Защитная функция p53 при трансформации фибробластов онкогеном RAS: механизмы и зависимость от происхождения клеток тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.03, кандидат биологических наук Копнин, Павел Борисович

• Копнин, Павел Борисович
• кандидат биологических наук
• 2003

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Копнин, Павел Борисович

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1 .1. Структура и физиологические функции белков семейства Ras.

1.1.1. Гены и белки Ras: структура, экспрессия, биохимическая активность, регуляция

1.1.2. Эффекторы Ras и регулируемые ими сигнальные пути.

1.1.2.1. Raf-MAPK: основной каскад пролиферативной сигнализации.

1.1.2.2. Р13К-зависимые пути: регуляция пролиферации и жизнеспособности клеток.

1.1.2.3. GEF для Ral и некоторые другие эффекторы.

1.1.2.4. Ras и ГТФ-азы семейства Rho

1.1.3. Белки Ras в регуляции клеточного цикла.

1.1 Онкогенный потенциал активации белков семейства Ras.

1.2.1. Изменения генов RAS в новообразованиях человека.

1.2.2. Неопластическая трансформация культур клеток при введении генов

1.2.2.1. Трансформация иммортализованных клеток грызунов: роль отдельных эффекторов в возникновении признаков трансформированного фенотипа

1.2.2.2. Трансформации нормальных фибробластов: необходимость кооперации с онкогенами, инактивирующими р53 и/или другие опухолевые супрессоры

1.3. Защитные функции опухолевого супрессора р53.

1.3.1. Введение: алгоритм функционирования р53.

1.3.2. Структура и биохимические активности р53.

1.3.3. Физиологические функции р53.

1.3.3.1. Активация р53 при различных внутриклеточных нарушениях и стрессах.

1.3.3.2. Гены-мишени р53 и их роль в контроле клеточного цикла и апоптоза.

1.3.4. Нарушения функции р53 в развитии новообразований человека и животных.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Защитная функция p53 при трансформации фибробластов онкогеном RAS: механизмы и зависимость от происхождения клеток»

Актуальность проблемы. Ключевую роль в развитии новообразований играют изменения определенных генов, так называемых протоонкогенов и опухолевых супрессоров. Дисфункция кодируемых ими белков приводит к нарушениям регуляции сигнальных путей, контролирующих клеточный цикл, апоптоз, генетическую стабильность, дифференцировку и морфогенетические реакции клетки. Чаще всего в опухолях человека обнаруживаются мутации или другие изменения, приводящие к инактивации опухолевого супрессора р53 (более половины всех новообразований) и активации протоонкогенов семейства RAS (около трети всех опухолей), причем, как правило, эти изменения сочетаются.

Недавно появились сообщения, что экспрессия онкогенов RAS может вызывать активацию р53 и, как следствие, необратимую остановку размножения клеток, аналогичную по ряду признаков «преждевременному репликативному старению» ("premature senescence"). С другой стороны ранее было показано, что инактивация р53 с помощью введения в клетки Т-антигена вируса SV40 или доминантно-негативных мутантов р53 делает клетки пермиссивными для трансформации онкогенами RAS. Таким образом, возникла гипотеза, согласно которой нормальное функционирование р53 предотвращает неопластическую трансформацию, вызываемую активированными генами RAS и рядом других онкогенов, а реализация трансформации возможна лишь в случае подавления функции р53 или его эффекторов [Lowe, 1998; Sherr and Weber, 2000]. Однако практически все наблюдения, касающиеся активации р53 в ответ на гиперэкспрессию онкогена RAS и возникающей в результате этого остановки клеточной пролиферации были сделаны на очень ограниченном числе модельных систем, а именно на первичных культурах мышиных эмбриональных фибробластов и легочных фибробластов человека. Поэтому было неясно, насколько универсален такой механизм противоопухолевой защиты, существуют ли особенности его функционирования в клетках разного происхождения/дифференцировки. Оставались невыясненными и механизмы активации р53 при экспрессии онкогенов RAS, а также возможные эффекты других онкобелков, в частности Мус, на остановку клеточного цикла, индуцируемую сочетанной активацией онкобелка Ras и опухолевого супрессора р53.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы являлось изучение роли опухолевого супрессора р53 в контроле размножения клеток, экспрессирующих активированный онкоген RAS.

В задачи исследования входило:

1) Используя системы регулируемой или конститутивной экспресии трансгена и культуры крысиных и человеческих фибробластов разного происхождения, изучить воздействие экспрессии онкобелка N-Ras на активность р53, функцию одного из важнейших эффекторов р53 - белка р21WAFl/CIPf и пролиферативную способность клеток;

2) Исследовать возможные механизмы функциональной активации р53 при экспрессии онкобелка Ras;

3) Определить, способен ли онкобелок с-Мус нивелировать работу защитного механизма, основанного на активации сигнального пути p53-p21WAF1/CIP1 и предотвращающего размножение клеток с активированным онкогеном RAS.

Научная новизна и практическая ценность работы. В настоящей работе выявлены и охарактеризованы особенности проявления функции опухолевого супрессора р53 в фибробластах разного происхождения, экспрессирующих онкобелок N-Ras. Обнаружено, что, в культуре иммортализованных крысиных фибробластов линии REF52 Ras-индуцированная активация р53 ведет к остановке клеточного цикла, сопровождающейся постепенным прекращением экспрессии онкобелка Ras, исчезновением признаков морфологической трансформации клеток и восстановлением их пролиферативных свойств, тогда как в /^^-трансформированных культурах человеческих легочных фибробластов повышение активности р53 ассоциировано с необратимой остановкой размножения клеток. Впервые показано, что в культурах человеческих кожных фибробластов и ранних эмбриональных фибробластов Ras-индуцируемая активация р53 сопровождается не остановкой клеточной пролиферации, а ее ускорением, при этом в этих клетках наблюдается ингибирование антипролиферативного действия белка р21WAF1/CIF>1.

При изучении механизмов активации р53 в &4£-экспрессирующих клетках обнаружено, что она не связана с повышением экспрессии мРНК р53, а обусловливается пост-трансляционными модификациями белка р53, в частности фосфорилированием аминокислотного остатка Serl5, и увеличением в результате этого времени жизни белковых молекул. Впервые исследована роль дезорганизации актинового цитоскелета в Ras-индуцируемой активации р53. При анализе культур клеток крысиных эмбриональных фибробластов линий REF52 и Rati обнаружено отсутствие корреляции между способностью р53 активироваться в ответ на экспрессию онкобелка Ras и в ответ на вызываемую цитохалазином Д дезорганизацию системы актиновых микрофиламентов. По-видимому, индуцируемые онкобелком Ras нарушения актинового цитоскелета не имеют критического значения для активации р53.

Впервые показано, что экспрессия онкобелка с-Мус не способна отменить остановку клеточной пролиферации, связанную с активацией р53 в RAS-экспрессирующих клетках линии REF52. Однако, экспрессия Мус увеличивает, тем не 8 менее, вероятность образования размножающихся ^^-трансформированных клонов за счет индукции мутаций в гене р53.

Результаты проведенной работы способствуют лучшему пониманию механизмов опухолевой прогрессии, что является важным для создания принципиально новых методов лечения злокачественных новообразований.

Заключение диссертации по теме «Молекулярная биология», Копнин, Павел Борисович

Выводы

1. Исследовано влияние экспрессии онкобелка N-Ras на пролиферативную способность фибробластов разного происхождения. Обнаружено, что в некоторых типах клеток (нормальных человеческих легочных фибробластах WI38, IMR90, IMG-1075 и крысиных фибробластах REF52) трансдукция онкогена N-RAS вызывает остановку пролиферации, тогда как другие типы фибробластов (нормальные человеческие фибробласты кожи IMG-977, IMG-1068, BJ и др., крысиные фибробласты Rati) прогрессивно размножаются при экспрессии в них онкобелка Ras.

2. Индуцируемая онкобелком Ras остановка пролиферации в исследованных культурах связана с повышением экспрессии и функциональной активности белка р53 и регулируемого им p21waf./ap. . ингибитора циклинзависимой киназы Cdk2, блокирующего переход из G1 в S фазу клеточного цикла. В клетках REF52-tRas р53 активируется после экспрессии онкогена RAS в течение 4-6 дней, в которые наблюдается стимуляция размножения клеток. Подавление функции р53 с помощью трансдукции доминантно-негативного элемента GSE22 отменяет в Ras-экспрессирующих клетках REF52 как активацию р21WAFi/CIP1, так и последующую остановку клеточного цикла в G1.

