Антифунгальное действие дельта-эндотоксина Bacillus Thuringliensis как экологически безопасного агента защиты растений тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.16, кандидат биологических наук Тюльпинева, Анна Александровна

• Тюльпинева, Анна Александровна
• кандидат биологических наук
• 2003

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Тюльпинева, Анна Александровна

введение.

глава 1. обзор литературы.

1.1.1. Основные типы болезней, вызываемые фитопатогенными грибами.

1.1.2. Современные методы зашиты растений.

1.1.3. Возможности биологических средств защиты растений от грибных болезней

1.1.4. Теоретические предпосылки использования антибиотических веществ в качестве экологически безопасных средств для борьбы с фитопатогенными грибами.

1.2.1. Бактерия В. ттлшогеыбю и современные направления её использования.

1.2.2. Токсины В. тнишЫсшыБге.

1.2.3. Белковый кристаллический дельта-эндотоксин.

1.2.4. Механизмы действия дельта-эндотоксина В. тнишмзшшБ.

1.2.5. Безопасность препаратов на основе В. тнтшсшыбб и их Сиу-токсинов.

глава 2. объекты и методы исследований.

глава 3. антифунгальная активность дельта-эндотоксина в. тникшсиЕ^ге в отношении ряда фитопатогенных грибов.

глава 4. фунгистатическое действие дельта-эндотоксина в. тниипчсшчбк на прорастание спор а. виазвюае.

глава 5. влияние дельта-эндотоксина в. 1шлшгс1е№18 на дыхание клеток культур фитопатогенных грибов.

глава 6. возможности использования дельта-эндотоксина для подавления грибных фитопатогенов.

6.1. Влияние дельта-эндотоксина на развитие фитофтороза плодов томата при хранении.

6.2. Действие дельта-эндотоксина на развитие корневой гнили злаковых культур . 90 выводы. литература.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Антифунгальное действие дельта-эндотоксина Bacillus Thuringliensis как экологически безопасного агента защиты растений»

Актуальность темы.

Предотвращение загрязнения окружающей среды становится одной из наиболее актуальных проблем современности. Интенсивное использование синтезированных пестицидов для борьбы с вредителями и болезнями растений привело, особенно в последние десятилетия, к насыщению биосферы химическими веществами, токсичными для человека, животных, полезной флоры и фауны (Федоров, Яблоков, 1999). Вред пестицидов не исчерпывается только их прямым токсическим воздействием, так как в процессе разложения может происходить образование метаболитов, обладающих повышенной токсичностью и устойчивостью (Минеев с соавт., 1991).

Помимо этого, некоторые пестициды отличаются мутагенными, канцерогенными и тератогенными свойствами, могут изменять иммунный статус, нарушать репродуктивные функции (Ракитский, 2001). Убедительные данные свидетельствуют о том, что именно применение пестицидов вносит сегодня значительный вклад в ухудшение здоровья населения (Майрапетян, Татевосян, 2001).

Агрессивная политика химизации сельского хозяйства приводит не только к загрязнению окружающей среды, но и снижению эффективности традиционно используемых ядохимикатов в результате возникновения у фитопатогенов резистентности к ним. Известно, что снижение биологической эффективности химических препаратов достигает 20-60% (Буга с соавт., 2000; Рябчинская, Харченко, 2002). Вместе с тем, потери сельскохозяйственной продукции в результате поражения агроценозов болезнями, вредителями и сорняками в период 1960-1990гг. оставались в мире практически неизменными, составляя ежегодно 30-40% (Харина, 2000), поэтому необходимость защиты растений безальтернативна.

В связи с этим, в последнее время происходит переориентация стратегии и тактики систем защиты растений от фитопатогенов в направлении расширения ассортимента и объёма применения различных биологических препаратов.

Известно, что наибольшей селективностью и экологичностью обладают биопрепараты на основе микроорганизмов или продуктов их жизнедеятельности.

Микробиологические средства защиты растений имеют ряд преимуществ перед химическими, которые сводятся к следующему: высокая экологическая безопасность, достаточная биологическая эффективность, избирательность действия, безвредность для теплокровных животных и человека, отсутствие фитотоксичности и отрицательного влияния на вкусовые качества растительной продукции, отсутствие опасности накопления токсических веществ в окружающей среде (Лиховидов с соавт., 1986).

Одной из наиболее перспективных и широко используемых в качестве основы биопрепаратов является спорообразующая бактерия Bacillus thuringiensis. На её основе разработан ряд отечественных и зарубежных препаратов: энтобактерин, битоксибациллин, дендробациллин, лепидоцид, гомелин, дипел и др., в своей совокупности они составляют 90-95% биопрепаратов, используемых в сфере защиты растений от вредителей (Вершинина, Алимова, 2000; Захаренко, 2003).

Такие препараты признаны Управлением по контролю за качеством продовольствия и лекарственных средств США вполне безопасными для человека и окружающей среды (Харвуд, 1992).

Главным токсическим компонентом бактериальных инсектицидов на основе В. thuringiensis являются параспоральные кристаллы дельта-эндотоксинов. Установлено, что объектом его действия являются клетки эпителия средней кишки чувствительных насекомых (Percy, Fast, 1983). Дельта-эндотоксин, прежде всего, взаимодействует с рецепторами мембран чувствительных клеток, формируя в них специфические каналы-поры (Himeno et al., 1987). Установлено также нарушение транспорта ионов, зависящего от ионов К+ транспорта аминокислот, активирование АТРаз, разобщение процессов окислительного фосфорилирования и дыхания (Percy, Fast, 1983; Каменёк, Штерншис, 1985).

Кроме инсектицидного действия дельта-эндотоксины, вырабатываемые некоторыми подвидами В. thuringiensis, а именно spp. thuringiensis, finitimus, kurstaki, galleriae, проявляют антибиотическую активность по отношению к ряду аэробных микроорганизмов (Егоров с соавт., 1990; Юдина, Бурцева, 1997), подавляют рост опухолевых клеток млекопитающих. Имеются также данные об антибиотическом действии на фитопатогенные грибы спорокристаллического комплекса В. thuringiensis (Кандыбин, Смирнов, 1999; Смирнов, 2000) и дельта-эндотоксинов подвидов finitimus, wuhanensis (Юдина, Егоров, 1996). Тем не менее, возможности применения В. thuringiensis и её дельта-эндотоксинов в борьбе с грибными фитопатогенами остаются малоизученными.

