Основы комплексной переработки биомассы промышленных микроорганизмов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, доктор химических наук Крылов, Игорь Алексеевич

• Крылов, Игорь Алексеевич
• доктор химических наук
• 1998

Оглавление диссертации доктор химических наук Крылов, Игорь Алексеевич

ГЕ.6.

Список принятых в работе сокращений.13.

Глава 1. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.14.

1.1. Объекты исследования.14.

1.2. Материалы и реактивы.14.

1.3. Методы исследования основных стадий получения препаратов КПК и КБВ.16.

1.4. Методы анализа.16.

1.5. Статистическая обработка экспериментальных данных.

Глава 2. ДЕНУКЛЕИНИЗАЦИЯ БИОМАССЫ ПРОМЫШЛЕННЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ.18.

2.1. Получение препаратов микробных полинуклеотидов -РНК и ДНК из дрожжей и бактерий. (Литературные данные).18.

2.2. Разработка стадий выделения и очистки полинуклеотидов дрожжей и бактерий.40.

2.2.1. Экстракция КН.К из дрожжей и бактерий водными и солевыми растворами.40.

2.2.2. Переработка КПК-содержащих экстрактов, выделение и очистка препаратов нуклеиновых кислот.50.

2.2.2.1. Получение бесклеточных экстрактов, содержащих КПК.

2.2.2.2. Осаждение нуклеиновых кислот в изоэлектри-ческой точке.

2.2.2.3. Концентрирование и очистка нуклеиновых кислот ультрафильтрацией.71,

2.2.2.4. Разложение нуклеопротеидов в среде ортофосфата.74.

2.2.2.5. Получение сухих форм препаратов РНК и концентрата ДНК.78.

Глава 3. ХИМИЧЕСКАЯ И ЭНЗИМАТИЧЕСКАЯ ДЕПОЛИМЕРИЗАЦИЯ РНК ДО НУКЛЕОЗИДОВ И ПУРИНОВЫХ

ОСНОВАНИЙ.83.

3.1. Получение препаратов нуклеозидов из РНК, гидроли зованной химическими агентами и ферментами.

Литературные данные.).,.83,

3.2. Получение препаратов нуклеозидов из РНК.94.

3.2.1. Гидролиз РНК до нуклеозидов под действием гидроксидов свинца и кальция.94.

3.2.2. Гидролиз РНК до нуклеозидов под действием ацетата аммония.106.

3.2.3. Гидролиз РНК до нуклеозидов под действием ферментного препарата Strept.om.yces соеНсо1ог.Ю8.

3.2.4. Переработка различных нуклеозидсодержащих гидролнзатов РНК. Особенности получения кристаллических препаратов нуклеозидов.112.

3.3. Получение пуриновых оснований нуклеиновых кислот из РНК.146.

3.3.1. Получение пуриновых оснований нуклеиновых кислот. (Литер атурные данные.).Л 46.

3.3.2. Гидролиз РНК до пуриновых оснований растворами минер альеых кислот.150,

3.3.3. Кинетика отщепления пуриновых оснований при кислотном гидролизе РНК.Л51.

3.3.4. Переработка кислотных гидролнзатов РНК, получение кристалличнских препаратов аденина и гуанина.156.

Глина 4. ХИМИЧЕСКИЕ И ЭНЗИМАТИЧЕСКИЕ ТРАНСФОРМАЦИИ ГУАНОЗИНА И АДЕНОЗИНА.163.

4.1. Получение препаратов гуанина из гуанозина, инозина из аденозина и фосфорилирование аденозина ферментными системами дрожжей. (Литературные данные.) .164,

4.2. Трансформация гуанозина в гуанин и О-рибозу.185.

4.2.1. Кинетика образования гуанина и О-рибозы при гидролизе гуанозина растворами серной кислоты. .185.

4.2.2. Переработка сернокислотных гидролизатов гуанозина, получение кисталлических препаратов гуанина и 1)-рибозы.189.

4.3. Трансформация аденозина в инозин.190.

4.3.1. Дезаминирование аденозина в инозин под действием нитрита натрия в растворе уксусной кислоты.190.

4.3.2. Переработка гидролизата аденозина, получение кристаллического препарата инозина.192.

4.4. Трансформация аденозина в 5'-аденозинфосфаты.193.

4.4.1. Фосфорилирование аденозина до 5'-аденозинфос-фатов ферментными системами клеток пивных дрожжей.193.

4.4.2. Переработка растворов, содержащих продукты фосфор ил ир ов ания аденозина, получение кристаллических препаратов 5'-аденозиифосфатов.

4.4.2.1. Отделение отработанной биомассы дрожжей, получение растворов адсиозинфосфатов.

4.4.2.2. Разделение и очистка 5'-аденозинфосфатов ионным обменом.214, а « лпуттрптвднизация денукжинизированнои :сы ПРОМЫШЛЕННЫХ микроорганиз

5.1. Выделение белков из клеток дрожжей и бактерий, получение препаратов белковых веществ с различной степенью гидролиза. (Литературные данные.).

5.2. Выделение белковых веществкислотным гидролизом биомассы дрожжей и бактерий.

5.3. Выделение белковых веществ ферментолизом дрожжей и бактерий.266.

5.4. Гидролиз микробных белков ферментным комплексом поджелудочной железы.278.

5.5. Переработка экстрактов и ферментолизатов белковых веществ, получение препарата аминокислот и низших пептидов.284.

ВЫВОДЫ.295.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Основы комплексной переработки биомассы промышленных микроорганизмов»

Актуальность проблемы: Одним из достижений современной промышленной биотехнологии является разработка технологий и создание крупнотомнажноI-о производства микробной биомассы (дрожжей и бактерий). В этом отношении особое место среди промышленно развитых стран занимает Россия, поскольку ей принадлежит приоритет в области разработанных технологий и она располагает большей частью производственных мощностей. Наличие крупного промышленного производства микробной биомассы и результаты научных исследований определили перспективу его дальнейшего развития пли следующий этап в биотехнологии, где биомасса микроорганизмов уже не является конечным продуктом, а рассматривается как сырье для получения различных по свойствам и назначению препаратов, преде всего, белковой, липидной и нуклеотидной природы. Отечественные и зарубежные авторы на основе различных подходов разработали и реализовали в опытно-промышленном производстве различные варианты технологий комплексной переработки биомассы дрожжей и бактерий, которые в отличие от индивидуальных производств позволяют добиться лучших технико-экономических показателей. Сегодня можно считать разработанными для крупнотоннажного производства разные варианты технологий выделения из микроорганизмов липидных фракций и их переработки до индивидуальных соединений, получения белковых концентратов, изолятов и фермеитолизатов с различной степенью гидролиза и очистки белковых веществ. Объединение германских фирм (ОГФ) Хёхст-Уд') перерабатывает сухую биомассу бактерий Ме-1Ьу1отопаз с1ага, выращенных на метаноле, в гамму продуктов, состоящую из отдельных фракций липидов, эргостерина, убихинона <3-10, белкового концентрата как пищевой добавки, ДНК и 5'-монорибонуклеоти-дов. Отечественная технология основывается на ряде схем комплексной переработки биомассы дрожжей и бактерий. Одна из них аналогично процессу ОГФ Хёхст-Удэ предусматривает переработку липидных фракций микробных клеток, а образующийся обезжиренный шрот - в кормовой продукт. Другие преследуют цель получения белковых изолятов пищевого и медицинского назначения, пищевкусовой добавки, содержащей продукты гидролиза нуклеиновых кислот, и кормового продукта на основе клеточного шлама и неизвлечениого белка. Общим недостатком всех вышеуказанных технологий является невысокая рентабельность продукции комплексного производства, что сдерживает его развитие. Высокорентабельную продукцию можно получить, если действующие биохимические заводы перейдут на выпуск фармацевтических препаратов или субстанций для них, изготовленных на основе компонентов микробгёых клеток. И здесь наибольший интерес представляет шлдсл ей не и переработка биополимеров нуклеотидной и белковой природы. Успехи в области многотоннажного производства микробных полинуклеогидов, особенно РНК, невелики. Известен процесс японской фирмы Kancgaruchy Chemical Industry Ltd, которая из дрожжей Candida utilis, выращенных па мелассе сахарного тростника, щелочной экстракцией выделяет нуклеопротеиды и перерабатывает их в продукты гидролиза РНК. Интерес к РНК и КНК проявляют практически все фармацевтические фирмы промышленно раз-витых стран мира, выпускающие препараты нуклеотидной природа. Их противовирусная группа относится к числу наиболее дорогостоящих ле-карственных средств. Отсутствие их производства в России усиливает актуальность проблемы. Сегодня выделение КНК и КБВ из микробных клеток и получение их модифицированных аналогов на действующих биохимических предприятиях может быть реализовано только по варианту комплексной переработки биомассы промышленных микроорганизмов при минимуме затрат на сырье, энергию и природоохранные системы. Такой подход ни только не исключает производство кормового белка, а, наоборот, сохраняет его в виде частично денуклеинизированных и депро-теинизированных микробных клеток.

При разработке технологий комплексной переработки дрожжей или бактерий для современных биохимических заводов должны учитываться их сырьевая база, энерговооруженность, низкая категория пожароопас-иости производства, использование водных сред на всех стадиях технологического процесса, наличие станции (цехов) биологической очистки стоков и опыт рабо ты производственного персонала. Все это позволяет считать наиболее перспективными те технологии, которые предполагают проведение основных стадий в водных средах с использованием традиционного для данных предприятий источников сырья и оборудования. Больше всего чтим условиям отвечаю т такие компоненты микробных клеток, как полпнхклеотиды и белковые вещества.

Цель и задачи исследования: Цель исследований состояла в разработке концепции второго этапа развития биотехнологии промыш-ленных микроорганизмов и научных основ глубокой комплексной пере-работки микробного сырья дня получения очищенных препаратов КНК и КБВ в системе взаимосочетающихся ресурсо- и энергосберегающих малоотходных технологий в условиях производства кормового белка.

В задачу работы входило:

- разработать высокоэффективные не уступающие лучшим мировым стандартам технологии глубокой переработки микробиологического сырья и получения очищенных препаратов полниуклеотидов и белковых веществ;

- для создания алгоритма управления основными стадиями технологического процесса получения микробных полинуклеотидов и деполимеризации белковых веществ в низко молекулярные продукты разработать математические модели процессов;

- разработать технологию очищенных препаратов КНК и КБВ на основе продуктов гидролиза микробных РНК и белков; для расширения области применения белковых гидролизатов провести поиск нетрадиционных сфер их применения;

- разработать нормативно-техническую документацию для организации опытного производства KHK и КБ В.

