конф., 2-6 авг. 1988 г., Новосибирск. - Новосибирск, 1988.-Т. 2.-С. 204-205.

2. Алехин С.А. Методическая рекомендация № 4: Сокращение вегетационного периода, ускорение роста растений и увеличение урожайности садово-огородных культур с использованием электроактивированных водных растворов (ЭВР) / С.А. Алехин -Ташкент: Изд-во ТГУ, 1992. - 12 с.

3. Артемов И.В. Рапс - масличная и кормовая культура / И.В. Артемов, В.В. Карпачев. - Липецк: Ориус, 2006. - 143 с.

4. Атабекова А.И. Цитология растений / А.И. Атабекова, Е. И. Устинова. - М.: «Агропромиздат», 1987. - 246 с.

5. Атанасов А. Биотехнология в растениеводстве / А. Атанасов. -Новосибирск, 1993.-241 с.

6. Барабанова Е.А. Регенерация растений из культивируемых зародышей озимой пшеницы / Е.А. Барабанова, В.П. Банникова, B.C. Гирко // Биология культивируемых клеток и биотехнология: Тезисы докл. межд. конф., 2-6 авг. 1988 г., Новосибирск. - Новосибирск, 1988. - Т. 1. - С. 110.

7. Батыгина Т.Б. Хлебное зерно: Атлас / Т.Б. Батыгина. - Л.: Наука, 1987. -103 с.

8. Белик Н.Л. Биологические основы технологии возделывания рапса ярового и редьки масличной в Центральном Черноземье: Автореф. дис. доктора с.-х. наук / Н.Л. Белик. - Москва, 2003. - 41 с.

9. Биология развития растений / Под ред. М.Х. Чайлахяна. - М.: Наука, 1975.-230 с.

Ю.Биотехнология растений: культура клеток / Пер. с англ. В.И. Негрука / Под ред. Р.Г. Бутенко. - М.: Агропромиздат, 1989. - 280 с.

П.Бочкарева Э.Б. Итоги работы по селекции и семеноводству рапса и сурепицы на качество масла и шрота / Э.Б. Бочкарева // «Научное обеспечение отрасли рапсосеяния и пути реализации биологического потенциала рапса». Научные доклады на междунар. коорд. совещании по рапсу. - Липецк, 2000. - С. 68-70.

12.Бочкарева Э.Б. Селекция масличного рапса на качественные признаки семян // Э.Б. Бочкарева, С.Л. Горлов, С.Л. Халилова, В.В. Сердюк // Проблемы рационального использования растительных ресурсов. Мат-лы междунар. научно-практич. конф. - Владикавказ, 2004. - С. 45-47.

13.Бочкарева Э.Б. Генетические ресурсы озимого и ярового рапса во ВНИИМК / Э.Б. Бочкарева, С.Л. Горлов, В.В. Сердюк // Рапс -культура XXI века: аспекты использования на продовольственные, кормовые и энергетические цели. - Липецк, 2005. - С. 23-27.

14.Бугара A.M. Пути индукции спорофитного развития в культуре репродуктивных клеток эфиромасличных растений / A.M. Бугара // Биология культивируемых клеток и биотехнология: Тезисы докл. межд. конф., 2-6 авг. 1988 г., Новосибирск. - Новосибирск, 1988. - Т. 2. - С. 225.

15.Бугара A.M. Культура неоплодотворённых завязей и семяпочек in vitro как способ получения гаплоидных растений / A.M. Бугара, Л.В. Русина // Физиология и биохимия культурных растений. - 1988. - Т. 20, № 5. -С. 419-430.

16.Бугара A.M. Гаплоидный каллусогенез в культуре неоплодотворённых семяпочек шалфея мускатного / A.M. Бугара, Л.В. Русина // Физиология и биохимия культурных растений. - 1989. - Т. 20, № 6. -С. 554-560.

17.Бутенко Р.Г. Культура изолированных клеток и физиология морфогенеза растений / Р.Г. Бутенко. - М.: Наука, 1964. - 272 с.

18.Бутенко Р.Г. Культура изолированных органов, тканей и клеток растений / Р.Г. Бутенко. - М.: Наука, 1970. - 342 с.

19.Бутенко Р.Г. Биология клеток высших растений in vitro и биотехнологии на их основе: Учеб. пособие / Р.Г. Бутенко. -М.: ФБК-ПРЕСС, 1999. - 160 с.

20.Васильченко E.H. Воздействие электроактивированной воды на всхожесть семян и развитие растений сахарной свеклы (В. vulgaris) в условиях in vitro / E.H. Васильченко, O.A. Подвигина // Экологическая генетика культурных растений: Материалы школы молодых ученых, 20-25 июня 2005 г., Краснодар. - Краснодар, 2005. - С. 266-267.

21.Васильченко Е. Н. Получение межвидовых гибридов сахарной свеклы в эмбриокультуре / E.H. Васильченко, O.A. Подвигина // Экологическая генетика культурных растений: Материалы школы молодых ученых, 2025 июня 2005 г., Краснодар. - Краснодар, 2005. - С. 263-265.

22.Вилор Т.А. Культура ткани и протопластов Brassica juncea / T.А. Вилор, А.Г. Лепешков, O.A. Абраменко, Ю.Д. Белецкий // Биология культивируемых клеток и биотехнология: Тезисы докл. междунар. конф., 2-6 авг. 1988 г., Новосибирск.-Новосибирск, 1988.-T. 1.-С. 14.

23.Гончаров C.B. О перспективах рапса на рынке масличных культур / C.B. Гончаров, Н.В. Королькова // Рапс - культура XXI века: аспекты использования на продовольственные, кормовые и энергетические цели. - Липецк: ВНИПТИР, 2005. - С. 18-22.

24.Горлов С.Л. Состояние, перспективы и научное обеспечение производства рапса в РФ / С.Л. Горлов, Э.Б. Бочкарева // Рапс: масло, белок, биодизель: материалы междунар. научно-практ. конф., 25-27 сент. 2006., г. Жодино. - Минск, 2006. - С. 21 - 28.

25.Горшков В.И. Результаты испытания сортов ярового рапса в условиях лесостепи ЦЧР / В.И. Горшков, В.В. Карпачев // Рапс - культура XXI века: аспекты использования на продовольственные, кормовые и энергетические цели. - Липецк: ВНИПТИР, 2005. - С. 66-74.

26.Горшков В.И. Исходный материал в селекции ярового рапса / В.И. Горшков // Научное обеспечение отрасли рапсосеяния и пути

реализации биологического потенциала рапса: Тезисы докл. междунар. координационного совещания по рапсу, 18-20 июля 2000 г., Липецк. -Липецк, 2000. - С. 38-40.

27.Гусаковская М.А. Гиногенез в культуре неоплодотворенных завязей и семяпочек пшеницы / М.А. Гусаковская, М.А. Наджар // Ботанический журнал. - 1994. - Т. 79, № 1. - С. 70-79.