Известно, что пути окислительного синтеза АТР имеют общие черты у всех аэробных организмов. Тем самым, возможно предположить наличие единого специфического механизма действия дельта-эндотоксина В. thuringiensis на чувствительные эукариотные организмы, включая фитопатогенные грибы. Изучение данных закономерностей может служить теоретической основой для разработки путей практического использования полученных результатов. Цель и задачи исследования.

В связи с вышеизложенным целью настоящей работы явилось установление антибиотической активности и особенностей механизма действия дельта-эндотоксина В. thuringiensis subsp. kurstaki в отношении фитопатогенных грибов различных таксономических групп, а также разработка практических приёмов их использования в борьбе с грибными патогенами растений.

Для достижения указанной цели в работе решались следующие задачи: 1. Выявить чувствительные к дельта-эндотоксину В. thuringiensis subsp. kurstaki фитопатогенные грибы: Rhizoctonia solani Kuhn., штамм S 160, Fusarium graminearum Schwabe, Fusarium oxysporum (Schlecht.) Snyd. et Hans., штамм

-6137, Fusarium oxysporum f.sp. lycopersici, Alternaría brassicae (Berk.) Sacc, Bipolaris sorokiniana (Sacc.) Shoemaker, Phytophthora infestans (Mont.) dBy, штаммы 3 и 5.

2. Определить характер фунгицидного действия дельта-эндотоксина В. thuringiensis subsp. kurstaki.

3. Выявить особенности механизма действия дельта-эндотоксина на клетки чувствительных микромицетов.

4. Изучить в условиях лабораторных и вегетационных опытов фунгицидное действие дельта-эндотоксина В. thuringiensis subsp. kurstaki на болезни растений, вызываемые P. infestans и F. graminearum.

Научная новизна результатов исследований.

Впервые дана оценка действия дельта-эндотоксина В. thuringiensis в отношении представителей 5 родов фитопатогенных грибов.

Установлено, что дельта-эндотоксин B.thuringiensis subsp. kurstaki обладает фунгистатическим действием по отношению к протестированным микромицетам. Наиболее чувствительными к дельта-эндотоксину оказались фитопатогенные грибы - P. infestans, R. solani, В. sorokiniana, наименее

A.brassicae. Степень чувствительности зависит от биологических свойств тест-культуры, фазы роста грибов, скорости радиального роста мицелия и концентрации токсина.

Показано, что в первые минуты инкубации суспензии клеток культур грибов F. graminearum, F. oxysporum f. sp. lycopersici, P. infestans с дельта-эндотоксином происходит резкая стимуляция поглощения кислорода, что характерно при обработке клеток веществами-разобщителями окислительного фосфорилирования и дыхания. Практическая значимость работы.

Выявленный фунгистатический эффект дельта-эндотоксина

B. thuringiensis в отношении фитофтороза плодов томата в условиях хранения и фузариоза злаковых культур в процессе вегетации может быть использован для разработки новых экологически безопасных бактериальных препаратов.

Применение таких препаратов возможно в период вегетации растений, для предпосевной обработки семян и в процессе хранения сельскохозяйственной продукции.

Положения, выносимые на защиту:

1. Чувствительность фитопатогенных грибов рр. Rhizoctonia, Fusarium, Alternaria, Bipolaris, Phytophthora к дельта-эндотоксину B.thuringiensis.

2. Характеристика культурально-морфологических признаков чувствительных микромицетов и их изменений под влиянием токсина.

3. Стимулирование дельта-эндотоксином потребления кислорода клетками фитопатогенных грибов как симптом разобщения окислительного фосфорилирования и дыхания.

4. Возможности практического применения дельта-эндотоксина для подавления фитопатогенных грибов в процессе вегетации растений и хранения сельскохозяйственной продукции.

Апробация работы.

Материалы диссертации доложены на I Международной научной конференции молодых учёных и студентов «Актуальные проблемы современной науки» (Самара, 2000), IV республиканской научной конференции «Актуальные экологические проблемы республики Татарстан» (Казань, 2000), XII всероссийской юбилейной конференции «Ферменты микроорганизмов» (Казань, 2001), Международной конференции «Актуальные вопросы экологии и организации здравоохранения» (Ульяновск, 2001), V Пущинской всероссийской конференции молодых учёных «Биология - наука XXI века» (Пущино, 2001), на Всероссийской научно-практической конференции «Проблемы плодородия почв на современном этапе развития» (Пенза, 2002), VII Пущинской всероссийской школе-конференции молодых учёных «Биология - наука XXI века» (Пущино, 2003), на кафедре экологии и генетики человека Ульяновского государственного университета. Публикации.

По материалам диссертации опубликовано 12 работ.

Структура и объём диссертационной работы.

Диссертация состоит из введения, литературного обзора, экспериментальных глав, выводов и приложения общим объёмом 136 страниц компьютерного набора. Работа иллюстрирована 13 таблицами и 21 рисунком. Список литературы состоит из 202 наименований, в том числе 76 наименований на иностранном языке.

Заключение диссертации по теме «Экология», Тюльпинева, Анна Александровна

Выводы

1. Выявлено фунгистатическое действие дельта-эндотоксина В.thuringiensis subsp.kurstaki в отношении ряда фитопатогенных грибов: R.solani, штамм S 160, F.graminearum, F.oxysporum, штамм 137, F.oxysporum f.sp.lycopersici, A.brassicae, B.sorokiniana, P.infestans, штаммы 3 и 5. Величина полученного эффекта зависит от вида микроорганизма, концентрации токсина и фазы развития грибов. Наибольшее подавление линейного роста отмечено у P.infestans, R.solani, B.sorokiniana (75-100%), наименьшую чувствительность наблюдали у A.brassicae (39%). Наиболее высокой активностью обладает токсин в концентрации 0,05% на начальной фазе развития мицелия.

