b-галактозидаза микромицета Penicillum canescens F-436: Препаративное получение и некоторые физико-химические свойства тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат технических наук Черемушкина, Ирина Валентиновна

• Черемушкина, Ирина Валентиновна
• кандидат технических наук
• 1998

Оглавление диссертации кандидат технических наук Черемушкина, Ирина Валентиновна

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Микробные источники (3-галактозидазы

1.2. Направленный биосинтез (3-галактозидазы

ю

1.3. Влияние состава питательной среды на биосинтез (3-галактозидазы

1.4. Влияние условий культивирования микроорганизмов на биосинтез (3-галактозидазы

1.5. Выделение' и очистка препаратов (3-галактозидазы /У

1.6. Физико-химические свойства 2,0

1.6.1. Стабильность и оптимальные условия действия (З-галактозидаз £()

1.6.2. Специфичность действия (З-галактозидаз

1.6.3. Влияние ингибиторов и активаторов на

активный центр фермента ££

1.7. Применение (З-галактозидаз Л? ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Объекты исследований 3{

2.2. Методы определения (З-галактозидазной активности

3<

2.3. Культивирование продуцентов

2.4. Биохимические и микробиологические методы исследовании

2.5. Получение технических препаратов (3-галактозидазы

2.6. Получение высокоочищенного препарата (3-галактозидазы

2.7. Определение молекулярной массы

2.8. Электрофоретические исследования фермента

2.9. Математическое планирование эксперимента и статистическая обработка результатов

ГЛАВА 3. ВЫБОР АКТИВНОГО ПРОДУЦЕНТА

Р-ГАЛАКТОЗИДАЗЫ. ИССЛЕДОВАНИЕ ОСОБЕННОСТЕЙ БИОСИНТЕЗА ГРИБНОЙ Р-ГАЛАКТОЗИДАЗЫ

3.1. Подбор продуцента Р-галактозидазы ^д

3.2. Влияние некоторых факторов на биосинтез

Р-галактозидазы АО

3.3. Изучение влияния компонентов питательной среды

на биосинтез р-галактозидазы грибом Р. сапезсеш Г-436 ¿/6

3.3.1. Влияние различных источников углерода на рост Р. сапезсепБ ¥-436 и биосинтез Р-галактозидазы

3.3.2. Влияние минерального и органического азота

на биосинтез Р-галактозидазы „

3.3.3. Зависимость синтеза Р-галактозидазы Р. сапезсепБ Р-436

от соотношения углерода и азота в питательной среде Si

3.4. Разработка питательных сред для Р. сапеБсепБ Р-436

3.5. Оптимизация питательной среды для Р. сапеэсепз Б-436 продуцента Р-галактозидазы ^^

3.6. Заключение •

ГЛАВА 4. ПОЛУЧЕНИЕ ФЕРМЕНТНОГО ПРЕПАРАТА

Р-ГАЛАКТОЗИДАЗЫ И ИССЛЕДОВАНИЕ ЕГО СВОЙСТВ

4.1.

4.2.

Получение технического препарата р-галактозидазы Р. сапезсеш Р-436

Очистка р-галактозидазы Р. сапезсепв Г-436

6д

4.3. Исследование некоторых физико-химических

свойств Р-галактозидазы микромицета Р. сапеБсеш Р-436 ^

4.4. Кислотная и термическая инактивация р-галактозидазы

4.5. Идентификация функциональных групп активного

центра Р-галактозидазы

4.6. Заключение дд

"" с.

ГЛАВА 5. КИСЛОТНЫЙ И ФЕРМЕНТАТИВНЫЙ

ГИДРОЛИЗ ЛАКТОЗЫ »

5.1. Кислотный гидролиз лактозы <02

5.2. Ферментативный гидролиз лактозы Юд

5.3. Сопоставление механизмов ферментативного

и кислотного гидролиза лактозы НО

ГЛАВА 6. ПРИМЕНЕНИЕ ФЕРМЕНТНОГО ПРЕПАРАТА р-ГАЛАКТОЗИДАЗЫ В ПРОИЗВОДСТВЕ ХЛЕБОБУЛОЧНЫХ ИЗДЕЛИЙ

6.1. Исследование процесса гидролиза сиропа лактозы ферментным препаратом р-галактозидазы

Р. сапевсепз Р-436

6.2. Влияние ферментативных гидролизатов на процесс брожения теста

6.3. Выбор технологии булочных изделий на основе положений теории нечеткой логики

6.3.1. Математическое обеспечение теории /36

6.3.2. Практическое применение теории нечеткой

логики к выбору технологии производства булочных изделий

выводы

ЛИТЕРАТУРА ПРИЛОЖЕНИЯ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «b-галактозидаза микромицета Penicillum canescens F-436: Препаративное получение и некоторые физико-химические свойства»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность работы. Ферменты широко используются в народном хозяйстве нашей страны. Особенно актуально их применение в пищевой, легкой промышленности, медицине, генетической инженерии. Ферментные препараты уникальны по своей природе, они позволяют получить продукты высокого качества и с большим выходом.

В исследовании ферментов наиболее актуальными являются такие вопросы, как биосинтез, физико-химические свойства, расшифровка механизма катализа. Решение этих вопросов имеет важное практическое значение с точки зрения рационального использования ферментных препаратов и интенсификации технологических процессов.

Среди гидролитических ферментов, нашедших свое применение в промышленности, важное место занимает ß-галактозидаза.

ß-Галактозидаза (К. Ф. 3.2.1.23) осуществляет гидролиз ß-1,4-гликозидной связи в лактозе. Образующийся гидролизат находит широкое применение в пищевой промышленности. Биотехнология ферментного препарата связана с подбором эффективных продуцентов ß-галактозидазы. В решении данного вопроса перспективными являются микромицеты рода Pénicillium, Aspergillus и другие, которые продуцируют экзогенную ß-галактозидазу.

Настоящая работа выполнилась в соответствии с тематикой научных исследований кафедры микробиологии и биохимии Воронежской государственной технологической академии по проблеме «Изыскание оптимальных условий микробного синтеза ферментов и исследование их физико-химических свойств». Данная проблема включена в Координационный план РАН по программе «Микробиологический синтез и

научные основы микробиологического получения практически ценных веществ».

Цель и задачи исследования. Целью нашей работы являлось выделение высокоспецифичного продуцента Р-галактозидазы, получение активного препарата для гидролиза лактозосодержащего сырья, исследование его некоторых физико-химических свойств и механизма катализа.

Для достижения поставленной цели предусматривалось решить следующие задачи:

• отбор * активного продуцента Р-галактозидазы среди микромицетов;

• исследование условий биосинтеза Р-галактозидазы и рационального режима культивирования продуцента;

• разработка эффективного метода выделения и очистки Р-галактозидазы из культуральной жидкости при глубинном культивировании продуцента;

• исследование некоторых физико-химических свойств Р-галактозидазы: рН - и температурного оптимума действия, рН - и термостабильности фермента;

• идентификация функциональных групп активного центра фермента, исследование механизма действия Р-галактозидазы;

• сопоставление режимов ферментативного и кислотного гидролиза лактозы;

• использование препарата р-галактозидазы в производстве пищевых продуктов.

Научная новизна. Отобран микромицет Pénicillium canescens F - 436, осуществляющий активный биосинтез Р-галактозидазы; подобраны

рациональные условия биосинтеза и состав питательной среды для глубинного культивирования микромицета; разработан способ получения препарата р-галактозидазы и предложена схема его очистки. Найдены оптимальные рН и температура действия фермента. Исследован процесс термической и кислотной инактивации Р-галактозидазы. На основе экспериментальных данных произведено сопоставление режимов кислотного и ферментативного гидролиза лактозы. Показана целесообразность применения ферментного препарата в производстве некоторых хлебобулочных изделий.

Практическая значимость работы. Штамм Pénicillium canescens F-436 рекомендуется для ферментной промышленности в качестве продуцента Р-галактозидазы.