Научная новизна исследований состоит в разработке научно-обоснованной концепции второго этапа развития биотехнологии крупнотоннажного производства микробной биомассы, предусматривающего комплексную переработку промышленных микроорганизмов, основаной на выделении из дрожжей и бактерий нуклеиновых кислот и белковых веществ и их трансформации в наиболее ценные продукты или перспективные субстанции для применения в различных областях хозяйственной деятельности.

Разработ аны нетрадиционные методы выделения из микробных клеток полинуклеотидов и их очистки в рациональном химическом процессе, исключающем использование протеолнтических ферментов и фенолсо-держащпх растворов:

- впервые разработаны приемы выделения из метанокисляющих бактерий Methylococcus capsulatus как РНК, так и ДНК без применения органических растворителей:

- разработаны математические модели реакционных взаимодействий для всех основных стадий получения очищенных полинуклеотидов: экстракции ПК водными и солевыми растворами; ультракоицентрирова-ния бесклеточных экстрактов, осаждения и разложения белково-нуклеи-новых комплексов в среде ортофосфата; выявлены параметры для прогнозирования доли белковых примесей в полинуклеотидных препаратах;

- установлены основные закономерности гидролитического расщепления РНК до нуклсозидов и пуринов под действием химических агентов и ферментов. Проведен сравнительный анализ промышленных способов гидролиза РНК и переработки различных гидролизатов в очищенные препараты KHK;

- разработаны технологические приемы глубокой переработки отдельных KHK в водных растворах: химические трансформации Ado в Ino,

Guo в Gua и D-рибозу, биофосфолирнрование Ado в 5'-аденозинфосфаты ферментами пивных дрожжей с получением очищенных препаратов.

Впервые по результатам кинетических исследований основных стадий выделения ПК, извлечения и гидролиза белков из дрожжей и бактерий под действием химических агентов и технических ферментов (про-тосубтилина и ферментной системы поджелудочной железы) разработаны математические модели.

Расширена область применения белковых гидролизатов: впервые показана возможность их использования для выделения металлов (на примере золота, серебра и меди) из второсортног о сырья и отходов.

Практически» ценность. Преимуществами получения KHK и КБВ при комплексной переработке микробного сырья являются: 1) использование сырьевой базы производства кормового белка; 2) применение водных реагентов для проведения большинства стадий; 3) регенерация малотоксичных органических растворителей; 4) отсутствие образования токсичных соединений; 5) малоотходиость; 6) замкнутость циклов, предусматривающая возрат твердых отходов и значительной части жидких стоков в основное производство; 7) высокая экономическая эффективность за счет выпуска продуктов разной степени очистки и минимизации затрат на природоохранные мероприятия.

Разработаны два варианта использования солей ортофосфорной кислоты в технологии получения очищенных полинуклеотидов: 1) для малотоннажного производства в составе окстрагента, извлекающего в ра-створ нуклеиновые кнслоы, свободные от белковой примеси; 2) для крупнотоннажного производства в составе раствора, разлагающего нук-леопротеиды с выделением свободных полинуклеотидов, исключающих в каждом случае применение протеолитических ферментов и фенолсодер-жащих растворов.

Проведение стадии осаждения нуклеопротеидов РНК отстаиванием из сконцентрированных ультрафильтрацией растворов позволило сокра

1 ц> I тить время процесса не менее, чем в 5 раз и энергозатраты на получение холода.

Разработан критерий качества перерабатываемых в KHK поли-нуклеотидов - доля белковой примеси в среде. При ее содержании до 5% переработка получаемых гидролизатов или ферментолизатов РНК требует минимальных норм расхода сорбентов (ионитов). Выявлена линейная корреляция между значением критерия и нормой расхода ионитов или количеством жидких стоков с ионообменных колонн.

На основании результатов апробации различных способов получения препаратов очищенной РНК в производственных' условиях на опытных и опытно-промышленных установках ВИЦ антибиотиков, Киришско-го БХЗ и Светлоярского БВК подготовлена нормативно-тех-ническая документация и исходные данные на проект ирование опытного производства РНК мощностью 1 т в год.

Созданы математические модели основных стадий получения поли-нуклеотидов, экстракции и гидролиза белковых веществ для создания алгоритма управления ими.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы были доложены на 2-ой Республиканской конференции "Проблемы охраны окружающей среды в районах с интенсивно развивающейся промышленностью" (Кемерово, 1982); 3-ем Симпозиуме социалистических стран по биотехнологии (Братислава, 1983); J.V-сй Всесоюзной конференции по ПАВ и сырью для их производства (Волгодонск, 1984); HI-ем Всесоюзном совещании по аминокислотам (Ереван, 1984); 4-ом Симпозиуме социалистических стран по биотехнологии (Варна, 1986); Всесоюзной конференции "Аминокислоты для сельского хозяйства, пищевой промыш-ленности, медицины и научных исследований" (Ереван, 1988); Всесоюзной научно-технической конференции "Итоги и перспекйвы использования природных и синтетических ВМС в производстве пищи" (Суздаль, 1991); III German-russian Workshop Biotechnology (Berlin, 1994), Всероссийской научной конференции "Химия и технология лекарственшлх средств" (С-Пе-тербург -1994), III Международный конгресс "Окружающая Среда для нас и будущих поколений: экология, бизнес и экологическое образование" (Са-мара -1998).

Публнкаиия результатов »есле.кшпшш: По материалам диссертации опубликованы 23 статьи, тезисы 11 докладов и получено 9 авторских свидетельств и патен тов РФ па изобретения.

Объем и структура работы: Диссертация изложена на . страницах машинописного текста, содержит . рисунков, . таблицы и 5 схем. Работа состоит из введения, главы общей характеристики объектов и методов исследования, 4-х глав собственных исследований (каждой главе предшествует анализ литературных данных), заключения, выводов и списка использованной литературы (. - источника, из них . - на иностранных языках). Материалы , имеющие практическое значение и подтверждающие основные результаты работы, представлены в приложении.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Крылов, Игорь Алексеевич

В Ы В оды i. по результатам теоретических иеайдожш.йи и хх гщакхитес:-;сй ' - .-7 «г 'i», т,- - ,-т г < I < I , I • Jt VJ^ ' ' 'ÍÜ иых. микроорганизмов lis. Oüxxxv cxcxcmxi гкххохо сочетания ресурса» и энергосберегающих технологий, не зависящих от природы субстрата, глубокой комплексной переработки микробного сырья, включающая денуклгинизацию и депротеикизацию микробных клеток; последу ( s^rr/íj !„,! j « т í ъ pry

1 .'. "> „.■• • . ' . л зелковой при

• 3 s . Г! ' " Í-H ' 1 i . 1 ' 1 ч r<- -í - х ( i Л ® I' > lib IH ¡I ( I ( i f >л i i ¡f г

3YVÍ-? ТГТТ' > < А А

У Устано&шды в пределах варьируемых параметров (условий)

У. Г Q-.TVS 7 ЧУ. р -Г- 'ТП* -f pit тг YV у О ТГ- ^ Д WVJ лчтпг 7Г Г"'(Г*»''Ч ? ТТ/Л» '7Т "ТУТО f'^TTi ТТ-?'Ч <"> Of V wj • ! I { it А 3./Л1 » л -г i * А q/ Vi^ г

Созданы математические модели основных стадии выделения, очистки и возможнг , . ; , . ^ . . жен и мета» » * » . • > » 7 • t%

- - -д - у ' ■ ■ : -у- г*-, -> - 1 - у : - - , --- ■ ':' --- <-■■. т -■' - ту". '"Л-i"-, С ? -г > > ------- - - г., ,' т.у-'-;.'

-< , J, I j I ¡1 , < *< м. Г ('S, f { <1 >,!-}(' -1 <"s » / f *М i . f U \ . . .J / vf.-x л-гг-'д.-гтс,-.-.,-.," . к.,-, -| f f-T. ? 'ti x v у .'x i i >"e-tv ^ г„.т, основ" - ' ' " - t ' и , £ ii.íwxxx¿xvx'i -x¡¿;1;.x - xx ií cúxpxi.iipi:-iwc ixlipilx i'exhojioi h'-íüixcüi'» х.".схих и о5-1хстхи микробных попинуклеотидов: 2) увели технологического процесса применение холодильных машин и поре

ЙЛ'ЛТг -Г- 7 - '. " . . ¡ТЭТЛ.ТЯО!^ Л П^Г!': А 1 ■■ ."г . ' Г ■ .--^У', г V * I . V. ~ ,- г V - '' и А , , 1 Л „ „ Ч |> , ». ' ^ . . А. - Л 1 I 1 . < , II I ггтт>г( а г f

- д Л. Л . . г. ./ '■:./ л.и . >: , ^ Ч. У^:.". ,:'. / О.1 . 7 V .:■. А Л Са- 1. '.л'.; 'О А'аА . / . . Ж .А . - . л . ' >- <-. . . ь." (¡я ¡> ,, ( (, / (v, ,<*., ^¿^м*! 1 • 1 ь/н "ч*-чи1*-1< 41 ¡е.,^ » икислот,

•/*•;. . , . .- . -., - . . . . ,,. . ,. 'л ими • и" 4 л .v /. .1 1' хк 7 ^ ^ ; I ; и ' * / ^ е t I I * * э в я н ^ н}ч < ' . «, i >■/.*< г ! 'к- , i -i й, О'&ЗрЯООТЕНЫ ГСХНО31ОГЙЧ01Ж!И0 ЦрИеМЫ ЛЙМИЧС-1Ж0И 1

V С ■ 1 "Ч-Ж О Н'Ч ! I 1 . I 1 ' "> ^

- . 1 "т)йяв среде уксусной кислоi Ь I"/(,IJ 1 i. J<1 j с и

1;^ ,'Г. г : г-. -,-.' '- ' у --" i » / í г ií ¿ t i | ' í 1 ' f > ¡ л 1

VJi.í.üU . < ' Si г r чц T г í^f i

Г ^ПП'ЮГ тгн ой, ii ) n j -i sí •< ни очистки для использования в медицинской, фармацевтической, пищевой промышленности, в сельском хозяйстве и других отраслях хозяйственной деятельности. По результатам расчетов организация выпуска гаммы препаратов различной степени очистки в условиях современных биохимических заводов позволяет существенно увеличить рентабельность производства кормового микробного белка за счет реализации более дорогостоящей продукции.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Одним из достижений современной биотехнологии в бывшем СССР является создание крупнотоннажного производства белка. Его производственные мощности достигали 1,5 млн. т кормовых дрожжей в год, культивируемых на различных субстратах. Нельзя не отметить соданное в том же СССР крупное опытно-промышленное производство кормового белка мощностью до 12 тыс т в год бактерий, выращиваемых на природном газе. Накопленный производственный опыт этими предприятиями уникален, поскольку ряд промышленно развитых стран имеют аналогичные заводы, однако они за редким исключением законсервированы, а действующие мощности в мире не превышают 10-ков тыс. т в год. Среди них особое место занимает Япония, где фирма Kanegafuchi Chemical Industry Co., Ltd является едва ли не единственным обладателем патентов, описывающих одновременное получение микробных РНК и белка, и которая производит не менее 23 тыс. т в год кормовых дрожжей вида Candida utilis, выращиваемых на мелассе сахарного тростника, причем основной свой научно-технический потенциал фирма использует для повышения содержания РНК в дрожжах и повышению ее выхода. При этом необходимо отметить, что технология получения РНК сводится к выделению иуклеопротендов, перерабатываемых в дальнейшем в продукты гидролиза полири-бонуклеотидов. И нет оснований сомневаться в том, что деятельность японских предприятий малорентабельна.