2. Различная чувствительность к дельта-эндотоксину обусловлена составом клеточных стенок, скоростью радиального роста и морфологией микромицетов. Наибольшая чувствительность отмечена у культур, имеющих в составе клеточных стенок целлюлозу - P.infestans, большую скорость роста - P.infestans, B.sorokiniana, R.solani. Устойчивость A.brassicae к токсину может быть обусловлена малой скоростью роста мицелия, наличием меланинов в клеточной стенке и крупных спор.

3. Установлено, что сроки формирования ростовой трубки у спор A.brassicae под воздействием токсина замедлялись на 1-1,5 часа при снижении количества проросших спор на 47%. Вакуолизация клеток первичного мицелия происходила без их дальнейшего лизиса.

4. Показана резкая стимуляция поглощения кислорода в первую минуту инкубации суспензии клеток культур F.graminearum, F.oxysporum f.sp.lycopersici, P.infestans с дельта-эндотоксином. Такая динамика потребления кислорода характерна для действия разобщителей окислительного фосфорилирования и дыхания. Для F.graminearum, P.infestans, штамм 3 отмечено несколько максимумов усиления потребления кислорода, очевидно, связанных с включением альтернативных дыхательных цепей и гетерогенностью тест-культуры.

- 1035. Установлено, что токсин сдерживает распространение фитофтороза и уменьшает степень пораженное™ плодов томата на начальной фазе развития болезни. Биологическая эффективность действия токсина зависит от начальной степени поражения обрабатываемых плодов: 100,0% - при обработке плодов без внешних признаков поражения, 39,4% - первого балла поражения, 15,5% - второго балла, 16,7% - третьего балла и 0% - четвертого балла.

6. Предпосевная обработка дельта-эндотоксином семян овса на искусственном инфекционном фоне приводит к снижению развития корневой гнили на 19,520,7%, не влияя на её распространённость. Показана стимуляция токсином всхожести злаковых культур: овса на 3,0%, яровой пшеницы на 23,0%, озимой ржи на 9,0%. Токсин также достоверно увеличивал среднюю высоту растений яровой пшеницы и озимой ржи на начальной фазе роста. Высота растений яровой пшеницы под действием токсина в среднем увеличивалась на 18,7 мм, озимой ржи - на 23,3 мм.

- 104

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Тюльпинева, Анна Александровна, 2003 год

1. Акименко B.K. Альтернативные оксидазы микроорганизмов. - М.: Наука, 1989.-263 с.

2. Александрова A.B., Великанов JI.JÏ., Сидорова Т.П. Влияние гриба Trichoderma hazianum на почвенные микромицеты//Микология и фитопатология. 2000. - Т. 34. - №3. - С. 68-77.

3. Барабой В.А. Структура, биосинтез меланинов, их биологическая роль и перспективы применения//Успехи современной биологии. 2001. - Т. 121. -№1. - С. 36-46.

4. Безуглов В.Г., Саранин К.И, Гафуров P.M. Химическая защита посевов озимых зерновых культур//Агро XXI. 2002. - №6. - С .6.

5. Беккер З.Э. Физиология и биохимия грибов. М.: МГУ, 1988. - 228 с.

6. Билай В.И. Основы общей микологии. Киев: Выща школа, 1989. - 389 с.• 7. Билай В.И. Фузарии. Киев: Наукова думка, 1977. - 442 с.

7. Билай В.И., Гвоздяк Р.И., Скрипаль И.Г. и др. Микроорганизмы -возбудители болезней растений. Киев: Наукова думка, 1988. - 552 с.

8. Бирюзова В.И., Мейсель М.Н. Молекулярная биология. М.: Наука, 1964. -316с.

9. Бородин С.Г., Котлярова И.А., Терещенко Г.А. Распространение возбудителей фузариоза подсолнечника в Краснодарском крае//Агро XXI. 2002. - №4. - С. 16-17.

10. V 11. Буга С.Ф., Радына A.A., Боярчук В.Е. Мониторинг чувствительности популяций гриба Fusarium nivale к фундазолу//Микология и фитопатология. 2000. - Т. 34. - Вып. 3. - С.63-67.

11. Великанов JI.JI., Сидорова И.И. Экологические проблемы защиты растений от болезней//Итоги науки и техники. 1988. - Т. 6. - С. 144.

12. Вершинина В.И., Алимова Ф.К. Продукты на основе микробной биомассы//Микробная биотехнология. Казань: Унипресс: ДАС, 2000. - С. 368.

13. Власова Э.А. Методические основы оценки устойчивости томатов к болезням//Методы фитопатологических и энтомологических исследований в селекции растений/Под ред. Ю.Н. Фадеева и A.A. Кузьмичёва. М.: Колос, 1977-С. 223.

14. Власова Э.А., Гаранько И.Б. Патогенная микрофлора томатов в защищенном грунте Ленинградской области//Труды по прикладной ботанике, генетике и селекции. 1974. - Т. 53. - Вып. 2.

15. Глик Б., Пастернак Дж. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение. Пер. с англ. М.: Мир, 2002 - 589 с.

16. Головко А.Э, Голышин П.Н., Рябченко Н.Ф. Роль Bacillus thuringiensis в природных биоценозах//Микробиологический журнал. 1993. - Т. 55. -№3. - С. 104-109.

17. Гораль В.М., Лаппа Н.В., Гораль C.B., Гарагуля А.Д., Киприанова Е.А., Омельянец Т.Г., Смирнов В.В. Инсектофунгицидный препарат гаупсин на основе штаммов Pseudomonas аигеоГааеп8//Прикладная биохимия и микробиология. 1999. - Т. 35. - №5. - С. 596-598.

18. Городецкая О.В. Микробиологический мониторинг почв Татарстана при использовании ридомила МЦ для защиты картофеля от фитофтороза. Автореферат на соискание учёной степени кандидата биол. наук. Казань, 1999-24 с.

19. Гришечкина С.Д., Смирнов О.В., Кандыбин Н.В. Фунгистатическая активность различных подвидов Bacillus Шиг^1епз18//Микология и фитопатология. 2002. - Т. 36. - Вып. 1. - С. 58-62.

20. Громовых Т.И., Литовка Ю.А., Громовых B.C., Махова Е.Г. Эффективность действия Trichoderma asperellum (штамм МГ-97) на развитие фузариоза на сеянцах Larix 8Ижюа//Микология и фитопатология. 2002. - Т. 36. - Вып.4. - С. 70-75.

