Аналитический контроль процесса получения тагатозы направленной трансформацией лактозы тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.02, кандидат химических наук Горбунова, Елена Михайловна

• Горбунова, Елена Михайловна
• кандидат химических наук
• 2012

Оглавление диссертации кандидат химических наук Горбунова, Елена Михайловна

ВВЕДЕНИЕ. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Глава 1 ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1.1 Лактоза как источник получения бифидогенных производных

1.1.1 Лактулоза

1.1.2 Лактитол

1.1.3 Лактосахароза

1.1.4 Галактоолигосахариды

1.2 Характеристика тагатозы как низкокалорийного подсластителя

1.2.1 Физиологическое и медицинское значение тагатозы

1.2.2 Функционально-технологические свойства Б-тагатозы

1.2.3 Направления применения Б-тагатозы

1.2.4 Промышленный способ получения тагатозы

1.2.5 Обоснование возможности использования вторичного молочного сырья для получения концентрата с тагатозой

1.3 Применение методов аналитической химии в анализе углеводов

Глава 2 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

2.1 Объекты исследования

2.2 Определение углеводов

2.2.1 Метод ТСХ

2.2.2Метод ВЭЖХ

2.3 Определение концентрации глюкозы 51 2.4Материальная база эксперимента

2.4.1 Ультрафильтрационная установка

2.4.2 Обратноосмотическая установка 54 2.5 Математическая обработка результатов анализа

Глава 3 ТРАНСФОРМАЦИЯ ЛАКТОЗЫ В ТАГАТОЗУ И

ОПТИМИЗАЦИЯ ПРОЦЕССОВ 60 3.1 Способ получения тагатозосодержащей добавки подсластителя из молочной сыворотки 60 3.2Исследование кинетики ферментативного гидролиза лактозы 64 3.3 Математическое обеспечение процесса трансформации лактозы

3.3.1 Моделирование процесса гидролиза лактозы

3.3.2 Оптимизация параметров гидролиза

3.3.3 Оптимизация процесса изомеризации

Б-галактозы искусственными нейронными сетями

Глава 4 РАЗРАБОТКА СПОСОБОВ ИДЕНТИФИКАЦИИ УГЛЕВОДОВ НА РАЗЛИЧНЫХ ЭТАПАХ

ТРАНСФОРМАЦИИ ЛАКТОЗЫ

4.1 Пробоподготовка перед ВЭЖХ

4.2Гидролиз лактозы

4.3 Изомеризация тагатозы

4.4Экспресс-способ идентификации тагатозы

Глава 5 ПРИМЕНЕНИЕ ТАГАТОЗЫ КАК НАТУРАЛЬНОГО

ПОДСЛАСТИТЕЛЯ 110 5.1 Токсикологическая оценка тагатозосодержащего натурального подсластителя

5.2Напиток на основе тагатозосодержащего подсластителя

5.3Технология производства низкокалорийного мороженого

ВЫВОДЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Аналитический контроль процесса получения тагатозы направленной трансформацией лактозы»

Актуальность. Углеводы являются одним из основных компонентов клеток и тканей живых организмов, выполняют энергетическую, структурную, пластическую, рецепторную, защитную функции. Контроль содержания углеводов в продуктах питания - актуальная задача большинства производственных и исследовательских лабораторий. Разработка методов количественного и качественного анализов углеводов приоритет многих отраслей науки (аналитическая химия, медицина, биохимия, фармакология и т.д.). В природных объектах эти соединения находятся в виде сложных смесей, содержащих низкомолекулярные неорганические и высокомолекулярные органические вещества, а также соединения белковой природы. Разделение моносахаридов представляет сложную задачу вследствие близости многих физико-химических свойств этих соединений. Будучи весьма лабильными веществами, углеводы, под влиянием даже слабых воздействий, легко подвергаются различным изменениям. Важным является разработка современных, простых, экспрессных способов пробоподготовки и анализа углеводов. Перспективны хроматографические методы, характеризующиеся высокой чувствительностью и селективностью.

Физико-химические и биотехнологические свойства лактозы позволяют рассматривать ее в качестве сахара жизни для компонентов функциональных продуктов, медицинских препаратов. Актуальное научное направление -получение химической и биохимической трансформацией производных (дериватов) лактозы, в том числе тагатозы, востребованных на мировом рынке как пребиотики и бифидогенные производные.

Разработка технологии производства натурального подсластителя на основе тагатозы и применение аналитических методов для контроля процесса на разных этапах трансформации лактозы вторичного сырья, позволяющие оптимизировать и регулировать выход конечного продукта, а также разработка методик идентификации углеводного состава является актуальной, представляет научную и практическую значимость. Решение проблемы позволит расширить ассортимент продуктов, обладающих функциональными свойствами.

Цель работы - аналитический контроль процесса получения D-тагатозы путем направленной химической и биохимической трансформации лактозы вторичного сырья и разработка способа идентификации углеводов.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи;

• разработка способа получения тагатозосодержащего подсластителя из лактозы вторичного сырья;

• математическое обеспечение этапов трансформации лактозы:

- создание математической модели процесса гидролиза лактозы;

- изучение влияния различных факторов на процесс гидролиза лактозы методом полнофакторного статистического анализа с центральным композиционным униформ-планированием;

- оптимизация условий гидролиза с применением ридж-анализа; оптимизация процесса изомеризации D-галактозы с использованием искусственных нейронных сетей и пакета прикладных программ Statistica Neural Networks v.7.0e;

• исследование кинетики ферментативного гидролиза лактозы и расчет кинетических параметров;

• распознавание и количественное определение углеводного состава субстрата на разных этапах трансформации лактозы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии;

• разработка способа идентификации тагатозы;

• применение натурального подсластителя в производстве функциональных продуктов.