3. Увеличение содержания белка р53 в Ras-экспрессирующих клетках REF52 не связано с повышением экспрессии его гена, а обусловлено пострансляционными модификациями, в частности фосфорилированием серина в 15-м положении, и существенным увеличением времени жизни белка.

4. Активация р53 и остановка пролиферации в Ras-экспрессирующих культурах REF52 сопровождается отбором клеток, в которых прекратилась экспрессия онкобелка N-Ras. Примерно через месяц после индукции экспрессии онкогена культура REF52tRas в основном состоит из морфологически нормальных, активно пролиферирующих Ras-негативных клеток. При подавлении функции р53 в культуре Ras-экспрессирующих клеток REF52 не наблюдается ни потери экспрессии онкобелка Ras, ни реверсии к нормальному фенотипу.

5. Экспрессия онкобелка с-Мус, в отличие от инактивации р53, не делает клетки REF52 пермиссивными для неопластической трансформации, вызываемой онкогеном RAS. В большинстве клонов с трансдуцированными генами с-туе и постепенно происходит потеря экспрессии онкобелка N-Ras и реверсия к нормальному фенотипу. В то же время в 3 из 30 клонов REF52/Myc/Ras наблюдались мутации гена р53, инактивация его функции и сохранение признаков трансформации. Очевидно, экспрессия Мус увеличивает вероятность возникновения в Ras-экспрессирующих клетках REF52 мутаций гена р53, разрешающих стабильную трансформацию.

6. В крысиных фибробластах линии Rati, в отличие от крысиных фибробластов линии REF52, при экспрессии онкогена RAS не происходит активации р53 и остановки клеточного цикла. При этом в клетках Rati, также как и в клетках REF52, р53 активируется в ответ на индуцируемые этилметансульфонатом повреждения ДНК и вызываемую цитохалазином Д дезорганизацию актинового цитоскелета.

7. В Ras-экспрессирующих культурах нормальных человеческих фибробластов раннего эмбриона и кожи наблюдается функциональная активация р53 и повышение экспрессии регулируемого им р21WAF1/CIP1, которые не приводят, однако, к остановке пролиферации. Вероятно, в данных клеточных контекстах происходят посттрансляционные модификации p21WAF1/CIP1, изменяющие его внутриклеточную локализацию и активность.

122

8. Проведенные исследования показывают, что при экспрессии онкогена RAS реализация защитной функции активации р53, предотвращающей размножение трансформированных клеток, зависит от клеточного контекста. В зависимости от типа клеток она может либо не проявляться, либо вызывать необратимую остановку пролиферации, либо приводить к аттенуации экспрессии онкогена и реверсии клеток к нормальному фенотипу.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Копнин, Павел Борисович, 2003 год

1. Копнин Б.П. 2000. Мишени действия онкогенов и опухолевых супрессоров: ключ к пониманию базовых механизмов канцерогенеза. Биохимия, 65, 5-33.

2. Кукушкин А.Н., Светликова С.Б., Белов Д.Н., Слепнева Н.И., Поспелов В.А. 1996. Транскрипционные факторы С-ЕВР и АР-1 модулируют промоторную активность регуляторной области гена р53 человека. Мол. биология 30(1), 93103.

3. Прасолов B.C., Чумаков П.М. 1988. Ретровирусные векторы в генной терапии. Мол. биология, 22, 1371-1380.

4. Ровенский Ю.А., Васильев Ю.М. Нарушения распластывания и локомоции клеток в результате неопластической трансформации. В: «Канцерогенез», Научный Мир, Москва, 2000, стр. 273-277.

5. Саблина А.А. 2000. Роль супрессора р53 и онкогенов Ras-Raf-MAPK сигнальных путей в регуляции точек проверки клеточного цикла. Автореферат диссертации на соискание степени кандидата биологических наук, Москва, РОНЦРАМН.

6. Чумаков П.М. 2000. Функция генар53: выбор между жизнью и смертью. Биохимия, 65, 34-47.

7. Agoff S.N., Нои J., Lizer D.I., Wu В. 1993. Regulation of the human hsp70 promoter by p53. Science, 259, 84-87.

8. Albanese C., Johnson H., Watanabe G., Eklund N., Vu D., Arnold A. 1995. Transforming p21 ras mutants and c-Ets2 activate the cyclin D1 promoter through distinguishable regions. J. Biol. Chem., 270, 23589-23597.

9. Aktas H., Cai H., Cooper G.M. 1997. Ras links growth factor signaling to the cell cycle machinery via regulation of cyclin D1 and the Cdk inhibitor p27KIPl. Mol. Cell. Biol., 17(7):3850-7.

10. Aschcroft M„ Vousden, K.H. 1999. Regulation ofp53 stability. Oncogene, 18, 7637-7643.

11. Albrechtsen N., Dornreiter I., Grosse F., Kim E., Wiesmuller L., Deppert W. 1999. Maintenance of genomic integrity by p53: complementary roles for activated and non-activated p53. Oncogene, 18, 7706-7717.

12. Alevizopoulos K., Vlach J., Hennecke S., Amati B. 1997. Cyclin E and c-Myc promote cell proliferation in the presence of pl6INK4a and of hypophosphorylated retinoblastoma family proteins. EMBO J., 16, 5322-5333.

13. Archer Д Bar-Sagi D. 2002. Ras and Rac as activators of reactive oxygen species (ROS). Methods Mol. Biol, 189, 67-73.

14. Asher G., Lotem J., Cohen В., Sachs L., Shaul Y. 2001. Regulation of p53 stability and p53-dependent apoptosis by NADH quinone oxidoreductase 1. Proc. Natl. Acad. Sci. U S A, 98, 1188-1193.

15. Asher G., Lotem J., Kama R., Sachs L., Shaul Y. 2002. NQOl stabilizes p53 through a distinct pathway. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 99, 3099-3104.

16. Bakalkin G., Yakovleva Т., Selivanova G., Magnusson K.P., Szekely L., Kiseleva E., Klein G., Terenius L., and Wiman KG. 1994. p53 binds single-stranded DNA ends and catalyzes DNA renaturation and strand transfer. Proc.Natl. Acad. Sci., 91, 413-417.

17. Ballester R., Furth M.E., Rosen O.M. 1987. Phorbol ester- and protein kinase C-mediated phosphorylation of the cellular Kirsten ras gene product. J. Biol. Chem., 262, 26882695.

18. Banin S., Moyal L., Shieh S.-Y., Taya Y., Anderson C. W., Chessa L., Smorodinsky N. I.,. Prives C, Reiss Y, Shiloh Y., Ziv Y. 1998. Enhanced Phosphorylation of p53 by ATM in Response to DNA Damage. Science, 281, 1674-1677.

19. Barbacid M. 1987. ras genes. Annu. Rev. Biochem., 56, 779-828.

20. BartekJ., Lukas J. 2001. Pathways governing Gl/S transition and their response to DNA damage. FEBSLett., 490, 117-122.

21. Bayle J.H., Elenbaas В., Levine A.J. 1995. The carboxy-terminal domain of the p53 regulates sequence-specific DNA binding through its nonspecific nucleic acid-binding activity. Proc. Natl Acad. Sci. USA, 92, 5729-5733.

22. Bar-Sagi D., Feramisco JR. 1986. Induction of membrane ruffling and fluid-phase pinocytosis in quiescent fibroblasts by Ras proteins. Science, 233, 1061-1068.

23. Bar-Sagi D, Hall A. 2000. Ras and Rho GTPases: a family reunion. Cell, 103,227-238.

24. BenchimolS. 2001. p53-dependent pathways of apoptosis. Cell Death Differ., 8, 1049-1051.

25. Berra E., Diaz-Meco M.T., Lozano J., Frutos S., Municio M.M., Sanchez P., Sanz L., Moscat J. 1995. Evidence for a role of MEK and МАРК during signal transduction by protein kinase С zeta. EMBO J., 14, 6157-6163.

