Выделение нуклеиновых компонентов из бактериальной биомассы в процессе ее комплексной переработки тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.06, кандидат наук Тимошенко Ксения Андреевна

• Тимошенко Ксения Андреевна
• кандидат наук
• 2016

Оглавление диссертации кандидат наук Тимошенко Ксения Андреевна

Введение

Список сокращений

1. Обзор литературы

1.1. Состав и строение ДНК

1.2. Практическое значение ДНК и ее производных

1.3. Источники и способы выделения ДНК из биологического материала

1.4. Способы гидролиза ДНК

1.5. Общая характеристика и классификация липидов и их функции

1.6. Области применения липидов

1.7. Источники получения липидов

1.8. Методы выделения и очистки липидов

1.9. Характеристика галофильных и метанокисляющих бактерий

1.9.1. Характеристика галофильных бактерий

1.9.2. Характеристика метилококков

2. Материалы и методы

2.1. Объекты исследования

2.2. Реагенты

2.3. Методы анализа

2.3.1. Определение влажности образца

2.3.2. Количественное определение азотсодержащих веществ в белковых растворах

2.3.3. Количественное определение углеводов

2.3.4. Определение содержания нуклеиновых кислот

2.3.5. Методика определения концентрации фосфат-иона в водном растворе методом Фиска-Саббароу

2.3.6. Определение содержания ДНК по Дише

2.3.7. Определение индекса растворимости азота (ш1)

2.3.8. Определение дезоксирибонуклеозидов в растворе методом двумерной тонкослойной хроматографии

2.3.9. Установление чистоты препарата методом ТСХ

2.3.10. Определение эффективности гидролиза ДНК методом одномерной ТСХ

2.3.11. Определение массового содержания основного вещества в препарате по поглощению в УФ спектре

2.3.12. Определение общих жиров

2.3.13. Тонкослойная хромотография

2.4. Методы исследования

2.4.1. Методика проведения концентрирования вакуум - выпариванием

2.4.2. Методика проведения осаждения белковых веществ из водных, водно-спиртовых и водно-ацетоновых растворов

2.4.3. Методика проведения процесса ультрафильтрации

2.4.3.1. Устройство и принцип действия лабораторной установки концентрирования

2.4.3.2. Методика проведения процесса концентрирования

2.4.4. Методика проведения ионного обмена

2.4.5. Методика проведения ферментативного гидролиза

2.4.6. Методика проведения гель-электрофореза в полиакриловом геле

2.4.7. Методика проведения сушки

2.4.7.1. Распылительная сушка

2.4.7.2. Лиофильная или сублимационная сушка

3. Результаты и обсуждение

3.1. Разработка основ технологии выделения липидов из биомассы бактерий М&куЬосвссш сарБыЬМт

3.1.2. Хроматографический анализ полученной липидной фракции

3.1.3. Изучение процесса фракционирования экстракта липидов биомассы бактерий Мв1ку1ососсы8 сарзы1аШ8

3.2. Разработка основ технологии выделения концентратов ДНК и РНК из биомассы бактерий Methylococcus capsulatus

3.3. Получение препаратов ДНК из других источников микробного происхождения

3.3.1. Исследование процесса выделения каротиноидов из биомассы бактерий Halobacterium halobium

3.3.2. Выделение нуклеиновых компонентов из биомассы Bifidobacterium bifidum

3.3.3. Выделение нуклеиновых компонентов из отходов микробного происхождения

3.4. Разработка основ технологии получения производных аденина, гуанина, тимина и цитозина из бактериальной ДНК

3.4.1. Выбор способа гидролиза

3.4.2. Исследование процесса выделения производных гуанина

3.4.3. Исследование процесса выделения производных тимина

3.4.5. Очистка растворов производных нуклеиновых кислот

3.4.6. Апробация разработанной технологической схемы получения производных нуклеиновых кислот для ДНК, выделенной из биомассы бактерий Methylococcus capsulatus

3.5. Выделение белковой фракции из денуклеинизированной биомассы Methylococcus capsulatus

3.5.1. Подбор оптимальных условий кислотной экстракции белковых веществ из денуклеинизированной биомассы Methylococcus capsulatus

3.5.2. Подбор оптимальных условий ферментативного гидролиза белковых изолятов из денуклеинизированной биомассы Methylococcus capsulatus

3.5.3. Подбор оптимальных условий ферментативной экстракции белковых веществ из денуклеинизированной биомассы Methylococcus capsulatus

3.5.4. Исследование влияния различных видов сушки на качество

получаемых белковых веществ

4. Расчёт технико-экономических показателей цеха по комплексной переработке биомассы Мв1ку1ососсы8 сар8ы1аШ8 мощностью 2 тонн/год по

исходному сырью

Выводы

Заключение

Список литературы

Приложение

Приложение

Приложение

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Выделение нуклеиновых компонентов из бактериальной биомассы в процессе ее комплексной переработки»

ВВЕДЕНИЕ

Возникшая в настоящее время проблема импортозамещения в Российской Федерации является приоритетной задачей для государства. В связи с неблагоприятной экологической и социально-экономической ситуацией возрастает потребность в лекарственных препаратах для лечения онкологических заболеваний и заболеваний, связанных с нарушением деятельности иммунной системы. Многие из таких препаратов изготавливают на основе компонентов нуклеиновых кислот, промышленное производство которых в России практически отсутствует. Поэтому актуальной является задача разработать основы технологии получения компонентов нуклеиновых кислот, в частности дезоксирибонуклеотидов, которые могут найти широкое применение в медицине и ветеринарии в качестве иммуномодулирующих, раноза-живляющих, противовирусных препаратов, диагностических средств, а также для лечения онкологических заболеваний.

В качестве сырья для получения дезоксирибонуклеотидов используют эритроциты цыплят, молоки осетровых рыб, пуриновые и пиримидиновые предшественники. Однако использование животного сырья не позволяет получить дезоксирибонуклеотиды с высоким выходом, а химический синтез и биотрансформация требуют тщательной очистки от сопутствующих примесей, что существенно увеличивает стоимость конечных продуктов. Поэтому в настоящее время повышается интерес к микробным источникам дезоксири-бонуклеозидов, в частности биомассе бактерий.

Бактериальные продуценты широко используются для получения метаболитов. В этом случае отработанная биомасса, отличающаяся высоким содержанием ценных биологически активных веществ липидной, белковой, нуклеотидной природы, является трудноутилизируемым отходом производства. Кроме того, получение на основе биомассы бактерий вторичных метаболитов способно обеспечить добавочную стоимость, что позволяет повысить рентабельность основного производства. В соответствии с вышеизложенным представляется актуальным разработать технологическую схему

получения препаратов нуклеотидной природы из биомассы бактерий в рамках ее комплексной переработки с получением в качестве попутной продукции препаратов липидной и белковой природы, имеющих самостоятельное практическое значение.

Цели и задачи исследований. Целью настоящей работы является разработка технологической схемы получения дезоксирибонуклеотидов из бактериальной биомассы в условиях комплексной переработки сырья.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- определить оптимальные условия предварительной обработки бактериальной биомассы с целью извлечения липидов и предложить технологическую схему получения продуктов липидной природы из полученной липид-ной фракции;

- научно обосновать и разработать оптимальные условия выделения ДНК из биомассы бактерий Methylococcus capsulatus;

- определить оптимальные условия получения дезоксирибонуклеозидов из бактериальной ДНК;

- разработать технологическую схему переработки ДНБМ бактерий в продукты белковой природы и оценить возможность их применения в качестве азотсодержащей основы питательных сред;

- провести технико-экономическую оценку разработанной технологии комплексной переработки микробного сырья;

- оценить возможность применения разработанной технологии получения дезоксирибонуклеозидов из других видов бактериального сырья.

Список сокращений

NSI - индекс растворимого белка, А - аденин,

АСВ (СВ) - абсолютно сухой вес (сухой вес), БАВ - биологически активные вещества, БВ - белковые вещества,

БОЛФ - биомасса, освобождённая от липидной фракции, Г - гуанин,

ДНБМ - денуклеинизированная биомасса, ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота, ИЭТ - изоэлектрическая точка, НК - нуклеиновые компоненты, РНК - рибонуклеиновая кислота, Т - тимин,

ТСХ - тонкослойная хроматография, ТХУ - трихлоруксусная кислота, УФ - ультрафиолетовое излучение, ФП - ферментный препарат, Ц - цитозин.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Состав и строение ДНК

Дезоксирибонуклеиновая кислота, или ДНК, впервые была выделена из клеточных ядер, поэтому она была названа нуклеиновой (от лат. nucleus -ядро). Ее кислотные свойства обусловлены присутствием в составе молекулы остатков фосфорной кислоты. В качестве углеводного компонента выступает 2-дезокси^-рибоза. В клетках присутствует и другой тип нуклеиновых кислот - рибонуклеиновые (РНК), в которых углевод представлен D-рибозой [143].

