Антимикробное действие дельта-эндотоксина Bacillus thuringiensis в отношении ряда фитопатогенных бактерий тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.07, кандидат биологических наук Климентова, Елена Георгиевна

• Климентова, Елена Георгиевна
• кандидат биологических наук
• 2001

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Климентова, Елена Георгиевна

Страница

Введение

Глава 1. Обзор литературы

Глава 2. Объекты и методы исследований

Глава 3. Антибактериальная активность Bacillus thuringiensis и продуцируемых культурой дельта-эндотоксинов в отношении фитопатогенных бактерий

Глава 4. Цитотоксйческое действие дельта-эндотоксина Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki, штамм Z-52 на клетки культуры Erwinia carotovora var. carotovora, штамм

Глава 5. Влияние дельта-эндотоксина Bacillus thuringiensis subsp. kurstalM»штамм Z-52 на дыхание клеток культуры Erwinialcafotovora var. carotovora, штамм

Глава 6. Лабораторные и полевые испытания бактерицидного действия дельта-эндотоксина Bacillus thuringiensis против фитопатогенных микроорганизмов

Выводы

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Антимикробное действие дельта-эндотоксина Bacillus thuringiensis в отношении ряда фитопатогенных бактерий»

Актуальность темы. Интерес к изучению микробов-антагонистов и антибиотических веществ в области сельскохозяйственной микробиологии появился сравнительно недавно. Первые сообщения о литическом действии бактерий-антагонистов на фитопатогенные организмы сделал Я.П. Худяков (1935). Вслед за этим были изучены многие виды бактерий и грибов, обладающих антибиотическим действием на возбудителей главным образом грибковых заболеваний у растений.

Как показали результаты исследований, применение микроорганизмов как агентов биологического метода в борьбе с фитопатогенными организмами в сельскохозяйственной микробиологии и защите растений оказался весьма успешным.

В настоящее время в этой области применяется в основном химический метод борьбы с болезнями растений, который, несмотря на очевидные преимущества, такие, как быстрота достигаемого результата и высокая эффективность, имеет и ряд существенных недостатков, среди, которых токсичность пестицидов для флоры и фауны, медленная детоксикация в окружающей среде, приводящая к загрязнению биоценозов, развитие резистентности вредных организмов к применяемому препарату, что приводит к увеличению норм расхода и кратности обработок. В районах регулярного применения химикатов все активнее развиваются устойчивые штаммы возбудителей болезней наблюдается также появление более стойких видов, ранее не представлявших опасности. Многие пестициды обладают мутагенными терратогенными, эмбриотоксическими и канцерогенными свойствами. По данным Всемирной организации здравоохранения, ежегодно в мире более двух миллионов людей заболевает, а свыше сорока пяти тысяч умирает в результате отравления пестицидами (Вершинина и Алимова, 2000).

Один из наиболее эффективных путей сокращения объема примененш пестицидов в растениеводстве — разработка и внедрение биологически) методов регуляции численности вредителей, фитопатогенных микроорганизма и сорняков в рамках интегрированной системы. Преимуществами микробиологических средств защиты перед химическими являются: высокая биологическая эффективность микробных препаратов по отношению к восприимчивым видам вредителей и болезней, последействие, сопровождающееся гибелью вредителей на последующих фазах развития и в ряде поколений, избирательность действия, щадящее влияние на энтомофагов и насекомых — опылителей, малая вероятность возникновения устойчивости патогенов и вредителей к микроорганизмам, безвредность для теплокровных животных и человека, отсутствие фитотоксичности и влияния на вкусовые качества растительной продукции, возможность применения микробопрепаратов в любую фазу вегетации растений, отсутствие опасности накопления токсических веществ в окружающей среде. По данным Дебабова В.Г. (2000 г.), в 1999 г. в мире произведено средств защиты растений на основе микробной биотехнологии около 5 тыс.тонн на сумму порядка 40 млн. долл. США.

В настоящее время широко ведется поиск, выделение и идентификация i микроорганизмов, полезных для использования в защите растений, изучение механизмов их взаимодействия с вредными организмами, оценка перспектив практического использования.

Энтомопатогенные бактерии Bacillus thuringiensis - уникальная группа микроорганизмов обладающих способностью к синтезу белкового дельта -эндотоксина, обеспечивающих эффективное высокоспецифическое действие на различных насекомых, нематод и клещей - паразитов растений и животных (Егоров, Юдина, 1989; Edwards et al., 1990; Payne et al., 1994). В последнее время появились сообщения о том, что дельта-эндотоксины, продуцируемые такими подвидами В. thuringiensis, как finitimus, kurstaki, gallería, thuringiensis проявляют антибиотическую активность по отношению к ряду аэробных микроорганизмов (Юдина, Бурцева, 1997). Появились также данные об антибиотическом действии токсинов, вырабатываемых В. thuringiensis, на фитопатогенные грибы (Смирнов, 2000).

Препараты на основе В. thuringiensis широко используются в настоящее время во всем мире. Отсутствие патогенности у штаммов В. thuringiensis послужило основанием для присвоения им Управлением по контролю за качеством продовольствия и лекарственных средств США статуса GRAS (generally regarded as safe) — вполне безопасных организмов (Харвуд, 1992).

Известно, что дельта-эндотоксин является основным действующим началом В. thuringiensis в отношении некоторых чувствительных насекомых, остальные токсины и споры лишь усиливают вызванную им патологию (Aronson et al., 1986).