21. Долгова A.B., Смирнов А.Н., Дьяков Ю.Т. Популяции Phytophthora infestans (Mont.) DBy. в России и некоторых странах бывшего СССР//Микология и фитопатология. 1996. - Т. 30. - Вып. 3. - С. 55-59.

22. Дорожкин H.A., Ремнёва З.И., Вельская С.И., Псарёва В.В. Фитофтороз картофеля и томатов. М.: Ураджай, 1976. - 224 с.

23. Доспехов Б.А. Методика полевого опыта: с основами статистической обработки результатов исследований. М.: Колос, 1979. - 416 с.

24. Дудка И.А., Вассер С.П. Грибы. Справочник миколога и грибника. Киев: Наукова думка, 1987. - 535 с.

25. Дьяков Ю.Т. Жизненные стратегии фитопатогенных грибов и их эволюция//Микология и фитопатология. 1992. - Т. 26. - №4. - С. 309-318.

26. Дьяков Ю.Т. Популяционная биология фитопатогенных грибов. М.: Муравей, 1998.-384 с.

27. Дьяков Ю.Т., Озерецковская О.Л., Джавахия В.Г., Башрова С.Ф. Общая и молекулярная фитопатология: Учебное пособие. М.: Общество фитопатологов, 2001. - 302 с.

28. Егоров Н.С., Лория Ж.К., Юдина Т.Г. Изучение свойств параспоральных кристаллов Bacillus thuringiensis/ZMaTepHanbi Всесоюзного симпозиума по биологии клетки. Тбилиси, 1985, ч. 1. - С. 259.

29. Егоров Н.С., Юдина Т.Г. Производство и применение продуктов микробиологических производств. М.: ВНИИСЭНТИ Минмедбиопрома. - 1989.-Вып. 6.-50 с.

30. Иванова А.Е., Марфенина O.E. Влияние экологических факторов на способность к росту фрагментов мицелия и прорастание спор микроскопических грибов//Микробиология. 2001. - Т. 70. - №2. - С. 235240.

31. Иванюк В.Г., Журомский Г.К., Авдей О.В. Микроэволюция Phytophthora infestans в условиях Белоруссии//Микология и фитопатология. 2002. - Т. 36.-Вып. 5.-С. 81-90.

32. Иващенко В.Г., Шипилова Н.П., Кирцидели И.Ю. Экологический мониторинг возбудителей фузариоза семян зерновых культур на северо-западе России//Микология и фитопатология. 1997. - Т 31. - Вып. 2. - С. 64-69.

33. Иващенко В.Г., Шипилова Н.П., Левитин М.М. Видовой состав грибов рода Fusarium на злаках в азиатской части России//Микология и фитопатология. 2000. - Т. 34. - Вып. 4. - С. 54-58.

34. Иващенко В.Г., Шипилова Н.П., Нефёдова Л.И., Гагкаева Т.Ю., Назаровская Л.А., Хлопунова Л.Б. Биоэкологические и фитосанитарные аспекты исследования фузариоза колоса//Микология и фитопатология. -1997. Т. 31. - Вып. 2. - С. 58-63.

35. Ивинскене В.Л. Роль фосфолипазы и термостабильного экзотоксина в патогенности Bacillus thuringiensis. Автореферат на соискание учёной степени кандидата биологических наук. Л., 1984. - 17 с.

36. Ивинскене В.Л., Заянчкаускас П.А. Патологические изменения гемоцитов у гусениц под воздействием фосфолипазы//Труды АН Лит. ССР. Сер. В. -1986.-Т. 2 (33).-С. 64-72.

37. Иштирякова Ф.К., Ямалеев А.М., Ахметов Р.Р. Изучение активности и молекулярной гетерогенности пероксидазы пшеницы при обработке бисолом 2 против корневой гнили//Вестник сельскохозяйственной науки. -1992.-№4.-С. 138-141.

38. Каленич Ф.С., Мялова JI.A., Нагорна JI.B. Биофунгициды против болезней//Захист рослин. - 1999. - №10. - С. 18-19.

39. Калько Г.В., Воробьёв Н.И., Лагутина Т.М., Новикова И.И. Ингибирование микробами-антагонистами фитопатогенного гриба Fusarium oxysporum в торфогрунте//Микология и фитопатология. 2001. - Т. 35. - Вып.З. - С. 66-75.

40. Каменёк Л.К. Дельта-эндотоксин Bacillus thuringiensis: строение, свойства и использование для защиты растений. Автореферат на соискание учёной степени доктора биологических наук. М., 1998. - 40 с.ч i

41. Каменёк Л.К. Влияние эндотоксина Bacillus thuringiensis на Mg зависимую АТФазу некоторых видов насекомых//Микроорганизмы в защите растений. Новосибирск, 1981. - С. 72-77.

42. Каменёк Л.К. Выделение и очистка кристаллов Bacillus thuringiensis//BKwm. научно-техн. информации. Новосибирск, 1980. - №2(3). - С. 14-15.

43. Каменёк Л.К. Структура, свойства и механизм действия 6-эндотоксина Bacillus thuringiensis//3HT0M0naT0reHHbie бактерии и их роль в защите растений: Сб. науч. тр./ВАСХНИЛ. Сиб отд-ние. Новосибирск, 1987. -136 с.

44. Каменёк JI.K., Штерншис М.В. Изучение действия кристаллического токсина на амилазу кишечника//Сиб. вестн. с.-х. науки. 1980. -№3.

45. Кваснюк Н.Я., Жеребцова JI.H., Филиппова Е.И. Устойчивость возбудителя фитофтороза к системным фунгицидам и её преодоление//Агро XXI. 2002. - №6. - С. 4.

46. Киль В.И, Надыкта В.Д. Генетически модифицированный картофель, устойчивый к колорадскому жуку//Агро XXI. 2002. - №1. - С. 12-15.

47. Кислых Т.Н. Распространённость и видовой состав возбудителей фузариоза колоса зерновых культур в лесостепной зоне Украины//Микология и фитопатология. 2000. - Т. 34. - Вып. 1. - С. 4247.