Звеньями или строительными блоками в молекуле всех нуклеиновых кислот служат мононуклеотиды, состоящие из трех компонентов: азотистых оснований, сахара (пентозы) и фосфатной группы. В зависимости от количества присоединенных фосфатных групп различают нуклеозидмонофосфаты, нуклеозиддифосфаты и нуклеозидтрифосфаты. В состав нуклеиновых кислот входят два вида азотистых оснований: девятичленные бициклические пурины и шестичленные моноциклические пиримидины. В состав молекул нуклеиновых кислот входят два пурина:

аденин (А) и гуанин (О), а также три пиримидина: цитозин(С), тимин (Т) и урацил (и). Причем А, С и О входят в состав как молекул ДНК, так и молекул РНК, а тимину в молекулах ДНК соответствует урацил в молекулах РНК.

Молекулы нуклеозидов состоят из пуриновых или пиримидиновых оснований и рибозы или дезоксирибозы. [53].

Во многих работах было отмечено, что в молекулах ДНК, несмотря на комплементарность, количество пар аденин-тимин не совпадает с количеством пар гуанин-цитозин, т. е. что (в+С)/(А+Т) не равно 1. Этот признак позволяет различить два основных типа ДНК: тип с преимущественным содержанием гуанина и цитозина ^-С) и тип с преимущественным содержанием аденина и тимина (А-Т). Такое различие было названо "видоспецифичностью", что открыло новые возможности для таксономической систематики организмов, как дальне-, так и близкородственных [140].

Таким образом, при выборе источника сырья для выделения одного из нуклеиновых оснований следует учитывать не только его стоимость, но и нуклеотидный состав.

1.2. Практическое значение ДНК и ее производных.

Очень велико биологическое значение нуклеиновых кислот. Особенности их химического строения обеспечивают возможность передачи информации по наследству дочерним клеткам, переноса в цитоплазму и хранения информации о структуре белковых молекул. Но этим физиологическое значение ДНК не исчерпывается. Уже давно было обнаружено иммуномодулирующее воздействие на организм самой ДНК, ее составных частей (олиго- и мононуклеотидов), пиримидиновых и пуриновых оснований и их химически модифицированных производных.

Препараты ДНК применяются в медицине, а именно в онкологии, и могут быть использованы при лечении опухолей. Лечебный эффект производных ДНК носит универсальный характер и заключается в

нормализации метаболизма в тканях, находящихся в экстремальных условиях [84]. До недавнего времени к основным методам лечения онкологических заболеваний относились химио- и лучевая терапии, а так же хирургическое вмешательство. В последнее время все чаще применяют метод биотерапии, а именно используют природные БАВ (интерфероны, интерлейкины), а также иммуномодуляторы (производные ДНК). При этом отмечают [130], чрезвычайную перспективность применения производных ДНК. Так, в зависимости от вида онкологического заболевания деринат (Sodium deoxyribonucleate - натрия дезоксирибонуклеат) снижает скорость роста опухолей: карциномы Уокера - на 2,5-25,6 %, саркомы - на 18,6-45,0 %, альвеолярного рака печени - на 13,8 % [48].

Был разработан метод основанный на использовании фрагментов ДНК, который применяется для лечения некоторых онкологических заболеваний. Такие препараты также обладают радиопротекторным, антитоксическим и противоопухолевым действием. Однако, ввиду того что в данном случае фрагментированная ДНК не защищена от действия нуклеаз крови человека, и в клетки доставляются преимущественно короткие фрагменты ДНК, данный метод обладает недостатком - относительно низкой эффективностью лечения. Для его устранения используют максимально допустимые дозы фрагментированной ДНК (приближающейся к 1500 нг/мл), что позволяет доставить более крупные фрагменты экзогенной ДНК. Только в этом случае для репарирования зон повреждений, связанных с утратой одного нуклеотида или фрагмента хромосомной ДНК, в клетку доставляется некоторое количество полноразмерных фрагментов ДНК. Повышение эффективности достигается введением в организм фрагментированной ДНК в комплексе с негистоновым белком протамином, выполняющим защитную функцию [126].

Одним из достоинств препаратов ДНК является то, что по отношению к ним не возникает резистентности. Помимо этого, для успешной терапии онкозаболеваний также используется способность ДНК служить

проводником цитостатика и накапливаться в тканях, находящихся в критическом состоянии. [61].

Препараты на основе ДНК применяются также при лечении миелодепрессии, вызванной цитостатической терапией. При таком методе инъекция ДНК стимулирует костномозговое кроветворение [94].

ДНК используют также в качестве средства фармакологической защиты при гипертермии в процессе лечения онкологических заболеваний. Было показано, что опухолеповреждающее действие гипертермии усиливается деринатом. При этом значительно легче протекают пред- и послепроцедурный периоды [61].

Обращает на себя внимание еще один аспект применения натриевой соли ДНК - для лечения заболеваний, характеризующихся аутоиммунной агрессией [109]. К таким заболеваниям относятся: неспецифический язвенный колит, ряд инфекционных заболеваний, инфаркт миокарда, сахарный диабет.

В таких случаях назначается лечение заключающееся в комплексной терапии, которая направлена на подавление аллергических процессов. В настоящее время для подавления аллергических реакций используют препараты, действие которых направлено на блокирование гистаминоподобных веществ, например, иммунодепрессанты и кортикостероиды, а также иммуноглобулины. Как правило, такие схемы лечения позволяют добиться временной неустойчивой ремиссии, а известные кортикостероиды и иммунодепрессанты не обладают селективным действием на определенные звенья клеточного и гуморального иммунитета и вызывают развитие толерантности. В.В.Стариков с соавторами [109] вводили больному натриевую соль ДНК, полученную из молок осетровых рыб в сочетании с человеческим альфа-фетопротеином (АФП). Основанием для применения ДНК-Ыа-АФП был известный факт, что ДНК выступает в качестве эндогенного материала для регенерации и избирательно накапливается в местах поврежденных тканей и клеток. Комплексное использование АФП и

ДНК позволяет получить качественно новый синергетический эффект, обусловленный стимулирующими регенерацию свойствами первого препарата и иммуносупрессорными свойствами второго.

Иммуномодулирующие свойства препаратов ДНК получили высокую оценку в гинекологии за счет возможности сочетать их со многими лекарственными средствами и отсутствия противопоказаний и побочных явлений. Как известно [51], при хронических воспалительных заболеваниях придатков и матки наблюдаются признаки выраженного вторичного иммунодефицита. В отличие от Дерината, системная иммунотерапия с использованием индукторов интерферона и препаратов тимуса не приводит к восстановлению защитных свойств слизистой оболочки репродуктивных органов женщин. По этой причине необходима местная иммунокоррекция Деринатом, при этом наблюдается наиболее интенсивное влияние иммунотропного препарата на лимфоидную ткань и местные факторы иммунитета. Помимо прочего ДНК так же может быть использована для лечения мужского бесплодия. При постепенном введении курсовой дозы (300-750 мг) ДНК наблюдается восстановление сперматогенеза примерно через 10 дней после начала лечения.

Широкое применение нашли также гидролизаты ДНК, причем не только в онкологии. Они эффективны в качестве противовирусных и противомикробных препаратов. Такое действие гидролизатов ДНК основано на способности стимулировать местный и системный иммунитет, что способствует устранению возбудителя инфекции на этапе внедрения в метаболизм чужеродного организма и его блокировки. Более того, гидролизаты ДНК не вызывают аллергических реакций, но даже могут быть использованы для их лечения. Гидролизаты ДНК можно применять и в качестве оптимальных средств профилактики, поскольку их действие направлено на восстановление повреждений слизистых, а их целостная структура будет служить основным препятствием для внедрения возбудителей в организм [142].

Также в медицине часто используются смеси нуклеотидов, например в гастроэнтерологии. Известно, что нуклеиновые кислоты во многом определяют пролиферацию и клеточную дифференцировку, лежащие в основе любого восстановительного процесса тканей. В связи с этим применение ДНК при лечении язвенной болезни целесообразно, ввиду высокой скорости заживления язвы и повышения степени дифференцировки новообразований слизистой оболочки желудка. На фоне лечения больных с эрозивным гастритом, язвенной болезнью желудка или двенадцатиперстной кишки отмечаются исчезновение диспептических явлений, болевого синдрома, и уже через 2 дня улучшение аппетита. Во всех случаях наблюдалось значительное ускорение эпителизации повреждений слизистой оболочки. При воздействии ДНК значительно сокращались количество дефектов и площадь поражения в случае эрозивного процесса. Помимо прочего после лечения с включением ДНК в курс терапии Helicobacter pilori, определенный в начале болезни у некоторых больных, после лечения обнаружен не был.

Не утратила актуальности и проблемы гнойных осложнений после хирургических вмешательств. Как сообщают [141], примерно в 50% случаев именно локализованные формы гнойной хирургической инфекции являются причиной развития хирургического сепсиса, при этом примерно половина из них заканчиваются летально. Клинически выраженный эффект детоксикации удалось получить за счет применения ДНК. Лимфотропность препарата ДНК, а именно свойство накапливаться в лимфоидных органах и очагах воспаления, обеспечивают санацию лимфатических путей и эффект усиления дренажа и продукции лимфы. Препараты ДНК обеспечивают второй "транспортный" этап детоксикации, приводящий к очищению очага воспаления от токсических продуктов. Было отмечено, что комплекс ДНК-антибиотик способен проникать через гематоэнцефалический барьер и эффективно накапливаться в интерацеребральных фокусах воспаления (например, абсцесс мозга), а также в значительной мере способствовать

инкапсулированию, ограничению и препятствованию дальнейшего распространения внутримозговых абсцессов.