В мировой литературе накоплен большой материал, описывающий состав, строение, физико-химические свойства кристаллов, а также механизмы действия дельта-эндотоксина на чувствительные к нему организмы.

Установлено, что мишенью действия токсина являются клетки эпителия средней кишки чувствительных насекомых (Persy & Fast, 1983). Дельта-эндотоксин, прежде всего, взаимодействует с рецепторами мембран чувствительных клеток (Himeno et al., 1985), имеются указания на I лектинподобный характер такого взаимодействия по остаткам N-ацетилгалактозамина (Knowles et al., 1984). Дельта-эндотоксины большинства подвидов В. thuringiensis оказывают практически одинаковое действие на мембраны чувствительных насекомых, несмотря на некоторое различие по молекулярной массе (Himeno et al., 1985). Вместе с тем, подвиды В. thuringiensis различаются по спектру и силе инсектицидного действия их кристаллов (Thomas & Ellar, 1983; Wu & Chang, 1985). Изучению механизма действия дельта-эндотоксина ряда подвидов В. thuringiensis на клетки чувствительных насекомых посвящено много работ. Установлено нарушение транспорта ионов, а также зависящего от ионов К+ транспорта аминокислот, активирование АТРаз, разобщение процессов окислительного фосфорилирования и дыхания, выражаемое в способности дельта-эндотоксина осуществлять протонодонорную функцию (Persy & Fast, 1983; Каменек и Штерншис, 1985; Sacci et al, 1986; Каменек, 1998).

Первые сообщения о возможностью антибиотического действия эндотоксина В. Лигш^егшв на микроорганизмы появились в 1982 г. (Егоров и соавт., 1982). Весьма перспективным представляется изучение антибиотических свойств дельта-эндотоксинов В. Лиш^епав в отношении различных фитопатогенных бактерий - аэробов, так как влияние этих токсинов на клетки прокариот и эукариот (в частности, насекомых) имеет общую природу (Егоров с соавт., 1990; Юдина с соавт., 1988).

Нами было проведено изучение чувствительности 12 штаммов различных родов фитопатогенных бактерий к четырем подвидам В. Липг^егшз и ее дельта-эндотоксину, позволившее сделать выводы, основные положения которых согласуются с результатами, полученными ранее различными авторами.

Сформулированные выводы можно рассматривать как перспективные для применения в биологическом методе защиты растений.

Цель и задачи исследования. Целью настоящего исследования явилось выявление бактерицидного действия В. Липп§1еп818 и ее дельта-эндотоксинов на фитопатогенные бактерии, выяснение особенностей механизма их взаимодействия с дельта-эндотоксином и разработка практических приемов использования дельта-эндотоксина В. 11шгт§1еп818 борьбе в борьбе с бактериозами растений.

В связи с этим были поставлены следующие задачи:

• изучить бактерицидное действие различны^}подвидов В. Шипг^егшз на

§ фитопатогенные бактерии;

• установить наиболее чувствительные к действию дельта-эндотоксина В. ^игт^еодв фитопатогенные бактерии;

• выявить особенности и механизм цитотоксического действия дельта-эндотоксина на клетки прокариот;

• изучить в условиях лабораторных и полевых испытаний бактерицидное действие наиболее активного дельта-эндотоксина В. Йндт^егшв БиЬБр kurstaki штамм Z-52 на фитопатогенные бактерии Erwinia carotovora var. carotovora штамм 115, вызывающие слизистый бактериоз капусты.

Научная новизна результатов исследований. Впервые проведено изучение бактерицидных свойств В. thuringiensis и дельта-эндотоксина в отношении 5 родов фитопатогенных бактерий.

Впервые было доказано (in vitro), что В. thuringiensis subsp. kurstaki и ее дельта-эндотоксины оказывают бактерицидное действие на бактерии -фитопатогены, вызывающие слизистый бактериоз капусты: Erwinia carotovora var. carotovora, штаммы 72, 115, 216. Показано, что величина этого эффекта зависит от рода тестируемого организма и концентрации дельта-эндотоксина. При совместном культивирование В. thuringiensis с бактериями -фитопатогенами на разных питательных средах наблюдалось изменение антибактериальной активности бацилл. Выявлены особенности цитотоксического действия дельта-эндотоксина на клетки культуры Е. carotovora. С помощью манометрических методов установлена способность дельта-эндотоксина резко стимулировать поглощение кислорода бактериальными клетками в первые минуты инкубации. В результате полевых испытаний выявилось наличие защитного эффекта при обработке раствором дельта-эндотоксина рассады капусты, инфицированной Е. саго^ога.

Практическая значимость работы. Результаты проведенной работы, показывающие бактерицидное действие В. thuringiensis и ее дельтасоздания новых экологически безопасных бактериальных препаратов на основе В. thuringiensis, направленных против бактериозов культурных растений.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на конференции молодых ученых УлГУ (Ульяновск, 1998), Межрегиональной научно-практической конференции «Экологические проблемы Среднего Поволжья» (Ульяновск, 1999), Первой Международной научной конференции молодых ученых и студентов «Актуальные проблемы современной науки» (Самара. 2000), Первом рабочем совещании микробиологов Поволжья эндотоксинов на фитопатогенные могут быть использованы для

Фундаментальные аспекты микробиологии» (Саратов, 2000), четвертой республиканской научной конференции «Актуальные экологические проблемы республики Татарстан» (Казань, 2000), Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы мониторинга антропогенно-нарушенных территорий» (Ульяновск, 2000).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 11 работ.

