Иммунологические нарушения у лиц с высоким уровнем контаминации 2,3,7,8-тетрахлордибензопара-диоксином и родственными соединениями тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.36, кандидат биологических наук Курчатова, Нелли Наилевна

• Курчатова, Нелли Наилевна
• кандидат биологических наук
• 1999

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Курчатова, Нелли Наилевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗОВАННЫХ В ДИССЕРТАЦИИ 3 ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Иммунотоксическое действие ПХДД/ПХДФ на организм животных

1.2 Иммунотоксическое действие ПХДД/ПХДФ на организм человека

1.3 Механизм действия ПХДД/ПХДФ

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Характеристика групп обследуемых

2.2. Процедура пробоотбора

2.3. Иммунологические методы исследования

2.4. Химико-аналитические методы исследования

3.5. Методы статистической обработки результатов

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Химико-аналитическая характеристика контрольной группы и обследуемой когорты.

3.2. Результаты иммунологического обследования лиц контрольной группы и лиц, характеризующихся длительной контаминацией ПХДД/ПХДФ

3.2.1. Субпопуляционная структура лимфоцитов периферической крови у лиц контрольной группы и лиц, характеризующихся длительной контаминацией ПХДД/ПХДФ

3.2.2. Пролиферативная активность лимфоцитов лиц контрольной группы и лиц, характеризующихся длительной контаминацией ПХДД/ПХДФ

3.2.3. Уровни сывороточных иммуноглобулинов и антител к двуспиральной ДНК (апй-скБМАз) у лиц контрольной группы и лиц, длительно контаминированных ПХДД/ПХДФ

3.2.4. Фагоцитарная и метаболическая активность нейтрофилов и макрофагов у лиц контрольной группы и лиц, длительно контаминированных ПХДД/ПХДФ

3.3. Характеристика иммунного статуса лиц, контаминированных ПХДД/ПХДФ в раннем постнатальном периоде

3.4. Типы иммунного статуса лиц, характеризующихся "фоновым" уровнем загрязнения ПХДД/ПХДФ и лиц с высоким уровнем контаминации, выявленные с помощью метода кластерного анализа

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Иммунологические нарушения у лиц с высоким уровнем контаминации 2,3,7,8-тетрахлордибензопара-диоксином и родственными соединениями»

В настоящее время полихлорированные ароматические соединения занимают одно из основных мест в группе вредных химических факторов, загрязняющих окружающую среду. Это обширный класс полихлорированных дибензодиоксинов (ПХДД), полихлорированных дибензофуранов (ПХДФ) и полихлорированных бифенилов (ПХБ), объединяемых под названием диоксиноподобные суперэкотоксиканты (Hagenmaier Н., 1987; Hutzinger О. et al., 1988). Перманентное загрязнение биосферы этой группой ксенобиотиков происходит при промышленном хлорорганическом синтезе, нефтепереработке (Scand J. et al., 1989), при пожарах лесов и в результате сжигания муниципальных отбросов (Blumich et al., 1990) и пр. Кроме того, в мире известно более двухсот промышленных аварий и инцедентов, связанных с экстремальным выбросом ПХДД/ПХДФ в атмосферу (Westing A.N., 1984; Reggiani G.M., 1988; A.C. Московкин, 1997).

Накапливаясь в биосфере в критических концентрациях, суперэкотоксиканты создают серьезную угрозу для живых организмов, причем наибольшую опасность представляет не столько их острая токсичность, сколько постоянное воздействие на организм (Л.А.Федоров, 1994, В.Н.Майстренко с соавт., 1996, Galio М.А., 1991).

По мнению большинства исследователей сходная организация молекулярной структуры - планарная конфигурация молекулы с галогензамещенными водородами в латеральной позиции - определяет сходную токсикодинамику и токсикокинетику этих соединений (Birnbaum L., 1997; Van Birgelen A., Birnbaum L.,1997). Диоксиновые ксенобиотики высокоаффинно связываются с внутриклеточным арилуглеводородным рецептором (Ah-R), с последующей индукцией "токсифицирующих" изоформ цитохрома Р-450 (Р-4501А1) и развитием токсического эффекта.

