Дельта-эндотоксин Bacillus thuringiensis: Строение, свойства и использование для защиты растений тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.01.11, доктор биологических наук Каменек, Людмила Кирилловна

• Каменек, Людмила Кирилловна
• доктор биологических наук
• 1998

Оглавление диссертации доктор биологических наук Каменек, Людмила Кирилловна

Введение. 4.

1. Bacillus thuringiensûs и ее токсины.12.

1.1. Из истории вопроса.12.

1.2. Эпизоотические свойства бактерии.16.

1.3. Споры Bacillus thuringiensi s.18.

1.4. Инсектицидные токсины Bacillus thuringiensi s.21.

2. Белковый кристаллический дельта-эндотоксин.31.

2.1. Происхождение белкового кристалла.31.

2.2. Форма и размеры кристаллов.40.

2.3. Химический состав и свойства.45.

2.4. Внутримолекулярная организация кристаллического белка.50.

2.5. Проникновение дельта-эндотоксина через клеточную мембрану.56.

3. Механизм действия дельта-эндотоксина Bacillus thuringiensi s на насекомых.68.

3.1. Патологические изменения в организме насекомых, вызванные Bacillus thuringiensi s и ее дельта-эндотоксином.

3.2. Действие дельта-эндотоксина на клеточные культуры тканей насекомых.77.

3.3. Разобщающие свойства дельта-эндотоксина.101.

3.4. Действие дельта-эндотоксина на Н+-АТРазную систему и дыхание в митохондриях.116.

3.5. Влияние дельта-эндотоксина на обмен глюкозы.126.

3.6 Действие дельта -эндотоксина на клеточный транспорт ионов.139.

4. Универсальность механизма действия дельта-эндотоксина на насекомых.175.

5.Факторы устойчивости насекомых к действию дельта-эндотоксина.188.

6. Особенности применения бактериальных препаратов для борьбы с капустной совкой.201.

7.Разработка энтомоцидных препаратов на основе дельта-эндотоксина и технологии их применения.214.

7.1. Физические свойства препарата.216.

7.2. Биологическая активность препарата.218.

7.3. Пути повышения эффективности препаратов на основе дельта-эндотоксина.230.

7.4. Производственные испытания препарата Дельта против листогрызущих гусениц на капусте.240.

7.5. Сведения по биологическим и технологическим свойствам препарата Дельта.247.

7.6. Испытание препарата Дельта против вредителей леса методом аэрозольного распыления.253.

8. Материалы и методики исследований.255.

8.1. Культивирование и идентификация микроорганизмов.255.

8.2. Получение препаратов дельта-эндотоксина.256.

8.3. Лабораторные насекомые и получение препаратов их тканей.258.

8.4. Спектральное изучение дельта-эндотоксина.262.

8.5. Методы электронной и световой микроскопии.263.

8.6. Прямое изучение разобщающих свойств дельта-эндотоксина.265.

8.7. Биохимические методы исследований.266.

8.8. Лабораторная и полевая оценка действия препаратов, содержащих дельта-эндотоксин.271.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Дельта-эндотоксин Bacillus thuringiensis: Строение, свойства и использование для защиты растений»

Актуальность темы: Защита растений от повреждений является одним из важнейших резервов повышения урожайности сельскохозяй-культур ственных^а также сохранения лесного и паркового фонда. В условиях агроценоза необходимость применения защитных мероприятий практически безальтернативна.

В настоящее время ведущим в этой области является химический метод борьбы с насекомыми-вредителями, который наряду с неоспоримыми преимуществами,такими как высокая эффективность и быстрота достигаемого результата, имеет и существенные недостатки. Среди них основными можно считать токсичность химических инсектицидов для полезной энтомофауны и теплокровных животных при низкой избирательности в отношении фитофагов, их сравнительно медленную детоксикацию в окружающей среде, приводящую к неизбежному ее загрязнению, и все чаще встречающееся развитие резистентности у насекомых - вредителей, следствием которой становится необходимость увеличения норм расхода пестицидов и кратности обработок. Поэтому в настоящее время усилия специалистов в области защиты растений направлены на разработку таких систем защитных мероприятий, при которых применение химических средств было бы сведено до абсолютно необходимого минимума. Это тем более актуально, что до сих пор не удалось создать высокоизбирательных и нетоксичных химикатов.

Перспективной альтернативой химической защиты растений служит биологическая регуляция численности в рамках интегрированной системы, и в частности, использование патогенных для насекомых микроорганизмов. Наибольший интерес в этом отношении представляет спорообразующая кристаллофорная бактерия Bacillus thuringiensis, поражающая многие виды насекомых - фитофагов, препараты на основе которой используются в настоящее время во всем мире.

Эффективное применение таких препаратов, а также создание новых более совершенных требует знания многих особенностей патогена, насекомого - объекта подавления, механизмов их взаимодействия и влияния на них окружающей среды.

Известно, что основным действующим началом Bacillus thuringiensis, в целом ответственным за комплекс патологических проявлений, является дельта - эндотоксин, продуцируемый ею. Остальные токсины и споры, лишь усиливают вызванную им патологию. Существующие ныне препараты на основе целой бактерии в своем составе содержат много балластных веществ (вегетативные клетки, элементы культурной среды). При их массовом применении создается предпосылка к чрезмерному обеднению среды спорами. Создание и применение средств на основе чистого дельта-эндотоксина позволило бы обеспечить максимальную эффективность и экологическую безвредность защитных мероприятий.

В мировой литературе накоплен обширный материал, описывающий строение, состав, физико-химические свойства кристаллов, включая их судьбу в кишечнике восприимчивого насекомого под действием pH и кишечных ферментов. Установлено, что синтез дельта-эндотоксина в процессе споруляции генетически запрограммирован (Дебабов и соавт., 1987; Feitelson et al., 1992), и что строение и химические свойства токсинов разного происхождения имеют значительное сходство (Честухина и соавт. 1986; 1987; Ellar, 1996).Дельта-эндотоксины класса Cry I А, токсичные для чешуекрылых, способны связываться с чувствительными рецепторами на цитоплазматических мембранах клеток кишечного эпителия, а затем проникать в них, формируя каналы-поры ( Hodgman & Ellar, 1990; Smith & Ellar, 1994). Все это позволило предположить единство механизма действия дельта - эндотоксина данного патотипа на всех восприимчивых насекомых.

Несомненно, что патологические изменения в организме насекомого являются следствием воздействия токсина на биохимические процессы в клетках кишечника. Многочисленные исследования „посвященные этому вопросу (Heimpel, 1977; Faust, 1984; Aronson et al., 1986; Gill et al, 1992; и другие), касались в основном изучения влияния дельта-эндотоксина на транспорт веществ, в первую очередь неорганических ионов, через цитоплазматические мембраны, которое не является первичным (Himeno et al., 1985). Предпринятые попытки до настоящего времени не привели к созданию единой теории механизма действия дельта - эндотоксина на насекомых, позволяющей связать в единое целое накопленные факты.

Для решения этой проблемы было проведено детальное изучение механизма действия дельта - эндотоксина, позволившее сформулировать единую концепцию, основные положения которой удовлетворительно согласуются с результатами, полученными ранее. Сформулированные положения, касающиеся как самого механизма, так и подходов к его изучению можно рассматривать как новое перспективное направление в бактериологии и токсикологии, служащее целям защиты растений.

Цель и задачи исследования: Целью настоящего исследования являлось выяснение механизма действия дельта - эндотоксина на организм насекомых на разных уровнях биологической организации (биохимическом, клеточном, организменном, видовом) и использование полученных результатов для поиска путей усиления вызванной эндотоксином патологии, улучшения существующих ныне препаратов на основе Вас. thuringiensis и создания принципиально новых эндотоксин^содержащих препаративных форм.

В связи с этим были поставлены следующие задачи .

- Изучить цитопатическое действие дельта - эндотоксина на клетки культуры и кишечника насекомых (непарного шелкопряда и монашенки).

- Уточнить особенности строения и свойства эндотоксина как разобщителя окислительного фосфорилирования и дыхания в митохондриях клеток кишечника насекомых (капустных белянки и совки, боярышницы, непарного шелкопряда и монашенки).

- Выявить влияние разобщающего действия дельта - эндотоксина на основные процессы в клетках кишечника насекомых отряда чешуекрылых (клеточное дыхание, поглощение глюкозы, гликолиз, интенсивность синтеза АТР, систему активного транспорта неорганических ионов - калия, натрия, магния, кальция).

-Установить биохимические факторы возникновения устойчивости насекомых к дельта - эндотоксину.

- Выяснить возможность повышения эффективности препаратов на основе Вас. thuringiensis путем усиления патологического процесса, вызываемого дельта - эндотоксином.

- Разработать принципы получения и применения новых препаративных форм на основе чистого дельта - эндотоксина.

Научная новизна результатов исследований. Впервые проведено комплексное изучение влияния дельта-эндотоксина Вас. thuringiensis на биохимические системы организма насекомых (окислительное фосфорилиро-вание, гликолиз, транспорт ионов). Сформулированы и обоснованы научные положения, совокупность которых можно квалифицировать как новое перспективное направление в изучении патогенеза бактериальных токсинов белковой природы.

Впервые доказано с использованием различных методов, что первичным действием дельта-эндотоксина является разобщение окислительного фосфорилирования и дыхания в митохондриях, обусловленное его протоно-форными свойствами. Способность разобщать при этом не зависит от источника происхождения токсина (в пределах патотипа), но прямо пропорциональна его концентрации. Установлено, что усиление клеточного дыхания в течение первых 10 минут воздействия дельта-эндотоксина Cry I А на фоне резкого снижения синтеза АТР, связано с разобщением окислительного фосфорилирования и дыхания, приводящего к деэнергизации митохондрий.

Установлено, что начальное усиление потребления клетками глюкозы связано с включением механизма, компенсирующего снижение синтеза ATP в ходе окислительного фосфорилирования за счет аэробной, а при дальнейшей деэнергизации клетки, и снижении потребления кислорода анаэробной стадии гликолиза. Это подтверждает динамика изменения активности 3-фосфорглицератдегидрогеназы и лактатдегидрогёназы-ферментов, катализи/рующих ключевые стадии гликолитического процесса.

Впервые показано, что вакуолизация клеток, приводящая к их деструкции, вызвана нарушением работы ион - транспортирующей Mg 2+~зависимой АТРазной системы вследствие общей деэнергизации клеток, результатом которого является пассивный нерегулируемый приток ионов натрия и воды в клетку и, как следствие, вакуолизация мембранных структур. Установлено, что нарушение транспортных функций клеточных мембран и, вслед за этим, их целостности вызывает выход лактатдегидрогеназы в гемолимфу и значительное повышение содержания лактата в ней.

Показано, что механизм действия дельта-эндотоксинов Cry I А класса универсален и един для клеток кишечного эпителия чувствительных насекомых - фитофагов, не зависит от вида насекомого, а его проявления прямо пропорционально связаны с концентрацией токсина.

Впервые проведен анализ защитных механизмов насекомых к действию дельта-эндотоксина. Показано, что увеличение активности транспортной 1У^2+-зависимой K+,Na+ - АТРазы клеток кишечника, а также лактатдегидрогеназы в гемолимфе коррелирует с восприимчивостью насекомых к данному токсину и бактерии в целом. Высказано предположение, что основной причиной различной восприимчивости является наличие или отсутствие на цитоплазматической мембране клеток кишечного эпителия специфических акцепторных центров, комплементарных к токсину данного вида, их количества и степени комплементарности, а так же секреция в кишечнике веществ-инактиваторов. Дано теоретическое обоснование разработки нового поколения бактериальных препаратов для защиты растений от листогрызущих вредителей сельского хозяйства и леса, содержащих очищенный и активированный дельта-эндотоксин и обладающих высокой биологической эффективностью и экологической безвредностью.

Практическая значимость работы. Результаты выполненной работы, вскрывающие механизмы взаимодействия патогена с организмом насекомого - хозяина, послужили теоретической основой при разработке серии бактериальных препаратов нового поколения на основе очищенного и активированного дельта-эндотоксина, обладающих инсектицидностью, более чем в 10 раз превышающей таковую для применяемых в настоящее время препаратов, что позволяет соответственно снизить их расход. Они абсолютно безвредны и практически растворимы, что делает перспективными их использование методом аэрозольного распыления. Приоритет в разработке этих инсектицидов защищен патентами Российской Федерации.

Выявленные закономерности позволили предложить приемы повышения эффективности препаратов на основе дельта-эндотоксина, защищенные четырьмя авторскими свидетельствами СССР на изобретения. Разработаны практические рекомендации по эффективному применению бактериальных препаратов в условиях сельского и лесного хозяйства. Предлагаемые технологии апробированы в ряде хозяйств Алтайского края, Новосибирской и Ульяновской областей.

Материалы на один из препаратов на основе очищенного и активированного дельта-эндотоксина (Дельта) переданы в Госкомиссию при МСХ РФ, которой в летнем сезоне 1996 года проведены Государственные испытания препарата, подтвердившие его высокую инсектицидность против листогрызущих вредителей на капусте.

Апробация работы. Основные результаты исследований докладывались на V совещании энтомологов Сибири (Новосибирск, 1979); XIV Тихоокеанском международном научном Конгрессе, Комитет К (Хабаровск, 1979); V Всесоюзной конференции по экологической физиологии, биохимии и морфологии (Фрунзе, 1977); IV региональной конференции молодых ученых Сибири и Дальнего Востока (Новосибирск, 1980); региональной научно-практической конференции молодых ученых Сибири по актуальным проблемам земледелия (Новосибирск, 1981); Всесоюзной школе молодых ученых и специалистов по актуальным проблемам теории и практики защиты растений (Сухуми, 1982); Всесоюзных научно-практических конференциях по микробиологическим средствам защиты растений (Новосибирск, 1985, 1986); Всесоюзной конференции координационного Совета программы «Сибирь» (Новосибирск, 1987); конференциях Сибирского отделения Всесоюзного микробиологического общества РАН (Новосибирск, 1983, 1997); Всесоюзных и региональных научно-практических и производственных конференциях и совещаниях по проблемам экологии и сельского хозяйства (Барнаул, 1987, 1990, 1991, 1992; Ульяновск, 1977); Всесоюзной научно-практической конференции по овощеводству (Минск, 1992); производственной конференции специалистов лесного хозяйства России (Ульяновск, 1993);научно-практических конференциях НИИ овощного хозяйства (Москва, 1982 - 1986); межлабораторных семинарах Сибирского НИИ земледелия и химизации СО ВАСХНИЛ (Новосибирск, 1973 - 1982); кафедре энтомологии Ленинградского СХИ (1984).

Публикации результатов исследований. Основные положения опубликованы в 45 работах, включая 7 авторских свидетельств и патентов СССР и РФ.

Объем диссертационной работы. Диссертационная работа изложена на 345 страницах компьютерного набора, включает 61 таблицу и 49 рисунков. Диссертация состоит из введения, 8 глав, включающих обзор литературы, результаты исследований и их обсуждение с учетом существующих в литературе данных, заключения, выводов, материалов и методов исследований и списка литературы. Список цитируемой литературы содержит 420 источников,в том числе 117 на русском языке. Диссертация снабжена приложением, включающим акты и официальные

Заключение диссертации по теме «Защита растений», Каменек, Людмила Кирилловна

ВЫВОДЫ

1. Установлен ранее неизученный механизм действия белкового бактериального токсина Вас. thuringiensis, отличный от известного для холерного токсина и включающий проникновение в клетку-мишень кишечного эпителия чувствительных насекомых с последующим воздействием на митохондрии.

2. Первичным эффектом дельта-эндотоксина является разобщение окислительного фосфорилирования и дыхания в митохондриях клетокмишеней кишечного эпителия, приводящего к блокированию синтеза АТР в щ течение первой минуты воздействия. Стимулирование поглощения 02 в начале интоксикации связано с высокой потребностью дыхательной цепи в i т Ь воссановлении потенциала при разобщении. Первичность разобщающего действия дельта-эндотоксина на митохондрии подтверждена методами | электронной микроскопии.Направленное воздействие является следствием f быстрого проникновения эндотоксина через цитоплазматическую мембрану и | обеспечивается благодаря наличию морфофункционального объединения I последней с митохондриями.

3. Методами воздействия на искусственные фосфолипидные мембраны I и интактные митохондрии, ИК- и ЯМР- спектроскопии уточнено строение дельта-эндотоксина и его свойства как разобщителя протонофорного типа, обладающего большим количеством лабильных протонов. ^

4. Угнетение синтеза АТР в митохондриях и усиление поглощения 02 в первые 10 мин приводит к интенсификации процесса гликолиза в цитоплазме по аэробному механизму, частично компенсирующего потерю ^ клеткой энергии за счет усиления потребления глюкозы , с последующим его ингибированием до полного прекращения в результате угнетения дыхания.

5. Снижение потребления кислорода интенсифицирует анаэробный | г t гликолиз с образованием лактата в цитоплазме кишечных клеток. Изменение активности ЛДГ в гемолимфе может служить простым тестом определения чувствительности насекомых к эндотоксину, поскольку, чем она выше, тем быстрее и в большем количестве обнаруживается фермент.

6. Деэнергизация клеток приводит к нарушению активного транспорта ионов К+, 1Яа+, Са2+ и через цитоплазматическую мембрану клеток кишечного эпителия, которому предшествует активирование АТРазной транспортной системы. Следствием нарушения ионного транспорта является нарастающая во времени вакуолизация, возникающая в результате нерегулируемого притока воды и приводящая к разрушению (лизису) клеток.

7. Выявлена связь между характером активирования М£2+-АТРазы и чувствительностью вида к дельта-эндотоксину, а также особенностями протекания вызванного им патологического процесса. Пики активирования фермента соответствуют максимальному развитию болезни (5 - 60 мин и 12 -30 ч). Второй пик не наблюдается у высокочувствительных видов и при большой дозе токсина. Снижение активности соответствует включению защитных механизмов.

8. Механизм действия дельта-эндотоксина одинаков в пределах патотипа А для всех чувствительных к нему видов. Различия носят количественный характер и связаны с особенностями организма насекомых, а все проявления токсического действия пропорциональны его концентрации (дозе) и времени воздействия.

9. Важнейшими причинами устойчивости насекомых к дельта-эндотоксину являются неспособность растворять его из-за отсутствия в кишечнике условий (низкий рН у обыкновенного соснового пилильщика), секреция в его полость инактивирующих факторов (капустная совка) и вероятно отсутствие или малое количество рецепторных центров на поверхности клеток кишечного эпителия, обеспечивающих проникновение токсина.

10. Выявленные закономерности явились теоретической основой для разработки высокоэффективных препаративных форм на основе дельта-эндотоксина (серия Дельта) и способов их применения, обеспечивающих гарантированную защиту растений от вредителей и обладающих высокой степенью экологической безопасности. Препараты защищены патентами РФ, не имеют в настоящее время аналогов и представляют новое поколение биологических инсектицидов.

