1→3-β-D-Глюканазы моллюсков Японского и Южно-Китайского морей тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.10, кандидат химических наук Захаренко, Александр Михайлович

• Захаренко, Александр Михайлович
• кандидат химических наук
• 2011

Оглавление диссертации кандидат химических наук Захаренко, Александр Михайлович

ВВЕДЕНИЕ.

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Классификация гликозидгидролаз.

1.1.1 Номенклатура ферментов (КФ), её недостатки и достоинства; новые системы классификации ферментов.

1.1.2 Классификация ферментов по аминокислотной последовательности

1.1.3 Классификации, основанные на механизмах действия гликозидгидролаз

1.2 1—»З-Р-Б-Глюканазы. Номенклатура. Классификация.

1.2.1 1—>3-р-0-Глюканазы бактерий.

1.2.2 1—»З-Р-О-Глюканазы грибов.

1.2.3 1—»3-ß-D-Глгоканазы растений.

1.2.4 1-»3-р-0-Глюканазы животных.

1.3 Особенности молекулярных и каталитических свойств 1 -»З-р-Б-глюканаз морских беспозвоночных.

1.4 1—>3;1—»б-р-Б-Глюканы - субстраты 1—»З-р-В-глюканаз (распространение, структура, свойства).

2 РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

2.1 Поиск источников 1—»З-р-Б-глюканаз среди морских беспозвоночных ЮжноКитайского моря.

2.1.1 1—>3-Р-В-Глюканаза промыслового моллюска Южно-Китайского моря Регпа viridis.

2.1.2 1—»З-р-Б-Глюканаза моллюска Южно-Китайского моря Tapes literata

2.2 Сравнение некоторых свойств эндо-1—»З-Р-Б-глюканаз морских беспозвоночных.

2.3 Специфичность О-гликозидгидролаз морского брюхоногого моллюска Японского моря ЬШогіпа Біїкапа.

2.4 Водорастворимые полисахариды зеленых водорослей рода Саиіегра.

3 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

3.1 Биологическое сырье и реактивы.

3.2 Определение восстанавливающих Сахаров.

3.3 Определение нейтральных Сахаров.

3.4 Определение гидролитической активности 1->3-Р-В-гюканаз.

3.5 Определение гликозидазной активности.

3.6 Электрофорез белков.

3.7 Определение оптимума рН.

3.8 Определение рН-стабильности.

3.9 Определение температурного оптимума.

3.10 Определение термостабильности.

3.11 Определение константы Михаэлиса (Кга).

3.12 Действие ингибиторов.

3.13 Ингибирование р-Б-глюкозидазы О-П формононетином.

3.14 Получение продуктов ферментативного гидролиза глюкозидов изофлавоноидов.

3.15 Условия реакции трансгликозилирования.

3.16 Аналитическая ВЭЖХ.

3.17 Анализ продуктов ферментативного гидролиза и трансгликозилирования методом ВЭЖХ.

3.18 ЯМР-спектроскопия.

3.19 Масс-спектрометрия.

3.20 ИК-спектроскопия.

3.21 Выделение и очистка 1—>3-Р-0-глюканазы вьетнамской. мидии Per па viridis.

3.22 Выделение и очистка 1 —>3-Р-0-гюканазы вьетнамского моллюска Tapes literata.

3.23 Экстракция полисахаридов.

3.24 Характеристика продуктов гидролиза ламинарана.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «1→3-β-D-Глюканазы моллюсков Японского и Южно-Китайского морей»

Ферменты или энзимы (от лат. ГегтепШт, греч. ^Зрл], еу£ицоу-дрожжи, закваска) - обычно белковые молекулы или молекулы РНК (рибосомы) или их комплексы, ускоряющие (катализирующие) химические реакции в живых системах.

На сегодняшний день согласно традиционной номенклатуре (КФ) существует 5258 КФ номеров ферментов. Для 1325633 ферментов установлена первичная структура и только для 13147 из них - третичная структура. Объектом нашего исследования являются О-гликозидгидролазы. О-гликозидгидролазы — это ферменты углеводного обмена, очень широко распространенные в природе. О-гликозидгидролазам присвоен 171 КФ номер, установлено 36545 первичных структур и 2286 третичных. Эти ферменты являются удобной моделью для исследований, на их примере решались и решаются многие проблемы энзимологии.

1->3-(3-0-Глюкапазь: встречаются у представителей всех царств живой природы от архебактерий до эукариот. Функции, выполняемые этими ферментами, чрезвычайно разнообразны. В частности, 1—»З-Р-О-глюканазы бактерий принимают участие в деградации полисахаридов, которые используются бактериями в качестве источника энергии. У грибов эти ферменты осуществляют лизис собственного клеточного матрикса в процессе развития клеток. В растениях они участвуют в клеточной дифференциации, в системе защиты растений от патогенных грибов, в деградации 1 —>3-р-0-глюканового слоя оболочки семян при их прорастании. Важную роль 1—»З-Р-Э-глюканазы играют в пищеварении морских беспозвоночных. Предполагают участие этого фермента в процессе оплодотворения и раннего развития эмбрионов морских ежей.