Научная новизна:

• разработан способ получения D-тагатозы из лактозы вторичного сырья;

• с применением многофакторного статистического анализа оптимизированы основные факторы [температура, время гидролиза, количество вносимого фермента, pH], влияющие на процесс гидролиза;

• оптимизирован процесс изомеризации галактозы в тагатозу с использованием искусственных нейронных сетей и пакета прикладных программ Statistica Neural Networks v.7.0e;

• методом ВЭЖХ качественно и количественно установлен состав тагатозосодержащего подсластителя;

• разработан способ экспрессного детектирования углеводов.

Практическая значимость:

• способ получения тагатозосодержащего подсластителя из молочной сыворотки прошел опытно-промышленную апробацию на ГМЗ «Лискинский» (г. Лиски, Воронежская область);

• предложена математическая модель для оптимизации условий процесса гидролиза лактозы;

• установлен качественный и количественный углеводный состав на различных этапах трансформации лактозы;

• метод хроматографии в тонком слое предложен в качестве экспресс-метода идентификации углеводов, в том числе тагатозы.

Новизна практических разработок подтверждена материалами Роспатента.

Основные положения, представляемые к защите:

• способ получения тагатозосодержащего подсластителя из лактозы вторичного сырья;

• математическая модель процесса гидролиза лактозы;

• оптимизация процесса изомеризации галактозы в Б-тагатозу с использованием искусственных нейронных сетей;

• распознавание и количественное определение методом ВЭЖХ углеводного состава на разных стадиях процесса направленной трансформации лактозы;

• экспресс-идентификация тагатозы методом ТСХ.

Апробация работы

Результаты работы доложены на 75-й конференции молодых ученых «Научные достижения молодежи - решению проблем питания человечества в XXI веке» (Киев, Украина, 2009), Международной конференции «Пищевые технологии и биотехнологии» (Казань, 2009, 2010), Всероссийской конференции «Пищевая промышленность: интеграция науки, образования и производства» (Краснодар, 2009, 2010), XII научной конференции «Львовские химические чтения» (Львов, Украина, 2009), III Международно-технической конференции «Инновационные технологии и оборудование для пищевой промышленности» (Воронеж, 2009) - очно, Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Инновационные технологии в пищевой промышленности» (Самара, 2009), Всероссийской научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых (Воронеж, 2009, 2010) - очно, Международном научно-практическом семинаре -Омского государственного аграрного университета «Современные технологии продуктов питания: теория и практика производства (Омск, 2010), II Международной научно-технической, конференции «Новое в технологии и технике пищевых производств» (Воронеж. 2010), 47 - 50 отчетных научных конференциях ВГТА (Воронеж, 2009 - 2011) - очно.

Публикации

Основные положения диссертационной работы изложены в 2 патентах, 3 статьях, тезисах 17 докладов, сделанных на Международных, Всероссийских и региональных конференциях.

Структура и объем работы

Диссертационная работа состоит из введения, пяти глав, выводов, списка цитируемой литературы (140 источников, из них 40 на иностранных языках) и приложения (материалы Роспатента, обучающие выборки, акт опытно-промышленной выработки, протокол лабораторных исследований, почетные грамоты и диплом). Работа изложена на 151 странице машинописного текста, содержит 62 рисунка, 27 таблиц.

Заключение диссертации по теме «Аналитическая химия», Горбунова, Елена Михайловна

Выход т концентрата сыворотки гт^меата

Рисунок 31 - Схема рулонного обратноосмотического элемента

Производительность экспериментальной установки с рабочей поверхностью мембран 6 м составляла 60 л/ч при рабочем давлении 5 МПа.

2.5Математическая обработка результатов анализа

Коэффициент смещения (/?/) углеводов рассчитывали по формуле:

1) где X - фронт смещения идентифицируемого красителя; Xf - фронт смещения растворителя [99].

Степень гидролиза лактозы (СГ) выражается в % исходя из соотношения:

Сг = лисх-л0с, 100 ^ Л исх где Лисх. - содержание лактозы до ферментативного гидролиза; Лосх -содержание лактозы после ферментативного гидролиза [100]. о

Скорость распада (-у^, (моль/(дм -с)) фермент-субстратного комплекса рассчитывали по уравнению:

3) где [Р] -концентрация глюкозы (моль/дм3); [ЕБ] - концентрация фермент-субстатного комплекса (лактаза-лактоза комплекс) (моль/дм3); к2 -константа скорости образования глюкозы.

Максимальую скорость ферментативной реакции (1^пад,,моль/(дм3 -с)) вычисляли по приведенному уравнению: тах

4) где [£]0 - общая концентрация лактазы (суммарное количество свободного и связанного с субстратом фермента) (моль/дм ).

Константа Михаэлиса - Ментен, равную концентрации субстрата, при которой скорость реакции составляет половину от максимальной, оценивали по формуле: где [8] - концентрация субстрата (лактозы) (моль/дм3) [101].