11. Предложены пути совершенствования эндотоксинсодержащих препаратов. Введение активирующих адыовантов (ЭДТА и аскорбиновой кислоты), усиливающих разобщающее действие дельта-эндотоксина, повышает инсектицидносгь Дельта против капустной совки в условиях полевого испытания при норме расхода 0,1 кг/га на 15 и 39,5 %, после первой обработки. Эффективность третьей обработки при этом достигает 98 - 99 %, обеспечивая полный защитный эффект.

12. Разработана технология применения эндотоксинсодержащих препаратов против комплекса листогрызущих вредителей капусты, включая капустную совку, позволяющая исключить использование химических инсектицидов. С учетом биологических и фенологических особенностей вредителей рекомендуется проведение 3 обработок с интервалом 7 дней при норме расхода Дельта 0,2 или лепидоцида 2 кг/га, причем первая должна быть выполнена в период массовой яйцекладки и отрождения гусениц капустной совки. В сезоны вспышки численности капустной белянки целесообразна четвертая обработка при норме расхода Дельта 0,1 или лепидоцида 1 кг/га. Использование предлагаемой технологии в ряде овощеводческих хозяйств позволило увеличить рентабельность защитных мероприятий в 5 - 13 раз.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В настоящее время промышленные препараты на основе спорообразующей кристаллофорной бактерии Bacillus thuringiensis являются наиболее важными средствами биологического метода регуляции численности насекомых во многих странах.

Кроме спор и кристаллического белкового включения, дельта-эндотоксина, бактерия может продуцировать ряд других токсинов, способных проявлять инсектицидные свойства: фосфолипаза С, альфа-, бета- и гамма-экзотоксины. Эти токсины выделяются бактерией в культуральную среду, продуцируются лишь некоторыми подвидами и в определенных условиях, следовательно, они не являются облигатными для патогенеза, хотя и способны усиливать его. Споры же в отсутствие кристалла непатогенны, либо малопатогенны для насекомых (Mohd -Salleh and Zeurs, 1982; Burges et al., 1976).

Практически строго обязательным для возникновения специфических синдромов, вызванных Вас. thuringiensis, следует признать кристаллический белковый дельта-эндотоксин. Установлено, что все восприимчивые виды насекомых обнаруживают аналогичное проявление его действия, хотя дозы эндотоксина при этом различны для разных видов (Faust, 1984).

Существенный вклад в подтверждение этого мнения в последние годы внесли интенсивные генетические исследования. Они подтвердили, что образование белкового кристалла не является артефактом. Он не представляет собой побочного продукта споруляции, удаляемого из растворимой среды путем кристаллообразования, а синтезируется в результате процесса образования белка спор (Somerville, 1978). Белки споровой оболочки и кристалла гомологичны и синтез их генетически детерминирован (Jizuka et al., 1981). В генетическом детерминировании кристалла принимают участие плазмиды (Дебабов и соавт., 1977; Галушка и Азизбекян, 1977 и др,). Считают, что плазмидная ДНК имеет хромосомное происхождение (Ermakova et s al., 1978). В последние годы осуществлена идентификация и клонирование ряда генов и плазмид, кодирующих полипептидную последовательность дельта-эндотоксинов (Hodgmann & Ellar, 1994; Wang et al., 1996), выясняются механизмы оперонной регуляции их экспресии ( Crikmore et al., 1993). Интенсивность синтеза параспоральных кристаллов зависит от условий, в которых происходит спорообразование, и может быть сведена до абсолютного минимума. Напротив, поскольку биосинтез кристаллов тесно связан со спорогенезом, то аспорогенные, но кристаллоносные мутанты крайне редки (Sommerville, 1971) и на самом деле, очевидно, являются олигоспорогенными с тенденцией к реверсии (восстановлению) (Krieg and Miltenburger, 1984).

Все вышесказанное убеждает, что для разработки и успешного применения биопрепаратов на основе Вас. thuringiensis необходимо прежде всего изучение свойств и механизма действия дельта-эндотоксина на организм вредителя.

Было предпринято много попыток отыскать корреляции между формой и размерами кристаллов и их токсичностью и специфичностью в отношении насекомых (Ануфриев, 1985; Смирнова и соавт., 1984; Бурцева и соавт., 1973; 1989; Sharp and Baker, 1979; Iizuka and Yamamoto, 1984 и другие). Закономерно, что наиболее распространенными формами для большинства подвидов бактерии являются бипирамидальная, свойственная вссем кристаллам патотипа А, токсичным для чешеукрылых, кубоидальная и овальная или неправильная (табл. 2.1.1). Согласно наблюдениям О.И.Швецовой (1962), кристаллы subsp.galleriae с четкими гранями менее патогенны, чем овальные. Возможно, что в этом случае речь идет не о двух различных формах, а частичном растворении под действием среды, что и приводит к повышению активности, способствуя освобождению активных центров кристалла. Такое предположение логично, так как известно, что кристалл-протоксин становится собственно токсином только после растворения в кишечнике насекомого, тогда как инъекция в гемоцель гибели не вызывает (Angus, 1954).

Не установлено существенных различий в структуре кристаллов разных видов, размерах и форме составляющих его субъединиц (Grigorova et al., 1967; Sommerville, 1977 и другие), их химическом составе (Честухина и соавт., 1978; Bulla et al., 1981 и другие), а также химических свойствах (Hannay and Fitz-James, 1955; Lecadet, 1966; 1967 и другие). Обращает лишь на себя внимание высокое содержание, до 25% от общего количества, аспарагиновой и глутаминовой кислот (табл. 2.3.1).

Детальное изучение внутримолекулярной организации дельта-эндотоксинов патотипа А различного происхождения показало их значительное сходство. Считают, что главным компонентом кристаллов является белок-протоксин с молекулярной массой около 130-140 кД, который в кишечнике насекомого под действием щелочного pH и ферментов разрушается, высвобождая комплекс полипептидных компонентов. Это не случайный набор полипептидов, а совокупность стабильных доменов с молекулярной массой около 70, 30 и 10 кД. Установлено, что разложение кристаллообразующих белков различных подвидов Вас. thuringiensis эндогенными протеиназами разного происхождения и специфичности неизменно приводит к образованию N-терминального стабильного доменного полипептида массой около 70 кД, который при введении в гемоцель насекомого вызывает его гибель, то есть соответствует истинному токсину (Chestukhina et al. ,1982 и другие). Видимо, компоненты с более низкой массой выполняют функцию усиления или расширения специфичности токсина, защиты его в бактерии или, что очень вероятно, влияния на рецепторы эпителиальных клеток кишечника насекомого (Knowles et al., 1984). Образуются они при гидролизе С-терминальной части молекулы протоксина.

В исследованиях последних лет удалось расшифровать структуру доменного N- терминального полипептида для дельта-эндотоксинов класса

-—^ 279

Cry I А, токсичных для чешуекрылых ( Но fite & Whitelley, 1989; Smith & Ellar, 1994). В их состав входит три домена (I - III), выполняющих определенные фукнции. Например домен II участвует в узнавании и связывании с рецепторными центрами чувствительных клеток- мишеней кишечника насекомых, а домен I проникает в их мембраны формирует поры - каналы. Структура и аминокислотный состав домена I практически одинаковы для всех Cry I А дельта-эндотоксинов (Честухина и соавт., 1986). В соответствии с этим одинаковыми оказываются форма, параметры и транспортные свойства образуемых каналов (Carrol & Ellar, 1993; 1997).

Установлено, что рецепторами клеток-мишеней,с которыми связывается дельта-эндотоксин являются мембранные гликопротеины с ом. концевым N-ацетил- D - галактозамин' в качестве непосредственного акцептора (Hofmann et al., 1995).

Согласно этим исследованиям микроворсинки клеток кишечного эпителия являются практически единственной его частью, атакуемой токсином in vivo. При этом нерастворенный токсин имеет значительно меньшее сродство к ним по сравнению с растворенными.

Доказана также с помощью использования радиоактивной метки способность токсина проникать через ненарушенную клеточную мембрану (Fast and Videnova, 1974) в течение одной минуты после перорального его введения. Этот факт подтверждается установленной нами возможностью проникновения дельта-эндотоксина через искусственную фосфолипидную мембрану (Каменек и Штерншис, 1986), а также опытами, демонстрирующими влияние его на проницаемость искусственных липосом (Haider and Ellar, 1989). Возможность и сила действия токсина зависят не только от наличия таких рецепторов, но и от их количества, а также от концентрации токсина.

Образовавшиеся каналы, вероятнее всего, предназначены для транспорта самих токсических полипептидов, так как обладают высоким В сродством к ним. Процесс их переноса в клетку 20 - 30 раз быстрее, чем воды и глюкозы (Кагава, 1985).

Отмеченная выше универсальность, гомологичность строения и состава дельта-эндотоксинов Cry I А различного происхождения (кроме цитолитических компонентов около 28 кД subsp.israelensis и подобных им у других подвидов Cyt класса, не обладающих избирательным действием (Li et al., 1996)) убеждают, что механизм их действия должен быть единым во всех случаях.

Изучение методами ИК-спектроскопии с применением неиспользовавшегося ранее для этих целей приема снятия ИК-спектров в абсолютном пиридине (кривая 1, рис. 3.3.2) позволило показать необычно высокое содержание лабильных ("кислых") протонов, которые легко могут быть отданы дельта-эндотоксином. Результаты были подтверждены методом ЯМР-спектроскопии при сравнении спектров, снятых в ДМСО и ДМСО с добавлением ДгО (дейтериевой воды) (рис. 3.3.3).

Большое количество лабильных протонов обусловлено доминирующим содержанием в составе белкового дельта-эндотоксина глутаминовой и аспарагиновой аминокислот по сравнению с остальными аминокислотами. Вещества природного или синтетического происхождения, обладающие лабильными протонами, можно рассматривать как потенциальные агенты, способные разобщать процессы окислительного фосфорилирования (синтеза АТР) и дыхания в митохондриях.

Доказано, что первичным местом действия дельта-эндотоксина является средний отдел кишечника насекомого (Angus, 1954). При этом, как показывает анализ огромного числа публикаций, патологические изменения клеток кишечника, вызванные им, и их временная последовательность одинаковы для всех восприимчивых насекомых, независимо от их типа, согласно классификации Хеймпела (Heimpel, 1967). Во всех случаях в первые 5-15 мин после перорального введения токсина наблюдали существенные изменения клеток кишечного эпителия, такие как исчезновение базальных включений, набухание апикальной микроворсиночной области с экструзией (вытеснением) довольно крупных глобул-вакуолей, вакуолизация эндоплазматического ретикулума, аппарата Гольджи, митохондрий, отделение кишечных клеток друг от друга с последующим их разрушением. Большинство таких исследований выполнено на насекомых I типа, согласно классификации Хеймпела, у которых патогенез сопровождается общим параличом (Iizuka, 1974; Ebersold et al., 1978), однако явления, описанные выше доказаны и для насекомых II типа, у которых паралича не наблюдается (Endo and Nisniitsutsuji-Uwo, 1981). Это также свидетельствует об едином характере механизма действия дельта-эндотоксина, а различия во внешних проявлениях патогенеза скорее всего связаны с защитными механизмами насекомых.

Наиболее полную информацию, позволяющую не только констатировать патологическое воздействие дельта-эндотоксина на клетки кишечника насекомых, но и проследить его динамику во времени, обеспечили исследования, выполненные на клеточных культурах in vitro методами световой, электронной сканирующей и трансмиссионной микроскопии. Вакуолизация клеток начиналась уже через 1 мин инкубации (рис. 3.2.2), нарастала во времени и прямопропорционально зависела от концентрации эндотоксина (табл. 3.2.1). Характер и динамика изменений были идентичными для токсина всех изученных штаммов. Нарастающая вакуолизация клеток приводила к их разрушению, временная последовательность которого также подчинялась описанным выше для кишечных клеток закономерностям (рис. 3.2.4; табл. 3.2.1).

Разрушение цитоплазматической мембраны в результате вакуолизации демонстрируют результаты изучения методом электронной сканирующей микроскопии (рис. 3.2.5 - 3.2.10). Объем клетки сильно увеличивается за счет образования вакуолей (рис. 3.2.7), что приводит к растягиванию цитоплазматической мембраны и, как следствие, ее механическому повреждению (разрыву) (рис.3.2.8). Сильная вакуолизация внутриклеточных структур, особенно эндоплазматического ретикулума и комплекса Гольджи, также приводит к их разрушению, что ясно видно на рисунке 3.2.9.

Эти результаты представляются важными, так как доказывают, что причиной разрушения клеток является именно их вакуолизация, а не действие каких-либо литических агентов, присущих Вас. thuringiensis, независимо от причин, которыми сама вакуолизация вызвана.

Данные электронной трансмиссионной микроскопии показали, что в первую очередь дельта-эндотоксин воздействует на митохондрии, кристы которых сильно вакуолизируются. При этом сама митохондрия не увеличивается значительно в размерах, так как матрикс ее сокращен и крайне плотен для электронов (рис. 3.2.14 и 3.2.15); такая форма митохондрии, "конденсированная", характерна именно для деэнергизованных органелл и наблюдается, в частности, при действии веществ, разобщающих процессы окислительного фосфорилирования и дыхания (Бакеева и Ясайтис, 1972).

С помощью прямых методов, было показано, что дельта-эндотоксин обладает способностью разобщать окислительное фосфорилирование и дыхание. Этот эффект обнаружен с помощью искусственных фосфолипидных ("черных") мембран, сопротивление которых снижается под действием разобщителей типа ионофоров (протонофоров). Было установлено, что дельта-эндотоксин достоверно снижал в серии опытов сопротивление мембран в 3-5 раз. Результаты были подтверждены в экспериментах на интактных, нормально функционирующих митохондриях с использованием проникающих ионов (рис. 3.3.5). Обнаружено, что дельта-эндотоксин, не оказывая влияния на дыхательную цепь митохондрии, ингибировал синтез АТР, то есть проявлял свойства типичного разобщителя окислительно фосфорилирования и дыхания. Описанные эксперименты, кроме того, доказывают способность токсина проникать через фосфолипидные мембраны, в том числе и митохондриальные.

В свете вышеизложенного „ не вызывает сомнения тот факт, что первичным действием дельта-эндотоксина является разобщающее. Возможность этого обеспечивается дополнительно тем, что цитоплазматическая мембрана клеток кишечного эпителия насекомых имеет форму глубоких впячиваний, в которых расположены митохондрии, явление, известное как морфофункциональное объединение митохогдрий с цитоплазматической мембраной и обеспечивающее интенсивный ионный обмен как наиболее энергоемкий в этом случае процесс (рис. 3.3.6). Такое объединение объясняет чрезвычайно быстрое (в течение первой минуты) разобщающее действие дельта-эндотоксина на митохондрии кишечных клеток насекомого.

Дальнейшим доказательством разобщающего действия дельта-эндотоксина является его влияние на продукцию АТР в митохондриях и интенсивность их дыхания. Синтез АТР снижался при любых используемых концентрациях токсина от 17 до 280 мкг/мл. Стимулирование поглощения кислорода в первые 5 мин связано с высокой потребностью митохондрии в востановлении посредством этого электрического потенциала в сравнительно лабильной электронно-транспортной системе дыхательной цепи. Последующее угнетение поглощения О2 вызвано снижением фосфорилирования, так как работа дыхательной цепи является энергозависимым процессом. Стимулирование дыхания начинается сразу же вслед за воздействием дельта-эндотоксина на АТР-синтезирующий комплекс, то есть в течение первой минуты (рис. 3.4.1). При этом , чем выше была концентрация токсина, тем значительнее усиливалось потребление О2 (рис. 3.4.2). Далее потребление кислорода снижалось при всех концентрациях токсина через 15 мин и тем быстрее, чем выше была концентрация последнего (рис. 3.4.1 и 3.4.2). Наиболее полно эффект начального стимулирования кислородопотребления с последующим его угнетением при общем снижении синтеза АТР демонстрирует коэффициент фосфорилирования (дыхательный контроль) Р/О, служащий мерой эффективности сопряжения синтеза АТР и дыхания в митохондриях (табл. 3.4.1), который во всех случаях оказывался ниже нормы от 5,5 до 32 раз. Снижение его тем значительнее, чем выше концентрация дельта-эндотоксина и чем длительнее его воздействие.

Эти результаты свидетельствуют о том, что дельта-эндотоксин, не воздействуя на процессы в дыхательной цепи митохондрии, блокирует ее АТР-синтезирующую систему, основным звеном которой является Н+-АТРаза (АТР - синтетаза).

Согласно существующим представлениям (Скулачев, 1974), синтезируемый в митохондриях АТР обменивается на цитоплазматический АДР в результате механизма активного их антипорта через митохондриальную мембрану. Следовательно, разобщающее действие дельта-эндотоксина полностью лишает клетку энергии, обеспечиваемой окислителным митохондриальным синтезом АТР, что приводит к значительной ее деэнергизации в]целом.

Ранее отмечалось стимулирование поглощения глюкозы клетками кишечника насекомого при пероральном введении им дельта-эндотоксина в течение первых 10 мин (Murphy et al., 1976). Установлено, что это не является следствием общего нарушения транспорта ионов и неэлектролитов, которое наблюдается не ранее, чем через 15 мин (Fast and Donaqhue, 1971).

Катаболизм глюкозы в цитоплазме клетки, не только сопровождается синтезом некоторого (незначительного) количества АТР, но в аэробных условиях в основном является поставщиком предшественников субстратов дыхательной цепи, легко проникающих в митохондрии. Известно, что в клетках кишечного эпителия насекомых при аэробном гликолизе в равных количествах образуются пируват и 3-фосфоглицерат, способные переноситься в матрикс и вступать в цикл Кребса, синтезирующий субстраты дыхательной цепи. В условиях повышенного дыхания митохондрий увеличивается и их потребность в восстановительных эквивалентах, что должно привести к усилению гликолиза в цитозоле. При изучении влияния дельта-эндотоксина на интенсивность гликолиза удобными моделями оказались 3-фосфоглицератдегидрогеназа, активность которой тем выше, чем выше степень аэробности условий, и лактатдегидрогеназа, для которой характерно обратное. Активирование 3-фосфоглицератдегидрогеназы наблюдали в течение первых 10 мин действия токсина, что соответствует максимуму потребления глюкозы (рис. 3.5.1). Скорость и величина активирования были значительнее для более высоких концентраций дельта-эндотоксина. Наблюдаемая картина была идентичной для клеток культуры in vitro и кишечного эпителия, после перорального введения эндотоксина in vivo (рис. 3.5.2). После 10 мин действия токсина активность фермента постепенно снижалась практически до полного его инактивирования через 30 мин. Это связано с прекращением окислительного синтеза АТР в митохондриях в результате разобщающего влияния дельта-эндотоксина, и их деэнергизации, что приводит к торможению дыхательной цепи, нарушению транспортных функций митохондриальных мембран в отношении метаболитов гликолиза.

Очевидно нарастающие в клетке анаэробные условия приводят к переключению гликолиза на анаэробный режим. Об этом свидетельствует динамика изменения активности лактатдегидрогеназы в цитозоле клеток, которая практически отсутствовала в период максимального потребления кислорода, 1-5 мин (рис. 3.5.3 и 3.5.4), и резко повышалась через 10-15 мин, что говорит об увеличении степени анаэробности условий. Однако анаэробный гликолиз не может обеспечить энергетических потребностей клетки, так как в ходе окислительного фосфорилирования синтезируется до 20 молекул АТР, тогда как при гликолизе всего 2 на каждую расщепляемую молекулу глюкозы.