Объем диссертационной работы. Диссертация состоит из введения, 6 глав и выводов общим объемом 100 страниц компьютерного набора. Работа иллюстрирована 13 таблицами и 11 рисунками. Список литературы состоит из 158 наименования, в том числе 9S наименований на иностранном языке.

Заключение диссертации по теме «Микробиология», Климентова, Елена Георгиевна

Выводы

1. Установлено, что различные подвиды В. thuringiensis проявляют антимикробное действие в отношении ряда широко распространенных аэробных бактерий-фитопатогенов. Полученный эффект зависел как от вида микроорганизма, объекта воздействия, так и от свойств самих подвидов В. thuringiensis. Наиболее активным оказался подвид В. thuringiensis subsp. kurstaki штамм Z-52, который в разной степени подавлял развитие культур фитопатогенных бактерий.

2. Выявлено бактерицидное действие дельта-эндотоксина В. thuringiensis subsp. kurstaki штамм Z-52 на представителей некоторых особо чувствительных к токсину аэробных бактерий родов Erwinia и Xanthomonas. Величина этого действия зависела как от вида тестируемого организма, так и от концентрации дельта-эндотоксина. Литическое действие дельта-эндотоксина оказалось достаточно продолжительным и постепенно затухало лишь на 12-й день инкубации клеток культуры-фитопатогена с дельта-эндотоксином. Наиболее высокой удельной активностью по отношению к культуре Е. carotovora var. carotovora 115 обладала концентрация дельта-эндотоксина 0,25 мг/мл - 21,9отн.ед.

3. С помощью световой микроскопии установлено, что дельта-эндотоксин В. thuringiensis оказывает цитотоксический эффект на клетки культуры Е. carotovora. Клетки вакуолизируются, набухают и разрушаются.

4. Установлено, что в первые минуты инкубации суспензии клеток с дельта-эндотоксином происходит резкая стимуляция поглощения кислорода, которая прямо пропорциональна концентрации токсина. Эффект начального стимулирования поглощения кислорода в течение первых минут сменяется угнетением в период более 10 минут и практически прекращается через 30 минут. Такая динамика потребления кислорода характерна при обработке клеток веществами-разобщителями окислительного фосфорилирования и дыхания.

5. Результаты лабораторных (in vivo) и полевых испытаний подтвердили наличие оздоровительного эффекта при обработке раствором дельта-эндотоксина инфицированной рассады капусты: уменьшалось число погибших и заболевших растений, растений, образовавших недоразвитый кочан, урожайность капусты повышалась.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Климентова, Елена Георгиевна, 2001 год

1. Азизбекян Р. Р., Смирнова Т. А., Миненкова И. Б., Ребектиш Б. А. Лизогения у Bacillus thuringiensis //Микробиология. 1980. - Т. 49. - с. 961-968.

2. Ануфриев Э. Ф. Электронно-микроскопическое изучение кристаллов эндотоксина Bacillus thuringiensis var. dendrolimus //В: Энтомопатогенныебактерии и грибы в защите растений. 1985. - с. 135-145.п

3. Африкян Э. Энтомопатогенные бактерии. Успехи микробиологии., 1975, вып. 10; с. 148-172.

4. Билай В. И, Гвоздяк Р. И., Скрипаль И. Г. и др. Микроорганизмы -возбудители болезней растений. / Киев: «Наукова думка», 1988. 552с.

5. Бирюзова В. И., Лукоянова М. А., Гельман Н. С., Опарин А. И. Доклады АН СССР, 1964, 156, с. 198.

6. Бирюзова В. И., Мейсель М. Н. В кн.: «Молекулярная биология», М., «Наука», 1964, стр.316.

7. Бурдейная Т. В. Испытание бактериальных антагонистов в борьбе с бактериальным корневым раком малины. // Мол. ученые садоводам России: Тезисы докладов Всероссийского совещания, Москва, 20-21 июня, 1995.-М., 1995.-с. 225-227

8. Бурлак В. А. // Материалы Всес. конференции «Микроорганизмыстимуляторы и ингибиторы роста растений и животных». Ташкент, 1989.,з4.1, с. 34.

9. Вершинина В.И., Алимова Ф.К. Продукты на основе микробной биомассы / Микробная биотехнология.- Казань: Унипресс: ДАС, 2000.- с.368.

10. Гулий В. В., Иванов Г. М., Штерншис М. В. Микробиологическая борьба с вредными организмами. // М., «Колос», 1982, 270с.

11. Гулий В. В., Теплякова Т. В., Иванов Г. М. Микроорганизмы, полезные для биометода. Изд-во «Наука», Сибирское отделение., Новосибирск., 1981., 270с.

12. Далин М. В., Фиш Н. Г. Белковые токсины микробов. М.: Медицина, 1980, 224с.

13. Дебабов В. Г., Азизбекян Р. Р., Хлебалина О. Н. Выделение и предварительная характеристика экстрахромосомальных элементов ДНК Bacillus thuringiensis. Генетика, 1977, Т. 13, №3, С. 496-501.

14. Дебабов В.Г. I рабочее совещание микробиологов Поволжья, 3-5 октября 2000 года, Саратов.