Для статистической обработки результатов эксперимента после выявления и устранения систематических погрешностей и исключения грубых промахов применяли следующие метрологические параметры в соответствии с распределением Стьюдента [102, 103].

Среднее значение единичных определений (х ) вычисляли по уравнению (6): = п х = ' (6) п где х, - величина единичного определения; п - число экспериментов.

Среднеквадратичное отклонение (£,.) - меру разброса результатов эксперимента относительно среднего значения вычисляли по уравнению (7): =1Кг- ■ (7)

Дисперсию (£2Г), характеризующую воспроизводимость результатов эксперимента, находили по уравнению (8):

1=п 2 п-1

Доверительный интервал (Ах) рассчитывали по уравнению (9): ып где I (Р, $ - коэффициент Стьюдента (^критерий) при выбранной доверительной вероятности Р и числе степеней свободы /= п- 1.

Относительное стандартное отклонение (А) находили по уравнению (10):

А = 8г/х-100%. (10)

ГЛАВА 3. ТРАНСФОРМАЦИЯ ЛАКТОЗЫ В ТАГАТОЗУ И ОПТИМИЗАЦИЯ ПРОЦЕССОВ

3.1 Способ получения тагатозосодержащей добавки подсластителя из молочной сыворотки

Разработан новый способ производства вкусоформирующей добавки подсластителя, содержащей комплекс углеводов (основные компоненты -тагатоза и глюкоза) [104]. Способ предусматривает следующие технологические операции (рис. 32).

ПР111 ЧКА с Ы1»1,Я и ОЦЕНКА КАЧЕСТВА плптплция а 72 ! 2 °С)

71ЬГРАФН.1Ь"1 РАЦИЯ(р 0.4 \IIlu. Г--45' С) Щ

ОЬРЛПЮСМ. КОН ЦЕНТРИРОВАНИЕ (р 4 ЧПаЛ--20°С>

Ф1;рм ен га'1 ивный гщро. не.

ЛАК ГО Ш (1^3 ЗУст.

1НОМЕР1ИА1ШЯ В Ш'НО'ТС 1 НИИ С'а(ОИ);. С аС'1:

В НР1К УТСI ВИИ ( О, . (О рН 6.5 и

ЦЕНГРИФМ НРОПАННЕ А

ХРАНЕНИЕ 11РН Г=4-.2'С

Рис. 32 - Получение тагатозосодержащей добавки подсластителя

В качестве исходного сырья для получения подсластителя применяли подсырную сыворотку, которую пастеризовали при 72±2 °С с выдержкой 1520 с и подвергали ультрафильтрации с использованием полисульфонамидных мембран УПМ-50 (температура 45 °С, рабочее давление 0,5 МПа) [105].

Ультрафильтрат подвергали сгущению на обратноосмотической установке до массовой доли сухих веществ 20-22 %.

Ферментативный гидролиз основного компонента обратноосмотического концентрата - лактозы - осуществляли (3-галактозидазой ферментного препарата Lactozym 6500 L Pure при рН 6,2, что соответствует рекомендуемому интервалу (6-7 ед. рН) в инструкции по применению, в течение 4,5 часов, дозировка фермента - 7500 LAU/дм3 (LAU - Lactase Activity Units).

Изомеризацию D-галактозы в гидролизованном обратноосмотическом концентрате проводили в присутствии 25 %-ного раствора гидроксида кальция (катализатор хлорид кальция) в течение 2 ч. На начальной стадии трансформации молекулы D-галактозы под действием оснований образуется промежуточная, неустойчивая енольная форма, переходящая в енолят-анион (рис.33).

Г> сн=о сн-о~

НОJ н ног

-он -н

-о но

-н

HJ ноR

D-галаетоза R н1

-он

-н R сн—он

II с—он но

-н R

Рис. 33 - Схема образования енолят-аниона

Енолят-анион может превращаться в исходную альдозу, ее эпимер по С2 и кетозу (рис. 34).

CHQH

HO* H

Ho

HO'

CH—OH 1 с?—»oh

•h я»0 он R

О-галзктом

HOHO

CH—о

-H

D-талоаа

Рис. 34 - Эпимеризация енолят-аниона

На химическое равновесие (рис. 34) влияют температура и рН, варьируя значениями которых можно увеличить выход того или иного углевода.

В результате «атаки» гидроксид-иона на атом водорода, который связан с а-углеродным атомом, несущим частичный положительный заряд, происходит отрыв протона. При этом отрицательный заряд в карбанионе делокализуется между атомами кислорода и углерода и образуется енолят-анион. Взаимодействие карбаниона с молекулой воды приводит к образованию тагатозы. В процессе протекания реакции изомеризации альдоз ионы металлов проявляют свойства катализаторов для получения металлоорганических комплексов, которые повышают выход целевых продуктов реакции, а именно кетоз [106].

При действии ионов кальция на молекулу Э-галактозы происходит образование комплекса О-галактоза-Са, который переходит в Б-тагатоза-Са (рис. 35). сно н-с-он но-с-н я I

О-гаааяоза Сз2\С*Г

НО „СэГ. Н

•о—н н но / л сн2он I с=о I но-с-к I я

СзСО?