В СССР РНК с 1964г. монопольно выпускал НПО "Биолар" (ранее завод Биохимреактнвов в г.Олайне Латв.ССР) из кормовых дрожжей, производимых Слокским ЦБК, а в последние годы работы предприятия из наприна Новополоцкого завода БВК. Помимо РНК, НПО "Биолар" мог производить в ограниченном объеме практически все продукты ее гидролиза и трансформации, используя в качестве гидролизующего агента гидр оксид свинца. Его сотрудничество с Новополоцким заводом БВК позволило наладить в Беларуссии опытно-промышленное производство аденозина и гуанозина для Белмедпре-паратов из очищенной РНК, гидролизуемой гидр оксидом кальция. С распадом СССР оба эти производства для России оказались утраченными. Оставшуюся от НПО "Биолар" в бывшем Минхимпроме СССР нормативно-техническую документацию сегодня необходимо считать как устаревшую, непригодную к применению в современных условиях, прежде всего, по требованиям экологической безопасности. В свое время, около 5 лет назад требования экологии и повышенные энергозатраты привели к полной остановки производств на НПО "Биолар" уже в независимой Латвии и в таком состоянии оно пребывает сегодня. Аналогичная ситуация, обусловленная высокими ценами на сырье и энергоносители, сложилась и в России в связи с остановом всех биохимзаводов по производству кормового белка из традиционного сырья, способного обеспечить получение добр ока честв еш гой биомассы для выделения из нее полинуклеотидов и белковых веществ. Сегодня основная проблема для этих предприятий связана с их рентабельностью и рынком сбыта продукции. И нет особых надежд на будущее, что эти предприятия станут высокорентабельными после преодоления экономического кризиса в России, если они, по-прежнему, будут соо-риенгированы только на выпуск традиционной продукции и на традиционного потребителя. Даже, если это вывод подвергнуть сомнению, то, учитывая опыт промышленио развитых стран (не только Японии, но и Германии, Италии, Австрии и Чехии и др.), следует признать, что биотехнология многотоннажного производства должна испытать следующий этап своего развития. Он должен предусматривать, в первую очередь, создание технологий переработки микробиологического сырья с получением необходимых и полезных продуктов (препаратов), которые невозможно получать по технологиям химического синтеза или быть им конкурентноспосо611ыми, обеспечивая, тем самым, рентабельность микробиологическому производству.

И здесь, по нашему мнению, кажутся наиболее перспективными препараты, технология получения которых рассмотрены в данной работе.

Среди возможных технологических приемов и подходов к разработке технологических схем получения различных препаратов, мы старались выбрать такие, которые наиболее просто могут быть реализованы на современных биохимзаводах. При этом, мы не ставили перед собой цель ликвидировать производство кормового белка, а наоборот, сохранить его как продукцию не только, необходимую для животноводства и птицеводства, но и как способ организации дополнительных малоотходных производств при биохимзаводах.

Разработанные нами новые технологические приемы мы старались апробировать в условиях работы опытных и опытно-промышленных установок, действовавших в разное время на отдельных предприятиях отрасли. К сожалению, в связи с прекращением их деятельности, многие разработки не удалось проверить на промышленном оборудовании, хотя освоить технологию получения препаратов очищенной РНК удалось.

Немаловажным кажется выбор пути восстановления производства кормового белка на новом уровне. Поскольку невозможно рассчитывать на значительные инвестиции, а в современных условиях особенно, со стороны государства, все-таки Федеральной программа необходима. Также невозможно надеяться на значительные средства со стороны частных инвесторов, если ставить задачу перепрофилирования хотя бы одного завода. Более вероятной представляется следующая схема возобновления ранее действующего и будущих производств, состоящая из ряда этапов: создание опытно-промышленной установки по комплексной переработки биомассы дрожжей, использующая в качестве сырья пивные или пекарские дрожжи (как это было в свое время в Германии), из которых выделяется РНК и компоненты дрожжевого экстракта. Последние, наряду с денуклеинизированной биомассой после высушивания реализуются как товарные продукты -певый для нужд бактериологии, второй - как кормовой продукт. Выделенная и очищенная РНК гидролизуется РНК-азой поджелудочной железы с последующей переработкой ее в известный препарат медицинского назначения ЭНКАД, получаемый в виде субстанции или в ампулированной форме и также реализуется как товарный продукт. Попутно отметим, что производство данного препарата весьма актуально, в мире его никто не производит, он является сугубо отечественной разработкой и считается незаменимым у нас и за рубежом при профилактике и послеоперационном лечении ряда болезней глаз.

Следующим этапом важно организовать производство смеси аминокислот из белоксодержащих отходов сначала для нужд бактериологии, а затем как препарата для парентеральног о питания.

По мере освоения рынка следует ожидать повышения спроса на выпускаемую продукцию, т.е. на увеличение объема выпуска. И здесь можно рассчитывать на поэтапную передачу части технологий на один из биохимзаводов, который должен возродить на относительно дешевом субстрате производство кормовых дрожжей с выделением из них РНК и пептонов, которые будут являться для него товарной продукцией. Приобретаемая первым предприятием РНК должна перерабатываться в продукты ее гидролиза (нуклеозиды, а пуриновые основания из РНК можно начинать производить на биохимзаводе) и трансформации (аденозинфосфаты медицинского назначения и для научных исследований в виде биохимреактивов).

•-ч а ледующии этап предусматривает вариант расширяющейся" спирали", при котором по мере освоения первым предприятием различных технологий они передаются биохимзаводу.

Такой подход представляется наиболее оптимальным, поскольку не предполагает единовременного вложения больших инвестиций, за счет созданного высокорентабельного опытно-промышленного производства даег возможность относительно быстро возвращать средства инвестору, позволяет готовить квалифицированные кадры для биохимзавода, создает ему рабочие места и обеспечивает интерес всем участникам производства.

Список литературы диссертационного исследования доктор химических наук Крылов, Игорь Алексеевич, 1998 год

1. Практикум по биохимии./Под ред. Северина С.Е. М.: МГУ,1989, 509 С.

2. В кн.: Кошелева Н.Ф., Головиной Н.К. Опыт использования микробных пептидаз в приготовлении белковых гидролизатов для парентерального питания. Рига: Зинатне, 1972, с. 157-162.

3. В кн.: Лебедева Н.Н., Манакова М.Н., Швеца В.Ф. Теория технологических процессов основного органического и нефтехимического синтеза. М.: Химия, 1975, с. 258-263.

4. Трубачев И.Н., Щитова Л.Ю. Способ извлечения нуклеиновых кислот из водородокисляюших бактерий Alcaligenes Eutrophus Z-1. А.с. 1661217 (СССР), C12P 19/34, C07H 21/00. 0публ.07.09.89.

5. Подгорный В.Ф., Гурьев В.П., Клименко В.П. и др. Способ получения высокополимерной РНК из дрожжей. А.с. 936701 (СССР), GO IN 33/48. Опубл. 05.03.85.

6. Рогожин С.В., Мамцис A.M., Вальковский Д.Г. Комплексное выделение нуклеиновых кислот и суммарного белка из дрожжей. -Прикладная биохимия и микробиология, 1970, т. ГУ, № 6, с. 57-62.

7. Mayer М., Woernle R. Chemie - Ing. Technik, 1985, 57, № 2, p. 152-153.

8. В кн.: Нуклеиновые кислоты. /Под ред. Збарского И.Б., М.: Мир, 1966, с. 17.

9. Srinivasan Damodaran, Sohn Е. Kinselia. The use Chaotropic salts for separation of Ribonucleic acids and proteins from yeast Nucleopro-teins. Biotecnology and Bio engineering, 1983, Vol. XXV, p. 761-770.

10. Achor Icoh M., Richardson Tom, Draper Norman R. Effect of treating Candida utilis with acid or alkali to remove medeic acids on the quality of the protein. S. Agr. and Food Chem., 1981, Vol. 29, №1, p. 2733.

11. Akin Cavit, Chao Kwei С. Ammonia extraction of unicellular microorganisms. Пат. 3775393 (США), A23J 3/00. Опубл. 15.03.80.

12. Alvarez R., Aguila В. Cinética de liberación de ácidos nucleicos y proteínas durate el tratamiento térmico con hidroxido ele amonio en levadura panadera. Rev. cienc. biol., 1983, 14, № 2, p.345-354.

13. Tajima Makoto, Yoshikawa Seiji. Changes of nucleic acids in the preparation process of cell protein isolates from yeast (Sacch. serev.). Agr. and Biol. Chem., 1975, vol.39, № 3, p.611-616.

14. Гранатская Т.А., Плациыда В.А. и др. Суммарное выделение белка из водородных бактерий. Изв. АН СССР. Сер. биол. и хим. науки, 1982, № 5, с. 30-33.

15. Daly William М., Ruiz Leonard P. Reduction of RNA in single cell protein in conjuction with fiber formation. Biotehnol. and Bio eng., 1974, vol.16, № 2, p. 285-287.

16. Vukari L., Link о M. A Process for reduction of the nucleic acid content of SCP. In: 5th Int. Ferment. Symp., 4th Int. Spec. Symp. Yeast., Abst. Pap., 1976, Berlin, p. 208.

17. Земсков B.M., Лидак М.Ю., Земсков A.M., Микстайс УЛ. Низкомолекулярная РНК получение, гидролиз и применение в медицине, 1985, Рига: Зинатне, 191 С.

18. Nakabayashi Yutaka. Method for treatment of mycroorganisms. Dai-Nippon Sugar Manufacturing Co., Ltd.. Пат. 4021303 (США), A23J 3/00. Опубл. 23.07.85.