М.И. Громов [41] для лечения больных хирургическим сепсисом применил ДНК. По мнению автора, одной из причин септического истощения, мог быть недостаток клеток крови, за счет нехватки материала для синтеза ДНК (удвоение ДНК обязательный этап в процессе размножения кровяных клеток). В отличие от лекарств, действующим началом которых являются мономерные нуклеотиды и их производные (метилурацил, рибоксин, пентоксил), полимерные фрагменты ДНК могут посредством эндоцитоза избирательно поступать в ядра клеток находящихся на стадии деления, во время интенсивного синтеза ДНК. Было показано, что уровень летальности в группе больных сепсисом, получавших ДНК, составил 33 %, при этом в контрольной группе, которая деринат не получала - 53 %. Кроме того, ДНК способствует восстанавлению исходно сниженного количества эритроцитов крови, это позволяет рассматривать препарат ДНК как средство для лечения анемии, которая часто сопровождает сепсис с тяжелой интоксикацией.

Нельзя не упомянуть об эффективности ДНК при лечении хронических неспецифических заболеваний легких (ХНЗЛ) [44]. Установлено, что при ХНЗЛ на фоне лечения, при применении ДНК (дерината), наблюдались не только быстрый клинический эффект, но и эрадикация этиологически значимого патогена, которые были подтверждены повторными микробиологическими исследованиями мазков из зева, носа, мокроты, а также при помощи полимеразной цепной реакции (ПЦР).

М.Л. Чернышова [139] сообщает о комплексом лечения вирусного гепатита с использованием ДНК из молок осетровых рыб. Автор анализировал состояние 106 больных. Применялся препарат, сочетающий а-интерферона с ДНК, который при распределении во всех тканях и органах, обладает выраженным репаративным и регенерирующим действием. В данном случае важное значение имеет и иммуномодулирующий эффект ДНК. Применение ДНК

способствовало уменьшению побочных действий а-интерферона, длительности использования и дозы. Кроме того, нормализовались индикаторные ферменты АСТ (аспартатаминотрансфераза), АЛТ (аланинаминотрансфераза), ГГТП (гаммаглютамилтранспептидаза ), отсутствовали вирусная РНК и антиген вирусного гепетита С НВs Ag. Сообщают и о других аспектах успешного применения ДНК. Так, Т.В. Ляпорова [60] провела исследование воздействия 0,25 %-ного раствора ДНК в виде интерназальных капель у часто болеющих ОРВИ детей. Она же применяла ДНК в педиатрической практике при лечении инфекций мочевой системы, ассоциированных с афтозном стоматите, урогенитальным хламидиозом, атопическом дерматите. Результаты полученные во всех случаях были положительными.

Также рекомендуется применять ДНК (деринат) в офтальмологической практике для лечения тяжелых дистрофических, воспалительных и аутоиммунных процессов [135].

Хорошие результаты применения ДНК отмечены в лечении туберкулеза с выраженной интоксикацией. Уже на следующий день после первого введения препарата улучшаются показатели иммунного статуса, нормализуется сон, аппетит, снижается температура.

Одной из актуальнейших проблем в современной медицине является борьба с вирусными заболеваниями, прочно удерживающими в настоящее время первое место среди всей инфекционной патологии человека. В связи с этим большой интерес представляет работа Ю.П. Вайнберга с соавторами (1995 г.) [32]. Авторы показали противовирусную активность ДНК в отношении ВИЧ-1, цитомегаловируса, а также вируса простого герпеса. В последнем случае отмечен, кроме того, защитный эффект ДНК в опытах на животных, сравнимый с защитным действием индуктора интерферона - ридостина, который в настоящее время используется в качестве противогерпетического препарата.

Из ДНК получают нуклеопротеиды и нуклеотиды, которые являются эффективными лекарственными препаратами. Так, производные тимидина

(азидотимидин-зидовудин фирмы «Wellcome») применяют для лечения и профилактики иммунодефицитов, в том числе СПИДа [138].

Гидролизат ДНК как источник нуклеотидов и нуклеозидов обладает выраженным иммуномодулирующим действием. Гидролизаты ДНК применяются в медицине и онкологии, для подавления роста опухолевых клеток. Этот эффект был обнаружен во время испытаний на опухолевых клетках в условиях in vivo кислотного гидролизата ДНК из зародышей пшеницы, содержащим пиримидиновые нуклеотиды. Первоначально аналогичный эффект был обнаружен на искусственно синтезированных пуриновых и пиримиди-новых нуклеотидах, однако такой способ их получения является дорогостоящим и увеличивает риск образования побочных токсичных соединений. Кроме того было установлено, что искусственно синтезированный препарат при внутрибрюшном введении лейкозным мышам всего лишь сдерживал, но не блокировал синтез ДНК раковых клеток. Однако было доказано, что гид-ролизаты ДНК, содержащие пиримидины, являются мощными ингибиторами пролиферации раковых клеток, в которые они проникают ввиду своего малого размера и строения цитоплазмотической мембраны [97].

Гидролизаты ДНК могут применяться совместно с другими веществами, что заметно меняет направление их действия. Например, они входят в состав гепатопротекторных средств для снижения последствий алкогольного опьянения. Такие препараты помимо компонентов на основе янтарной, фу-маровой, глутаминовой кислот содержат компоненты на основе винной кислоты, гидролизат ДНК лососевых рыб или кальмаров. Их действие заключается в предупреждении и снятии похмельного синдрома, защиты печени, в том числе и при неалкогольной интоксикации [119].

Известны препараты на основе олигонуклеотидов. Так некоторые из них применяются в качестве иммуномодуляторов [82] или для получения лекарственных средств для лечения многих типов общих злокачественных опухолей, таких как рак желудка, легких, печени, толстой кишки, молочной железы и опухолей репродуктивной системы [74].

Описаны новые модифицированные нуклеозид-5'-трифосфаты, снабженные алкильной группой, которые являются антивирусными агентами, в частности, они способны ингибировать репродукцию вируса иммунодефицита человека в культуре лимфоцитов [113].

Широкое применение нашли и дисахаридные нуклеозиды - важная группа природных соединений. К настоящему времени из разных источников выделено более ста дисахаридных нуклеозидов и их производных. Они обладают широким спектром биологической активности, проявляя противогрибковые, антибактериальные, инсектицидные, гербицидные, антивирусные и противоопухолевые свойства. Этих соединения характеризуются дополнительным моносахаридным остатком, присоединенным к одной из гидрок-сильных групп нуклеозида по средствам О-гликозидной связи. Наличие ди-сахаридного остатка и гетероциклического основания определяет свойства соединений, родственные свойствам нуклеозидов и углеводов [47].

Смеси нуклеотидов также часто используются в медицине, а именно к физиологии, патанатомии и гастроэнтерологии в тест-системах. Например, при диагностировании структурных изменений в печени при заражении вирусным гепатитом В используется биологическая тест-система (0,1% водный раствор аминокислот; 0,5% водный раствор нейромедиатора дофамина; водная смесь нуклеотидных оснований ДНК (гуанин, цитозин, тимин, аденин); 25% водный раствор сернокислой магнезии в соотношении 4:1:1:4). Способ позволяет в динамике оперативно регистрировать и дифференцировать структурные нарушения в печени, обусловленных хроническим вирусным гепатитом В, а так же полностью исключить травматичность и снизить себестоимость диагностики [124].

Как уже говорилось выше, нуклеотиды служат строительными блоками для ДНК и РНК. а их фосфаты являются источниками энергии в клетке (фосфатными макроэргами). На основе этих знаний был разработан метод профилактики и лечения ретинопатии недоношенных детей со сроком гестации от 29 недель, основанный на обеспечении недоношенного ребенка как высоко-

энергетическим и пластическим биологическим материалом (а именно нук-леотидами и их производными), так и преградой попадания света к недоразвитым фоторецепторам, что снижает риск заболевания и обеспечивает скорейшее выздоровление [125].

В медицине находят применение не только смеси нуклеотидов, но и отдельные нуклеиновые основания и их сахаро-фосфатные производные. Большинство из них также обладают антивирусными и антиопухолевыми свойствами, но для некоторых из них есть специфические области применения.