Снижение активности внутриклеточной лактатдегидрогеназы, наблюдавшееся во всех случаях после 15 мин действия дельта-эндотоксина н рис. 3.5.3, 3.5.4), представляется связаным с выходом фермента из клеток в результате нарушения целостности их мембран. Известно, что подобное явление имеет место при любых деструкциях цитоплазматических мембран (Хиггинс, 1990). Это подтверждают результаты изучения изменения активности лактатдегидрогеназы в культуральной жидкости и гемолимфе насекомых (рис. 3.5.5 и 3.5.6), которая начинала повышаться уже через 5 мин, возрастала с увеличением времени воздействия дельта-эндотоксина, и была тем значительнее, чем больше была концентрация токсина.

Деэнергизация ? связанная с разобщающим действием дельта-эндотоксина, приводит к нарушению работы ее энергозависимых систем, а в кишечных клетках,в первую очередь, активного транспорта ионов через мембраны. Отмечали значительные изменения рН, концентрации ионов калия, натрия, магния, кальция, хлорида, карбоната в гемолимфе и кишечной ткани насекомых в различные моменты времени после скармливания токсина (Fast and Angus, 1965; Narayanan and Jayaraji, 1974; Gill et al., 1993). Колебания концентрации ионов не зависели от содержания их в кормовом субстрате (Pendleton, 1970) и не являлись первичными в механизме действия дельта-эндотоксина (Faust, 1984), так как ни в одном случае не наступали ранее, чем через 10 мин после обработки токсином. Показано, что голодание также не может подобным образом влиять на ионный транспорт (Smirnoff and Valero, 1980).

Нормальную концентрацию ионов в клетках и межклеточных жидкостях поддерживают мембранные транспортные системы, важнейшим звеном которых являются высокоспецифичные транспортные АТРазы. Действие дельта-эндотоксина на культуру клеток непарного шелкопряда TN -368 стимулировало активность Mg2+ - зависимой К+, Na +- АТРазы (Himeno et al., 1985). Однако внесение в среду АТР или GTP снимало активирующий эффект и блокировало вакуолизацию клеток. Именно таким образом должна реагировать клеточная культура в случае первичности разобщающего действия дельта-эндотоксина, так как внесение АТР или GTP предотвращает деэнергизацию клеток, несмотря на прекращение ими синтеза собственной АТР. Установлено, что для всех известных типов клеток разобщение окислительного фосфорилирования и дыхания в митохондриях всегда сопровождается стимулированием активности транспортной Mg2+ -зависимой К+, Na АТРазы (McMurray and Begg, 1969).

Детальное изучение влияния дельта-эндотоксина in vivo на уровень активности транспортной Mg2+ -зависимой К+, Na АТРазы среднего кишечника гусениц монашенки и содержание ионов в гемолимфе показало, что изменение концентрации ионов является следствием опосредованного разобщением воздействия на данную ферментную систему. Наиболее значительно изменялся уровень К+ в гемолимфе. При этом заметное его увеличение в 1,5 раза наблюдалось только спустя 15 мин после введения токсина, тогда как активность фермента увеличивалась в 1,6 раза уже спустя 5 мин и достигала максимума (в 2 раза) через 15 мин. Степень увеличения активности Mg2+ -зависимой АТРазы пропорциональна изменению концентрации ионов К+ в гемолимфе (табл. 3.6.1 и 3.6.2). Отмечена тенденция снижения содержания ионов Са2+ и увеличения Mg2+ в гемолимфе в период времени 15-60 мин. Не обнаружено достоверных изменений уровня Na+.

Применение вдвое большей концентрации дельта-эндотоксина вызвало активирование фермента кишечников непарного шелкопряда, обладающего одинаковой восприимчивостью с монашенкой, которое также начиналось спустя 5 мин (1,6 раза), но было более длительным и значительным (6 ч и 6,7 раза, соответственно) (табл. 3.6.3 и 3.6.4). Эти данные демонстрируют, что чем выше концентрация токсина, тем сильнее вызываемый им эффект, и тем меньше возможность ремиссии, то есть восстановления исходного статуса организма в результате включения защитных механизмов.

Еще более показательные результаты получены при изучении уровня концентрации ионов не в гемолимфе, а в ткани среднего отдела кишечника в различные моменты действия дельта-эндотоксина. Это связано с тем, что у насекомых ионообмен интенсивно осуществляется не только между клетками кишечника и гемолимфой, но и между этими клетками и содержимым кишечника, причем последний более интенсивен. Важно также, что Са2+, например, в норме в основном локализуется во внутриклеточных мембранных структурах - митохондриях, эндоплазматическом ретикулуме, а не в цитозоле. Поэтому нарушение его транспорта, скорее^ произойдет между цитозолем и органеллой, и не обязательно между клеткой и гемолимфой.

Установлено, что концентрации неорганических ионов значительно изменялись, начиная с 15 мин после введения токсина (табл. 3.6.6). Максимальные изменения наблюдали через 60 мин действия патогена. Уровень натрия и кальция увеличивался в 2-2,2 и 1,3 раза, соответственно, а калия и магния снижался до 56-60% и 71-75% от исходного. В период времени от 15 мин происходит интенсивное нарастание вакуолизации клеток кишечника (табл. 3.2.1), связанной с нарушением транспорта ионов, и в первую очередь Na+, через цитоплазматическую мембрану. Повышение концентрации последнего в клетке приводит к усилению пассивного транспорта воды в нее, что и является непосредственной причиной вакуолизации. Нарушение активного транспорта ионов приводит к соответствующему влиянию на зависимый от него вторичный транспорт аминокислот и Сахаров. Это в свою очередь, наряду с деэнергизацией, влечет за собой снижение скорости синтетических процессов, в том числе синтеза белка и нуклеиновых кислот, что проявляется уменьшением количества хроматина в ядре и рибосом (рис. 3.2.13).

Опыты in vitro с гомогенатами, содержащими целые клетки кишечников насекомых трех видов (табл. 3.6.7.-3.6.9), показали, что максимальное активирование Mg2+ - зависимой К+, Na АТРазы достигается при концентрации дельта-эндотоксина 0,075-0,125 мг/мл, а дальнейшее увеличение концентрации не приводит к усилению стимуляции активности фермента. Это, вероятно, обусловлено насыщением рецепторов на мембране, с которыми связывается токсин, и ограничением его транспорта в клетку. Степень активирования АТРазы коррелировала с восприимчивостью вида к дельта-эндотоксину (табл. 3.6.10 и 3.6.11) и была максимальной для препаратов из ткани боярышницы (2,4 раза), несколько ниже (2,1 раза) обыкновенного соснового пилильщика и наиболее низкой (1,4 раза) капустной совки (табл. 3.6.9). Первое соприкосновение токсина с организмом насекомого происходит именно в кишечнике, поэтому чувствительность его клеток к патогену определяет таковую для вида в целом. Очевидно это связано с количеством рецепторов на клеточных мембранах, способных взаимодействовать с дельта-эндотоксином. Следовательно, изучение действия данного токсина на АТРазу кишечника, наряду с определением активности лактатдегидрогеназы в гемолимфе, может служить удобным тестом для установления восприимчивости к нему насекомых.

Полученные in vitro результаты в целом подтверждаются установленными при пероральном введении эндотоксина гусеницам in vivo закономерностями (рис. 3.6.1 - 3.6.6). Характерной особенностью полученных графиков является наличие пиков увеличения активности АТРазы в первые 30-60 мин действия токсина (период "острой" интоксикации). Снижение степени активирования после этого промежутка времени объясняется включением защитных механизмов, которые слабее всего у видов, чувствительных к патогену, и подавляются в течение этого периода (рис. 3.6.1, 3.6.2 и 3.6.4). Второй пик активирования фермента через 12-30 ч соответствует у видов чувствительных и при достаточной дозе токсина максимальному (летальному) развитию болезни. Именно этот период совпадает в контрольных опытах (табл. 3.6.10) с началом массовой гибели насекомых. Период между пиками, соответствующий включению защитных механизмов, очевидно, тем короче, чем выше доза токсина и чувствительность вида к нему. Отрезки кривых после 24 ч характеризуется постепенным возвратом ферментативной активности у выживших особей до исходного уровня. Этому соответствует восстановление нормального физиологического состояния (ремиссия): подвижности, интенсивности питания, веса.

Анализ многочисленных литературных данных, а также собственные исследования не оставляют сомнения в том, что механизм действия дельта-эндотоксина Cry I А разных подвидов Вас. thuringiensis на все восприимчивые к нему виды насекомых универсален, то есть одинаков во всех случаях. Различия носят количественный характер и их, скорее, следует искать в биологии насекомого и особенностях организма, включая наличие и число центров связывания токсина на поверхности клеток кишечного эпителия. Изучение ЛД50 и действия дельта-эндотоксина Cry I А, выделенного из нескольких штаммов шести подвидов Вас. thuringiensis, на Mg2+ -зависимую К+, Na +- АТРазу кишечной ткани двух видов вредителей-фитофагов, отличающихся степенью восприимчивости к нему (непарного шелкопряда и капустной белянки), подтвердило, что полученные параметры очень близки внутри вида (табл. 4.2 - 4.4), различия между ними находятся в пределах ошибки измерения.

Проблема устойчивости насекомых к действию дельта-эндотоксина Вас. thuringiensis и препаратов на ее основе, а также возможного возникновения резистентности к ним у чувствительных видов является одной из ключевых в защите растений. Поскольку эндотоксин является патогеном кишечного действия и не обладает контактным или системным, то восприимчивыми к нему могут быть лишь виды с ротовым аппаратом грызущего или лижущего типа.

Другим важным механизмом, обусловливающим устойчивость к эндотоксину, является рН кишечного сока, который должен быть щелочным (более 8) для обеспечения растворения токсина. Показано, что личинки обыкновенного соснового пилильщика, рН кишечного сока которого составляет около 7, практически невосприимчивые к действию культуры Вас. thuringiensis и препаратам на ее основе, были высокочувствительны к растворенному дельта-эндотоксину (табл. 5.1), а ЛД50 для них составила 0,07 мг/г массы насекомого. Mg2+ -зависимая К+, Na

АТРаза кишечников личинок также стимулировалась при действии дельта-эндотоксина как in vitro, так и in vivo (табл. 3.6.9; рис. 3.6.3 и 3.6.4). Следовательно устойчивость данного вида к Вас. thuringiensis обусловлена неспособностью растворять кристаллы из-за низкого значения рН, и применение растворенного токсина позволяет ее преодолеть, расширяя спектр насекомых - объектов борьбы.

На скорость и степень растворения кристаллов влияет присутствие в кишечнике восстановительных агентов, способных усиливать эффект (аскорбиновая кислота) или тормозить его (фосфолипиды, фенолы, таннины).

Особого внимания заслуживает изучение механизма устойчивости к Вас. thuringiensis совок, являющихся опасными многоядными вредителями растений. На примере гусениц капустной совки, рН кишечника которой сильнощелочной, 9,6, и увеличивается с возрастом насекомого (Батурина, 1970), удалось показать, что причиной ее резистентности не является неспособность растворять кристаллы. Предварительное растворение кристаллов дельта-эндотоксина, в том числе в кишечном соке капустной белянки, не приводило к усилению его действия. Введение даже таких высоких доз, как 5 мг/гусеницу IV возраста не вызывало гибели; не отмечено активирования Mg2+ -зависимой К+, Na +- АТРазы при действии на кишечные клетки in vitro и in vivo у гусениц, начиная с III возраста (табл. 5.2 и 5.3). Увеличение активности наблюдали лишь у гусениц II возраста при концентрации дельта-эндотоксина 0,075-0,125 мг/мл, причем эффект был во много раз слабее, чем у восприимчивых видов. Было однако установлено, что гусеницы капустной совки весьма чувствительны к действию дельта-эндотоксина в первые 3-4 дня после выхода из яиц, и JIK50 составляет 0,19 мг/мл.

Введение дельта-эндотоксина, обработанного кишечным соком гусениц капустной совки, приводило к заметному снижению гибели гусениц капустной белянки IV возраста (табл. 5.4) и увеличению ЛД50 почти в 12 раз (табл. 5.5). Следовательно, одной из причин устойчивости данного вида является наработка в кишечном соке гусениц совки, начиная со II возраста, метаболитов, способных инактивировать дельта-эндотоксин или чувствительные к нему центры на поверхности клеток кишечного эпителия. Веществами-инактиваторами дельта-эндотоксина могут служить, например, ионы-комплексообразователи. Сравнительный анализ показал почти в 5 раз более высокое содержание ионов Са2+ в кишечном соке гусениц капустной совки V возраста по сравнению с капустной белянкой того же возраста (табл. 5.6), причем уровень концентрации иона возрастал в процессе жизненного цикла гусеницы совки. Данный ион может являться фактором инактивации дельта-эндотоксина. Экспериментальные данные доказывают способность кишечного сока гусениц капустной совки инактивировать действие дельта-эндотоксина. В соответствии с этим следует признать наиболее вероятной инактивацию компонентами кишечного сока либо чувствительных рецепторов клеток эпителия, либо самого дельта-эндотоксина. Оба эти подхода не исключают также возможности уменьшения количества центров связывания (рецепторов) с увеличением возраста насекомого. В пользу последнего свидетельствуют результаты опытов in vitro по изучению действия токсина на Mg2+ -АТРазную систему, в которых исключено влияние кишечного сока.

Проведенные исследования послужили теоретической основой разработки технологии применения бактериального препарата лепидоцида с.к. для регуляции численности гусениц капустной совки, показавшей себя высокоэффективной и рентабельной при защите капусты в овощеводческих хозяйствах Алтайского края. Для преодоления устойчивости гусениц старших возрастов целесообразно использование высоких норм расхода препарата (2-3 кг/га), при этом избыток его идет на связывание в кишечнике насекомых инактивирующих веществ. Особенностью вида является очень растянутый во времени лет бабочек и отрождение яиц. Чтобы иметь возможность при этом условии воздействовать на чувствительных гусениц I возраста, следует увеличить кратность обработок до 3-4 и уменьшить интервалы между ними до 5-7 дней. Эти приемы позволяют создать постоянно высокий фон препарата и повысить эффективность защитных мероприятий с его использованием (табл. 6.1 - 6.7), вплоть до полного отказа от использования химических инсектицидов.

Многолетние наблюдения применения предложенной технологии показали, что следствием ее является сохранение полезной энтомофауны, обеспечивающее естественное сдерживание численности капустной тли. Все это позволяет не только получить продукцию, свободную от химикатов, но и значительно улучшить экологическую обстановку ^целом.

Логическим завершением исследований свойств и механизма действия дельта-эндотоксина явилась разработка теоретических подходов к созданию препаратов, содержащих его в качестве действующего начала. Такие препараты свободны от спор, других токсинов, не обладающих специфическим для вредителя действием, вегетативных клеток и элементов культуральной среды. Приоритет в разработке серии этих препаратов закреплен патентами Российской Федерации №№ 2027369 и 2062577. Как следует из результатов патентного поиска, препараты аналогов в настоящее время не имеют. Главными преимуществами их являются дозированность действующего начала, возможность контроля его содержания путем прямого определения биохимическими методами, меньший расход при большей эффективности для восприимчивых видов, а также абсолютная безвредность в отношении окружающей среды, делающие их инсектицидами принципиально нового типа.

Представителем серии препаратов, отличающихся друг от друга совокупностью вспомогательных компонентов, является Дельта с.п., свойства и технология применения которого прошли многолетнюю проверку.

Препаративная форма обладает высокими параметрами основных физических свойств (табл. 7.1.1). Она относится к хорошо смачивающимся порошкам (60 с) с высокой адгезивной способностью (66%). Соответствующие характеристики для лепидоцида с.п. и лепидоцида с.к. составляют 53 и 530 с и 58,7 и 44,0%. Физическая стабильность рабочей суспензии Дельта выше, чем у названных препаратов (89,3; 72 и 61,2%%, соответственно).

Биологическая эффективность препарата против гусениц капустной белянки (табл. 7.2.1) оказалась в 9,6 раза выше, чем для лепидоцида с.п., и 30,1 раза лепидоцида с.к., благодаря большему содержанию действующего начала и переводу его в активную форму, что дает возможность соответственно уменьшить нормы его расхода.

Препарат обладает выраженным избирательным действием (табл. 7.2.2) в отношении листогрызущих гусениц чешуекрылых и личинок пилильщика и не оказывает влияния на насекомых-паразитов отряда перепончатокрылых, а также сосущих насекомых, так как не обладает системным либо контактным действием.

Инсектицидное действие препарата сохраняется при постепенном ослаблении в течение 10 дней при оптимальных условиях среды (температура 18-28° С, влажность 70-90%, отсутствие дождей) (табл. 7.2.4).

При полевых испытаниях 1991-92 г Дельта с.п. в норме расхода 0,3 кг/га оказался в 1,5-2 раза эффективнее ровикурта и лепидоцида с.к. в норме расхода 2-3 кг/га (рис. 7.2.1 и 7.2.2) против гусениц капустной белянки. В отношении гусениц капустной совки инсектицидность Дельта 0,3 кг/га и лепидоцида 3 кг/га была сравнима с действием ровикурта (рис. 7.2.3 и 7.2.4). Использование Дельта с.п. в норме расхода 0,3 кг/га позволило получить максимальную прибавку урожая 17% (табл. 7.2.7) при минимальной поврежденности растений 5% со степенью повреждения 1 балл (табл. 7.2.6).

С целью преодоления устойчивости капустной совки наряду с применением насыщающих количеств биопрепарата, была изучена возможность усиления его инсектицидности за счет введения активатора. Из целого спектра веществ, потенциально способных выполнять такую функцию, ЭДТА и аскорбиновая кислота продемонстрировали максимальный эффект (табл. 7.3.1).

ЭДТА является комплексообразователем, обеспечивающим связывание ионов Са2+, содержание которых в кишечном соке капустной совки до 5 раз выше, чем у капустной белянки (табл. 5.6). Аскорбиновая кислота кроме этого является сильным восстановителем, способным усиливать разобщающие свойства дельта-эндотоксина.

Применение ЭДТА и аскорбиновой кислоты в качестве активирующих адъювантов даже при использовании низких норм расхода Дельта 0,1 кг/га и лепидоцида 1 кг/га позволило достичь эффективности 56,6-97,8 % и 66,698,7% для Дельта и 49,2-99,0% и 47,0-98,1% для лепидоцида в присутствие ЭДТА и аскорбиновой кислоты, соответственно (табл. 7.3.2 и 7.3.3). Эти значения находятся на уровне полученных при использовании высоких норм расхода для Дельта 0,3 кг/га и лепидоцида 3 кг/га и несколько выше, чем для химического эталона актеллика (45,6-98,6%; 46,5-99,6% и 39,296,2%, соответственно). Использование таких составов значительно снижало поврежденность растений (не более 6% со средним баллом 1) по сравнению с необработанным контролем (20% и 1-2 балла), что обеспечивало улучшение товарного вида продукции (табл. 7.3.4) и прибавку урожая от 43,1 до 68,5% по сравнению с 34,3% при защите актелликом (табл. 7.3.5 и 7.3.6).