Препарат р-галактозидазы апробирован при производстве хлебобулочных изделий в АО «Псковский хлебокомбинат». Рассчитана экономическая эффективность использования ферментного препарата при производстве булочных изделий, которая составляет 232 тыс. руб. в год.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Черемушкина, Ирина Валентиновна

выводы

1. Из 40 штаммов проверенных микроорганизмов отобран Pénicillium canescens F-436, проявивший значительную потенциальную возможность к биосинтезу

Р-галактозидазы.

2. Установлено, что биосинтез р-галактозидазы P. canescens F-436 носит индуцибельный характер. Накопление фермента в культуральной жидкости микромицетом резко возрастает в присутствии пектин осо держащих'веществ.

3. С использованием математического планирования эксперимента подобрана рациональная питательная среда для культивирования P. canescens F-436 в % мае: тыквенные выжимки - 3,4, дрожжи - 8,1, гидроортофосфат натрия - 4,0. Это позволило повысить выход фермента в 4,3 раза.

4. С помощью методов множественной корреляции получили уравнение, адекватно описывающее экспериментальные условия для глубинного культивирования микромицета: температура 29 °С, продолжительность культивирования 144 ч, рН среды 5,8 - 6,0.

5. Оптимальные условия для действия р-галактозидазы Pénicillium canescens F-436 являются: рН 4,5 при гидролизе лактозы и о-нитрофенил-Р-D-галактопиранозида, температура. - 55 и 50 °С для гидролиза лактозы и о-нитрофенил-р-О-галактопиранозида соответственно.

6. Разработан метод получения высокоочищенного препарата р-галактозидазы с удельной активностью 427,1 ед/мг белка и степенью очистки 93,3. Молекулярная масса фермента 145 кДа.

7. Установлено, что инактивация фермента описывается уравнением реакции первого порядка, р-галактозидаза P. canescens F-436 имеет достаточно высокую кислотную и термическую стабильность. Расчет термодинамических параметров активированного комплекса позволил заключить, что в формировании белковой глобулы фермента важную роль играют гидрофобные взаимодействия.

8. Профиль кривой активность Р-галактозидазы - рН, величины рК ионогенных групп, фотоинактивация фермента в присутствии метиленового синего, зависимость константы скорости фотоинактивации от рН дают основание считать, что в активный центр фермента входит система карбоксилат-имидазолий.

9. На основе экспериментальных данных проведено сопоставление режимов кислотного и ферментативного гидролиза лактозы. Предложен вероятный механизм разрыва гликозидных связей под действием Н+-ионов и Р-галактозидазы в молекуле лактозы. Односторонняя атака Н+-ионов на гликозидную связь при кислотном гидролизе обусловливает использование жестких условий, которые ведут к частичной деструкции продуктов гидролиза. Двусторонняя атака гликозидной связи системой карбоксилат-имидазолий снижает энергию активации, обусловливает интенсивный разрыв этой связи при мягких условиях гидролиза. Ферментативный гидролиз исключает разложение продуктов гидролиза.

10. Проведенные исследования показали целесообразность применения Р-галактозидазы для гидролиза сиропов лактозы и использования гидролизатов в производстве хлебобулочных изделий.

4.6. Заключение

Разработана схема получения препарата Р-галактозидазы P.canescens F-436. Установлено, что, осаждение органическими растворителями лучше вести при рН 4,5, а из растворителей наиболее эффективен этанол в концентрации 60 %.

Максимальная активность р-галактозидазы соответствует и для лактозы и для орто-нитрофенил-р-О-галактопиранозида - рН 4,5; оптимальная температура при гидролизе орто-нитрофенил-P-D-галактопиранозида была 50 °С, для лактозы 55 °С, что свидетельствует о стабилизирующем действии лактозы на фермент. Удельная активность препарата р-галактозидазы была 427,1 ед/мг белка, и степень очистки 93,3. Молекулярная масса 145 кДа.

Р-галактозидаза Pénicillium canescens F-436 обладает высокой кислотной и термической стабильностью.

Данные расчетов термодинамических характеристик процесса инактивации р-галактозидазы P.canescens F-436 позволили предположить, юо

Рис. 4.15. Зависимость ^(К) = А(рН) при фотоокислении (3-галактозидазы Р.сапезсет Р-436 от рН при температуре 20 °С: к - константа скорости инактивации, ч"1. что в формировании белковой глобулы фермента важную роль играют гидрофобные взаимодействия.

Профиль кривой зависимости активности р-галактозидазы от рН, величины рК и теплоты ионизации, фотоинактивация р-галактозидазы позволили заключить, что в активный центр р-галактозидазы входят карбоксильная и имидазольная группы.

Ферментный препарат Р-галактозидазы Р.сапезсепБ Р-436 экспонировался на второй международной выставке Агробизнес Черноземья и был награжден дипломом (приложение 2).

ГЛАВА 5. КИСЛОТНЫЙ И ФЕРМЕНТНЫЙ ГИДРОЛИЗ ЛАКТОЗЫ

Одно из направлений переработки лактозы, позволяющее существенно расширить сферу ее применения - гидролиз на составляющие моносахариды: глюкозу и галактозу [70]. Сладость продуктов гидролиза увеличивается и достигает 60-70 % от сладости сахарозы, возрастает растворимость - до 300-500 г/л. Продуценты гидролиза легко сбраживаются обычными расами дрожжей и хорошо усваиваются человеком. Смесь глюкозы и галактозы -эффективный антикристаллизатор сахара в сиропе [87,117,168].

Возможны два способа гидролиза лактозы - кислотный и ферментативный.

Ферментативный гидролиз лактозы незаменим при использовании в качестве сырья субстратов, содержащих наряду с лактозой белок. Если же гидролизуемое сырье не содержит термолабильные компоненты, как, например, ультрафильтрат или раствор лактозы, то более предпочтительным является кислотный способ гидролиза лактозы [2, 116, 172, 173]. В то же время известно, что кислотный гидролиз лактозы проходит в довольно жестких условиях (высокая концентрация Н+-ионов и высокая температура), а ферментативный гидролиз идет, напротив, в «мягких» условиях.

Цель настоящего раздела - дать сравнительную характеристику указанным способам гидролиза.

5.1. Кислотный гидролиз лактозы

Перспективы применения кислотного способа гидролиза лактозы связаны с распространением" в последние годы принципиально новых, высокоэффективных способов очистки молочной сыворотки от несахаров и увеличение доли сыворотки, подвергаемой ультрафильтрации [130].

В качестве катализатора процесса используют минеральные кислоты. Использование органических кислот неэффективно из-за слабой способности их к диссоциации [86].

При проведении кислотного гидролиза использовали серную кислоту с массовой долей 10 %. Для нейтрализации кислоты в гидролизатах применяли карбонат кальция (ч.д.а.). Образовавшаяся нерастворимая соль - сульфат кальция - выпадает в осадок и легко удаляется из гидролизата. При этом она способствует формированию фильтрующего слоя при фильтрации гидролизата, что оказывает благоприятное влияние на скорость процесса.

Для изучения Динамики процесса гидролизовали растворы с массовой долей лактозы 10 % при рН 0,8 и 3,0, температурах 100 и 120 °С. Как видно на рис. 5.1, при рН 3,0 подъем кривых плавный, степень гидролиза за 5 ч составила 14,3 и 72,4 % для 100 С и 120 °С соответственно.

Кинетика гидролиза лактозы в этих условиях представляла собой типичную реакцию первого порядка и описывалась уравнением [36, 57, 58]: где т-продолжительность гидролиза, ч; [э]-начальная концентрация лактозы, %; [бт]-концентрация лактозы в момент х , %. Иная картина наблюдается при рН 0,8. Интенсивность гидролиза резко возрастает. Профиль кривых имеет иную форму - с восходящими и нисходящими ветвями и экстремумами на них. Чем выше температура и концентрация Н+-ионов, тем круче восходящая и нисходящая ветви кривых.