К таким нуклеотидам относится аденин (витамин В4). Это связано с его особой ролью в метаболических процессах в организме, а именно участие в качестве компонента коферментов в регуляции процессов кроветворения и работе центральной нервной системы (поэтому фосфаты аденина нашли широкое применение в кардиологии), в передаче нервных импульсов в мозг и в работе самого мозга. Его производные способны оказывать антидепрессивный и психотропный эффект на человеческий организм, без выраженных побочных эффектов, таких как сонливость и упадок сил [54, 131]. На основании этого открытия были разработаны методы лечения рассеянного склероза. При традиционных методах лечения в настоящее время применяют терапию с помощью кортикостероидов или адренокортикотропного гормона, которые индуцируют более быстрое устранение острых симптомов и признаков болезни, однако они не влияют на отдаленные последствия заболевания. Длительная терапия с помощью этих препаратов противопоказана, т.к. иммуно-супрессанты не оказывают продолжительного воздействия на течение болезни. Однако, совместное применение терапевтических средств, содержащих производные аденина, значительно улучшает состояние больного, не дает побочных эффектов в виде кожной сыпи, тошноты, рвоты, нарушений работы печени или почек[108].

Как и все нуклеиновые компоненты, аденин является иммуномодуля-тором, поэтому применяется в качестве кровоостанавливающего, жаропони-

жающего, общеукрепляющего и антитоксического средства. Аденин так же применяют для профилактики и лечения онкологических заболеваний, таких как острый лимфобластный лейкоз, острый миелолейкоз (в т.ч. острый мие-лоцитарный лейкоз), хронический миелолейкоз (индукция ремиссии и поддерживающая терапия), миелодепресии, вызванной цитостатической терапией, хорионэпителиома матки, ретикулез, хронический гранулоцитарный лейкоз [116].

При добавлении к рациону аденин предупреждает или устраняет жировую дистрофию печени при избытке оротовой кислоты (витамин В13).

Препараты на основе дезоксиаденозина также обладают противокан-церным действием, а именно стимулируют апоптоз клеток астроцитомы. Глиомы, особенно астроцитного происхождения, устойчивы к химиотерапии и часто характеризуются плохим прогнозом, однако они очень чувствительны к манипуляциям, влияющим на баланс концентрации метаболитов пури-новой природы [4].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Тимошенко Ксения Андреевна, 2016 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Asgarani E. Mechanisms of DNA protection in Halobacterium salinarium, an extremely halophilic bacterium / Ezat Asgarani, Hirofumi Funamizu, Takeshi Saito, Hiroaki Terato, Yoshihiko Ohyama, Osamu Yamamoto, Hiroshi Ide. // Microbiological Research. - 1999. - Vol. 154. - №. 2. - P. 185-190.

2. Been L.B. Positron emission tomography in patients with breast cancer us-

1 8

ing F-3'-deoxy-3'-fluoro-L-thymidine ( F-FLT) - a pilot study / L.B. Been, P.H. Elsinga, J. de Vries, D.C.P. Cobben, P.L. Jager, H.J. Hoekstra, A.J.H. Suurmeijer // European Journal of Surgical Oncology (EJSO). - 2006. - Vol. 32. - №. 1. - P. 3943.

3. Coker J.A. Transcriptional profiling of the model Archaeon Halobacterium sp. NRC-1: responses to changes in salinity and temperature / J.A. Coker, P. Das-Sarma, J. Kumar, J.A. Müller // Saline Systems. - 2007. - Vol 3. - №. 6. - Р. 1-17.

4. Garcia-Gil M. The combination of adenosine deaminase inhibition and de-oxyadenosine induces apoptosis in a human astrocytoma cell line / M. Garcia-Gil , M.G. Tozzi , S. Varani , L. Della Verde , E. Petrotto , F. Balestri , L. Colombaioni , M. Camici // Neurochem Int. - 2015. - Vol. 80. - Р. 14-22.

5. Gustavsson T. Thymine, thymidine and thymidine 5'-monophosphate studied by femtosecond fluorescence upconversion spectroscopy / T. Gustavsson, A. Sharonov, D. Markovitsi. // Chemical Physics Letters. - 2002. - Vol 351. - №3-4. -P. 195-200.

6. Hyder S.L. Membrane modulation in a methylotrophic bacterium methylo-coccus capsulatus (Texas) as a function of growth substrate / S.L. Hyder, A. Meyers, M.L. Cayer // Tissue and Cell. - 1979. - Vol. 11. - №. 4. - P. 597-610.

7. Jahnke Linda L. The effects of growth temperature on the methyl sterol and phospholipid fatty acid composition of Methylococcus capsulatus (Bath) / Linda L. Jahnke. // FEMS Microbiology Letters. - 1992. - Vol. 93. - №. 3. - P. 209-212.

8. Jehlicka J. Bacterioruberin and salinixanthin carotenoids of extremely halophilic Archaea and Bacteria: A Raman spectroscopic study / J. Jehlicka, H.G.M.

Edwards, A. Oren // Spectrochimica Acta Part A: Molecular and Biomolecular Spectroscopy. - 2013. - Vol. 106. - P. 99-103.

9. Kushwaha S.C. Isolation and identification of dehydrosqualene and C40-carotenoid pigments in Halobacterium cutirubrum / S.C. Kushwaha, E.L. Pugh, J.K.G. Kramer, M. Kates // Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Lipids and Lipid Metabolism. - 1972. - Vol. 260. - №. 3. - P. 492-506.

10. Lee Y.K. A simple method for DNA extraction from marine bacteria that produce extracellular materials / Y.K. Lee, H.W. Kim, C.L. Liu, H.K. Lee // Journal of Microbiological Methods. - 2003. - Vol. 52. - №. 2. - P. 245-250

11. Lu H. Effects of cordycepin on HepG2 and EA.hy926 cells: Potential antiproliferative, antimetastatic and anti-angiogenic effects on hepatocellular carcinoma / Lu H., Li X., Zhang J., Shi H., Zhu X., He X. // Oncology letters. - 2014. -Vol. 7. - №. 5. - P. 1556-1562.

12. Marrone A. Hydrolysis of DNA and its molecular components in the dry state / A. Marrone, J. Ballantyne //Forensic Sci Int Genet. - 2010. - Vol. 4. - №3. -P. 168-77.

13. McCready S. UV irradiation induces homologous recombination genes in the model archaeon, Halobacterium sp. NRC-1 / Shirley McCready, Jochen A Mtller, Ivan Boubriak, Brian R Berquist, Wooi Loon Ng, Shiladitya DasSarma // Saline Systems. - 2005. - Vol. 1. - №. 3. - P. 1-9.

14. Müller Jochen A. Genomic Analysis of Anaerobic Respiration in the Archaeon Halobacterium sp. Strain NRC-1: Dimethyl Sulfoxide and Trimethylamine N-Oxide as Terminal Electron Acceptors / Jochen A. Müller, Shiladitya DasSarma // J. Bacteriol. - 2005. - Vol. 187. - №. 5. - P. 1659-1667.

15. Oesterhelt D. The structure and mechanism of the family of retinal proteins from halophilic archaea / Dieter Oesterhelt // Current Opinion in Structural Biology. - 1998. - Vol. 8. - №. 4. - P. 489-500.

16. Pickin K.A. Phospholipid/deoxycytidine analogue prodrugs for the treatment of cancer / K.A. Pickin, R.L. Alexander, C.S. Morrow, S.L. Morris-Natschke, K.S.

Ishaq, R.A. Fleming, G.L. Kucera // Journal of Drug Delivery Science and Technology. - 2009. - Vol. 19. - №. 1. - P. 31-36.

17. Plotnik D.A. In vitro analysis of transport and metabolism of 4'-thiothymidine in human tumor cells / D.A. Plotnik, S. Wu, G.R. Linn, F.C. Yip, N.L. Comandante, K.A. Krohn, J. Toyohara, J.L. Schwartz // Nuclear Medicine and Biology. - 2014. - Vol. 42. - №. 10. - P.784-791.

18. Romarheim Odd H. Cell wall fractions from Methylococcus capsulatus prevent soybean meal-induced enteritis in Atlantic salmon (Salmo salar) / Odd H. Romarheim, Thor Landsverk, Liv T. Mydland, Anders Skrede, Margareth Overland // Aquaculture. - 2013. - Vol. 402-403. - P. 13-18.

19. Soppa J. From genomes to function: haloarchaea as model organisms / Jörg Soppa // Microbiology. - 2006. - Vol. 152. - №. 3. - P. 585-590.

20. Sternberg B. The essential role of specific Halobacterium halobium polar lipids in 2D-array formation of bacteriorhodopsin / Brigitte Sternberg, Chantal L'Hostis, Clare A. Whiteway, Anthony Watts. // Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Biomembranes. - 1992. - Vol. 1108. - №. 1. - P. 21-30.

21. Vodnala S.K. Structure-activity relationships of synthetic cordycepin analogues as experimental therapeutics for African trypanosomiasis / S.K. Vodnala, T. Lundbäck, E. Yeheskieli, B. Sjöberg, A.L. Gustavsson, R. Svensson, G.C. Olivera, A.A. Eze, H.P. de Koning, L.G. Hammarström, M.E. Rottenberg // Journal of medicinal chemistry. - 2013. - Vol. 56. - №. 24. - P. 9861-9873.