26. Bishop A.L., Hall A. 2000. Rho GTPases and their effector proteins. Biochem. J., 348, 241255.

27. Blagosklonny M.V., An W.G., Romanova L.Y., Trepel J., Fojo Т., Neckers L. 1998. p53 inhibits hypoxia-inducible factor-stimulated transcription. J. Biol. Chem., 273, 11995-11998.

28. Bos JL. 1989. Ras oncogenes and human cancer: a review. Cancer Res., 49, 4682-4689.

29. Bullock A.N., Fersht A.R. 2001. Rescuing the function of mutant p53. Nat. Rev. Cancer, 1, 68-76.

30. Campbell SL, Khosravi-Far R, Rossman KL, Clark GJ, Der CJ. 1998. Increasing complexity of Ras signaling. Oncogene, 17, 1395-1413.

31. Cantor S.B., Urano Т., Feig L.A. 1995. Identification and characterization of Ral-binding protein 1, a potential downstream target of Ral GTPases. Mol. Cell. Biol, 15, 45784584.

32. Cantrell D.A. 2001. Phosphoinositide 3-kinase signalling pathways. J. Cell Sci., 114, 14391445.

33. Caron de Fromentel C., Soussi T. 1992. The TP53 tumor suppressor gene: a model for investigating human mutagenesis. Genes Chrom. Cancer, 4, 1 15.

34. Chang H.W., Aoki M., Fruman D., Auger K.R., Bellacosa A., Tsichlis P.N., Cantley L.C., Roberts T.M., Vogt P.K. 1997. Transformation of chicken cells by the gene encoding the catalytic subunit of PI3-kinase. Science, 276, 1848-1850.

35. Cheng M., Sexl V., Sherr C.J., Roussel M.F. 1998. Assembly of cyclin D-dependent kinase and titration of p27Kipl mediated by mitogen-activated protein kinase kinase (Mekl). Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95, 1091-1096.

36. Cooper A. 1987. Effects of cytochalasin and phalloidin on actin. J. Cell Biol., 105, 14731478.

37. Cos о O.A., Chiariello M., Yu J.C., Teramoto H., Crespo P., Xu N., Miki Т., Gutkind J.S. 1995. The small GTP-binding proteins Racl and Cdc42 regulate the activity of the JNK/SAPK signaling pathway. Cell, 81, 1137-1146.

38. Cowley S., Paterson H., Kemp P., Marshall C.J. 1994. Activation of MAP kinase kinase is necessary and sufficient for PC 12 differentiation and for transformation of NIH 3T3 cells. Cell, 77, 841-852.

39. Cox, L.S., T.Hupp, C.A.Midgley, and D.P.Lane. 1995. A direct effect of activated human p53 on nuclear DNA replication. EMBOJ., 14, 2099-2105.

40. Crespo P and Leon J. 2000. Ras proteins in the control of the cell cycle and cell differentiation. Cell. Mol. Life Sci., 57, 1613-1636.

41. Crook Т., Wrede D., Vousden K.H. 1991. p53 point mutation in HPV negative human cervical carcinoma cell lines. Oncogene, 6, 873-875.

42. Dameron K.M., Volpert O.V., Tainsky M.A., Bouck N. 1994. Control of angiogenesis in fibroblasts by p53 regulation of thrombospondin-1. Science, 265, 1582-1584.

43. Datta, S. R., Brunei, A. & Greenberg, M. E. 1999. Cellular survival: a play in three Akts. Genes Dev., 13, 2905-2927.

44. Delgado M.D., Vaque J.P., Arozarena I., Lopez-Ilasaca M.A., Martinez C., Crespo P. 2000. H-, K-, and N-Ras inhibit myeloid leukemia cell proliferation by a p21WAF1-dependent mechanism. Oncogene, 19,783-790.

45. Diaz-Meco M.T., Lozano J., Municio M.M., Berra E., Frutos S., Sanz L., Moscat J. 1994. Evidence for the In vitro and In vivo interaction of Ras with protein kinase C£. J. Biol. Chem., 269, 31706-31710.

46. Diaz-Meco M.T., Municio M.M., Frutos S., Sanchez P., Lozano J., Sanz L., Moscat J. 1996. The product of par-4, a gene induced during apoptosis, interacts selectively with the atypical isoforms of protein kinase C. Cell, 86, 777-786.

47. DiehlJ.A., Cheng M., Roussel M.F., Sherr C.J. 1998. Glycogen synthase kinase 3P regulates cyclin D1 proteolysis and subcellular localization. Genes Dev, 12, 3499-3511.

48. Donehower L.A., Harvey M., Slagle B.L., McArthur M.J., Montgomery C.A. Jr., Butel J.S., Bradley A. 1992. Mice deficient for p53 are developmentally normal but susceptible to spontaneous tumours. Nature, 356, 215-221.

49. Donehower L.A., Bradley A. 1993. The tumor suppressor p53. Biochem.Biophys. Acta, 1155, 181-205.

50. D'Orazi G., Soddu S., Sacchi A. 2000. Activation of p53/p21wafl pathway is associated with senescence during v-Ha-ras transformation of immortal C2C12 myoblasts. Anticancer Res., 20, 3497-3502.

51. Drane P., Bravard A., Bouvard V., May E. 2001. Reciprocal down-regulation of p53 and SOD2 gene expression-implication in p53 mediated apoptosis. Oncogene, 20, 430439.

52. Drowolski S., Harter M., Stacey D.W. 1986. Cellular ras activity is required for passage through multiple points of the G0/G1 phase in Balb/сЗТЗ cells. Mol. Cell. Biol, 14, 5441-5449.

53. Durkin J.P., Whitfield J.F. 1986. Characterisation of G1 transit induced by mitogenic-oncogenic Ki-Ras product. Mol. Cell. Biol., 6, 1386-1392.

54. Dutta A., Ruppert J.M., Aster J.C., Winchester E. 1993. Inhibition of DNA replication factor RPA by p53. Nature, 365, 79-82.

55. El-Deiry WS. 1998. Regulation of p53 downstream genes. Semin Cancer Biol, 8, 345-357.

56. Eliyahu D., Raz A., Gruss P., Givol D., Oren M. 1984. Participation of p53 cellular tumor antigen in transformation of normal embryonic cells. Nature, 312, 646 649.

57. Eliyahu D., Michalovitz D., EliyahiS., Pinhasi-Kimhi O., Oren M. 1989. Wild-type p53 can inhibit oncogene-mediated focus formation. Proc. Natl Acad. Sci.USA, 86, 87638767.

58. Facchini M.L., Penn L.Z. 1998. The molecular role of Мус in growth and transformation: recent discoveries lead to new insights. FASEB J., 12, 633-651.

59. Fan J., Bertion J.R. 1997. K-ras modulates the cell cycle via both positive and negative regulatory pathways. Oncogene, 14, 2595-2607.

60. Fedorov Y. V., Jones N.C., Olwin B.B. 2002. Atypical protein kinase Cs are the Ras effectors that mediate repression of myogenic satellite cell differentiation. Mol. Cell. Biol., 22, 1140-1149.

61. Feig L.A., Urano Т., Cantor S. 1996. Evidence for a Ras/Ral signaling cascade. Trends Biochem. ScL, 21,438-441.

62. Felsher D.W., Bishop J.M. 1999. Transient excess of MYC activity can elicit genomic instability and tumorigenesis. Proc. Natl.Acad. Sci. USA, 96, 3940-3944.

63. Felsher D. W., Zetterberg A., Zhu J., Tlsty Т., Bishop J.M. 2000. Overexpression of MYC causes p53-dependent G2 arrest of normal fibroblasts. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 97, 10544-10548.

64. Ferbeyre G., de Stanchina E., Querido E., Baptiste N., Prives C., Lowe S. W. 2000. PML is induced by oncogenic ras and promotes premature senescence. Genes Dev., 14, 20152027.

65. Ferbeyre G., de Stanchina E., Lin A. W., Querido E., McCurrach M.E., Hannon G.J., Lowe S.W. 2002. Oncogenic ras and p53 cooperate to induce cellular senescence. Mol. Cell. Biol., 10, 3497-3508.

66. Finlay, C.A. 1993. The mdm-2 oncogene can overcome wild-type p53 suppression of transformed cell growth. Mol. Cell Biol., 13, 301-306.