От-атоза

СО,

Са"

2* в> Н

Л* I с=о о,: к" Л но»>с-н I н

Рис. 35 - Схема процесса изомеризации и нейтрализации

Полученный комплекс нейтрализовали углекислым газом до значения рН 6,7, а карбонат кальция отделяли центрифугированием [107]. Тагатозосодержащий подсластитель необходимо хранить при температуре 4±2 °С не более 14 дней.

Химический состав тагатозосодержащего подсластителя представлен в табл. 11.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Горбунова, Елена Михайловна, 2012 год

1. Современная теория позитивного питания и функциональные продукты Текст. / А. А. Кочеткова, А. Ю. Колеснов, В. И. Тужилкин и др. // Пищ. пром-сть. 1999. - № 4. - С. 7 - 10.

2. Зобкова, 3. С. Использование функциональных пищевых ингредиентов творожной сыворотки Текст. / 3. С. Зобкова, С. А. Щербакова // Молоч. пром-сть. 2007. - № 3. - С. 44-46.

3. Доронин, А.Ф. Функциональное питание Текст. / А.Ф. Доронин, Б.А. Шендеров. М.: ГРАНТЪ, 2002. - 296с.

4. Храмцов, А. Г. Справочник технолога молочного производства Текст. В 7 т, 5. Продукты из обезжиренного молока, пахты и молочной сыворотки / А. Г. Храмцов, С. В. Василисин. СПб. : ГИОРД, 2004. -576 с.

5. Конь, И.Я. Углеводы Текст. / И.Я. Конь, В.А. Тутельян. В кн. «Руководство по детскому питанию».- М.: МИА, 2004.- С 88-111.

6. Конь И.Я. Углеводы пищи и здоровье детей и подростков Текст. / И.Я. Конь // Пищевая промышленность.- 2005.- №4.- С. 14-16.

7. Weber, F.L. Lactulose and combination therapy of hepatic encephalopathy: the role of the intestinal microflora Text. / F.L. Weber // Digestive Disease.- 1996.-№14.- V.1.-P.53-63.

8. Timmermans E. Lactose derivatives: functions and applications Text. / E. Timmermans. In: Whey. — Proceedings of the 2nd International Whey Conference, Chicago, 1997.

9. Timmermans E. Nutritional significance of lactose and lactose-derived products Text. / E. Timmermans- In: The impotence of Whey and Whey components in Food and Nutririon. — Proceedings of the 3rd International Whey Conference, Munich, 2001.

10. Tipson, R.S. Sulfonic esters of Carbohydrates Text. / R.S. Tipson // Advances in Carbohydrate Chemistry. 1953. —V. 8. - P. 107-215.

11. Гапонова, Jl.В. Переработка и применение молочной сыворотки Текст. / JI.B. Гапонова, Т.А. Полежаева, Н.В. Волотовская // Молочная промышленность.- 2005.-№4.-С. 52-53.

12. Данилов, М.Б. Теоретические и практические основы производства про-биотических продуктов с использованием |3-галактозидазы и эубиотиков Текст. / М.Б. Данилов.- Улан-Удэ. 2003.- 130 с.

13. Lactitol and lactulose. An in vivo and vitro cjmparison of their effesct on the human intestianl flora Text. / M.E. Kitler, M. Luginbuhl, O. Lang, F. Wuhl, A. Wyss, G. Lebek // Drug Invest.- 1992.-№ 4.- P. 73-82.

14. Боровкова, Ю.А. Гидролиз лактозы фильтрата сыворотки иммобилизованной Р-галактозидазой Текст. / Ю.Я. Боровкова, Ю.Я. Свириденко, В.Ю. Смурыгин //Молочная промышленность.- 1985.-№2.- С. 14-16.

15. Свириденко, Ю.Я. Биотехнологические аспекты интенсификации сыродельного производства: дис. д-ра биол. наук в форме научного доклада: 03.00.23 биотехнология: защищена 20.01.99 Текст. / Свириденко Юрий Яковлевич.- Углич, 1999.- 55 с.

16. Нахапетян, J1.A. Получение глюкозо-галактозных сиропов из молочной сыворотки Текст. / J1.A. Нахапетян, Л.И. Можина // Биотехнология.- 1998.- Т.4.-№1.-С. 4-19.

17. Денисова, E.B. Оптимизация биотехнологии получения минорных моносахаридов и разработка лечебно-профилактических препаратов на их основе: дис. канд. биол. наук: 03.00.23: защищена 21.06.02 Текст. / Денисова Евгения.

18. Russia Whey and Lactose Market 2009 Электронный ресурс. M., [2009]. Режим доступа: // http://www.researchandmarkets.com/reports/575345/- Загл. с экрана.

19. Marteau P. Nutritional advantages of probiotics and prebiotics Text. / P. Marteau, M.C. Boutron-Ruault // British Journal of Nutrition.- 2001.- V. 87.-№2.-S.153-157.

20. Бархатова, T.B. Бифидогенные олигосахариды Текст. / T.B. Бархатова, И.А. Евдокимов.- Краснодар: ООО «Фирма Тамзи», 2003.90 с.

21. Бархатова, Т.В. Создание технологий синбиотических продуктов на основе растительных полисахаридов: дис. д-ра техн. наук: 05.18.04 и 05.18.07: защищена 18.12.04 Текст. / Бархатова Татьяна Викторовна.-Ставрополь, 2003.-267 с.