48. Клечковская Е.А. Эколого-биохимическая характеристика Fusarium spp. на озимой пшенице в Причерноморской степи Украины//Микология и фитопатология. 1999. - Т. 33. - Вып. 4. - С. 280-289.

49. Климентова Е.Г. Антимикробное действие дельта-эндотоксина Bacillus thuringiensis в отношении ряда фитопатогенных бактерий. Автореферат на соискание учёной степени кандидата биологических наук. М., 2001. -21с.

50. Крючкова JT.O. Фузарии//3ахист рослин. 2000. - №7. - С. 8-9. ! 64. Кураков A.B. Методы выделения и характеристики комплексов микроскопических грибов наземных экосистем. - М.: МАКС Пресс, 2001. -91с.

51. Кураков A.B., Костина Н.В. Особенности пространственного заселения ризопланы микроскопическими грибами//Микробиология. 2001. - Т. 70. - №2. - С. 204-214.

52. Куренина Н.Е., Хмель И.А. Микроцины: природа и генетическое детерминирование//Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 1986. - №4. - С. 3.

53. Люовий М.П., Питель С.Г. Фитофтороз томатов и взаимодействие в растение-хозяин Phytophthora infestans (Mont.) de Bary//BicH. аграр. науки. - 1999. - №6. - С. 27-32.

54. Майрапетян А.Х., Татевосян Н.С. Экологические аспекты применения пестицидов в республике Армения и здоровье населения//Экология человека. 2001. - №4. - С. 61-63.

55. Макарюнайте Ю.П. Хроматографическое разделение комплекса фосфолипаз Bacillus cereus и характеристика индивидуальных ферментов. Автореферат диссертации кандидата биологических наук. Вильнюс, 1985.- 19 с.

56. Мелентьев А.И. Аэробные спорообразующие бактерии рода Bacillus Cohn, как агенты биологического контроля болезней растений. Автореферат диссертации на соискание учёной степени доктора биологических наук. -Казань, 2000. 55с.

57. Мелентьев А.И. Бактерии антагонисты фитопатогенных грибов //ArpoXXI. -2001. -№11.

58. Мелентьев А.И., Актуганов Г.Э., Галимзянова Н.Ф. Роль хитиназы в проявлении антигрибной активности штаммом Bacillus sp.739 //Микробиология. 2001. - Т. 70. - №5. - С. 636-641.

59. Мелентьев А.И., Галимзянова Н.Ф., Влияние метаболитов бацилл-антагонистов на прорастание спор и развитие грибов-возбудителей обыкновенной корневой гнили//Прикладная биохимия и микробиология. -1999.-Т. 35.-С. 353-357.

60. Методика по оценке устойчивости сортов полевых культур к болезням на инфекционных и провокационных фонах/Под ред. Захаренко В.А, Медведева A.M. и др. М., Россельхозакадемия, 2000. - 88 с.

61. Методы практической биохимии. М.: Мир, 1978. - 308с.

62. Методы экспериментальной микологии/Дудка И.А., Вассер С.П., Элланская И.А. и др. Киев: Наукова думка, 1982. - 550с.

63. Мирчинк Т.Г. Почвенная микология. М.: Изд-во МГУ, 1988. - 220 с.

64. Никонорова А.К. Особенности взаимодействия Bacillus subtilis с Helminthosporium sativum Pam., King et Bakke/УМикология и фитопатология. 1996. - Т. 30. - Вып. 5-6. - С. 69-73.

65. Новикова И.И., Литвиненко А.И., Калько Г.В. Влияние новых биопрепаратов, созданных на основе штаммов микробов-антагонистов, на комплекс возбудителей корневых гнилей огурца//Микология и фитопатология. 1995. - Т. 29. - Вып. 5-6. - С. 46-53.

66. Паников Н.С. Кинетика роста микроорганизмов. Общие закономерности и экологические приложения. М.: Наука, 1992. - 311с.

67. Печуркин Н.С., Брильков A.B., Марченкова Т.В. Популяционные аспекты биотехнологии. Новосибирск: Наука, сиб. отделение, 1990. - 173 с.

68. Пидопличко Н.М. Грибы-паразиты культурных растений. Определитель. -Киев: Наукова думка, 1977, том 1, 2.

69. Плохинский H.A. Математические методы в биологии. М.: МГУ, 1978. -265с.

70. Салина O.A., Лугаускас А.Ю., Жарикова Г.Г., Великанов Л.Л., Лихачев А.Н. Влияние грибов рода Trichoderma на некоторые почвенные микроорганизмы//Микробные сообщества и их функционирование в почве. -Киев: Наукова думка, 1981.-С. 195-199.

71. Секун М.П., Ретьман C.B., Джам О.В. Скоро сев: протравливаем семена//3ахист рослин. 1999. — №7. - С. 10-11.

72. Сичунь Джан, Лутова Л.А. Использование методов in vitro и антибиотика нистатина для получения растений томатов, устойчивых к фитофторе (Phytophthora infestans (Mon.) De Вагу)//Вестник С.-Петербург, ун-та. Серия 3. 1999. — №1. - С. 106-114.

73. V 95. Смирнов О.В. Патотипы Bacillus thuringiensis и экологические основы их использования в защите растений. Автореферат диссертации на соискание учёной степени доктора биологических наук. Санкт-Петербург - Пушкин, 2000.-42 с.

74. Соколова Г.Д., Девяткина Г.А., Павлова В.В., Дорофеева Л.Л., Кожуховская В.А. Гетерогенность изолятов Fusarium graminearum по характеру токсиногенных реакций на воздействие фунгицидов//Микология и фитопатология. 2001. - Т. 35. - Вып. 2. - С. 53-57.

75. Список пестицидов и агрохимикатов, разрешённых к применению на территории Российской Федерации, 2002.

76. Сухаревич В.И., Зайцева Т.В., Медведева Н.Г., Сухаревич М.Э., Кузикова И.Л. Влияние биоцидов различной химической природы на синтез пигментов у целлюлозоразрушающих грибов//Микология и фитопатология. 2000. - Т. 34. - Вып. 3. - С. 39-42.

77. V 99. Сухаревич В.И., Кузикова И.Л., Медведева Н.Г., Гриднева Ю.А. Рост микромицетов и синтез пигментов на средах, содержащих фунгициды иингибиторы пигментообразования//Микология и фитопатология. 2000. -Т. 34. - Вып. 3.- С. 43-47.