67. Finlay C.A., Hinds P.W., Levine A.J. 1989. The p53 protooncogene can act as a suppressor of transformation. Cell, 57,1083-1093.

68. Franza BR Jr, Maruyama K, Garrels JI, Ruley HE. 1986. In vitro establishment is not a sufficient prerequisite for transformation by activated ras oncogenes. Cell, 44, 409418.

69. Funk W.D.,Pak D.T., Karas R.H., Wright W.E., Shay J. W. 1992. A transcriptionally active DNA-binding site from human p53 protein complexes. Mol. and Cell. Biol., 12, 2866-2871.

70. Galaktionov K., Lee A.K., Eckstein E., Draetta G., Mecklet J., Loda M., Beach D. 1995. CDC25 phosphatases as potential human oncogenes. Science, 269, 1575-1577.

71. Gartel A.L., Najmabadi F., Goufman E., Tyner A.L. 2000. A role for E2F1 in Ras activation of p21(WAFl/CIPl) transcription. Oncogene, 19, 961-964.

72. Giaccia A. J., Kastan M.B. 1998. The complexity of p53 modulation: emerging patterns from divergent signals. Genes Dev., 12, 2973-2983.

73. Gille H., Downward J. 1999. Multiple Ras effector pathways contribute to G1 cell cycle. J. Biol. Chem., 274, 22033-22040.

74. Goi Т., Shipitsin M., Lu Z., Foster D.A., Klinz S.G., Feig L.A. 2000. An EGF receptor/Ral-GTPase signaling cascade regulates c-Src activity and substrate specificity. EMBO J., 19,623-630.

75. Gomez N, Cohen P. 1991. Dissection of the protein kinase cascade by which nerve growth factor activates MAP kinases. Nature, 351, 69-72.

76. Gopalkrishnan R.V., Lam E.W., Kedinger C. 1998. The p53 tumor suppressor inhibits transcription of the TATA-less mouse DPI promoter. J. Biol. Chem., 273, 1097210978.

77. Gossen M., Bujard H. 1992. Tight control of gene expression in mammalian cells by tetracycline-responsive promotors. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89, 5547-5551.

78. Gottifredi V., Prives C. 2001. P53 and PML: new partners in tumor suppression. Trends Cell Biol, 11, 184-187.

79. Gottlieb Т., Oren M. 1998. p53 and apoptosis. Semin. Cancer Biol., 8, 350-368.

80. Groth A., Weber J.D., Willumsen B.M., Sherr C.J., Roussel M.F. 2000. Oncogenic Ras induces pl9ARF and growth arrest in mouse embryo fibroblasts lacking p21c,p! and p27Kipl without activating cyclin D-dependent kinases. J. Biol. Chem., 275, 2747327480.

81. Hahn W.C., Weinberg R.A. 2002. Modelling the molecular circuitry of cancer. Nat. Rev. Cancer, 5, 331-341.

82. Hainaut P., Soussi Т., Shomer В., Hollstein M., Greenblatt M., Hoving E., Harris C.C., Montesano R. 1997. Database of p53 gene somatic mutations in human tumors and cell lines: undated compilation and future prospects. Nucl. Acid. Res., 1, 151-157.

83. Hamilton M., Wolfman A. 1998. Ha-ras and N-ras regulate МАРК activity by distinct mechanisms in vivo. Oncogene, 11, 1417-1428.

84. Han J. W., Dionne C.A., Kedersha N.L., Goldmacher V.S. 1997. p53 status affects the rate of the onset but not the overall extent of doxorubicininduced cell death in rat-1 fibroblasts constitutively expressing c-Myc. Cancer Res., 57, 176-182.

85. HanL., WongD., Dhaka A., AfarD., White M., Xie W., Herschman H., Witte O., ColicelliJ. 1997. Protein binding and signaling properties of RIN1 suggest a unique effector function. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 94,4954-4959.

86. Harbour J.W., Dean D.C. 2000. The Rb/E2F pathway: expanding roles and emerging paradigms. Genes Dev, 14, 2393-2409.

87. Harris AL. 2002. Hypoxia—a key regulatory factor in tumour growth. Nat. Rev. Cancer, 2, 38-47

88. Hermeking H., Lengauer C., Polyak К., He T.C., Zhang L., Thiagalingam S., Kinzler K. W., Vogelstein B. 1997. 14-3-3 sigma is a p53-regulated inhibitor of G2/M progression. Mol. Cell, 1,3-11.

89. Hicks G.G., Egan S.E., Greenberg A.H., Mowat M. 1991. Mutant p53 tumor suppressor alleles release ras-induced cell cycle growth arrest. Mol. Cell. Biol., 11, 1344-1352.

90. Hirakawa Т., Ruley H.E. 1988. Rescue of cells from ras oncogene-induced growth arrest by a second complementing oncogene. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85, 1519-1523.

91. Hoffman W.H., Biade S., ZilfouJ.T., Chen J., Murphy M. 2002. Transcriptional repression of the anti-apoptotic survivin gene by wild type p53. J. Biol. Chem., 277, 3247-3257.

92. Hollstein M., Sidransky D., Vogelstein В., Harris C.C. 1991. p53 Mutations in human cancers. Science, 253, 49- 53.

93. Hollstein M., Soussi Т., Thomas G., vonBrevem M.C., Bartsch. 1997. P53 gene alterations in human tumors: perspectives for cancer control. Recent Results Cancer Res. 143, 369389.

94. Hundley J.E., Koester S.K., Troyer D.A., Hilsenbeck S.G., Subler M.A., Windle J.J. 1997. Increased tumor proliferation and genomic instability without decreased apoptosis in MMTV-ras mice deficient in p53. Mol.Cell Biol., 17, 723-731.

95. Jackson P., Bos E., Braithwaite A.W. 1993. Wild-type p53 down-regulates transcription from different virus enhancer/promoters. Oncogene, 8, 589-597.

96. Janda E., Litos G., Grunert S., Downward J., Beug H. 2002. Oncogenic Ras/Her-2 mediate hyperproliferation of polarized epithelial cells in 3D cultures and rapid tumor growth via the PI3K pathway. Oncogene, 21, 5148-5159.

97. Jenkins J.R., Rudge K, Chumakov P., Currie G.A. 1985. The cellular oncogene p53 can be activated by mutagenesis. Nature, 317, 816-818.

98. Jimenez В., Volpert О. V., Crawford S.E., Febbraio M., Silverstein R.L., Bouck N. 2000. Signals leading to apoptosis-dependent inhibition of neovascularization by thrombospondin-1. Nat. Med., 6, 41-48.

99. Johnson L, Greenbaum D, Cichowski K, Mercer K, Murphy E, Schmitt E, Branson RT, Umanoff H, Edelmann W, Kucherlapati R, Jacks T. 1997. K-ras is an essential gene in the mouse with partial functional overlap with N-ras. Genes Dev., 11, 2468-2481.

100. Joneson Т., White M.A., Wigler M.H., Bar-Sagi D. 1996. Stimulation of membrane ruffling and MAP kinase activation by distinct effectors of Ras. Science, 271, 810-812.

101. Jullien-Flores V., Dorseuil O., Romero F., Letourneur F., Saragosti S., Berger R., Tavitian A., Gacon G., Camonis J.H. 1995. Bridging Ral GTPase to Rho pathways. J. Biol. Chem., 270, 22473-22477.

102. Kamijo T, Weber JD, Zambetti G, Zindy F, Roussel MF, Sherr CJ. 1998. Functional and physical interactions of the ARF tumor suppressor with p53 and Mdm2. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95, 8292-8297.

103. Karp J.E., Kaufmann S.H., Adjei A.A., Lancet J.E., Wright J.J., End D.W. 2001. Current status of clinical trials of farnesyltransferase inhibitors. Curr. Opin. Oncol., 13, 470476.

104. Kelley G.G., Eks S.E., Ondrako J.M., Smrcka A.V. 2001. Phospholipase Ce: a novel Ras effector. EMBO J., 20, 743-754.

105. Khokhlatchev A.V., Canagarajah В., Wilsbacher J., Robinson M., Atkinson M., Goldsmith E., Cobb M.H. 1998. Phosphorylation of the MAP kinase ERK2 promotes its homodimerization and nuclear translocation. Cell, 93, 605-615.