Богатым источником высокоактивных 1—»З-Р-О-глюканаз являются морские организмы; в основном, беспозвоночные и микроорганизмы. Тем не менее, 1-»3-Р-0-глюканазы из морских источников - одна из самых малоизученных групп О-гликозидгидролаз. 1->3-Р-0-Глюканазы из морских источников в большинстве своем отличаются от аналогичных ферментов, синтезируемых наземными организмами, по своим кинетическим характеристикам и повышенной способностью к реакциям трансгликозилирования.

1—»З-р-О-Глюканазы представляют большой научный и прикладной интерес. Субстратами для этих ферментов являются 1—>3-(3-0-глюканы и смешанные 1—>3;1->4- и 1-^3;1-»6-Р-0-глюканы. Эти полисахариды известны как иммуномодуляторы, радиопротекторы, антигрибковые, противоопухолевые соединения. Источниками этих глюканов являются водоросли, дрожжи, грибы, бактерии, лишайники и высшие растения. Очевидно, что запасы Р-1 —»3-связанной глюкозы в природе достаточно велики и сопоставимы с запасами ее в виде целлюлозы. Практическое использование 1—>3-|3-0-глюканаз связано с перспективами ферментативной трансформации 1—>3- или смешанных 1—>3;1—>4- и 1—>3;1—»б-Р-О-глюканов из различных природных источников с целью их стандартизации и увеличения биологической активности. Следовательно, изучение этих полисахаридов, так же, как и ферментов, катализирующих их трансформацию, является перспективным и актуальным.

Цель исследования - установить структурно-функциональные связи для некоторых 1—»З-р-Э-глюканаз морских моллюсков, обитающих в различных экорегионах.

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Биоорганическая химия», Захаренко, Александр Михайлович

выводы

1. Проведен поиск О-гликозидгидролаз: 1-»3-р-0-глюканаз, фукоиданаз, гликозидаз среди морских беспозвоночных Южно-Китайского моря. Показано, что I—>3-Р-0-глюканазы присутствуют во всех исследованных видах, фукоиданазы и гликозидазы обнаружены в пищеварительных органах морских ежей, моллюсков, червей и голотурий. Кристаллические стебельки вьетнамских промысловых моллюсков Perna viridis и Tapes literata выбраны как источники для выделения и изучения новых 1->3-р-0-глюканаз.

2. Изучены каталитические свойства новой 1—»З-р-О-глюканазы из кристаллических стебельков двустворчатого моллюска Р. viridis, установлена аминокислотная последовательность. Фермент классифицирован как глюкан эндо-1—»З-Р-О-глюкозидаза (КФ 3.2.1.39) и отнесен к 16-ому структурному семейству О-гликозидгидролаз.

3. Показано, что 1—»З-Р-О-глюканаза из Р. viridis катализирует реакцию трансгликозилирования. Регистрация продуктов реакции методом масс-спектрометрии позволила использовать в качестве акцепторов глицерин, метил-p-D-глюкопиранозид, метил-р-О-ксилопиранозид и метанол. Установлено, что лучшим акцептором является глицерин.

4. Из кристаллических стебельков двустворчатого моллюска Т. literata в гомогенном виде выделена новая 1—>3-Р-0-глюканаза, изучены свойства фермента. Показано, что он обладает высокой трансгликозилирующей способностью. Фермент классифицирован как глюкан эндо-1—»З-Р-О-глюкозидаза (КФ 3.2.1.39). Анализ аминокислотной последовательности позволил отнести эндо-1—»З-Р-О-глюканазу к 16-ому структурному семейству О-гликозидгидролаз.

5. Проведен сравнительный анализ взаимосвязи структуры и каталитических свойств новых ферментов и известных эндо-1-»3-Р-0-глюканаз морского происхождения. Установлено, что термостабильность ферментов возрастает с увеличением количества дисульфидных связей.

6. Обнаружена способность О-гликозидгидролаз морского брюхоногого моллюска Японского моря Littorina sit/сапа катализировать гидролиз гликозидов изофлавоноидов. Показано, что структура агликона практически не влияет на скорость гидролиза. Наличие малоиильиого заместителя в углеводной компоненте существенно уменьшает скорость и степень гидролиза гликозидов изофлавоноидов 7. Расширена коллекция субстратов для 1—»З-Р-О-глюканаз. Из водоросли Сагйегра 1епИ1И/ега выделены новые 1—»З-р-О-глюканы, отличающиеся от известных ламинаранов более высокой молекулярной массой (от 20 до 60 кДа).

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Захаренко, Александр Михайлович, 2011 год

1. Gourley D.G., Shrive A.K., Polikarpov I., Krell T., Coggins J.R., Hawkins A.R. The two types of 3-dehydroquinase have distinct structures but catalyze the same overall reaction. //Nature Struct. Biol. 1999. V. 6. P. 521-525.

2. Coutinho P.M., Deleury E., Davies G.J., Henrissat B. An evolving hierarchical family classification for glycosyltransferases. // J. Mol. Biol. 2003. V. 328. 307-317.

3. Bartlett G.J., Borkakoti N., Thornton J.M. Catalysing new reactions during evolution: economy of residues and mechanism // J. Mol. Biol. 2003. V. 331, № 4. P. 829-860.