19. Lee J., Simard R.E. Simple process for the reduction in the nucleic asid content in yeast. Appl. Microbiol., 1975, vol.29, № 1, p. 59-62.

20. Безруков М.Г. Принципы выделения и регулирования свойств белка из биомассы одноклеточных. Дие. докт. хим. наук. М., 1988. Рукопись.

21. Trevelyan William Е. Chemical methods for the purine content of baker's yeast and form of single-cell protein. J. Sci. Food and Agr., 1976, vol.27, № 3, p. 225-230.

22. Hopkins Thomas R. Producshion of protein with reduced nucleic asid. Provesto Corp.. Пат. 4341802 (США), A23L 1/28. Опубл. 15.05.78.

23. Опыты по денуклеинизации дрожжей для использования их в пищевых целях. Висш. ин-т хранит, и вкус, пром-ст., Пловдив, 1980, 27, № !, с. 215-233.

24. Tannenbaum Steven R., Sinskey Anthony J., Maul Stephen B. Process for reducing nucleic acid content of yeast and bacteria. Massachusetts Institute of Technology. Пат. 3968009 (США), C12C. Опубл. 06.07.76.

25. Способ понижения содержания нуклеиновых кислот в биомассе микроорганизмов. Пат. 152690 (ГДР), C12N 1/08, A23J 1/18. Опубл. 07.08.79.

26. WeiBlach Franz, Homes Eckart, Lux Gertraut, Sawistowsky Joachim. Verfahen zur Herstellung von nucleisaurearmem Bacterien-proteinkonzentrat. Пат. 161243 A3 (ГДР), C12N 1/08. Опубл. 03.02.80.

27. Yang Iiuei-Msiung, Thayer D.W., Yang S.P, Reduction of endogenous nucleic acid in a single-cell protein. Appl. and Environ. Microbiol., 1979, vol. 38, № 1, p. 143-147.

28. Сапера A., Pieber M., Romero C., Toha J.C. A Method of large reduction of the nucleic acid content of yeast. Biotechnology and Bioengineermg, 1972, vol. XIY, p. 173-177.

29. Бограчева Т.Я., Браудо Е.Е., Гринберг В .Я. и др. Способ получения белка из дезинтеграта биомассы дрожжей. Ах. 1333286 (СССР), A23J 1/18, опубл. 17.07.89.

30. Мамцис A.M., Николаева В.В., Андреев С.А. и др. Способ выделения белков и нуклеиновых кислот из белково-нуклеиновых смесей.- А.с. 960261 (СССР), С12Р 21/00, A23J 1/18. Опубл. 17.08.83.

31. Shetty K.S., Kinsella S.E. Preparation of yeast protein isolate with low nucleic acid suceinylation. J. Food Sci., 1979, vol. 44, № 3, p. 633-638.

32. A.C. СССР 754857, C12P 1/00.

33. Выделение белкового материала с пониженным содержанием нуклеиновых кислот. Пат. 4348479 (США), A23J 1/18. Опубл. 20.07. 80.

34. Станиславский Е.С., Рогожин С.В., Мамцис A.M. и др. Дезинтеграция микроорганизмов. / Под ред. Скрябина Г.К. М.: 1978.

35. Рогожин С.В., Вальковский Д.Г., Мамцис A.M. Способ последовательного выделения липидов, нуклеиновых кислот и белков из клеток микроорганизмов. А.с. 274059 (СССР), C12N 1/00. Опубл. 17. 03.75

36. Барай В.Н., Логачева А.И., Цвигун И.В. и др. Способ получения рибонуклеиновой кислоты из клеток дрожжей. А.с. 1708845 (СССР), C12N 15/01. Опубл. 25.09.80.

37. Nicolajwski Н.Е., Dichschneit R., Buetner W., Nondheim Willi. Способ получения белковых концентратов без вкуса и запаха и дрожжевых экстрактов с одновременным выделением нуклеиновых кислот.- Пат. 156875 (ГДР), C12N 1/08. Опубл. 07.10.80.

38. Бранинь Л.Б., Иргена A.M., Сар аз дыня Р.Э. Способ получения рибонуклеиновой кислоты. А.с. 215429 (СССР), C12D. Опубл. 03.04.67.

39. Nase R., Gonzales А.С. Nucleic acid reduction from yeast. Activation of intracellular. Acta biotehnol., 1985, vol. 5, № 1, p. 91-100.

40. Method for separation and recovery of proteins and nucleic acids from nucleoproteins using water destrueturing salts. Пат. 414086 (США), A23J1/18. Опубл. 05.09.85.

41. Lawford G.R., I lewis P.N. isolation of microbiae protein with reduced nucleic acid content. Пат. США 281632, кл. 260/112 R. George Weston Ltd.. Опубл. 18.05.82.

42. Долобоская А.С., Щетинин А.И. Способ выделения нуклеиновых кислот из активного ила. А.с. 548614 (СССР), С07М 21/00. Опубл. 17.09.79.

43. Dainodaran S. Removal of nucleic Acids from yeast nucleopro-tein. Complexes by sulfitolysis. S. Agric. Food С hem., 1986, vol.34, p. 2025.

44. Damodaran S. Removal of nucleic Acids from yeast nucleopro-tein Complexes by sulfitolysis. S. Agric. Food Chem., 1986, vol.34, p. 2630.

45. Production d'aside ribonucleigue a portir de levure. liar.1310199 (Франция), CI 2D. Опубл. 13.11.82.

46. Бринкманис P.A., Иргена A.M., Рубенис О.С., Лиепиня В.А. Способ получения биологически активных веществ. А.с. 465417 (СССР), С1213 13/06. Опубл. 12.05.85.

47. Рубенис О.С. Бринкманис Р.А., Ирген A.M., Лиепиня В.А., Тенисон Р.А. Прикладная биохимия и микробиология, 1976, т.XII, вып. 3, с. 403-407.

48. Опытно-промышленный регламент на производство дрожжевой РНК (1,5 т в год), 1964, НПО "Биохпмреактив", г. Олайне, Латв. ССР.

49. Крылов И.А., Маркина Н.С., Красноштанова А.А., Гунин В.А., Манаков М.Н. Выбор оптимальной схемы получения дрожжевой РНК в условиях современных биохимзаводов БВК и лизина. Биотехнология, 1992, № 3, с. 79-82.

50. Березии И.А., Клееов A.A. Практический курс химической и ферментативной кинетики. М.: МГУ, 1976, 320 С.

51. В кн.: Гороновского И.Т., Назаренко Ю.ГГ, Некряч Е.Ф. Краткий справочник химика. Киев: Наукова думка, 1974, с. 768.

52. ТУ 64-18-05-89. Тимидин, ПО "Восток", Киров, 1989.

53. ТУ 6-09-23-252-82. Гидролизат рибонуклеиновой кислоты, предприятие "Биохимреактив", Олайне, 1982.

54. ВФС 42-1768-87. Раствор энкада 3,5%-ный для инъекций, ФС 42-1781-82. Натрия нуклеинат.

55. Бейли Дж., Оллис Д. Основы биохимической инженерии. /Пер. с англ. в 2-х частях, ч. 2. М.: Мир, 1989, 590 С.

56. Дытнерский Ю.И. Баромембраниые процессы. Теория и расчет. М.: Химия, 1986, 272 С.

57. Волкова Н.В. Разработка технологии микробных РНК и ДНК из метанутилизирующих бактерий. Дис. . канд. хим. наук, М., 1996. Рукопись.

58. By Тхи Фыонг Ань. Разработка основ технологии препаратов РНК из дрожжей. Дис.канд. хим. наук, М., 1997. Рукопись.

59. Промышленный регламент № 283 на производство рибоксина. Пензенский завод медицинских препаратов. Пенза, 1983.

60. Levene P.A., Jacobs W.A. Ber., 1910,43, 3150 .

61. Loring H.S., Ordway G., Pierce J.G. J. Biol. Chem., 1948, 176, p. 1123.

62. Levene P.A., Bass L.W., Nucleic Asids. American Chemical Society Monograph Series., N.Y., 1931.

63. Bredereck H., Martini A., Richter F. Ber., 1941, 74, 694.

64. Bock R.M., Grossman L., Moldave К. (ets). In: Methods in Enzy-mology, v. 1.2, part A. N.Y.-L.: Academic Press, 1967, p. 224,

65. Levene P.A. J. Biol. Chem., 1919, 39,77.

66. Loring H.S., PI oeser J. M. Biol. Chem., 1949, 178, 439.

67. Dimroth К., Holle К. Zellstoff fabrik Waidnof. Ger. 814, 004 (1951). - C.A., 1954, v.48, p. 7672.

68. Dimroth K., Holle K. Nucleosides by hydrolysis of nucleic acid. -Ger. 824, 206 (1951). C.A., 1954, v.48, p. 7672.

69. Hydrolysis of RNA. Пат. 76-65772 (Япония). - Kokai. - C.A., 1976, v. 85, p.108951.

70. Hayes D.H. J. Chem. Soc., 1960, p. 1184.

71. Dimroth K„ Hamm R., Jaenicke L., Holle К. Пат. 820328 (ФРГ). - С.А.,1954, v. 48, р. 209le.

72. Nobumitsu Y., Numata T. Nucleosides. Пат. 66-16389 (Япония). - С.А. ,1967, v.66, p. 2734q.

73. Пат. 76-40079 (Япония). С.А. 1977, v. 12, р. 34567.

74. Dimroth К., Witzel H., Hülsen W., Mirbach IL Uber die hydrolyse von ribonucleic sauren in gegenwart von metalloxyden. Just. Lieb. -Ann. Chem.Л959, 620, № 1, s. 94-108.

75. Eichhorn G.L., Kutzow J.J. Biopolymers, 1965, 3, p. 79.

76. Bamman E., Trapmann H., Fischler F. Biochem. Z., 1954, 325, p. 89.

77. Bacher I.E., Aienn F.W. J. Bio!. Chem., 1951, 188, p.39.

78. Trapmann H., Devani M. Hoppe-Seyler's. Z. phisiol. Chem., 1965, 340, s. 81.

79. Способ получения дезоксирибонуклеозидов. A.c. 540874 (СССР), C12N 15/01.-Б.И., 1977, №8.

80. Способ выделения двухферментного биокатализ а тора для получения нуклеозидов. » A.c. 1771484 (СССР) , C12N 15/01. Б.И., 1992, № 39,.

81. Fujishima Т. Tsujimura J., Suzuki M., Yoshino H. Enzymic manufacture of adenosine, guanosine, cytidine, and uridine. Пат. 47-27037 (Япония). Опубл. 20.07.72.