22. Wailap V. Ng. Genome sequence of Halobacterium species NRC-1 / Wailap Victor Ng, Sean P. Kennedy, Gregory G. Mahairas, Brian Berquist, Min Pan, Hem Dutt Shukla, Stephen R. Lasky, Nitin S. Baliga, Vesteinn Thorsson, Jennifer Sbrogna, at al. // The National Academy of Sciences of the United States of America. - 2000. - Vol. 97. - №. 22. - P. 12176-12181

23. Weidler G. Survival and growth of Halobacterium sp. NRC-1 following incubation at -15°C, freezing or freeze-drying, and the protective effect of cations / G. Weidler, S. Leunko, H. Stan-Lotter // In: Proceedings of the Third European

Workshop on Exo-Astrobiology, 18 - 20 November 2003. Madrid, Spain. - 2004. -Р. 311 - 312.

24. www.compendium.com.ua препарат TELBIVUDINUM компании Novartis Pharma (дата обращения 14.05.10)

25. Yasui H. DNA synthesis inhibitors for the treatment of gastrointestinal cancer / H. Yasui, G. Tsurita, K. Imai // Expert Opinion on Pharmacotherapy. -2014. - Vol. 15. - №. 16. - Р. 1-12.

26. Алимова Е.К. Липиды и жирные кислоты в норме и при ряде патологических состояний / Е.К. Алимова, А.Т. Аствацатурян, Л.В. Жаров // М.: Медицина. - 1975. - С.279.

27. Андреев Л.В. Жирнокислотный состав и идентификация метанотроф-ных бактерий. / Л.В. Андреев, В.Ф. Гальченко // Доклады АН СССР. - 1978. -Т. 239. - с. 1465-1468.

28. Аркадьева З.А. Промышленная микробиология / З.А. Аркадьева, А.М. Бубородов // М.: Высшая школа. - 1989. - С. 688.

29. Белозерский А. Д. Методы исследования нуклеиновых кислот / А. Д. Белозерский // М.: Мир. - 1980. - С. 432.

30. Бергельсон Л.Д. Препаративная биохимия липидов / Л.Д. Бергельсон, Э.В. Дятловицкая, Ю.Г. Молотковский и др. // М.: Наука. - 1981. - С. 259

31. Бриттон Г. Биохимия природных пигментов / Г. Бриттон // М.: Мир. -1986. - С. 442.

32. Вайнберг Ю.П. Использование внутриклеточного распределения комплекса ДНК с карминомицином / Ю.П. Вайнберг, Л.П. Исаева, Г.И. Кирьянов, Л.Б. Щагалова // Антибиотики и медицинская биотехнология. - М. -1985. - №7. - с. 532-534.

33. Ванющкин Б. Ф. Пристальный взгляд стихийного натуралиста на мир ДНК (нуклеотидный состав, последовательности, метилирование) / Б. Ф. Ванющкин // Биохимия. - 2007. - Т. 72. - №12. - с. 1583-1593.

34. Владимиров Ю.А. Перекисное окисление липидов в биологической мембране / Ю.А. Владимиров, А.И. Арчаков // М.: Наука. - 1972. - С.252

35. Власов Г.С. Липосомы и перспективы их использования в прикладной иммунологии / Г.С. Власов, В.Ф. Салов, В.П. Торчилин, В.Р. Бердичевский // ЖМЭИ. - 1982. - №8. - с. 12-19

36. Высоко эффективный гидролиз фосфатного диэфира и взаимодействи-

3~1. 2+

ие ДНК с новым несимметричным модельным комплексом Fе +N1 // РЖ 19В. Неорганическая химия. Комплексные соединения. 2005,. №14.

37. Гальченко В.Ф. Метанотрофные бактерии / В.Ф. Гальченко // М.: ГЕОС. - 2001- С. 500

38. Гидролиз ДНК под действием гомо- И гетероядерных комплексов Си(2+)-М(2+) с двумя лигандами типа диэфиров // РЖ 19В. Неорганическая химия. Комплексные соединения. Радиохимия. 2005,. №8.

39. Грачев Ю.П. Математические методы планирования эксперимента / Ю.П. Грачев, Ю.М. Плаксин // М.: ДеЛи. принт, 2005. -296 с.

40. Григорян А.Н. Биосинтез на природном газе / А.Н. Григорян, Л.А. Горская // Обзор ОНТИТЭИмикробиопром. М. - 1975. - С. 399.

41. Громов М.И. Применение препарата Деринат для лечения больных хирургическим сепсисом / М.И. Громов // Использование препарата Деринат в различных областях медицины: Мат-лы 1-й Всерос. конф. - М. - 2000. - с. 1417.

42. Гусакова С.Д. Липиды некоторых лекарственных растений / С.Д. Гуса-кова, Г.А. Степаненко, Д.Т. Асимбекова и др. // Раст. Ресурсы. - 1983. - Т. 19. - Вып. 4. - с. 444-445.

43. Гусев М.В. Микробиология / М.В. Гусев, Л.А. Минеева // Кафедра клеточной физиологии и иммунологии биологического факультета МГУ им. М.В.Ломоносова. М. - 2001. - С.464.

44. Дубынина В.П. Деринат в комплексной терапии больных с хроническими обструктивными заболеваниями легких / В.П. Дубынина, Л.М. Фитен-ко, Б.Г. Городков // Использование препарата Деринат в различных областях медицины: Мат-лы 1-й Всерос. конф. - М. - 2000. - с. 17-19.

45. Дудниченко А.С. Липосомальные лекарственные препараты в эксперименте и клинике / А.С. Дудниченко, Ю.М. Краснопольский, В.И. Швец // Харьков: Каравелла. - 2001. - С. 143.

46. Евстигнеева Р.П. Химия липидов / Р.П. Евстигнеева, Е.А. Звонкова // М.: Химия. - 1983. - С. 296.

47. Ефремцева Е. В. Дисахаридные нуклеозиды - важная группа природных соединений / Е. В. Ефремцева, И. В. Куликова, С. Н. Михайлов. // Молекулярная биология. - 2009. - Т. 43. - №2. - с. 327-338.

48. Жаврид Э.А. Изучение противоопухолевых свойств комплекса адри-амицин-деринат в экспериментах / Э.А. Жаврид, Ю.П. Истомин // Минск: Онкоцентр. - 1994

49. Збарский И. Б. Нуклеиновые кислоты / И. Б. Збарский // М.: Мир. -1966. - С. 382.

50. Каган В.Е. Локализация а-токоферола в гидрофобной зоне липидного бислоя / В.Е. Каган, В.И. Скрыпник, Е.А. Сербинова и др. // Докл. АН СССР. - 1986. - Т. 288. - №. 5. - с.1242-1246.

51. Казачкова Э.А. Применение препарата Деринат в комплексном лечении воспалительных заболеваний матки и придатков / Э.А. Казачкова // Использование препарата Деринат в различных областях медицины: Мат-лы 1 -й Всерос. конф. - М. - 2000. - с. 23-24.

52. Кирхнер Ю. Тонкослойная хроматография. Т.2 / Ю. Кирхнер // М.: Мир. - 1981. - С. 523.

53. Клаг С. Мир биологии и медицины. Основы генетики / С. Клаг, Р. Каммингс. // М.: Техносфера. - 2007. - С. 894.

54. Ковалев Д.Г. Исследование антидепрессивной активности нового соединения ряда 9-(2-арилоксиэтил) аденина УМА-99-82. / Д.Г. Ковалев, Н.А. Николаенко // Вестник Волгоградского государственного медицинского университета, - 2007. - №4. - с. 50-52.

55. Красикова И.Н. Липиды некоторых наземных и морских грамотрица-тельных бактерий как факторы патогенности и потенциальные антагонисты

эндотоксинов / И.Н. Красикова // Диссертация на соискание ученой степени доктора химических наук. Владивосток. - 2009. - С. 188. 92

56. Красноруцский М. А. Антитела против ДНК гидролизуют ДНК и РНК / М. А. Красноруцский, В. Н. Бунева, Г. А. Невинский // Биохимия. - 2008. - Т. 73. - №11. - с. 1547-1560.

57. Крепс Е.М. Липиды клеточных мембран / Е.М. Крепс // М.: Наука. -1981. - С.280

58. Крылов И. А. Основы комплексной переработки биомассы промышленных микроорганизмов / И. А. Крылов //Диссертация на соискание ученой степени доктора химических наук. Москва. - 1999. - С. 528. 132

59. Кучеренко Н.Е. Липиды / Н.Е. Кучеренко, А.Н. Васильев // Киев: Высшая школа. - 1985. - С. 248

60. Ляпорова Т.В. Опыт применения препарата Деринат в условиях детской больницы / Т.В. Ляпорова // Использование препарата Деринат в различных областях медицины: Мат-лы 1-й Всерос. конф. - М. - 2000. - с. 9-11.

61. Мельников Д.Ю. Применение иммуноконъюгатов Дерината в химиотерапии онкологических больных / Д.Ю. Мельников // Использование препарата Деринат в различных областях медицины: Мат-лы 1-й Всерос. конф. - М. -2000. - с. 6-8.

62. Мельянцева Л.П. Влияние уровня перекисного окисления липидов и величины рН липосом суспензии на ее антибактериальную активность / Л.П. Мельянцева, В.М. Крейнес, В.Г. Булгаков // ЖМЭИ. - 1995. - №1. - с. 6-10.

