Значение основного фактора роста фибробластов в постишемическом неоангиогенезе тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.25, кандидат медицинских наук Щава, Сергей Петрович

• Щава, Сергей Петрович
• кандидат медицинских наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Щава, Сергей Петрович

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Рост и реорганизация сосудов в онтогенезе и при реакции на повреждение.

1.1.1. Механизмы образования сосудов.

1.1.2. Этапы ангиогенеза.

1.2. Стимуляторы постишемического ангиогенеза.

1.2.1.Сосудистый эндотелиальный фактор роста.

1.2.2. Фактор роста фибробластов.

1.2.3. Тромбоцитарный фактор роста.

1.2.4. Колоние-стимулирующий фактор гранулоцитов.

1.2.5. Оксид азота.

1.3. Фактор роста фибробластов и ишемия.

Глава 2. Материал и методы исследования.

2.1. Модель неполной ишемии головного мозга.

2.2. Морфологические методы исследования.

2.2.1. Импрегнация нитратом серебра по методу Гольджи.

2.2.2. Инъекция сосудов тушью.

2.3. Морфометрические исследования.

2.4. Гистохимические методы исследования.

2.4.1. Гистохимия NADPH-диафоразы.

2.4.2. Метод выявления щелочной фосфатазы.

2.5. Трансмиссионная электронная микроскопия.

2.6. Статистическая обработка данных.

Глава 3. Результаты и обсуяедение.

3.1. Организация микроциркуляторного русла теменной коры.

3.1.1. Ангиоархитектоника новой коры.

3.1.2. Локализация NADPH-диафоразы.

3.1.3. Гистохимия щелочной фосфатазы.

3.1.4. Общая морфология.

3.2. Состояние капилляров теменной коры крысы при экспериментальной ишемии.

3.2.1.Гистохимия NADPH-диафоразы в условиях редукции кровотока.

3.2.2. Гистохимия щелочной фосфатазы капилляров коры головного мозга крысы в условиях редуцированного кровотока.

3.2.3. Морфология теменной коры при хроническом ишемическом повреждении.

3.3.1. Морфофункциональная и гистохимическая характеристика капилляров теменной коры крысы при стимулированном ангиогенезе через 48 часов от момента ишемии

3.3.1.1.Ультраструктурная характеристика микрососудистого русла.

3.3.1.2. Гистохимия NADPH-диафоразы.

3.3.1.3. Гистохимия щелочной фосфатазы.

3.3.1.4. Общая морфология.

3.3.2. Морфофункциональная и гистохимическая характеристика капилляров теменной коры крысы при стимулированном ангиогенезе через 12 суток от момента ишемии.

3.3.2.1. Гистохимия NADPH-диафоразы.

3.3.2.2. Гистохимия щелочной фосфатазы.

3.3.2.3. Общая морфология.

3.3.3. Морфофункциональная и гистохимическая характеристика капилляров теменной коры крысы при стимулированном ангиогенезе на 24-е сутки от момента ишемии.

3.3.3.1. Гистохимия NADPH-диафоразы.

3.3.3.2. Гистохимия щелочной фосфатазы.

3.3.3.3. Общая морфология.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Значение основного фактора роста фибробластов в постишемическом неоангиогенезе»

Актуальность проблемы

Ежегодно в России от цереброваскулярных нарушений страдает 450 тысяч человек. При этом более 50% случаев оканчивается летальным исходом (Мельникова, 2007). Это обстоятельство определяет актуальность клинико-морфологических и экспериментальных исследований динамики ишемического поражения головного мозга и механизмов постишемического ангиогенеза.

Центр ишемического повреждения с максимальной выраженностью нейродеструктивных процессов формируется уже на 6-8 минутах после редукции кровотока (Виничук, Черенько, 2003). Аноксия оказывает мощное деполяризующее действие на нейроны и является триггером патологических расстройств, связанных с гипоксией и окислительным стрессом. Изменения микроциркуляторного окружения нейронов дополняются на функциональном уровне дефицитом* нейровазальной регуляции и трофических сигнальных молекул (Haseloff et al., 2005). Поэтому восполнение адекватного уровня кровотока и поддержание регуляторных систем гемоциркуляции являются непременным условием реабилитации структурно-функциональных повреждений клеток при гипоксии и ишемии.

Наряду с традиционными нейропротективными средствами для уменьшения зоны инфаркта в последнее десятилетие предложено использовать факторы роста сосудов (ФРС) - эндогенных олигопептидов, выработка которых компенсаторно усиливается в тканях в ответ на ишемическое повреждение (Бузиашвили и соавт., 2000; Reuss et al., 2003; Бокерия и соавт., 2004). Дополнительное введение этих соединений в ишемизированную ткань стимулирует локальную перфузию и защищает клетки от токсического влияния окислительного стресса (Naldini, Саггаго, 2005; Liu et al., 2006). Пролонгированные эффекты ФРС связаны с компенсаторным неоангиогенезом и становлением коллатеральной сосудистой сети, что является предпосылкой для использования этих соединений в лечении патологий, сопровождающихся артериальной окклюзией и ишемизацией тканей (Lazarous et al., 2000; Carmeliet, 2000; Conway et al., 2001; Zhang et al., 2005).

Ключевую позицию в процессах постишемического ангиогенеза занимает основной фактор роста фибробластов (bFGF). В мозге bFGF локализуется в цитоплазме нейронов и эндотелиоцитов, а его ангиогенные и нейропротективные эффекты способны уменьшать зону распространения ишемического некроза (Kim et al., 2004; Guoa et al., 2006; Bebdfeldt et al., 2007). Данные биохимических и нейрофармакологических исследований указывают на наличие тесных взаимосвязей bFGF-экспрессирующих клеток с NO-ергической системой мозга (Brasen et al., 2001; Cao et al., 2003; Watanabe el al., 2004). Известно, что степень выработки bFGF может влиять на баланс цитотоксического и нейропротективного эффектов NO в ишемизированной ткани (Hampton et al., 2000). Однако критическое содержание фактора в ткани мозга, при котором цитотоксическое действие N0 меняется на противоположное, остается невыясненным. Неясно также влияние bFGF на пролиферацию компонентов сосудистой стенки на различных стадиях ишемического процесса, что затрудняет интерпретацию данных о его ангиогенном и протективном действии. Это определяет' актуальность проблемы стимулированного ангиогенеза в фокусе экспериментального ишемического повреждения и конкретном влиянии bFGF на состояние предсуществующих и новообразованных сосудов.

Цель исследования состояла в анализе морфофункциональной динамики bFGF-стимулированного ангиогенеза в очагах неполной хронической ишемии в теменной коре крыс.

Задачи исследования:

1. провести качественный и количественный анализ микроциркуляторного русла теменной коры крыс на различных стадиях ишемического повреждения;

2. исследовать морфологические изменения стенки новообразованных сосудов в области ангиогенной стимуляции и дать им количественную характеристику;

3. определить локализацию активности NADPH-диафоразы и щелочной фосфатазы в фокусах ишемии на фоне внутриартериального введения bFGF;

4. изучить влияние экзогенного bFGF на эффективность постишемического ангиогенеза.

Научная новизна и теоретическое значение работы.

Впервые проведен детальный анализ влияния bFGF на состояние стенки микрососудов коры головного мозга на различных стадиях ишемического повреждения. Установлена тесная корреляция между содержанием экзогенного bFGF в капиллярах ишемизированной коры и активностью NADPH-диафоразы. Дана морфологическая характеристика сосудистого русла при bFGF-стимулированном ангиогенезе. Проведенные исследования позволили обосновать и сформулировать научные положения о взаимодействии bFGF и NO-эргических механизмов, лежащих в основе постишемического ангиогенеза, что может иметь важное теоретическое значение для понимания патогенеза церебральной ишемии и ее фармакологической коррекции.

Практическая значимость работы.