106. Khokhlatchev A., Rabizadeh S., Xavier R., Nedwidek M., Chen Т., Zhang X., Seed В., Avruch J. 2002. Identification of a novel ras-regulated proapoptotic pathway. Curr. Biol., 12, 253-265.

107. Khosravi R„ Maya R., Gottlieb Т., Oren M., Shiloh Y, Shkedy D. 1999. Rapid ATM-dependent phosphorylation of MDM2 precedes p53 accumulation in response to DNA damage. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 96, 14973-14977.

108. Khosravi-Far R., Solski P.A., Clark G.J., Kinch M.S., Der, C.J. 1995. Activation of Racl, RhoA, and mitogen-activated protein kinases is required for Ras transformation. Mol. Cell. Biol., 15, 6443-6453.

109. Kim G.Y., Mercer S.E., Ewton D.Z., Yan Z., Jin K., Friedman E. 2002. The Stress-activated Protein Kinases p38alpha and JNK1 Stabilize p21Cipl by Phosphorylation. J. Biol. Chem., Ill, 29792-29802.

110. Kirch H.C., Flaswinkel S., RumpfH., Brockmann D., Esche H. 1999. Expression of human p53 requires synergistic activation of transcription from the p53 promoter by AP-1, NF-kappaB and Myc/Max. Oncogene, 18, 2728-2738.

111. Kivinen L., Tsubari M., Haapajarvi Т., Datto M.B., WangX.FLaiho M. 1999. Ras induces p21Cipl/Wafl cyclin kinase inhibitor transcriptionally through Spl-binding sites. Oncogene, 18, 6252-6261.

112. Knebel A., Rahmsdorf H.J., Ullrich A., Herrlich P. 1996. Dephosphorylation of receptor tyrosine kinases as target of regulation by radiation, oxidants or alkylating agents. EMBOJ., 15, 5314-5325.

113. KoL.G. andPrives C. 1996. p53: puzzle and paradigm. Genes Dev., 10, 1054-1072.

114. KohlN.E., Ruley H.E. 1987. Role of c-myc in the transformation ofREF52 cells by viral and cellular oncogenes. Oncogene, 2, 41-48.

115. Komarova E.A., Diatchenko L., Rokhlin O.W., Hill J.E., Wang Z.J., Krivokrysenko V.I., Feinstein E., Gudkov A.V. 1998. Stress-induced secretion of growth inhibitors: a novel tumor suppressor function ofp53. Oncogene, 17,1089-1096.

116. Kortenjann M., Thomae О., Shaw P.E. 1994. Inhibition of v-raf-dependent c-fos expression and transformation by a kinase-defective mutant of the mitogen-activated protein kinase Erk2. Mol. Cell. Biol., 14, 4815-4824.

117. Krause K, Wasner M, Reinhard W, Haugwitz U, Dohna CL, Mossner J, Engeland K. 2000. The tumour suppressor protein p53 can repress transcription of cyclin B. Nucleic Acids Res., 28, 4410-4418.

118. Kyriakis J.M., App H., Zhang X., Banerjee P., Brautigan D.L., Rapp U.R., Avruch J. 1992. Raf-1 activates MAP kinase-kinase. Nature, 358,417-421.

119. Macip S., Igarashi M., Fang L., Chen A., Pan Z.-Q., Lee S.W., Aaronson SA. 2002. Inhibition of p21-mediated ROS accumulation can rescue p21-induced senescence EMBOJ., 21, 2180-2188.

120. Maekawa M., Ishizaki Т., Boku S., Watanabe N., Fujita A., Iwamatsu A., Obinata Т., Ohashi K., Mizuno K., Narumiya S. 1999. Signalling from Rho to the actin cytoskeleton through protein kinases ROCK and LIM-kinase. Science, 285, 895-898.

121. Magun B.E., Bowden G.T. 1979. Effects of the tumor promoter TPA on the induction of DNA synthesis in normal and RSV-transformed rat fibroblasts. J. Supramol. Struct., 12, 63-72.

122. Malumbres M., Pellicer A. 1998. Ras pathways to cell cycle control and cell transformation. Front Biosci., 3, d887-d912.

123. Malumbres M., Perez De Castro /., Hernandez M.I., Jimenez M., Corral Т., Pellicer A. 2000. Cellular response to oncogenic ras involves inudction of the Cdk4 and Cdk6 inhibitor pl5(INK4b). Mol. Cell. Biol, 20, 2915-2925.

124. Manne V., Bekesi E., KungH.F. 1985. Ha-ras proteins exhibit GTPase activity: pointmutations that activate Ha-ras gene products result in decreased GTPase activity. Proc. Nat., Acad. Sci. USA, 82, 376-380.

125. Mansour S.J., Matten W.T., Hermann A.S., Candia J.M., RongS., Fukasawa K., Vande

126. Woude G.F., Ahn N.G. 1994. Transformation of mammalian cells by constitutively active MAP kinase kinase. Science, 265, 966-970.

127. Marais R., Light Y, Paterson H.F., Mason C.S., Marshall C.J. 1997. Differential regulation of Raf-1, A-Raf, and B-Raf by oncogenic ras and tyrosine kinases. J. Biol Chem., 272, 4378-4383.

128. Martindale J.L., HolbrookN.J. 2002. Cellular response to oxidative stress: signaling for suicide and survival. J. Cell Physiol., 192, 1-15.

129. Matsuda К., Yoshida К., Taya Y., Nakamura K., Nakamura Y., Arakawa H. 2002. p53AIPl regulates the mitochondrial apoptotic pathway. Cancer Res., 62, 2883-2889.

130. Matsuzawa S.I., Reed J. С. 2001. Siah-1, SIP, and Ebi collaborate in a novel pathway for beta-catenin degradation linked to p53 responses. Mol. Cell, 7, 915-926.

131. MeekD. W. 1999. Mechanisms of switching on p53: a role for covalent modification? Oncogene, 18, 7666-7675.

132. MindenA., Lin A., Claret F.X., Abo A., Karin M. 1995. Selective activation of the JNKsignaling cascade and c-Jun transcriptional activity by the small GTPases Rac and Cdc42Hs. Cell, 81, 1147-1157.

133. Mittnacht S., Paterson H., Olson M.F., Marshall C.J. 1997. Ras signaling is required for inactivation of the tumour suppressor pRb cell-cyle control protein. Curr. Biol., 7, 219-221.

134. Miyashita Т., Harigai M., Hanada M., Reed J.C. 1994a. Identification of a p53-dependent negative response element in the bcl-2 gene. Cancer Res., 54, 3131-3135.

135. Miyashita Т., Krajewsky S., Krajewska M., Wang H.G., Lin H.K., Lieberman D.A., Hoffman В., Reed J.C. 1994b. Tumor suppressor p53 is a regulator of bcl-2 and bax gene expression in vitro and in vivo. Oncogene, 9, 1799-1805.

136. Moll U.M., Riou G., Levine A.J. 1992. Two distinct mechanisms alter p53 in breast cancer: Mutation and nuclear exclusion. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89, 7262-7266.

137. Moll U.M., LaQuaglia M., Benard J., Riou G. 1995. Wild-type protein undergoes cytoplasmic sequestration in undifferentiated neuroblastomas but not in differentiated tumors. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 92, 4407-4411.

138. Morgenstern J.P., LandH. 1990. Advanced mammalian gene transfer: high titre retroviral vectors with multiple drug selection markers and a complementary helper-free packaging cell line. Nucl. Acid. Res., 18, 3587-3596.

139. Momand J., Zambetti G.P., Olson D.C., George D., Levine A.J. 1992. The mdm-2 oncogene product forms a complex with the p53 protein and inhibits p53 mediated transactivation. Cell, 69, 1237 1245.

140. Mulcahy L.S., Smith M.R., Stacey D.W. 1985. Requirements for Ras proto-oncogene function during serum-stimulated growth ofNIH3T3 cells. Nature, 313, 241-243.

141. Mumberg D., Haas К., Moroy Т., Niedenthal R., Hegemann J.H.H., Funk M., Muller R. 1996. Uncoupling of DNA replication and cell cycle progression by human cyclin E. Oncogene, 13, 2493-2497.