15. Доспехов Б.А. Методика полевого опыта. М.: Колос, 1979. - 416 с.

16. Егоров Н. С. Микробы-антагонисты и биологические методы определения антибиотической активности. М.: «Высшая школа», 1965., 212с.

17. Егоров Н. С. Основы учения об антибиотиках. М.: «Высшая школа», 1986., 448 с.

18. Егоров Н. С., Лория Ж. К., Юдина Т. Г. Изучение свойств параспоральных кристаллов Bacillus thuringiensis. // Материалы Всесоюзного симпозиума по биологии клетки. Тбилиси., 1985., 4.1., с. 259.

19. Егоров Н. С., Юдина Т. Г. Производство и применение продуктов микробиологических производств. М.: ВНИИСЭНТИ Минмедбиопрома, 1989., вып. 6, 50 с.

20. Егоров Н. С., Юдина Т. Г., Баранов А. Ю. О корреляции между инсектицидной и антибиотической активностями параспоральных кристаллов Bacillus thuringiensis. // Микробиология. 1990. - Т. 59. - Вып. 3. с. 448-452.

21. Ивинскене В. JI. Роль фосфолипазы и термостабильного экзотоксина в патогенности Bacillus thuringuensis. Автореф. дисс. . канд. биол. наук. JL, 1984.- 17 с.

22. Ивинскене В. JL, Заянчкаускас П. А. Патологические изменения гемоцитов у гусениц под воздействием фосфолипазы. // Труды АН Лит. ССР. Сер. В. -1986.1. Т. 2 (33). с. 64-72.

23. Ивинскене В. Л., Заянчкаускас П. А. Патологические изменения гемоцитов у гусениц под воздействием термолабильного экзотоксина. // Труды АН Лит. ССР. Сер. В. 1986. - Т. 3 (95). - с. 43-50.

24. Каменек Л. К. Автореф. на соиск. уч. степени докт. биол. наук., М., 1998., 345 с.

25. Каменек Л. К. Структура, свойства и механизм действия 8-эндотоксина Bacillus thuringiensis. / В кн.: Энтомопатогенные бактерии и их роль в защите растений. Новосибирск., 1987, с. 42-57.

26. Каменек Л. К., Штерншис М. В. Влияние 5-эндотоксина Bacillus thuringiensis на активный транспорт ионов у насекомых. // Изв. СО АН СССР. Сер. биол. 1984.-Вып. 3.-е. 113-117.

27. Каменек Л. К., Штерншис М. В. Разобщающее действие 8-эндотоксина Bacillus thuringiensis. // Интегрированная защита растений от болезней и вредителей в Сибири. Новосибирск., 1985. с. 148-154.

28. Кандыбин и соавт. «Актуальные проблемы биологической защиты растений» / Труды конференции, Минск, 1998, с. 62-63.

29. Кандыбин, Смирнов Агро XXI, 1999, № 9, с. 11.

30. Лиховидов В. Е., Китик В. С., Тихоняк П. А. Герпетобий полей овощных культур в связи с проблемами экотоксикации. / В кн.: Проблемы почвенной зоологии (тезисы докладов VIII Всес. Совещ.), Ашхабад, 1984, кн. 1, с. 184-185.

31. Лукин А. А., Пермогоров В. И. Роль пептидных антибиотиков в регуляции клеточной дифференциации у бактерий. // Антибиотики. 1983. № 6. с. 28. с. 406.

32. Макарюнайте Ю. П. Хроматографическое разделение комплекса фосфолипаз Bacillus cereus и характеристика индивидуальных ферментов: Автореф. дис. . канд. биол. наук.- Вильнюс, 1985, 19 с.

33. Новикова Л. М., Попов Ф. А., Вельская С. И., Шабашова Т. Г. Возможность использования штамма Bacillus myc. 683 для защиты картофеля и капусты от болезней. // Вести академии сельскохозяйственных наук Беларусии. 1994. -№ 1. - с. 89-92, 126.

34. Пидопличко В. Н., Гарагуля А. Д. Антагонистическое действие бактерий родов Pseudomonas и Bacillus на возбудителей картофельной гнили озимой пшеницы. Микология и фитопатология. Т. 13., 1979.

35. Плохинский H.A. Математические методы в биологии. М.: МГУ, 1978. -265 с.

36. Рябченко Н. Ф., Алиханян С. Н. Бактериоциногенные плазмиды Bacillus thuringiensis. // Генетика. 1984. - 20, № 7. - с. 1067-1070.

37. Сазыкин Ю. О. Антибиотики как химические реагенты. // ВИНИТИ. 1984. с. 3.

38. Скулачев В. П. Биоэнергетика. Мембранные преобразователи энергии. М., «Высшая школа», 1989,270с.

39. Смирнова М. А., Богданова Г. Л., Гальперин М. Ю. Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 1987., № 10, с. 23.

40. Справочник пестицидов и агрохимикатов, разрешенных к применению в РТ.М.: Агрорус, 2000. 269с.

41. Степанов В. М., Честухина Г. Г. Структурные основы биологической специфичности эндотоксинов. // Материалы Всесоюзной Конференции «Пути совершенствования микробиологической борьбы с вредными насекомыми и болезнями растений». 1986., с. 207.

42. Харвуд К. Р. Бациллы. Генетика и биотехнология. М. "Мир". - 1992. - 530 с.