28.Давоян Э.И. Получение гаплоидов у риса методом культивирования неоплодотворенных завязей в условиях in vitro / Э.И. Давоян // Доклады ВАСХНИЛ. - 1985. -Вып. 3. - С. 15-16.

29.Демьянчук Г.Т. Оценка селекционного материала рапса и сурепицы на содержание эруковой кислоты и глюкозинолатов. Методические указания. / Г.Т. Демьянчук, Мельник М.В., Лысюк В.И., Микитин Н.С. - М.: РАСХН, 1988.- 16 с.

30.Домблидес A.C. Разработка лабораторной технологии получения гиногенных растений моркови in vitro: Автореф. дис. канд. с.-х. наук / A.C. Домблидес. - Москва, 2001. - 23 с.

ЗЬДубовская А.Г. Исходный материал для селекции сортов и гибридов яровых рапса и сурепицы масличного направления: Автореф. дис. канд. с.-х. наук / А.Г. Дубовская. - Санкт-Петербург, 1993. - 18 с.

32.Дубовская А.Г. Потенциал коллекции ВИРа в селекции сортов рапса и сурепицы для производства биотоплива / А.Г. Дубовская, Н.Г. Конькова, Т.С. Горковенко, Г.К. Низова // Рапс - культура XXI века: аспекты использования на продовольственные, кормовые и энергетические цели. - Липецк, 2005. - С. 35-38.

33.Егорова Т.А. Основы биотехнологии: Учеб. пособие для высш. пед. учеб. заведений / Т.А. Егорова, С.М. Клунова, Е.А. Живухина. - М.: Издательский центр «Академия», 2003. - 208 с.

34.Жидкова E.H. Использование культуры in vitro для получения ресинтезированных форм рапса / E.H. Жидкова, A.A. Муравлев // Науч. - техн. бюл. ВНИИР им. Н. И. Вавилова. - 1993. - Т. 230. - С. 30.

35.Жидкова E.H. Получение ресинтезированных форм ярового рапса с целью селекции на желтосемянность и жирнокислотность масла / E.H. Жидкова, В.В. Карпачёв // Сельскохозяйственная биология. - 1996. -№ 5:-С. 123-125.

36.Жидкова Е. Н. Теоретические и практические аспекты отдалённой гибридизации рапса / E.H. Жидкова // Генетика. - 1997. - Т. 33, № 1. -С. 5 -11.

37.Жидкова E.H. Новый источник ЦМС для селекции рапса / E.H. Жидкова, В.В. Карпачев, В.А. Никоноренков // Селекция и семеноводство. - 1997. - № 2. - С. 52.

38.Жидкова E.H. Использование межвидовой гибридизации и мутагенеза в получении желтосемянного ярового рапса / E.H. Жидкова, В.В. Карпачев // Вопросы естествознания. - Липецк, 1999. - Вып.7. - С 86-88.

39. Жидкова E.H. Основные направления работы с отдалёнными гибридами ярового рапса во ВНИПТИР / E.H. Жидкова, В.В. Карпачев // Научное обеспечение отрасли рапсосеяния и пути реализации биологического потенциала рапса: Тезисы докл. междунар. координационного совещания по рапсу, 18-20 июля 2000г., Липецк. -Липецк, 2000.-С. 34-35.

40.Жидкова E.H. Получение желтосемянного ярового рапса во ВНИПТИР / E.H. Жидкова, A.A. Муравлев // Рапс - культура XXI века: аспекты использования на продовольственные, кормовые и энергетические цели. - Липецк: ВНИПТИР, 2005. - С. 92-93.

41.Жидкова E.H. Морфологическое изучение гибридов рапса ярового и горчицы белой / E.H. Жидкова, С.А. Шапошникова // Рапс - культура XXI века: аспекты использования на продовольственные, кормовые и энергетические цели. - Липецк: ВНИПТИР, 2005. - С. 94-100.

42.Жученко A.A. Экологическая генетика культурных растений и проблемы агросферы (теория и практика) / A.A. Жученко. - М.: ООО «Изд-во Агрорус». - Т. I. - 2004. - 690 с.

43.3друйковская-Рихтер А.И. Тканевые и клеточные культуры в селекции растений / А.И. Здруйковская-Рихтер. -М.: Изд-во ВАСХНИЛ, 1979. -С. 57-70.

44.3наменская В.В. Микроклональное размножение сахарной свёклы (методические рекомендации) /В.В. Знаменская, Т.П. Жужжалова -Воронеж: ВНИИСС, 1995. - 23 с.

45.Знаменская В.В. Принципы и методы создания и поддержания исходного материала на современном этапе селекции сахарной свеклы: Автореф. дис. доктора с.-х. наук / В.В. Знаменская. - Воронеж, 1999. - 40 с.

46.Использование биотехнологических методов для получения исходного селекционного материала капусты / Под ред. М.С. Бунина. - М.: ФГНУ «Росинформагротех», 2004. - 44 с.

47.Кавецкая A.A. Цитоэмбриологические исследования рапса: Автореф. дис. канд. с.-х. наук / A.A. Кавецкая. - Киев, 1960. - 16 с.

48.Калинин A.B. Каллусогенез в культуре неоплодотворенных семяпочек картофеля / A.B. Калинин // Биология культивируемых клеток и биотехнология: Тезисы докл. междунар. конф., 2-6 авг. 1988 г., Новосибирск. - Новосибирск, 1988. - Т. 2. - С. 206-207.

49.Карпачев В.В. Рапс в России (состояние и перспективы) / В.В. Карпачев // Рапс: масло, белок, биодизель: материалы междунар. науч-практ. конф., 25-27 сент. 2006., г. Жодино. - Минск, 2006. - С. 11 - 21.

50.Карпеченко Г.Д. Полиплоидные гибриды Raphanus sativus L. х Brassica napus L. / Г.Д. Карпеченко // Труды по прикладной ботанике. - 1927. -№ 17.-С. 305-310.

51.Кефели В.И. Рост растений / В.И. Кефели; Под ред. М.Х. Чайлахяна. - 2-е изд., перераб. и доп. - М.: Колос, 1984. - 175 с.

52.Корнейчук В.А. Классификатор вида Brassica napus L. (рапс) / В.А. Корнейчук. - Л.: ВИР, 1983. - 20 с.

53.Котлярова Е.Б. Влияние направления скрещивания и сроков введения в культуру на развитие зародышей отдалённых гибридов семейства Brassicaceae / Е.Б. Котлярова // Проблемы преподавания молекулярной биологии, биотехнологии и вирусологи в высших педагогических учебных заведениях. - Орехово-Зуево, 2006. - С. 129-133.

54.Муравлёв A.A. Методические рекомендации по получению андроклинных растений ярового рапса / A.A. Муравлёв, О.Г. Кривошеева. - М.: РАСХН, 1999. - 23 с.

55.Муравлёв A.A. Использование методов биотехнологии растений в создании оригинального исходного материала ярового рапса / A.A. Муравлёв // Научное обеспечение отрасли рапсосеяния и пути реализации биологического потенциала рапса: Тез. докл. междунар. координационного совещания по рапсу, 18-20 июля 2000г., Липецк. -Липецк, 2000.-С. 31-33.