142. Mummenbrauer Т., Janus F., Muller В., Wiesmuller L., Deppert W., Grosse F. 1996. p53 Protein Exhibits 3'-to-5' Exonuclease Activity. Cell, 85, 1089-1099.

143. Murphy G.A., Graham S.M., Morita S., Reks S.E., Rogers-Graham K., VojtekA., Kelley

144. G.G., Der C.J. 2002. Involvement of phosphatidylinositol 3-kinase, but not RalGDS, inTC21/R-Ras2-mediated transformation. J. Biol. Chem., 277, 9966-9975.

145. Nakagawa H., MikiH., Ito M., OhashiK., Takenawa Т., Miyamoto S. 2001. N-WASP, WAVE and Mena play different roles in the organization of actin cytoskeleton in lamellipodia. J. Cell Sci., 114, 1555-1565.

146. Nakano K., Vousden K.H. 2001. PUMA, a novel proapoptotic gene, is induced by p53. Mol. Cell, 7, 683-694.

147. Nakielny S., Cohen P., Wu J., Sturgill T.W. 1992. MAP kinase activator from insulin-stimulated skeletal muscle is a protein threonine/tyrosine kinase. EMBOJ., 11, 21232129.

148. Naumann U., Eisenmann-Tappe I., Rapp U.R. 1997. The role of Raf kinases in development and growth of tumors. Recent Results Cancer Res., 143, 237-244.

149. Nobes C.D., Hall A. 1995. Rho, rac, and cdc42 GTPases regulate the assembly of multimolecular focal complexes associated with actin stress fibers, lamellipodia and filopodia. Cell, 81, 53-62.

150. Obaya A.J., Mateyak, M.K., Sedivy J.M. 1999. Mysterious liaisons: the relationship between c-Myc and the cell cycle. Oncogene, 18, 2934-2941.

151. Obaya A.J., Sedivy J.M. 2002. Regulation of cyclin-Cdk activity in mammalian cells. Cell. Mol. Life Sci., 59, 126-142.

152. О da E., Ohki R., Murasawa H., Nemoto J., Shibue Т., Yamashita Т., Tokino Т., Taniguchi Т., Tanaka N. 2000. Noxa, a ВНЗ-only member of the Bcl-2 family and candidate mediator of p53-induced apoptosis. Science, 288, 1053-1058.

153. OdaK., Arakawa H., Tanaka Т., Matsuda К., Tanikawa C., Mori Т., Nishimori H., TamaiK., Tokino Т., Nakamura Y, Taya Y. 2000. p53AIPl, a potential mediator of p53-dependent apoptosis, and its regulation by Ser-46-phosphorylated p53. Cell, 102, 849-862.

154. Ohta Y., Suzuki N., Nakamura S„ Hartwig J.H., Stossel T.P. 1999. The small GTPase RalA targets filamin to induce filopodia. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 96,2122-2128.

155. Okazaki K., Sagata N. 1995. MAP kinase activation is essential for oncogenic transformation of NIH3T3 cells by Mos. Oncogene, 10, 1149-1157.

156. OlinerJ.D., Kinzler K.W., Mettrer P.S., George D.L., Vogelstein B. 1992. Amplification of a gene encoding a p53-assosiated protein in human sarcomas. Nature, 358, 80-83.

157. Oh en C.L., Gardie В., Yaswen P., Stampfer M.R. 2002. Raf-1-induced growth arrest in human mammary epithelial cells is pl6-independent and is overcome in immortal cells during conversion. Oncogene, 21, 6328-6339.

158. Olson D.C., Marechal V., Momand J., Chen J., Romocki C., Levine A.J. 1993. Identification and characterization of multiple mdm-2 proteins and mdm-2-p53 protein complexes. Oncogene, 8, 2353-2360.

159. Olson M.F., Ashworth A., Hall A. 1995. An essential role for Rho, Rac and Cdc42 GTPases in cell cycle progression through Gi. Science, 269, 1270-1272.

160. Olson M.F., Paterson H.F., Marshall C.J. 1998. Signals from Ras and Rho GTPases interact to regulate expression of p21Wafl/Cipl. Nature, 394, 295-299.

161. Palmero I, Pantoja C, Serrano M. 1998. pl9ARF links the tumour suppressor p53 to Ras. Nature, 395, 125-126.

162. Palmero I., Murga M., Zubiaga A., Serrano M. 2002. Activation of ARF by oncogenic stress in mouse fibroblasts is independent of E2F1 and E2F2. Oncogene, 21, 2939-2947.

163. Pantoja C, Serrano M. 1999. Murine fibroblasts lacking p21 undergo senescence and are resistant to transformation by oncogenic Ras. Oncogene, 18, 4974-4982.

164. Parada L.F., LandH., Weinberg R.A., WolfD., Rotter D. 1984. Cooperation between gene encoding p53 tumor antigen and ras in cellular transformation. Nature, 312, 649 -651.

165. Pawlak G„ Helfman D.M. 2002. Post-transcriptional down-regulation of ROCKI/Rho-kinase through an MEK-dependent pathway leads to cytoskeleton disruption in Ras-transformed fibroblasts. Mol. Biol. Cell, 13, 336-347.

166. Pearson M., Carbone R., Sebastiani C., Cioce M., FagioliM., Saito S., Higashimoto Y., Appella E., Minucci S., Pandolfi P.P., PelicciP.G. 2000. PML regulates p53 acetylation and premature senescence induced by oncogenic Ras. Nature, 406, 207210.

167. PolyakK., Xia Y., ZweierJ.L., Kinzler K.W., Vogelstein B. 1997. A model for p53-induced apoptosis. Nature, 389, 300-305.

168. Prives C. 1998. Signaling to p53: breaking the MDM2-p53 circuit. Cell, 95, 5-8.

169. Prives C„ Hall P.A. 1999. The p53 pathway. J. Path., 187, 112-126.

170. Prives С., Manley J.L. 2001. Why p53 is acetylated? Cell, 107, 815-818.

171. Pruitt K., Pestell R. G, Der C.J. 2000. Ras inactivation of the retinoblastoma pathway bydistinct mechanisms in NIH 3T3 fibroblast and RIE-1 epithelial cells. J. Biol. Chem., 275, 40916-40924.

172. PruittK., Pruitt W.M., Bilter G.K., WestwickJ.K., Der C.J. 2002. Raf-independent

173. Deregulation of p38 and JNK Mitogen-activated Protein Kinases Are Critical for Ras Transformation. J. Biol. Chem., Ill, 31808-31817.

174. Quilliam L.A., Rebhun J.F., Castro A.F. 2002. A growing family of guanine nucleotideexchange factors is responsible for activation of Ras-family GTPases. Prog. Nucleic Acid Res. Mol. Biol., 71, 391-444.

175. RagimovN., Krauskopf A., NavotN., Rotter V., Oren M., Aloni Y. 1993. Wild-type but not mutant p53 can repress transcription initiation in vitro by interfering with the binding of basal transcription factors to the TATA motif. Oncogene, 8, 1183-1193.

176. Ragozzino M.M., Kuo A., DeGregori J., Kohl N., Ruley H.E. 1991. Mechanisms of oncogene cooperation: activation and inactivation of a growth antagonist. Environ. Health Perspect., 93, 97-103.

177. Rebollo A., Martinez A.C. 1999. Ras Proteins: Recent Advances and New Functions. Blood, 94, 2971-2980.

178. Reddy E.P., Reynolds R.K., Santos E., Barbacid M. 1982. A pointmutation is responsible for the acquisition of transforming propeties by the T24 human bladder carcinoma oncogene. Nature, 300, 149-152.

179. Reed M., Woelker В., Wang P., Wang Y., Anderson M.E., Tegtmeyer P. 1995. The C-terminal domain of p53 recognizes DNA damaged by ionizing radiation. Proc. Natl. Acad. Sci., 92, 9455-9459.

180. Reuter C.W., Catling A.D., Jelinek Т., Weber M.J. 1995. Biochemical analysis of MEK activation in NIH3T3 fibroblasts. Identification of B-Raf and other activators. J. Biol Chem., 270, 7644-7655.

181. Reynolds V.L., Lebovitz R.M., Warren S., Hawley T.S., Godwin A.K., Lieberman M.W. 1987. Regulation of a metallothionein-rasT24 fusion gene by zinc results in graded alterations in cell morphology and growth. Oncogene, 1, 323-330.