Результаты настоящего исследования по экзогенной активации ангиогенеза с помощью bFGF могут найти широкое применение в фармакотерапии ишемического инсульта, инфаркта миокарда, диффузных нарушений кровоснабжения головного мозга, хронической ишемии нижних конечностей и других сосудистых заболеваний. Очевидным преимуществом стимуляции ангиогенеза при интраоперационном использовании является его миниинвазивность, поскольку он может применяться как совместно, так и отдельно от основного хирургического вмешательства.

Положения, выносимые на защиту:

1. Реорганизация сосудистого русла в очаге ишемии сопровождается изменением активности щелочной фосфатазы и NADPH-диафоразы эндотелиоцитов и зависит от стадии ишемии

2. Экзогенное введение основного фактора роста фибробластов стимулирует постишемический ангиогенез

3. Ангиогенные эффекты bFGF опосредованы цитопротективным действием N0 в очаге ишемии

Апробация работы

Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на VII-й и VIII-й Тихоокеанских научно-практических конференциях студентов и молодых ученых с международным участием «Актуальные проблемы экспериментальной, профилактической и клинической медицины» (г. Владивосток, 2006, 2007), V-й Международной конференции по функциональной нейроморфологии «Колосовские чтения - 2006» (г. Орел, 2006). По материалам диссертации опубликовано 4 печатных работы.

Заключение диссертации по теме «Гистология, цитология, клеточная биология», Щава, Сергей Петрович

Выводы:

1. Формирование функционирующей сосудистой сети с развитой системой коллатералей и четко дифференцированной эндотелиальной выстилкой завершается на 24-й день после ишемии.

2. Активность щелочной фосфатазы в капиллярах теменной коры крыс варьирует от низкой в первые дни после редукции кровотока, до средней на 12-й день, и высокой на 24-й день после ишемии, что отражает позитивную динамику трансэндотелиального транспорта в постишемическом периоде.

3. Активность NADPH-диафоразы в эндотелии микрососудов и астроцитах закономерно меняется от очень высокой в первые часы после ишемии до умеренной в среднесрочный период и низкой на поздних этапах постишемической перестройки.

4. Внутриартериальное введение bFGF приводит к пролиферации эндотелиоцитов и перицитов в фокусе ишемии. Эти процессы коррелируют с постепенным увеличением плотности микрососудистой сети и достигают максимума на 12-й день после ишемии.

5. Экспозиция bFGF при его внутриартериальном введении усиливает активность NADPH-диафоразы в сосудах и астроцитарном окружении на всех стадиях постишемической реорганизации сосудистого русла.

6. Индукция эндотелиальной и астроцитарной NADPH-диафоразы при стимулированном ангиогенезе указывает на взаимодействие bFGF-зависимого и NO-ергического механизмов развития сосудов в фокусе ишемии.

Заключение

Развитие и постишемическая реорганизация сосудов функционируют в результате взаимодействия различных регуляторных факторов, среди которых эндотелиозависимый и нейровазальный признаны преобладающими (Мотавкин и соавт., 1994; Carmeliet, 2000). Развитие этой концепции получило всестороннюю поддержку после открытия сигнальных молекул - факторов роста сосудов (ФРС), посредством которых состояние сосудистой стенки и ее реакция на ишемическое повреждение адаптируются к уровню локальной гемоциркуляции и метаболической потребности ткани мозга (Бокерия и соавт., 2000; Conway et al., 2001; Zhang et al., 2005). Феномены ангиогенеза, а так же вазодилятации и другой вазомоции в микроциркуляторном русле зависят от нейрохимической активности ближайшего микроокружения, что определяет неодинаковое влияние факторов роста на различные типы формирующихся сосудов.

Ишемический очаг в мозге формируется уже при 5-кратном снижении объемной скорости кровотока (Виничук, Черенько, 2003). Морфофункциональные изменения ткани в очаге ишемии протекают гетерохронно и наблюдаются на некотором удалении от участка сосудистой окклюзии. Сердцевина очага - центральная зона тотального клеточного некроза образуется на 6-й минуте после наступления ишемии головного мозга. За сердцевиной следует зона ишемической «полутени», или пенумбра, в которой сохранен метаболизм и отмечаются лишь функциональные, а не структурные изменения (Muir, Grosset, 1999). Степень снижения кровотока в этой зоне достигает 18-12 мл/мин на 100 грамм вещества мозга, что и обуславливает обратимость функциональных повреждений нейронов (Завгородняя, Малахов, 2006). Длительность существования пенумбры определяется компенсаторными возможностями сосудистого русла и степенью ишемического повреждения, и составляет в среднем 2-4 часа (Хилько, 1998).

Гистофизиология микроциркуляторного русла при ишемии исследована нами в теменной коре крыс при экспериментальной окклюзии общей сонной артерии. Ишемическое повреждение коры наблюдается в первые 48 часов от начала редукции кровотока. Очаги нейронального опустошения располагаются во II-VI слоях коры и подкорковом белом веществе. Нейроциты вследствие отека увеличены в размерах, их цитоплазма вакуолизирована, а в перинуклеарном участке наряду с интенсивно окрашенным ядром обнаруживается хроматолиз базофильного вещества цитоплазмы. Другие нейроны имеют менее выраженные изменения, часто они локализуются в группы по периферии ишемического очага. Такие клетки слабо окрашиваются по Нисслю, имеют нечеткие контуры и зачастую ассоциированы с близлежащими микрососудами и астроцитами.

Сосудистая сеть в участке ишемии имеет признаки вазоспазма, характеризуется разрыхлением базальных мембран и отеком периваскулярного нейропиля. В * фокусах ишемического повреждения отмечается выраженное усиление активности NADPH-диафоразы в нейронах (до 109,4 ЕОП), эндотелиоцитах (до 82,7 ЕОП), и астроцитарной глие (96,1 ЕОП). Активность щелочной фосфатазы сосудистой стенки значительно снижена, что свидетельствует о резком угнетении метаболических процессов в зоне ишемии. В проведенных нами морфометрических исследованиях установлено снижение суммарной длины микрососудов теменной коры ишемизированного полушария на 33% и площади их обменной поверхности на 39% в сравнении с показателями интактных животных (р<0,05).

Следует отметить, что идентичная картина постишемической перестройки обнаруживается при ишемии ткани незрелого мозга. Так, на модели гипоксической ишемии, полученной путем создания постоянной односторонней окклюзии одной общей сонной артерии у 7-дневных крысят с последующим помещением их в гипоксическую камеру, ипсилатерально наблюдается очаговое поражение коры больших полушарий по типу некроза, локализующееся преимущественно в III, V, VI слоях (Чехонин и соавт., 2002). В этом случае зона повреждения последовательно распространяется на подкорковые структуры (базальные ганглии, стриатум, гиппокамп) в течение 8-15 часов от начала ишемии. Полное формирование зоны ишемического инсульта заканчивается к концу первых суток. Авторы отмечают, что явления интерстициального отека, апоптоза и некроза нейронов, а так же скопления активированных микроглиоцитов наблюдаются в течение 5 суток с момента гипоксически-ишемического воздействия, а уменьшение объемов пораженного полушария вследствие клеточных потерь регистрируется спустя 3 месяца с момента ишемии (Чехонин и соавт., 2002).

В наших исследованиях на поздних сроках постишемической перестройки выявляется выраженное снижение численности нейронов преимущественно в III-IV слоях. Дистрофически измененные нейроны резко уменьшены в размерах, определяется тотальный хроматолиз базофильного вещества, вакуолизация цитоплазмы и кариолизис. В некоторых нейронах контрлатеральной коры выявляется сегментарная гиперхромия. Импрегнация срезов ишемизированной теменной коры выявляет слабоветвящиеся микрососуды диаметром 7-15 мкм и группы периваскулярно расположенных пирамидальных и непирамидных клеток. Активность NADPH-диафоразы в нейронах и астроцитарной глие на стороне поражения на данном этапе остается значительно повышенной. Однако в коре NADPH-d позитивные нейроны единичны, тогда как в подкорковых структурах определяются кластеры интенсивно окрашенных клеток. Фосфатазная активность сосудистого эндотелия на данном этапе увеличена в сравнении с показателями первых суток эксперимента, но остается сниженной на 30% в сравнении с контролем (р<0,05). На этом же этапе отмечается некоторая реабилитация морфометрических показателей микрососудистого русла коры пораженного полушария. Так, на 24-сутки эксперимента дефицит микрососудистой плотности составляет 17% от исходных величин, а площадь обменной поверхности капилляров на 14,5% меньше контроля.