43. Хохряков М. К., Доброзракова Т. Л., Степанов^. М., Летова М. Ф. Определитель болезней растений. Изд. "Колос", Ленинград, 1966. 590 с.

44. Честухина Г. Г., Степанов В. М. Сравнительная биохимия 5-эндотоксинов и ферментов Bacillus thuringiensis. // Тез. Всесоюз. биохим. съезда. М.: Наука, 1985., Т. 1, с. 236.

45. Честухина Г. Г., Тюрин С. А., Остермах А. Л., Залунин И. А., Костина Л. И., Ходова О. П., Степанов В. М. Структурно-функциональные особенности энтомоцидного белка Bacillus thuringiensis. // Тез. Всесоюзн. биохим. съезда.

46. М.: "Наука", 1985. Т. 2. с. 20.

47. Шарга Б. М., Туряниц А. И. Микробы антагонисты возбудителей бактериального ожога плодов. // Защита растений, № 10, 1991.

48. Шарга Б. М., Туряниц А. И., Вьюницкая В. А. Антагонистическая активность споровых бактерий по отношению к некоторым представителям рода Erwinia. // Микробиологический журнал. 1994. - 56, № 1.-е. 1-25.

49. Штерншис М.В. Спектрофотометрический метод определения концентрации микроорганизмов в суспензии.// Бюлл.научно-техн.инф.- 1976. СибНИИЗХим. Новосибирск. - в. 16. - с. 44 -50.

50. Юдина Т. Г., Егоров Н. С., Лория Ж. К., Выборных С. Н. Биологическая активность параспоральных кристаллов Bacillus thuringiensis. // Изв. АН СССР. Сер. биол. 1988. - № 3. - с. 427- 436.

51. Юдина Т. Г., Милько Е. С., Егоров Н. С. Чувствительность диссоциатов Micrococcus puteus к действию 5-эндотоксина Bacillus thuringiensis. // Микробиология № 3. 1996. - Т. 65. - с. 365-369, 321-325.

52. Юдина Т. Г., Саламаха О. В., Олехнович Е. В., Рогатых Н. П., Егоров Н. С. Влияние источников углерода на биологическую активность и морфологию параспоральных кристаллов Bacillus thuringiensis. // Микробиология. 1992. -Т. 61.-е. 577-584.

53. Юдина, Т. Г., Бурцева Л. И. Действие 8-эндотоксинов четырех подвидов Bacillus thuringiensis на различных прокариот. // Микробиология, 1997. Т. 66. № 1.-е. 25-31.

54. Abrams A., ftQ Namara P., Johnson F. J. Biol. Chem., 1960, 235, 3659.I

55. Adang Michael J., Rocheleu Thomas A., Merlo Donald Y., Murray Elisabeth E. Mycogen Plant Sciences, Ync. № 369835; Заявл. 0601. 95. Опубл. 22. 10. 96; НПК 536/23.71. synthetic incecticidal crystal protein gene. Пат. 5567600 США, МПК6с 12 № 15/32.

56. Angus Т. A. Association of toxility with protein crystalline inclusion of Bacillus sotto Ischiwata // Canad. J. Microbiol. - 1956. - V. 2 - p. 122-131.

57. Aronson A. I., Fitz-James P. C. Structure and morphogenesis of the bacterial spore coat. // Bacterid. Rev. 1976. - V. 40. - p. 360-402.

58. Aronson A. J., Dong W. // J. Cell. Biochem. 1989. Suppl. 13 A. p. 151.

59. Aronson A. L., Beckman W., Dunn P. // Microbiol. 1984. V. 11 № 3. p. 171.

60. Aronson A. L., Beckman W., Dunn P. //Microbiol. Rev. 1986. V. 50. № 1. P. 1.

61. Asnis R., Vely V., Glick M. // J. Bacterid., 1956, 72, 314.

62. Baquero F., Moreno F. The microcins // FEMS Microbiol. Wett. 1984. V. 23. № 2-3. P. 117.

63. Baijac H., Bonnefoi A. A classification of strains of Bacillus thuringiensis Berliner with a key their differentiation. J. Invertebr. Pathol., 1968, V. 11, p. 335-347.

64. Baumann L., Okamoto K., Unterman B. M., Lynch M.' Y., Baumann P. Phenotypic Characterization of Bacillus thuringiensis and Bacillus cereus. // J. Invertebr. Pathol. 1984. - V. 44. - p.329-341.

65. Beeblee T. G. C., Bond R. P. M. Effect of an exotoxin from Bacillus thuringiensis on deoxyribonucleic acid depended ribonucleic acid polymerase in nuclei - from adult Sarcophaga bullata. // Biochem. J. - 1975. - V. 136.1. - p. 9-13.

66. Berliner E. Uber die Schlaffsucht der Mehlmottenrouppe (Ephestia Kuhniella Zell.) und ihen Erreger Bacillus thuringiensis, n. sp. // Z. Angew. Entomol. -1915.-V. 2.-p. 29-56.

67. Berliner E. Uber die Schlaffsucht der Mehlmottenrouppe. // L. Ges. Getreidew. -1911. -V. 3. -p. 63-70.

68. Bulla L. A., Kramer K. J., Bechtel O. B., Davidson L. I. Entomocidal proteinaceous crystal of Bacillus thuringiensis. // In: Microbiology, 1976. -Washington: D. C., 1976. p. 534-539.