182. Rodenhuis S. 1992. ras and human tumors. Semin. Cancer Biol., 3, 241-247.

183. Roninson LB. 2002. Oncogenic functions of tumour suppressor p21 Wafl/Cipl/Sdil: association with cell senescence and tumour-promoting activities of stromal fibroblasts. Cancer Letters, 179, 1-14.

184. Roper E., Weinberg W., Watt F.M., Land H. 2001. pl9ARF-independent induction of p53 and cell cycle arrest by Raf in murine keratinocytes. EMBO Rep., 2, 145-150.

185. Rotman G., Shiloh Y. 1999. ATM: a mediator of multiple responses to genotoxic stress. Oncogene, 18, 6136-6144.

186. Rodriguez-Viciana P., Warne P.H., Khwaja A., Marte B.M., Pappin D., Das P., Waterfield M.D., Ridley A., Downward J. 1997. Role of phosphoinositide 3-OH Kinase in cell transformation and control of the actin cytoskeleton by Ras. Cell, 89, 457-467.

187. Roy S., McPherson R.A.,. Apolloni A., Yan J., Lane A., Clyde-Smith J., Hancock J.F. 1998. 14-3-3 facilitates Ras-dependent Raf-1 activation In vitro and In vivo. Mol. Cell. Biol, 18, 3947-3955.

188. Rubtsova S.N., Kondratov R.V., Kopnin P.В., Chumakov P.M., Kopnin B.P., Vasiliev J.M. 1998. Disruption of actin microfilaments by cytochalasin D leads to activation of p53. FEBSLett., 430, 353-357.

189. Ruley HE. 1983. Adenovirus early region 1A enables viral and cellular transforming genes to transform primary cells in culture. Nature, 304, 602-606.

190. Ruley H.E. 1990. Transforming collaborations between ras and nuclear oncogenes. Cancer Cells, 2, 258-268.

191. Russell A., Hendley J., Germain D. Inhibitory effect of p21 in MCF-7 cells is overcome by its coordinated stabilization with D-type cyclins. Oncogene, 18(47):6454-9.

192. Sabapathy K, Klemm M, JaenischR, Wagner EF. 1997. Regulation of ES cell differentiation by functional and conformational modulation of p53. EMBOJ., 16, 6217-6229.

193. Sablina A.A., Ilyinskaya G.V., Rubtsova S.N., Agapova L.S., Chumakov P.M., Kopnin B.P. 1998. Activation of p53-mediated cell cycle checkpoint in response to micronuclei formation. J. Cell. Sci., Ill, 977-984.

194. Sachdev P., Zeng L., Wang L.H. 2002. Distinct role of phosphatidylinositol 3-kinase and Rho family GTPases in Vav3-induced cell transformation, cell motility, and morphological changes. J. Biol. Chem.,211, 17638-17648.

195. Sage J., Mulligan G.J., Attardi L.D., Miller A., Chen S., Williams В., Theodorou E., Jacks T. 2000. Targeted disruption of the three Rb-related genes leads to loss of G(l) control and immortalization. Genes Dev., 14, 3037-3050.

196. Sahai E„ Olson M.F., Marshall C.J. 2001. Cross-talk between Ras and Rho signalling pathways in transformation favours proliferation and increased motility. EMBO J., 20, 755-766.

197. SambroockJ., Fritsch E.F., Maniatis T. 1989. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY.

198. Samuels-Lev Y., O'Connor D.J., Bergamaschi D., Trigiante G., Hsieh J.K., Zhong S., Campargue I, Naumovski L, Crook T, Lu X. 2001. ASPP proteins specifically stimulate the apoptotic function of p53. Mol. Cell, 8, 781-794.

199. Scheffzek K., Ahmadian M.R., Kabsch W., Wiesmuller .L, Lautwein A., Schmitz F.,

200. Wittinghofer A. 1997. The Ras-RasGAP complex: structural basis for GTPase activation and its loss in oncogenic Ras mutants. Science, 277, 333-338.

201. Schneider E, Montenarh M, Wagner P. 1998. Regulation of CAK kinase activity by p53. Oncogene, 17, 2733-2741.

202. Scott M.T., Morrice N., Ball K.L. 2000. Reversible phosphorylation at the C-terminal regulatory domain of p21(Wafl/Cipl) modulates proliferating cell nuclear antigen binding. J. Biol. Chem., 275, 11529-11537.

203. Seo YR, Fishel ML, Amundson S, Kelley MR, Smith ML. 2002. Implication of p53 in base excision DNA repair: in vivo evidence. Oncogene, 21, 731-737.

204. Serrano M, Gonez-Lahos E., DePino R.A., Beach D., Bar-Sagi D. 1995. Inhibition of ras-induced proliferation and cellular transformation by pl6INK4a. Science, 267, 249252.

205. Serrano M., Lin A. W., McCurrach M.E., Beach D., Lowe S. W. 1997. Oncogenic ras provokes premature cell senescence associated with accumulation of p53 and pl6INK4a. Cell, 88, 593-602.

206. Sharpless N.E., DePinho R.A. 2002. p53: good cop/bad cop. Cell, 110, 9-12.

207. Shaulian E, Karin M. 2001. AP-1 in cell proliferation and survival. Oncogene, 20, 23902400.

208. Shaw P., Tardy S., Benito E., Obrador A., Costa G. 1991. Occurrence of Ki-ras and p53 mutations in primary colorectal tumors. Oncogene, 6, 2121-2128.

209. Sheen J.H., Dickson R.B. 2002. Overexpression of c-Myc alters G(l)/S arrest following ionizing radiation. Mol. Cell. Biol., 22, 1819-1833.

210. Shefner M., Werness В., Huibregtse J., Levine A., Howley P. 1991. The E6 oncoprotein encoded by human papillomavirus types 16 and 18 promotes the degradation of p53. Cell, 63, 1129-1136.

211. Sheng H., Shao J., DuBois R.N. 2001. Akt/PKB activity is required for Ha-Ras-mediated transformation of intestinal epithelial cells. J. Biol. Chem., 276, 14498-14504.

212. Sherr C.J. 1996. Cancer cell cycles. Science, 274, 1672-1677.

213. Sherr C.J. 2000. The Pezcoller lecture: cancer cell cycles revisited. Cancer Res., 60, 36893695.

214. Sherr C.J., Roberts J.M. 1995. Inhibitors of mammalian G1 cyclin-dependent kinases. Genes Dev., 9, 1149-1163.

215. Sherr C. J., Weber J. D. 2000. The ARF/p53 pathway. Curr. Opin. Genet. Dev., 10, 94-99.

216. Sigal A., Rotter V. 2000. Oncogenic Mutations of the p53 Tumor Suppressor: The Demons of the Guardian of the Genome. Cancer Res., 60, 6788-6793.

217. Sionov R. V., Haupt, Y. 1999. The cellular response to p53: the decision between life and death. Oncogene, 18, 6145 -6157.

218. Small M.B., Hay N., Schwab M., Bishop J.M. 1987. Neoplastic transformation by the human gene N-myc. Mol. Cell Biol, 7, 1638-1645.

219. Song С., Ни C.D., Masago M., Kariyai K., Yamawaki-Kataoka Y., Shibatohge M., Wu D., Satoh Т., Kataoka T. 2001. Regulation of a novel human phospholipase C, PLCepsilon, through membrane targeting by Ras. J. Biol Chem., 276,2752-2757.

220. Souyri M, Koehne CF, ODonnell PV, Aldrich TH, Furth ME, Fleissner E. 1987. Biological effects of a murine retrovirus carrying an activated N-ras gene of human origin. Virology, 158, 69-78.

221. Spyridopoulos I., Isner J.M., Losordo D.W. 2002. Oncogenic ras induces premature senescence in endothelial cells: role of p21(Cipl/Wafl). Basic Res. Cardiol, 97, 117-124.

222. Stambolic V, Мак T.W., Woodgett J.R. 1999. Modulation of cellular apoptotic potential: contributions to oncogenesis. Oncogene, 18, 6094-6103.

223. Stokoe D., Mcdonald S.G., Cadwallader K., Symmons M., Hancock J.F. 1994. Activation of Raf as a result of recruitment to the plasma membrane. Science, 264, 1463-1467.