4. Babbitt P.C., Gerlt J.A. Understanding enzyme superfamilies. Chemistry As the fundamental determinant in the evolution of new catalytic activities // J. Biol. Chem. 1997. V. 272, № 49. P. 30591-30594.

5. Todd A.E., Orengo C.A., Thornton J.M. Evolution of function in protein superfamilies, from a structural perspective // J. Mol. Biol. 2001. V. 307, № 4. P. 1113-1143.

6. Gariev I.A., Varfolomeev S.D. Hierarchical classification of hydrolases catalytic sites // Bioinformatics. 2006. V. 22, № 20. P. 2574-2576.

7. O'Boyle N.M., Holliday G.L., Almonacid D.E., Mitchell J.B. Using reaction mechanism to measure enzyme similarity // J. Mol. Biol. 2007. V. 368, № 5. P. 14841499.

8. Henrissat B., Callebaut I., Fabrega S., Lehn P., Mornon J.P., Davies G. Conserved catalytic machinery and the prediction of a common fold for several families of glycosyl hydrolases // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1995. V. 92, № 15. P. 70907094.

9. McCarter J.D., Withers S.G. Mechanisms of enzymatic glycoside hydrolysis // Curr. Opin. Struct. Biol. 1994. V. 4, № 6. P. 885-892.

10. Koshland D. // Biol. rev. 1953. V. 28. P. 416.

11. Vocadlo D.J., Withers S.G. Detailed comparative analysis of the catalytic mechanisms of beta-N-acetylglucosaminidases from families 3 and 20 of glycoside hydrolases // Biochemistry. 2005. V. 44, № 38. P. 12809-12818.

12. Mark B.L., Vocadlo D.J., Knapp S., Triggs-Raine B.L., Withers S.G., James M.N. Crystallographic evidence for substrate-assisted catalysis in a bacterial beta-hexosaminidase // J. Biol. Chem. 2001. V. 276, № 13. P. 10330-10337.

13. Watson J.N., Dookhun V., Borgford T.J., Bennet A.J. Mutagenesis of the conserved active-site tyrosine changes a retaining sialidase into an inverting sialidase // Biochemistry. 2003. V. 42, № 43. P. 12682-12690.

14. Klebl F., Tanner W. Molecular cloning of a cell wall exo-beta-l,3-glucanase from Saccharomyces cerevisiae // J. Bacteriol. 1989. V. 171, № 11. P. 6259-6264.

15. Riou C., Salmon J.M., Vallier M.J., Gunata Z., Barre P. Purification, characterization, and substrate specificity of a novel highly glucose-tolerant betaglucosidase from Aspergillus oryzae // Appl. Environ. Microbiol. 1998. V. 64, № 10. P. 3607-3614.

16. Comitini F., Di Pietro N., Zacchi L., Mannazzu I., Ciani M. Kluyveromyces phaffii killer toxin active against wine spoilage yeasts: purification and characterization // Microbiology. 2004. V. 150, Pt 8. P. 2535-2541.

17. Izgu F., Altinbay D. Isolation and characterization of the K5-type yeast killer protein and its homology with an exo-beta-l,3-glucanase // Biosci. Biotechnol. Biochem. 2004. V. 68, №3. P. 685-693.

18. Kritzman G., Chet I., Henis Y. Localization of beta-(l,3)-glucanase in the mycelium of Sclerotium rolfsii // J. Bacteriol. 1978. V. 134, № 2. P. 470-475.

19. Cortat M., Matile P., Wiemken A. Isolation of glucanase-containing vesicles from budding yeast // Arch. Mikrobiol. 1972. V. 82, № 3. P. 189-205.

20. Santos T., Sanchez M., Villanueva J.R., Nombela C. Regulation of the beta-1,3-glucanase system in Penicillium italicum: glucose repression of the various enzymes //J. Bacteriol. 1978. V. 133, № 2. P. 465-471.

21. Molina M., Cenamor R., Sanchez M., Nombela C. Purification and some properties of Candida albicans exo-l,3-beta-glucanase // J. Gen. Microbiol. 1989. V. 135, Pt 2. P. 309-314.

22. Brown R., Embil J.M. p-Glucanases // Handbook of Microbiology. Boca Ration: CRC Press. 1987. V. VIII. P. 301-315.

23. Kasahara S., Nakajima T., Miyamoto C., Wada K., Furuichi Y., Ichishima E. Characterization and mode of action of exo-l,3-beta-D-glucanase from Aspergillus saitoi II J. Bacterid. 1992. V. 108. P. 184-190.

24. Bodenmann J., Heiniger U., Hohl H.R. Extracellular enzymes of the Phytophtora infestans: endo-cellulase, ß-glucosidases, and 1,3-ß-glucanases // Canad. J. Microbiol. 1985. V. 31. P. 75-82.

25. Richelt B.Y., Fleet G.H. Isolation, properties, function, and regulation of endo-(l-3)-beta-glucanases in Schizosaccharomyces pompe II J. Bacteriol. 1981. V. 147. P. 1085-1094.