78. Tapp С. Основы патологии растений. М.: Мир, 1975. - 587 с.

79. Твердюков А.П. и др. Биологический метод борьбы с вредителями и болезнями в защищенном грунте М.: Колос, 1993. - 157 с.

80. Титко A.B. Влияние протравителей на защищаемое растение и поражение корневыми гнилями//Тр. Кубан. гос. аграр. ун-та, 1999. №377. - С. 65-67.

81. Титова Ю.А., Новикова И.И., Хлопунова Л.Б., Коршунов Д.В. Триходермин на основе вторичной биоконверсии отходов и его эффективность против болезней огурца//Микология и фитопатология. -2002. Т. 36. - Вып. 4. - С. 76-80.

82. Тулемисова К.А. Микробиологические методы защиты растений//Вестник АН Каз. ССР. 1990. - №6. - С. 29-36.

83. Федоров J1.A., Яблоков A.B. Пестициды токсический удар по биосфере и человеку. - М.: Наука, 1999. - 460 с.

84. V 108. Феофилова Е.П. Клеточная стенка грибов. М.: Наука, 1983. - 248с.

85. Франц И., Криг А. Биологические методы борьбы с вредителями. М.: Колос, 1984.-352 с.

86. Харвуд K.P. Бациллы. Генетика и биотехнология. М.: Мир, 1992. - 530 с. Ш.Харина С.Г. Воздействие пестицидов на агроэкосистемы Верхнего

87. Приамурья//Проблемы региональной экологии. 2000. - №4. - С. 69-73.- 115112. Честухина Г.Г., Залунин И.А., Тюрин С.А. и др. Дельта-эндотоксины Bacillus thuringiensis//2 Всесоюз. конф. «Бактериал. токсины», 27-30 ноября, 1989: Тез. Юрмала, 1989. - С. 146.

88. Шералиев А.Ш., Бухаров К.В. Видовой состав грибов рода Fusarium, поражающих культурные и сорные растения Узбекистана//Микология и фитопатология. 2001. - Т. 35. - Вып. 2. - С. 44-47.

89. Шкаликов В.А., Белошапкина О.О., Букреев Д.Д. и др. Защита растений от болезней/Под ред. В.А. Шкаликова. М.: Колос, 2001. - 248 с.

90. Штейнберг М.Е., Завелишко И.А., Ротаренко А.П., Андронаки JI.C. Gliocladium roseum Bainier и Gliocladium virens Miller, Giddens et Foster и их микофильные свойства//Микология и фитопатология. 1991. - Т. 25. -Вып. 1.-С. 34-38.

91. Штерншис М.В. Повышение эффективности микробиологической борьбы с вредными насекомыми: Монография/Новосибирский гос. аграрный университет. Новосибирск, 1995. - 194 с.

92. Штерншис М.В. Спектрофотометрический метод определения концентрации микроорганизмов в суспензии//Бюлл. научно-техн. инф., СибНИИЗХим. Новосибирск, 1976. - Вып. 16. - С. 44-50.

93. Юдина Т.Г. Сравнение биологической активности -эндотоксинов разных подвидов Bacillus thuringiensis//MHKpoopraHH3Mbi в сельском хозяйстве. Тезисы докладов IV Всесоюз. науч. конференции. Пущино, 20-24 янв. 1992.-С. 220.

94. Юдина Т.Г., Егоров Н.С., Лория Ж.К., Выборных С.Н. Биологическая активность параспоральных кристаллов Bacillus thuringiensis//H3Becnw АН СССР. Серия биол. 1988. - №3. - С. 427-436.

95. Юдина Т.Г., Милько Е.С., Егоров Н.С. Чувствительность диссоциантов Micrococcus luteus к действиюб -эндотоксинов Bacillus thuringiensis //Микробиология. 1996. - Т. 65. - №3. - С. 365-369.

96. Юдина Т. Г., Саламаха О.В., Олехнович Е.В., Рогатых Н.Л., Егоров Н.С. Влияние источников углерода на биологическую активность и морфологию параспоральных кристаллов Bacillus thuringiensis //Микробиология. 1992. - Т. 61. - Вып. 4. - С. 577 - 584.

97. Юрина Т.П., Умнов A.M., Караваев В.А., Солнцев М.К. Влияние трихотецина на процесс патогенеза у растений пшеницы, поражённых возбудителем стеблевой ржавчины//Физиология растений. 1989. - Т. 36. -Вып. 3.-С. 581-587.

98. Яруллина Л.Г., Ибрагимов Р.И., Ахметов P.P. Гормональный баланс у пшеницы, пораженной возбудителем корневой гнили Helminthosporium sativum//H3Becn™ Академия Наук. Сер. биол. 2001. - №4.

99. Amelung Dietrich. 1st die Getreidebeizung noch notig//Getreide Mag 2000. -№3. - S. 202-205.

100. Angus T.A. Association of toxility with protein crystalline inclusion of Bacillus sotto Ischiwata//Canad. J. Microbiol. - 1956. - V.2. - P. 122-131.

101. Aronson A. J., Beckman W., Dunn P.//Microbiol. Rev.- 1986. V.50. - №1. -P. 1.

102. Baker K.F., Cook R.J. Biological control of plant pathogens. San Francisco, 1974.-433 p.

103. Belanger R.R., Benyagoub M. Challenges and prospects for integrated control of powdery mildew in the greenhouse//Can. J. Plant Pathology. 1997. - V. 19. -№3.-P. 310-314.

104. Belanger R.R., Deacon J.W. Interaction specificity of the biocontrol agents Sporothrix flocculosa a video microscopy study//Phytopathology. - 1996. - V. 86. -№ 12.-P. 1317-1323.

105. Berliner E. Uber die Schlaffsucht der Mehlmottenrouppe//Ges. Getreidew. -1911. -V. 3. -S. 63-70.

106. Berliner E. Uber die Schlaffsucht der Mehlmottenrouppe (Ephestia Kuhniella Zell.) und ihen Erreger Bacillus thuringiensis, n.sp.//Z. Angew. Entomol. -1915.-V. 2.-S. 29-56.