82. Шахова Т.В., Хомякова Г.И. и др. Способ получения ферментного комплекса. A.c. 943279 (СССР). » Б.И., 1982, № 26.

83. Шахова Т.В., Хомякова Г.И. и др. Способ получения нук-леозидов. А.с. 947186 (СССР). - Б.И., 1982, № 28.

84. Keller R., Schlingmann M. Process for the preparation of 5!-ribo~ nucleotides. Пат. 4649III (США). Опубл. 10.03.87.

85. Способ культивирования мицелкальиых грибов продуцентов нуклеаз. - Ах. 1405310 (СССР). - Б.И., 1989, № 8.

86. Зинченко A.PL Получение природных и модифицированных компонентов нуклеиновых кислот с использованием ферментов микроорганизмов. Дис. докт. биол. наук, М., 1992. Рукопись.

87. Yorbruggen H., Bennua В., Nucleoside synthesis. XIX. New simplified nucleoside synthesis. Tetrahedron Lett., 1978, № 15, p. 1339-1342.

88. Vorbruggen H. Methods of nucleoside synthesis. In: Nucleoside analogues. Chemistry, biology and medical application, NewYork- London: Plenum Press, 1979, v. 26, Ser. A., p. 35-69.

89. Колодкина И,И, Мамонтова Т.А., Юркевич A.M. Способ получения аденозина. Ах. 915445 (СССР). Опубл. 07.01.80.

90. Nakaya Y., Kanzaki Т., Nara К. Nucleosides by enzimatic dephos-phorylation of nucleotides. Пат. 68-28959 (Япония). Опубл. 12. 12.68.

91. Komatsu К., Saijo A. ets.all. Process for producing adenosine by fermentation. Пат. 3730836 (США). Опубл. 01.05.73.

92. Tsunemi Y., Asahi S., Doi M. Production of uridine. Пат. i 79468 (Япония). Опубл. 30.04.86.

93. Кузнецова О. С., Конев Ю. Е. и др. Штамм Penieillum baiolum ЛИА-Т-192 продуцент нуклеозидов. - Ах. 969034 (СССР). Опубл. 27.04.81.

94. Doi M., Asahi S., Tsunemi Y., Akiyama S. Mechanism of uridine production by Bacillus subtilis mutants. Appi. Microbiol. Biotechnol., 1989, v. 30, №3, p. 234-238.

95. Shoji O. Process for the production of adenosine bymicroorga-nisms. Пат. 3647626 (США). Опубл. 07.03.72.

96. Yamasha Shoyu К. Methods of preparation of adenosine from adenine. Пат. 49-35994 (Япония). Опубл. 27.09.74.

97. Сидорова Н.Д. Способ получения аденозина и его фосфорных эфиров. A.c. 963263 (СССР). Опубл. 25.08.80.

98. Ott J.!,., Werkman C.I 1. Coupled nucleoside phosphoryla.se reactions in Escherichia coli. Arch. Biochem. Bioohvs., 1957. v.69, № 1, o. 2641. A ■»> " ' 3 1 JL276.

99. Van den Bos R.C.,Van Kamp G. J. Anal. Biochem., 1970, 35, p.32.34.

100. Braun R. Biochem. Biophys. Acta, 1967, 149, p. 601-603.

101. Sweet man L., Nyham W.L. J. Chromatogr., 1968, 32, p. 662675.

102. Wasternack C., Reinbothe II. Trennung von Nucleinsaurebaus-teinen und ihren Strukturanalogen an Sephadex G-10. J. Gromatogr.,1970,48 (3), s. 551.

103. О стер май Л. Хроматография белков и нуклеиновых кислот, М.: Мир, 1985.

104. Лурье A.A. Хроматографические материалы. Справочник, М., 1978.

105. Mac Gee J., Smith В.Н. Anal. Biochem., 1971, 41, p. 286-287.

106. Junowicz E., Spencer J. H. Anal. Biochem., 1969, 44, p. 342348.

107. Moran R., Werkheiser W. A. Borate Column for the Separation of Ribo and Deoxyribonucleosides. Anal. Biochem., 1978, 88, p. 668-674.

108. In: Harausgegen von. F.Reiff u.a. Die Heilen, 1962, Bd. II, s. 834-836.

109. Штернберг И .Я., Микстайс У .Я. Способ выделения гуанози-на. A.c. 670576 (СССР). - Б.И., 1979, № 24.

110. Ш. Пат. 51-15039 (Япония). Опубл. 13.05.76.

111. Lorixig H.S., Fairley I.L., Bortner H.W., Seagran H.L. A spec-trophotometric method for the analysis of the purine and pyrimidine components of ribonucleic acid. J. Biol. Chem., 1952,197 (2), p. 809.

112. Пат. 6063-71 (Япония), кл. 16E461. Опубл. 15.11.68.

113. Микстайс У.Я., Штернберга И.Я., Веверис А.Я. Способ выделения аденозина. A.c. 553251 (СССР). - Б.И., 1977, N 13.

114. Микстайс У .Я., Штернберга И.Я. Способ выделения уриди-на. A.c. 515758 (СССР). - Б.И., 1976, № 20.

115. Numata Т., Kishi М., Sato Т. eis all. Separation of nucleosides from nucleicacid hydrolyzates. Пат. 69256, 587 (Япония). - C.A.,1970. v.72, p.l 1401.

116. Гетероциклические соединения. /Под ред. Р. Эльдерфильда, т. 8, М., 1970.

117. Пат. 49-9478 (Япония). Опубл. 03.74.

118. Способ получения азотсодержащих гетероциклических оснований. Пат. 43754 (Япония). Опубл. 02.71.

119. Получение аденина и/или 4,5-дицианоимидазола. Пат. 20623 (Япония). Опубл. 06.72.

120. Способ получения аденина, пригодный для использования в промышленном масштабе. Пат. 4059582 (США). Опубл. 11.77.

121. Кочетков Ы.К., Будовский Э.Й., Свердлов Е.Д. и др. Органическая химия нуклеиновых кислот, М.: Химия, 1970, 597 С.

122. Королев Ю.Г. Получение препаратов рибонуклеозидов и пуриновых оснований гидролизом микробной РНК. Дис. . канд. хим. наук, М., 1997. Рукопись.

123. Слуцкин Р.Л. Возможности практического использования нуклеиновых компонентов микроорганизмов. Тр. МХТИ им. Д. И. Менделеева, 1988, №149, с.124-131.

124. Кондратенко И.В., Микстайс У .Я., Гайлума М.А. Способ получения смеси рибонуклеозид-2',3'-монофосфатов. A.c. 1525167ггл г1 уч ттл -г1 tí 1лол л \",-,лл

125. V О Ks 01" ). " O.lri., i У Ö У, J .

126. Пат. 76-40079 (Япония). С.А., 1977, ¥.12, р. 34567.

127. Шахова Т.В., Майорова Г.,И., Нестеренко Е.А., Орлова Т.В. Получение и выделение ферментного комплекса 5-экзонукяеазы и щелочной фосфатазы Actinomyces coeÜcolor. Биотехнология, 1988, т,4, №4, с. 501-505.

128. Попиты: каталог НПО Пластмассы, Черкассы, 1989.129. Catalog Merck, 1995.

129. Аденин. ТУ 64-6-269-84, Минмедпром, 1985.

130. Способ получения аденина восстановлением ариазомалоно-нитрила. Пат. 56-131589 (Япония). Опубл. 15.10.81.

131. Sekia M. Facile synthesis of hvpohantine and adenine. Chem. Pharm. Bull., 1972, 20 (1), p. 209-210.

132. Способ получения гуанина и изогуанина и их 7-метшшро-изводных. Пат. 3557113 (США ). Опубл. 01.71.

133. Пат. 3884827 (США). Опубл. 05.73.

134. Микстайс У.Я., Арене И.Б. Способ получения аденина. A.c. 412196 (СССР). - Б.И., 1974, №18.

135. Микстайс У.Я., Арене И.Б. Способ получения аденина. A.c. 455959 (СССР). - Б.И., 1975, №7.

136. Пат. 48-698 (Япония). Опубл. 11.76.

137. In: Harausgegen von. F.Reiff u.a. Die tieften., Bd. IL Nürnberg: 1962, s. 834-836.

138. Микстайс У.Я. Способ получения аденина и гуанина. A.c. 73044 (СССР). - Б П., 1980, №39.

139. Baron F., Brown D.M. J. Chem. Soc., 1955, p. 2855.

140. Tamm С., Ilodes M. E., Chargaif E. J. Biol. Chem., 1952, 195,p. 49.

141. Shapiro H.S., Chargaif E, Biochim. Biophys. Acta, 1957, 23, p.

142. Levene P.A., Jacobs W.A. Ber. ,1959, 42, 2469, 2703.

143. Vernier H. Hoppe-Sayler'sj. Z. physiol. Chem., 1964, 339, p. 14; 1966, 344, p. 189.

144. Kenner G.vv. in: Giba Foundation Symposium on Chemistryand Biology purines. Little Brown Co., Boston, Mass., 1957, p.312.

145. Shapiro R., King S. Biochemistry, 1969, 8, p. 1806.

146. Dekker C.A. Ann. Rev. Bioehem., 1960, 29, p. 453.

147. Micheel F., Heesing A. Chem. Ber., 1961, 94, p. 1814.

148. Capon В., Connett B.E. J. Chem. Soc., 1965, p. 4497.

149. Simon I I., Palm D. Chem. Ber., 1965, 98, p. 433.

150. Шабарова 3., Богданов А. Химия нуклеиновых кислот и их компонентов. М.: Химия, 1978.

151. Уайтт Г. в кн.: Нуклеиновые кислоты. /Под ред. Чаргаффа Э. и Дэвидсона Дж. М.: HJI, 1957, 443 С.

152. В кн.: Справочник химика. /Под ред. Никольского Б.П. М.-Л.: Химия, 1966, т.2, с. 1146 .

153. Лидак М.Ю., Пр ео бра женская М.Н., Кор бух И.А. и др. Комплексное использование гуанозина для получения лекарственных препаратов. В кн.: Методы получения и анализа биохимических реактивов, Черкассы, 1979, с.75.

154. Степаненко Б.Н. Курс органической химии. М.: 1991.

155. Data for Biochemical Research. 3rd ed. Oxf. University Press. Oxford: 1986.

156. In: Harausgegen von F. Reiff u.a. Die Heffen, Bd. II. Nurnberg: 1962, s. 828-842.

157. Shapiro R., Pohl S.H. Biochemystry, 1968, 7, p. 448.

158. Машковский М.Д. Лекарственные средства, ч.2. Справочник. М.: Медицина, 1977,648 С.