Производственные испытания препарата Дельта 0,3 кг/га на капусте против комплекса листогрызущих вредителей подтвердили его высокую эффективность. Численность гусениц через 5 дней после обработки снизилась на 56,6%, тогда как под действием химического инсектицида арриво - на 52,4% (табл. 7.4.3). Поврежденность растений в конце опыта и прибавка урожая были практически одинаковыми для обоих препаратов. Это показывает возможность полной замены химических препаратов на бактериальные нового поколения типа Дельта.

Средние данные по экономической эффективности (табл. 7.4.4) показали, что защитные мероприятия с применением Дельта оказались выгоднее для хозяйства, чем использование химических средств. Эффект может быть гораздо более значительным при осуществлении политики более высоких цен на экологически чистую продукцию, полученную без применения химикатов.

При разработке регламентов использования препаратов, кроме указанных выше высокой биологической эффективности, избирательности и технических качеств, были выявлены другие положительные характеристики препарата. К ним относятся совместимость с большинством биологических и химических пестицидов и удобрений, а также возможность его применения в сочетании с выпуском насекомых-энтомофагов, благодаря чему он хорошо вписывается в общую систему агротехнических мероприятий. Препарат не обладает фитотоксичностью, не вызывает ожогов или других повреждений растений, а следовательно не портит товарного вида продукции, не влияя также на ее запах и вкус. Это обстоятельство полностью обеспечивает возможность варьирования культур в севообороте.

К достоинствам препарата следует отнести и простоту определения действующего начала по общеизвестному методу Лоури (Lowry, 1956) или другому методу определения обычного белка, длительность сроков и простоту условий хранения (не менее 18 мес в сухом помещении при температуре от -20 до +20° С), несложность приготовления рабочей суспензии, обусловленную хорошей смачиваемостью препарата.

Препарат нетоксичен для теплокровных животных и человека. Пероральное введение кроликам и мышам его действующего начала даже в концентрации 700 и 1000 мг/кг, соответственно, не вызывало их гибели. Не отмечено проявления токсичности дельта-эндотоксина патотипа А в отношении насекомых хищников и паразитов (Jaques, 1973; Jousten, 1973). Он не является онкогенным или мутагенным (Zamola et al., 1985). Кроме того, согласно регламентам его применения, его расход на 1 га не превышает 300 г, что соответствует не более чем 60 г действующего начала. Следовательно нет необходимости применения особых мер безопасности при работе с ним, обезвреживания спецодежды, тары, складов, просыпанного или пришедшего в негодность препарата и пролитой рабочей суспензии, как это требуется в случае химических пестицидов.

Важное преимущество препарата состоит в том, что он может быть эффективно использован при распылении аэрозольным генератором, что снижает его расход до 10-20 г/га при сохранении эффективности. Применение химических препаратов этим методом запрещено из-за чрезвычайно высокой токсичности при отсутствии избирательности, а препаратов типа лепидоцида затруднено в силу технологических причин (большой расход, неспособность растворяться, забивание форсунок). Использование Дельта этим методом против непарного шелкопряда в норме расхода 10 г/га позволило достичь 81-94% гибели гусениц, что сравнимо с действием химического препарата Каратэ (90-95%), и обеспечить высокий защитный эффект лиственных лесов в Ульяновской области при снижении обычных затрат на мероприятия по борьбе с вредителем в 50-100 раз по сравнению с обычной авиационной защитой.

Препарат может также широко применяться для защиты садов и луговых культур как при промышленном производстве, так и в условиях приусадебного иди фермерского хозяйства.

Таким образом,результаты изучения свойств и механизма действия дельта-эндотоксина Вас. Лиги^ашв послужили теоретическим фундаментом для успешного решения практических задач, связанных с усовершенствованием бактериальных средств и технологии их применения для защиты растений от вредителей-фитофагов.

Список литературы диссертационного исследования доктор биологических наук Каменек, Людмила Кирилловна, 1998 год

1. Ангус Т., Хеймпел А. Бактериальные инсектициды//Сельское хоз. за рубежом., сер. Растениеводство.- 1961. № 11. - С.

2. Ануфриев Э.Ф. Электронно-микроскопическое изучение кристаллов эндотоксина Bacillus thuringiensis var. dendrolimus //В:i Энтомопатогенные бактерии и грибы в защите растений. 1985. - С. 135 -: 145.

3. Бартнинкайте И.С. Развитие устойчивости к микробным препаратам у насекомых. //Сб.: Микробиологические

4. Бартнинкайте И.С., Бабонас И.Л. Развитие резистентности к Bacillus thuringiensis насекомых. //IX Съезд Всес. энтомол. об-ва. Киев, 1984.-ч. 1. - с. 46-47.

5. Батурин В.В. Инфекционный иммунитет насекомых. //Сб.: Использование микроорганизмов для борьбы с вредными насекомыми в сельском и лесном хозяйстве. Иркутск, 1981. - с. 106 - 107.

6. Батурин В.В. Реакция иммунизированных насекомых на заражение кристаллообразующими бактериями. IIСб.: Энтомо-патогенные бактерии и грибы в защите растений. Иркутск, 1985. - с. 71 - 80.

7. Батурин В.В., Батурина Л.И. Показатель водородных ионов (pH) пищеварительного канала насекомых при заражении кристаллообразующими бактериями. //В кн.: Микроорганизмы в защите растений от вредных насекомых. Иркутск, 1978. - с. 108 - 117.

8. Батурин В.В., Батурина Л.И. Защитные реакции иммунизированных насекомых к кристаллообразующим бациллам. //Сб.: Энтомологические исследования в Киргизии. Фрунзе, 1984. - с. 102 -112.

9. Батурина JT.И. Роль пищеварительного канала в резистентности гусениц сибирского шелкопряда при инфицировании Bacillus thuringiensis. //Автореф. дисс. канд.биол.н. Иркутск, 1970. - 23 с.

10. Беллами Л. Инфракрасные спектры сложных молекул. М.: Иностранная литература, 1963. - 590 с.

11. Болдырев A.A. Введение в биохимию мембран. М.: Высшая школа, 1986. - 112 с.

12. Бурцева Л.И., Скворцова М.М., Шашкина Н.И. О выборе штаммов Bacillus thuringiensis var. galleriae для производства энто-бактерина//Сиб. вестн. с.-х. науки. 1973. - № 2. - с. 33 - 38.

13. Бюржерон А., Мартуре Д. Микроорганизмы в борьбе с вредными насекомыми и клещами. М.: Колос, 1976. - с. 243 - 257.

14. Галушка Ф.П., Азизбекян Р.Р. Изучение плазмид линий различных разновидностей Bacillus thuringiensis Berliner // Докл. Акад. наук СССР. 1977. - Т.236. - с. 1233 - 1235.

15. Гукасян А.Б. Перспективный способ борьбы с сибирским шелкопрядом. Вестник АН СССР. -1961. - Т.35, с. 58 - 59.

16. Гукасян А.Б. Бактериологические методы борьбы с сибирским шелкопрядом. М.: Наука, 1970. - 128 с.

17. Гулий В.В., Теплякова Т.В., Иванов Г.М. Микроорганизмы, полезные для биометода. Новосибирск: Наука, 1981. - 270 с.

18. Гилмур А. Метаболизм насекомых. М.: Мир, 1968. - 229 с.

19. Доспехов Б.А. Методика полевого опыта. М.: Колос, 1979.416 с.

20. Дебабов В.Г., Азизбекян Р.Р.ДПилабалина О.И., Дьяченко В.В., Галушка Ф.П., Белиш P.A. Выделение и предварительная ха-рактеристикахромосомных элементов ДНК Bacillus thuringiensis // Генетика. 1977. -T.B. - с. 496 - 500.

21. Езепчук Ю.В. Биомолекулярные основы патогенности бактерий. М.: Наука, 1977. - с. 215.

22. Захваткин Ю.А., Соломатин В.М., Зурабова Э.Р., Попова Т.А. Оценка действия нового бактериального препарата лепидоцида против некоторых вредителей сельскохозяйственных культур // Изв. ТХСА. 1984. - в.2. - С. 123 - 125.

23. Залунин И.А., Честухина Г.Г., Степанов В.М. Белковый состав кристаллов дельта-эндотоксина различных серотипов Bacillus thuringiensis// Биохимия. 1979. - Т. 44. - с. 693 - 698.

24. Ивинскене B.JI. Роль фосфолипазы и термолабильного экзотоксина в патогенности Bacillus thuringiensis //Автореф. дис. канд. биол.наук.-J1., 1984. 17 с.

25. Ивинскене B.JI. Фосфолипаза и термолабильный экзотоксин Bacillus thuringiensis// Сб.:Энтомопатогенные бактерии и их роль в защите растений. 1987. - с. 57 - 75.

26. Ивинскене В.Л., Флуэр Ф.С., Василяускас И.Ф. Образование лецитиназы Bacillus thuringiensis // Микробиология. 1975. - с. 999 - 1004.

27. Ионин Б.И., Ершов Б.А. ЯМР спектроскопия в органической химии. - Л.: Химия. 1967. - 326 с.

28. Исакова Н.П., Разумова А.П. О факторах, влияющих на восприимчивость насекомых к бактериальным возбудителям, на при-мере некоторых вредителей капусты.// Сб.: Биологическая защита плодовых и овощных культур. Кишинев, 1971.-е. 180- 182.

29. Исакова Н.П., Разумова А.П. Значение лизоцина и гемо-цитарной реакции в патогенезе бактериальных инфекций насеко-мых.//В сб.: Перспективы использования микроорганизмов в защите растений. Л., 1980.-с.33 -44.

30. Кагава Я. Биомембраны. М.: Высшая школа, 1985. - 303 с.

31. Каменек JI.К. Выделение и очистка кристаллов Bacillus thuringiensis// Сб.: Бюллетень научно-технической информации СибНИИЗХим.- Новосибирск, 1980. № 2 (3). - с. 14 - 15.

32. Каменек Л.К. Влияние эндотоксина Bacillus thuringiensis на Mg2+- зависимую АТФазу некоторых видов насекомых.//Кн.: Микроорганизмы в защите растений. Новосибирск, 1981. - с.72 - 77.

33. Каменек Л.К. Действие дельта-эндотоксина Bacillus thurin-giensis на обыкновенного соснового пилильщика.// Сб.: Микробио-логическая защита растений в Сибири. Новосибирск, 1982. - с. 28 - 30.

34. Каменек Л.К. Изучение механизма действия дельта-эндотоксина Bacillus thuringiensis на насекомых.//Автореф. дисс. канд. биол. наук, Л.,- 1985,-19 с.

35. Каменек Л.К. Структура, свойства и механизм действия дельта-эндотоксина Bacillus thuringiensis //Сб.: Энтомопатогенные бактерии и их роль в защите растений. Новосибирск, 1987. - с. 42 - 57.

36. Каменек Л.К. Действие Bacillus thuringiensis и ее дельта-эндотоксина на жуков капустного листоеда (Phaedon cochleariae F.). //Сиб. вестник с.-х. науки. 1988. - с. 37 - 40.

37. Каменек Л.К. Способ получения эндотоксинсодержащих эн-томопатогенных препаратов.//Патент РФ № 2027369. 1995.

38. Каменек Л.К. Способ получения бактериального энтомо-патогенного препарата.//Патент РФ № 2062577. 1996.

39. Каменек Л.К., Ильяшевич Н.К. Сравнительная оценка некоторых серотипов Bacillus thuringiensis//C6.: Интегрированная защита растений от вредителей. Новосибирск, 1987. - с. 98 - 103.

40. Каменек Л.К., Новикова Л.К. Действие дельта-эндотоксина Bacillus thuringiensis и бактериальных препаратов на его основе на капустную совку (Mamestra brassicae L.) //Сиб. вестник с.-х. науки. 1984. - № 4. - с. 52 - 54.

41. Каменек Л.К., Харина Н.И. Действие эндотоксина Bacills thuringiensis на культуру клеток непарного шелкопряда.//Сб.: Актуальные проблемы земледелия химизации и защиты растений в Сибири. -Новосибирск, 1981. с. 40.

42. Каменек JI.K., Штерншис М.В. Действие кристаллов эндотоксина на амилазу кишечника гусениц капустной совки.//Сиб. Вест-ник с.-х. науки. 1980. - № 3. - с. 105 - 106.

43. Каменек JI.K., Штерншис М.В. Влияние дельта-эндотоксина Bacillus thuringiensis на активный транспорт ионов у насеко-мых.//Изв. СО АН СССР, сер. биол. 1984. - в.3. -б с. 113 -117.

44. Каменек J1.K., Штерншис М.В. Разобщающее действие дельта-эндотоксина Bacillus thuringiensis.//Сб.: Интегрированная защита рас-тений от болезней и вредителей в Сибири. Новосибирск, 1986. - с. 80 - 85.

45. Катуха С.П., Честухина Г.Г., Степанов В.М. Химическая характеристика белков кристаллов Bacillus thuringiensis.// Химия при-родн. соедин. 1980. - № 3. - с. 384 - 386.

46. Кандыбин Н.В., Гребельский С.Г., Череда М.Г., Стусь A.A. Овоцидное действие термостабильного экзотоксина Bacillus thurin-giensis var. thuringiensis. // Сб.: Бактериальные средства и методы бо-рьбы с насекомыми и грызунами. JL, 1972. - с. 50 - 54.

47. Ким Нам Ук, Ли Хы Сон. Изучение кристаллических включений, содержащихся в Bacillus thuringiensis.//Сэнмульхак (КНДР), Биология. 1976. - т. 14. - с. 22 - 27.

48. Кольчевский А.Г., Ермолова В.П. Изучение инфракрасных спектров спор и кристаллов эндотоксина Bacillus thuringiensis./'/Бюлл. ВНИИ с.-х. микробиологии Л., 1985. - № 40. - с. 48 - 50.

49. Кольчевский А.Г., Рыбина Л.М., Коломиец В.Я. Выделение и отбор высоковирулентных культур Bacillus thuringiensis var. Galleri-ae.//Методические рекомендации. Л., 1987. -21 с.

50. Кочетов Г.А. Практическое руководство по энзимологии. М.: Высшая школа, 1980. - 272 с.

51. Красильников H.A., Гукасян А.Б. Вас. tuviensis nov. sp. новый возбудитель болезни сибирского шелкопряда.//Микробиология. - 1964. - т. 33.-с. 664-671.

52. Крымский Л.Д., Нестайко Т.В., Рыбалов Л.Г. Растровая электронная микроскопия сосудов и крови. М.: Медицина, 1976. - 168 с.

53. Кулагин B.C. Проявление эпизоотического процесса в популяции сибирского шелкопряда при использовании дендро-бациллина в темнохвойных насаждениях.//Сб.: Энтомопатогенные микроорганизмы и их использование в защите растений. Иркутск, 1986. - с. 45 - 56.

54. Лаппа Н.В. Гемолимфа златогузки и патологические изме-нения в ней под влиянием энтомопатогенных бактерий.//Сб.: Защита растений. -Киев, 1967.-в. 4.-с. 60-76.

55. Левин A.C., Завезенова Т.В., Левина И.И. Фракционный состав белка эндотоксинов и биохимическая характеристика энтомо-патогенных бацилл группы thuringiensis//C6.: Микроорганизмы в защите растений от вредных насекомых. Иркутск. 1978. - с. 37 - 44.

56. Ленинджер А. Биохимия. М.: Мир, 1974. - 957 с.

57. Лескова А.Я. Патологические изменения гемолимфы у гусе-ниц яблонной моли при заражении их энтобактерином.//Сб.: Иссле-дования по биологическому методу борьбы с вредителями лесного и сельского хозяйства. Новосибирск, 1964. - с. 48 - 53.

58. Лескова А.Я. Патогенные свойства Bacillus thuringiensis berliner и условия эффективного использования их для борьбы с вредными насекомыми.//Автореф. дис. д. биол. н. Л., 1975. - 32 с.

59. Лескова А.Я., Охотников В.И. О последействии на насекомых препаратов, содержащих экзотоксин Bacillus thuringiensis.//C6.: Патогенные микроорганизмы вредителей растений. Рига, 1972. - с. 55 - 58.

60. Лескова А.Я., Рыбина Л.М. Термостабильный экзотоксин Bacillus thuringiensis //Сб: Энтомопатогенные бактерии и их роль в за-щите растений. Новосибирск, 1987. - с. 31 - 42.

61. Лескова А.Я., Рыбина Л.М. Патогенез насекомых, вызванный кристаллогенными бактериями, как фактор депрессии их числен-ности. //Сб.: Микроорганизмы в защите растений. Иркутск, 1983. - с. 22 - 31.

62. Лескова А.Я., Рыбина Л.М., Строева И.А. Идентификация культур Bacillus thuringiensis и оценка их патогенных свойств.//Методические указания. Л., 1984. - 19 с.

63. Лескова А.Я., Рыбина Л.М., Чумакова А.Я. Действие бета-экзотоксина Bacillus thuringiensis на насекомых.//Сб.: Бактериальные средства и методы борьбы с насекомыми и грызунами. Л., 1972. - с. 55 -65.

64. Либерман Е.А. Мембранный потенциал митохондрий. //Кн.: Митохондрии. Молекулярные механизмы ферментативных реакций. М., Наука, 1972.-с. 99- 107.

65. Либерман Е.А., Мохова E.H., Скулачев В.П., Топалы В.П. Действие разобщителей окислительного фосфорилирования на бимолекулярные фосфолипидные мембраны.//Биофизика. 1968. - т. 13. - с. 188 -193.

66. Лисовская Н.П. Аденозинтрифосфатаза клеточных мембран и перенос ионов.//Успехи биол.химии. 1967. - т. 8. - с. 93 - 116.

67. Лысенко Л.Н., Михновская Н.Д., Храновский В. А. Инфракрасные спектры клеток различных вариантов Bacillus 1:1шп^1еп518.//Микробиол.журнал 1984. - т. 46. - с. 6 - 9.

68. Макарюнайте Ю.П. Хроматографическое разделение комплекса фосфолипаз С Bacillus cereus и характеристика индиви-дуальных ферментов.//Автореф. дис. канд. биол. наук. Вильнюс, 1985. - 19 с.

69. Малукас Э.Э. Фагоцитарная активность гемоцитов капустной белянки Pieris brassicae L. при очищении гемолимфы от микро-организмов типа Bacillus thuringiensis.//C6.: Экология микроорга-низмов и продукты их обмена. Вильнюс, 1983. - с. 176 - 178.

70. Машанов А.И., Томшин А.Т. Микроэлементарный состав некоторых кристаллообразующих бактерий.//Сб.: Энтомопатогенные микроорганизмы в лесных биоценозах. Красноярск, 1979. - с. 40 - 44.

71. Мейнел Д., Мейнел Э. Экспериментальная микробиология. М.: Мир, 1967.- 347 с.