63. Невзорова Т. А. Исследование ДНК-гидролизующей активности антител к ДНК / Т. А. Невзорова, В. Г. Винтер // Ученые записки Казанского государственного университета. Серия: Естественные науки. - 2005. - Т. 147. -№2. - с. 136-148.

64. Николаев А.Я. Биологическая химия / А.Я. Николаев // М.: Медицинское информационное агенство. - 2001. - С. 496

65. Остерман Л.А. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот. Электрофорез и ультрацентрифугирование / Л.А. Остерман // М.: Наука. -1981. - С. 288.

66. Патент CA № 1058105 A1. Culture of methylococcus on methane gas // David E.F. Harrison, Harmannus J. Doddema; Заявл. 11.02.1976. Опубл 10.07.1979

67. Патент CN № 102499937 A. Application of the combination of deoxynucleosides and nucleosides in preparation of antitumor drugs / Zhang Shizhuang, Cheng Xin, Zhao Yao, Zhao Rongrong, Han Ming, Gao Zhiqin; Заявл. 17.10.2011 Опубл. 20.06.2012.

68. Патент CN № 103751778 A. Application of 3'- deoxyadenosine to preparation of immunologic adjuvant for synergizing broad-spectrum vaccine / Zhu Naishuo, Yang Yan, Liu Rui, Bai Dou, Dong Yue; Заявл. 28.01.2014. Опубл. 30.04.2014.

69. Патент CN № 1396172 A. Process for extracting compound cordycepin and its Chinese medicine / Zhu Hongtu, Xiao Hong, Zou Yi; Заявл. 29.05.2002. Опубл. 12.02.2003.

70. Патент EP № 0188708B1.Способ получения цитидина и / или дезоксицитидина / Satoru Asahi, Yutaka Tsunemi, Muneharu Doi; Заявл. 30.10.1985. Опубл. 11.11.1989.

71. Патент EP № 0713705 A. Novel anti-hiv drug / Akira Kaji; Заявл. 24. 03.1995. Опубл. 29.04.1996.

72. Патент EP № 1416808 B1. Use of single-cell protein as feed for fish and shellfish / Gunnar Kleppe; Заявл. 16.08.2002. Опубл 04.10.2006

73. Патент EP № 2109459 B1. Archaeal polar lipid aggregates for administration to animals / Girishchandra B. Patel, Wangxue Chen; Заявл. 14.12.2007. Опубл. 06.03. 2013.

74. Патент EP № 2769727 A1. Use for deoxynucleoside/nucleoside combination in preparation of tumor medicament / Xin Cheng, Zhiqin GAO, Ming Han; Заявл. 16.10.2012. Опубл. 27.08.2014.

75. Патент US № 20020082416 A1. Method for obtaining DNA from fish spermatogonium / Han Park, In Lee; Заявл. 28.12.2001. Опубл. 27.06.2002

76. Патент US № 20030186260 A1. Adding 2'- deoxyguanosine to solution then quantifying 8-hydroxy-2' deoxyguanosine after exposing to ultraviolet radiation; drug screening / Atsushi Takaki; Заявл. 16.03.2001. Опубл. 02.10.2003.

77. Патент US № 20140309188 A1. Use of pharmaceutical composition comprising deoxynucleoside and nucleoside for treatment of tumor / Shizhuang Zhang, Xin Cheng, Zhiqin GAO, Ming Han; Заявл. 17.04.2014. Опубл. 16.10.2014.

78. Патент US № 20140309188 A1. Use of pharmaceutical composition comprising deoxynucleoside and nucleoside for treatment of tumor / Shizhuang Zhang, Xin Cheng, Zhiqin GAO, Ming Han; Заявл. 17.04.2014. Опубл. 16.10.2014.

79. Патент US № 5770582 A. Mixture of deoxycytidine and deoxyguanosine in a carrier / Reid Warren von Borstel, Michael Kevin Bamat; Заявл. 10.04.1995. Опубл. 23.06.1998.

80. Патент US № 6403565 B1. Enhances DNA repair and prevents consequences of mutagenic radiation even when administered after damage or exposure to radiation has already occurred; deoxyribonucleosides: deoxycytidine, deoxyadenosine, deoxyguanosine, and thymidine / Reid W. von Borstel, Fedor Romantsev; Заявл. 01.09.1999. Опубл. 11.06. 2002.

81. Патент US № 6656915 B1. Inhibiting T-cell proliferation / Shanta Bantia, John A. Montgomery, George A. Omura; Заявл. 15.09.2000. Опубл. 02.12. 2003.

82. Патент US № 8568742B2. Methods and compositions involving immunostimulatory oligodeoxynucleotides / Walter Schmidt, Karen Lingnau, Carola Schellack, Alena Egyed; Заявл. 07.06.2001. Опубл. 29.10.2013

83. Патент WO № 1991013898 A1. O6-benzylated guanine, guanosine and 2'-deoxyguanosine compounds possessing o6-alkylguanine-dna alkyltransferase depleting activity / Mary Eileen Dolan, Robert Carl Moschel, Anthony E Pegg; Заявл. 13.03.1991. Опубл. 14.09.1991.

84. Патент WO № 2007089166. Médicament pour atténuer le syndrome de réponse inflammatoire systémique / Sukoyan G. V.; Заявл. 02.02.2006. Опубл. 09.08.2007.

85. Патент WO № 2010128312 A2. Feed composition for the treatment or prevention of enteritis in fish / Odd Hedge Romarheim, Margareth Overland, Liv Torunn Mydland, Anders Skrede, Thor Landsverk; Заявл. 10.05.2010. Опубл 11.11.2010

86. Патент РФ № 2017496С1. Способ выделения натриевой соли ДНК. / Вайнберг Ю. П., Ладыгин А. Е., Каплина Э. Н., Аносова И. Г.; Заявл. 28.12.1990. Опубл. 15.08.1994.

87. Патент РФ № 2019187 С1. Способ получения фосфатидилхолина / Сак-сон В.М., Кузнецов С.А., Кретов А.В., Хромых Д.П., Бойкова И.В., Новикова И.И., Конев Ю.Е.; Заявл.07.06.1996; 0публ.27.07.1998.

88. Патент РФ № 2028148. Способы получения липидов./ Шинкаренко А.Л.; Щербак И.Ф.; Малуха К.И.; Карачев Г.Н.; Заявл. 09.10.1991. Опубл. 09.02.1995.

89. Патент РФ № 2034554C1. Способ выделение ДНК из молок осетровых рыб (и его варианты). / Аносова И.Г., Конарев А.А., Карпов И.Н., Кочеткова М.Г., Асафов А.В., Безюлев В.В.; Заявл. 24.05.1993. Опубл. 10.05.1995.

90. Патент РФ № 2050003C1. Способ диагностики трансформации керато-акантомы в плоскоклеточный рак кожи. / Молочков В. А., Крашенинникова Е. А.; Заявл. 07.09.1992. Опубл. 10.12.1995.

91. Патент РФ № 2063237 А1. Ранозаживляющее средство / Нузов Б.Г.; Олифсон Л.Е.; Яглинский В.А.; Каган И.И.; Володина Е.П.; Насырова И.И.; Заявл. 16.07.1986. Опубл 10.07.1996

92. Патент РФ № 2068563C1. Способ оценки индивидуальной химиочувствительности опухолей у больных. / Филиппова Л. А., Лавренов А. Л.; Заявл. 20.04.1992. Опубл. 27.10.1996.

93. Патент РФ № 2073721. Способ получения 2'-дезоксирибонуклеотидов / Шахова Т.В., Румянцева С.А., Майорова Г.И.; 3аявл.11.06.1993. Опубл. 20.02.1997.

94. Патент РФ № 2078581С1. Способ стимуляции лейкопоэза. / Трещалин И.Д.,Бодягин Д.А.,Переверзева Э.Р.,Сыркин А.Б.,Асафов А.В.,Безюлев В.В.,Трещалина Е.М.; Заявл. 11.10.1993. Опубл. 10.05.1997.

95. Патент РФ № 2091491С1. Способ получения нуклеиновых кислот из бактерий / Крылов И.А.; Панфилов В.И.; Волкова Н.В.; Манаков М.Н.; Заявл. 14.07.1995. Опубл. 27.09.1997.

96. Патент РФ № 2095059 А1. Способ профилактики и лечения атеросклероза / Капитанов А.Б.; Пименов А.М.; Нестерова О.А.; Сергиенко В.И.; Заявл. 27.07.1993. Опубл 10.11.1997

97. Патент РФ № 2102985С2. Способ подавления гиперактивных клеток. / Васильев В. К.; Заявл. 10.11.1995. Опубл. 27.01.1998. 4 с.

98. Патент РФ № 2104700 А6. Способ лечения гепатита В / Филлип А. Ф., Джордж Р. П.; Заявл. 01.05.1992. Опубл. 20.02.1998.

99. Патент РФ № 2105009. Способ диастереоселективного получение оптически активных цис-нуклеозидов или производных и промежуточные продукты для этого способа./ Тарек Мансур; Аллан Х.Л.Тсе; Заявл.20.05.1992. Опубл. 20.02.1998.