Снижение степени гидролиза находилось в коррелятивной зависимости с его оптической плотностью (табл. 5.1). Чем выше температура и

5.1)

Рис. 5.1. Динамика кислотного гидролиза лактозы (%) при температуре (°С) и рН соответственно: 1-100; 0,8; 2 -120; 0,8; 3 -120; 3,0; 4-100; 3,0. концентрация Н+-ионов, тем интенсивнее возрастает оптическая плотность гидролизата (рис. 5.2). По-видимому, образование продуктов гидролиза и их разложение под действием жестких факторов (рН и температуры) связано с образованием продуктов деструкции с хромофорными группами. Кислотный гидролиз лактозы и разложение моноз представляет собой сопряженные реакции. С увеличением концентрации моноз в гидролизате растет и скорость их разложения [36].

Список литературы диссертационного исследования кандидат технических наук Черемушкина, Ирина Валентиновна, 1998 год

ЛИТЕРАТУРА

1. Абдулина T.M., Сафонова Т.Н., Куликова А.К., Тихомирова А.С. Гидролиз лактозы грибной Р-галактозидазой // Известия ВУЗов. Пищ. технология. -1979.-№3.-С. 131-132.

2. Авдолян Г.В. Технология глюкозо-галактозного сиропа на основе кислотного гидролиза лактозы: Автореф. дис. ... канд. техн. наук. - М., 1990. -

16 с.

3 А.С. № 1065476 (СССР). Штамм Pénicillium caneseens - 20171 - продуцент р-галактозидазы. Билай В.И., Школьный А.Т., Элланская И.А., Черемнова Т.А., Югова Л.В., Дорохов В.В., Калунянц К.А. Опубл. 20.01.84. Бюл. № 1.

4. А.С. № 1494889 (СССР) Способ производства хлеба. Л.П. Пащенко, И.Н. Гущина. Опубл. 23.07.89. Бюл. № 27.

5 Ауэрман Л.Я. Технология хлебопекарного производства. - М.: Пищевая пром-сть, 1972. - 512 с.

6. Беккер З.Э. Физиология грибов и их практическое использование. - М.: МГУ, 1963.-269 с.

7 Бекер М.Е. Введение в биотехнологию. - М.: Пищевая пром-сть, 1978. -82 с.

8. Белозерский А.П., Проскуряков Н.И. Практическое руководство по биохимии растений. - М.: Советская наука, 1951.-е. 37-108.

9 Березин И.В., Мартинек К. Основы физической химии ферментативного катализа. - М.: 1977. - 280с.

10. Билай В.И. Методы экспериментальной микологии. - Киев: Наукова думка, 1973.-242 с.

11. Билай В.И. Основы общей микологии. - Киев: Вища школа, 1974. - 396 с.

12. Бояринов А.И., Кафаров В.В. Методы оптимизации в химической технологии. - М.: Химия, 1975. - 576 с.

13 Буник В.И., Гомазкова B.C. О функциональной роле гистидиновых остатков а-кетоглутаратдегидрогеназы // Биохимия. - 1987. - Т. 52. - № 8. -С. 1235.

14. Василисина В.В., Чеботарева Н.П., Василисин C.B. Ферментативный гидролиз лактозы молочной сыворотки. - Новое в технике и технологии переработки молочной сыворотки. Углич, 1981. - с. 50-54.

15. Васильев H.H., Амбросов В.А., Складнев A.A. Моделирование процессов

*

микробиологического синтеза. - М.: Лесная пром-сть, 1975. - 344 с.

16. Гомартели М.М., Куликова А.К., Церетели А.К., Безбородов А.М., Квеси-тадзе Г.И. ß-галактозидаза Pénicillium canescens шт. 20171 // Прикл. биохимия и микробиол. - 1988. - Т.24. - № 1. - С. 20-27.

17 Гордон А., Форд Ф. Спутник химика. - М.: Мир, 1976. - 541 с.

18. Грачев Ю.П. Математические методы планирования экспериментов. - М.: Пищевая пром-сть, 1979. - 192 с.

19. Грачева И.М. Технология ферментных препаратов. - М.: Пищевая пром-сть, 1975.- 392 с.

20. Грысс 3. Использование отходов плодоовощной консервной промышленности. - М.: Пищевая пром-сть, 1974. - 280 с.

21. Детерман Г. Гель - хроматография, - М.: Мир, 1970. - 352 с.

22. Диксон М., Уэбб Э. Ферменты: В 3 т. - М.: Мир, 1982. - 1118 с.

23. Дудкин М.С. Введение в химию углеводов. - Киев: Вища школа, 1976. -160 с.

24. Жакоб Ф., Моно Ж. Регуляция активности генов. - В сб.: Регуляторные механизмы клетки. - М.: И.Л., 1964. - С. 278-286.

25. Жакоб Ф., Моно Ж. Биохимические и генетические механизмы регуляции в бактериальной клетке. - В сб.: Молекулярная биология. Проблемы и перспективы. - М.: Наука, 1964.

26. Жеребцов H.A. О каталитическом центре ß-амилазы // Биохимия. - 1968. -Т.33. - № 3. - С. 453-444.

27. Жеребцов H.A. Амилолитические ферменты в пищевой промышленности. - М.: Легкая и пищевая пром-сть, 1984. - 160 с.

28. Жеребцов H.A., Букова В.Б. ß-фруктофуранозидаза плесневого гриба Aspergillus awamori // Прикл. биохимия и микробиол. - 1977. - Вып. 2 -С. 289-294.

29. Загустина H.A., Тихомирова A.C. Очистка и свойства ß-галактозидазы Curvularia inaegualis // Биохимия. - 1976. - Т.41. -№ 6. - С. 1061-1066.

•г

30. Загустина H.A., Тихомирова A.C., Рафаловская Т.Я., Янголь Л.М., Грачева А.Ю., Фениксова Р.В. Получение и свойства препарата ß-галактозидазы из Alternaría tenuis // Прикл. биохимия и микробиол. - 1975. - Т.11. - Вып.5. -С. 725-729.

31 Заявка № 95211 (Япония) Способ получения ß-галактозидазы. Опубл. 15.08.1982.

32. Землянухин A.A. Малый практикум по биохимии. - Воронеж: Изд-во ВГУ, 1985. - 128 с.

33 Кафаров В.В., Перов В.Л., Мешалкин В.П. Принципы математического моделирования химико-технологических систем. - М.: Химия, 1974. - 344 с.

34 Ковалева С.В., Дорожко А.И., Каган З.С. Фотоокисление и модификация диэтилпирокарбонатом «био,синтетической» L - треониндегидрогеназы из пивных дрожжей Saccharomyces caresbergensis // Биохимия. - 1984. - Т.49. -№8. -С. 1253.

35. Коновалов С.А. Биосинтез ферментов микроорганизмами. - М.: Пищевая пром-сть, 1972. - 270 с.

36. Корнеева О.С., Жеребцов H.A., Черемушкина И.В. Влияние химической природы гликозидных связей на кислотный гидролиз олиго- и полисахаридов // Хранение и переработка сельхозсырья. - 1998. - № 1. - С. 10-13.

№

37. Корнеева О.С., Жеребцов Н.А., Черемушкина И.В., Ухина Е.Ю. Исследование механизма расщепления гликозидных связей сахарозы [j-фруктофуранозидазой Aspergillus niger 801 // Биохимия. - 1998. - Т.63. -№ Ю. - С. 1433-1438.

38. Кочетков Г.А. Тиминовые ферменты. - М.: Наука, 1978. - 74 с.

39. Кочетков Г.А. Практическое руководство по энзимологии. - М.. Наука, 1980. - С. 233-246.

40. Кошланд Д. Катализ в живой природе и пробирке, - В кн.: Горизонты биохимии. - М.: 1964. - с. 202-227.

41. Кретович B.JI. Биохимия растений. - М.: Высшая школа, 1986. - 503 с.

42. Квескгадзе Г.И. Селекция продуцентов и характеристика амилолитических ферментов грибов рода Aspergillus. Дис. ... докт. биол. наук. - М., 1980. -

26 с.

43. Куликова А.К., Летунова Е.В. Метод определения активности р- галакто-зидазы с лактозой в качестве субстрата // Прикл. биохимия и микробиол. -1984. - Т.20. - № 1. - С. 133-138.