Известно, что применение нейропротективных средств во временном интервале формирования ядерной зоны направлено на поддержание существования ишемической полутени до компенсации дефицита кровотока и раннее восстановление функций мозга (Adams et al., 2003). В последнее время наряду с общепринятыми нейромодуляторами и антигипоксантами к таким средствам относят факторы роста сосудов (VEGF, FGF, PDGF, GM-CSF), экзогенное поступление которых в ишемизированную ткань стимулирует локальную перфузию и защищает клетки от токсического влияния окислительного стресса (Conway et al., 2001; Brasen et al., 2001; Zhang et al., 2005). Пролонгированные эффекты ФРС связаны с компенсаторным ангиогенезом и становлением коллатеральной сосудистой сети в зоне ишемии.

В настоящем исследовании мы использовали основной фактор роста фибробластов (bFGF), обладающий нейропротективным, и ангиогенным действиями (Lazarous et al., 2000; Ou-Yang, 2000; Wada et al., 2003; Kim et al., 2004). Нами установлено, что через 48 часов после интраартериального введения bFGF относительная плотность сосудов микроциркуляторного русла теменной коры ишемизированного полушария и площадь их обменной поверхности значительно выше этих показателей контрольной группы. Эти данные можно интерпретировать как следствие выраженного NO-опосредованного вазодилятирующего эффекта фактора, подтверждаемого исследованиями Hampton и соавт. (Hampton et al., 2000). Следует отметить, что на модели фокальной церебральной ишемии у мышей с блокированной eNOS Chen и соавт. отмечали снижение экспрессии BDNF, но не bFGF и VEGF. Однако исследователи так же фиксировали снижение пролиферации эндотелиальных клеток и уменьшение сосудистой плотности в ишемизированной зоне, а в отдаленной перспективе ухудшение неврологических функций подопытных животных (Chen et al., 2005).

Значительное усиление синтеза NO в нейронах и астроцитах теменной коры в нашем исследовании подтверждается данными гистохимических реакций. При исследовании на NADPH-диафоразу маркируются нейроны преимущественно пирамидной и веретеновидной формы, располагающиеся во II-IV слоях коры, а NADPH-d-позитивная астроцитарная глия занимает периваскулярное расположение. Так же нами зафиксировано четырехкратное увеличение активности NADPH-диафоразы капилляров в первые 48 часов после введения bFGF. При этом площадь обменной поверхности NADPH-d-позитивного микроциркуляторного русла в присутствии экзогенного bFGF увеличивается на 50,6% в сравнении с группой контроля (р<0,05). Гистохимия другого маркера сосудистой стенки - щелочной фосфатазы, участвующей в реакциях трансфосфорилирования, подтверждает увеличение числа активно функционирующих микрососудов на 22,8%. Этот феномен, по всей видимости, свидетельствует об усилении ангиогенных процессов в ишемизированной ткани.

На препаратах, окрашенных по Гомори, нами установлено появление на стенках капилляров почек роста - структур грибовидной формы с высокой активностью щелочной фосфатазы. Почки роста содержат мигрирующие в перпендикулярном направлении эндотелиоциты и являются начальной стадией новообразующегося капилляра (Куприянов и соавт., 1993). При электрономикроскопическом исследовании в почках роста обнаруживаются слабо дифференцированные эндотелиоциты, не имеющие четко выраженной базальной мембраны и связи с перицитами. Последние могут отсутствовать, либо располагаются на некотором удалении от эндотелиальных клеток. Поверхность эндотелиоцитов имеет сложный рельеф вследствие многочисленных выростов цитоплазмы, отходящих в периваскулярную ткань. Контакты между соседними клетками незамкнуты. Ядра эндотелиоцитов неправильной формы и занимают большую часть клетки. Отмечается гипертрофия пластинчатого комплекса, увеличение числа митохондрий, расширение цистерн гладкой и гранулярной цитоплазматической сети.

Введение bFGF очевидно оказывает протективное действие на нейроны и стенки сосудов в зоне ишемического повреждения. Так, в присутствии bFGF в теменной коре наблюдается существенное снижение количества некротических клеток на 12-е сутки постишемической перестройки. При окраске срезов по методу Ниссля, наряду с гиперхромными несморщенными нейронами, располагающимися преимущественно в III-IV слоях, наблюдается нормохромная реакция клеток. Постишемическая редукция нейронов менее выражена и носит диффузный характер. Результаты наших исследований подтверждаются данными Kawamata и соавт. (Kawamata et al., 1997), отмечающими улучшение функции сенсомоторной коры у крыс с окклюзией одной средней мозговой артерией после интрацистернального введения bFGF. Сообщается о протекторной роли bFGF на нейроны зоны ишемической полутени путем стимуляции аксонального спраутинга и поддержания синаптической пластичности нейронов. Аналогичные результаты были получены Watanabe и соавт. на материале мозга крыс с фокальной церебральной ишемией после интрацистернального введения аденовирусного вектора, кодирующего синтез bFGF (Watanabe et al., 2004). Кроме того, недавние исследования показывают, что bFGF, помимо ангиогенной и церебропротективной функции, стабилизирует целостность структур гематоэнцефалического барьера, проницаемость которых неизменно страдает при ишемии мозга (Bendfeldt et al., 2007).

В наших исследованиях через 12 суток от момента окклюзии артерии на фоне введения bFGF наблюдается снижение активности NADPH-диафоразы в нейронах и астроцитарной глии. В этом случае диформазан маркирует незначительную популяцию нейронов с низкой и средней степенью активности энзима. Наряду с этим отмечается значительный прирост суммарной длины и площади обменной поверхности NADPH-d-позитивных капилляров. Следует отметить, что хронологически данный временной интервал совпадает с процессами анастомозирования в зоне неоангиогенеза (Куприянов и соавт., 1993). В нашем исследовании анастомозирование новообразованных капилляров выявляется реакцией на щелочную фосфатазу, увеличение оптической плотности которой в сосудистом русле отражает тенденцию к повышению метаболической активности нервной ткани. Дефицит плотности ЩФ-позитивных микрососудов и площади их обменной поверхности становятся на данном этапе менее выраженными -показатели выше в сравнении с группой контроля на 13,2% и 17,5% соответственно (р<0,05).

Электронномикроскопическое исследование новообразованной сосудистой сети выявляет извитые капилляры с широким просветом, эндотелиоциты в которых имеют признаки дефинитивных клеток материнского сосуда и окружены местами прерывистой базальной мембраной. Межэндотелиальные контакты преимущественно замкнуты, отмечается образование перицито-эндотелиальных контактов, что, по-видимому, отражает замедление вследствие контактного торможения процессов направленной миграции эндотелиоцитов (Carmeliet, 2000).

Стабилизация новообразованной сосудистой сети обнаруживается нами на 24-е сутки стимулированного ангиогенеза. При электрономикроскопическом исследовании выявляются капилляры, содержащие дифференцированные эндотелиальные клетки уплощенной формы с вытянутым ядром, образующие плотные межклеточные контакты и окруженные непрерывной базальной мембраной, к которой вплотную прилежат перициты. Поверхность клеток ровная, не дает выростов и трансэндотелиальных каналов, в цитоплазме много микровезикул. Просвет капилляров занимает большую часть от сосудистого профиля.

Гистохимические исследования ишемизированной коры выявляют признаки более полной реабилитации нервной ткани в сравнении с группой чистой ишемии. Так, фосфатазная активность сосудистой стенки достигает на данном этапе максимума и превышает на 22% показатели в группе контроля. Активность NADPH-диафоразы микрососудов и нейронов на 29,3% ниже, чем в контрольной группе (р<0,05). Диафоразная активность снижается синхронно и в астроцитах.