72. Миселюнене И.С. Изменения морфологии и состояния различных типов клеток гемолимфы у гусениц капустной белянки при заражении энтобактерином.//Цитология. 1976. - т. 18.-е. 1220 - 1225.

73. Михайлов E.H. Защитная функция пищеварительного сока гусениц тутового шелкопряда. 2.//Шелк. 1985. - № 4. - с. 8 - 9.

74. Наточин Ю.В., Парнова Р.Г. О функциональном значении высокой осмоляльности и большой доли связанного кальция в гемо-лимфе у личинок насекомых фитофагов.//Ж., эвол. биохим. физиол. - 1986. - т. XXII, с. 594 - 595.

75. Пирс Э. Гистохимия. М.: Иностр. лит., 1962. - 962 с.

76. Писарева Л.Н. Активируемая Na+ и К+ аденозинтрифосфатаза из коры почек морской свинки. Получение, взаимодействие с ионами и ферментными ядами.//Цитология. - 1968. - № 10. - с. 988 - 994.

77. Плохинский H.A. Математические методы в биологии. М.: МГУ, 1978.-265 с.

78. Придачина H.H., Эль-Регистан Г.И., Кругляк Е.Б., Козлов А.И. Применение спектроскопии в микробиологии.// Сб.: Микробиологические средства защиты растений и бактериальные препараты. М., 1975. -в. 3. - с. 37 - 56.

79. Попова Т.А. Совершенствование биологической защиты капу-ты от капустной совки.//Автореф. дисс. канд. биол. н. М., 1988. - 15 с.

80. Приставко В.П., Янишевская Л.В., Довженок Н.В. Устойчивость к инфекционным заболеваниям как критерий жизне-способности насекомых.//Зоол. ж. 1986. - т. 65. - с. 1411 -1415.

81. Де Робертис Э., Новинский В., Саэс Ф. Биология клетки. М.: Мир, 1973.-487 с.

82. Ролан Ж.-К., Селоши А., Селоши Д. Атлас по биологии клетки. -М.:Мир, 1978.- 118 с.

83. Секун Н.П. Влияние инсектицидов на активность пищеварительных ферментов насекомых.//Химия в с.-х. 1969. - № 5. - с. 40 - 42.

84. Скулачев В.П. Механизм окислительного фосфорилирования и некоторые общие принципы биоэнергетики.// Успехи соврем, био-логии. -1974. -т. 77. -В.2. с. 125- 154.

85. Скулачев В.П. Рассказы о биоэнергетике. М., 1985. - 191 с.

86. Смирнова Т.А., Михайлов A.M., Тюрин B.C., Азизбекян P.P. Ультраструктура спор и кристаллов бактерий различных серотипов Bacillus thuringiensis.//Микробиол. 1984. - т.53. - с. 455 - 462.

87. Талалаев Т.В. О воспроизведении эпизоотии септицемии у гусениц сибирского шелкопряда Dendrolimus sibericus, Tschtv. (Lepi-doptera, Lasiocampidae).//3HTOMon.o6o3peHHe. 1958. - т.37. - с. 557 - 567.

88. Талалаева E.B. Случай бактериальной эпизотии в популяции гусениц Selenephera lunigera Esp. (Lepidoptera, Lasiocampidae). //Энтомол.обозр.- 1967. V.46. - с. 190 - 192.

89. Троицкая E.H. Чувствительность гусениц тутового шелкопряда к возбудителю бациллярного токсикоза.//Узб. биол. ж. 1989. - № 2. - с. 51 -53.

90. Трусков В.М., Мятежная Ю.А., Голованова Н.И. Спектро-фотометрическое изучение штаммов Bacillus thuringiensis.//C6.: Микробиологические методы защиты растений (Материалы 1-й Всесоюз.конф.). Кишинев, 1976. - с. 48 - 49.

91. Туманова С.Ю., Прохорова М.И. Биохимия миэлина в норме и патологии.//Сб.: Биохимия липидов и их роль в обмене веществ, М.: Наука, 1981.-с. 128 139.

92. Тыщенко В.П. Физиология насекомых. Высшая школа, 1986.303 с.

93. Уотсон Д.Д. Молекулярная биология гена. М.: Мир, 1967. - 462с.

94. Федоринчик Н.С. Методические указания по испытанию биопрепаратов для защиты растений от вредителей, болезней и сор-няков. -М.: Колос, 1973.-41 с.

95. Филиппович Ю.Б. Основы биохимии. М.: Высшая школа, 1993.-496 с.

96. Фрезер Р. Инфракрасная спектроскопия.//Кн.: Аналитические методы белковой химии. М.: Иностранная литература, 1963. - с. 329 - 393.

97. Харсун А.И. Изучение показателя патогенности микробиопрепаратов, используемых для борьбы с вредными членистоногими.//Доклады ВАСХНИЛ. 1977. - № 6. - с. 21 - 22.

98. Харина Н.И. Применение среды с ингредиентами, заменяющими сыворотку, для выращивания культур клеток насеко-мых.//Сб.: Применение удобрений и средств защиты растений в Сибири. -Новосибирск, 1983. с. 116 -119.

99. Хиггинс Д.А.Разделение и анализ липидных компонентов мембран.//В кн.: Биологические мембраны. Методы. М.: Мир, - 1990. - с. 150 - 195.

100. Честухина Г.Г., Залунин И.А., Костина Л.И., Котова Т.С., Катруха С.П., Люблинская Л.А., Степанов В.М. Протеолитические ферменты, связанные с кристаллами Bacillus thuringiensis. //Био-химия. -1978.-т. 43.-с. 857 864.

101. Честухина Г.Г., Костина Л.И., Залунин И.А., Ходова О.М., Степанов В.М. Структурное многообразие дельта-эндотоксинов Bacillus thuringiensis//Te3HCbi VII Всесоюзн. симпозиума по химии белков и пептидов. Таллин, 1987. - с. 132-133

102. Честухина Г.Г., Степанов В.М. Сравнительная биохимия 5-эндотоксинов и ферментов Bacillus thuringiensis.//Te3HCbi V Всесою-зного биохимического съезда. М., 1985. - т.1. - с. 236 - 237.

103. Честухина Г.Г., Тюрин С.А., Остерман А.Л., Залунин И.А., Костина Л.И., Ходова О.П., Степанов В.М. Структурно-функци-ональные особенности энтомоцидного белка В.thuringiensis// Тезисы V Всесоюзного биохимического съезда. М., 1986. - т.2. - с. 20.

104. Чиргадзе Ю.Н. Инфракрасные спектры и структура полипептидов и белков. М.: Наука, 1965. -135 с.

105. Шевкунова B.C. Изменение иммунобиологических свойств капустной совки (Barathra brassicae Е.).//Автореф.дис.канд.биол.н. -Новосибирск, 1968. 25 с.

106. Шевкунова B.C. Влияние бактериальных инфекций на общее число гемоцитов у личинок некоторых насекомых.//Сб.: Вредители и болезни сельскохозяйственных культур. Новосибирск, 1972. - с. 40 - 50.

107. Швецова О.И. Биологическое обоснование эффективности бактериального препарата энтобактерина-3 для борьбы с вредными насекомыми// Ж. общ. биол. 1962. - т.23. - с. 381 - 390.

108. Штерншис М.В. Спектрофотометрический метод опреде-ления концентрации микроорганизмов в суспензии. // Бюлл. научно-техн. инф. -1976. СибНИИЗХим. - Новосибирск. - в. 16. - с. 44 - 50.

109. Штерншис М.В. О методах оценки физических показателей бактериальных инсектицидов.//С .-х. биология. 1985. - № 9. - с. 120 - 123.

110. Штерншис М.В., Каменек JT.K. Усиление действия дельта-эндотоксина Bacillus thuringiensis.//C6.: Интегрированная защита с.-х. культур от болезней и вредителей в Сибири. Новосибирск, 1986. - с. 80 -85.

111. Ahmad W., Ellar D.J. Directed mutagenesis of selected regions of a Bacillus thuringiensis entomocidal protein.// FEMS Microbiol. Lett. 1990. - V.68. -P. 97 -104.

112. Akihiko F. Mode of action of bipyramidal 5-endotoxin of Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki HD l.//Appl. Environ. Microbiol. - 1986. - Y.51. - P. 630 - 633.

113. Akune S., Watanabe Т., Mukai J., Tsutsui R., Abe K. A toxic protein from the insect pathogen Bacillus thuringiensis//Jap.J.Med.Sci.Biol. -1971. -V.24.-P. 57- 59.

114. Albers R.W. Biochemical aspekt of active transport.//Ann. Rev. Biochem.- 1967. V.36. - P. 727 - 756.

115. Angus T.A. A bacterial toxin paralysing silkworm larvae.//Nature. -1954.-V. 173.-P. 545 546.

116. Angus T.A. Association of toxicity with proteincrystalline inclusions of Bacillus sotto Ishiwata.//Can. J. Microbiol. 1956 a. - V.2. - P. 122 -131.

117. Angus T.A. Extraction, purification and properties of Bacillus sotto toxin.//Can. J. Microbiol. 1956 b. - V.2. - P. 416 - 426.

118. Angus T.A. The use of Bacillus thuringiensis as a microbial insecticide.//World Rev. Pest Control. 1968 a. - V.7. - P. 11 - 26.

119. Angus T.A. Similarity of valinomicin and Bacillus thuringiensis parasporal protein in larvae of Bombyx mori.//Invert. Pathol. 1968 b. - V.l 1. -P. 145- 146.

120. Angus T.A. Implications of some recent studies of Bacillus thuringiensis a personal preview.//In: Proceedings IV International Colloquium on Insect Pathology. - College Park, Maryland, 1970. - P. 183 - 189.

121. Angus T.A., Norris J.K. A comparison of the toxicity of some varieties of Bacillus thuringiensis Berliner for silkworm larvae.//J.Invertebr.Pathol. 1968. - V.2. - P. 351 - 357.

122. Aoki K., Chigasaki Y. Uber die Pathogenität der sog. Sotto Bacillien (Iskivata), bei Seidenraupen.//Mitt. Med. Fak. Kais. Univ. Tokio. -1915. -V.13. -P.419-440.

123. Arbuthnott J.P., Freer J.H., Billeliffe B. Alfa-toxin of Staphilococcus polypeptide contents.//J.ben. Microbiol. 1973. - V.75. - P. 309 -314.

124. Aronson A.I., Beckman W., Dunn P. Bacillus thuringiensis and related insect pathogens.//Microbiol. Rev. 1986. - V.50. - P. 1 - 24.

125. Aronson A.I., Fitz-James P.C. Structure and morphogenesis of the bacterial spore coat.//Bacteriol. Rev. 1976. - V.40. - P. 360 - 402.

126. Aronson A.I., Pandy N.K. Comparative structural and functional aspects of spore coats//In: Spores VII. American Society for Microbiology. -Washington, 1978.-P. 54-61.

127. Aronson A.L, Tyrell D.J., Fitz-James P.C., Bulla L.A. Relationship of the syntheses of spore coat protein and parasporal crystal protein in Bacillus thuringiensis//J.Bacteriol. 1982. - V.151. - P. 399 - 410.

128. Armstrong J.L., Rohrmann G.F., Beaudreau G.S., Delta endotoxin of Bacillus thuringiensis subsp.israelensis//J. Bacteriol. 1985. - V.161. - P. 39 -46.

129. Baracco M.A., Menezes H. Mechanismos celulares de defesa em insetos.//Cienc.e cult. 1985. - Y.37. - P. 237 - 250.

130. De Barjac H., Bonnefoi A. Essai de classification biochimique et serologicue de 24 souches de Bacillus du type B.thuriniensis. //Entomophaga. -1962.-V. 7.-P. 5-31.

131. De Baijac H., Bonnefoi A. Classification des souches de Bacillus thuringiensis.//C.R. Acad. Sci. Paris. 1967. - V. 264. - P. 1811 -1813.

132. De Barjac H., Bonnefoi A. A classification of strains of Bacillus thuringiensis Berliner with a key to their differentiation.//!. Invert. Pathol. -1968.-V.11.-P. 335 347.

133. De Baijac H., Frachon E. Classification of Bacillus thuringiensis : insect and beyond // Biotechnol. 1992.- V.-10. - P. 271 - 275.

134. De Barjac H., Burgerjon A., Bonnefoi A. The production of heat-stable toxin by nine serotypes of Bacillus thuringiensis // J. Invert. Pathol. 1966. -V.8. - P. 537 - 538.

135. Bateson J.B., Stainsby G. Analysis of the active principle in the biological insecticide Bacillus thuringiensis Berliner//J.Food Technol. 1970. -V.5. - P. 403 - 415.

136. Baumann L., Okamoto K., Unterman B.M., Lynch M.J., Baumann P. Phenotypic Characterization of Bacillus thuringiensis and Bacillus cereus//J. Invertebr. Pathol. 1984. - V.44. - P. 329 - 341.

137. Beeblee T.G.C., Bond R.P.M. Effect of an exotoxin from Bacillus thuringiensis on deoxyribonucleic acid-dependent ribonucleic acid polymerase in nuclei from adult Sarcophaga bullata//Biochem. J. 1975. - V.136. - P. 9 -13.

138. Bechtel D.B., Bulla L.A. Electron microscope study of sporulation and parasporal crystal formation in Bacillus thuringiensis.//J. Bacteriol. 1976. -V.127. - P. 1472- 1481.

139. Berliner E. Uber die Schlaffsucht der Mehlmottenrouppe .//L. Ges. Getreidew. 1911. - V.3. - P. 63 - 70.

140. Berliner E. Uber die Schlaffsucht der Mehlmottenrouppe (Ephestia kuhniella Zell.) und ihen Erreger Bacillus thuringiensis, n. sp.//Z. Angew. Entomol. -1915. V. 2. -P. 29 - 56.

141. Bond R.P., Bocye C.B., Rogoff M.N., Shiefh T.R. The thermostable exotoxin of Bacillus thuringiensis, n. sp.//In: Microbial Control of Insects and Mites, H.D. Burges and N.W. Hussey (Eds.). Acad. Press: N. - Y., 1971.-p. 275-303.

142. Bonnefoi A., de Bariac H. Classification des souches du groupe Bacillus thuringiensis par la determination de lantignee flagellaire.//Entomophuga. -1963. Y.8. - p. 223 - 229.

143. Bucher G.E., Angus T.A., Krywienczyk J. Characteristics of a new strain of Bacillus thuringiensis var. thuringiensis Berliner (Serotype I) isolated from the bumblebee wax moth// J.Livert.Pathol. 1996. - V.8. - P. 485 - 491.

144. Bulla L.A., Bechtel D.E., Kramer J.K.J., Shethna J.I., Aronson A.I., Fitz-James P.C. Ultrastructure, physiology and biochemistry of Bacillus thuringiensis//Crut. Rev. Microbiol. 1980. - V.8. - p. 147 - 204.

145. Bulla L.A., Davidson L.I.,Kramer K.J., Jones B.L. Purification of the insecticidal toxin from the parasporal crystal of Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki//Biochem. Biophys. Res. Commun. 1979. - V.91: 1123 - 1126.

146. Bulla L.A., Kramer K.J., Bechtel D.B., Davidson L.I. Entomocidal proteinaceous crystal of Bacillus thuringiensis// In: Microbiology, 1976. -Washington: D.C., 1976. P. 534 - 539.

147. Bulla L.A., Kramer K.J., Cox D.J., Jones B.L., Davidson I., Lookhart C.L./Purification and characterization of the entomocidal protoxin of Bacillus thuringiensis//J. Biol. Chem. -1981. V.256. - P. 3000 - 3004.

148. Bulla L.A., Kramer J.J., Davidson L.I. Characterization of the entomocidal parasporal crystal of Bacillus thuringiensis//J. Bacteriol. 1977. -V.130. - P. 375 - 383.

149. Burgerjon A., de Barjac H. Essais preliminaries sur le role insecticide de la toxine thermostable produite par Bacillus thuringiensis Berliner//Proceed. Intern. Congr. Entomol. Vienna, 1960 a. - V.2. - P. 835 -839.

150. Burgerjon A., de Baijac H. Nouvelle donnus sur le role de la toxine soluble thermostable produite par Bacillus thuringiensis Berliner//C.R. Acad. Sci. Paris. 1960 b. - V.251. - P. 911 - 912.

151. Burgeijon A., Biache G. Divers effects spéciaux et symptômes teratologiques de la toxine thermostable de Bacillus thuringiensis en fanction de Lage physiologique des insectes//Ann. Soc. Entomol. Fr. N.S. 1967. - V.3. - P. 929 - 952.

152. Burgerjon A., Martouret D. Determination and signification of the host spectrum of Bacillus thuringiensis.//In: Microbial Control of Insect and Mites. New York: Academic Press, 1971. - P. 303 - 322.

153. Burges H.D., Hurst J.A. Ecology of Bacillus thuringiensis in storage moth.//J. Invert. Pathol. 1977. - V.30. - P. 131 -139.

154. Burges H.D., Thomson E.M., Latchford R.A. Importance of spores and 5-endotoxin protein crystals of Bacillus thuringiensis in Galleria mellonella.//J. Invertebr. Pathol. 1976. - V.27. - P. 87 - 94.

155. Cantwell G.E., Heimpel A.M., Thompson M.J. The production of an exotoxin, the fly factor, by various crystal forming bacteria related to Bacillus thuringiensis var. thuringiensis//J. Insect Pathol. 1964. - V.6. - P. 406 -408.

156. Carlton B.C., Gonzales J.M. Plasmid-associated delta-endotoxin production in Bacillus thuringiensis //In: Genetics and biotechnology of bacilli. -N.-York: Acad. Press, 1984. P. 387 - 400.

157. Carroll J., Ellar D.J. An analysis of Bacillus thuringiensis endotoxic action on insect midgut membrane permeability using a light scattering assay // Eur. J. Biochem. 1993.- V.- 214. - P. 771- 778.

158. Carrol J., Ellar D.J., Analisis of the large aqueons pores produced bu a Bacillus thuringiensis protein insecticide in Manduca sexta midgut brush -border - membrane vesicles // Eur. J. Biochem. - 1997. - V.- 245. - P. 797 -804.

159. Carrol J., Wolfersberger M., Ellar D.J. The Bacillus thuringiensis Cry I A toxic-induced permeability change in Manduca sexta midgut brush border membrane versicles proceeds by more them one mechanism // J. Cell. Sci. -1997. -V. 15.-P. 83 -87.

160. Chadwick J.S. Antibacterial immunity in Lepidoptera.//Proc. 18th Int. Congr. Entomol. Vancouver, 1988. - p. 253.

161. Charles J.-F. Action de la 5-endotoxine de Bacillus thuringiensis var. israelensis sur cultures de cellules de Aedes aegypti L. Ann. Microbiol. -1983. -V.134A. p. 365 - 381.

162. Cheng E.Y., Cutcomp L.K. Ageing in the honeybee, Apis mellifera, as related to brain ATPases and their DDT sensitivity.//J. Insect Physiol. 1972. -V.18.-P. 2285-2291.