44. Куликова А.К., Тихомирова А.С., Фениксова Р.В. Очистка и свойства р-галактозидазы Saccharomyces fragilis // Биохимия. - 1972. - Т.37. - № 2. -С. 405-408.

45. Лейднер К. Кинетика органических реакций. - М.: Мир, 1966. - 287 с.

46. Летунова Е.В., Тихомирова А. С., Шиян С.Д., Маркин В.А., Хорлин А .Я.. Безбо'родов А.М. Очистка и свойства р-галактозидазы Alternaría tenuis. -Биохимия. -1981. - Т.46. - № 5. - С. 911-919.

47. Леунг И. Разделение на торговые зоны в нечетких условиях. Нечеткие множества и теория возможностей. Последние достижения // Радио и связь. - 1986.-С. 339-348.

48. Лилли В., Барнетт Г. Физиология грибов. - М.: И.Л., 1953. - 531 с.

49. Лосева Л.П., Бендианишвили М.В., Шатилов В.Р., Шубин В.В., Кретович В.Л. Роль остатков гистидина к конститутивной НАД (Р) - глутомат - де-

4 b 9

гидрогеназе Chlorella pyrenoidosa 82 T // Биохимия. - 1986. - T.51. - № 5. -С. 840-849.

50. Методы биохимического исследования растений / Под ред. Ермакова А.И. - JL: Агропромиздат, 1987. - 430 с.

51. Нестеренко П.Г., Василисина В.В., Чеботарев Е.А. Использование молочной сыворотки в хлебопекарном и кондитерском производстве // Молочная пром-сть. - 1982. - № 5. - С. 25-27.

52. Пат. № 1306751 (Великобритания). Получение лактазы. Опубл. 14.11.1973.

4P

53. Пат. № 3919049 (США). Способ получения ß-галактозидазы. Опубл. 1 1.1 1.1975.

54. Пат. № 1306752 (Великобритания). Получение лактазы. Опубл. 14. 02. 1973.

55. Поландова Р.Д., Дремучева Г.Ф. Характеристика сахаросодержащих продуктов и способы применения их в хлебопечении. - М.: ЦНИИТЭИпище-пром. - 1985. - Сер.27. - Вып.Ю. - С. 12-14.

56. Поляновский O.A. Роль функциональных групп белка в ферментах. - М.: Наука, 1964. - С. 101-121.

57 Полянский К.К. Кристаллизация лактозы при производстве молочных продуктов: Автореф. дис. ... докт. техн. наук. - М., 1982. - 51 с.

58. Полянский К.К. Устойчивость лактозы в водных средах // Известия ВУЗов. Пищевая технология. - 1981. - № 4. - С. 20.

59. Полянский К.К., Шестов А.Г. Физико-химия молочного сахара // Известия ВУЗов. Пищевая технология. - 1978. - № 2. - С. 58-62.

60. Путнам Ф. Денатурация белков. - В кн.: Белки. - М., 1984. - 24 с.

61. Разеева В.А., Никифорова В.Н., Кочетова Л.И. О применении вторичных молочных продуктов в кондитерском производстве // Молочная пром-сть. -1982. -№ 2. - С. 23-24.

62. Рипелиус К., Двинский Б.М. Максилат - ферментная обработка молока решает проблему непереносимости лактозы // Молочная пром-сть. - 1995. -№ 5 - С. 23 -25.

63. Роуз Э. Химическая микробиология. - М.: Мир, 1971. - 294 с.

64. Рузинов Л.П. Статистические методы оптимизации химико-технологических процессов. - М.: Химия, 1972. - 199 с.

65. Самошина Н.М., Лотменцова Е.Ю., Борисова В.Н., Нахапетян Л.А. Сравнительное изучение некоторых параметров грибных ß-галактозидаз Н

Прикл. биохимия и микробиол. - 1976. - Т. 12. - № 2. - С. 221-226. *

66. Сборник технологических инструкций по производству молочного сахара (с изменениями). - М.: Минмясомолпром, 1980.

67. Свириденко Ю.Я., Смурыгин В.Ю. Гидролиз лактозы: мировой опыт // Молочная пром-сть. - 1996. -№7,- С. 21 - 24.

68. Свириденко Ю.Я., Смурыгин В.Ю. Сывороточные сиропы - заменители сахара. // Молочная пром-сть. - 1993. - № 2. - С. 8-10.

69. Семенов С.М. Лабораторные среды для актиномицетов и грибов. Справочник. - М.: Агропромиздат, 1990. - 240 с.

70. Стерлигов Г.И. Комплексное использование вторичного молочного сырья // Вопросы экономики. - 1986. - № 5. - С. 95-103.

71. Суворова И.М. Оптимизация биосинтеза и изучение физико-химических свойств ß-галактозидазы грибного происхождения: Автореф. дис. ... канд. техн. наук. - Воронеж, 1987. - 24 с.

72. Технологические инструкции по выработке хлебобулочных изделий. - М.: Пищевая пром-сть, 1973. - С. 46-47.

73. Тихомирова A.C. ß-галактозидаза микромицетов и перспектива их применения.: Автореф. дис. ... докт. биол. наук. - М., 1981. - 28 с.

74. Тихомирова A.C. Успехи промышленного культивирования в СССР микроорганизмов - продуцентов ферментов. - Сб.: Биохимия народному хозяйству. - М.: Знание, 1977. - С. 48-62.

75 Тихомирова А.С., Гоголева М.Н., Скалабан Н.В., Куликова А.К., Тронина Г.Г., Феникова Р.В. Влияние рН среды на биосинтез р-галактозидазы Sac-charomyces fragilis // Микробиология. - 1973. - Т.42, - Вып.З. - С. 423-427.

76 Тихомирова А.С., Загустина Н.А. Получение и свойства ферментных препаратов [3-галактозидазы из Curvularia inaegualis // Прикл. биохимия и мик-робиол. - 1976. - Т.12. - № 2. - С. 221-226.

77. Тихомирова А.С., Загустина Н.А., Фениксова Р.В. О факторах, влияющих

на-биосинтез Р-галактозидазы Alternaría tenuis// Микробиология. - 1975. -

Т.44. -Вып.1. - С. 28-32.

¥

78. Тихомирова А.С., Куликова А.К., Фениксова Р.В. Образование р-галактозидазы в культурах грибов и бактерий // Микробиология. - 1974. -Т.43.-Вып. 2.-С. 257-260.

79. Тихомирова А.С., Куликова А.К., Церетели А.К., Гоголева М.Н., Летунова Е.В. Оптимизация условий биосинтеза Р-галактозидазы у эукариотов // Микробиология. - 1978. - Т.47. - Вып. 1. - С. 26-31.

80. Тихомирова А.С., Летунова Е.В. Влияние компонентов соевой муки на биосинтез грибной р-галактозидазы // Прикл. биохимия и микробиол. -1979.-Т.15.-№ 1.-С. 63-69.

81. Тихомирова А.С., Тихомиров Д.Ф. Ферментные препараты р-галактозидазы // Пищевая пром-сть. - 1991. - № 7. - С. 88-91.

82. Тихомирова А.С., Церетели А.К., Куликова А.К., Летунова Е.В., Безбородое А.М. Трансгликозилирующее действие ферментных препаратов р-галактозидаз// Прикл. биохимия и микробиол. - 1980. - Т. 16. - Вып. 1. - с. 65-71.

83. Уильяме В., Уильяме X. Физическая химия для биологов. - М.: Мир, 1979. - 600 с.

84. Фениксова Р.В., Тихомирова А.С., Куликова А.К., Токарева Р.Р. (3-галактозидаза Fabospora fragilis // Прикл. биохимия и микробиол. - 1967. -Т.З. - вып. 5. - С. 597-599.

85. Фершт Э Структура и механизм действия ферментов. - М.: Мир, 1980. -432 с.

86. Харин С.Е., Полянский К.К., Милюкин М.В. Разложение лактозы в сильнокислотной среде // Известия ВУЗов. Пищевая технология. - 1974. - № 3. -С. 158-159.