26. Fontaine T., Ilartland R.P., Beauvais A., Diaquin M., Latge J.P. Purification and characterization of an endo-l,3-beta-glucanase from Aspergillus fumigatus // Eur J Biochem. 1997. V. 243, № 1-2. P. 315-321.

27. Fontaine T., Hartland R.P., Diaquin M., Simenel C., Latge J.P. Differential patterns of activity displayed by two exo-beta-l,3-glucanases associated with the Aspergillus fumigatus ccll wall //J. Bacteriol. 1997. V. 179, № 10. P. 3154-3163.

28. Stubbs H.J., Brasch D.J., Emerson G.W., Sullivan P.A. Hydrolase and transferase activities of the beta-l,3-exoglucanase of Candida albicans // Eur. J. Biochem. 1999. V. 263, № 3. P. 889-895.

29. Castresana C., de Carvalho F., Gheysen G., Habets M., Inze D., Van Montagu M. Tissue-specific and pathogen-induced regulation of a Nicotiana plumbaginifolia beta-1,3-glucanase gene //Plant Cell. 1990. V. 2, № 12. P. 1131-1143.

30. Genta F.A., Terra W.R., Ferreira C. Action pattern, specificity, lytic activities, and physiological role of five digestive beta-glucanases isolated from Periplaneta americana // Insect Biochem. Mol.Biol. 2003. V. 33, № 11. P. 1085-1097.

31. Ebel J. Oligoglucoside elicitor-mediated activation of plant defense // Bioessays. 1998. V. 20, №7. P. 569-576.

32. Umemoto N., Kakitani M., Iwamatsu A., Yoshikawa M., Yamaoka N., Ishida I. The structure and function of a soybean beta-glucan-elicitor-binding protein // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1997. V. 94, № 3. P. 1029-1034.

33. Mithofer A., Fliegmann J., Neuhaus-Url G., Schwarz H., Ebel J. The hepta-beta-glucoside elicitor-binding proteins from legumes represent a putative receptor family // Biol. Chem. 2000. V. 381, № 8. P. 705-713.

34. Sangwan I., O'Brian M.R. Identification of a soybean protein that interacts with GAGA element dinucleotide repeat DNA // Plant Physiol. 2002. V. 129, № 4. P. 1788-1794.

35. Fliegmann J., Montel E., Djulic A., Cottaz S., Driguez H., Ebel J. Catalytic properties of the bifunctional soybean beta-glucan-binding protein, a member of family 81 glycoside hydrolases // FEBS Lett. 2005. V. 579, № 29. P. 6647-6652.

36. Chesters C.G., Bull A.T. The enzymic degradation of laminarin. 1. The distribution of laminarinase among micro-organisms // Biochem. J. 1963. V. 86. P. 28-31.

37. Piavaux A. Distribution and localization of the digestive laminarinases in animals // Biochemical Systematics and Ecology. 1977. V. 5, № 3. P. 231-239

38. Pauchet Y., Freitak D., Heidel-Fischer H.M., Heckel D.G., Vogel H. Immunity or digestion: glucanase activity in a glucan-binding protein family from Lepidoptera // J. Biol. Chem. 2009. V. 284, № 4. P. 2214-2224.

39. Kumagai Y., Ojima T. Enzymatic properties and the primary structure of a beta-1,3-glucanase from the digestive fluid of the Pacific abalone Haliotis discus hannai // Сотр. Biochem. Physiol. 2009. V. 154 В, № 1. P. 113-120.

40. Захаренко A.M., Кусайкин М.И., Ли Б.М., Хуэн Ф.В., Кхань Х.Х., Сова В.В., Звягинцева Т.Н. Каталитические свойства эндо-1,3-Ь-0-глюканазы из вьетнамской мидии Perna viridis // Биоорган, химия. 2009. Т. 35, № 1 .С. 62-69.

41. Genta F.A., Bragatto 1., Terra W.R., Ferreira C. Purification, characterization and sequencing of the major beta-l,3-glucanase from the midgut of Tenebrio molitor larvae // Insect Biochem. Mol. Biol. 2009. V. 39, 12. P. 861-874.

42. Sova V.V., Elyakova L.A. Some aspects of the specificity and action pattern of -1,3-glucan glucanohydrolase from Spisula sachalinensis // Biochim. Biophys. Acta. 1972. V. 258, № 1. P. 219-227.

43. Favorov V.V., Vozhova E.I., Denisenko V.A., Elyakova L.A. A study of the reaction catalysed by alginate lyase VI from the sea mollusc, Littorina sp // Biochim. Biophys. Acta. 1979. V. 569, № 2. P. 259-266.

44. Giordano A., Andreotti G., Mollo E., Trincone A. Transglycosylation reactions performed by glycoside hydrolases from the marine anaspidean mollusc Aplysia fasciata // J. Mol. Cat. B-Enzym. 2004. V. 30, № 2. P. 51-59.

45. Kumagai Y., Inoue A., Tanaka H., Ojima T. Preparation of P-l,3-glucanase from scallop mid-gut gland drips and its use for production of novel heterooligosaccharides // Fisheries Science. V. 74, № 5. P. 1127-1136.