56.Муравлёв A.A. Изменение агрономических показателей у андроклинных линий ярового рапса (Brassica napus L.) / A.A. Муравлёв // Рапс - культура XXI века: аспекты использования на продовольственные, кормовые и энергетические цели. - Липецк: ВНИПТИР, 2005. - С. 125-127.

57.Никитина Н.И. Эмбриоидогенез в культуре пыльников рапса и получение гаплоидных растений / Н.И. Никитина, Т.С. Федоренко, А.Н. Боровков // Доклады ВАСХНИЛ. - 1989. - № 9. - С. 13-16.

58.Ницше В. Гаплоиды в селекции растений / В. Ницше, Г. Венцель. - М.: Колос, 1980.- 128 с.

59.0сипова Г.М. Рапс в Сибири (Морфобиологические, генетические и селекционные аспекты) / Г.М. Осипова. - Новосибирск: Изд-во СибНИИ кормов, 1998. - 168 с.

бО.Охтенко C.H. Аномалии цветка у горчицы и рапса / С.Н. Охтенко // Бюллетень НТИ по масличным культурам. - 1968, октябрь - Краснодар: ВНИИМК, 1968.-С. 53-58.

61.Павлова М.К. Культура неоплодотворенных завязей и семяпочек: возможности и перспективы / М.К. Павлова // Сельскохозяйственная биология. - 1987. - № 1. - С. 27-33.

62.Паушева З.П. Практикум по цитологии растений / З.П. Паушева. - М.: Агропромиздат, 1988.-271 с.

63.Першина JI.A. Проблемы использования методов in vitro при отдалённой гибридизации злаков / JI.A. Першина, В.К. Шумный // Биология культивируемых клеток и биотехнология растений. - М., 1991.-С. 102-114.

64.Першина JI.A. Влияние хромосом ржи на особенности каллусогенеза и регенерации в каллусной культуре незрелых зародышей пшенично-ржаных замещенных линий Triticum aestivum L. сорта Саратовская 29 х Seeale cereale L. сорта Онохойская / JI.A. Першина, О.Б. Добровольская, Т.С. Раковцева, JI.A. Кравцова, А.И. Щапова, В.К. Шумный // Генетика. - 2003. -Т. 39, № 8. -С. 1073 - 1080.

65.Подвигина O.A. Особенности микроспорогенеза и фертильности пыльцы инбредных линий сахарной свеклы / O.A. Подвигина, Т.П. Жужжалова // Цитология и анатомия культурных растений: Сб. науч. трудов по прикладной ботанике, генетике и селекции. - Т. 124. - Д., 1989.-С. 83-85.

66.Подвигина O.A. Индуцирование гаплоидии у сахарной свеклы: Автореф. дис.... канд. с.-х. наук / O.A. Подвигина. - Рамонь, 1994. - 18 с.

67.Подвигина O.A. Теоретическое обоснование и приёмы использования методов биотехнологии в селекции сахарной свеклы: Автореф. дис. доктора с.-х. наук / O.A. Подвигина. - Воронеж, 2003. - 44 с.

68.Поляков A.B. Биотехнология в селекции льна: Монография / A.B. Поляков. - Тверь, 2000. - 180 с.

69.Поляков И .Я. Фитосанитарная диагностика в интегрированной защите растений / И.Я. Поляков, М.М. Левитин, В.И. Танский. - М.: Колос, 1995.-208 с.

70.Потапов Д.А. Инбридинг как метод генотипической дифференциации исходного материала при создании «000»-форм ярового рапса / Д.А. Потапов // Сельскохозяйственная биология. - 2004, № 3. - С. 76-79.

71.Прасад М. Сатья. Действие генотипа и состава питательной среды на соматический эмбриогенез и регенерацию растений из незрелых зародышей / М. Сатья Прасад, А.Н. Кравченко // Биология культивируемых клеток и биотехнология. - Новосибирск, 1988. - Т. 1. -С. 154- 155.

72.Пустовойт B.C. Руководство по селекции и семеноводству масличных культур / B.C. Пустовойт. - М.: Колос, 1967. - 351с.

73.Ралдугина Г.Н. Влияние NaCl на протопласты и каллусную культуру Brassica napus L. / Г.Н. Ралдугина, Е.Б. Пескова // Биология культивируемых клеток и биотехнология. Тез. докл. межд. конф., 2-6 авг. 1988 г., Новосибирск. - Новосибирск, 1988. - Т. 1. - С. 24.

74.Рапс озимый и яровой (практическое руководство по освоению интенсивной технологии возделывания) / Под ред. Ю.П. Бурякова - М.: Гос. агропромышл. комитет СССР, 1988. - 43 с.

75.Рафаилова Е. Влияние генотипа на развитие изолированных in vitro неоплодотворенных семяпочек сахарной свеклы / Е. Рафаилова, Ц. Кикиндонов, Р. Петрова // Раст. науки. - 1997. - Т. 34, № 7-8. - С. 13-15.

76.Рахимбаев И.Р. Экспериментальная гаплоидия в культуре пыльников и микроспор зерновых злаков (обзор) / И.Р. Рахимбаев, Ш. Тивари, Б.Р. Кударов // Сельскохозяйственная биология. - 1990. - № 3. - С. 44-55.

77.Сельскохозяйственная биотехнология: Учеб. / B.C. Шевелуха, Е.А. Калашникова, Е.С. Воронин и др.; Под ред. B.C. Шевелухи - 2-е изд., перераб. и доп. - M.: ВШ, 2003. - 469 с.

78.Семова Н.Ю. Андрогенез in vitro и получение гаплоидных растений белокочанной капусты с помощью культуры пыльников / Н.Ю. Семова, JI.A. Ушакова // Новые методы биотехнологии растений. Тез. докл. II Рос. симп., 18 - 20 мая 1993 г., Пущино. - Пущино, 1993. - С. 168.

79.Славова И.В. Получение гаплоидных растений из неоплодотворённых семяпочек сахарной свёклы В. vulgaris в условиях in vitro / И.В. Славова, Е.Г. Рафаилова // Биология культивируемых клеток и биотехнология растений. -М.: Мир, 1991 -С. 157-162.

80.Таратонов H.A. Влияние экзогенных факторов на рост и развитие регенерантов в процессе формирования дигаплоидных форм сахарной свеклы: Автореф. дис. канд. с.-х. наук / H.A. Таратонов. - Рамонь, 1999. -28с.

81.Титова И.В. Включение методов культуры in vitro в процесс создания исходного материала при межвидовой гибридизации лука / И.В.Титова // Биология культивируемых клеток и биотехнология. Новосибирск, 1988.-Т. 2.-С. 233.

82.Тодераш Л.Г. Использование культуры in vitro зародышей томата в селекции растений / Л.Г. Тодераш // Биология культивируемых клеток и биотехнология: Тезисы докл. междунар. конф., 2-6 авг. 1988 г., Новосибирск. - Новосибирск, 1988. - Т. 2. - С. 238-239.