163. Cherrer P., Luthy P., Trumpi B. Production of 5-endotoxin by Bacillus thuringiensis as a function of glucose concentrations.//Appl. Microbiol. 1973.-V.25.-p. 644-646.

164. Chestukhina G.C., Kostina L.I., Michailova A.L., Tyurin S.A., Klepikova F.S., Stepanov V.M. The main features of Bacillus thringiensis molecular structure.//Arch. Microbiol. 1982. - V.132. - P. 159 - 162.

165. Chiang A.S., Yen D.f., Peng W.K. Germination and proliferation of Bacillus thuringiensis in the gut of rice moth larva, Corcyra cephalonica.//J. Invertebr. Pathol. 1986. - V.48. - P. 96 - 99.

166. Chilcott C.N., Kalmakoff J., Pillai J.S./ Neurotoxic and haemolytic activity of a protein isolated from Bacillus thuringiensis var. israelensis crystals// EMS Microbiol. Lett. 1984. - V.25. - P. 259 - 263.

167. Chungjatupornhai W., Hofte H., Seurinck J., Angsuthanasombat Ch., Vaeck M. Common beatures of Bacillus thuringiensis toxins specific for Diptera and Lepidoptera//Europ.J. Biochem. 1988. - V.173. -. 9 - 16.

168. Cooksey K.E. Purification of a protein from Bacillus thuringiensis toxic to a larvae of Lepidoptera.//Biochem.J. 1968. - V.106. - P. 445 - 454.

169. Cooksey K.E. Donninger C., Norris J.R., Shankland D. Nerve-blocking effects of Bacillus thuringiensis protein toxin.//J. Invert. Pathol., 1969, V.13. P. 461 -462.

170. Crawford D.N., Harven W.R. Barium and calcium block Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki 5-endotoxin inhibition of potassium current across isolated midgut of larval Manduca sexta.//J. Exp. Biol. 1988. - V.137. - P. 277 -286.

171. Crichmore N.,Bone E.J., Ellar D.J. Genetic manipulation of Bacillus thuringiensis: toward and impruved pesticide.// Aspect of Applied Biology. 1990 a. -V.24.-P. 17-24.

172. Crichmore N., Nicholls C.N., Eaps D.J., Hodgman T.C., Ellar D.J. The construction of Bacillus thuringiensis strains expressing delta-endotoxin combinations.//Biochem. J. 1990 b. - V. 270. - P. -133 - 141.

173. Crichmore Wheeler V.C., Ellar D.J. Use of operon fusion to induce expression and crystallisation of a Bacillus thuringiensis delta-endotoxin encoded bya cryptic gene.// Mol. Gen.Genet. 1993. - V. 242. - P. 365 - 368.

174. Cumming C.E., Ellar D.J. Chemical modification of Bacillus thuringiensis activated delta-endotoxin and its effect.

175. Day M.F., Powning R.F. A study of the process of digestion in certain insects.//Austr. J. Sci. Res. 1949. - Ser.B. - N 2. - P. 175 - 215.

176. Debro L., Fitz-James P.C., Aronson A. Two different parasporal inclusions are produced by Bacillus thuringiensis subsp. fmitimus//J. Bacteriol. -1976. V.165.-P. 258 -268.

177. Delafield F.P., Somerville H.J., Rittenberg S.C. Immunologocal homology between crystal and spore protein of Bacillus thuringiensis.//J. Bacteriol. 1968. - V. 96. - P. 713 - 720.

178. Delaporte B., Beguin S. Etude d une souche de Bacillus pathogene pour certains insects, identifiable a Bacillus thuringiensis Berliner.//Ann. Inst. Pasteur. V.89. - P. 632 - 643.

179. De Maagd R.A., Yanderklei H., Bakker R.L., Stiekema W.J.,.Bosch D. Different domains of Bacillus thuringiensis delta-endotoxin can bind to insect midgut membrane proteins on ligand blots. // Apple. Anviromn. Microbiol. -1966.-V. 62. -P. 2753 -2757.

180. Du C., Nickerson K.W. Bacillus thuringiensis HD -73 spores have surface localized Cry I Ac toxin: Phisiological and phatogenic consequences.//Appl. Environm. Microbiol. - 1996. - V. 62. - P. 3722 -3726.

181. Dulmage H.T. Production of 5-endotoxin by eighteen isolates of Bacillus thuringiensis, serotype 3, in three fermentation media.//J. Invert. Pathol. 1971.-V.18.-p. 353 - 358.

182. Dulmage H.T. Insecticidal activity of isolates of Bacillus thuringiensis and their potential for pest control//In: Microbial, control of pests and plant diseases (Burges H.D) Acad. Press: London, 1981. - P. 193 - 222.

183. Duncan J.L. Interaction between diphteria toxin and cell membrane.//J. Toxicol. Toxin Rev. 1984. - V.3. - P. 1 - 51.

184. Ebersold H.R., Luthy P., Geiser P., Ettlinger L. The action of the delta-endotoxin of Bacillus thuringiensis: An electron microscope study.//Experientia. 1978. - V.34. - P. 1672 - 1674.

185. Ebersold H.R., Luthy P., Huber H.E. Membrane demaging effect of the 5-endotoxin of Bacillus thuringiensis.//Experientia. 1980. - V.36. -. 495 -498.

186. Ebersolde H.R., Luthy P., Mueller M. Changes in the fine structure of the epithelium of Pieris brassiccae induced by the 5-endotoxin of Bacillus thuringiensis.//Bull. Soc. Entomol. Swissl. 1977. - V.50. - P. 269 - 276.

187. Ellar D.J. Molecular genetics of Bacillus thuringiensis delta-endotoxin and toxin receptors // Proc.Jnt. Coll., Montphellier, Fr. 1994 a. P. 185 -189.

188. Ellar D.J. Structure and mechanizm of action of Bacillus thuringiensis delta-endotoxins and theirs receptors // Biochem. Sci. Biotechnol. 1994. - V. 4. .p. 445-447.

189. Ellar D.J. Building better biopesticide. // Agri Derect. 1996. - V. 4. - P. 4-5.

190. Ellar D.J. The structure and function of Bacillus thuringiensis delta-endotoxins and protects for bioinsecticide improvement.// In: Microbial Insecticides : Novelty or Necessity; BCPC Symposium. 1997. - V. 68. -P. 83 -100.

191. Endo Y., Nishiitsutsuji-Uwo J. Mode of action of Bacillus thuringiensis 5-endotoxin. Histopathological changes in the silkworm midgut.//J. Invertebr. Pathol. - 1980. - V.36. - P. 90 - 103.

192. Endo Y., Nishiitsutsuji-Uwo J. Mode of action of Bacillus thuringiensis delta-endotoxin: Ultrastructural changes of midgut epithelium of Pieris, and Ephestia Iarvae.//Appl. Entomol. Zool. 1981. - V. 16. - P. 231 - 241.

193. English L.N., Cantley L.S. Delta-endotoxin inhibits Rb+ uptake, lowers cytoplasmic pH and inhibits a K+ ATPase in Manduca sexta CHE cells.//J. Membr. Biol. - 1985. - V.85. - P. 199 - 204.

194. English L.N., Cantley L.C. Delta-endotoxin is a potent inhibitor of the (Na, K)-ATPase.//J. Biol. Chem. 1986. - V.261. - P. 1170 - 1173.

195. English M.N., Readdy T.L. Delta-endotoxin inhibits a phosphatase in midgut epithelial membranes of Heliothis virescens.//Insect Biochem. 1989. -V.19. - P. 145- 152.

196. Evlakhova A.A., Schwetzova O.J. Methodes de selection des formes pathogene de microorganismes//Entomophaga. 1964. - V.2. - P. 521 - 529.

197. Farkas J., Sebesta K., Horska K., Samek Z., Dolejs J., Sorm F. The structure of exotoxin of Bacillus thuringiensis var. gelechiae.//Collect. Czech.Chem.Commun. 1969. - V.34. - P. 1118 -1119.

198. Fast P.G. Isolation of water-soluble toxin from a commercial microbial insecticide based on Bacillus thuringiensis//J. Invert. Pathol. 1971. -V.17. - P. 301.

199. Fast P.G. The crystal toxin of Bacillus thuringiensis.//In: Microbial control of pests and plant diseases 1970 1980. - London - New York: Acad. Press, 1981.-P. 223 -248.

200. Fast P.G., Angus T.A. Effects of parasporal inclusions of Bacillus thuringiensis var. sotto Ishiwata on permeability of the gut wall of Bombyx mori (Linnaeus) larvae.//J. Invertebr. Pathol. 1965. - V.7. -. 29 - 32.

201. Fast P.G., Donague T. The 5-endotoxin of Bacillus thuringiensis. II. On the mode of action.//J. Invertebr. Pathol. -1971. V.18. - P. 135 - 138.

202. Fast P.G., Milne R. The 6-endotoxin of Bacillus thuringiensis. 4. The effect of 5-endotoxin on ion regulation by midgut tissue of Bombyx mori larvae//J.Invert. Pathol. 1979. - V.34. - P. 319.

203. Fast P.G., Morrison I.K. The 8-endotoxin of Bacillus thuringiensis. 4. The effect of 5-endotoxin on ion regulation by midgut tissue of Bombyx mori larvae.//J. Invert. Pathol. 1972. - V.20. - P. 208 - 211.

204. Fast P.G., Murphy D.W., Sohi S.S. Bacillus thuringiensis 8-endotoxin: evidence that toxin acts at the surface of susceptible cells//Experientia. 1978. - V.34. - P. 762 - 763.

205. Fast P.G., Videnova E. The 8-endotoxin of Bacillus thuringiensis . V. On the occurence of endotoxin fragments in hemolymph.//J. Invertebr. Pathol. 1974. - V.23. - P. 280 - 284.

206. Faust R.M. In vitro chemical reaction of the 8-endotoxin produced by Bacillus thuringiensis var. dendrolimus with other proteins.//! Invertebr. Pathol. 1968. - V.l 1. - P. 465 - 475.

207. Faust R.M. Nature of pathogenig process of Bacillus thuringiensis.//Compar. Pathol. 1984. - V.7. - PP. 91 - 141.

208. Faust R.M., Adams J.R., Abe K., Iizzuka T., Bulla L.A. Comparative morphology and size distribution of the parasporal crystals from various strains of Bacillus thuringiensis.//J. Sericult. Sci. Jap. 1982. - V.51. - P. 316-324.

209. Faust R.M., Estes L.E. Silicon content of the parasporal crystal of the several crystalliferous bacteria.//J. Invertebr. Pathol. 1966. - V.8. - P. 141 -144.

210. Faust R.M., Dougherty E.M. Effects of the B.t. 5-endotoxin produced by Bacillus thuringiensis var. dendrolimus on the hemolymph of the silkworm, Bombyx mori.//J. Invertebr. Pathol. 1969. - V.l3. - P. 155 - 157.

211. Faust R., Hallam G., Travers R. Degradation of the parasporal crystal produced by Bacillus thuringiensis var. kurstaki.//J. Invertebr. Pathol. -1974 a. -V.24. P. 365 - 373.

212. Faust R., Travers R., Hallam G. Preliminary investigations on the molecular mode of action of the 5-endotoxin produced by Bacillus thuringiensis var. alesti.//J. Invertebr. Pathol. 1974 b. - V.23. - P. 259 - 261.

213. Faust R.M., Travers R.S., Heimpel A.M. Correlation of the biochemical and histological temporal sequence in Bacillus thuringiensis 5-endotoxin intoxication.//Proc. 11 Ann. meet. Soc. invert, pathol. Prague, 1978. -p. 36.

214. Fiske C.H., Subbarow J. The colorimetric determination of phosphorus.//J. Biol. Chem. 1925. - V.66. - P. 988 - 994.

215. Feitelson J.S., Payne J., Kim L. Bacillus thuringiensis: insect and beyond // Biotechnol. 1992. - V. 10. - P. 271 -275.

216. Fitz-James P., Young E. Morphology of sporulation.//In: The bacterial spore, ed. by Gould G.W. and Hurst A. Acad. Press: N.Y., 1969. - P. 39 - 72.

217. Galani G. Zur Histologie der Raupen von Orgyia antiqua L. (Lepid., Lymantridae) nach Behandlung mit einem Bacillus thuringiensis Praparat.//Anz. Schaedlingskd. Pflanze. Umweltschutz. 1973. - B. 56. - S. 150 -152.

218. Galanti B.F., Paradisi D., Mancini A., Guisti G. The inhibition of ATP syntethis by staphilococcus alpha-toxin in cultured tissues.//Pathol. Microbiol. 1968. - V.32. - P. 277 - 283.

219. Galowalia M.M.S., Gibson N.H.E., Wolf J. The comparative potencies of the crystalline endotoxin of eight varieties of Bacillus thuringiensis to larvae of Pieris brassicae.//J. Invert. Pathol. 1973. - V.21. - P. 301 - 308.

220. Gingrich R.E. A flotation procedure for producing spore-free crystals from commercial formulations of Bacillus thuringiensis var. thuringiensis.//J. Invertebr. Pathol. 1968. - V. 10. - P. 180 - 184.

221. Glinski L., Jarosz J. Efforts to induce defence responses in the greater wax moth larvae by oral feeding of insect pathogenic bacteria.//Comp. Biochem. Physiol. 1986. - V. A 85. - P. 673 - 677.

222. Conzales J.M., Dulmage H.T., Carlton B.C. Correlation between specific plasmids and 8-endotoxin production in Bacillus thuringiensis//Plasmid. -1981.-V.5. -P. 351 -365.

223. Govindarajanan R., Yayaraj S., Narayanan K. Observations on the nature of resistance in Spodoptera litura (F.) (Noctuidae: Lepidoptera) to infection by Bacillus thuringiensis Berliner.//Indian J. Exp. Biol. 1976 a. - V.13.- P. 548 550.

224. Govindarajanan R., Yayaraj S., Narayanan K. Studies on the effect of Bacillus thuringiensis Berliner on the castor semi-looper, Achoea janata L. (Noctuidae, Lepidoptera).//Z. angew. Entomol. 1976 b. - S. 191 - 200.

225. Griego V.M., Fancher L.J., Spence K.D. Scanning electron microscopy of the disruption of tobacco hornworm, Manduca sexta, midgut by Bacillus thuringiensis endotoxin.//J. Invertebr. Pathol. 1980. - V.35. - P. 186 -189.

226. Griego V.M., Moffett D., Spence K.D. Inhibition of active K+ transport in the tobacco hornworm (Manduca sexta) midgut after ingestion of Bacillus thuringiensis endotoxin.//! Insect Physiol. 1979. - V.25. - P. 283 - 288.

227. Grigorova R.E., Kantardgieva E., Pashov N. On the shape and structure of the crystal in two strains of Bacillus thuringiensis//J. Invert. Pathol.- 1967. -V.9. P. 503 -509.

228. Hammar G.D., Steiner H. Characterization of inhibitor A., a protease from Bacillus thuringiensis wich degrades attacins and cecropins, two classes of antibacterial proteins in insect.//Eur. J. Biochem. 1984. - V.139. - P. 247 - 252.

229. Haider M.Z., Ellar D.J. Specific membrane receptors for 5-endotoxin on the midgut insect target cells.//Biochem. J. 1987. - V.248. - P. 197 -201.

230. Haider M.Z., Ellar D.J. Mechanism of action of Bacillus thuringiensis insecticidal 5-endotoxin: interaction with phospholipid vesicles.//Biochim. Biophys. Acta. 1989. - V.978. - P. 216 - 222.

231. Haider M.Z., Mahmood S. Bacillus thuringiensis insecticidal delta-endotoxin: Divisity of crystal proteins and its relatendens to the toxicity spectrum//J. Basic Microbiol. 1990. - V.30. - P. 251 - 258.

232. Hannay C.L. Crystalline inclusions in aerobic sporeforming bacteria.//Nature. 1953. - V.172. - P. 1004.

233. Hannay C.L. Inclusions in bacteria.//In: Bacterial Anatomy. -Spooner E. and Stocker B. (eds.), 1956. P. 318 - 340.

234. Hannay C.L., Fitz-James P. The protein crystals of Bacillus thuringiensis Berliner//Can. J. Microbiol. 1955. - V.l. - P. 694 - 710.

235. Harvey W.R., Wolfersberger M.G. Mechanism of inhibition of active potassium transport in isolated midgut of Manduca sexta by Bacillus thuringiensis endotoxin. J. Exp. Biol.//1979. - V.83. - P. 293 - 304.

236. Hedman R., Suranyi E.M., Luft R., Ernster L. Oxidation of external DPNH by mitochondria from human and rat sceletal muscle.// Biochem. Biophys. Res. Communs. 1962. - V.8. - P. 314 - 320.

237. Heimpel A.M. A strain of Bacillus cereus Fr. and Fr. pathogenic for the larch sawfly, Pristiphora erichsonii (Htg)//Can. Entomol. 1954 b. - V.86. -P. 73 - 77.

238. Heimpel A.M. The pH in the gut and blood of the larch sawfly, Pristiphora erichsonii (Htg) and other insects with reference to the pathogenicity//Can. J. Zool. 1955 a. - V.33. - P. 99 - 106.

239. Heimpel A.M. Investigations of the mode of action of strains of Bacillus cereus Frankland and Frankland pathogenic for the larch sawfly, Pristiphora erichsonii.//Can. J. Zool. 1955 b. - V.33. - P. 311 - 326.

240. Heimpel A.M. A critical review of Bacillus thuringiensis var. thuringiensis Berliner and other crystalliferous bacteria.//Ann. Rev. Entomol. -1967. V.12. - P. 287-322.

241. Heimpel A.M., Angus T.A. The site of action of crystalliferous bacteria in Lepidoptera larvae.//! Insect. Pathol. 1959. - V.l. - P. 152 - 170.

242. Heimpel A.M., Angus T.A. Bacterial insecticides//Bacteriol. Rev. -1960.-V.24.-P. 266 288.

243. Heimpel A.M., Harshberger J.C. Immunity in Insect. Symposium on microbial insecticides.//Bacteriol. Rev. 1965. - V.29. - P. 397 - 405.

244. Held G.A., Kawanishi C.Y., Huang-Yuan-Shen. Characterization of the parasporal inclusion of Bacillus thuringiensis subsp. kyushuensis//J. Bacteriol. 1990. - V.172. - P. 481 - 483.

245. Herbert B.N., Gould H.J. Biosynthesis of the crystal protein of Bacillus thuringiensis var. tolworthi: 1 .Kinetics of formation of the polypeptide components of the crystal protein in vivo//Eur. Biochem. 1973. - V.37. - P. 441 - 448.

246. Himeno M., Koyama N., Funato T., Komano T. Mechanism of action Bacillus thuringiensis insecticidal delta-endotoxin on insect cells in vivo.//Agr. Biol. Chem. 1985. - V.49. - P. 1461 - 1468.

247. Hodgman T.C., Ellar D.J. Models for the structure and function of the Bacillus thuringiensis delta-endotoxins determined by compilation analysis // J. DNA Sequens. Mapp. 1990. - V. 1. - P. 97 -106.