100. Патент РФ № 2105545С1. Состав для лечения вирусных заболеваний кожи. / Николаенко Н.С., Крупенникова Н.А., Биктимирова И.О., Соколова Л.Н., Глумова Н.М., Эльнатанова М.И.; Заявл. 30.01.1996. Опубл. 27.02.1998.

101. Патент РФ № 2105545С1. Состав для лечения вирусных заболеваний кожи. / Николаенко Н.С., Крупенникова Н.А., Биктимирова И.О.,Соколова Л.Н., Глумова Н.М., Эльнатанова М.И.; Заявл. 30.01.1996. Опубл. 27.02.1998. 5 с.

102. Патент РФ № 2109515. Препарат, обладающий антиоксидантной активностью и модулирующий физиологические и иммунологические процес-

сы в организме / Азизова О.А., Чекулаева Л.Н., Поляков В.Ф., Чижиков М.А.; Заявл. 18.03.1997. Опубл. 27.04.1998

103. Патент РФ № 2111967 С1. Способ получения ацикловира. / Студенцов Е.П.; Заявл. 26.09.1996; Опубл. 27.05.1998. 6 с.

104. Патент РФ № 2116145 С1. Способ получения биопрепарата для очистки объектов окружающей среды от нефти и нефтепродуктов / Василенко И.А., Швец В.И., Быков В.А., Кобринский Г.Д., Фиш Н.Г., Спивак С.М., Га-рифулин Р.Х., Аргинбаева Е.К.; заявл.29.12.1991; опубл.15.09.1994.

105. Патент РФ № 2124020С1. 3'-(5-Я-тетразол-2-ил) тимидины, проявляющие антивирусную активность и способ их получения. / Островский В.А.; Иванова Н.В.; Хохрякова Н.Р.; Поплавский В.С.; Студенцов Е.П.; Гулевский С.Г.; Малин А.А.; Карамов Э.В.; Пашкова Т.А.; Заявл. 12.07.1993. Опубл. 27.12.1998. 6 с.

106. Патент РФ № 2128184С2. Способ получения дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК)./ Васильев В.К.; Заявл. 26.09.1995. Опубл. 27.03.1999.

107. Патент РФ № 2128503С1. Антивирусная фармацевтическая эмульсия типа масло в воде. / Кнуд Эрик Гебхар-Хансен, Серен Болс Педерсен, Карен Бьернсдоттир, Бодил Гюллембург Лиссау, Берге Ингвар Фриск Алхеде.; Заявл. 09.09.1993; Опубл. 10.04.1999.

108. Патент РФ № 2130308С1. Применение замещенных производных аденина при лечении рассеянного склероза. / Эрнест Беутлер; Заявл. 18.02.1993. Опубл. 20.05.1999. 5 с.

109. Патент РФ № 2137477С1. Способ лечения заболеваний, характеризующихся аутоиммунной агрессией. / Стариков В.В., Мягкоходов В.А., Родионов С.Ю.; Заявл. 05.12.1995. Опубл. 20.09.1999.

110. Патент РФ № 2160446С1. Способ определения риска формирования экообусловленной нефропатии у детей. / Игнатова М.С., Юрьева Э.А., Раба Г.П., Харина Е.А., Длин В.В., Османов И.М.; Заявл. 14.09.1999. Опубл. 10.12.2000.

111. Патент РФ № 2177035 С1. Способ выделения геномной ДНК из клеток микроорганизмов. / Данилевич В.Н.; Гришин Е.В.; Заявл. 21.02.2000. Опубл. 20.12.2001.

112. Патент РФ № 2181017 С1.Способ получения вкусовой добавки для мясных продуктов и мясной продукт, содержащий такую добавку /Вуд Роберт Дастан, Хоуз Хью ; Цурбригген Бит Денис (; заявитель и патентообладатель Зубец Александр Матвеевич.; заявл.24.01.1992; опубл.30.12.1994.

113. Патент РФ № 2183213С2. Модифицированные нуклеозид-5-фосфаты как антивирусные агенты. / Дяткина Н.Б.,Арзуманов А.А.,Широкова Е.А.,Ясько М.В.,Александрова Л.А.,Викторова Л.С.,Горюнова Л.Е.,Бибилашвили Р.Ш.,Краевский А.А.; Заявл. 05.11.1996. Опубл. 05.11.1996. 5 с.

114. Патент РФ № 2185440 С1. Способ выделения геномной ДНК из клеток микроорганизмов / Данилевич В.Н. Гришин Е.В.; Заявл. 21.02.2000. Опубл. 20.07.2002.

115. Патент РФ № 2185440C2. Способ выделения геномной ДНК из клеток микроорганизмов. / Данилевич В.Н., Гришин Е.В.; Заявл. 21.02.2000. Опубл. 20.07.2002.

116. Патент РФ № 2225612С2. Способ прогнозирования течения множественной миеломы. / Бакиров А.Б.,Калимуллина Д.Х., Викторова Т.В., Грин-чук О.В., Вахитов В.А., Бакиров Б.А., Хуснутдинова Э.К., Макарова О.В.; Заявл. 30.04.2002. Опубл. 20.11.2003.

117. Патент РФ № 2230120C2. Способ выделения ДНК микроорганизмов. / Вафин Р.Р., Зайнуллин Л.И., Фаизов Т.Х., Равилов Р.Х., Алимов А.М., Вафин Р.Р.; Заявл. 08.04.2002. Опубл. 10.06.2004.

118. Патент РФ № 2232768C2. Способ выделения дезоксирибонуклеиновых кислот. / Лактионов П.П., Тамкович С.Н., Симонов П.А., Рыкова Е.Ю., Власов В.В.; Заявл. 02.10.2002. Опубл. 20.07.2004.

119. Патент РФ № 2240789 C1. Средство, обладающее гепатопротекторными свойствами, для снижения алкогольного опьянения,

предупреждения и снятия похмельного синдрома./ Маевский Е.И., Учитель М.Л.; Заявл. 24.12.2003. Опубл. 27.11.2004. 4 с.

120. Патент РФ № 2245149С2. Иммуностимулирующие нуклеиновые кислоты. / Криг Артур М., Шеттер Кристиан, Фолльмер Йорг.; Заявл. 25.09.2000. Опубл. 27.01.2005. 5 с.

121. Патент РФ № 2255741С2. СБР-холина (цитидин-дифосфат-холина) или его соли в качестве профилактического средства для лечения церебральной ишемии и способ его использования. / Кастелло Хосеп М., Лосано Рафаэль, Ортис Хосе А., Рага Мануэль, Раментоль Хорхе, Секадес Хулио Х., Феррер Исидро Х., Фогет Рафаэль.; Заявл. 13.03.2001. Опубл. 10.07.2005. 6 с.

122. Патент РФ № 2302876С1. Способ выделения натриевой соли ДНК из тканей животного происхождения. / Сафонова Г. М.; Заявл. 21.10.2005. Опубл. 20.07.2007.

123. Патент РФ № 2351652С1. Способ выделения ДНК. / Евтушенко В. И., Школьник М. И., Андабеков Т. Т., Карелин М. И. , Клочкова Т. Г.; Заявл.

03.07.2007. Опубл. 10.04.2009.

124. Патент РФ № 2377948С1. Способ экспресс-диагностики структурных изменений в печени при хроническом вирусном гепатите В. / Савина Л. В., Кокуева О. В., Яковенко М. С., Чекмарева С. Е., Лукошникова Т. В.; Заявл.

13.02.2008. Опубл. 10.01.2010. 4 с.

125. Патент РФ № 2387416С1. Способ профилактики и лечения ретинопатии недоношенных детей. / Милевская Т. А., Муха А. А., Муха А. И.; Заявл. 18.12.2008. Опубл. 18.12.2008. 6 с.

126. Патент РФ № 2387456С1. Способ лечения онкологических заболеваний. / Шурдов М. А., Богачев С. С., Рогачев В. А., Николин В. П., Попова Н. А., Лихачева А. С., Себелева Т. Е., Стрункин Д. Н. , Шилов А. Г. , Черных Е. Р. , Гельфгат Е. Л., Алямкина Е. А., Долгова Е. В.; Заявл. 28.08.2008. Опубл. 27.04.2010.

127. Патент РФ № 2388473С2. Средство для разрушения нуклеиновой кислоты и способ разрушения нуклеиновой кислоты. / Есида Синити (ДР), Соедзима Такаси (ДР); Заявл. 17.07.2007. Опубл. 10.05.2010. 6 с.

128. Патент РФ № 2459617 А6. Синтетические комбинации для лечения гипертонии / Зелкха Моррис ,Паран Эстер ,Хирш Керен; Заявл. 10.07.2008. Опубл 27.08.2012

129. Патент РФ № 2475254 С1. Препарат для профилактики и лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта / Волков М. Ю.,Заболоцкая А. А.,Буяновская Н. Я.; Заявл. 13.12.2011. Опубл. 20.02.2013.