87. Храмцов А.Г. Молочный сахар. - М.: Агропромиздат, 1987. - 224 с.

»

88. Храмцов А.Г. Научно-технические аспекты рационального использования молочной сыворотки // Молочная пром-сть. - 1993. - № 2. - С. 2-4.

89. Храмцов А.Г., Евдокимов И.А., Костина В.В. Разработка технологии лактозы пищевой категории качества // Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук. - 1996. - № 1. - С. 70-73.

90. Храмцов А.Г., Евдокимов И.А., Костина В.В., Рябцева С.А., Папин В.Г. Рациональная переработка молочной сыворотки // Молочная пром-сть. -1996. -№ 4. - С. 10- 14.

91. Черемнова Т.А., Югова J1.B., Калунянц К.А., Дорохов В.В. Образование J3-галактозидазы микроскопическим грибом Pénicillium canescens под воздействием различных источников углерода. - М., 1983. - 11 с. Деп. в ОН-ТИТЭИ микробиопром 05.09.1983, № 154.

92. Черемушкина И.В., Корнеева О.С., Жеребцов Н.А., Сербулов Ю.С. Исследование и оптимизация процесса кислотного гидролиза лактозы // Вестник ВГТА.- 1997.-№2.-С. 36-38.

93. Церетели А.К. Получение и свойства дрожжевой р-галактозидазы: Авто-реф. дис. ... канд. биол. наук. - М., 1981. - 23 с.

94. Церетели А.К., Куликова А.К., Шиян С.Д., Тихомирова А.С. Очистка внутриклеточной [З-галактозидазы Sàccharomyces fragilis // Прикл. биохимия и микробиол. - 1980. - Т.16. - № 6. - С. 902-907.

95. Школьный А.Т. Первичный отбор микромицетов с р-галактозидазной активностью // Мшробюлог. журнал. - 1973. - Т.35. - Вып. 2. - С. 154-157.

96. Школьный А.Т. р-галактозидазная активность некоторых видов пеницил-лов // Мшробюлог. журнал. - 1975. - Т.37. - № 1. - С. 45-48.

97. Школьный А.Т. Одержання та деяю вместивости р-галактозидази Pénicillium canescens - waksmani и Helminthosporium turcicum // Мжробюлог. журнал. - 1977. - Т.39. - № 6. - С. 739-740.

98. Югова J1.B. Разработка технологии микробной р-галактозидазы: Автореф. дис. ... канд. техн.,наук. - М., 1984. - 24 с.

99. Akasaki M., Suzuki M., Funakashi J., Yamashina J. Characterization of p-galacfosidase from a special strain of Aspergillus oryzae // J.Biochem. - 1976. -V. 80. -№6. - P. 1195-1200.

100. Bates W. K., Woodward D.O. Neurospora p-galactosidase: Evidens for a second enzyme // Science. - 1964. - V. 146. - № 364. - P. 777 - 778.

101. Barker S.A., Shirley J.A. P-galaktosidase. In: Mickobial enzymes and Biocon-versione (ed. A.H. Rose), London, 1980. - P. 205-212.

102. Bednarski W., Kowalewska J. Production and use of p-galactosidase from Aspergillus niger // Acta Aliment. Pol. - 1986. - V.12. - № 1.- P. 55-62.

103. Biermann L.,Glantz M. D. Isolation and charecterization of p-galactosidase from Saccharomyces lactis // Biochim. Bioph. Acta. - 1968. - V.167. - № 2. -P. 373-377.

104. Borglum G.B., Sternberg M'.Z. Properties of a fungal lactase // J. Food Sci. -1972. - V.37.-№ 4.-P. 619-623.

105. Broom M. C., Roginski H., Hickey M. W. The enzymic hydrolysis of lactase in skim milk yogurt // Aust. J. Dairy Technol. - 1983. - V. 38. - № 1. - P. 35-37.

106. Castillio F.,Mareno B. Properties of lactase produced by Candida pseudotropi-calis // J. Dairy Sci. - 1983. - V.66. - № 8. - P. 1616-1621.

107. Clark P. J., Marr A.G. Studies on the repression of ß-galactosidase in E. coli I I Biochim. of Biophys. Acta. - 1964. - V.92. - № 1. - P. 85-98.

108. Cohn M., Horibata K. Inhibition by glucose of the induced synthesis of the ß-galactoside enzyme system of Escherichia coli. Analysis of maintenance // J. Bacteriol. - 1959. - V. 78. - № 5. - P. 601-612.

¡09. Comp P. C., Lester G. Properties of an extracellular ß-galactosidase secreted by Neurospora crassa// J. Bacteriol. - 1971. - V. 107. - № l. - p. 162 - 167.

110. Comp. P.C., Lester G. Properties of an extracellular ß-galactosidase secreted by Neurospora crassa // J. Bacteriol. - 1971. - V.107. - № 1. - p. 162-167.

111. Citi J. E., Sandine W. E. ß- galactosidase of Streptococcus lactis // J. Bacteriol. - 1965. - V. 89. - № 4. - P. 937-943.

112. Craven G. R., Steers E. Jr., Anfinsen C. B. Purification, composition and molecular weight of the ß-galactosidase E. coli K - 12 // J. Biol. Chem. - 1965. -V. 240.-№ 6.-P. 2468 -2477.

113. Davis B. J. Dies electrophoresis. 11. Method and application to human serum proteins // Ann. № 4. Asad. Sei. - 1974. - Vol. 121. - P. 404 - 427.

114. De Bales S.A., Castillio F.Y. Properties of lactase produced by Candida pseu-dotropicalis grown in whey // Appl. and Environ. Microbiol. - 1979. - V.37. -№6. - P. 1201-1205.

115. Decleire M., De Cat W., Van Huyuh N. Appearance of cell-bound ß-galactosidase activity in Kluyveromyces bulgaricus resting eels // Appl. Microbiol and Biotechnbe. - 1986. - V.24. - № 4. - P. 323-325.

116. Demaimay M. Etude comparative des produits d ' hydrolyse enzumatique et catalutique du lactozerum de proteine sur résinés echgeases d ions // Lait et nous. - 1977. - V.57. - № 567. - S. 25-28.

117. Deya E. Recant studies on the utilisation of lactose // Japan j. Of Dairy and Food. Soi. - 1986. - V.35. - № 6A. - P. 321-327.

118. Dickson R.C., Dickson L.R., Markin J.S. Purification and properties of inducible p-galactosidase isolated from the yeast Kluyveromyces lactis // J. Bacte-nol. - 1979. - V.137. - № 1. - P. 51-61.

119. Dickson R.C., Markin J.S. Physiological studies (3-galactosidase induction in Kluyveromyces lactis. // J. Bacteriol. - 1980. - V.142. - № 3. - P. 777-785.

120. Draper N.R. «Ridge analysis» of Response urfaces // Technometries. - 1963. -№4. - P. 3-18.

121. Edsall J. Protein. V.l. ed. H. Neurath, K. Walley. Acad. Press. - № 4. - 1958. -P.990.

122. Erickson R.P., Steers E. Jr. Isoenzymes of bacterial P-galactosidase. Purification and characterization of a nonisoenzyme forming P-galactosidase of Aero-bacter cloacae // Arch. Biochem. Biophys. - 1970. - V. 137. - № 2. - P. 399-408.

123. Fantes P.A., Roberts C.F. p-galactosidase activity and lactose utilization in Aspergillus nidulans // J. of Gen. Microbiol. - 1973. - V.7. - № 2. - P. 471-486.

124. Feters G. A., Sandine W.E., Elliker P.R. Purification and properties of Streptococcus lactis p-galactosidase // J. Bacteriol. - 1967. - V.93. - № 3. - P. 914-917.

125. Frank J.E., Somkuti G.A. General properties of p-galactosidase of Xanthomo-nas campestris // Appl. and Environ. Microbiol. - 1979. - V.38. - № 3. - P. 554-556.

126. Gekas V., Lopez-Leiva M. Hydrolysis of lactose: a literature review // Process Biochem. - 1985. - V.20. - № 1. - P. 2-12.