22. Применение лактулозы в молочных продуктах Текст. // Российская лактулоза — XXI век. — М.:Изд-во МИИТ, 2000. С. 97-101.

23. Kamerling, J.P. Lactulose Text. / J.P. Kamerling, J.P. Vliegenthart // Tetrahedron. 1972. - №. 28. - P.4375.

24. Физико-химические свойства лактулозы Текст. / A.B. Серов, И.А. Евдокимов, С.А. Рябцева, Д.В. Харитонов // Хранение и переработка сельхозсырья.-2003 .-№6.-С. 65-66.

25. Mizota Т. Lactulose as a sugar with physiological significance Text. / T. Mizota, Y. Tamura, M. Tomita // Bull. Int. Dairy Fed.- 1987.- №212.- P. 6976.

26. Lee, Y.J. Lactulose production by p-galactosidase in permeabilized cells of Kluyveromyces lactis Text. / Y.J. Lee, C.S. Kim, D.K. Oh // Applied Microbiology and Biotechnology. — 2004. — V. 64, N 6. — P. 787-793.

27. Лактоза и ее производные Текст. / Б. М. Синельников, А. Г. Храмцов, И. А. Евдокимов и др. СПб. : Профессия, 2007. - 768 с.

28. Sachetta, A. Acceptability, efficacy, and tolerability of lactitol syrup in chronic or hospitalization related constipation Text. / A. Sachetta, C. Bottini, R. Guarisco // European Bulletin of Drug Research. - 2000. - №1. -V. 8.-P. 1-6.

29. Kruger F. Presentation during Interpralinq Text. / F. Kruger.- ZDS, Solingen, Germany, 1997.

30. Патент РФ № 2161414, МКИ A23G3/00. Способ производства карамели Текст. / Крылова Э.Н., Савенкова Т.В., Благодатских В.Е. Приор. 16.12.1998. — Опубл. 10.01.2001. — Бюллетень «Открытия. Изобретения». — № 3. — 2001.

31. Van Loo. Functional food properties of NDOs: a consensus report from the ENDO project Text. / Loo Van // British Journal of Nutrition. 1999. -V. 81.-P. 121-132.

32. Lactitol and lactulose. An in vivo and vitro comparison of their effect on the human intestinal flora Text. / M.E. Kitler, M. Luginbuhl, O. Lang, F. Wuhl, A. Wyss, G. Lebek // Drug Invest.- 1992.-№ 4.- P. 73-82.

33. Patent 5064672 Functional sugar substitutes with reduced calories Text. / Adam W. Mazur, Cincinnati, Ohio. Filed: Nov. 12, 1991.

34. Patent 5989352 US Lactitol composition and process for the preparation thereof Text. / Caboche; Jean-Jacques. Appi. No. 934649; filed: September 23.- 1997.

35. Patent 6090429 US Process for the manufacture of a lactitol syrup Text. / Wilson; Lonny Lee.- Appi. No. 828024; filed: March 27. 1997.

36. Евдокимов, И. А. Анализ возможности использования лактитола в молочных продуктах Текст. / И. А. Евдокимов, И. К. Куликова // Сборник научных трудов СевКавГТУ. Серия «Продовольствие». -Ставрополь. 2006. - № 2. - С. 56 - 58.

37. Playne, M.J. Commercially available oligosaccharides Text. / M.J. Playne, Crittenden R. Bulletin of IDF N 313.- 1996. - P. 10-22.

38. Грачева, И.М. Технология ферментных препаратов Текст. / И.М. Грачева, А.Ю. Кривова. М.: Элевар. 2000. —512 с.

39. O'Sullivan, M.G. Metabolism of bifidogenic factors by gut flora an overview Text. / M.G. O'Sullivan. - Bulletin of IDF N 313. - 1996. - P. 1689.

40. Mortensen, P.B. In Vitro fermentation of Tagatose to Short-Chain Fatty Acids (SCFA) and D+L-Lactate in Human Faecal Homogenates Text. / P.B. Mortensen. Internal repopt.- 1999.

41. Dekker, Marcel. Alternative Sweeteners Third Edition Text. / Marcel Dekker. USA : Lyn O'Brien Nabors. - 2001. - 710 p.

42. Patent WO 92/12263.1992 US. Process for manufacturing tagatose Text. / J. R. Beadle, J. P. Saunder, T. J. Wajada.

43. Bertelsen, H. D-tagatose a novel low-calorie bulk sweetener with prebiotic properties Text. / H. Bertelsen, В. B. Jensen, B. Buemann // World Rev Nutr Diet. - 1999. - No 85. - P. 98 - 109.

44. Schnermann, P. Evaluation of key odourants in milk chocolateand cocoa mass by aroma extracts dilutions analysis Text. / P. Schnermann, P.

45. Schiberle // Journal of Agriculture and Food Chemistry. 1997. - №45. - P. 867 - 872.

46. Skutte, U.P. Tagatose prebioticsweetener for cereals Text. / U.P. Skutte // International Food Ingrediens. - 2004. - № 2. - P 381-386.

47. Храмцов, А. Г. Рыночная концепция полного и рационального использования молочной сыворотки Текст. / А. Г. Храмцов // Молоч. пром-сть. 2006. - № 6. - С. 7 - 12.