Морфометрия регистрирует преобладание в правой теменной коре нормохромно окрашенных нейронов. Дистрофически измененные клетки содержатся во всех слоях и располагаются диффузно. Положительную динамику реабилитационных процессов также характеризует значительный прирост относительной плотности микрососудов на стороне окклюзии и площади их обменной поверхности (на 12,4% и 10,7% соответственно) (р<0,05).

Проведенные нами исследования показывают, что в среднесрочной и долгосрочной перспективе в зоне bFGF-стимулированного неоангиогенеза отмечается увеличение активно функционирующих микрососудов. Пролонгированное участие в этих процессах bFGF подтверждается исследованием Guoa и соавт. (Guoa et al., 2006), которые изучали содержание эндогенного сывороточного bFGF у пациентов, перенесших инфаркт головного мозга. Было установлено, что синтез bFGF, увеличиваясь с третьих суток от момента ишемии, остается значительно повышенным на 14 день от начала ишемии. Авторы указывают на отчетливую количественную корреляцию между обширностью зоны инфаркта и содержанием фактора роста в сыворотке.

Так же в исследовании отмечается, что пик экспрессии bFGF приходится на реабилитацию неврологического дефицита у пациентов.

Факторы роста сосудов взаимодействуют друг с другом в очаге ишемии, и последовательность этих взаимодействий коррелирует с различными этапами становления новой микрососудистой сети. Это положение подкрепляется рядом экспериментальных работ. Например, активированные макрофаги в очаге ишемии способны синтезировать целый спектр ростковых факторов, включающий в себя VEGF, bFGF, PDGF и ряд других (Naldini, Саггаго, 2005). В опыте in vivo Tomanek и соавт. исследовали взаимодействие bFGF и VEGF. Было установлено, что при применении нейтрализующих антител к bFGF на ранней стадии постнатального периода плотность микрососудов в миокарде крыс снижалась на 80% в сравнении с контролем (Tomanek et al., 2001). На модели инфаркта миокарда у собаки Liu и соавт. (Liu et al., 2006) установили, что плотность микрососудов была выше в миокарде с сочетанным применением bFGF и нейротрофинов.

Таким образом, результаты настоящего исследования позволяют рассматривать bFGF как ключевой ангиогенный фактор, влияющий на развитие сосудов в участках ишемического повреждения головного мозга. Основные события ангиогенеза в фокусе ишемии при участии NO, bFGF и других ростковых факторов суммированы на Рис. 55. Фактор роста фибробластов экспрессируется на всех этапах постишемического ангиогенеза, сохраняет целостность гематоэнцефалического барьера, оказывает протективное действие на ближайшее микроокружение. Ангиогенное действие фактора стимулирует процессы пролиферации и направляет миграцию активированных эндотелиальных клеток. Как неотъемлемая часть сложной системы постишемической реорганизации сосудов, bFGF функционирует в едином морфофункциональном компартменте с другими ростковыми факторами, оказывающими друг на друга синергичное влияние (Bebdfeldt et al., 2007). Этот вывод согласуется с результатами настоящей работы, согласно которым экзогенное введение bFGF усиливает активность NADPH-d в фокусе ишемии. По всей видимости, этот феномен связан с индукцией дополнительных порций энзима и соответствующим увеличением синтеза NO в участках ишемического повреждения. Однако, гиперпродукция N0 может оказывать цитотоксический эффект за счет накопления недоокисленных продуктов, и в частности пероксинитритов (Гусев, Скворцова, 2001). Можно полагать, что суммарное действие ангиогенного и протективного эффектов bFGF определяется степенью активности NOS с одной стороны и уровнем локальной наработки фактора с другой. грация ПЦ

Мобилизация предшественников ЭК

Вы работка *VEGF

Миграция н дифференциро:

ЭК ,

NO ^ Ишемия

Пр е дш е ств с н н нки bFGF п о Экспрессия VL PDGF-Ra

Т. vSA PDGF-CC

Васкулогенез ЭК VEGF PDGF-CC

Активация клеток-предшественников

PDGF-CC Ч М

Сосуд

Рис. 55. Взаимодействие факторов роста сосудов и их влияние на постишемический ангиогенез и васкулогенез.

Схема иллюстрирует сигнальные механизмы развития сосудов в очаге ишемии. Участие VEGF, PDGF-CC в миграции эндотелиоцитов и перицитов указано по данным Dimmeler (Dimmeler, 2005). Суммарные эффекты VEGF и PDGF-CC мобилизуют из красного костного мозга клетки-предшественники эндотелиоцитов. В фокусе ишемии bFGF экспрессируется перицитами и эндотелиоцитами и выделяется в интерстициальную ткань пропорционально синтезу NO. ЭК эндотелиальная клетка, ГМ - гладкий миоцит, ПЦ - перицит, N0 - оксид азота, bFGF - basic Fibroblast Growth Factor, VEGF - Vascular Endothelial Growth Factor, PDGF-CC - Platelet-Derived Growth Factor CC, PDGF-Rot -ct-рецепторы к PDGF-CC.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Щава, Сергей Петрович, 2008 год

1. Белецкий, В. К. Методика микроскопического исследования нервной системы / В. К. Белецкий. М.: Медгиз, 1939. - 214 с.

2. Биленко, М. В. Ишемические и реперфузионные повреждения органов / М. В. Биленко. М.: Медицина, 1989. - 359 с.

3. Блинков, С. М. Определение плотности капиллярной сети в органах и тканях человека и животных независимо от толщины микротомного среза / С. М. Блинков, Г. Д. Моисеев // Докл. АН СССР. 1961. - Т 140, № 2. - С. 465-468.

4. Бокерия, Л. А. Первый опыт клинического применения терапевтического ангиогенеза с использованием гена VEGF165 человека / Л. А. Бокерия, Е. 3. Голухова, М. В. Еремеева и др. // Бюллетень НЦССХ им. А. В. Бакулева РАМН. 2004. - Т 5, № 4. - С. 134-141.

5. Бокерия, Л. А. Современное состояние и перспективы использования ангиогенеза в лечении ишемической болезни сердца / Л. А. Бокерия, М.

6. B. Еремеева // Грудная и сердечно-сосудистая хирургия. 2000. - № 2.1. C. 57-61.

7. Бузиашвили, Ю.И. Ангиогенез как антиишемический механизм / Ю. И. Бузиашвили, Е. Picano, С. Г. Амбатьелло, С. Т. Мацкеплишвили // Кардиология. 2000. - № 12. - С. 82-85.

8. Виничук, С. М. Ишемический инсульт: эволюция взглядов на стратегию лечения / С. М. Виничук, Т. М. Черенько. Киев: Комполис, 2003.- 120 с.

9. Гуревич, К. Г. Оксид азота: биосинтез, механизмы действия, функции / К. Г. Гуревич, Н. Л. Шимановский // Вопросы биологической медицинской и фармацевтической химии. 2000. - № 4. - С. 16-21.

10. Гусев, Е. И. Ишемия головного мозга / Е. И. Гусев, В. И. Скворцова. -М.: Медицина, 2001. 328 с.

11. Ю.Демченко, И. Т. Кровоснабжение бодрствующего мозга / И. Т. Демченко. -М.: Медицина, 1983. 174 с.

12. Н.Дирлам, Г. Г. Морфофункциональная характеристика капилляров коры головного мозга в условиях редуцированного кровотока / Г. Г. Дирлам: Дисс. канд. мед. наук. Владивосток, 1994. - 167 с.

13. Зотова, И. В. Синтез оксида азота и развитие атеросклероза / И. В. Зотова, Д. А. Затейщиков, Б. А. Сидоренко // Кардиология. 2002. - № 4. - С. 58-64.

14. Калиниченко, С. Г. Кора мозжечка / С. Г. Калиниченко, П. А. Мотавкин. М.: Наука, 2005. - 319 стр.

15. Кипшидзе, Н. Н., Терапевтический ангиогенез у пациентов с далеко зашедшей формой коронарной болезни сердца / Н. Н. Кипшидзе, Николай Н. Кипшидзе, В. Д. Джонсон // Терапевтический архив. 1999. - № 9. - С. 33-38.