46. Kumagai Y., Ojima T. Isolation and characterization of two types of beta-1,3-glucanases from the common sea hare Aplysia kurodai // Сотр. Biochem. Physiol. 2010. V. 155 B, № 2. P. 138-144.

47. Звягинцева Т.Н., Елякова JI.A., Исаков B.B. Ферментативное превращение ламинаранов в 1—>3;1—>6-(3-0-глюканы, обладающие иммуностимули-рующим действием // Биоорган, химия. 1995. Т. 22, № 3. С. 218-225.

48. Звягинцева Т.Н., Елякова Л.А. Механизм действия и специфичность эндо-1—>3-P-D-глюканаз морских моллюсков // Биоорган, химия. 1994. Т. 20, № 5. С. 453474.

49. Bachman E.S., McClay D.R. Molecular cloning of the first metazoan beta-1,3 glucanase from eggs of the sea urchin Strongylocentrotus purpuratus // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. V. 93, № 13. P. 6808-6813.

50. Roux M.M., Pain A., Klimpel K.R., Dhar A.K. The lipopolysaccharide and beta-1,3-glucan binding protein gene is upregulated in white spot virus-infected shrimp (Penaeus stylirostris) // J. Virol. 2002. V. 76, № 14. P. 7140-7149.

51. Libertini E., Li Y., McQueen-Mason S.J. Phylogenetic analysis of the plant endo-beta-1,4-glucanase gene family // J. Mol. Evol. 2004. V. 58, 5. P. 506-515.

52. Lee W.J., Lee J.D., Kravchenko V.V., Ulevitch R.J., Brey P.T. Purification and molecular cloning of an inducible gram-negative bacteria-binding protein from the silkworm, Bombyx raori // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. V. 93, № 15. P. 78887893.

53. Ma C., Kanost M.R. A betal,3-glucan recognition protein from an insect, Manduca sexta, agglutinates microorganisms and activates the phenoloxidase cascade // J. Biol. Chem. 2000. V. 275, № 11. P. 7505-7514.

54. Fabrick J.A., Baker J.E., Kanost M.R. cDNA cloning, purification, properties, and function of a beta-l,3-glucan recognition protein from a pyralid moth, Plodia interpunctella // Insect Biochem. Mol. Biol. 2003. V. 33, № 6. P. 579-594.

55. Henrissat В., Bairoch A. New families in the classification of glycosyl hydrolases based on amino acid sequence similarities // Biochem. J. 1993. V. 293, Pt 3. P. 781788.

56. Широкова П.И., Елякова JI.A. Экзо-Р-1,3-глюканаза из улитки Eulota maakii // Биоорган, химия. 1977. Т. 3. С. 1656-1662.

57. Sova V.V., Elyakova L.A., Vaskovsky V.E. The distribution of laminarinases in marine invertebrates // Сотр. Biochem. Physiol. 1970. V. 32 B. P. 459-464.

58. Privalova N.M., Elyakova L.A. Purification and some properties of endo-pi,-glucanase from marine bivalve Chlamys albidus // Сотр. Biochem. Physiol. 1978. V. 60 B. P. 225-228.

59. Звягинцева Т.Н., Макарьева Т.Н., Ермакова С.П., Елякова Л.А. Получение п-нитрофенил-ламинариолигозидов реакцией трансгликозилирования, катализируемой эндо-1,3-р-0-глюканазой из морского моллюска // Биоорган, химия. 1998. Т. 24, № 3. С. 219-223.

60. Turkiewicz M., Galas E., Zielinska M. Purification and partial characterization of an endo-(l-3)-|3-D-glucanase from Euphasia superba Dana (Antarctic krill) // Polar Biol. 1985. V. 4. P. 203-211.

61. Takeuchi K. Purification and characterization of exo-beta-1,3-glucanase from a hatching supernatant of Strongylocentrotus intermedius // Canad. J. Biochem. Cell Biol. 1983. V. 61, № 1. P. 54-62.

62. Talbot C.F., Vacquier V.D. The purification and characterization of an exo-beta-1,3-glucanohydrolase from sea urchin eggs // J. Biol. Chem. 1982. V. 257, № 2. P. 742746.

63. Green J.D., Glas P.S., Cheng S.D., Lynn J.W. Fertilization envelope assembly in sea urchin eggs inseminated in chloride-deficient sea water: II. Biochemical effects // Mol. Reprod. Dev. 1990. V. 25, №2. P. 177-185.

64. Muchmore A.V., Epel D., Weaver A.M., Schimke R.T. Purification and properties of an exo-beta-D-l,3-glucanase from sea urchin eggs // Biochim. Biophys. Acta. 1969. V. 178, №3. P. 551-560.

65. Cline K., Albersheim P. Host-Pathogen Interactions: XVI. Purification and characterization of a beta-glucosyl hydrolase/transferase present in the walls of soybean cells // Plant Physiol. 1981. V. 68, № 1. P. 207-220.

66. Cline K., Albersheim P. Host-Pathogen Interactions : XVII. Hydrolysis of biologically active fungal glucans by enzymes isolated from soybean cells // Plant Physiol. 1981. V. 68, № 1. P. 221-228.

67. Lienart Y., Comtat J., Barnoud F. A wall-bound exo-l,3-D-glucanase from Acacia cultured cells // Biochem. Biophys. Acta. 1986. V. 883. P. 353-360.