48. Храмцов, А.Г. Технология продуктов из молочной сыворотки Текст.: Учебное пособие / А.Г. Храмцов, П.Г. Нестеренко.- М.: ДеЛи принт, 2004.- 578с.

49. Горбатова, К.К. Химия и физика молока Текст. / К.К. Горбатова. -Учебник для вузов. СПб.: ГИОРД, 2004. - 288 с.

50. Натуральные и искусственные подсластители: свойства и экспертиза качества Текст. / К.К. Полянский, О.Б. Рудаков, Г.К. Подпоринова и др. -М.: Дели-Принт, 2009. 252с.

51. Pacsu Е. Chemische Berichte Text. / Е. Pacsu. 1928. V.61. -P. 1508.

52. Розанов, А.А. Руководство по производству молочного сахараТекст. / А.А. Розанов М.: Пищепромиздат, 1952. - 64с.

53. Rapid determination of lactulose in milk by microdialysis biosensors Text. / D. Moscone, R. Bernardo, E. Marconi, G. Palleschi // The Analyst. 1999. -V.-124.-P. 325-329.

54. Тепел, А. Химия и физика молока Текст. / А. Тепел // Пер. с нем. М.: Пищевая промышленность, 1979. - 624с.

55. Lobry de Bruyn, C.A. Rec. trav.chim Text. / C.A. Lobry de Bruyn. -1893.-V. 12.-P. 286.

56. Кунижев, C.M. Унифицированные методы определения Сахаров в пищевых продуктах с помощью газовой хроматографии Текст. / С.М. Кунижев, И. П. Чепурной, О.Э. Линке // Метрология и стандартизация аналитических измерений. — Новосибирск: 1990. — С. 138-139.

57. Biggs, D. A. Analisys of Fat, Protein, Lactose and Total solids by Infra -red Abssorption Text. / D. A. Biggs, L.O. Sjauma // Bull. Int. Dairy Food.- 1987.-N208.-P. 21-30.

58. Geier H. Estimatische bestimmung von lactulose Text. / H. Geier, H. Klostermeyer // Z. Lebensm. Unters. Forsch. 1980.- V. 171. P. 443-445.

59. Olano A. Changes in the carbohydrate faction of milk during heating processes Text. / A. Olano, M. Galvo, V. Corzo // Food Chem. 1989. -V.31.-P. 259-265.

60. Сенкевич Т. Молочная сыворотка: переработка и использование в агропромышленном комплексе Текст. / Т. Сенкевич, К.Х. Ридель. -Пер. с нем.; под ред. Липатова Н.Н. — М.: Агропромиздат, 1989. 270 с.

61. Пат. 2396560 РФ, МПК 7 G 01 N 30/90. Способ идентификации углеводов Текст. / Нифталиев С.И., Мельникова Е.И., Лобанова Е.М., Ширунов М.О. и др. № 2009116966/28; Заявл. 04.05.2009; Опубл. 10.08.2010, Бюл. № 22, Ч. III, 2010.- С.-910.

62. Степаненко, Б.Н. Химия и биохимия углеводов (полисахариды) Текст.: Учеб. пособие для вузов / Б.Н. Степаненко. М.: Высш. школа, 1978г.

63. Бочков, А. Ф. Углеводы Текст. / А. Ф. Бочков, В.А. Афанасьев, Г.Е. Заиков,- М.:Наука, 1980.- 176с.

64. Кочетков, Н.К. Химия углеводов Текст. / Н.К. Кочетков, А.Ф. Бочков.- Издательство: Химия, 1967- 674с.

65. Хорлин, А .Я. Методы исследования углеводов Текст. / А.Я. Хорлин. -М.:Мир, 1975-448с.

66. Скурихина, И.М. Руководство по методам анализа качества и безопасности пищевых продуктов Текст. /Под ред. И.М. Скурихина, В.А. Тутельяна. -М.: Брандес, Медицина, 1998.

67. Ильина, И. А. Системный подход к типизации технологий плодоводства Текст. / И.А. Ильина, И.В. Хвостова, H.H. Сергеева // Садоводство и виноградарства. 2004. -№ 2. - С. 5-9.

68. Хорлин, А.Я. Методы исследования углеводов Текст. / А.Я. Хорлин. -М.:Мир, 1975г.

69. Азрилевич, М.Р. Заменители сахара Текст. / М.Р. Азрилевич // Пищевые ингредиенты: сырье и добавки. 2001. - № 2 - С. 42-45.

70. Ross, Р. Н. Protein Liquid Chromatographia Text. / P. H. Ross // Journal of chromatography library. 2000. - V. 61. - P. 2.

71. Аналитическая хроматография Текст. / Сакодынский К.И., Бражников В.В., Волков С.А. и др. М.: Химия, 1993.

72. Яшин, Я. И. Высокоэффективная жидкостная хроматография Текст. / Я. И. Яшин, А. Я. Яшин // Состояние и перспективы Рос, хим. ж. -2003. т. XLVII. - № 1.

73. Nollet, L. M. Food analysis by HPLC Text. / L. M. Nollet. Marcel Dekker inc., 1992. - P. 426. ISBN: 0-8247-8623-8

74. Гапонова, JI.В. Переработка и применение молочной сыворотки Текст. / Л.В. Гапонова, Т.А. Полежаева, Н.В. Волотовская // Молочная промышленность. 2005. - № 4. - С. 52-53.