16. Куприянов, В. В. Ангиогенез. Образование, рост и развитие кровеносных сосудов / В. В. Куприянов, В. А. Миронов. М.: Наука, 1993.- 200 стр.

17. Лупа, X. Основы гистохимии / X. Луппа. М.: Мир, 1980. - 343 стр.

18. Матвеева, Н. Ю. Апоптоз и оксид азота в развитии нейронов сетчатки / Н. Ю. Матвеева. Владивосток: Медицина ДВ, 2006. - 216 стр.

19. Мельникова, Е. В. Многофакторная нейропротекция при острой и хронической недостаточности мозгового кровообращения (клинико-экспериментальное исследование) / Е. В. Мельникова: Дисс. д-ра мед. наук.- С-Пб., 2007. -210 с.

20. Мотавкин, П. А. Гистофизиология кровообращения в спинном мозге / П. А. Мотавкин, Ю. И. Пиголкин, Ю. В. Каминский. М.: Наука, 1994.- 240 стр.

21. Мотавкин, П. А. Капилляры головного мозга / П. А. Мотавкин, А. В. Ломакин, В. М. Черток. Владивосток: Институт биологии моря ДВНЦ АН СССР, 1983,- 140 стр.

22. Мчедлишвили, Г. И. Микроциркуляция крови / Г. И. Мчедлишвили. -Л: Наука, 1989. 179 с.

23. Мчедлишвили, Г. И. Функция сосудистых механизмов головного мозга. Их роль в регулировании и в патологии мозгового кровообращения / Г. И. Мчедлишвили. Л: Наука, 1968. - 203 с.

24. Ремизова, М. И. Роль оксида азота в норме и при патологии / М. И. Ремизова // Вестник службы крови России. 2000. - № 2. - С. 53-57.

25. Самойлов, М. О. Реакция нейронов на гипоксию / М. О. Самойлов. Л.: Наука, 1985. - 188 с.

26. Тищенко О. В. Образование оксида азота в гипертрофированном сердце / О. В. Тищенко: Автореф. на соиск. степ. канд. мед. наук. -Владивосток, 2002. 29 стр.

27. Хилько, В. А. Диагностика и лечение хронической цереброваскулярной недостаточности при атеросклерозе сонной артерии / В. А. Хилько // Вестник РАМН. 1998. - № 1. - С. 30-34.

28. ЗО.Шахламов, В. А. Капилляры (Электронномикроскопическое исследование) / В.* А. Шахламов. М.: Медицина, 1971. - 200 с.

29. Шерстюк, Б. В. Гистохимическая характеристика капиллярного русла спинного мозга / Б. В. Шерстюк: Дисс. канд. мед. наук. Владивосток, 1989. - 254 с.

30. Adams, Н. P. Jr. Guidelines for the early management of patients with ischemic stroke: A scientific statement from Stroke Council American Association / H. P. Adams Jr., R. J. Adams, T. Brott // Stroke. 2003. -Vol. 34, N 4. - P. 1056-1083.

31. Adhesion molecules on murine brain microvascular endothelial cells: Expression and regulation of ICAM-1 and Lgp 55 / Z. Fabry, M. M. Waldschmidt, D. Hendrickson el al. // J Neuroimmunol. 1992. - Vol. 36, N 1. - P. 1-11.

32. An immunochemical study of basic fibroblast growth factor in developing chicken / Y. Funakosi, S. Matsuda, K. Uryu el al. // Anat Embryol. 1993. -Vol. 187. - P. 415-423.

33. Angiogenesis, VEGF and PDGF-BB Expression, Iron Deposition, and Oxidation-Specific Epitopes in Stented Human Coronary Arteries / J. Brasen, A. Kivela, K. Roser et al. // Arterioscler Thromb Vase Biol. 2001. - Vol. 21. - P. 1720-1726.

34. Asahara, T. Local delivery of vascular endothelial growth factor accelerates reendothelialization and attenuates intimal hyperplasia in balloon-injured rat carotid artery / T. Asahara // Circulation. 1995. - Vol. 91. - P. 2793-2801.

35. Application of bFGF and BDNF to Improve Angiogenesis and Cardiac Function / Y. Liu, L. Sun, Y. Huan, H. Zhao, J. Deng // Journal of Surgical Research. 2006. - Vol. 136. - P. 85-91.

36. Babaei, S. Role of nitric oxide in the angiogenic response in vitro to basic fibroblast growth factor / S. Babaei // Circ Res. 1998. - Vol.82. - P. 10071015.

37. Basic fibroblast growth factor alleviates brain injury following global ischemia reperfusion in rabbits / M. Zhang, Y. Ma, J. Gan et al. // J Zhejiang Univ SCI. 2005. - Vol. 6. - P. 637-643.

38. Basic fibroblast growth factor expression in human bone marrow and peripheral blood cells / G. Brunner, N. Nguen, J. Gabrilove et al. // Blood. -1992. Vol. 81. - P. 631-639.

39. Basic Fibroblast Growth Factor Increases Collateral blood Flow in Rats With Femoral Arterial Ligation / H. T. Yang, M. R. Deschenes, R. W. Ogilvie, R. L. Terjung // Circ Res. 1996. - Vol. 79. - P. 62-69.

40. Basic Fibroblast Growth Factor in Patients With Intermittent Claudication: Results of a Phase I Trial / D. Lazarous, E. F. Unger, S. Epstein et al. // J Am Coll Cardiol. 2000. - Vol. 36. - P. 1239-1244.

41. Basic fibroblast growth factor is cardioprotective in ischcmia-reperfusion injury / R. Padua, R. Sethi, N. Dhalla, E. Kardami // Mol Cell Biochem. -1995. Vol. 143. - P. 129-135.

42. Basic fibroblast growth factor promotes the proliferation of human megakaryocyte progenitor cells / R. Bruno, R. Cooper, E. Wilson et al. // Blood. 1993. - Vol. 82. - P. 430-435.

43. Basic fibroblast growth factor protects endothelial cells against radiation-induced programmed cell death in vitro and in vivo / Z. Fuks, R. S. Persaud, A. Alfieri et al. // Cancer Res. 1994. - Vol. 54. - P. 2582-2590.

44. Basic FGF reduces stunning via a N0S2-dependent pathway in coronary-perfused mouse hearts / T. Hampton, I. Amende, J. Fong et al. // Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2000. - Vol. 279. - P.H260-H268.

45. Baumgartner, I. Somatic Gene Therapy in the Cardiovascular System / I. Baumgartner, J. M. Isner // Annu Rev Physiol. 2001. - Vol. 63. - P. 427450.

46. Benjamin, L. E. A plasticity window for blood vessel remodelling is defined by pericyte coverage of the preformed endothelial network and is regulated by PDGF-B and VEGF / L. E. Benjamin // Development. 1998. - Vol. 125.- P. 1591-1598.

47. Betsholtz C. Insight into the physiological functions of PDGF through genetic studies in mice / C. Betsholtz // Cytokine Growth Factor Rev. -2004. Vol. 15. - P. 215-228.

48. Cao, R. Angiogenesis stimulated by PDGF-CC, a novel member in the PDGF family, involves activation of PDGFR-alphaalpha and -alphabeta receptors / R. Cao // FASEB J. 2002. - Vol. 16. - P. 1575-1583.

49. Cao, R. Angiogenic synergism, vascular stability and improvement of hind-limb ischemia by a combination of PDGF-BB and FGF-2 / R. Cao // Nat Med. 2003. - Vol. 9. - P. 604-613.

50. Carmeliet, P. Mcchanisms of angiogenesis and arteriogenesis / P. Carmeliet // Nature Medicine. 2000. - Vol. 6, N 3. - P. 318-324.

51. Cassells, W. Growth Factor Therapies for Vascular Injury and Ischemia / W. Cassells // Circulation. 1995. - Vol. 91. - P. 2699-2702.