248. Hodgman T.C., Liniu J., Jugun S., Ellar D.J. Identification of a cryptic gene association with an in secretion sequence not previously identified in Bacillus thuringiensis. // FEMS Microbiol. Lett. 1994. - V. 114. - P. 23 -30.

249. Hofmann C., Luthy P., Hutter R., Pliska V., Binding of the delta endotoxin from Bacillus thuringiensis to brush-border membrane vesicles of thecabbage butterfly (Pieris brassicae). //Eur. J. Biochem. 1988. - V. 173. - P. 85 -91.

250. Hofmann C., Wolfersberger M.J., Luthu P. Visualisation of binding of Bacillus thuringiensis delta-endotoxin to invertebrate cells.//In: Proc. 2nd Europ. Workshop on bact. toxins. 1985. - PP. 70 - 72.

251. Höfte H., Whiteley H. Insecticidal crystal proteins of Bacillus thuringiensis delta endotoxins determined by compilation analysis // J. DNA Sequens. Mapp. - 1990. - V. 1. - P. 97 -106.

252. Holmes K.C., Monro R.E. Studies on the structure of parasporal inclusions from Bacillus thuringiensis//J. Mol. Biol. 1965. - V. 14. - P. 572 - 581.

253. Hoopingarner R., Materu M.E. Toxicology and histopathology of Bacillus thuringiensis Berliner in Galleria mellonella (L.)//J. Insect. Pathol. -1964.-V.6.-P. 26- 39.

254. Huber H.E., Luthy P. Bacillus thuringiensis 5-endotoxin: composition and activation.//In: Pathogenesis of invertebrate microbial diseases.- Allanheld: N.-Y., 1981. P. 209 - 234.

255. Huber H.E., Luthy P., Ebersold H.R., Goldier J.L. The subunits of the parasporal crystal of Bacillus thuringiensis: size, linkage and toxicity//Arch. Microbiol. -1981. V.129. - P. 14-18.

256. Huger A.M., Krieg A. Uber zwei Typen parasporaler Kristalle beimkaferwirk- samen Stamm BI 256-82 von Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis.//J. Appl. Entomol. 1989. - B. 108. - S. 490 - 497.

257. Hurley J.M., Lee S.G., Andrews R.E., Knowden M.J., Bulla L.A. Separation of cytolytic and mosquitocidal proteins of Bacillus thuringiensis subsp. israelensis//Biochem. Biohys. Res. Commun. 1985. - V.126. - P. 961 -965.

258. Husz B. Bacillus thuringiensis Berliner, a bacterium pathogenic to corn borrer larvae, a preliminary report.//Sci. Rep. Int. Corn Borrer Invest. 1928, -V.l.-P. 191 - 193.

259. Husz B. Field experiments on the application of Bacillus thuringiensis against the corn borrer.//Sci. Rep. Int. Corn Borrer Invest. 1930. -V.3.-P.91 -93.

260. Iizuka T. Histo- and cytopathological studies on the midgut epithelium of silkworm larvae fed Bacillus thuringiensis.//J. Fac. Agric. Hokkaido Univ. 1974. - V.57. - P. 313 - 318.

261. Iizuka T., Faust R.M., Travers R.S. Comparative profiles of extrachromosomal DNA in single and multiple crystalliferous strains of Bacillus thuringiensis var. kurstaki.//J. Fac. Agr. Hokkaido Univ. 1981 b. - V.60. - P. 143-151.

262. Iizuka T., Yamamoto T. Possible location of the mosquitocidal protein in the crystal preparation of Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki//FEMS Microbiol. Lett. 1983. - Y.19. - P. 187 - 192.

263. Iizuka T., Yamamoto T. Serological properties of the mosquitocidal protein of Bacillus thuringiensis and the morphology of its//J. Fac. Agr. Hokkaido Univ. 1984. - V. 62. - P. 98 - 114.

264. Ikezava H., Taguchi R. Phosphatidylinositolspecific phospholipase C from Bacillus cereus and Bacillus thuringiensis //Methods in Enzymology. -N.-Y.: Acad. Press, 1981. V.71. - P. 731 - 741.

265. Irvine B., Audsley N., Lechleitner R., Meredith J., Thomson B., Phillips J. Transport properties of locust ileum in vitro: effect of cyclic AMP.//J. Exp. Biol. 1988. - V.137. -P. 361 - 385.

266. Jarret P. Potency factors in the delta-endotoxin of Bacillus thuringiensis var. aizawai and the significance of plasmids in their control.//J. Appl. Bacteriol. 1985. - V.58. - P. 437 - 448.

267. Jaques R.P. Methods and effectiveness of distribution of microbial insecticides.//Ann. N.-Y. Acad. Sci. 1973. - Y.217. - P. 109 -119.

268. Johnson D.E. Toxicity of Bacillus thuringiensis entomocidal protein toward cultured insect tissue.//J. Invert. Pathol. -1981. V.38. - P. 94 -101.

269. Junovitz H., Jawetz A. Interaction between the 8-endotoxin produced by Bacillus thuringiensis ssp. entomocidus and liposomes.//FEBS Lett. 1988.-V.230.-P. 105- 109.

270. Jacobs S.E. Bacteriological control of the flour moth (Ephestia kuehniella).//Proc. Soc. Appl. Bacteriol. 1950. - V. 13. - P. 83 - 91.

271. Kim Y.T., Gregory B.G., Ignoffo C.M. The P-exotoxin of Bacillus thuringiensis: IV . Effects of Bacillus thuringiensis of macromolecules in an insects cell line//J. Invert. Pathol. 1972. - V.20. - P. 284 - 287.

272. Kimmich G.A. Active sugar accumilation by isolated intestinal epithelial cells. A new model for sodium-dependent metabolite transort.//Biochem. 1970. - V.9. - P. 3669 - 3677.

273. Knight P.J.K., Crichmore N., Ellar D.J. The receptor for Bacillus thuringiensis Cry I A (c) delta-endotoxin in the brush border membrane of the lepidopteran Manduca sexta is aminopeptidase N // Molec. Microbiol. 1994. -V. 11.-P. 429 436.

274. Knight P.J.K.,Knowles B.H., Ellar D.J Molecular cloning of an insect aminopeptidase N that serves as a receptor for Bacillus thuringiensis Cry I A (c) toxin //J. Biol. Chem. 1995. - V. - 270. - P. 1765 -1770.

275. Knowles B.H., Ellar D.J. Characterization and partial purification of a plasma membrane receptor for Bacillus thuringiensis var. kurstaki lepidopteran-specific §-endotoxin.//J. Cell. Sei. 1986. - V.83. -. 89 - 101.

276. Knowles B.H., Ellar D.J. Colloid-osmotic lysisis is a general feature of the mechanism of action of Bacillus thuringiensis S-endotoxin with different insect specificity.//Biochem. Biophys. Acta. 1987. - V.924. - P. 509 - 518.

277. Knowles B.H., Farndale R.W. Activation of insect cell adenylate cyclase by Bacillus thuringiensis 8-endotoxin and melitin. Toxicity is independent of cyclic AMP.//Biochem. J. 1988. - V.253. - P. 235 - 241.

278. Koni P.A., Ellar D.J. Cloning and characterization of a novel Bacillus thuringiensis cytolitic delta -endotoxin.// J. Mol. Biol. 1993. - V. 229. - P. 319 -327.

279. Knowles B.H., White P.J., Nichols C.N., Ellar D.J. A broad spectrum cytolitic toxin from Bacillus thuringiensis subsp. Kyushiensis // Proc. Roy. Soc. Ser. B.- 1992.-V.248.-P. 1-7.

280. Knowles B.H., Thomas W.E., Ellar D.J. Lectin-like binding of Bacillus thuringiensis var. kurstaki lepidopteran specific toxin is an initial step in insecticidal action.//FEBS Lett. 1984. - V.168. - P. 500 - 508.

281. Krieg A. Transformations in the Bacillus cereus Bacillus thuringiensis group. Description of a new subspecies: Bacillus thuringiensis var. toumanoffi.//J. Invert. Pathol. - 1969. - V. 14. - P. 279 - 281.

282. Krieg A. Concerning exotoxin produced by vegetative cells of Bacillus thuringiensis and Bacillus cereus.//J. Invert. Pathol. 1971. - V.17. - P. 134- 135.

283. Krieg A. Die Entdehckung des Bacillus thuringiensis durch Dr. Ernst Berliner: Ein Meilenstein der Insectenpathologie und der microbiologischen Bekämpfung von Schadinsekten.//Ruckblick und Ausblick symposium. (Darmstadt) Berlin, 1986. - S. 11 - 24.

284. Krieg A., de Barjac H., Bonnefoi A. A new serotype of Bacillus thuringiensis isolated in Germany: Bacillus thuringiensis var. darmstadiensis.//J. Invert. Pathol. 1968. - Y.10. - P. 428 - 430.

285. Krieg A., Miltenburger H.G. Bioinsecticides: I. Bacillus thuringiensis/VAdvances in biotechnological processes. 1984. - V.3. - P. 273 -290.

286. Krieg A., Fargette F., Ribier J., Rapoport G. Cloning and expression of the crystal protein genes from Bacillus thuringiensis strain Berliner 1715//EMBO J. - 1982. - V.l. - P. 791 - 798.

287. Krishna S.S., Saxena K.N. Digestion and absorption of food in Tribolium castaneum Herbst.//Physiol. Zool. 1962. - V.35. - P. 66 - 78.

288. Kronstad J.W., Schnepf H.E., Whiteley H.R. Diversity of locations for Bacillus thuringiensis crystal protein genes//J. Bacteriol. 1983. - V.l34. - P. 419-428.

289. Krywienczyk J., Dulmage H.T., Fast P.G. Occurrence of two serologically distinct groups within Bacillus thuringiensis serotype 3ab var. kurstaki//J. Invertebr. Pathol. 1978. - V.31. - P. 372 - 375.

290. Kushner D.J., Lisson T.A. Alkali resistance in a strain of Bacillus cereus pathogenic for the larch sawfly, Pristiphora erichsonii.//J. Gen. Microbiol. 1959. - V.21. - P. 96 - 108.

291. Labaw L.W. The structure of Bacillus thuringiensis Berliner crystals.//! Ultrastruct. Res. 1964. - V.l0. - P. 66 - 75.

292. Laurent P., Charles J.F. Action comparée des cristaux solubilises des serotypes H-14 et H-l Bacillus thuringiensis sur des cultures, de cellules de Aedes aegypti//Ann. microbiol. 1984. - V.l35 A. - P. 473 - 484.

293. Lecadet M.-M. La toxine figuree de Bacillus thuringiensis. Fechnique de separation et composition en acides amines//Compt. Rend. Acad. Sci. 1965. - V.261. - P. 5693 - 5696.

294. Lecadet M.-M. Action comparée de 1-uree et du thioglycolate sur la toxine figuree de Bacillus thuringiensis//Compt. Rend. Acad. Sci. 1967. -V.264. - P. 2847 - 2850.

295. Lecadet M.-M., Dedonder R. Biogenesis of the crystalline inclusion of Bacillus thuringiensis during sporulation//Eur. J. Biochem. 1971. - V.23. - P. 282 - 294.

296. Lecadet M.-M., Chevrier G., Dedonder R. Analysis of a protein fraction in the spore coats of Bacillus thuringiensis//Eur. J. Biochem. 1972. -V.25. - P. 349 - 358.

297. Lee S.G., Eckblad W., Bulla L.A. Diversity of protein inclusion bodies and identification of mosquitocidal protein in Bacillus thuringiensis subsp. israelensis.//Biochem. Biophys. Res. Commun. 1985. - V.126. - P. 953 -960.

298. Li J. Insecticidal delta endotoxin from Bacillus thuringiensis // In: Protein toxic structure. - 1996. - P. 49 -77.

299. Li J., Koni A.P., Ellar D.J. Structure of the mosqu-2itocidal delta-endotoxin from Bacillus thuringiensis subsp. Kyushvensis, and implication for membrane pore formation // J. Mol. Biol. 1996. - V. 257. - P. 129 - 152.

300. Li J., Henderson R., Carroll J., Ellar D.X-ray analysis of the crystalline parasporal inclusion in Bacillus thuringiensis var. tenebrionis.//J. Mol. Biol. -1988. -V.199. P. 543 -544.

301. Liberman E.A., Topaly V.P. Selective transport of ions through bimolecular phospholipid membranes.//Biochem. Biophys. Acta. 1968. - V.l63. -P. 125- 136.

302. Lilley M., Ruffel R.N., Somerville H.J. Purification of the insecticidal toxin in crystals of Bacillus thuringiensis//J. Gen. Microbiol. 1980. -V.118.-P. 1-11.

303. Lowry O.H., Rosenbrough N.J., Farr A.L., Randall R.T. Protein measurement with the Folin phenol reagent.//J. Biol. Chem. 1951. - V.193. - P. 265 - 275.

304. Luthy P. Insecticidal toxins of Bacillus thuringiensis.//FEMS Microbiology Letters. 1980. - V.8. - P. 1 - 7.

305. Luthy P., Hoffmann C., Jaquet F. Inactivation of delta-endotoxin of Bacillus thuringiensis by tannin.//FEMS Microbiol. Lett. V.28. - P. 31 - 33.

306. Luthy P., Wolfersberger M.G. The delta-endotoxin of Bacillus thuringiensis. Structure and mode of action.//Swiss Biotechn. 1986. - V.4. - P. 11-14.

307. Mattes O. Parasitore Krankheiten der Mehlmotten larven und Versuche über ihre Verwendbarkeit als biologisches Bekampyungsmittel.//Sitzunberg Ges. Befoerd Gesamten NaturwissV/Marburg, 1927.-V.62.-P. 381-417.

308. McCarthy W.J., Aronson J.N., Labenberg J. A 63 KDa toxic polypeptide from Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki (HD-263): effect on several lepidopteran cell lines.//In Vitro Cell. Development. Biol. 1988. - V.24. -P. 59 - 64.

309. McConnell E., Richards A.G. The production of Bacillus thuringiensis Berliner of a heat-stable substance toxic to insects//Can. J. Microbiol. 1959. - V.5. - P. 161 -168.

310. McEwen F.L., Glass E.H., Davis A.S., Spittstoesser C.M. Field tests with Bacillus thuringiensis for control of four lepidopterous pests.//J. Insect Physiol. 1960. - V.2. - P. 152 - 164.

311. McMurray W.C., Begg R.W. Effect of valinomycin on oxydative phosphorilation. Arch. Biochem. Biophys. - 1969. - V.84. - P. 546 - 550.

312. Metalnikov S., Chorine V. On the infection of the gypsy moth and certain other insects with Bacterium thuringiensis. A preliminary report.//Sci. Rep. Int. Corn Borer Invest. 1929. - V.2. - P. 60 - 61.

313. Metalnikov S. Utilization des microbes dans la lutte contre Lymantria et autres insectes nuisibles.//C.r. Soc. Biol. -1930. V.105. - P. 535 -537.

314. Mitchell P. Chemiosmotic coupling in oxidative and phosphothetic phosphorylation.//Biol. Rev. 1965. - V.41. - P. 445.

315. Miteva V.l. Isolation of plasmid DNA from various strains of Bacillus thuringiensis and Bacillus cereus//C.R. Acad. Sei. Bulgaria. 1978. -V.31. - P. 913 - 916.

316. Mohd-Salleh M.B., Leurs L.C. Toxic effects of spore/crystal ratios of Bacillus thuringiensis on european corn borer larvae. J. Invertebr. Pathol. -1982. -V.39. -P. 290-299.

317. Monro R.E. Protein turnover and the formation of protein inclusions during sporulation of Bacillus thuringiensis.//Biochem. J. 1961. -V.81.-P. 225-232.

318. Murphy D.W., Sohi S.S., Fast P.G. Bacillus thuringiensis enzym-digested delta-endotoxin: effect on cultured insect cells.//Science. 1976. - V.194.- P. 954 956.

319. Nagamatsu Y., Itai Y., Hatanaka C., Funatsu G., Hayashi K. A toxic fragment from the entomocidal crystal protein of Bacillus thuringiensis.//Agric. Biol. Chem. 1984. - V.48. - P. 611 - 619.

320. Narayanan K., Jayaraji S. The effect of Bacillus thuringiensis endotoxin on hemolimph cation levels in the citrus leaf caterpillas, Papilio demoleus.//J. Invert. Pathol. 1974. - V.23. - P. 125 - 126.

321. Narayanan K., Jayaraj S., Govindarajan R. Futher observations on the mode of action of Bacillus thuringiensis on Papilio demoleus and Spodoptera litura.//J. Invertebr. Pathol. 1976. - V.28. - P. 269 - 270.

322. Niccoli A., Pelagatte O. Persistenza di prodotti a base di Bacillus thuringiensis Berl. impiegati nel controllo di alcune specie di lepidopteri. //Redia. 1986. - V.69. - P. 329 - 339.

323. Nickerson K.W. Structure and function of the Bacillus thuringiensis protein crys tal.//Biotechnol. and Bioengineer. 1980. - V.22. - P. 1305 - 1335.

324. Nishiitsutsuji-Uwo J., Endo Y., Himeno M. Mode of action of Bacillus thuringiensis 8-endotoxin. Effect on TN-368 cells.//J. Invertebr. Pathol.- 1979.-V.34.-P. 267-275.

325. Nishiitsutsuji-Uwo J., Endo Y. Mode of action of Bacillus thuringiensis 5-endotoxin: general characteristics of intoxicated Bombyx larvae.//J. Invertebr. Pathol. 1980 a. - V.35. - P. 219 - 228.

326. Nishiitsutsuji-Uwo J., Endo Y. Mode of action of Bacillus thuringiensis delta-endotoxin: Effect on Gallería mellonella (Lepidoptera: Pyralidae).//Appl. Entomol. Zool. 1981. - V. 16. - P. 79 - 87.

327. Nishiitsutsuji-Uwo J., Endo Y., Himeno M. Effects of Bacillus thuringiensis delta-endotoxin on insect and mammalian cell in vitro.//Appl. Entomol. Zool. 1980 b. - V. 15. - P. 133 - 139.

328. Norris J.R., Watson D.H. Electron Microscope study of sporulation and protein crystal formation in Bacillus cereus var. alesti//G. Gen. Microbiol. -1960.-V.22.-P. 744-749.

329. Novak E., Seifert J., Raskova H. Alfa-toxin St. aureus stimulation of ATPase in rate liver mitochondria.//Toxicon. 1970. - V.8. - P. 261 - 265.

330. Ochiai E.-J. Why calcium? Principles and applications in bioinorganic chemistry .//J. Chem. Educ. 1991. - V.68. - P. 10 -12.

331. Ohba M., Aizawa K. Crystals of Bacillus thuringiensis subsp. yunnanensis are produced only in asporogenous cells.//J. Invert. Pathol. 1986. -V.48. - P. 254 - 256.

332. Ohba M., Yu Y.M., Aizawa K. Non-toxic isolates of Bacillus thuringiensis producing parasporal inclusions with unusual protein components.//Lett. Appl. Microbiol. 1987. - V.5. - P. 29 - 32.

333. Okada M., Natori S. Mode of action of a bacterial protein induced in the haemolymph of Sarcophaga peregrina (flesh-fly) larvae.//Biochem. J. -1984.-V.222.-P. 119-124.