224. Sturzbecher H.W., Donzelmann В., Henning W., Knippschild U., Buchhop S. 1996. p53 is linked directly to homologous recombination processes via RAD51/RecA protein interaction. EMBO J., 15, 1992-2002.

225. Sugrue, M. M., D. Y. Shin, S. W. Lee, Aaronson S. A. 1997. Wild-type p53 triggers a rapid senescence program in human tumor cells lacking functional p53. Proc. Natl Acad. Sci. USA, 94, 9648-9653.

226. Sundaresan M., Yu Z.X., Ferrans V.J., Sulciner D.J., Gutkind J.S., Irani K., Goldschmidt-Clermont P. J., Finkel T. 1996. Regulation of reactive-oxygen-species generation in fibroblasts by Racl. Biochem. J., 318, 379-382.

227. Susse S, Janz C, Janus F, Deppert W, Wiesmuller L. 2000. Role of heteroduplex joints in the functional interactions between human Rad51 and wild-type p53. Oncogene, 19, 4500-4512.

228. Takenawa Т., Miki H. 2001. WASP and WAVE family proteins: key molecules for rapid rearrangement of cortical actin filaments and cell movement. J. Cell Sci., 114, 18011809.

229. Takimoto R., El-Deiry W.S. 2001. DNA replication blockade impairs p53-transactivation. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 98, 781-783.

230. Taylor W.R., Stark G.R. 2001. Regulation of the G2/M transition by p53. Oncogene, 20, 1803-1815.

231. Thannickal V.J., Day R.M., Klinz S.G., Bastien M.C., Larios J.M., Fanburg B.L. 2000. Ras-dependent and -independent regulation of reactive oxygen species by mitogenic growth factors and TGF-betal. FASEBJ., 14, 1741-1748.

232. Thannickal V.J., Fanburg B.L. 2000. Reactive oxygen species in cell signaling. Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol., 279, L1005-L1028.

233. Tocque В., Delumeau I., Parker F., Maurier F., Multon M.C., Schweighoffer F. 1997. Ras-GTPase activating protein (GAP): a putative effector for Ras. Cell Signal, 9, 153158.

234. TokerA. 1998. Signaling through Protein kinase C. Front. Biosci., 3, dl 134-dl 147.

235. Umanoff H, Edelmann W, Pellicer A, Kucherlapati R. 1995. The murine N-ras gene is not essential for growth and development. Proc. Nad. Acad. Sci. USA, 92, 1709-1713.

236. Vafa O., Wade M., Kern S., Beeche M„ Pandita Т.К., Hampton G.M., Wahl G.M. 2002. c-Myc can induce DNA damage, increase reactive oxygen species, and mitigate p53 function: a mechanism for oncogene-induced genetic instability. Mol. Cell, 9, 10311044.

237. Vaziri H, Dessain SK, Ng Eaton E, Imai SI, Frye RA, Pandita TK, Guarente L, Weinberg RA. 2001. hSIR2(SIRTl) functions as an NAD-dependent p53 deacetylase. Cell, 107, 149-159.

238. Vogelstein В., Lane D., Levine A. 2000. Surfing the p53 network. Nature, 408, 307-310.

239. WangY., Waldron R. Т., Dhaka A., PatelA., Riley M.M., Rozengurt E., Colicelli J. 2002. The RAS effector RIN1 directly competes with RAF and is regulated by 14-3-3 proteins. Mol. Cell. Biol., 22,916-926.

240. Weber J.D., Raben D.M., Philips P.J., Baldassare J.J. 1997. Sustained activation of extracellular-signal-regulated kinasel (ERK1) is required for the continued expression of cyclin D1 in G1 phase. Biochem. J., 326, 61-68.

241. Wei W, Hemmer R.M., Sedivy J.M. 2001. Role of pl4(ARF) in replicative and induced senescence of human fibroblasts. Mol. Cell. Biol., 21, 6748-6757.

242. Weinberg R.A. 1989. Oncogenes, antioncogenes, and the molecular bases of multistep carcinogenesis. Cancer Res., 49, 3713-3721.

243. Wittinghofer A., Pai E. 1991. The structure of Ras protein: a model for a universal molecular switch. Trends Biochem. Sci., 16, 382-387.

244. Woods D. В., Vousden, KH. 2001. Regulation of p53 function. Exp. Cell Res., 264, 56-66.

245. Wright W.E., Shay J.W. 2001. Cellular senescence as a tumor-protection mechanism: the essential role of counting. Curr. Opin. Genet. Dev., 11, 98-103.

246. Wu X., Bayle J.H., Olson D., Levine A.J. 1993. The p53-mdm-2 autoregulatory feedback loop. Genes Devt, 7, 1126-1132.

247. Xing J., Ginty D.D., Greenberg M.E. 1996. Coupling of the Ras-MAPK pathway to gene activation by RSK2, a growth factor-regulated CREB kinase. Science, 273, 959-963.

248. Yu J., Zhang L., Hwang P.M., Kinzler K.W., Vogelstein B. 2001. PUMA induces the rapid apoptosis of colorectal cancer cells. Mol. Cell, 1, 673-682.

249. Yun J„ Chae H.D., Choy H.E., Chung J., Yoo H.S., Han M.H., Shin D.Y. 1999. p53 negatively regulates cdc2 transcription via the CCAAT-binding NF-Y transcription factor. J. Biol. Chem., 21 A, 29677-29682.

250. Zacchi P., Gostissa M., Uchida Т., Salvagno C., Avolio F., Volinia S., Ronai Z., Blandino G., Schneider C., Del Sal G. 2002. The prolyl isomerase Pinl reveals a mechanism to control p53 functions after genotoxic insults. Nature, 419, 853-857.

251. Zambetti G.P., Levine A.J. 1993. A comparison of the biological activities of wild type and mutant p53. FASEBJ., 7, 855-865.

252. Zerler В., Moran В., Maruyama K., Moomaw J., Grodzicker Т., Ruley H.E. 1986. Adenovirus El A coding sequences that enable ras and pmt oncogenes to transform cultured primary cells. Mol Cell. Biol., 6, 887-899.

253. Zhan Q., Antinore M.J., Wang X. W., Carrier F„ Smith M.L., Harris C.C., Fornace A.J. Jr. 1999. Association with Cdc2 and inhibition of Cdc2/Cyclin B1 kinase activity by the p53-regulated protein Gadd45. Oncogene, 18, 2892-2900.

254. Zhang Y, Xiong Y, Yarbrough WG. 1998. ARF promotes MDM2 degradation and stabilizes p53: ARF-INK4a locus deletion impairs both the Rb and p53 tumor suppression pathways. Cell, 92, 725-734.

255. Zhang Y, Xiong Y. 1999. Mutations in human ARF exon 2 disrupt its nucleolar localization and impair its ability to block nuclear export of MDM2 and p53. Mol Cell, 3, 579591.

256. Zheng Н., You Н., Zhou X.Z., Murray S.A., Uchida Т., Wulf G., Gu L., Tang X., Lu K.P., Xiao Z.X. 2002. The prolyl isomerase Pinl is a regulator of p53 in genotoxic response. Nature, 419, 849-853.

257. Zhou B.P., Liao Y., Xia W., Spohn В., Lee M.H., Hung M.C. 2001. Cytoplasmic localization of p21Cipl/WAFl by Akt-induced phosphorylation in HER-2/neu-overexpressing cells. Nat. Cell. Biol., 3, 245-252.

258. Zhu, J., D. Woods, M. McMahon, Bishop J. M. 1998. Senescence of human fibroblasts induced by oncogenic Raf. Genes Dev., 12, 2997-3007.

259. Zieve G.W. 1984. Nocodazole and cytochalasin D induce tetraploidy in mammalian cells. Am. J. Physiol., 246, C154-C156.

260. Zink D., Mayr C., Janz C., Wiesmuller L. 2002. Association of p53 and MSH2 with recombinative repair complexes during S phase. Oncogene, 21, 4788-4800.

261. Zondag G.C., Evers E.E., ten Klooster J.P., Janssen L., van der Kammen R.A., Collard J.G. 2000. Oncogenic Ras downregulates Rac activity, which leads to increased Rho activity and epithelial-mesenchymal transition. /. Cell Biol., 149, 775-782.