75. Moegele R. Bestiiaiaung von Zuckern mittels Enzyirireaktoren (Biosensoren) in Verbindung Eit der HPLC Text. / R.Moegele, R.Galensa // LebensiTiittelchemie. -1992. -V. 46. P.40-52.

76. Методика выполнения измерений массовой концентрации углеводов в напитках методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (Св-во №21-03 от 04.07.2003 ВНИИМС) Текст.

77. ГОСТ Р 52738- 2007 молоко и продукты переработки молока. Термины и определения Текст.

78. Хортон, Б.С. Переработка и утилизация сыворотки Текст. / Б.С. Хортон // Молочная промышленность.- 2003.- №10.- С. 42-43.

79. Храмцов, А.Г. Технология продуктов из молочной сыворотки Текст.: Учебное пособие / А.Г. Храмцов, П.Г. Нестеренко.- М.: ДеЛи принт, 2004,- 578 с.

80. Куявски М. Использование молочной сыворотки для производства молочной кислоты Текст. / М. Куявски, Е. Рымашевски, Г. Цихош // Изв. вузов. Пищевая технология. — 1991. — С. 88-91.

81. Храмцов, А.Г. Молочный сахар Текст. — М.: Агропромиздат, 1987. — 224 с.

82. Серов, A.B. Химия и физика лактозы и ее производных Текст. Монография. С 32. / A.B. Серов.— Ставрополь: СевКавГТУ, 2003.- 116 с.

83. Берман, С.Л. Углеводы молока Текст. / С.Л. Берман // ВМИ. 1963. -Т. 48.-С. 25-47.

84. Fujita К. Production of lactosucrose and its properties Text. / K. Fujita, S. Kitahata // Carbohydrates in industrial synthesis. Proc. Symp. Div. Carbohyd. Chem. Am. Chem. Soc., Bartens. Berlin. 1992. - P. 68-76.

85. Авдалян Г.В. Технология глюкозо-галактозного сиропа на основе кислотного гидролиза лактозы Текст. : Автореферат. — М., 1990

86. Получение D-тагатозы из лактозы вторичного сырья и аналитический контроль процесса Текст. / С.И. Нифталиев, Е.И. Мельникова, Е.М. Горбунова, М.О. Ширунов, Р.В. Кораблин // Журнал химическая технология. 2011. -№11 - С. 682-686.

87. Исследование кинетики ферментативного гидролиза лактозы Текст. / С.И. Нифталиев, Е.И. Мельникова, Е.М. Горбунова, М.О. Ширунов, Р.В. Кораблин // Журнал химическая технология. 2010. -№11 - С. 693-696.

88. Ультрафильтрационная обработка молочного сырья и тенденции его дальнейшей переработки Текст. / А.П. Чагаровский, М.А. Гришин, В.П. Чагаровский и др. // Обзорная информация. Серия «Молочная промышленность». 1986. - 57с.

89. Tamura Y. Lactose hydrolysis / Y. Tamura, T. Mizota, S. Shimamura, M. Tomita // Bulletin of the international dairy federation. 1993. - №289. - P. 43-54.

90. Евдокимов, И.А. Научно-технические основы интенсивной технологии молочного сахара Текст. / И.А. Евдокимов. Докторская диссертация. - 1997.

91. Павлов, В.А. Новые методы переработки молочной сыворотки Текст. / В.А. Павлов. М.: Росагропромиздат, 1990. - 150с.

92. Мельникова, Е. И. Исследование биотехнологического потенциала творожной сыворотки: модификация химического состава, прогнозирование качества и новые технологические решения Текст. / Е. И. Мельникова. Дисс. доктора техн. наук, Воронеж, 2007.

93. Рудаков, О.Б. Спутник хроматографиста Текст. /. О.Б. Рудаков, И.А. Востров. — Воронеж: Водолей, 2004. — 528 с.

94. Смурыгин В.Ю Диссертация на соискание ученой степени кандидата наук. Углич, 1989

95. Жеребцов, H.A. Биохимия Текст.: Учебник / H.A. Жеребцов, Т.Н. Попова, В.Г. Артюхов- Воронеж: Издательство Воронежского государственного университета, 2002. С. 266-271.

96. Доерфель, К. Статистика в аналитической химии Текст. / К. Доерфель. М.: Мир, 1969. - 223 с.

97. Грачев, Ю.П. Математические методы планирования экспериментов Текст. / Ю.П. Грачев. М.: Пищевая пром - сть, 1979. - 200 с.

98. Разработка тагатозосодержащего подсластителя натурального биокорректора Текст. / Е.И. Мельникова, С.И. Нифталиев, Е.М. Лобанова, М.О. Ширунов и др. // Фундаментальные исследования. -2009 - №7 -М. : «Академия естествознания»

99. Ernst, Beat Carbohydrates in Chemistry and Biology Text. / Beat Ernst, Gerald W. Hart, Pierre Sinay. VILEY-VCH. - Vol. 1, 2000 - 655 p.

100. Мельникова, Е.И. Инновации в переработке подсырной сыворотки Текст. / Е.И. Мельникова, С.И. Нифталиев, М.О. Ширунов // Сыроделие и маслоделие. 2011 - № 1. - С. 42-43.