69. Carlton B. C. Complex plasmid system of Bacillus megaterium. // Microbiology. 1976. - 24, № 1. - p. 394-405.

70. Chapman J. S., Carlton B. C. Conjugal plasmid transfer in Bacillus thuringiensis. // Plasmid Bacteria Conf. Urbana Inl. May 1984. N. Y.; L., 1985. P 453.

71. Chestukhina G. G., Kostina L. I., Mikhailova A. L., Yurin S. A., Klepikova F. S., Stepanov V. M. The main features of Bacillus thuringiensis S-endotoxin molecular structure. Arch, Microbiol., 1982, 132: 159-162.

72. Cooksey K. E. Purification of a protein from Bacillus thuringiensis toxic to a larvae of Lepidoptera.// Biochem.J. 1968. - V.106. - P.445-454.

73. Cooksey K. E., Donninger C., Norris J. R., Shankland D. Nerve-block effects of Bacillus thuringiensis protein toxin. // J. Invert. Pathol. 1969. - V. 13. - p. 461-452.

74. De Baijac H. Insect pathogens in the genus Bacillus, in: The Aerobic, Endospore-Forming Bacteria: Classification and Identification (R. C. W. Berkeley and M. Goodfellow, eds.), 1981, Academic Press, New York, pp. 241-250.

75. Egorov N. S., Yudina T. G. / Proc. 4th Europ. Congr. on Biotechnol. 1987 // Eds. by Nejissel O. M. et al. Amsterdam, 1987. V. 3, P. 550.

76. English L., Slatin S. L. Mode of action of delta-endotoxins from Bacillus thuringiensis: comparison with other bacterial toxins. // Insect Biochem. and Mol. Biol. 1992. V. 2. № 1. P.l-7.

77. Farkas-Himsley H. Bacteriocins are they broad-spectrum antibiotics? // J. Antimicrob. agents and Chemother. 1980. V. 6. №-4. P. 424.

78. Faust R. M. Nature of pathogenic process of Bacillus thuringiensis. // Compar. Pathol. 1984. - V. 7. -p. 91-141.

79. Feiteison J. S., Payne J., Kim L. Bacillus thuringiensis: insects and beyond. // Biotechnology. 1992. - 10.№ 1. - p. 271-275.

80. Fitz-James P. / J. Biophys. and Biochem. Cytol. 1960, 8, 507.

81. Gingrich R.E. A flotation procedure for producing sporefree crystals from commercial formulation of Bacillus thuringiensis J.Invert. Pathol., 1968,Q/.10, pp.180- 184.

82. Gonzales J. M., Dulmage H. T., Carlton B. C. Transfer of Bacillus thuringiensis plasmids coding delta toxin among strains of Bacillus thuringiensis and Bacillus cereus. // Proc. Nat. Acad. Sci. 1982. - 79. - p. 6591-6595.

83. Hannay C. L. Crystalline inclusions in aerobic sporeforming bacteria. // Nature. -1953.-V. 172.-p. 1004.

84. Heimpel A. M. A critical review of Bacillus thuringiensis var. thur. Berliner and other crystalliferous bacteria. // Ann. Rev. Entomol. 1967. - V. 12. - p. 287-322.

85. Heimpel A. M. A strain of Bacillus -cereus Fr. and Fr. pathogenic for the larch sawfly, Pristiphora erichsonin (Htg) // Can. Entomol. 1954. - V. 86. - p. 73-77.

86. Heimpel A. M. The ph in the gut and blood of the larch sowfly, Pristiphora erichsonii Htg and other insects with reference to the pathogenicityof Bacillus cereus Fr. and Fr. // Canad. J. of Zoology. 1955. - V. 33, № 2. - p. 99-106.

87. Heimpel. A. M., Angus T. A. The site of action of ciystalliferous Bacteria in Lepidoptera larvae. // J. Insect. Pathol. 1959. - V. 1. - p. 152-170.

88. Herrnstandt C., Soares G. G., Wilcox E. R., Edwards P. 1. A new strain of Bacillus thuringiensis with activity against Coleopterion insects. // Biotechnology, 1986, 4: 305-308.

89. Hill P. / Biochim. et Biophys. acta, 1962,27, 386.

90. Himeno M., Koyama N., Funato T., Komano T. Mechanism of action of Bacillus thuringiensis insecticidal delta-endotoxin on insect cells in vitro. // Agric. and Biol. Chem. 1985. -V. 49. - № 5. - p. 1461.

91. Hofte H., Whiteley H. Insecticidae crystal proteins of Bacillus thuringiensis. // Microbiol. Rev. 1989. V. 53, № 3. - p. 242-260.

92. Hoolf van Iddekinge B. J. L., Meyer D., Zabel P., Vlak J. M. Detection of sequences in Autographa californica nuclear polyhedrosis virus DNA, that act as autonomous replication sequences (ARS) in yeasts. // Arch. Virol. 1986. - V. 88, №3-4.-p. 279.

93. Huber H. E., Luthy D. Bacillus thuringiensis delta-endotoxin: composition and activation. / In: Q Davidson (ed.), Pathogenesis of enver tabrate microbial diseases, Allenheld, Osmun Fotowa, NJ, 1981, p. 2.

94. Huber H. E., Luthy D., Ebersold H.-R., Cordier J.-L. The subunits of the parasporal crystal of Bacillus thuringiensis: sise, lineage and toxicity. //Arch. Microbiol. 1981, 129: 14-18.