159. Производственный регламент по изготовлению 1%-ного раствора натрия аденозинтрифосфата (АТФ). Завод бакпрепаратов Львовского НИИ эпидемиологии и микробиологии, Львов, 1975.

160. Etaix Е., Org el L.E. Phosphorylation of nucleotides in aqueous solution using trimetaphosphate. Formation of nucleoside triphosphates. -J. Carbohydr. Nucleotides, Nucleosides, 1978, vol.5, №2, p. 91-110.

161. Yatani K., Nakayama K., Honda H. Adenosine-5'-triphosphate. Japan 70,01,268 C.A., 1970, vol.72, p. Ill787.

162. Keller R., Schlingmann M. Procces for the preparation of 5'-ribonucleotides. Пат. 4649111 (США), С 12P 19/30. Опубл. 10.03.87.

163. Yokoi Н., Onishi Н. Enzymatic production of 5"-nucleotides with micrococcus nuclease. Пат. 63-169992 (Япония), С 12P 19/32. Опубл. 13.07.88.

164. Benaiges M.D., Lopez-Santin J., Sola C. Production of 5'-ribonucleotides by enzymatic hydrolysis of RNA. Enzyme Microb. Techno!.,1990, v. 12, № 2, p. 86-89.

165. Бердышев Г.Д., Луценко H.A., Дьячковская Т.Б. Способ получения дезоксирибомононуклеотидов. А.с. 534236 (СССР), А61К 37/ 10. Опубл. 05.11.76.

166. Jamauchi Jakayoshi, Jujii Kyoichi, Jamada Joshiyuki. Japan Kokai 76,141,885 (C07H 19/10) 07 Dec. 1976, Appl.75/66,014,03. Jim. 1975, 5 pp.

167. Konansky W., Grunze H., Munch G. Phosphorylienmg von Nucleosiden mit Pyrophsphorykhlorid. Ztschr. Naturforsch., 1962, Bd. 176, H.5, s. 291-295.

168. Ikehara M., Omori E. Nucleoside phosphates. Japan 17848 ("64). -C.A., 1965, vol.62, p. 5328.

169. Колодоина И.И., Калинина Н.Н., Пичужкина Е.й. и др. Способ получения рибонуклеозид^'-монофосфатов. Ах. 504784 (СССР). Б.И., 1976, №8, с. 59.

170. Fuijio Т., Ftiruya A. Production of ATP from adenine by Brevi-bacterium ammoniagenes. Ferment. TechnoL, 1983, v. 61, №3, p. 261-267.

171. Tochikura, Rokuro. Adenine nucleotides. Jpn. Kokai Tokkyo Koho 80 71, 495 (C12P 19/32) 29 May 1980, Appl. 78/145, 268, 27 Nov. 1978.

172. Suniino Jasuhiro, Sawata Hidekazu, Akiyama Shunichi. Jpn. Kokai Tokkyo Koho 78,124,687 (C 12D 13/00) 31 Oct. 1978, Appl. 77/37, 883, 01 Apr. 1977, 5 pp.

173. Попов И .Л., Барай В.Н., Зинченко А.И., Чернов СЛ., Ква-сюк Е.И., Михайлопуло И.А. Трансформация аденозина в аденозин-5"-монофосфат интактными клетками Erwihia. - Биотехнология, 1985, т. 30, вып. №8, с. 588-591.

174. Kinoshita Tokio. Abe Shigeo, Miruhara Kuniro, Vtagana Kiyshi, Nakayamma Kiyoshi, Nara Takashi, Suruki Taklo, Sato Zenroku, Misawa Masayoshi. Adenylic acid production. Jpn. 76 38, 797 (CI2D 13/00) 23 Oct. 1976. Appl. 63/12, 136,09 Mar. 1963 - 2 pp.

175. Цыренов В. Ж. Микробиологический синтез нуклеозидфос-фатов. М.: Наука, 1990, 200 С.

176. Robertson А. М., Walfe R. S. J. Bacteriol., 1970, Vol. 102, p.4323.

177. Шавловекий Г.М., Логвиненко E.M. Прикладная биохимия и микробиология, 1988, т. 24, с. 435-447.

178. Limditt A., Thore А. Appl. Microbiol., 1975, vol. 30, p. 713.

179. Коновалов C.A. Биохимия дрожжей. М.: Пищевая промышленность, 1980,193 С,

180. Ostein P. und Terszakowec J. liber die enzymatische Syntliese von Adenosin-5-inonophosphorsaure (Muskeladenylsaure) aus Adenosin.гч;, -., —, 7 1 «'»т n л 1ГА < г»; n

181. Diese Z., iУЗ/, du. ¿ju, s.ljj-I.

182. Ostern P., Baranowski Т. und ierszakowec J. Über die Phosphorylierung des Ädenosin durch Hefe und die Bedeutung dieses Vorgangs für die alkoholische Gärung. Diese Z., 1938, Bd. 251, s. 258-284.

183. Anna Kockova-Kratochirlova, Anna Gebauerov, Margita Hrdi-nova. Study of Harden-Young effect in yeasts. I. Choice of suitable conditions. Ceskoslov. Mikrobiol., 1956, 1, № 247, p. 247-254.

184. Murakami Keiko, Nagura Hiroshi, Yoshino Masataka. -Per-meabilization of yeast cells aplication to study on the regulation of AMP deaminase activity in situ. Anal. Biochem., 1980, v. 105, № 2, p. 407-413.

185. Otto Meyerhof and. Jean R.Wilson. Further studies of the Harden-Young effect in alcoholic fermentation of yeast preparations. J. Biol. Chem., 1949, № 180, p. 575-586.

186. Зинчешсо А. И., Залашко JI. M., Барай В.Н. Изучение возможности использования клеток Saccharomyces cerevisiae для получения нуклеозид-5"-трифосфатов. Весщ Акадэмп навук БССР. Сер. 61ял. навук, 1989, №1, с. 30-34.

187. Айсберга С.Э., Ирген А.И., Александрова. М.А. Исследование мембранных структур клеток дрожжей Saccharomyces cerevisiae при фосфорилировании аденозина. Микробиологические препараты, Рига: Зинатне, 1976, с. 110-112

188. Du Ru-Hui, Chen Ching-Shan. Enzymic phosphorylation of AMP to ATP by sun-dried baker's yeast. -Wei Sheng Wu Hsueh T'ung Pao., 1981, v. 8, № 2, p. 66-69.

189. Hu Zhao-Qing, Wang Jian-Ye, Yan Mei-Ling. Enzymic phos-phoiylating synthesis of adenosine triphosphate by baker's yeast. Wei Sheng Wu Hsueh Pao, 1978, v.18,№ 3, p. 239-247.

190. Tochikura Т., Kuwahare M., Jagi S., Okamoto II., Tominaga J., Kawa Т., Oyeta K. Fermentation and metabolism of nucleie acid related compounds in yeast.- J. Ferment.'Techno)., 1967, v. 45, №6, p. 511- 529.

191. Irving Lieberman, Arthur Komberg, Ernest S.Simms. Enzymic synthesis of nucleoside diphosphates and triphosphates. J. Biol. Chem., 1955, v. 255, p. 429-440.

192. Killey W.W., Meyerhof O. Studies on adenosinetriphosphatase of muscle. III. The lipoprotein nature of the magnesium-activated adenosinetriphosphatase. -J. Biol. Chem., 1950, v. 183, p. 391-401.

193. Айсберга C.3., Брод И.И., Ирген A.M., Кестере B.P>, Каула В.П. Исследование режима биофосфорилирования аденозина. -Хим.-фарм. журн., 1976, т. 10, вып. № 8, с. 85-86.

194. Айсберга С.Э., Ирген A.M., Брод И.И., Кестере ВН., Каула В.П. Способ получения рибонуклеозид-5'- или сахарофосфатов. Ах. 522190 (СССР), С07Н 19/00. Опубл. 25,07.76.

195. Брод ИМ,, Лудрика Р.А,, Микстайс У.Я. Способ получения аденозин-5ч-трифосфата. Ах. 722920 (СССР), С07Н 19/16. Опубл. 25. 03,80.

196. Айсберга С.Э., Дмитриенко Л.В., Ирген A.M., Рубеке М.Х., Самсонов Г.В., Страздынъ Р.Э., Пирогов В.С, Способ получения аде-нозин-5'-ди- и трифосфатов. А.с. 395082 (СССР), C07G 7/02. Опубл. 1971.

197. Брод И.И., Кестере В.Р., Лудрика Р.А., Шнитко М.Р. Способ получения аденозин-5ч-трифосфата. Ах, 941384 (СССР), С07Н 19/16. Опубл. 07.07,82.

198. Айсберга С.Э.5 Иргео А.М, Подходящие пивные дрожжи даш биофосфорилирования аденозина. Вести Латвийск. академии наук, 1975, т. 1, с. 40-44.

199. В кн.: Ленинджер А. Биохимия. Молекулярные основы структуры и функций клетки, Мл Мир, 1974, с. 340-389.

200. Racker Е. Mechanisms of synthesis of adenosine triphosphate.-Advances in enzymology and related subjects of biochemistry. /Edited by F.F.Nord. v. XXIII, 1961, p. 361.

201. Ogata Koichi, Tani Yoshiki, Shimizu Sakayu, Uno Kasyo. Metabolism of pantothenic acid in microorganisms. II. Formation of coenzyme A by baker's yeast, Agr. Biol Chem., 1972, y. 36, №l,p. 93-100.

202. Ganti Tibor. Adenozin forzforilalasa elezto enzimrendszerreL -Magyar Kemia Folyoirat., 1975, v. 81, № 8, p. 336-339.

203. Ganti Tibor, Patay Lajos, Bodoki Reka, Palagiji Tivadar. Adenosine^ -diphosphate. Hung. Teljes 2392 (C07D) 21 Jul. 1971, Appl. 13 Apr. 1970, 10 pp.

204. Wm, J. Bowen and Timothy D, Kerwin. The kinetics of myo-kinase. I. The effects of salts and pH and of the state equilibrium. -Arch. Biochem. Biophys., 1954, v. 49, p. 149-159.

205. Kirih Drewery Co, Ltd. Adenosine-5"-triphosphate. Jpn. Kokai Tokkyo Koho 8034, 036 (C12P 19/32), 10 Mir 1980, Appl. 78 105, 640, 31 Aug. 1978, 4 pp.

206. Tuan Hui-Ming. Production of ATP by enzimic methods. -Sheng Wu Hu Hsueh Tu Shend Wu Wu Li Chin Chan., 1979, y. 30, p. 7579.