83.Тырнов B.C. Гаплоидия у растений: Научное и прикладное значение / B.C. Тырнов. -М.: Наука, 1998. - 53 с.

84.Тюкавин Г.Б. Культура неопылённых семяпочек моркови / Г.Б. Тюкавин, H.A. Шмыкова // Селекция и семеноводство овощных культур в XXI веке: Труды междунар. научно-практ. конф., 24-27 июля 2000 г., Москва,- М., 2000. - Т. 2. - С. 275-277.

85.Тюкавин Г.Б. Разработка методов андро- и гиногенеза для создания дигаплоидных линий в селекции Fj гетерозисных гибридов овощных культур / Г.Б. Тюкавин, H.A. Шмыкова // Гетерозис

сельскохозяйственных растений, Москва, 1-5 дек. 1997 г.: Тезисы докл. -М., 1997.-С. 161-162. 86.Шпота В.И. Рекомендации по интенсивной технологии возделывания ярового рапса и сурепицы / В.И. Шпота, Э.Б. Бочкарева и др. -Краснодар, 1987. - 24 с. 87.Эмбриология зерновых, бобовых и овоще-бахчевых возделываемых растений / Под ред. М.С. Яковлева. - Кишинёв: Штиница, 1987. - 224 с.

88.Akbar М.А. Resynthesis of Brassica napus for earliness and daylength iinsensitivity / М.А. Akbar // Dissertation. - Uppsala. - 1987. - 75 p.

89.Agnihotri A. Production of Eruca - Brassica hybrids by embryo rescue / A. Agnihotri, V. Gupta, M.S. Laksiimikumaran, K.R. Shivanna, S. Prakash, V. Jagannathan // Plant. Breed. - 1990. - Vol. 104, № 4. - P. 281 - 289.

90. Ao G. In vitro induction of haploid plantlets from unpollinated ovaries of corn (Zea mays L.) / G. Ao, S. Zhao, G. Li // Acta Genet. Sinica. - 1982. -№9.-P. 281-283.

91.Arnison P.G. Genotype-specific response of cultured broccoloi (Brassica oleracea var. italica) anthers to cytokinins / P.G. Arnison, P. Donaldson, A. Jackson, C. Semple, W.A. Keller // Plant. Cell Tiss. Org. Cult. - 1990. -Vol. 20.-P. 217-222.

92.Ayotte R. The transfer of triazine resistance from B. napus to B. oleracea L. I. Production of hybrids through embryo culture / R. Ayotte, P.M. Harney, V. Souza Machado // Euphytica. - 1987. - Vol. 36. - P. 615 - 624.

93.Banga S.S. Spontaneous haploidy in Brassica napus / S.S. Banga, K.S. Labana // Cruciferae Newsl. - 1986. - № 11. - P. 54-55.

94.Baillie A.M.K. In vitro culture of isolated microspores and regeneration of plants in Brassica campestris / A.M.K. Baillie, D.J. Epp, D. Hutcheson, W.A. Keller / Plant Cell Rep. - 1992. - Vol. 11. - P. 234-237.

95.Bajaj Y.P.S. Interspecific hybridization of Brassica napus and B. juncea through ovary, ovule and embryo culture / Y.P.S Bajaj, S.K. Mahajan, K.S. Labana // Euphytica. - 1986. - Vol. 35. - P. 103-109.

96.Barcikowska B. On the way to yellow seeded Brassica napus L. hybrids of Brassica campestris x B. oleracea and B. oleracea x B. carinata yelow-

iL

seeded / B. Barcikowska, E. Zwieczykowska, M. Baliska // Proc. 7 Intern. Rapeseed Congr. - 1987. -Vol. 2. - P. 492-495.

97.Batra V. Intergeneric hybridization between Diplotaxis siifolia, a wild species and crop brassicas / V. Batra, S. Prakash, K.R. Shi vanna // Theor. Appl. Gen. - 1990. - Vol. 80, № 4. - P. 537 - 541.

98.Brown J. Intergeneric hybridization between Sinapis alba and Brassica napus / J. Brown, A. P. Brown, J. B. Davis, D. Erickson // Euphytica. -1997. - Vol. 93, № 2. - P. 163 - 168.

99.Bundgaard P.G. Selection in protoplast culture of Brassica napus resistant to toxins from Alternaria brassicae / P.G. Bundgaard, L. Buchwaldt // GCIRC Bull.-1989.-№4.-P. 20.

100. Burnett L. Embryogenesis and plant regeneration from isolated microspores of Brassica rapa L. ssp. oleifera / L. Burnett, S. Yarrow, B. Huang // Plant Cell Rep. - 1992. - Vol. 11. - P. 215-218.

101. Campion B. Induction of haploid plants in onion {Allium cepa L.) by in vitro / B. Campion, C. Alloni // Plant Cell, Tissue and Organ Cult. - 1990. -Vol. 20, № l.-P. 1-6

102. Chekurov V.M. Effect of inbreeding and grouth regulators on the in vitro androgenesis of wheatgrass, Agropyron glaucum / V.M. Chekurov, E.P. Razmakhnin // Plant Breed. - 1999. - Vol. 118, № 6. - C. 571-573.

103. Chèvre A.M. Comparison of somatic and sexual Brassica napus -Sinapis alba hybrids and their progeny by cytogenetic studies and molecular characterization / A.M. Chèvre, F. Eber, E. Margale, M.C. Kerlan, C. Primard, F. Vedel, M. Delseny, G. Pelletier // Genome. - 1994. - Vol. 37, № 3.-P. 367-374.

104. Chuong P.V. The use of haploid protoplast fusion to combine cytoplasmic atrazine resistance and cytoplasmic male sterility in Brassica

napus / P.V. Chuong, W.D. Beversdore, A.D. Powell, K.P. Pauls // Plant. Cell. Tissue and Organ Culture. - 1988. - Vol. 212, № 2. - P. 181-184.

105. Chuong P.V. Effects of donor genotype and bud sampling on microspore culture of Brassica napus / P.V. Chuong, C. Deslauriers, L.S. Ott, W.D. Beversdorf// Can. J. Bot. - 1988. - Vol. 66. - P. 1653-1657.

106. Darrorez G. La selection du colza / G. Darrorez // Cultivar. - 1981. -№ 151.-P. 16-17.

107. Delounne R. Intergeneric hybridization of Diplotaxis erucoides with B. napus. I. Cytogenetic analysis of Fj and BCj progeny / R. Delounne, F. Eber, A.M. Chevre // Euphytica. - 1989. - Vol. 41, № 1-2. - P. 123 - 128.

108. Diederichsen E. The use of ovule culture in reciprocal hybridization between B. campestris L. and B. oleracea L. / E. Diederichsen, M.D. Sacristan // Plant Breeding. - 1994. - Vol. 113. - P. 79 - 82.

109. Dietert M.F. Effects of genotype on in vitro culture in genus Brassica / M.F. Dietert, S.A. Barron, O.C. Joder // Plant Sci. Letters. - 1982. - Vol. 26.-P. 233-240.