107. Biyk H., Dyki B., Sobiczewsky P. Antagonistic effect of Erwinia herbicola on in vitro spore germination and germ tube elongation of Botrytis cinerea and Pénicillium expansum/ZBioControl. 1998. - V. 43. - P. 97-106.

108. Bulla L.A., Kramer K.J., Bechtel O.B., Davidson L.I. Entomocidal proteinaceous crystal of Bacillus thuringiensis//Microbiology, 1976. -Washington: D.C., 1976. P. 534-539.

109. Carroll, J. and Ellar, D.J. An analysis of Bacillus thuringiensis endotoxin action on insect midgut membrane permeability using a light scattering assay//Eur. J. Biochem. 1993. - 214. - P. 771-778.

110. Chaban V.S., Kyrylyuk T.P. Intensity of infection of tomato by Phytophthora ifestans in central Ukraine in relation to varietal resistance//Bull. OEPP. 2000. - №2. - S. 275-277.

111. Couteaudier Y. Competition for carbon in soli and rhizosphere, a mechanism involved in biological control of Fusarium wilts//Biological control of plant diseases, 1991.-P. 99-104.

112. De Barjac H. Insect pathogens in the genus Bacillus. In: The Aerobic, Endospore-Forming Bacteria: Classification and Identification (R.C.W. Berkeley and M. Goodfellow, eds.), 1981. P. 241-250.

113. De Boer W., Gunnewiek P.J.A.K., Lafeber P., Janse J.D., Spit B.E., Woldendorp J.W. Anty-fimgal properties of chitinolytic dune soil bacteria//Soil Biol. Biochem. 1998. - V. 30. - №2. - P. 193-203.

114. Ebersold H. R., Luthy P., Geiser P., Enliger L. The action of the delta-endotoxin of Bacillus thuringiensis: an electron microscope study//Experientia. 1978. -V. 34.-P. 1672- 1677.

115. Ebersold H.R., Luthy P., Huber H.E. Membrane damage effect of the delta-endoxin of Bacillus thuringiensis//Experientia. 1980. - V. 36. - P. 495 - 498.

116. Egorov N.S., Yudina T.G./Proc. 4th Europ. Congr. on Biotechnol. 1987//Eds. by Nejissel O.M. et al. Amsterdam. 1987. - V. 3. - P. 550.

117. English L., Slatin S.L. Mode of action of delta-endotoxins from Bacillus thuringiensis: comparison with other bacterial toxins//Insect Biochem. and Mol. Biol. 1992. - V. 2. - №1. - P. 1-7.

118. Farkas-Himsley H. Bacteriocins are they broad-spectrum antibiotics?//J. Antimicrob. agents and Chemother. - 1980. - V. 6. - № 4. - P. 424.

119. Gilbert J., Tekauz A. Recent developments in research on fusarium head blight of wheat in Canada//Can. J. Plant. Pathol. 2000. - 22. - №1. - P. 1-8.

120. Gonzales J.M., Dulmage H.T., Carlton B.C. Correlation between specific plasmids and delta-endotoxin production in Bacillus thuringiensis//Plasmid, 5. 1981.-P. 351-365.

121. Gonzales J.M., Dulmage H.T., Carlton B.C. Transfer of Bacillus thuringiensis plasmids coding delta toxin among strain of Bacillus thuringiensis and Bacillus cereus//Proc. Nat. Acad. Sci. 1982. - 79. - P. 6591-6595.

122. Gonzales M.S., Trevathan L.E. Identity and pathogenicity of fungi associated with root and crown rot of soft red winter wheat grown on the upper coastal plain land resource area of Mississipi//J. Phytopathol. 2000. - 147. - №2. - P. 77-85.

123. Griego V.M., Moffett D., Spence K.D. Inhibition of native K+ transport in the tobacco hornworm (Manduca sexta) midgut after ingestion of Bacillus thuringiensis endotoxin//! Insect Physiol. 1979. - V. 25. - P. 283-288.

124. Heimpel A.M. A strain of Bacillus cereus Fr. and Fr. pathogenic for the larch sawfly, Pristiphora erichsonin (Htg)//Can. Entomol. 1954. - V. 86. - P. 73 -74.

125. Heimpel A.M. A critical review of Bacillus thuringiensis var. thuringiensis Berliner and other crystalliferous bacteria//Ann. Rev. Entomol. 1967. - V. 12. - P. 287-322.

126. Himeno M. Mechanism of Bacillus thuringiensis insecticidal endotoxin action on insect cells in vitro//Biotechnology in invertebrate pathology and cell culture. Academic Press, 1987. P. 29-43.

127. Hofte H., Whiteley H. Insecticidae crystal proteins of Bacillus thuringiensis//Microbiol. Rev. 1989. - V. 53. - №3. - P. 242-260.

128. Huber H.E., Luthy D., Ebersold H.-R., Cordier J.-L. The subunits of the parasporal crystal of Bacillus thuringiensis: size, lineage and toxicity//Arch. Microbiol. 1981. -V. 129. - P. 14-18.

129. Huber-Lukas H. Zur structur des delta-endotoxin von Bacillus thuringiensis//Diss. Dokl. Naturwiss, 1982. 105 s.

130. Ikezava H., Taquchi R. Phosphatidilinositolspecific phospholipase C. from Bacillus cereus and Bacillus thuringiensis/ZMethods in Enzymology. N.Y.: Acad. Press, 1981.-V. 71.-P. 731-741.

131. Islam K.Z., Nandi B. Control of brown spot of rice by Bacillus megaterium//Z. Pflanznkrankh, und Pflanzenschutz. 1985. - Bd 92. - №3. - S. 241-246.

132. Janczak Cecylia Kawecki Tadeusz, Pawlak Adam. Chonoby grzybowe bobiku I ich zwalczanie: Ref. 38 Ses. nauk. Jnst. ochr. rosl., Poznan, 1998//Post. ochr. rosl. 1998. - 38. - №1. - C. 89-92.

133. Johnson S.E. Toxicity of Bacillus thuringiensis entomocidal protein toward cultural insect tissues//! Invert. Pathol. 1981. - V. 38. - P. 94-101.