68. Звягинцева Т.Н., Елякова Л.А. Кинетические особенности действия эндо-1-3-0-D-глюканаз из различных источников // Биоорган, химия. 1981. Т. 7. С. 680685.

69. Звягинцева Т.Н., Беседнова Н.Н., Елякова Л.А. Структура и иммунотропное действие 1—>3; 1—>6-Р-В-глюканов. Владивосток: Дальнаука. 2002. 160 с.

70. Eylakova L.A., Shilova T.G. Characterization of the type of action of beta-1,3-glucanases from marine invertebrates // Сотр. Biochem. Physiol. 1979. V. 64 B, № 3. P. 245-248.

71. Елякова Л.А., Звягинцева Т.Н., Привалова Н.М. Сравнительная характеристика и изучение сорбционных свойств активных центров эндо-р-1,3-глюканаз из морских беспозвоночных//Биоорган, химия. 1978. Т. 4. № 11. С. 1553-1559.

72. Duffus J.H., Levi С., Manners D.J. Yeast cell-wall glucans // Adv. Microb. Physiol. 1982. V. 23. P. 151-181.

73. Нага C., Kiho Т., Ukai S. A branched (l-3)-P-Dglucan from a sodium carbonate extract of Dictyophora indusiata Fisch. // Cardohydr. Res. 1983. V. 117. P. 201-213.

74. Johnson J., Kirkwood S., Misaki A., al. e. Structure of a new glucan // Chem. Ind. 1963. V. 9. P. 820-822.

75. Shida M., Ushioda Y., Nakajima Т., Matsuda K. Structure of the alkali-insoluble skeletal glucan of Lentinus edodes // J. Biochem. 1981. V. 90, № 4. P. 1093-1100.

76. Sietsma J.H., Wessels J.G. Chemical analysis of the hyphal wall of Schizophyllum commune // Biochim. Biophys. Acta. 1977. V. 496, № 1. P. 225-239.

77. Елинов Н.П. Некоторые микробные полисахариды и их применение // Успехи микробиологии. 1982. Т. 7. С. 158-177.

78. Dubourdieu D., Ribereau-Gayon P., Fournet В. Structure of the extracellular P-D-glucan from Botrytis cinerea // Carbohydr. Res. 1981. V. 93. P. 294-299.

79. Harada Т., Masada M., Fujimori K., Maeda J. Production of a firm resilient gel-forming polysaccharide by a mutant of Alcaligenes faecalis var. myxogenes 10C3 // Agric. Biol. Chem. 1966. V. 30. P. 196-198.

80. Iwamuro Y., Murata M., Kanamaru K., al. e. Structural analisis of an extracellular polysaccharide of Porodisculus pendulus // Agric. Biol. Chem. 1981. V. 45. P. 525526.

81. Ohno N., Suzuki I., Yadomae T. Structure and antitumor activity of a beta-l,3-ghican isolated from the culture filtrate of Sclerotinia sclerotiorum IFO 9395 // Chem. Pharm. Bull (Tokyo). 1986. V. 34, № 3. P. 1362-1365.

82. Ueno Y., Hachisuka Y., Esaki H. Structural analysis of extracellular polysaccharide of Sclerotinia libertiana // Agric. Biol. Chem. 1980. V. 44. P. 353-359.

83. Warsi S.A., Whelan W.J. Structure of pachyman, the polysaccharide component of Poria cocos Wolf// Chem. Ind. 1957. V. 48. P. 1573.

84. Kato K., Mutoh K., Egashira T., al. e. Chemical heterogeneity of (3-D-glucan in sclerotia of Grifora umbellate (fr.) // Plat Chem. 1978. V. 42. P. 1073-1074.

85. Miyazaki T., Oikawa N. Studies on fungal polysaccharides. XII. Water-soluble polysaccharide of Grifora umbellate (Fr.) Pilat. // Chem. Pharm. Bull. 1973. V. 21. P. 2545-2548.

86. Ohno N., Adachi Y., Suzuki I., Sato K., Oikawa S., Yadomae T. Characterization of the antitumor glucan obtained from liquid-cultured Grifola frondosa // Chem. Pharm. Bull. 1986. V. 34, №4. P. 1709-1715.

87. Singh P.P., Whistler R.L., Tokuzen R., Nakahara W. Scleroglucan, an antitumor polysaccharide from Sclerotium glucanicum // Carbohydr. Res. 1974. V. 37, № l.P. 245-247.

88. Wang M.C., Bartnicki-Garcia S. Mycolaminarans: storage (l-3)-beta-D-glucans from the cytoplasm of the fungus Phytophthora palmivora // Carbohydr. Res. 1974. V. 37. P. 331-338.

89. Manners D.J., Ryley J.F., Stark J.R. Studies on the metabolism of the protozoa. The molecular structure of the reserve polysaccharide from Astasia ocellata // Biochem. J. 1966. V. 101, №2. P. 323-327.