110. Duijs J.G. Microspore culture is successful in most crop types of Brassica oleracea L. / J.G. Duijs, R.E. Voorrips, D.L. Visser, J.B.M. Custers // Euphytica. - 1992. - Vol. 60. - P. 45-55.

111. Dunwell J.M. Induction and growth of microspore-derived embryos of Brassica napus ssp. oleifera / J.M. Dunwell, M. Cornish, A.G.L. Decourcel, J.E. Middlefell-Williams // J. Exp. Botany. - 1983. - Vol. 34, № 149. - P. 1768-1778.

112. Dunwell J.M. Anther and ovaiy culture / J.M. Dunwell // Cereal Tissue and Cell Culture / S.W.J. Bright, M.G.K. Jones (ed.). - 1985. - Ch. 1. -P. 1-44.

113. Dunwell J.M. Influence of genotype, plant growth temperature and anther incubation temperature on microspore embryo production in Brassica napus ssp. oleifera / J.M. Dunwell, M. Cornish, A.G.L. Decourcel // J. Exp. Botany. - 1985.-Vol. 36, № 165.-P. 679-689.

114. Dun well J.M. Influence of preculture variables on microspore embryo production in Brassica napus ssp. oleifera cv. Duplo / J.M. Dunwell, M. Cornish // Annals of Botany. - 1985. - № 56. - P. 281-289.

115. Dunwell J.M. Role of sucrose in microspore embryo production in Brassica napus ssp. oleifera / J.M. Dunwell, N. Thurling // J. Exptl. Bot. -1985.-Vol. 36.- P. 1478-1491.

116. Frandsen K.J. The experimental formation of Brassica napus L. var. oleifera DC. and Brassica carinata Braun / K.J. Frandsen // Dansk Bot. Arkiv. - 1947. - Vol. 12. - P. 1 -16.

117. Gamborg O.L. Nutrient reguirentes of suspension cultures of soybean root cells / O.L. Gamborg, R.A. Miller, K. Ojima // Exp. Cell Res. - 1968. -Vol. 50.-P. 151-158.

118. Gemesne J.A. In vitro ginogenesis induction in Hungarian lines of onion (Allium cepa L.) / J.A. Gemesne, L. Martinovich // Zoldsegtermesztesi kut. intez. bull. - 1995. - Vol. 27. - C. 37-43.

119. Gerdemann-Knoerck M., Utilization of asymmetric somatic hybridization for the transfer of disease resistance from Brassica nigra to Brassica napus / M. Gerdemann-Knoerck, M.D. Sacristan, C. Braatz, O. Scheider//Plant Breed.-1994.-Vol. 113.-P. 106-113.

120. Gland A. Gehalt und Muster der Glucosinolate in Samen von resynthetisierten Rapsformen / A. Gland // Z. Pflanzenzücht. - 1982. - Vol. 88.-P. 242 -254.

121. Gland A. Genetic and exogenous factors affecting embryogenesis in isolated microspore culture of Brassica napus L. / A. Gland, R. Lichter, H.-G. Schweiger//Plant Physiol.- 1988.-Vol. 132.-P. 613-617.

122. Gowers S. Intercrossing Brassica napus and B. oleracea to introgress characters from kale to rape / S. Gowers, M.C. Christey // 10th Int. Rapeseed Congress. - Canberra, 1999. - P. 1147-1149.

123. Goyal R.K. Development of fertile Brassica juncea x B. tournefortii hybrids through embryo rescue / R.K. Goyal, J.B. Chowdhury, R.K. Jain // Cruciferae Newslett. Eucarpia. - 1997. - Vol. 19. - P. 19 - 20.

124. Gyulai G. Biotechnology of rapeseed (Brassica napus L.) / G. Gyulai, E. Kiss, L.E. Heszky // Acta Agronomica Hungarica. - 1992. - Vol. 41, № 3-4.-P. 277-287.

125. Hansen N.J.P. In vitro chromosome doubling with colchicines during microspore culture in wheat (Triticum aestivum L.) / N.J.P. Hansen, S.B. Andersen // Euphitica. - 1998. - Vol. 102, № 1. - P. 101 - 108.

126. Hosemans D. Induction of haploid plant from in vitro culture of unpollinated beet ovules (Beta vulgaris L.) / D. Hosemans, D. Bossoutrot // Z. Pflanzenzucht. - 1983. - Vol. 91, № 1. - S. 74-77.

127. Hossain M.M. Intergeneric and interspecific hybrids through in vitro ovule culture in the Cruciferae / M.M. Hossain, H. Inden, T. Asahira // Plant Sei.- 1988.-Vol. 58, № l.-P. 121-128.

128. Hossain M.M. In vitro ovule culture of intergeneric hybrids between Brassica oleracea and Raphanus sativus / M.M. Hossain, H. Inden, T. Asahira// Sei. hort. (Neth.). - 1990. - Vol. 41, № 3. _p. 181 - 188.

129. Huang Q.T. Embryological observations on ovary culture of unpollinated young flowers in Hordeum vulgare L. / Q.T. Huang, H.Y. Yang, C. Zhou // Acta Bot. Sinica. - 1982. - Vol. 24, № 3. - P. 295-300.

130. Inomata N. In vitro culture of ovaries of Brassica hybrids between 2x and 4x. I. Culture medium / N. Inomata // Jpn. J. Breed. - 1968. - Vol. 18. -P. 139-148.

131. Inomata N. Production of interspecific hybrids in Brassica campestris x B. oleracea by culture in vitro of excised ovaries. I. Development of excised ovaries in the crosses of various cultivars / N. Inomata // Jap. J. Genet. - 1978. - Vol. 53. - P. 161-173.

132. Inomata N. Interspecific hybrids between Brassica campestris and B. cretica by ovary culture in vitro / N. Inomata // Cruciferae Newslett. Eucarpia.- 1985.-Vol. 10.-P. 92-93.

133. Inomata N. Interspecific hybrids between Brassica campestris and B. bourgeaui by ovary culture in vitro/ N. Inomata // Cruciferae Newslett. Eucarpia.- 1986.-Vol. 11.-P. 14-15.

134. Inomata N. Interspecific hybrids between Brassica campestris and B. montana by ovary culture in vitro/ N. Inomata // Cruciferae Newslett. Eucarpia. - 1987. - Vol. 12. -P. 8 - 9.

135. Jahier J. Extraction of disomic addition lines B. napus - B. nigra and introduction of B. nigra type Phoma lingam resistance to rapeseed / J. Jahier, A.M. Tanguy, A.M. Chevre, X. Tanguy, M. Renard // 7th Int. Rapeseed Congress. - Poznan. - 1987. - Vol. 2. - P. 445 - 448.

136. Jain S.M. In vitro culture of anthers in Petunia hybrida and Brassica oleracea / S.M. Jain, S. Bagga, N. Bhalla-Sarin, S. Guha-Mukherjee, S.K. Sopory // Proc. of a National Symp. on Plant tissue culture, genetic manipulation and somatic hybridization of plant cells, Bombay, febr. 27-29, 1980. - Bombay, 1980. - P. 26-32.