52. Casscells, W. Isolation, characterization, and localization of heparin-binding growth factors in the heart / W. Casscells // J Clin Invest. 1990. - Vol. 85. -P. 433-441.

53. Clinical significance of increased plasma concentration of macrophage colony-stimulating factor in patients with angina pectoris / T. Saitoh, H. Kishida, Y. Tsukuda et al. // J Am Coll Cardiol. 2000. - Vol. 35. - P. 655665.

54. Clinical trials in coronary angiogenesis: issues, problems, consensus. An expert panel summary / M. Simons, R. Bonow, N. Chronos et al. // Circulation. 2000. - Vol. 102. - P. 73-86.

55. Constitutive Expression of phVEGFi65 After Intramuscular Gene Transfer Promotes Collateral Vessel Development in Patients With Critical Limb Ischemia / I. Baumgartner, R. Pieczek, O. Manor et al. // Circulation. 1998. - Vol. 97. - P. 1114-1123.

56. Conway, E. M. Molecular mechanisms of vessel growth / E. M. Conway, D. Collen, P. Carmeliet // Cardiovascular Research. 2001. - Vol. 49. - P. 507521.

57. Coronary vascularization during development in the rat and its relationship to basic fibroblast growth factor / R. Tomanek, L. Haung, A. Suvarna et al. // Cardiovasc Res. 1996. - Vol. 31 - P. E116-E126.

58. Cuevas, P. Therapeutic prospects for fibroblast growth factor treatment of brain ischemia / P. Cuevas // Neurol Res. 1997. - Vol. 19. - P. 355-356.

59. Deuel, T. F. Human platelet-derived growth factor: purification and resolution into two active protein fractions / T. F. Deuel, J. S. Huang, R. T. Proffitt // J. Biol Chem. 1981. - Vol. 256. - P. 8896-8899.

60. Differential Role of bFGF and VEGF for Vasculogenesis / S. Kazemi, D. Wenzel, E. Kolossov et al. // Cell Phyziol Biochem. 2002.- Vol. 12. - P. 55-62.

61. Dimmeler, S. Platelet-Derived Growth Factor CC A Clinically Useful Angiogenic Factor at Last? / S. Dimmeler // N Engl J Med. - 2005. - Vol. 352, N17.-P. 1815-1816.

62. Dose-dcpendcnt response of FGF-2 for lymphangiogenesis / L. K. Chang, G. Garcia-Cardena, F. Farnebo, M. Fannon // Proc Natl Acad Sci USA. 2004. - Vol. 101, N 32. - P. 11658-11663.

63. Dulak, J. Nitric Oxide Induces the Synthesis of Vascular Endothelial Growth Factor by Rat Vascular Smooth Muscle Cells / J. Dulak, A. Jozkowicz, I. Guevara // Arterioscler Thromb Vase Biol. 2000. - Vol. 20. - P. 659-666.

64. Dzau, V. J. Therapeutic Potential of Nitric Oxide Synthase Gene Manipulation / V. J. Dzau, H. E. von der Leycn // Circulation. 2001. - Vol. 103. - P. 2760-2765.

65. Effect of basic fibroblast growth factor treatment on brain progenitor cells after permanent focal ischemia in rats / K. Wada, H. Sugimori, P. D. Bhide, M. A. Moskowitz // Stroke. 2003. - Vol. 34. - P. 2722—2728.

66. Endogenous NO and Myocardial Adaptation to Ischemia / G. Heusch, H. Post, M. C. Michel et al. // Circ Res. 2000. - Vol. 87. - P. 146-152.

67. Endothelial cells modulate the proliferation of mural cell precursors via platelet-derived growth factor-BB and heterotypic cell contact / К. K. Hirschi, S. A. Rohovsky, L. H. Beck et al. // Circ Res. 1999. - Vol. 84. - P. 298-305.

68. Evaluation of the Effects of Intramyocardial Injection of DNA Expressing VEGF in a Myocardial Infarction Model in the Rat / E. Schvarz, M. Speakman, M. Patterson et al. // J Am Coll Cardiol. 2000. - Vol. 35. - P. 1323-1330.

69. Expression of basic fibroblast growth factor in normal human tissues / C. Cordon-Cardo, I. Vlodavsky, Z. Fuks et al. // Lab Invest. 1990. - Vol. 63. -P. 832-840.

70. Failure of blood island formation and vasculogenesis in Flk-l-deficient mice / F. Shalaby, J. Rossant, T. Yamaguchi, X. Wu // Nature. 1995. - Vol. 376. - P. 62-66.

71. Fernandes, B. Transgenic myocardial overexpression of FGF-1 increases coronary artery density and branching / B. Fernandes // Circ Res. 2000. -Vol. 87 - P. 207-213.

72. Ferrara, N. The biology of vascular endothelial growth factor / N. Ferrara // Endocr Rev. 1997. - Vol. 18. - P. 4-25.

73. FGF-2 regulates neurogenesis and degeneration in the dentate gyrus after traumatic brain injury in mice / S. Yoshimura, T. Teramoto, M. Whalen et al. //J Clin Invest. 2003. - Vol. 112. - P. 1202-1210.

74. Folkman, J. Anti-angiogenesis: new concept for therapy of solid tumors / J. Folkman //Ann. Surg. 1972. - Vol. 175. - P. 409-416.

75. Folkman, J. Important Advances in Oncology / J. Folkman, De Vita. -Philadelphia, 1985.-117 p.

76. Fong, G. H. Role of the Flt-1 receptor tyrosine kinase in regulating the assembly of vascular endothelium / G. H. Fong, J. Rossant, M. Gertsenstein // Nature. 1995. - Vol. 376. - P. 66-70.

77. Furuhashi, M. Platelet-derived growth factor production by B16 melanoma cells leads to increased pericyte abundance in tumors and an associated increase in tumor growth rate / M. Furuhashi // Cancer Res. 2004. - Vol. 64. - P. 2725-2733.

78. Gage, F. FGF-2 is sufficient to isolate progenitors found in the adult mammalian spinal cord / F. Gage // Exp Neurol. 1997. - Vol. 148 - P. 577586.

79. Gallacher, В. NO signalling and VEFG expression by human vascular smooth muscle / B. Gallacher, C. J. Callahan, B. Williams // J Hypertens. -1998. Vol. 16. - P. 5-7.

80. Gene Therapy for Myocardial Angiogenesis / D. W. Losordo, P. Vale, J. Symes et al. // Circulation. 1998. - Vol. 98. - P. 2800-2804.

81. Gene Therapy With Vascular Endothelial Growth Factor for Inoperable Coronary Artery Disease / J. Symes, D. Losordo, P. Vale et al. // Ann Thorac Surg. 1999. - Vol. 68. - P. 830-837.

82. Genetic models to study adult neurogenesis / R. Filipkovski, A. Kiryk, A. Kowalczyk, L. Kaczmarek // Acta Biochimica Polonica. 2005. - Vol. 52, N 2. - P. 359-372.

83. Giordano, F. J. Angiogenesis: mechanisms, modulation, and targeted imaging / F. J. Giordano // J Nucl Cardiol. 1999. - Vol. 6. - P. 664-671.

84. Goldescher, S. The localization of phosphatase activities at the level of ultrastucture / S. Goldescher, E. Fasner, A. Novicoff // J Histohem and Citochem. -1964. Vol. 12. - P. 72 - 75.

85. Gomory, G. Microscopic histohemistry. Principles and Practice / G. Gomory. The University of Chicago Press, Chicago, 1950. - 200 p.

86. Greve, J. M. Evaluation of Ischemia-Driven Angiogenesis in a Rat Model of Peripheral Arterial Insufficiency / J. M. Greve // Proc Intl Sot Mag Reson Med. 2000. - Vol. 8. - P. 235-239.

87. Growth factors, receptor kinase and protein tyrosine phosphatase in normal and malignant melanocytes / R. Halaban, B. Fan, J. Ahn et al. // J Immunopathol. 1992. - Vol. 12. - P. 154-161.