90. Painter T.J. Structural evolution of glycans in algae // Pure Appl. Chem. 1983. V. 55. P. 677-694.

91. SalkowskiE. (1984), Berlin. Vol. 27.

92. Zechmeister L., Toth G. // Biochem. Z. 1934. V. 270. P. 309.

93. Schimideberg J.E.O. // Gesellschaft deutcher Naturforschung and Lrzte, Leipzing, Tageblatt der Versammlung. 1885. V. 58. P. 427-428

94. Riggi S.J., Di Luzio N.R. Identification of a reticuloendothelial stimulating agent in zymosan // Amer. J. Physiol. 1961. V. 200. P. 297-300.

95. Reagents for immunology // Nature. 1990. V. 346. P. 591-592

96. Wang Z.M., Cheung Y.C., Leung P.IL, Wu J.Y. Ultrasonic treatment for improved solution properties of a high-molecular weight exopolysaccharide produced by a medicinal fungus // Bioresour. Technol. V. 101, № 14. P. 5517-5522.

97. Leathers T.D., Nunnally M.S., Cote G.L. Optimization of Process Conditions for Enzymatic Modification of Alternan using Dextranase from Chaetomium erraticum // Carbohydr. Polym. 2010. V. 81. P. 732-736.

98. Xu X., Wang X., Cai F., Zhang L. Renaturation of triple helical polysaccharide lentinan in water-diluted dimethylsulfoxide solution // Carbohydr. Res. V. 345, № 3. P. 419-424.

99. Sang H.M., Fotedar R. Effects of dietary beta-l,3-glucan on the growth, survival, physiological and immune response of marron, Cherax tenuimanus (smith, 1912) // Fish Shellfish Immunol. 2010. V. 28, № 5-6. P. 957-960.

100. Bromuro C., Romano M., Chiani P., Berti F., Tontini M., Proietti D., Mori E., Torosantucci A., Costantino P., Rappuoli R., Cassone A. Beta-glucan-CRM197 conjugates as candidates antifungal vaccines // Vaccine. V. 28, № 14. P. 2615-2623.

101. Chattopadhyay N., Ghosh T., Sinha S., Chattopadhyay K., Karmakar P., Ray B. Polysaccharides from Turbinaria conoides: Structural features and antioxidant capacity // Food Chemistry. 2010. V. 118. P. 823-829.

102. Mcntosh M., Stone В .A., Stanisich V.A. Curdalan and other bacterial (l-3)-beta-D-glucans // Appl. Microbiol. Biotechnol. 2005. № 68. P. 163-173.

103. Бурцева Ю.В., Веригина H.C., Сова B.B., Пивкин М.В., Звягинцева Т.Н. О-гликозилгидролазы морских мицелиальных грибов. р-1,3-Глюканазы морского гриба Trichoderma aureviride II Прикл. биохим. и микробиол. 2003. Т. 39, № 5. С. 542-548.

104. Sinnott M.L. Catalytic mechanisms of enzymic glycosyl transfer. // Chem. Rev. 1990. V. 90. P. 1171-1202.

105. Tang L., Kebarle P. Dependence of ion intensity in electrospray mass spectrometry on the concentration of the analytes in the electrosprayed solution // Anal. Chem. 1993. V. 65, № 24. P. 3654-3668.

106. Bonnin E., Vigouroux J., Thibault J.F. Kinetic-Parameters of Hydrolysis and Transglycosylation Catalyzed by an Exo-Beta-(l,4)-Galactanase // Enzyme and Microbial. Technology. 1997. V. 20, № 7. P. 516-522.

107. Elyakova L.A., Zvyagintseva T.N. A study of the laminarins of some Far-Eastern, brown seaweeds // Carbohydr. Res. 1974. V. 34, № 2. P. 241-248.

108. Сова В.В., Левина Э.В., Андриященко П.В., Федоров С.Н., Елякова Л.А. Действие полиоксистероидов из морских звезд и офиур на активность бета-1,3-глюканаз // Химия природ, соедин. 1994. Т. 5. С. 647-650.

109. Звягинцева Т.Н., Макарьева Т.Н., Стоник В.А., Елякова Л.А. Сульфатироваиные стероиды губок семейства Halichondriidae природные ингибиторы эндо-1,3-(3-0-глюканаз // Химия природ, соедин. 1986. № 1. С. 7178.

110. Бакунина И.Ю., Сова В.В., Елякова Л.А., Макарьева Т.Н., Стоник В.А., Пермяков Е.А., Емельяненко В.И. Влияние сульфатов полиоксистероидов на экзо- и эндоглюканазы // Биохимия. 1991. Т. 56, № 8. С. 1397-1405.

111. Sritunyalucksana К., Soderhall К. The proPO and clotting system in crustaceans // Aquaculture. 2000. V. 191. P. 53-69.

112. Gueguen Y., Voorhorst W.G., van der Oost J., de Vos W.M. Molecular and biochemical characterization of an endo-beta-1,3- glucanase of the hyperthermophilic archaeon Pyrococcus furiosus // J. Biol. Chem. 1997. V. 272, № 50. P. 31258-31264.

113. Matz M., Shagin D., Bogdanova E., Britanova O., Lukyanov S., Diatchenko L., Chenchik A. Amplification of cDNA ends based on template-switching effect and step-out PCR//Nucleic Acids Res. 1999. V. 27, № 6. P. 1558-1560.