137. Jain R.K. Genotypic and media effects on plant regeneration from cotyledon explant cultures of some Brassica species / R.K. Jain, J.B. Ghowdhury, D.R. Sharma, W. Friedt // Plant Cell Tissue Organ Cult. -1988.-Vol. 14.-P. 197-206.

138. Kaneko K. Production of interspecific hybrids between Brassica campestris and B. oleracea and intergeneric hybrids between Raphanus sativus and B. campestris by ovule culture / K. Kaneko, Y. Okafuji, 0. Matsumoto // Bull. Yamaguchi Agr. Exp. Sta. - 1996. - Vol. 47. - P. 6 - 13.

139. Kameya T. Induction of haploid plants from pollen grains of Brassica / T. Kameya, K. Hinata // Jpn. J. Breed. - 1970. - Vol. 20, № 2. - P. 82-87.

140. Keller J. Culture of unpollinated ovules, ovaries and flower buds in some species of the genus Allium and haploid induction via ginogenesis in

onion {Allium cepa L.) / J. Keller // Euphytica. - 1990. - Vol. 47, № 3. - P. 241-247.

141. Keller W.A. In vitro production of plants from pollen in Brassica campestris / W.A. Keller, T. Rajhathu, J. Lacapra // Can. J. Genet. Cytol. -1975.-Vol. 17.-P. 655-666.

142. Keller W.A. Embryogenesis and plant regeneration in B. napus anther culture / W.A. Keller, K.C. Armstrong // Can. J. Bot. - 1977. - Vol. 55, № 10.-P. 1383-1388.

143. Keller W.A. High frequency production of microspore derived plant from Brassica napus anther cultures / W.A. Keller, K.C. Armstrong // Z. Pflanzenzüchtg. - 1978. - Vol. 80. - P. 100-108.

144. Keller W. A. Stimulation of embryogenesis and haploid production in Brassica campestris anther cultures by elevated temperature treatments / W.A. Keller, K.C. Armstrong // Theor. Appl. Genet. - 1979. - Vol. 55. - P. 65 - 67.

145. Klimaszewska K. The production of haploids from Brassica hirta Moench (Sinapis alba L.) anther cultures / K. Klimaszewska, W.A. Keller I I Z. Pflanzenphysiol. - 1983. - Vol. 109, № 3. - P. 235-241.

146. Komatsu Y. Investigations on the progeny of haploid plants and embryo sac formation by diploid and haploid plants of Brassica napus / Y. Komatsu // Proc. Crop. Sei. Soc. Japan. - 1936. - Vol. 8. - P. 364-372.

147. Kudou R. Raising of Brassica interspecific hybrids by embryo culture / R. Kudou, Y. Fujime, N. Fukada // Acta Hort. - 1995. - Vol. 392, № 87 - P. 96.

148. Kumar R. Interspecific hybridization in Brassica juncea and Brassica tournefortii through embryo rescue and their evaluation for biotic and abiotic stress tolerance / R. Kumar, J.B. Chowdhury, R.K. Jain // Indian J. Exper. Biol. - 2001. - Vol. 39, № 9. - P. 911 - 915.

149. Kuo C.S. The preliminary studies on culture of unfertilized ovary of rice in vitro / C.S. Kuo // Acta Bot. Sinica. - 1982. - Vol. 24, № 1. - P. 33-38.

150. Kuriyama H. Studies on the haploid plant of Brassica carinata / H. Kuriyama, Y. Watanabe // Jpn. J. Breed. - 1955. - Vol. 5. - P. 1-5.

151. Leelavathi S. Somatic cell genetic studies in Brassica species. II. Production of androgenetic haploid plants in Brassica nigra (L.) Koch. / S. Leelavathi, V.S. Reddy, S.K. Sen // Euphytica. -1987. - Vol. 36. - P. 215-219.

152. Lelivelt C.L. Transfer of resistance to the beet cyst nematode Heterodera schachtii Schm. into the Brassica napus L. gene pool through intergeneric somatic hybridization with Raphanus sativus L. / C.L. Lelivelt, F.A. Krens // Theor. Appl. Gen. - 1992. - Vol. 83. - P. 887 - 894.

153. Lichter R. Anther culture of Brassica napus in a liquid culture medium / R. Lichter // Z. Pflanzenphysiol. - 1981. - Vol. 103. - P. 229 - 237

154. Lichter R. Induction of haploid plants from isolated pollen of Brassica napus / R. Lichter // Z. Pflanzenphysiol. - 1982. - Vol. 105. - P. 427-434.

155. Lillo C. Anther culture of cabbage. Influence of growth temperature of donor plants and medie composition on embryo yield and regeneration / C. Lillo, M. Hansen//Norw. J. Agr. Sei. - 1987.-Vol. l.-P. 105-109.

156. Loh C.S. Cytokinins and the regeneration of plantlets from secondary embryoids of winter oilseed rape, Brassica napus ssp. oleifera / C.S. Loh, Ingram D.S. // New Phytol. - 1983. - Vol. 95. - P. 349-358.

157. Loh C.S. The response of haploid secondary embryoids and secondary embryogenic tissues of winter oilseed rape to treatment with colchicine / C.S. Loh, Ingram D.S. // New Phytol. - 1983. - Vol. 95. - P. 359-366.

158. MacDonald M.V. Mutagenesis and haploid culture for disease resistance in Brassica napus / M.V. MacDonald, I. Ahmad, D.S. Ingram // Xll Eucarpia Congr. Göttingen. - 1989. - P. 22-27.

159. Mamar A. Production de plantes haploids de Gerbera jamesanii par culture in vitro d'ovules / A. Mamar // Can. J. Bot. - 1986. - Vol. 64, № 10. - P. 2355-2357.

160. Mathias R. Improved embryo rescue technique for intergeneric hybridization between Sinapis species and Brassica napus / R. Mathias // Cruciferae Newslett. - Eucarpia, 1991. - Vol. 14/15. - P. 90 - 91.

161. Meynet J. Possibilities of obtainment and utilization of doubled haploids in Gerbera / J. Meynet // «Gen. Manipulat. Plant Breed.», Proc. Int. Symp., Berlin (West), Sept. 8-13,1985.-Berlin, New York, 1986.-P. 319-321.

162. Mohapatra D. Hybridization in Brassica juncea X B. campestris through ovary culture / D. Mohapatra, Y.P.S. Bajaj // Euphytica. - 1988. -Vol. 37,№1.-P. 83 -88.

163. Momotaz A. Production of intergeneric hybrids between Brassica and Sinapis species by means of embryo rescue techniques / A. Momotaz, M. Kato, F. Kakihara // Euphytica. - 1998. - Vol. 103. - P. 123 - 130.

164. Morinaga T. Karyological studies on a spontaneous haploid mutant of Brassica napella / T. Morinaga, E. Fukushima // Cytologia. - 1933. - Vol. 4. -P. 457-460.