130. Патент РФ № 396103348/14. Способ лечения запущенных форм опухоли органов брюшной полости / Каплина Э.Н., Гринев М.В., Цибин Ю.Н. и др.; Заявл. 25.02.1996. Опубл. 10.09.1999.

131. Петров В.И. Соотношение психотропных и антивирусеых свойств в ряду производных 9-(2-феноксиэтил) аденина / В.И. Петров, Н.В. Онищенко, О.Ю. Ананьева, М.С. Новиков, А.А. Озеров // Успехи современного естествознания. - 2004. - №9. - с. 59-60.

132. Северин С. Е. Практикум по биохимии / С. Е. Северин // М.: Московский университет. - 1989. - С. 492.

133. Сикорская А.С. Выделение липидов из отходов масложировой промышленности с применением экстракционного и хроматографического методов / А.С. Сикорская, А.А. Назарова, В.Ф. Селеменев // Сорбционные и хро-матографические процессы. - 2008. - Т. 8. - Вып. 2. - с. 350-354.

134. Складнев Д.А. Метилотрофные бактерии как основа биотехнологического получения стабильно меченых биологически активных соединений / Д.А. Складнев //Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук. Москва. - 2000. - С. 205.

135. Соколов Т.В. Опыт применения препарата Деринат в офтальмологической практике / Т.В. Соколов, О.В. Пшеничников, В.Г. Хейфец, А.А. Миронов // Использование препарата Деринат в различных областях медицины: Мат-лы 1-й Всерос. конф. - М. - 2000. - с. 26-28.

136. Степанов А.Е. Физиологически активные липиды / А.Е. Степанов, Ю.М. Краснопольский, В.И. Швец // М.: Наука. - 1991. - C.135

137. Степанов Е.А. Некоторые аспекты технологии получения липосомаль-ных форм лекарственных препаратов / Е.А. Степанов, Ю.М. Краснопольский, В.И. Швец // Химико-фармацевтический журнал. - 1999. - Т. 33. - №10. - с. 54-63

138. Хаитов Р.М. СПИД / Р.М. Хаитов, Г.А. Игнатьева - М.: Народная Академия культуры и общечеловеческих ценностей. - 1992. - С. 242.

139. Чернышева М.Л. Комплексное лечение вирусных гепатитов «С» с использованием экстракорпоральных методов терапии и препарата Деринат / М.Л. Чернышева // Использование препарата Деринат в различных областях медицины: Мат-лы 1-й Всерос. конф. - М. - 2000. - с. 36-42.

140. Шнеер В. С. О видоспецифичности ДНК: 50 лет спустя / В. С. Шнеер // Биохимия. - 2007. - Т. 72. - №12. - с. 1690-1699.

141. Щукин С.А. Опыт применения препарата Деринат в детской хирургической клинике / С.А. Щукин, А.В. Липин, Л.П. Рубинов // Использование препарата Деринат в различных областях медицины: Мат-лы 1 -й Всерос. конф. - М. - 2000. - с. 11-14.

142. Электронный ресурс; //URL: http://www.pharmvestnik.ru/text/16675.html (дата обращения 18.08.2013). "Фармацевтический вестник": Ноябрь, 2009 №36

143. Эллиот В. Биохимия и молекулярная биология / В. Эллиот, Д. Эллиот // М.: МАИК "Наука/Периодика". - 2002. - С. 444.

утверждаю

Справка о внедрении

Настоящей справкой подтверждается, что при создании опытной установки по комплексной переработки биомассы метанутилизирующих бактерий Ме(ку1ососст сарникпт на предприятии «ГапроХим-БТ» были использованы результаты исследований и рекомендации по оптимальным условиям технологических операций, предложенные Тимошенко Ксенией Андреевной в диссертационной работе.

Предложенные Тимошенко К.А. принципиальные схемы выделения и очистки бактериальных липидов, белковых веществ и дезоксирибонук-леотидов были апробированы на опытной установке вышеуказанного предприятия. В результате были наработаны опытные партии препаратов дезоксирибонуклеотидов, белковых изолятов и гидролизатов, а также фракций липидов.

Полученные препараты по своему физико-химическому составу соответствуют существующим отечественным и зарубежным аналогам.

Научный сотрудник, инженер

Приложение 3 Грамоты и награды

VI МОСКОВСКИЙ МЕЖДУНАРОДНЫЙ КОНГРЕСС

БИОТЕХНОЛОГИЯ:

СОСТОЯНИЕ И ПЕРСПЕКТИВЫ РАЗВИТИЯ

Пмоттьок! Молви Рсссмйим кипм И«уи Министерски ойрапмлмл» и к!\*и РФ Министерство чо»ишг«и«ост» и шдошм РФ Министерство сечьсха'о хшиж'ы РФ Тожов^лроньаллв-и» пнап Рг>

Москва. Новый Арбою, 36/9 (Здание Правительства Москвы)

Поя латроматом Правительства Мосиы

Ршхиммя шдгауя медииянсми нау« Рш.:ииеки иодешк и!Пи:«шиЯ»»СГ1еж»и нгу« Рэсдоски фонд фуцдамеитшшшх мхледаьчп!

Рисплкпм сэи) хтмш>

ЗАО -3*иго-Смк«ии-тпп№тг«-

Москва, Россам 21 - 25 марта 2011

вю

ТЕХНОЛОГИИ

Конкурс молодых ученых на лучшую научно-исследовательскую работу

ДИПЛОМ

награждается Тимошенко Ксения Андреевна за работу

Исследование процесса выделения каротиноидов из галофильных бактерий На1оЬас1егшт Ьа1оЫит

ПрМНИММ иткгрсим »

Прмсмгиь П|«г|а|шмг( имигга перко.

Ч»1И Пр|»ДИ1Ч| ЧССИИСМБМ ДкШМИИ Ч)*

(•МСМКН

European Federation of Chemical Engineering (EFCE), Российская Академия наук. Российская Инженерная Академия, Российская Академия Естественных Наук, Ассоциация «Основные процессы и техника промышленных технологий>, Международная Академия наук экологии, безопасности человека и природы, Комиссия по образованию и науке Общественной молодежной палаты при Госдуме ФС РФ, Российское химическое общество им. Д.И.Менделеева, Межведомственная комиссия Правительства РФ по содействию творческому и научно-техническому развитию детей и молодежи Российской Федерации, Кафаров-Фонд, Национальная система развития научной, творческой и инновационной деятельности молодежи России »Интеграция», Русский инвестиционно-инновационный Фонд «Научная перспектива», Российский инвестиционно-инновационный Фонд 'Научная перспектива»

Министерство образования и науки Российской Федерации

Федеральное Агентство по образованию Российский химико-технологический университет имени Д. И. Менделеева

АТТЕСТАТ

ДИПЛОМАНТА

Международного Менделеевского конкурса научных исследований молодых ученых по химии и химической технологии

Выдан 11 ноября 2011 г., ¿Я ЛФ-049-11

авторскому коллективу в составе:

сЖимошенко <йсения Лндресвна

Аспирант 2 года каф. биотехнологии

Рук. доцент Красношганова Алла Альбертовна Российский химико-технологический университет им. Д.И. Менделеева, Москва

за научное исследование в области химии и химической технологии

Председатель химического Президент Академик Л

гидент Российского ■енделеева, еева ^^

П.Д. САРКИСОВ

Ученый секретарь, директор Российского Фонда «Научная Перспектива», член ЦКК Минобрнауки РФ АкадемикРАЕН __, В.Б.САЖИН

VII Московским международный конгресс

БИОТЕХНОЛОГИЯ: СОСТОЯНИЕ И ПЕРСПЕКТИВЫ РАЗВИТИЯ

При поддержав Департамента науки, промышленное пошляки и предпринимательства города Мопсы

Мнилгвосгюr)0(ij.v«..jH я -л»*РОССИЙСЮ« ®«дгр»иии

n|t!iwu.. i »чХГЯ

игоргсвгм Россшсызи Федвраияй Раосийск>я iMjutwa nty< Российски) жаден« иедиикпскм м|у>

Москва, Новый Арбат, 36/9 (Здание Правительства Москвы)

Poc.'vui I.1J .пугни* i-nw;ic«:uWctirrmui Mi/1 Pn:rH*:*Aí фсмд ф>пд1Мг*игШ1Ыа WC( nUjiáif

России: км cíiín /паки ЗАЛ -Загас-Акнии-inuninoriM-

Москва, Россия 19 22 марта 2013

вго

ТЕХНОЛОГИИ

Конкурс молодых ученых на лучшую научно-исследовательскую работу

ДИПЛОМ

награждается Тимошенко Ксения Андреевна за работу

"Исследование процесса выделения ДНК из бактериальной биомассы МеМуЬсоссиБ сарзиШиэ"

медалью

ПрвдюШ'въ пдотимиют? вомигга. «деиж Россия;«:« »¡дай« -лр> ¡ягя-мж РАМИ » РАСХН. соютаик Росошснаи зиамии uiy.

C1WMC0P «MtVPCA

^Jm'L

ИБВМ

Институ» Омо'еинологий ветеринарной медицины

Г»:ад:адг{дь юи1у:с«:м ммкосии.

manиж РАМН