95. Iizura T., Faust R. M., Travers R. S. Comparative profiles of exrtachromasomal DNA on single and multiple crystalliferous strains of Bacillus thuringiensis var. kurstaki. // J. Fac. Agr. Hokkaido Univ. 1981b. - V. 60. - p. 143-151.

96. Ikezava H., Taquchi R. Phosphatidilinositolspecific phospholipase C. from Bacillus cereus and Bacillus thuringiensis. // Methods in Enzymology. N. Y.: Acad. Press, 1981. - V. 71. - p. 731 -741.

97. Israil A. M. Recent data on the molecular biology Bacteriocins. // Arch. Roum. Pathol. Exptlet. Microbiol. 1984, № 1, p. 5.

98. Kawata T. / J. Gen. Appl. Microbiol., 1963, 9, 1.

99. Kim Y. T., Gregory B. G., Ignoffo C. M. The (3-exotoxin of Bacillus thuringiensis: effects of Bacillus thuringiensis of macromolecules in an insects cell line. // J. Invert. Pathol. 1972. - V. 20, 3. - p. 284-287.

100. Knowles B. H., Thomas W. E., Ellar D. J. Wectinlike binding of Bacillus thuringiensis var. kurstaki lepidoptera specific toxin is an initial step in insecticidal action. //FEBS Lett. 1984. V. 168. № 2. P. 197.

101. Krieg A. Concerning exotoxin produced by vegetative cells of Bacillus thuringiensis and Bacillus cereus. // J. Invert. Pathol. 1971. - V. 17. - p. 134-135.

102. Krieg A. Transformatipns in the Bacillus cereus Bacillus thuringiensis group. Description of a new subspecies Bacillus thuringiensis var. toumanoffi. // J. Invert. Pathol. - 1969. - V. 17. P. 279-281.

103. Krieg A., de Baqac H., Bonnefoi A. A new serotype of Bacillus thuringiensis isolated in Germany: Bacillus thuringiensis var. darmstadiensis. // J. Invert. Pathol. 1968. - V. 10. - p. 428-430.

104. Lagret I., de Baijac H. Specific et principe active de Bacillus thuringiensis var. israelensis. // Bull, de la Soc. Path. Exotique. -1981.-74 (2). p. 216-227.

105. Lana N. J., Maddrel S. H. P., Harrison J. B., Orectron J. A. // Cell. Biol. Sut. Repts. 1987. - V. 11. - № 3. - p.229.

106. Lecadet M.-M., Deconder R. Biogenesis of the crystalline inclusion of Bacillus thuringiensis during sporulation. // Eur. J. Biochem. 1971. - V. 23. - p. 282-294.

107. Lereclus D., Lecadet M. M., Klier A., Riber J., Rapoport G., Dedonder R. Recent aspects of genetic manipulation in Bacillus thuringiensis. // Biochimie. -1985.-V. 67.-№ l.-p.91.

108. Luthy P. Insecticidal toxin of Bacillus thuringiensis. I I FEMS Microbiology Letters. 1980. - V. 8. - p. 1-7.

109. Lysenko O. The taxonomy of entomogenous bacteria. // Insect. Pathol. V. 2, N. Y.: Academic Press, 1963, p. 1-20.

110. Mandi J., Paulus H. Effects of linear gramicidin on sporulation and intra cellular ATP pools of Bacillus brevis. // Arch. Microbiol. 1985. - V. 143 - № 3. -p. 248.

111. Marquis R., Gerhardt P. / J. Biol. Chem., 1964, 239, 3361.

112. Marr A. / Annual. Rev. Microbiol., 1960, 14, 253.

113. Mattes O. Parasitore Krankheiten der Mehlmotten larven und versuche über ihre Verwendbarkeit als bioloqiaches Becampyungsmittel. / Sitzunberg Ges. Befoerd. Gesamten Naturwiss. // Marburg, 1927. V. 62. - p. 381-417.

114. Mc Connel E., Richards A.G. The production by Bacillus thuringiensis Berliner of a heat-stable substance toxic for insects. // Canad. J. Microbiol. -1959.-V. 5 (2).-p. 161-168.

115. Minnich S. A., Aronson A. I. Regulation of prototoxin synthesis in Bacillus thuringiensis. // J. Bacterid. 1984. - V. 158. - № 2. - p. 447.

116. Mitchell P. / Annual Rev. Microhol., 1959, 13, 407. Q

117. Mitchell P. / Biochem. Soc. Sympos., 1959, 16, 73.

118. Mitchell P. / В кн.: "Cell Interface Reactio". H. Brown (ed.) N. Y., 1963.

119. Miteva V. I. Characteristics of there plasmids of Bacillus thuringiensis (В.) 1 secotype. Докл. Болг. АН, 1978,131, № 8, p. 1059-1062.

120. Mudd S, Kawata Т., Payne J., Sail Т., Takagi A. /Nature., 1961, 189, 79.

121. Nielsen L., Abrams A. Biochem. and Biophys. Res. Communs., 1964,17, 680.

122. Norris J. R., Burges H. D. The identification of Bacillus thuringiensis. // Entomophaga, 1965, V. 10, № 1, p. 41.

123. Oeda K., Inouye K., Ibuchl Y. // J. Bacterid. 1989. V. 171. № 6. P. 3568.

124. Ohba M., Aizawa K. Crystals of Bacillus thuringiensis subsp yunnanensis are produced only in asporogenous cells. // J. Invert. Pathol. 1986. - V. 48. - p. 254-256.