165. Murashige T. A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures / T. Murashige, F. Skoog // Plant Physiol. - 1962. -Vol. 15.-P. 473-497.

166. Naleczynska A., Cegielska T. Dihaploid production in Brassica napus L. by in vitro androgenesis / A. Naleczynska, T. Cegielska // Genet. Pollen.

- 1985. - Vol. 25, № 3. - P. 271 - 276.

167. Nishi S. Studies on the embryo culture in vegetable crops. III. On the condition affect to embryoculture of interspecefic hybrids between cabbage and Chinese cabbage / S. Nishi, M. Toda, T. Toyoda // Bull. Hort. Res. Sta.

- 1970.-A, №9.-P. 75- 100.

168. Ockendon D. J. Anther culture in Brussels sprouts (Brassica oleracea var. gemmifera). II. Effect of donor genotype on embryo yields / D. J. Ockendon // Ann. Appl. Biol. - 1985. - Vol. 107. - P. 101 -104.

169. Ockendon D. J. The ploidy of plants obtained from anther culture of cauliflowers (Brassica oleracea var. botrytis) / D. J. Ockendon // Ann. Appl. Biol. - 1988. - Vol. 113, № 2. - P. 319 - 325.

170. Olsson G. Undersokning av sjalvfertiliteten hos artificiell raps (Investigation of self compatibility of artificial rapeseed) / G. Olsson // Kungl. Lantbr. Akad. Tidskr. - 1953. - Vol. 92. - P. 394 - 402.

171. Olsson G. Investigation on a haploid rape / G. Olsson, A. Hagberg // Hereditas. - 1955. - Vol. 41. - P. 227-237.

172. Olsson G. Species crosses within the genus Brassica. I. Artificial Brassica juncea Coss. / G. Olsson // Hereditas. - 1960. - Vol. 46. - P. 171 - 222.

173. Osolink B. Stimulation of androgenesis in white cabbage (Brassica oleracea var. capitata) anthers by low temperature and anther dissection / B. Osolink, B. Bohancec, S. Jelaska // Plant Cell Tiss. Org. Cult. - 1993. - Vol. 32.-P. 241-246.

174. Ozminkowski R.H. Comparing the resynthesis of Brassica napus L. by interspecific somatic and sexual hybridization 1. Producing and identifying hybrids / R.H. Ozminkowski, P. Jourdan // J. Am. Soc. Hortic. Sc. - 1994. -Vol. 119,№4.-P. 808-815.

175. Palmer C.E. Experimental haploidy in Brassica species / C.E. Palmer, W.A. Keller, P.G. Arnison // In vitro haploid production in higher plants. -1996.-Vol. 2.-P. 143-172.

176. Paulmann W. Effective transfer of cytoplasmic male sterility from radish (Raphanus sativus L.) to rape (Brassica napus L.) / W. Paulmann, G. Robbelen // Plant Breed. - 1988. - Vol. 100, № 4. - P. 299 - 309.

177. Phippen C. Genotype, plant, bud size and media factors affecting anther culture of cauliflowers (Brassica oleacea var. botrytis) I C. Phippen, D.J. Ockendon // Theor. Appl. Genet. - 1990. - Vol. 79, № 1. - P. 33-38.

178. Prakash S. Haploidy in Brassica nigra Koch. / S. Prakash // Euphytica. - 1973. - Vol. 22. - P. 613-614.

179. Prakash S. Haploid meiosis and origin of Brassica tournefortii Gouan. / S. Prakash // Euphytica. - 1974. - Vol. 23. - P. 591-595.

180. Primard C. Interspecific somatic hybridization between Brassica napus L. and Brassica hirta (Sinapis alba L.) / C. Primard, F. Vedel, C. Mathieu // Theor. Appl. Gen. - 1988. - Vol. 75, № 4. - P. 546 - 552.

181. Quazi M.H. Interspecific hybrids between Brassica napus L. and B. oleracea L. by embryo culture / M.H. Quazi // Theor. Appl. Gen. - 1988. -Vol. 75, №2.-P. 309-318.

182. Ramanujam S. A haploid plant in Toria (Brassica campestris) / S. Ramanujam // Proc. Indian Acad. Sei. B. - 1941.-Vol. 14.-P. 25-34.

183. Rangan T.S. Ovary, ovule, and nucellus culture / T.S. Rangan // Experimental embryology of vascular plants. - 1982. - P. 105 - 129.

184. Ripley Van L. Hybridization of Sinapis alba L. and. Brassica napus L. via embiyo rescue / Van L. Ripley, P.G. Arnison // Plant Breed. - 1990. - Vol. 104,№ l.-P. 26-33.

185. Robers M. B. Cytogenetics of Eruca sativa / Brassica rapa hybrids produced by embryo rescue / M. B. Robers, P. H. Williams, T. C. Osborn // Cruciferae Newslett. Eucarpia. - 1999. - Vol. 21. - P. 41 - 42.

186. Röbbel en G. Breeding for low content of glucosinolates in rapeseed / G. Röbbelen // Prod, and utilisat. of protein in oilseed crops. -1981. - Vol. 5. -P. 91-106.

187. Rongbai L. Development of a technique for in vitro unpollinated ovary culture in rice, Oryza sativa L. / L. Rongbai, M.P. Pandey, G.K. Garg, S.K. Pandey, Dwivedi D.K. // Euphytica. - 1998. - Vol. 104, № 3. - P. 159-166.

188. Roulund N. Effect of genotype, environment an carbohydrate on anther culture response in head cabbage (Brassica oleracea L. convar. capitata Alef.) / N. Roulund, L. Hansted, S.B. Anderson, B. Farestveit // Euphytica. - 1990. - Vol. 49. - P. 237-242.

189. Roulund N. Optimal concentration of sucrose for head cabbage (Brassica oleracea L. convar. capitata (L.) Alef.) anther culture / N.

Roulund, S.B. Andersen, B. Farestveit // Euphytica. - 1991. - Vol. 52, № 2. -P. 125-129.

190. Rudorf W. Uber die erzeugung und die eigenschaften synthetischer Rapsformen / W. Rudorf// Zschr. Pf. Zucht. - 1950. - Vol. 29. - P. 35 - 54.

191. Sacristan M.D. Different behavior of Brassica juncea and Brassica carinata as sources of Phoma Ungarn resistance in experiments of interspecific transfer to B. napus / M.D. Sacristan, M. Gerdemann // Plant Breed. - 1986. -Vol. 97,№4.-P. 304-314.

192. San Noeum L.H. Haploids d'Hordeum vulgare L. par culture in vitro d'ovaries non fécondés / L.H. San Noeum // Annual Amelior. Plantes. -1976. - Vol. 26, № 4. - P. 751-754.

193. Sarashima M. Intergeneric hybridization between Brassica oleracea and Raphanus sativu by embryo culture / M. Sarashima, Y. Matsuzawa, T. Kimura // Cruciferae Newslett. - Eucarpia, 1980. - Vol. 5. - P. 25.