207. Ghiocel Radu Pual. Sodium adenosine triphosphate. Rom. 62, 203 (CI2D 13/06), 20 May. 1977, Appl. 75, 280, 29 Jim, 1973; 4 pp.

208. Ко Hyong, Park Chang Gi. ATP synthesis by enzymic phosphorylation. Choson Minjujuui Inmin Konghwagiik Kwahagwon Tongbo, 1979, v. 27, №3, p. 46-47.

209. Teodor Marinica and Mitrache Maxinescii, Process for obtining ATP. Rom. 48, 536 (C07b) Aug. 28, 1967, Appl. July 29, 1966; 2 pp.

210. Laws J.O. and Stickland L.H. Changes in adenosinedi- and triphosphate concentrations in the early stages of the action of yeast on glucose. Nature, 1959, v. 184, Suppl. № 16, p.!246.

211. Чернаешш B.M., Крутиков B.M., Дмитриенко Л.В. Микробиологический синтез АТР из аденозина. Прикладная биохимия и микробиология, 1971, т/7, № 6, с. 713-716.

212. Watanable Toshio, Oka Osamu, Hodo Taiko, Saheki Keicio. Biosynthesis of physiologicaliy active substance. Jpn. Kokai. 77, 110, 887 (C07G 7/02), 17 Sep. 1977, Appl. 76/26, 041,12 Mar, 1976; 3 pp.

213. Адеева В.И. Фосфорилирование аденозина клетками пивных дрожжей Saccharomyces carlsbergensis основы технологии аденозин-фосфатов. Дис. канд. хим. наук, М., 1998. Рукопись.

214. Артюхин В.И., Шепелин А.П., Киселева Н.В. Бежовые гидро-лизаты в производстве питательных сред: производство и применение продуктов микробиологических производств. Обзорн. информ. М.: ВНИ ИСЭНТИ Минмедпрома СССР, 1990, Вып. 9-10, 52 С.

215. Красноштанова А.А. Гидролиз белковых веществ биомассы промышленных микроорганизмов. Дис. . канд. хим. наук, М., 1995. Рукопись.

216. Раскин Б.М. ЖМЭИ, № 5, с. 25-32.

217. Максименко А.В., Надирашвили Л.А., Абрамова В.В., Брко-машвили Г.С. Модификация комплекса протеиназ папайи. Биотехнология, 1990, № 6, с. 56-60.

218. Максименко А.В., Надирашвили Л.А., Абрамова В.В,, Еркома-швили Г,С. и др. Биотехнология, 1990, № 6, с. 29-32.

219. Arad Dorit Landridex Robert, Kollman Peter A- A simulation of the sulfor attack in the catalitic pathwey of papain using mechanics and sli-empriricai quantium mechanics. J. Amer. Chem. Soc., 1990, v, 112, № 2, p. 491-502.

220. Маряаузе А,А., ' .X., Юшвика Д.А., Фридман Т.Ф., Путере М.П. Способ получения карооксипептидазы А и В из поджелудочной железы свиней, А.с. 1551742 (СССР), C12N 9/48, Опубл. 23. 03. 90.

221. Kawata Shuji, Takayama Shuji, Nimoniga Kazuto. Purification and some properties of purine liver aminopeptidase В J. Biochem. / Tokkio, 1990, 88 (4), p. 1025-1032.

222. Jursh Louis B, Mikelvy Jeffrey F. An aminopeptidase from bovine brain which catalized the hydrolysis of enkefalin. J. Naturochem., 1981, 36, (l),p. 171-178.

223. Kobayashi Juataha, Kobayshi Rioko, Hirs C, H.W, Identification of zymogen E in a complex with bovine carboxipeptidase A. J. Biol. Cliein., 1981, v. 256 (5), p. 2466-2470.

224. Qiu Xiobao Daihong, Juan Ying, Yu Ying. Исследования щелочной протеазы из адкалофилъной бактерии Bacillus pumilus. Acta Microbiol. Sin,, 1.990, 30 (6), p. 445-449,

225. Zamost Bruce L., Brantley Ountin J., Elm Dana D., Reck Carol M, Production and characterzation of a thermostable protease produced by an asparogenous mutant, of Вас, stearothermophilns, J, Ind. Microbiol,, 1990, v. 5, №5, p. 303-312,

226. Selim M.N., El-Masry Hoda G. Proteases from thermophilic bacili, Microbiol, 1990, v. 63, № 254, p. 55-61.

227. Таками Хидэто. Термостабильные щелочные протеазы. Био-сай неу тоиндасутори, 1990, v. 48, Jsfe 7, p. 657-660.

228. Tokami H,s Akiba Т., Harikoshi, Вас. sp, produces extremely thermostable alkaline protease, ■• In: 5th int. Sump. Mierob, ecol. (ISME5), Kuo-to, Aug. 27- Sept. 7, 1989, Abstr. kuoto, 1990, p. 313.

229. Thiem M„ Savistovski J., Htimrits В., Hedich R., Rogge G. Ver-fachren zur Herstellung einer neuen thermostabillen protease. Пат. 282144 (ГДР), CI2 N 9/54. Опубл. 05.09,90.

230. Halid Naraiki M., Marti* Ei-i- . Г Л ;.ir Ir-. and characterization of an aminopepfidase from. Lactobacillus helveticus CNBZ 32. -Syst. and Appl, Microbiol., 1990, 13, № 4, p. 311-319.

231. Горбунова B.A., Бабаева B.A., Бабаева П.В. и др. Способ получения протеолитических ферментов. А,с. 1316239 (СССР), C12N. Опубл. 07.91,

232. Говорунова В .А., Бабаева П.В., Шевцов В.В., Чегодаев Ф.Н. идр. Способ получения протеолитических ферментов. А.с. 131239 (СССР), C12N 9/54Б АО IN 63/00. Опубл. 30.07.91.

233. Lopez Fandiiio Rosina Arbo Ilva. Effect of heat treatment on the proteolitic enzyme system of a Lactobacillus delfrueckii. J. Dairy Res., 1991, v. 58, №4, p. 469-475.

234. Kholid Naraini Marth Elver H. Purification of a pro 1 i I dip ep tid.il ammopeptidase from Lactobac, Helveticus CNRZ. Appl. and Environ, Microbiol., 1990, v. 56, № 2, p. 381-388.

235. Черняева Л .А., Яковлев В,P. Субстратная специфичность про-теиназы Streptomices aeidoresistans 1403. Тр. Воронеж, технол. ин-та, Воронеж, 1991.

236. Gaios Edvard, Koluzevska Maria. Proteinases of Streptomices fra-diae. i. Prehiminary characterization and purification. Acta Microbiol, pol., 1989, 38-19-4, p. 247-258.

237. Hoverman Michel. Method for producimg complex stimulating theactivity of the pancreas and its application in zootechny. Пат. 5047240 (США), A61K 37/54. Опубл. 10.09.91.

238. Hess W., Kochanovaski N., Scheme M. Kohler W., Forbery W., Harbe A. Verfacyren zui teeymchen Herstellimg eints proteolytishen Enzym completes. Пат, 268974 (ГДР), C12 N 9/52, C12P 19/54. Опубл. 14,06.89.

239. Акамкэ Такаэаки и др. О некоторых особенностях протеаз, продуцируемых бактериями вида Serratia marcescens. Jap. J. BacterioL, 1989. v. 44, № l,p. 487.pidly produce large quantities 01 extracellular protease. Phytopathology, 1989, v. 79, № io, рЛ!91.

240. Ермолицкий В.Н., Астапович Н.И. Кислая протеиназа Asp. factidus, выделение и некоторые свойства. Прикладная биохимия и микробиология, 1992, 28, № 5, с. 674-679.

241. Камиыили Хиуэнори. Протеиназы Candida utilis, повышающие проницаемость кровеносных сосудов. Танака, 1989, 44, jSfe 1, р. 486.

242. Wools Fronda С,, Kinsella John Е, Proteas from Saccaromices carlsbergensis: activity on food pronteins, Foodsci., 1980. 4515, p. 12001202.

243. Горяев М.И., Букова ЛИ., Кодобецкая B.H., Бобровская Т.Г., Изатулаев Е,А. Биологическое значение пептона, полученного из кера» тинсодержащего сырья. Прикладная биохимия и микробиология, 1981, 17(2), с, 273-277.

244. Levine Rodney L. Rapid benchtop method of alkaline hydrolysis of proteins, J. Chromatography, 1982, 236 (2), p. 499-502.

245. Payne Laurence Sidney. Process for preparing improved »v.-., zated protein. Eur. Pat., AppL EP 361596, A23J 3/00, 04,04,90. EP ' A "" /202085, Опубл. 26.09.88.

246. Konbeck Winfried, Pytrik Heinz. Preparation of mineral salts by electrolytic neutralization and reduction. Ger, Oflen DE 37112825, C07C 93/02, Опубл. 03,11.88,

247. Armanet. Jean Michel, Giddey ^ i ' 1 » , Hydrolysiiig proleinaceus materials of animal w ✓ « i . Ыг Fnt. Appl. EP 169166, A23J 3/00, Опубл. 13.06.84.

248. Копылов B.A., Харабадисахян Г.Д. и др. В кн.: Акт. вопросы разработки препаратов медицинской биотехнологии, Махачкала, 1988. с. 33-40.

249. Robertson Harry J. PCX Int. Medical protein hydrolyzate. AppL 8000, 059 A61K37 1/18, 24.01.80. Appl. us 78/14, 12.06.78.

250. Kan T.A., Shipe W.F. Modification and evaluation of reverse phase high performance liquid chromatography method for aminoacid análisis. » J. Food Sei., 198!, 47(1), p. 338-339.

251. Кожух A.A., Касаткин Н.Ф., Ованесова FI.Г. Проблемы ООН, вып. 4. Саратов, 1972, с. 118-122.

252. Бакрах А. и др. ЖМЭИ, 1962, № 3, с. 51-53.

253. Боровкина В.М.? Попов А,Г, Способ автоматического контроля ионообменного процесса. A.c. 757474 (СССР). Опубл. 23,08.80.

254. Иониты. в химической технологов. /Под ред. Никольского Б.П., Л.: Химия, 1982, 289 С.

255. Даванков А,Б. Деионязация кислотных гщролизатов бед-ков анионообменной смолой. Журн. прикладной химии, 1959, № 32, с, 2269-2275.