125. Ohye D., Murrell W. / J. Cell Biol., 1962,14, 111.

126. Pendleton I. R., Morrison R.B. Separation of the spores and crystals or Bacillus thuringiensis. Nature, 1966, V.212, pp.228 729.

127. Pendleton I. R., Bernheimer A. W., Grushoff P. Purification and partical characterization of hemolisins from Pendleton I. R.,. // J. Inverterb. Pathol. -1973.-V. 21.-p. 131-135.

128. Percy J., Fast P. G. Bacillus thuringiensis crystal toxin: ultrastructural stadies of its effect on silkworm midgut cells. // Invert. Pathol. 1983. V. 41. - № 1. - P. 86.

129. Prasad S. V., Shethna Y. I. Mode of action of a purified antitumor protein from the proteinaceous crystal of Bacillus thuringiensis on Yoshida ascites Carcoma cells. // Antimicrob. Agents and Chemother. 1976. - V. 10, № 2. - p. 293.

130. Rogers H. J. The bacterial surface where does it begin and ends? // Antibiot. Inhib. Bact. Cell Surface Assembly and Funct.: Conf., Philadelphia 17-20 May, 1987. Wash. D. C.; 1988. P. 639-641.

131. Sadoff Ph. D. The antibiotics of Bacillus species: their possible roles in sporulation. // Progress in industrial microbiol. / Ed. Hockenhull O. J. D. 1972. V. 11.P. 1.

132. Scherrer P. Molecular elastic gel network structure of the Bacillus megaterium cell wall. // Abstr. Annu. Meet. Amer. Soc. Microbiol. 1986. 86th Annu. Meet., Wash. D. C., 23-28 March, 1986. Wash D. C. 1986. P. 191.

133. Scherrer P., Luthy P., Trumpi B. // Appl. Microobiol. 1973. V. 25. № 4. P. 644.

134. Schneft H. E., Wong H. C., Whiteley H. R. The amino acid sequence of a crystal protein from Bacillus thuringiensis deduced from the DNA base sequence. //J. Biol. Chem. 1985. V. 260. № 10. P. 6264.

135. Sebesta K., Horska K., Vankova J. Isolation and properties of the insecticidal exotoxin of Bacillus thuringiensis var. gelechiae. // Auct. Collection Czechoslov. Chem. Commun. 1969. - V. 34. - p. 891-900.

136. Shestukhina G. G., Kostina A. L., Mikhailova S. A. The main features of Bacillus thuringiensis delta-endotoxin molecular structure. // Arch. Microbiol. -1982.-V. 132.-p. 159-162.

137. Shivakunar A. G. // J. Bacterid. 1986. V. 116. № 1. P. 194.

138. Singer S. Use of entomogenous bacteria against insects of public health importance. / Develop. Ind. Microbiol., Houston. Tex., 1978. Arlington, Va, 1979, p. 117-122.

139. Smith N. R., Gordon R. E., Clark F. E. Aerobic mesophilic spore forming bacteria. // US Department of Agriculture monograph Washington, 1952. - p. 16.

140. Somerville H. J., Jones M. L. DNA competition studies within the Bacillus cereus group of Bacilli. // J. Gen. Microbiol. 1972. - V. 73. - p. 257-265.

141. Thomas W. E., Ellar D. J. Bacillus thuringiensis var. israelensis crystal 5-endotoxin: effects on insect and mammalian cells in vitro and in vivo. // J. Cell Sci. 1983. V. 60. №3. P. 181.

142. Thwaites J. J., Surana V. C., Jones A. M. Mechanical properties of Bacillus subtilis cell walls: effects of ions and lysozim. // J. Bacterid. 1991. V. 1*73. № 1. P. 204-210.

143. Tissieres A., Slater E. / Nature, 1955, 176, 736.

144. Toumanoff C. Etude comparative de la souche toxigene de Bacillus cereus var. sotto (Ischiwata) agent pathogene de la flacherie des vers a sole an Japon. // Ann. Inst. Pasteur. 1955. - V. 83 (3). - p. 384-387.

145. Travers R. S., Faust R. M., Reichelderfer C. F. Effects of Bacillus thuringiensis var. kurstaki delta-endotoxin on isolated lepidopteran mitochondria. // J. Invert. Pathol. 1976. - V. 28. - p. 351 -356.

146. Tyrell D. J., Bulla L. A., Andrews R. E., Kramer K. J., Davidson L. I., Nordin P. Comparative biochemistry of entomocidal parasporal crystals of selected Bacillus thuringiensis strains. // J. Bacteriol. 1981. - V. 145. - p. 1052-1062.

147. Vidaver A. K. Bacteriocins: the fiture and reality. // Plant Disease: 1983. V. 67. №5. P. 471.

148. Weibull C., Greenawalt I., Low. H. / J. Biol. Chem. 1962, 237, 847.

149. Winder W. R., Whiteley H. R. // J. Bacteriol. 1989. V. 171. № 2. P. 965.

150. Wu D., Chang F. N. Cynergisn in mosquitocidal activity israelensis crystal. // FEBS Lett. 1985. V. 190. № 2. P. 232.