127. Goncalves Jose A., Castillio.F. J., Fransisco J. Partical purification and characterization of P-galacfosidase from Kluyveromyces marxianum // J.Dairy Sci. -1982. - V.65.-№ 11.-P. 2088-2094.

128. Gomes A., Castillio F. J. Production of biomass and p-galactosidase by Candida pseudotropicalis grown in continuous culture on whey // Biotechnol. Bioeng. - 1983. - V.25. - P. 1341-1354.

129. Guy E.J., Bingham F.W. Properties of p-galactosidase Saccharomyces lactis in milk and milk products // J.Dairy Sci. - 1978. - V.61. - № 2. - P. 147-151.

130. Harji M. Lactose hidrolysis // Trendsin whey utilisation. Bulitetin of IDF. -1987. -№212. - P. 50-55.

131. Hasan N., Durr J.F. Induction of p-galactosidase in Lactobacillus plantarum // J. Bacteriol. - 1974. - V.120. -№ 1. - P. 66-73.

132. Hewitt G.M., Greot Wassink J.W. Simultaneous production of inulase and

lactase in batch and continuous cultures of Kluyveromyces fragilis // Enzyme

and Microbiol Technol. - 1984. - V.6. - № 6. - P. 263-270. ¥

133. Higgins J.J., Lewis P.J., Daly W.H.., Mosgueira P.Y., Dunnill P., Lilly M.D. Investigation of the unit operations involved in the continuous flow insolation of p-galactosidase from Escherichia coil // Biotechnol. and Bioeng. - 1978. - V.20.

- № 2. - P. 159-182.

134. Hofsten B.V. Growth and metabolism of Ophiostoma multiannulatum on different sources of carbon // Physiol, plantarum. - 1956. - V.9. - № 4. - P. 624-639.

135. Hsu E. Y., Vaughn R.H. Production and catabolit repression of the constitutive polygalacturonic acid trans - Eliminase of Aeromonas liquefaciens // J. Bacteriol. - 1969. - V.98. -№ 1. - P. 172-181.

136. Ikura J., Horikoshi K. p-galactosidase aikalophilic bacillus // Agr. Biol. Chem.

- 1979. - V.43.-P. 1356-1360.

137. Iton T.,Suzuki M.,Adachi, S. Production and characterization of P-galacfosidase from lactose - fermenting yeasts // Agr. and Biol. Chem. - 1982. -V.46. - № 4. - P. 899-904.

138. Iacob F., Monod J. Cenetic regulatory mechanisms in the synthesis of proteins // J. Molec. Biol. - 1961. - V.3. - № 3.. p. 318-356.

139. Iesus S., Carlos H. Glucose inhibition of galactose - induced synthesis of ß-galacfosidase in Streptomyces Violacean // Arch. Microbiol. - 1980. - V.125. -№ 1. - P. 111-114.

140. Iogota S.K., Romana Rao M.V., Dutta S.M. ß-galacfosidase in Streptococcus cremoris // J.Food. Sei. - 1981. - V.46. - № l.-P. 161-167.

141. Kaji A., Jchimi T. Production and properties of galactosidases from Corticium rolfsii // Appl. Microbiol. - 1969. - V.18.- № 6. - P. 1036-1040.

' 142. Kaji A., Sato M., Shinmyo N., Jasuda M. Purification and properties of acid ß-D-galactosidase frQm Coricium rolfsii // Agr. Biol. Chem. - 1972. - V.36. -№ 10.-P. 1729-1735.

143. Keen N.T., Long M., Males J. Induction and represson of ß-galacfosidase synthesis by Verticiliura alboatrum // Physiol. Plantarum. - 1970,- V.23. - № 4. -P. 691-696.

144. Kitomihado Manabu, Ito Makoto, Li Yu-Tek. Endo-ß-galacfosidase from Fla-vobacterium keratolyticus // Meth. Enzym. - V.83, New York. - 1982. - P. 619-625.

145. Kiyoshi J. Induction and repression of enzymes in microbial culture // J. Chem. Tech. Biotechnol. - 1981. - V. 31 - P. 775 - 790.

146. Kuby S. A., Lardy H. A. Purification and kinetics of ß-galactosidase from E. coli, strain K-12 // J. Ainer. Chem. Soc. - 1958. - V. 75. - № 4. - P. 890 - 896.

147. Kylp K. Carbohydrases. In: Enzymes in food processing, (ed G. Reed). // Academic Press, New York, 1975, P. 92 -97.

148. Lederberg J. The ß-galactosidase of E. coli, strain K-12 // J. Bacteriol. - 1950. -V. 60. -№ l.-P. 381 - 388.

149. Lee J. C., Wacek V. Galactosidases from Aspergillus niger // Arch. Biochem. Biophys. - 1970.-V. 138.-№ 1. - P. 264 - 271.

150. Leuba J. L., Widmer F., Magnolato D. Purification and immobilization of a fungal ß- galactosidase (lactase) // Enzyme Eng. N. Y.; L. - 1978. - V. 4. -P. 57 - 59.

151. Lopez - Leiva M., Gekas V. A. A crossflow immobilized enzyme reactor for the hydrolysis of whey // Process Biochem. - 1986. - V. 21. - № 1. - P. 27 - 29.

152. Lowry O.H., Rosebrough N.H., Forr A.L Protein estimation with folin phenol reagent // J. Biol. Chem. - 1951. - V. 193. - № 2. - P. 265-275.

153. Mahoney R.R., Whitaker J.R. Purification and physicochemical properties of ß-galactosidase from Kluyveromyces fragilis // J. Food. Sei. - 1978. - V. 43. -№2. - P. 584-591.

154. Makio Marita, Masakuni Okunara, Tadaaki Kikuchi, Yosito Sakurai. Polysaccharides of soybean seeds // Agr. Biol. Chem. - 1967. - V.31. - № 3. - P. 314-318.

155. Mega T., Matsushima Y. Comparative studies of three exo-ß-galactosidases of Aspergillus oryzae // J. Biolcthem. - 1979. - V. 85. - № 2. - P. 335-341.

156. Mavropoulou J.D., Kosirowski F.V. Composition, solubility, and stability of whey powders // J. Dairy Sei. - 1973. - V. 56. - № 9. - P. 1128-1134.

157. Nevalainen H.K.M. Induktion, isolation and characterization of Aspergillus niger mutant strain producing elevated levels of ß-galactosidase // Appl. and Envior. Microbiol. - 1981. - V. 41. - № 3. - P.593-596.

158. Novotnj C., Sinijta B. Inducible synthesis of ß-galactosidase in Kluyveromyces fragilis // Folia Microbiol., 1987. - V.32. - № 1. - P. 6-12.

159. Ohtakara A., Hayashi N., Mitsutomi M. Purification and some properties of acid ß-galactosidase from Pycnoporus cinnabarinus // J. Ferment. Techno!. -1981. - V.59. - № 4. - P. 325-328.

160. Okinaka R. T., Dobrogosz W.J. Enhanced catabolite repression in Escherichia coil by growth on combyned substrates // J. Bacteriol. 1996. - V.92. - № 2. -P. 526-527.

/S3

!6l .Paigen K. Changes in the inducibility of galactokinase and p-galactosidase during inhibition of grows in E. coil // Biochem. of Biophys. acta. - 1963. -V.77. - № 2. - P. 318-328.

162. Park Y.K., De Santi MS.S., Pastore G.M. Production and characterization of P-galactosidase from Aspergillus oryzae // J. Food. Sci. - 1979. - V. 44. - № 1. -P. 100-103.

163. Parolee A.B„ Jacob F., Monod J. The genetic control and cytoplasmicexpres-sion of «inducibility» in the synthesis of p-galactosidase by E.coil // J. Molec.

Biol. - 1959. - V. 1. - № 2. - P. 165-178.

*

164. Pastore G.M., Park Y.K. Screening of high P-galactosidase-producing fungi and characterizing the hydrolysis properties of a selected strain // J. Food. Sci. -1979. - V. 44. - № 6. - P. 1577-1579.