256. Киселев A.B., Розенберг Г.Я. и др. В кн.: Справочник по кровезаменителям и препартам крови, М.: Медицина, 1969, с, 48-50,

257. Аширов А. Ионообменная очистка сточных вод, растворов и газов, Л.г Химия, 1983, 285 С,

258. Мартене Л .А. Уч. Записки ДагНИИ Питательных сред, Махачкала, 1964, Вып. 4, с. 99-104,

259. Королев CJX, Шамичева И.Н. и др, » В кн.: Разработка и производство препаратов гбиотехнологии, M;—".t~\ 1990, с. 48-49.

260. Горская Н.А. Уки. I . . 1980, № 4,с. 63-67.

261. Степчхов К.А. В кн.: Проблемы парештрнлънсто питания, Рига: Зинатне, 1969, с. 55-59,

262. Матвеев В.Е., Скворцов Г.Е., Куяи Н.В. Биотехнология, 1986, №1, с. 53-58.

263. Матвеев В.Е., Скворцов Г.Е., Куян Н.В. Биотехнология, 1986, № 1, с. 58-62.

264. Казакова Г.И. и др. В кн.: Актуальные вопросы парентерального питания, Рига: Зинатне, 1972, с. 207-209.

265. Groen L,G., Rickolo P. Anal Biochem., 1972, v. 41, p. 348-355,

266. Крестьянинова И.Н. и др. Прикладная биохимия и мкробио-логия, 1985, т. 21, вып. 1, с. 48-57,

267. Кудрявцев P.M., Страшненко E.G., Волков Е.Н. Тр. ВНИИ консервной и овощной пром-ти, Мл Пищевая пром-сть, 1985, № 6, с, 3841.

268. Tsugia Akira, Sckeiller Jean Jaiques. A rapid method for acid of protein with a mixture of trisulfoacetic acia. Eur. J. Biochem,, 1982, v. 124 (3), p, 585-588,

269. Пичугин H.M., Самсонов C.A., Помазина B.H., Морозов В,В., Житняк В.А. Белковый гидролизат. А.с. 1240788 (СССР), С14С 3/32. Опубл. 30.06.86,

270. Serlupic G., Croechionig PL, Df Efmicis G. Progress in the preparation of hydrolizates for the treatment of desease reared to aminoacid metabolism disorders, - J, Dairy Sci.s 1975, v. 58, suppl. № 3, p. 808-812,

271. Филатов A.H., Чаплыгина 3.A., Депп M.E. Белковые гидро-лизаты, М.: Медицина, 1968, 183 С.

272. Калашникова H.A., Гребешкова P.H., Виноградова И.Н. Получение белковых гкдроиигвтов с использованием F' •' "1 "f I < В , . 1 t i i>4 ^ , ) L . „j1 i . 1978, 216 C.

273. Контзяег Н,Ф.; Головина НЛС В :ки,: O^wr использования микробных пептидаз в приготовлении гидролизатов для парентерального питания, Рига: Зииатне, 1972, с. 157-162.

274. Bertullo N.M., Ptrcira C.R, Protein liydruiydis, Пат (США), А23К, 1/18. Опубл, 1970.

275. Лизочеико Л.Г., Абядов Л.А., Сишшишн Н.И., Берникова О.Г., Шин С.Т, Белковый гидролизат. Ах, 562284 (СССР). - Б.И., 1977, №23.

276. Haragama Fuminori. Hydrolysis of soybean protein by enzymes from general Aspergillus und Rhizopus. J, Brev. Soc. Jap,, 1978, 12, p. 2420,

277. Chou Myliong-Rak, Sato Norifumi, Yamauchi Fumio. Effective digestion of casein with agar gel entrappped cell walls as immobilized proteases. J, Ferment, and Bioeng., 1991, v. 72, № 3, p. 379-383,

278. Verfachren zur Herstellung von Protein-Hydrolysaten nidmiedri-gem Gehaltan BiiterstaJTeii. Пат, 330519 (ФРГ), C12P 21/06. Опубл. 1991.> - "vi Linn, Ibrahim Amir A. Effect of enzymic Hydrolysis с , . \ .-Egypt. J. Food 8ci., i985,v.I3 (2), p. 207-212.

279. Chorbanov В., Bozhkova M., Dilov X., Liciiev V. Protein Hydro-lyzates from green aigae chloreila and seenedesmiis. -Naehimig., 1986, v. 30 (3-4), p. 405-408.

280. Schuster Werner, Fridrich Manfred, Р-ч •< з г л Г" JC Гн Protein Hydrolyzate as a food nutrient, Пат. 262675 у. ДР), Опубл. 07.12.88.

281. Friedrich Manfred, Велики Ulrich, Moo, to'uui »«, r •» . < »«»

282. Riittloff Heinz. Protein partial hydrolyzate bazed lr* > ^ 1 ' '* 1 lanced diet preparation, Пат. 249402 (СДР), A23.1 . , м ,

283. Matsumura Т., Nakamishi Т., Lizuka М,, Jamamoto "Г. Hydrolysis of protein by incubation with proteinaze and aminopeptidases mixture. -Agric. Biol, chem., 1975, v. 39, J3b 2, p. 379-386.

284. КЯН В .А., Ы Г I- « ( I i" . > f I и on < h' S,p< f » ' Hiif4 ' » ,

285. С" ! Со Ci i "С ГС-; « , "1С ,** ние, харага,» » « ' », <м » V • I ; „uiti, "И' ihibHH\ Применение кии" С , t ; -, - 1 - ~ - »1 дрожжей. - Научи. m Висш. инин хранит, и . t , Пловдив, 1990, т. 37s JC? 3, с, 159 -169,.

286. Денисова О,А., Богданова Е.В., Трушина О.А., Кручина»Богданов Я.В. Пути получения ёеомента:ип"- т * тов на основе авто», wji i j л . с. 14-13.

287. Yeast autolysate, Standart. Oil Co, Neth.. Appl. 79,07,402, C12H 1/05 • -06.10.7S.]1 .j, дошников А.И., Егоров И.А., Купина Л,Я,

288. Л. * Л* / j-t ^ А -, 1> И/ , çv ^и- ч " • • " ' >д • >- > . " ! >х <>t Hi-о и, ' 9^3, j с.•? g-t л "i и "etî 7"i (* 1 \ т т /"'i "î 1 1 .i л nf ~Г\ ' 1 t-1 '1.« . ' и. * ' >v„ ii и j Jphis., Uitrasimc/t, 1981, Jsfe 2, c. 129437.

289. Неклюдов А.Д., Купов X,A. Дрожжи как источник получения ¿шинокиедотных препаратов. Антибиотики и химиотерапия, 1988, т, 33, ле 9, с. 708-713.

290. Кекян . а Хим. . ' . . ~ с.

291. T Роскни E.M., Баранова. А.К. Лабораторное доле,1. U f Г. ¿4. ■

292. Кобчик И.Л,, Лнтвипсчго И,У'. Рчгряботко. и стгндчртичн.

293. I 1 пи, I м«ц I i4 I 1 1м t i id JH ti i . i i ^ it \A ы liwi л 1. rii\ 1

294. Frantisek Machek, Bozena Belialova, SiHiiger "Vladimir и др. Способ получения дрожжевого экстракта, и зргоетерина, А,с, 6696-87 (ЧССР). Спубл. 14.07.89.

295. Сорфы Р. Procede de preparation cle lyzats cie levures. Пат. 264517! (Франция), C12N 1/06. Опубл. 05,10.90,

296. Orr David С., Audrey С., Kay John. Dunn Ben 1V1,;I Cameron Janet I ' * 1 « «' 's HL.it .П , 3: • H rhinovims i4c>c proieim^ rl

297. Ремч ЕЛО. О.Ф., Селезнев;. 9 еклеточкме протсазы Streptomyces sp. Прикладная биохим'лх ч ч ^обиология,, 1991, 27,91° 5, с. 651-657.

298. Спаг.пеу А,К,, Cooper R.M,, Leger R.J. Preparation, of proteaservv-* ^ /^.-fl^'V'V. т ,-v r1 y^f cSVi'V«" f\yv% <?> 'h V» О Of ¿V*-* ? f О /.'УУ1 fii i i S i ' 8 * * V

299. Пригода A.C., Коренева A.PL, Коновалова Е.Ю., Андреева"s / т. t ^ ^ « t|, it 1 J rt, • • Tr , TT

300. Talshy G., Fresenius 2. Tempera Гиге dependence of the velocity of casein proteolysis catalyzed by trypsin and chymotrypsin. Anal, chem», 1980, v. 301, №5, c. 431-432.

301. Лиагнозов А.КЗ. Самарцев M.A. Математическая модель ферментативного протеолиза, 1984. ВИНИТИ, № 470384, с. 22-25.

302. Vorob'ev М.М. Vitt S.V., Belikov V.M. Kjbietic description of proteolysis. Part 3. Total kinetics of peptide bond hydrolysis in peptide mixtures. Die Nachrung,, 1987, v. 31, № 4, s. 331-340.

303. Беликов B.M., Кудинова Е.Г'. Воробьев M.M. Кинетическое описание протеолиза. ч.1. Гидролиз пепсином белков, выделенных из сердца цыпленка: оптимизация условий по времени и концентрации субстрата. Die Nachrung, 1986, v. 30, № 5, s. 501-506.

304. Беликов B.JVf, Кудинова 13.13. Воробьев M.M. Кинетическое описание протеолиза. ч.Р Гидролиз пепсином белков, вьщеленных пз сердца цыпленка: оптимизация условии но времени и концентрации субстрата. Die Nachrung, 1986, v. 30, № 5, с. 501-506.

305. Беликов В.М., Антонова Г.В. Квасов Б.А. Биоорганическая химия, 1979. т. 5, № 3, с. 449-457.

306. Ефимов В.Е., Иванов B.C. и др. Хим. - фарм. жури., 1982, г. 7, с. 70 -74.

307. Матвеев В.Е., Рогов ер В.С п др. Хим. - фарм. жури., 1984, № 12. с. 1499-1503.

308. Матвеев В.Г. Зайцева З.М. и др. Прикладная биоШмня и микробиология, 1985. т. 21, № 4. с. 520-527.

309. Иванкнн АЛ Т. Биологически активные вещества из животной гкани и микроорганизмов. Методы получения и структурно-функциональные взаимосвязи. Автореф. лис, . Д01ст. хим. наук. М г

310. Б а ер H.A., Неклюдов А. Д., Иванкин A.II. и др. Способ активации комплекса ферментов поджелудочной железы убойных животных. Ал. на пат. РФ 97115280/13. Положит, реш. от 18.12,97.

311. Кастальская-Бороздинская Н.К., Крылов 14.Д. Манаков М.Н. Получение ПАВ на основе аминокислот активного ила. Нефтепереработка и нефтехимия, М., 1984, № 3. с. 31-33.