88. Guo, P. Platelet-derived growth factor-B enhances glioma angiogenesis by stimulating vascular endothelial growth factor expression in tumor endothelia and by promoting pericyte recruitment / P. Guo // Am J Pathol.2003. Vol. 162. - P. 1083-1093.

89. Hao, X. Angiogenic effects of dual gene transfer of bFGF and PDGF-BB after myocardial infarction / X. Hao // Biochem Biophys Res Commun.2004. Vol. 315. - P. 1058-1063.

90. Harlan, J. M. a-Thrombin induces release of platelet-derived growth factorlike molecule(s) by cultured human endothelial cells / J. M. Harlan // J Cell Biol. -1986. Vol. 103. - P. 1129-1133.

91. Heldin, C. Mechanism of Action and In Vivo Role of Platelet-Derived Growth Factor / C. Heldin, B. Westermark // Physiological Reviews. 1999. -Vol. 79, N4.-P. 1283-1316.

92. Hellstrom, M. Lack of pericytes leads to endothelial hyperplasia and abnormal vascular morphogenesis / M. Hellstrom // J Cell Biol. 2001. -Vol. 153. - P. 543-553.

93. Hoch, R. Roles of PDGF in animal development / R. Hoch, P. Soriano // Development. 2003. - Vol. 130. - P. 4769-4784.

94. Hope, B. Histochemical characterization of neuronal NADPH-diaphorase / B. Hope, S. Vincent // J. Histochcm. Cytochem. 1989. - Vol. 37, N5. - P. 653-661.

95. Increase of basic fibroblast growth factor immunoreactivity and its mRNA level in rat brain following transient forebrain ischemia / K. Takami, M. Iwane, Y. Kiyota et al. // Experimental Brain Research. 2002. -Vol. 90. - P. 1-10.

96. Induction of Neoangiogenesis in Ischemic Myocardium by Human Growth Factors / B. Schumacher, P. Pecher, B. U. von Specht, T. Stegmann // Circulation. 1998. - Vol. 97. - P. 645-650.

97. Ingber, D. E. Mechanical Signaling and the Cellular Response to Extracellular Matrix in Angiogenesis and Cardiovascular Physiology / D. E. Ingber // Circ. Res. 2002. - Vol. 91. - P. 877-887.

98. In search of the astrocytic factor(s) modulating blood- brain barrier functions in brain capillary endothelial cells in vitro / R. F. Haseloff, I. E. Blasig, H. C. Bauer, H. Bauer // Cell Mol Neurobiol. 2005. - Vol. 25. - P. 25-39.

99. In vivo activation of JAK2/STAT-3 pathway during angiogenesis induced by GM-CSF / D. Valdembri, G. Serini, A. Vacca et al. // FASEB J. -2002. Vol. 16. - P. 225-227.

100. Ischemia-Indused Coronary Collateral Growth Is Dependent on Vascular Endothelial Growth Factor and Nitric Oxide / T. Matsunada, D. Warltier, D. Weihrauch et al. // Circulation. 2000. - Vol.102. - P. 30983102.

101. Isolation and partial molecular characterization of pituitary fibroblast growth factor / P. Bohlen, A. Baird, F. Esch et al. // Proc Natl Acad Sci USA. 1984. - Vol. 81. - P. 5364-5368.

102. Jaye, M. Fibroblast growth factor receptor for acidic and basic fibroblast growth factors / M. Jaye, J. Schlessinger, C. Dionne // Biohim Biophys Acta. 1992. - Vol. 1135. - P. 185-199.

103. Kawasuji, M. Therapeutic Angiogenesis for Ischemic Heart Disease / M. Kawasuji // Ann Thorac Cardiovasc Surg. 2002. - Vol. 8, N 2. - P. 5961.

104. Kourembanas, S. T. Mechanisms by which oxygen regulates gene expression and cell-cell interaction in the vasculature / S. T. Kourembanas, Y. L. Morita, H. Christou // Kidney Int. 1997. - Vol. 51. - P. 438-443.

105. Ku, P. T. Regulation of basic fibroblast growth factor (bFGF) gene and protein expression following its release from sublethally injured endothelial cells / P. T. Ku, P. A. D'Amore // J Cell Biochem. 1995. - Vol. 58. - P. 328-343.

106. Lazarous, D. The Fibroblast Growth Factors and Angiogenesis: Basic Considerations / D. Lazarous // Current Interventional Cardiology Reports. -2001. Vol. 3. - P. 213-217.

107. Lin, T. N. Induction of basic fibroblast growth factor (bFGF) expression following focal cerebral ischemia / T. N. Lin // Brain Res Mol Brain Res. -1997. Vol. 49. - P. 255-265.

108. Lindahl, P. Endothelial-perivascular cell signaling in vascular development: lessons from knockout mice / P. Lindahl // Curr Opin Lipidol. 1998. - Vol. 9. - P. 407-411.

109. Lindner, V. Basic FGF stimulates endothelial regrowth and proliferation in denuded arteries / V. Lindner, R. A. Majack, M. A. Reidy // J Clin Invest. 1990. - Vol. 85. - P. 2004-2008.

110. Local Perivascular Delivery of Basic Fibroblast Growth Factor in Patients Undergoing Coronary Bypass Surgery / R. Laham, F. W. Sellke, E. Edelman et al. // Circulation. 1999. - Vol. 100. - P. 1865-1871.

111. Loo, В. M. Binding of heparin/heparan sulfate to fibroblast growth factor receptor 4 / В. M. Loo // J Biol Chem. 2001. - Vol. 276. - P. 1686816876.

112. Maniotis, A. J. Vascular channel formation by human melanoma cells in vivo and in vitro: vasculogenic mimicry / A. J. Maniotis // Am J Patol. -1999. Vol. 155. - P. 739-752.

113. Marc, R. Therapeutic Angiogenesis, Transmyocardial Laser Revascularization, and Cell Therapy / R. Marc, глава в кн. L. E. Cohn, L. H. Edmunds Cardiac Surgery In The Adult, 2003.

114. Modulation of megakaryocytopoiesis by human basic fibroblast growth factor / H. Avraham, N. Banu, D. Scadden et al. // Blood. 1994. -Vol. 83.- P. 2126-2132.

115. Moons, L. Targeted deficiency or cytosolic truncation of the VE-cadherin gene in mice impairs VEGF-mediated endothelial survival and angiogenesis / L. Moons // Cell. 1999. - Vol. 98. - P. 147-157.

116. Morioka, I. PDGF-a Receptor Expression Following Hypoxic-Ischemic Injury in the Neonatal Rat Brain / I. Morioka, S. Tsuneishi, S. Takada // Kobe J Med Sci. 2004. - Vol. 50, N 1. - P. 21-30.

117. Moscatelli, D. Membrane and matrix localization of proteinases: a common theme in tumor cell invasion and angiogenesis / D. Moscatelli, B. Rifkin // Biochim Biophys Acta. 1988. - Vol. 948. - P. 67-85.

118. Muir, K. W. Neuroprotection for acute stroke: making clinical trials work / K. W. Muir, D. G. Grosset // Stroke. 1999. - Vol. 30, N 1. - P. 180182.

119. Myocardial Contrast Echocardiography Can Be Used to Assess the Microvascular Response to Vascular Endothelial Growth Factor-121 / F. Villanueva, J. Abraham, J. Lee et al. // Circulation. 2001. - Vol. 105. - P. 759-765.

120. Naldini, A. Role of Inflammatory Mediators in Angiogenesis / A. Naldini, F. Carraro // Current Drug Targets Inflammation & Allergy. -2005. - Vol. 4, N 1. - P. 3-8.

121. Neuronal defects and delayed wound healing in mice lacking fibroblast growth factor 2 / S. Ortega, M. Ittmann, S. Tsang et al. // Proc Natl Acad Sci USA. 1998. - Vol. 95. - P. 5672-5677.

122. NO Inhibition Impairs Blood Flow During Exercise in Hearts With a Collateral-Dependent Myocardial Region / J. Traverse, J. Kinn, C. Klassen et al. // J Am Coll Cardiol. 1998. - Vol. 31. - P. 67-74.