334. Pendleton I.R. Toxic subunits of the crystal of Bacillus thuringiensis.//J. Appl. Bacteriol. 1968. - V.31. - P. 208 - 214.

335. Pendleton I.R. Sodium and potassium fluxes in Philosamia ricini during Bacillus thuringiensis protein crystal intoxication.//J. Invert. Pathol., 1970. -V.16. P. 313-315.

336. Pendleton I.R. Characterization of crystal protoxin and an activated toxin from Bacillus thuringiensis var. entomocidus.//I. Invertebr. Pathol.- 1973.-V. 21.-P. 46-49.

337. Pendleton I.R., Bernheimer A.W., Grushoff P. Purification and partial characterization of hemolisins from Bacillus thuringiensis.//J. Invertebr. Pathol. 1973. - V.21. - P. 131 - 135.

338. Pendleton I.R., Morrison R.B. Separation of the spores and crystals of Bacillus thuringiensis.//Nature. 1966. - V.212. - P. 728 - 729.

339. Persy J., Fast P.G. Bacillus thuringiensis crystal toxin: Ultrastructural studies of its effect on silkworm midgut cells.//J. Invertebr. Pathol.- 1983.-V.41.-P. 86-98.

340. Peterson J.W., Verwey W.F. Adenilatciclase stimulation by cholera-toxin in cell membrane.//Proc. Soc. Exper. Biol. Med. 1974. - V. 145. - P. 1187 -1191.

341. Pfannenstiel M.A., Muthukumar G., Couche G., Nickerson K.W. Amino sugars in the glycoprotein toxin from Bacillus thuringiensis subsp. israelensis//J. Bacteriol. 1987. - V.169. - P. 796 - 801.

342. Prasad S.S., Shethna Y.I. Biochemistry and biological activities of the proteinaceous crystal of Bacillus thuringiensis//J. Sci. Ind. Res. 1976. -V.35. - P. 626 - 632.

343. Rahal J.J., Plant M.E., Rosen H., Weinstein L. Alfa-toxin inhibition of ion transport in cultured cells.//Science 1967. - V. 155. - P. 1118 -1122.

344. Ramakrishnan N. Observations of the toxicity of Bacillus thuringiensis for the silkworm, Bombyx mori.//J. Invertebr. Pathol. 1968. - V. 10. - P. 449 -450.

345. Reisner W.M., Feir D.J., Lavrik P.B., Ryerse J.S. Effect of Bacillus thuringiensis kurstaki 5-endotoxin on insect malpighian tubule structure and function.//J. Invertebr. Pathol. 1989. - V.54. - P. 175 - 190.

346. Ribier J. L'inclusion parasporale du Bacillus thuringiensis var. berliner 1715: moment et site de son initiation, rapports avec 1ADN sporangial//C.R. Acad. Sei.: Paris. 1971. - V.273. - P. 1444 - 1447.

347. Rubier J., Lecadet M.M. Etude ultrastructurale et cinetique de la sporulation d Bacillus thuringiensis var. berliner 1715. Remarques sur la formation de l inclusion parasporale//Ann. Microbiol. Inst. Pasteur. 1973. -V.123 A.-P. 311 -344.

348. Roehrich R. Essais de laboratoire de preparations de Bacillus thuringiensis Berl. contre les chemilles du Carpocapse (Laspeyresia) pomonella L.//Entomophage Colloq. Intern. Pathol. Insectes. Paris, 1964. - Ser. N 2. - P. 309.

349. Salama H.S., Foda M.S., Sharaby A. Potentiation of Bacillus thuringiensis against the greasy cutworm Aqrotis ypsilon.//Proc. 18th Int. Congr. Entomol. Vancouver, 1988. - P. 256.

350. Saleh S.M., Harris R.F., Allen O.N. Recovery of Bacillus thuringiensis var. thuringiensis from field soils.//!. Invertebr. Pathol. 1970 a. -V.15. - P. 55-59.

351. Saleh S.M., Harris R.F., Allen O.N. Method for determining Bacillus thuringiensis var. thuringiensis Berliner in soil.//Can. J. Microbiol. -1970b. V.16. -P. 677-680.

352. Sayles V.B., Aronson J.N., Rosenthal A. Small polypeptide components of the Bacillus thuringiensis. Parasporal crystalline inclusion//Biochem. Biophys. Res. Commun. 1970. - V.41. - P. 1126 - 1133.

353. Schesser J.H., Bulla L.A. Toxicity of Bacillus thuringiensis spores to the tobacco hornworm, Manduca sexta//Appl. Environm. Microbiol 1978. -V.35. - P. 121 - 123.

354. Schesser J.H., Kramer K.J., Bulla L.A. Bioassay for homogenious parasporal crystal of Bacillus thuringiensis using the tobacco hornworm, Manduca sexta.//Appl. Environm. Microbiol 1977. - V.33. - P. 878 - 880.

355. Scherrer P., Luthy P., Trumpi B. Production of 5-endotoxin by Bacillus thuringiensis as a function of glucose concentrations//Appl. Microbiol. 1973. V.25. - P. 644 - 646.

356. Scherrer P., Pillinger R.R., Somerville H.J. Toxicity to Lepidotera in the exosporium membrane spores of Bacillus thuringiensis//Proc. Soc. Gen. Microbiol. 1974. - V.l. - P. 145.

357. Sebesta K., Horska K., Anova J. Isolation and properties of the insecticidal exotoxin of Bacillus thuringiensis var. galechiae.//Collect. Czech. Chem. Commun. 1969 a. - V.34. - P. 891 - 900.

358. Sharpe E.S., Baker F.L. Ultrastructure of the Unusual crystal of the HD-1 isolate of Bacillus thuringiensis var. kurstaki.//J. Invert. Pathol. 1979. -V.34. - P. 320 - 322.

359. Sharpe E.S., Nickerson K.W., Aronson J.N., Bulla L.A. Separation of spores and parasporal crystals of Bacillus thuringiensis in gradients of certain X-ray contrasting agents//J. Gen. Microbiol. 1975. - V.30. - P. 1052 - 1055.

360. Shiefh T.R., Anderson R.F., Rogoff M.N. Regulation of exotoxin production in Bacillus thuringiensis//Bacteriol. Proc. 1968. - P. 6.

361. Short J., Walker P., Thomson R.O., Somerville H.J. The fine structure of Bacillus funitimus and Bacillus thuringiensis spore with special reference to the location of crystal antigen//J. Gen. Microbiol. 1974. - V.84. - P. 261 -276.

362. Skou J.C. Enzymatic basis for active transport of Na+ and K+ across the cell membrane.//Physiol. Rev. 1965. - V.45. - P. 596 - 617.

363. Smedley D.P., Armstrong G., Ellar D.J. Channel activity caused by a Bacillus thuringiensis delta -endotoxin preparation dependson the method of activation // Mol. Membr. Biol. 1997. - V. 14. - P. 13 -18.

364. Smedley D.P., Ellar D.J. Mutagenesis of three surphace exposed loops of a Bacillus thuringiensis insecticidal toxin residues importante for toxicity,receptor recognition and possibly membrane insertation // Microbiol. 1996. -V. 142.-P. 1617-1624.

365. Smirnoff W.A. Effects of volatile substances released by foliage of various plants on the entomopathogenic Bacillus cereus group.//J. Invertebr. Pathol.- 1968.-V.ll.-P. 513-515.

366. Smirnoff W.A., Berlinguet L. A substance in some commercial preparations of Bacillus thuringiensis var. thuringiensis toxic to sawfly larvae//J. Invertebr. Pathol. 1966. - V.8. - P. 376 - 381.

367. Smirnoff W.A. Results of tests with Bacillus thuringiensis and chitinase on the entomopathogenic Bacillus cereus group//J. Invertebr. Pathol. -1973.-V.21.-P. 116-118.

368. Smirnoff W.A., Valero J. Determination of the chitinolytic activity on nine subspecies of Bacillus thuringiensis//J. Invertebr. Pathol. 1977. - V.30. -P. 265 - 266.

369. Smirnoff W.A., Valero J. Metabolic exploration in insects: variations in potassium and calcium levels in insects during various infections.//J. Invertebr. Pathol. 1980. - V.35. - P. 311 - 313.

370. Smith N.R., Ellar D.J. Mutagenesis of two surface exposed loops of the Bacillus thuringiensis Cry I C delta-endotoxin affects insecticidal specifility // Biochem. J. - 1994 b. - V. 302. - P. 611 -616.

371. Smith N.R., Ellar D.J Nucleotide sequence and analysis of an insertion sequence from Bacillus thuringiensis related to I. S I 50// Plasmid. 1994 a. - V. 32.-P. 10-18.

372. Smith N.R., Gordon R.E., Clark F.E. Aerobic mesophilic spore forming bacteria.//US Department of Agriculture monograph Washington, 1952.-P. 16.

373. Somerville H.J. Formation of the parasporal inclusion of Bacillus thuringiensis//Eur. J. Biochem. -1971. V. 18. - P. 226.

374. Somerville H.J. Microbial toxins//Ann. N.Y. Acad. Sci. 1973. - V. 217.-P. 93 - 108.

375. Somerville H.J. The insecticidal endotoxin of Bacillus thuringiensis//Citta del Vaticano. 1977. - V.41. - P. 253 - 268.

376. Somerville H.J. Insect toxin in spores and protein crystals of Bacillus thuringiensis//Trends Biochem.Sci. 1978. - V.3. - P. 108 - 110.

377. Somerville H.J., James C.R. Association of the crystalline inclusion of Bacillus thuringiensis with the exosporium//J. Bacteriol. 1970. - V.102. - P. 580 - 583.

378. Somerville H.J., Jones M.L. DNA competition studies within the Bacillus cereus group of bacilli//J. Gen. Microbiol. 1972. - V.73. - P. 257 - 265.

379. Somerville H.J., Pockett H.V. An insect toxin from spores of Bacillus thuringiensis and Bacillus cereus//J. Gen. Microbiol. 1975. - V.87. - P. 359 - 369.

380. Somerville H.J., Tanada Y., Omi E.M. Lethal effect of purified spores and crystalline endotoxin preparations of Bacillus thuringiensis on several lepidoterous insects.//J. Invertebr. Pathol. 1970. - V.16. - P. 241 - 248.

381. Spencer E.Y. Comparative amino acid composition of the parasporal inclusions of five entomogenous bacteria//J. Invertebr. Pathol. -1968.-V.10.-P. 444-445.

382. Springer G.F., Adye J.C., Bezkorovainy A., Yirgensons B. Lipid component of glicoprotein receptor of gramm-negative bacteria.//Biochem. -1974. -V.13. P. 1379 - 1383.

383. Stahly D.P., Dingman D.W., Irgens R.L., Field C.C., Feiss M.G., Smith G.L. Multiple extrachromosomal deoxyribonucleic acid molecules in Bacillus thuringiensis//FEMS Microbiol. Lett. 1978 a. - V.3. - P. 139.

384. Stahly D.P., Dingman D.W., Bulla L.A., Aronson A.T. Possible origin and function of the parasporal crystals in Bacillus thuringiensis//Biochem. Biophys. Res. Communs. 1978 b. - V.84. - P. 581 - 588.

385. Steinhaus E.A. Possible use of Bacillus thuringiensis Berliner as an aid in the biological control of the alfalfa caterpillar. Hilgardia. - 1951. - V.20. -P. 359 - 381.

386. Steinhaus E.A. Futher observations on Bacillus thuringiensis Berliner and other sporeforming bacteria.//Hilgardia. 1954. - V.23. - P. 1 - 21.

387. Stone T.B., Sims S.R., Marrone P.G. Selection of tobaco budworm for resistance to a genetically engineered Pseudomonas fluorescens containing the 5-endotoxin of Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki.//J. Invert. Pathol. -1989. V.53.-P. 228 -234.

388. Sutter G.R., Raun E.S. Histopathology of European corn borer larvae treated with Bacillus thuringiensis.//J. Invertebr. Pathol. 1967. - V.9. - N l.-P. 90- 103.

389. Symington D.A., Arbuthnott J.P. The oxidation of succinate in Krebs cicle ander the influence of alfa-toxin st. aureus.//J. Med. Microbiol. -1969.-V.2.-P. 495.

390. Talalaev E.V. Bacteriological method for control of Siberian silkworm.//Trans I st Int. Conf. Insect Pathol. Biol. Control. Prague, 1959. - P. 51-57.

391. Thomas W.E., Ellar D.J. Bacillus thuringiensis var. israelensis crystal 5-endotoxin: effects on insect and mammalian cells in vitro and in vivo.//J. Cell Sei. 1983. - V.60. - P. 181 -197.

392. Toumanoff C. Description de quelques souches entomophytes de Bacillus cereus Frank, and Frank, avec remarques sur leur action et celle d-autres bacilles sur le jaune d>oeuf.//Ann. Inst. Pasteur. 1953. - V.85. - P. 90 -99.

393. Toumanoff C. L action de Bacillus cereus var. alesti Toum. et Vago sur les chenilles de Galleria mellonella L. and Hyponomeuta congnatella.//Ann. Inst. Pasteur. 1954. - V.86. - P. 570 - 597.

394. Toumanoff C., LeCoroller Y. Contributions a letude de Bacillus cereus Frank, et Frank, crystallophores et pathogenes pour les larves de Lepidopteres.//Ann. Inst. Pasteur. 1959. - V.96. - P. 680 - 688.

395. Travers R., Faust R., Reichelderfer C.F. Effects of Bacillus thuringiensis var. kurstaki 5-endotoxin on isolated lepidopteran mitochondria.//J. Invertebr. Pathol. 1976 b. - V.28.- P. 351 - 356.

396. Travers R., Faust R., Reichelderfer C.F. Inhibition of adenosine triphosphate production by Bacillus thuringiensis var. kurstaki 5-endotoxin.//In: Proceedings of the I International Colloquium on Invertebrate Pathology. -Canada, 1976 a. P. 408-409.

397. Treherne J.E. The absorption of glucose from the alimentary canal of the locust, Schistocerca gregaria Forsk.//J. Exp. Biol. 1958 a. - V.35. - P. 297 - 306.

398. Treherne J.E. The absorbtion and metabolism of some sugars in the locust, Schistocerca gregaria Forsk.//J. Exp. Biol. 1958 b. - V.35. - P. 611 - 625.

399. Turbeck R.O., Nedergaard S., Kruse H. An anion stimulated adenosine triphosphatase from potassium transporting midgut of the larvae of Hyalophora cecropia.//Biochim. Biophys. Acta. 1968. - V.163. - P. 354 - 361.

400. Tyrell D.J., Bulla L.A., Andrews R.E., Kramer K.J., Davidson L.I., Nordin P.Comparative biochemictry of entomocidal parasporal crystals of selected Bacillus thuringiensis strains.//J. Bacteriol. 1981. - V.145. - P. 1052 -1062.

401. Vankova I. Bacillus thuringiensis in praktischer Anwendung Intern. Colloq. Insect PathoU/Entomophaga. 1962. - V.2. - P. 271 - 291.

402. Vankova I., Kralik O. An electron microscope study of protein crystals in different strains of the Bacillus thuringiensis group//Ztbl. f. Bact. -1966.-V. 199.-P. 380- 386.

403. Vankova J., Svestka M. Effectiveness and persistance of Bacillus thuringiensis in forest stands.//Proced. Nat. Wide Conf. Int. Particip. Fabor, 1985.-P. 50- 56.

404. Van Heyningen W.E., Carpenter C.C.J., Peirce N.F., Greenough W.B. Specificity of bacterial toxins interaction with cell receptors.//J. Infect. Diseases.-1971.-V. 124.-P. 415.

405. Van Heyningen W.E. The mechanizm of cholera-toxin linkage to cell receptors.//Science. 1974. - V.183. - P. 656.

406. Van Mellaert H., Vanderbruggen H., Hofmann C. The mode of action of Bacillus thuringiensis delta-endotoxins: binging to lepidopteran midgut membranes.//Proc. 18th Int. Congr. Entomol. Vancouver, 1988. - P. 257.

407. Ward E.S., Ellar D.J., Todd J.A. Cloning and expression in Escherichia coli of the insecticidal delta endotoxin gene of Bacillus thuringiensis var. israelensis//FEBS Lett. 1984. - V.175. - P. 377 - 382.

408. Ward E.S., Ellar D.J., Chilcott C.N. Single amino acid changes in the Bacillus thuringiensis var. israelensis 8-endotoxin affect the toxicity and expression of the protein//! Mol. Biol. 1988. - V.202. - P. 527 - 535.

409. Wojtczak A.B., Chmurzynska W., Wojtczak L. Intracellular localization of enzymes in waxmoth, Galleria mellonella L.//Acta Biol. Expt. -1958. V.18.-P.249-264.

410. Wong H.C., Schnepf H.E., Whiteley H.R. Transcriptional and translational start sites for the Bacillus thuringiensis crystal protein gene.//J. Biol. Chem. 1983. - V.258. - P. 1960 - 1967.

411. Yamamoto T. Identification of entomocidal toxins of Bacillus thuringiensis by high performance liquid chromatography//! Gen. Microbiol. -1983. -V.129. P. 2595 -2603.

412. Yamamoto T., McLaughlin R.E. Isolation of a protein from parasporal crystal of Bacillus thuringiensis var. kurstaki toxic to the mosquito larva, Aedes taeniorhynchus//Biochem. Biophys. Res. Commun. 1981. - V.103. .p. 414-421.

413. Yamamoto T., Garsia J.A., Dulmage H.T. Immunological properties of the entomocidal proteins of Bacillus thuringiensis and its insecticidal activity//J. Invertebr. Pathol. 1983. - V.41. - P. 122 - 130.

414. Yamamoto T., Iizuka T. Two type of entomocidal toxins in the parasporal crystals of Bacillus thuringiensis kurstaki//Arch. Biochem. Biophys. -1983.-V.227.-P. 233 -241.

415. Yamvrias C. Contribution a etude der mode faction de Bacillus thuringiensis Berliner vis-a-vis de la teigne de la farine: Anagasta (Ephestia) kuhniella Zeller. Doctoral thesis.//University of Paris: Paris, 1961. 120 p.

416. Yousten A.A. Effect of the Bacillus thuringiensis 8-endotoxin on an insect predators wich has consumed intoxicated cabbage loper larvae.//J. Invertebr. Pathol. 1973. - V.21. - P. 312 - 314.

417. Yousten A., Guerrant R. Comparative activities of Bacillus thuringiensis 5-endotoxin, cholera-toxin and E.coli enterotoxin.//J. Invertebr. Pathol. 1976. - V.28. - P. 395 - 397.

418. Yousten A.A., Rogoff M.F. Metabolism of Bacillus thuringiensis in relation to spore and crystal formation//! Bacteriol. 1969. - V.100.- P. 1229.

419. Zamola B., Karminski-Zamola G., Fuks Z., Kubovric M., Wrisher M. Enhacement of intrinsic antitumor activity of spore endotoxin Bacillus thuringiensis.//Photochem. Photobiol. 1985. - V.41. - P. 361 - 367.