134. Kashyar U. Biological control pf some fungal diseases of tomatoes by phyllosphere microorganisms//Ind. J. Mycol. Plant Pathol. 1978. - V. 8. - N 1. -P.37.

135. Kim Y.T., Gregory B.G., Ignoffo C.M. The P-exotoxin of Bacillus thuringiensis: effects of Bacillus thuringiensis of macromolecules in an insects cell line//J. Invert. Pathol. 1972. - V. 20. - №3. - P. 284-287.

136. Klingenhagen Gunter, Frahm Johann. Fusariumbefall im Getreide//Getreide Mag. 1999. - 5. - №2. - S. 74-76.

137. Knowles B.H., Ellar D.L. Colloid-osmotic lysis in a general feature of the mechanism of action of Bacillus thuringiensis endotoxins with different insect specificity//Biochem. et Biophys. acta: Gen. subj. 1987. - V. 924. - P. 509518.

138. Kohl J., Belanger R.R., Fokkema NJ. Interaction of four antagonistic fungi with Botrytis aclada in dead onion leaves a comparative microscopic and ultrastructural study//Phytopathology. - 1997. - V. 87. - № 6. - P. 634-642.

139. Krieg A. Concerning exotoxin produced by vegetative cells of Bacillus thuringiensis and Bacillus cereus//J. Invert. Pathol. 1971. - V. 17. - P. 134135.

140. Lane N.J., Maddrel S.H.P., Harrison J.B., Orectron J.A.//Cell. Biol. Sut. Repts. -1987. V. 11. -№3. - P. 229.

141. Lockwood I.L. Exploration and competition//The fungal community: its organization and role in ecosystem/Eds. Wicklow D.T., Carrol G.C. New York: MarselDeccer, 1992. -P. 243-263.

142. Manibhushan K., Sreenivasaprasad S., Baby U., Joe Y. Susceptibility of rice sheath blight pathogen to mycoparasites//Curr. Sci. (India), 1989. V. 58. - №9. -P. 575-578.

143. Mc Connel E., Richards A.G. The production by Bacillus thuringiensis Berliner of a heat-stable substance toxic for insects//Canad. J. Microbiol. 1959. - V. 5 (2).-P. 161-168.

144. Mc New G.L./Plant Pathology. 1960. - V. 2. - P. 19-69.

145. Muriuki G., Mirocha C.I. Time of deoxynivalenol and nivalenol biosynthesis during pathogenesis of Fusarium species in wheat: Pap. 6 th European Fusarium

146. Seminar and Third COST 835 Workshop of Agriculturally Important Toxigenic Fungi, Berlin, 11-16 Sept., 2000//Mitt. Biol. Bundesanst. Land-und Forstwirt. Berlin-Dahlem. 2000. - №377. - P. 48-49.

147. Nishiitsutsuji-Uwo J., Ohsawa A., Nishimura M. Factors affecting the insecticidal activity of endotoxin of Bacillus thuringiensis//J. Invert. Pathol. -1977.-V. 29.-P. 162-169.

148. Pendleton I.R., Bernheimer A.W., Grushoff P. Purification and partical characterization of hemolisins//J. Invert. Pathol. 1973. -V. 21. - P. 131-135.

149. Pendleton I.R., Morrison R.B. Separation of the spores and crystals or Bacillus thuringiensis/ZNature. 1966. - V. 212. - P. 228-729.

150. Percy J., Fast P.G. Bacillus thuringiensis crystal toxin: ultrastructural studies of its effect on silkworm midgut cells//Invert. Pathol. 1983. - V. 41. - №1. -P.86.

151. Podile A.R., Prakash A.P. Lysis and biological control of Aspergillus niger by Bacillus subtilis AF 1 // Can. J. Microbiol. 1996. - V. 42. - № 6. - P. 533-538.

152. Rogers H.J. The bacterial surface where does in begin and ends?//Antibiot. Inhib. Bact. Cell Surface Assembly and Funct.: Conf., Philadelphia 17-20 May, 1987. - Wash. D.C., 1988. - P. 639-641.

153. Samasanti W., Tojio A., Aizawa K. Insecticidal activity of bipyramidal and cuboidal inclusions of delta-endotoxin and distribution of their antigens among various straines of Bacillus thuringiensis//Agric. Biol. Chem. 1986. - V. 50. -P. 1731-1736.

154. Schluter Klaus, von Blucher Borusso. Wurzelschutzbeize in Winterweizen abhangig vom Krankheitsauftreten//Getreide Mag. 2000. - 6. - №1. - S. 3234.

155. Spurr H., Bailey J. Biological control of peanut leafspot//Proc. Amer. Peanut. Res. and Educ. Soc. 1983. - V. 15. - № 1. - p. 93.

156. Tojio A. Enzyme liked immunosorbent assay for the toxic fragment of bipyramidal endotoxin produced by Bacillus thuringiensis kurstaki strain HD-1//J. Sericult. Sci. Jap. - 1985. - V. 54. - P. 304-309.

157. Toumanoff C. Etude comparative de la souche toxigene de Bacillus cereus var. sotto (Ischiwata) agent pathogene de la flacherie des vers a sole an Japon//Ann. Inst. Pasteur 1955. -V. 83 (3). - P. 384-387.

158. Travers R.S., Faust R.M., Reichelderfer C.F. Effects of Bacillus thuringiensis var. kurstaki delta-endotoxin on isolated lepidopteran mitochondria//.!. Invert. Pathol. 1976. - V.28. - P. 351-356.

159. Utkhede R.S., Amer G.A. Formulation of biological agents to control root rots of lettuce and cucumber: Abstr. Annual Meeting of the Canadian Phytopathological Society, Victoria, 2000//Can. J. Plant Pathol. 2000. - 22. -№2.-P. 194.

160. Vidaver A.K. Bacteriocins: the fituer and reality//Plant Disease. 1983. - V.67. -№5.-P. 471.

161. Winder W. R., Whiteley H. R.//J. Bacteriol. 1989. - V. 171. - №2. - P. 965.

162. Yamamoto T., Lizuka T. Two types of entomocidal toxins in the parasporal crystals of Bacillus thuringiensis kurstaki//Arch. Biochem. Biophys. 1983. -V. 227-P. 233-241.