114. Keitel Т., Simon O., Borriss R., Heinemann U. Molecular and active-site structure of a Bacillus 1,3-1,4-beta-glucanase // Proc. Natl. Acad Sci USA. 1993. V. 90, № 11. P. 5287-5291.

115. Juncosa M., Pons J., Dot Т., Querol E., Planas A. Identification of active site carboxylic residues in Bacillus licheniformis 1,3-1,4-beta-D-glucan 4-glucanohydrolase by site-directed mutagenesis // J. Biol. Chem. 1994. V. 269, № 20. P. 14530-14535.

116. Рабинович M.JI., Мельник M.C., Болобова A.B. Структура и механизм действия целлюлолитических ферментов // Биохимия. 2002. Т. 8. С. 1026-1050.

117. Лакизова И.Ю., Елякова Л.А., Емельяненко В.И., Пермяков Е.А., Бурштейн Э.А. Сравнительное изучение бета-1,3- глюканаз морских моллюсков по флуоресценции триптофана // Биофизика. 1988. Т. 33, № 1. С. 31-35.

118. Светашева Т.Г., Сова В.В., Шевченко Н.М., Елякова Л.А. Исследование функциональных групп, существенных для каталитической активности бета-1,3-глюканазы из Chlamys albidus, методом химической модификации // Биохимия. 1984. Т. 49, № 11. С. 1762-1768.

119. Елякова Л.А., Светашева Т.Г., Лакизова И.Ю. Значение гистидина для активности бета-1,3-глюканазы IV из Spisula sachalinensis II Биоорган, химия. 1977. Т. 3,№3.C. 415-420.

120. Елякова Л.А., Сова В.В., Светашева Т.Г., Лакизова И.Ю. О возможной роли триптофана в ферментативной активности бета-1,3-глюканазы из Spisula sachalinensis II Биоорган, химия. 1976. Т. 2, № 1. С. 90-97.

121. Сова В.В., Елякова Л. А. Влияние реагентов, взаимодействующих с карбоксильными группами, на бета-1,3-глюканазу из Spisula sachalinensis II Биоорган, химия. 1978. Т. 4, № 11. С. 1547-1552.

122. Сова В.В., Мястовская Т.Г., Светашева Т.Г., Филитова М.Б., Елякова Л.А. Сравнение энзиматических и структурных характеристик бета-1,3-глюканаз из морских моллюсков. //Химия природ, соедин. 1987. Т. 4. С. 577-582.

123. Елякова Л.А., Звягинцева Т.Н. Кинетические особенности действия 1,3-бета-глюканаз из различных источников // Биоорган, химия. 1981. Т. 7, № 5. С. 680685.

124. Delmonte P., Rader J.I. Analysis of isoflavones in foods and dietary supplements // J. AOAC Int. 2006. V. 89, № 4. P. 1138-1146.

125. Day A.J., DuPont M.S., Ridley S., Rhodes M., Rhodes M.J., Morgan M.R., Williamson G. Deglycosylation of flavonoid and isoflavonoid glycosides by human small intestine and liver beta-glucosidase activity // FEBS Lett. 1998. V. 436, № 1. P. 71-75.

126. Keung W.-M. Daidzin: A potent, selective inhibitor of human mitochondrial aldehyde dehydrogenase // Proc. Natl. Acad. Sci. 1993. V. 90, № 4. P. 1247-1251.

127. Bilan M.I., Vinogradova E.V., Shashkov A.S., Usov A.I. Structure of a highly pyruvylated galactan sulfate from the Pacific green alga Codium yezoense (Bryopsidales, Chlorophyta) // Carbohydr. Res. 2007. V. 342, № 3-4. P. 586-596.

128. Zvyagintseva T.N., Shevchenko N.M., Popivnich I.B., Isakov V.V., Scobun A.S., Sundukova E.V., Elyakova L.A. A new procedure for the separation of water -soluble polysaccharides from brown seaweeds // Carbohydr. Res. 1999. V. 322. P. 32-39.

129. Nelson T.E., Scarletti J.V., Smith F., Kirkwood S. // Can. J. Chem. 1962. V. 245. P. 1671-1678.

130. Nelson T.E. A photometric adaptation of the Somogy method for the determination of glucose // J. Biol. Chem. 1944. V. 153. P. 375-381.

131. Dubois M., Gilles K.A., Plamilton J.K., Rebers P.A., Smith F. // Anal. Chem. 1956. V. 28. P. 350-356.

132. Bradford M.M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding // Anal. Biochem. 1976. V. 72. P. 248-254.

133. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 //Nature. 1970. V. 227, № 5259. P. 680-685.

134. Colburn N.H., Wendel E.J., Abruzzo G. Dissociation of mitogenesis and late-stage promotion of tumor cell phenotype by phorbol esters: mitogen-resistant variants are sensitive to promotion // Proc. Natl. Acad Sci USA. 1981. V. 78, № 11. P. 69126916.

135. McFeeters R.F. A manual method for reducing sugar determinations with 2,2'-bicinchoninate reagent // Analytical Biochemistry. 1980. V. 103, № 2. P. 302-306.