194. Sarmah B.K. Diplotaxis tenuisiliqua x Brassica campestris hybrids obtained by embryo rescue / B.K. Sarmah, N. Sarla // Indian J. Genet. PI. Breed. - 1998. - Vol. 58. - P. 35 - 39.

195. Scoog F. Chemical regulation of growth and organ formation in plant tissues cultured in vitro / F. Scoog, C.O. Miller // Sym. Exper. Biol. - 1957. -Vol. 11.-P. 118.

196. Seguin-Swartz G. Anther culture in Brassica campestris / G. Seguin-Swartz, D.S. Hutheson, R.K. Downey // Proc. 6th Intl. Rapeseed Congr., Paris.- 1983.-P. 246-251.

197. Sharma K.K. Microspore embryogenesis in anther cultures of two indian cultivars of Brassica juncea (L.) Czern. / K.K. Sharma, S.S. Bhojwani // Plant. Cell Tissue Organ Cult. - 1985. - Vol. 4. - P. 235-239.

198. Sharma K.K. In vitro regeneration of shoot buds and plantlets from seedling root segments of Brassica napus L. / K.K. Sharma, T.A. Thorpe // Plant Cell Tissue Organ Cult. - 1989.-Vol. 18.-P. 129-141.

199. Sjodin C. Brassica naponigra, a somatic hybrid resistant to Phoma lingam / C. Sjodin, K. Glimelius // Theor. Appl. Gen. - 1989. - Vol. 77, № 5.-P. 651 -656.

200. Starzycki M. Production of B. carinata x B. campestris hybrids from crosses made in field and greenhouse conditions using in vitro embryo culture / M. Starzycki, J. Krzymanski // 7th Int. Rapeseed Congress. -Poznan, 1987. -Vol. 2. - P. 421 - 422.

201. Svirshchevskaya A.M. Production and performance of gynogenetic sugar beet lines / A.M. Svirshchevskaya, J. Dolezel // J. Sugar Beet Res. -2000.-Vol. 37, №4.-P. 117-133.

202. Takahata Y. Intergeneric (intersubtribe) hybridization between Moricandia arvensis and Brassica A and B genome species by ovary culture / Y. Takahata, T. Takeda // Theor. Appl. Gen. - 1990. - Vol. 80. - P. 38 - 42.

203. Takeshita M. Application of ovule culture to the production of intergeneric or interspecific hybrids in Brassica and Raphanus / M. Takeshita, M. Kato, S. Tokumasu // Jap. J. Genet. - 1980. - Vol. 55, № 5. -P. 373 -387.

204. Tang K. A comparison of ovary, ovule and embryo culture in producing hybrids from wide crosses among rapid cycling Brassica species and Raphanus / K. Tang, P.H. Williams // Cruciferae Newslett.- Eucarpia, 1988.-Vol. 13.-P. 82- 83.

205. Thomas E. Embryogenesis from microspores of Brassica napus / E. Thomas, G. Wenzel // Z. Pflanzenzuchtg. - 1975. - Vol. 74. - P. 79-81.

206. Thompson K.F. Production of haploid plants of marrow-stem kale / K.F. Thompson //Nature (London). - 1956. - Vol. 178. - P. 748.

207. Thompson K.F. Frequencies of haploid in spring oilseed rape (Brassica napus) / K.F. Thompson // Nature (London). - 1969. - Vol. 178. -P. 748.

208. Thurling N. The influence of donor genotype and environment on production of multicellular microspores in cultured anthers of Brassica

napus ssp. oleifera / N. Thurling, P.M. Chay // Ann. Botany. - 1984. - Vol. 54, №5.-P. 681-693.

209. Toriyama K. Ability of callus growth and shoot regeneration in the wild species of Brassicaceae / K. Toriyama, T. Kameya, K. Hinata // Plant Tissue Cult. Lett. - 1987. - Vol. 4, № 2. - P. 75-78.

210. UN. Genomic analysis of Brassica with special reference to the experimental formation of B. napus and peculiar mode of fertilization / N. U // Japanese Journal of Botany. - 1935. - № 7. - P. 389 - 452.

211. Vivadilova M. Anther cultures of Brassica napus L. / M. Vivadilova, C.S. Zelenkova, D. Tomaskova // Scienta Agriculturae Bohemoslovaca. -1987.-Vol. 19, №4.-P. 267-273.

212. Wang C.C. Induction of haploid plants from the female gametophyte of Hordeum vulgare / C.C. Wang, B.Q. Kuang // Acta Botanica Sinica. -1981. - Vol. 23, № 4.-P. 329-330.

213. Wenzel G. Anther culture of Solanum tuberosum / G. Wenzel, B. Foroughi-Wehr // Cell Culture and Somatic Cell Genetics of Plants. - 1984. -Vol. l.-P. 293.

214. Wijowska M. Autonomous endosperm induction by in vitro culture of unfertilized ovules of Viola odorata L. / M. Wijowska, E. Kuta, L. Przywara // Sexual Plant Reproduction. - 1999. - Vol. 12, № 3. - P. 164-170.

215. Yadav R.C. Interspecific hybridization in Brassica juncea XBrassica tournefortii using ovary culture / R.C. Yadav, P.K. Sareen, J.B. Chowdhury // Cruciferae Newslett. Eucarpia. - 1991. - Vol. 14/15. - P. 84.

216. Yang D.G. Maintenance of male sterile germplasm in Brassica rapa by in vitro propagation / D.G. Yang, N. Tarla, T. Unto, P. Seppo // Agricultural and food Science in Finland. - 2000. - Vol. 9. - P. 231-238.

217. Zenkteler M. In vitro culture of ovules of Triticum aestivum at early stages of embryogenesis / M. Zenkteler, W. Nitzsche // Plant Cell Rep. -1985.-Vol. 4, № 3.-P. 168-171.

218. Zenkteler M. In vitro fertilization of ovules of some species of Brassicaceae / M. Zenkteler // Plant Breed. - 1990. - Vol. 105, № 3. - P. 221 -228.

219. Zhang G.Q. Plant regeneration from the hybridization of Brassica juncea and B. napus through embryo culture / G.Q. Zhang, W. J. Zhou, H.H. Gu, W.J. Song, E.J.J. Momoh // Journal of Agronomy and Crop Science. -2003.-Vol. 189, №5.-P. 347-350.

220. Zhang G.Q. Resynthesizing Brassica napus from interspecific hybridization between Brassica rapa and B. oleracea through ovary culture / G.Q. Zhang, G.X. Tang, W.J. Song, W. J. Zhou // Euphytica. - 2004. - Vol. 140, №3.-P. 181-187.

221. Zhou C. Studies on the in vitro induction of callus from embryo sacs of rice / C. Zhou, H.Y. Yang // Hereditas. - 1981. - Vol. 3, № 5. - P. 10-12.

222. Zur I. Efektywnose androgenezy w kulturach mikrospor rzepaku (B. napus L. var. oleiferä) /1. Zur // Nowoczesne metody i techniki w hodowi i fizjologii roslin. - Warszawa, 2002. - Cz. 2. - S. 675-680.