123. Olson, N. E. Proliferation of Intimal Smooth Muscle Cells / N. E. Olson // J Biol Chem. 2000. -Vol. 275. - P. 11270-11277.

124. Ou-Yang, W. Alteration of basic fibroblast growth factor expression in rat during cerebral ischemia / W. Ou-Yang // Chin Med J. 2000. - Vol. 21.-P. 296-300.

125. Palmer, T. FGF-2-responsive neuronal progenitors reside in proliferative and quiescent regions of the adult rodent brain / T. Palmer // Mol Cell Neurosci. 1995. - Vol. 6 - P. 474-486.

126. Pecher, P. Angiogenesis in ischemic human myocardium: clinical results after 3 years / P. Pecher, B. Schumacher // Ann Thorac Surg. 2000. - Vol. 69. - P. 1414-1419.

127. Pepper, M. S. Extracellular proteolysis and angiogenesis / M. S. Pepper // Thromb Haemost. 2001. - Vol. 86. - P. 346-355.

128. Posttreatment with intravenous basic fibroblast growth factor reduces histopathological damage following fluid-percussion brain injury in rats / W. D. Dietrich, 0. Alonso, R. Busto, S. P. Finklestein // J Neurotrauma. 1996. - Vol. 13. - P. 309-316.

129. Proliferation, differentiation and long-term culture of primary hippocampal neurons / J. Ray, D. Peterson, F. Gage et al. // Proc Natl Acad Sci USA. 1993. - Vol. 90. - P. 3602-3606.

130. Promotion of Collateral Growth by Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor in Patients With Coronary Artery Disease / C. Seiler, T. Pohl, P. Nicolet et al. // Circulation. 2001. - Vol. 104. - P. 2012-2017.

131. Raines, E. W. Platelet-derived growth factor. I. High yield purification and evidence for multiple forms / E. W. Raines, R. Ross // J Biol Chem. -1982. Vol.257. - P. 5154-5160.

132. Rafii, S. Therapeutic stem and progenitor cell transplantation for organ vascularization and regeneration / S. Rafii // Nat Med. 2003. - Vol. 5. - P. 702-712.

133. Reuss, B. Functions of fibroblast growth factor (FGF)-2 and FGF-5 in astroglial differentiation and blood-brain barrier permeability: evidence from mouse mutants / B. Reuss, R. Dono, K. Unsiker // J Neurosci. 2003. - Vol. 23. - P. 6404-6412.

134. Revascularization of ischemic tissues by PDGF-CC via effects on endothelial cells and their progenitors / X. Li, M. Tjwa, L. Moons, et al. // J Clin Invest. 2005. - Vol. 115. - P. 118-127.

135. Richards, L. De novo generation of neuronal cells from the adult mouse brain / L. Richards, T. Kirkpatrick, P. Bartlett // Proc Natl Acad Sci USA. 1992. - Vol. 89. - P. 8591-8595.

136. Risau, W. Differentiation of endothelium / W. Risau // FASEB J. -1995.-Vol.3.-P. 926-933.

137. Risau, W. Development and differentiation of endothelium / W. Risau // Kidney Int Supl. -1998. Vol. 67. - P. 3-6.

138. Risau, W. Vasculogenesis / W. Risau, I. Flamme // Ann Rev Cell Dev Biol. -1995. Vol. 11. - P. 73-91.

139. Ross, R. J. A plateletdependent serum factor that stimulates the proliferation of arterial smooth muscle cells in vitro / R. J. Ross, Kariya B. Glomset, L. Harker // Proc Natl Acad Sci USA. 1974. - Vol. 71. - P. 12071210.

140. Samdani, A. F. Nitric oxide synthase in models of focal ischemia / A. F. Samdani, Т. M. Dawson, V. L. Dawson // Stroke. 1997. - Vol. 28. - P. 1283-1288.

141. Sannes, P. L. Immunohistochemical localization of epidermal growth factor and acidic and basic fibroblast growth factors in postnatal developing and adult rat lungs / P. L. Sannes // Am J Respir Cell Mol Biol. 1992. -Vol. 7 - P. 230-237.

142. Sato, N. Platelet-derived growth factor indirectly stimulates angiogenesis in vitro / N. Sato // Am J Pathol. 1993. - Vol. 142. - P. 11191130.

143. Schaper, W. Molecular mechanisms of coronary collateral vessel growth / W. Schaper, W. D. Ito // Circ Res. 1996. - Vol. 79. - P. 911-919.

144. Senger, D. R. Tumor cells secrete a vascular permeability factor that promotes accumulation of ascites fluid / D. R. Senger // Science. 1983. -Vol. 219. - P. 983-985.

145. Serial measurement of serum basic fibroblast growth factor in patients with acute cerebral infarction / H. Guoa, L. Huanga, M. Chenga, X. Jinb, Y. Zhaoc, M. Yia // Neuroscience Letters. 2006. - Vol. 393. - P. 56-59.

146. Tabata, I. Biodegradable hydrogels for bone regeneration through growth factor release / I. Tabata, M. Yamamoto, I. Ikada // Pure & Appl. Chem. 1998. - Vol. 70, N 6. - P. 1277-1282.

147. Terapeutic Angiogenesis With Basic Fibroblast Growth Factor: Technique and Early Results / F. Sellke, R. Laham, E. Edelman et al. // Ann Thorac Surg. 1998.- Vol. 65. - P. 1540-1544.

148. Targeting expression of a dominant negative FGF receptor blocks branching morphogenesis and epithelial differentiation in the mouse lung / K. Peters, S. Werner, X. Liao et al. // EMBO J. 1994. - Vol. 13. - P. 32963301.

149. Therapeutic angiogenesis in cardiology using protein formulations / R. Post, R. Laham, F. Sellke, M. Simons // Cardiovascular Research. 2001. -Vol. 49. - P. 522-531.

150. Therapeutic Myocardial Angiogenesis Using Percutaneus Intrapericardial Drug Delivery / R. Laham, D. Hung, M. Simons et al. // Clin. Cardiol. -1999. Vol. 22. - P. I-6-I-9.

151. Treatment of thromboangiitis obliterans by intramuscular gene transfer of vascular endothelial growth factor: Preliminary clinical results / J. M. Isner, I. Baumgartner, G. Rauh et al. // J Vase Surg. 1998. - Vol. 28. -P. 964-975.

152. Tretter, Y. Induction of activin A is essential for the neuroprotective action of basic fibroblast growth factor in vivo / Y. Tretter // Nat Med. -2000. Vol. 6. - P. 812-815.

153. Upregulation of VEGF and FGF2 in Normal Rat Brain after Experimental Intraoperative Radiation Therapy / J. Kim, Y. Chung, C. Kim et al. // J Korean Med Sci. 2004. - Vol.19. - P. 879-886.

154. VEGF(121)-and bFGF-induced increase in collateral blood flow requires normal nitric oxide production / H. T. Yang, Z. Yan, J. A.

155. Abraham, R. L. Terjung I I Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2001. - Vol. 280. - p. 1097-1104.

156. Walicke, P. Characterization of the neuronal receptor for basic fibroblast growth factor and comparison to receptors on mesenchymal cells / P. Walicke // J Biol Chem. 1989. - Vol. 264. - P. 4120-4126.

157. Waltenberger, J. Modulation of Growth Factor Action / J. Waltenberger // Circulation. 1997. - Vol. 96. - P. 4083-4094.

158. Wanaka, A. Localization of FGF receptor mRNA in the adult rat central nervous system by in situ / A. Wanaka // Neuron. 1990. - Vol. 5. -P. 267-281.

159. Yokoyama, M. Harmonic Interplay of Angiogenic Growth Factors in the Development of Coronary Blood Vessels / M. Yokoyama, T. Hirase // Circ Res. 2001. - Vol. 88. - P. 1099-1101.

160. Zhang, X. Effects of granulocyte-macrophage colony stimulating factor on the repair of vessel intima damaged by balloon / X. Zhang, X. Ma, T. Zhao // Chin Med J. 2005. - Vol. 118, N 3. - P. 220-225.