165. Pedrique M., Castillo F.J. Regulation of p-D-galactosidase synthesis in Candida pseudotropicalis // Appl. and Environ. Microbiol. - 1982. - V.43. - № 2. -P.303-310.

166. Pollard H., Steers E. Bacillus megaterium KM p-galactosidase: purification by affi-nity chromatography and characterization of the active species // Arch. Biochem. Biophys. - 1973. - V.158. -№2. - P.650-661.

167. Pheinlander P.M. Lactosehydrolysatie van. Wei en de Bereiding van dehy-drolyseerd weipoeder// Voedingsmiddelentechnologie. - 1982. - V. 15. - № 12. - P. 27-31.

168. Pritzuealed - Stegmann B.F. Lactose and some its derivatives // J. of the Society of Dairy Technol. - 1986. - V.39. - № 3. - P. 91-97.

169. Richardson G.H. Dairy industry. In: Enzymes in Food processing, (ed. G.Reed). Academic Press, New York, 1975, P. 383-389.

170. Richmond M. Z., Gray J.I., Stine C.M. p-galactosidase: review of recent research related to technological application, mutational concerns, and immobilisation // J. Dairy Sci. - 1981. - V. 64. - № 9. - P. 1759-1771.

171. Rickenberg H.V. Role of the induced synthesis of |3-galactosidase in E. coli // Nature (Engl) - 1960. - V. 185. - № 4708. - P. 240-241.

172. Robbrtsen T., Romijn D.J., Boer R.D., Hanenmaaijer J.H. Manufacture of hy-drolised lactose syrups // Voedingsmid delentechnologie. - 1983. - V. 16. - № 22. -P. 19-21.

173. Robbrtsen T., Romijn D.J., Boer R.D., Hanenmaaijer J.H. Preparation of hy-drolised milk sugar syrups // North European J. - 1984. - V.50. - № 54. - P. 87-91.

174. Rohlfing S.R., Crawford I.P. Purification and characterization of the (3-galactosidase of Aeromonas formicans // J. Bacteriol. - 1966. - V.91. -P. 1085-1087.

175. Romanada R.V., Dutta S.M. Lactase activity of microorganisms // Folia mi-crobiol. - 1978. - V.23. -№3. - P. 210-215.

176. Sancher J., Arias M.E., Hardission C. Measurement of inducer p-galactosidase activity in infact cells of Streptomyces species // Experientia. - 1981. - V.37. -№ 5. - P. 469-473.

177. Sancher J., Hardission C. Glucose inhibition of galactose - induced synthesis of P-galactosidase in Streptomyces violaceus // Arch. Microbiol. - 1980. -V.125. -№ 1-2. - P.111-114.

178. Sorensen S. G., Crisan E. V. Thermostable lactase from thermophilic fungi // J. Food Sci. - 1974. - V. 39. - № 6. - P. 1184- 1187.

179. Sonowat H.M., Agarwal A.,•Dutta S.M. Production of P-galactosidase from Kluyveromyces fragilis grown on whey // Folia Microbiol. - 1981. - V.26. - № 5. - P. 370-376.

180. Tanaka Y., Kagamiishi A., Kiuchi A., Horiuchi T. Production and properties of P-galactosidase from Aspergillus oryzae // J. Biochem. - 1975. - V. 77. - № 1. -P. 241-247.

181. Takenishi S., Watanabe Y., Miwa T., Kobayashi R. Purification and some properties of ß-galactosidase from Pénicillium multicolor // Agr. Biol. Chem. -1983. - V.47. - № 11. - P. 2533-2540.

182. Uwajima T., Yagi H., Tekeda O. Purification, crystallization and some properties of ß-galactosidase from Saccharomyces fragilis // Agr. Biol. Chem. -1972. - V.36. - № 24. - P. 570-577.

183. Vitalis S., Szabo G. Enzyme induction in Streptomyces griseus. - Necardia and Streptomyces. Stuttgart - New York, 1978. - P. 327-334.

184. Watanabe Y., Kibesaki Y., Takenishi S., Sakai K., Tsujisaki Y. Purification

»

and properties of ß-galactosidase from Pénicillium citrinum // Agr. Biol. Chem. - 1979. - V.43. - № 5. - P. 943-950.

185. Watanabe Y., Miva T., Kobayashi R. Purification and some properties of ß-galactosidase from Pénicillium multicolor// Agr. Biol. Chem. - 1983. - V.47. -№ 11.- P. 233-2540

186. Wendorff W.L., Amundson C.H., Olson N.F. Nutrient reguirements and growth conditions for production of lactase enzyme by Saccharomyces fragilis // J.Milk Food Technol. - 1970. - V. 33. - № 10. - P. 451-455.

187. Widmer F., Leaba J.L. ß-galactosidase from Aspergillus niger Separation and characterization of three multiple forms // Europ. J. Biochem. - 1979. - V. 100. -№ 2. - P. 559-567.

188. Wierzbicki L.E., Kosikowski F. V. Lactase potential of microorganisms grown in whey //J. Dairy Sei. - 1973. - V.56. - №1. - P. 26-33.

189. Woychik J.H., Holsinger V.H. Use of lactase in the manufacture of Dairy Products. In: Enzymes in Food and Beverage Product, (ed. R.L. Ory, A. J. St. Angelo), Washington, 1977. - P. 67-79.

II P И Jí 0 S Е H И Е

гнтр гассанзпиигши^ира Воронежской области

94062 а. Воронеж гл. Космонавтов, 21 33 52 41

СЭН. Г*и. Ц004

СЭН. Ии. Ц00.035 от 22.04.94 г.

ПРОТОКОЛ од,

ИССЛЕДОВАНИЯ ПРОБ ОТ ¿4.АА.97 г.

Наименование пробы рмечтнш препарат^-гад-актозидазыДядтоканесцин ГТПх Сому ЗГТА, ка^здра микробиологии и биохимии

Соличество I образец_■____

величина партии ______

Дополнительные сведения ферментный препарат -галактозидазы ¡Ыкооми-цета ИмиШеип йаие^саьз Р -дя^_ ■■■"

•/ьд? ф°рш

Утв. Лабораторным Советом центра ГСЭИ

Протокол N36 от 04.11.37 г. Анализ Ыя .

'■¿За

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

№ А/Я анализа Наименование пробы Место отбора Наименование показателя Обнаруж. концентр. мг/кг ЩУ мг/кг НД на методику исследования

431 ! зрмэнт ЗГГА индекс ТОКСИЧНОСТИ О 6 /О от -10 ДО' ¿0% не токсичен

За ключ эр- ме: поэдставленный образец соответ М^ 01-19/16-17 о требовг ЗШ ЯМ'

имя, отчество п о о зодизшэг о ис едедавания

нкушжина Л

тт тт

3аз.лабораторией Аспирант '

Басова Г.М. еремушкина И.В.

♦♦♦♦♦♦♦♦♦♦♦♦♦♦♦♦♦♦♦♦

Воронежский Государственный Агроуниверсэтет (Учебный центр агробизнеса)* Экспоцентр

Дгровизиес Черноземья НАГРАЖДАЮТ

Участников второй меаэдународаой выставки

V V • у V у. ' ' V ' у" у ' у î' у. ' ' У ' V :.у V V .'. V. ' V " у-. '. 'у "• V / ' у '•.»,■ .'"![• ' V V - ''У' л • X' ' л ' О' X ' X '• ' X "■' X^' ч ' л" " ' ■ V ' у. ■ у ' у ' V • у • у •

мясо молочная индустрия и 6етеринария97

Жеребцова Н.А.,Кре$ова Й.Т., Корнееву Q.C., Черемушову Й.В*, Шахову М.Н., Шевцова A.A.