101. Грабчак, C.JI. Способ гидролиза лактозы в сывороточном концентрате Текст. / C.JI. Грабчак, JI.C. Иванова, Г.В. Кричевская // Агропром Украины.- 1990. -№12. -С. 40-41.

102. Zadow, J. G. Whey and lactose processing. Chapter 10. Lactose hydrolysis Text. / J. G. Zadow. London - New York: Elsevier applied science, 1992. -P.361-409.

103. Smart, J. Lactose Intolerance: Exploring Reaction Kinetics Governing Lactose Conversion of Dairy Products within the Undergraduate Laboratory Text. / J. Smart // Chemical Engineering Education. 2008. - V. 42. - № 2.-P. 43-46.

104. Urushadze Z. About a Real Conceptual Framework for Enzyme Catalysis Text. / Z.Urushadze // Bull. Georg. Natl. Acad. Sci. 2006. - Vol. 173, No 2.-P. 421-424.

105. Варфоломеев, С. Д. Текст.: Практический курс / С. Д. Варфоломеев, К. Г. Гуревич. -М. : ФАИР-ПРЕСС, 1999. 720 с.

106. Food processing modeling Text. / LMM Tijskens, MLATM Hertog, B.M. Nicolai. Woodhead Publishing. - Cambridge. England. - 2001. - 780 p.

107. Кинетика ферментативного гидролиза лактозы Текст. / Е.И. Мельникова, С.И. Нифталиев, М.О. Ширунов, Е.М. Горбунова // Современные наукоемкие технологии. -2010. № 10. - С. 180-181.

108. Муравьева, С.И. Санитарно-химический контроль воздуха промышленных предприятий Текст. / С.И. Муравьева, М.Д. Бабина. -М.: Медицина, 1982. 351 с.

109. Кучменко, Т.А. Применение методов планирования многофакторных экспериментов в аналитической химии Текст. / Т.А. Кучменко, И.В. Аристов, Д.Б. Десятов. Воронеж: Изд-во Воронеж, гос. технол. акад. -1999.-99 с.

110. Доерфель, К. Статистика в аналитической химии Текст. / К. Доерфель. М.: Мир, 1969.-223 с.

111. Ясницкий, JIM. Введение в искусственный интеллект Текст. / JI.M. Ясницкий. М.: Академия, 2005. - 176 с.

112. Калач, A.B. Искусственные нейронные сети вчера, сегодня, завтра Текст. / A.B. Калач, Я.И. Коренман, С.И. Нифталиев. - Воронеж: Изд -во Воронеж, гос. технол. акад., 2002. - 213 с.

113. Филаретов, Г.Ф. Применение искусственных нейронных сетей в сенсорных системах Текст. /Г.Ф. Филаретов, А.Н. Житков // Датчики и системы. 1999. - № 5. - С. 2 - 9.

114. Ахназарова С.Л. Оптимизация эксперимента в химии и химической технологии Текст. / С.Л. Ахназарова, В.В. Кафаров. — М.: Высшая школа, 1978. —319 с.

115. Назаров A.B. Нейросетевые алгоритмы прогнозирования и оптимизации систем Текст. / A.B. Назаров. СПб.: Наука и техника, 2003.-384 с.

116. Alternative Sweeteners Text. / edited by Lyn O'Brien Nabors, Robert C. Gelardi. USA : Marcel Dekker. - 2001. - 464 p. - ISBN-10: 0824784758.

117. Тюкавкина, H.A. Биоорганическая химия Текст. / H.A. Тюкавкина, Ю.И. Бауков. М.: «Медицина», 1991. - 528с.

118. Кнорре, Д.Г. Биохимия / Д.Г. Кнорре, С.Д. Мызина. М.: «Высшая школа», 1998.-479 с.

119. Сумина, Е.Г. Тонкослойная хроматография. Теоретические основы и практическое применение Текст. / Е.Г. Сумина, С.Н. Штыков, Н.В. Тюрина. Саратов: изд-во Саратов, гос. ун-та, 2006. - 112с.

120. МУ № 2163-80 «Методические указания к постановке исследований для обоснования санитарных стандартов вредных веществ в воздухе рабочей зоны» Текст.

121. МУ 4230-86 «Показатели токсикометрии, подлежащие определению на разных стадиях производства и применения химических веществ. Методические указания» Текст.

122. ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества. Классификация безопасности» Текст.

123. Бугаенко, И.Ф. Сахар и заменители Текст. / И.Ф. Бугаенко. М.: ООО «Телер», 2004.

124. Мельникова, Е.И. Тагатозосодержащая добавка-подсластитель в безалкогольных напитках Текст. / Е.И. Мельникова, С.И. Нифталиев, М.О. Ширунов. // Пиво и напитки. 2009. - №6. - С.32-33.

125. Тагатозосодержащий подсластитель Текст. / Е.И. Мельникова, С.И. Нифталиев, М.О. Ширунов, Р.В. Кораблин, А.Г. Мягкова // Молочная промышленность. 2010. - № 7. - С.52.

126. Оленев, Ю.А. Комплекс показателей характеристик мороженого Текст. / Ю.А. Оленев // Молочная промышленность. 1993.

127. Твердохлеб, Г. В. Технология молока о молочных продуктов Текст. / Г. В. Твердохлеб. -М.:ДеЛи принт, 2006. С.616.