у' • V ; у"' у ' у"- у"'-у ' '' X' ' "' % ' л; ' л'"' • ' V"/- v •' у."'. у. ' у у"'. у"' v.'y у î;"; :y\'ï" л]".' i/.'.i;'' у ; v • y"': • s) \ у у ;у'■' • y'". у/ у • у ' У' у • у ' у ' у • у ' •.; • у

За представяещшге работы до теме:

^Получение и использование ферментного

"• у"" ».;"• у"; >.:'■' у:": л'"'- у"' >.;"■ у"4 у"' л;'-": у-"''.у"' 'у"' :у"": у"- у": у";- у"' у"' у'.'- у"' .у':' у''", - у"' 'у''": -у•".''.у'"- у'*' у' ' V'"' у": у • у"'- v*

препарата гаяахтозидаз«

"' "î'.' ''. X ' К ' '■'. X'' л"'* л"' X ' Х'.у"' Y"' У. "' ' Ч'л "С ' .v"-. v'.'. I'"'. v'1.у'"'- х'" Х''' /.''' '^'''' Х:Х К."' X ' 1

Pénicillium caimscens ÎN436 "

а,

Исподшггеяъньш диредТор

m

З/рилож&ь/ие 3

........... «Утверждаю»

^^н^^^альньш директорАО

'§êy «Йеедский хлебркбмбинат»

о проведении производственных испытаний способа приготовления хлебобулочных изделий с лактозным гидролизатом.

Мы, нижеподписавшиеся, составили настоящий акт о том, что на данном предприятии с 9 февраля по 10 март.il998 года проведена производственная проверка способа приготовления батонов нарезных из пшеничной муки первого сорта массой 0,4 кг с использованием лак-тозного гидролизата.

Данный вид продукта рекомендуется в диетическом питании людей, страдающих /?- галактозидазной недостаточностью,т.е.не усваивающих лактозу.

Перед замесом теста готовили лактозный i идролизат. Для этого предварительно проводили гидролиз 40% сиропа лактозы ферментным препаратом Лактоканесцин ГЮх с активностью 10000 Е/г, продуцентом которого является микромицет Pénicillium caiiescens F-436. Для гидролиза вносили ферментный препарат из расчета 150 единиц активности на 1 г лактозы.

Гидролиз проводили при температуре 50±2°С в течение 9 часов. О степени гидролиза судили по количеству образовавшейся глюкозы, которую определяли глюкозо-оксидазным методом. Степень гидролиза должна быть не менее 98%.

Показатели качества гидролизата представлены в табл. 1.

1 ООг гидролизата

Для выпечки батонов нарезных использовали муку пшеничную первого сорта среднего хлебопекарного достоинства, по органолепти-ческим и физико-химическим показателям соответствующую ГОСТ

Таблица1

Показатели качества гидролизата

Влажность, % Активная кислотность: Степень гидролиза, % Остаточное содержание лактозы в

50 4,5

не менее 98% следы

26574-85. Дополнительно определяли следующие показатели: газообразующая способность - 1450 см3, кислотность - 3,2 .

В работе использовали хлебопекгцэные прессованные дрожжи, соответствующие ГОСТ 171-81, с влажностью 75%, кислотностью 112 град, и подъемной силой 53 мин. Используемая соль поваренная пищевая соответствовала ГОСТ 13830-91, а сахар-песок - ГОСТ 21-94.

Тесто готовили- ускоренным способом с интенсивной обработкой и с увеличенным количеством дрожжей. Замес теста проводили на тестомесильной машине А2-ХД2Б в течение 4 минут. Брожение теста проходило 170 минут в подкатных дежах емкостью 0.33м3- Разделку теста осуществляли на линии, включающей тестоделитель А2-ХТМ, округлитель ХТО,'тестозакаточную машину ХТЗ.

Окончательная расстойка длилась в течение 30 ± 5 мин при температуре 40 °С и относительной влажности 80%. Расстоявшиеся тестовые заготовки выпекали в печи ППЦ-25М при температуре среды пекарной камеры 200-210 °С.

Рецептура и показатели технологического процесса приготовления батонов нарезных из муки первого сорта массой 0.4 кг приведены в табл. 2.

Таблица 2.

Рецептура, показате- Способ приготовления теста

ли технологического

процесса и качества

теста

контроль опыт с 5% сиропа лактозы

( . V ( 1, г по утвер- без гидролиза гидролизат лак-

( жденнои лактозы тозы

; 1 рецептуре

•2' 3 4

Мука пшеничная 100 100 100

хлебопекарная пер-,

вого сорта, кг

Дрожжи хлебопекар- 2'0 2,0 .2,0

ные прессованные, кг

Соль поваренная 1,5 1,5 1,5

пищевая, кг

Сахар-песок, кг < ;. ■; 4 2 2

Лактоза, кг .1 У • ' » - 2 2

•-¡Во

1 2 3 4

Маргарин 3,5 3,5 3,5

«Столовый» с содер-:

жанием жира 82%, к;г

Вода, кг по расчету

Продолжительность

процессов, мин:

замеса теста • , 4 4 4

брожения теста ; 170 170 150

расстойки тестовых 1 30 + 5 30 + 5 30 ±5

заготовок

выпечки изделий 22 22 22

Тесто:

влажность, % 41,5 42 42,25

температура, °С

начальная 33 33 33

конечная 32 32 32

кислотность, град

начальная 2,0 2,2 2,2

конечная 3,2 3,2 3,4

>

Готовые изделия анализировали по ГОСТ 27844 - 88. Дополнительно определяли объем, см3; удельный объем, см3/100г.

Сравнительная оценка качества батонов нарезных из пшеничной муки первого сорта, массой 0.4 кг, приготовленных по известной и предлагаемой технологии, приведены в табл.3.

Таблица 3

Наиме;нованиепока-зателей качества Показатели качества батонов, приготовленных

контроль опыт с 5% сиропа лактозы

по утвержденной рецептуре без гидролиза лактозы гидролизат лактозы

1 2 3 4

Органолептические Внешний вид: форма

Продолгов£1то-овальная с округленными концами

1 2 3 4

поверхность Гладкая, без трещин, подрывов

цвет корки Золотисто-желтый Светло-

коричневый

Состояние мякиша:

пропеченность Пропеченный, не влажный на ощупь

пористость Равномерная, без пустот Более раз-

витая

эластичность Эластичный

Вкус Соответствующий данному виду Более выра-

изделия, сладковатый женный

Запах Свойственный данному виду Более выражен-

изделия, без постороннего иый

Физико-химические: ¥

влажность, % 39,2 39,8 40

кислотность, град 2,4 2,4 2,8

пористость, % 77,2 74,4 78,5

Доп. показатели:

объем,см3 1280 1248 1325,2

удельный объем, 320 312 331,3

см3/100г

прирост уд.объема -2,5 3,5 '

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

1. Батоны нарезные из пшеничной муки первого сорта, приготовленные с добавление^ 5% лактозного гидролизата 40 % концентрации по всем показателям]качества соответствовали ГОСТу 27844-88.

2. Батоны нарезные, приготовленные с лактозным гидролиза-' гом, превосходили по качеству батоны, приготовленные по утвер-кденной рецептуре или с добавлением 5% лактозного раствора: удельный объем, пористость увеличивались на 3,5, 1,3% соответственно. Эпытные изделия были дучше контрольных также по органолептиче-жим показателям: более выраженная окраска корки, нежный эластич-1ый мякиш, более выраженные вкус и запах, более развитая порис-

"ОСГЬ.

3. Целесообразно создание новых изделий диетического назначил, необходимых для людей, страдающих р-галактозидазной недостаточностью.

4. Результаты производственных испытаний показали целесооб->азность использования ферментного препарата р -галактозидазы

И М Civ

i. ) >; i

. м ¡. к

Лактоканесцин Г10х для гидролиза лактозного сиропа при приготовлении булочных изделий.

Представители ВГТА:

от кафедры ТХМКП ■ с/д^^^^с. проф Пащенко Л.Г1.

студ.Гребенникова Л.А.

от кафедры микробиологии и биохимии:

б^Ь/у/ доц. Корнеева О.С. • ' асп- Черемушкина И.В.

Представители от а;, »

АО «Псковский хлебокомбинат»:

<-1 ^ I

ц

__/1

V г

(/¿'-/¿¿¿О

7.

Горшкова Т.Н. Назарова Т.А. Яковлева Л.А.