Спектр последнего включает генотоксичность, канцерогенность, иммунотоксичность, гепатотоксичность, нарушение метаболизма эндогенных стероидов и пр. Наиболее токсичным представителем ксенобиотиков-суперэкотоксикантов является 2,3,7,8-тетрахлордибензо-пара-диоксин (2,3,7,8-ТХДД). Считается, что поражение иммунной системы - одно из ключевых проявлений токсичности 2,3,7,8-ТХДД. Иммунотропный эффект 2,3,7,8-ТХДД на животных изучен достаточно подробно и расценивается большинством авторов как иммуносупрессивный. В тоже время, несмотря на интенсивные исследования, остаются дискуссионными многие вопросы, касающиеся воздействия 2,3,7,8-ТХДД и родственных соединений на иммунную систему человека, отсутствуют четкие иммунологические критерии иммунотоксического действия 2,3,7,8-ТХДД. Причинами являются трудность в экстраполяции экспериментальных данных, высокая внутривидовая вариабельность экспрессии А1ьрецептора, различия в методологических подходах к оценке иммунного статуса и, в числе основных, включение в исследуемые когорты объектов с неподтвержденным химико-аналитическими методами уровнем контаминации ПХДД/ПХДФ на момент обследования. Можно полагать, что параллельные химико-биологические исследования представляют особую актуальность.

Цель исследования

Выявить нарушения иммунного статуса у лиц с подтвержденным высоким уровнем контаминации организма 2,3,7,8-ТХДД и родственными соединениями и установить их взаимосвязь с уровнем и профилем загрязнения.

Задачи исследования

1) Изучить уровень и профиль контаминации ПХДД/ПХДФ в популяции и когорте, подвергшейся профессиональному загрязнению суперэкотоксикантами;

2) Изучить субпопуляционную структуру лимфоцитов периферической крови у лиц с аналитически подтвержденным уровнем контаминации ПХДД/ПХДФ;

3) Изучить пролиферативную активность лимфоцитов периферической крови у лиц, контаминированных ПХДД/ПХДФ, и влияние 2,3,7,8-ТХДД на процессы активации лимфоцитов человека in vitro;

4) Изучить структуру сывороточных иммуноглобулинов у лиц с подтвержденным уровнем контаминации 2,3,7,8-ТХДД и родственными соединениями;

5) Реализовать системно-структурный подход при анализе полученных данных для выявления химико-биологических коррелятов.

Новизна исследования

Впервые проведено сравнительное систематическое параллельное химико-биологическое исследование, включающее определение уровня контаминации 2,3,7,8-ТХДД и родственными соединениями и расширенную оценку иммунного статуса в группе лиц, длительно подвергшихся воздействию суперэкотоксикантов и в группе, характеризующейся «фоновым» уровнем содержания ПХДД/ПХДФ в организме. Впервые сделана попытка выявления прямых коррелятов между контаминацией различными изомерами ПХДД/ПХДФ и рядом иммунологических параметров. Проведено сравнительное исследование митогенной реактивности и экспрессии активационных антигенов - рецептора к ИЛ-2 и ассоциированного с процессом апоптоза Fas/APO-1 гликопротеина в системе in vitro при прямом воздействии 2,3,7,8-ТХДД на лимфоциты лиц, характеризующихся фоновым уровнем контаминации и лимфоциты лиц, характеризующихся высоким уровнем контаминации ПХДД/ПХДФ.

Выявлен средний фоновый уровень контаминации ПХДД/ПХДФ жителей г. Уфы в возрасте от 40 до 60 лет при условии индивидуального пробоотбора. Обнаружено, что контаминация ПХДД/ПХДФ приводит к появлению в периферической крови лимфоцитов, экспрессирующих антиген фенотипически незрелых В-клеток CD 10 и связь этого показателя с суммарным уровнем загрязнения TEQ и уровнем загрязнения 2,3,7,8-ТХДД.

Выявлено, что лимфоциты лиц, длительно контаминированных ПХДД/ПХДФ характеризуются устойчивостью к иммунотоксическому воздействии ТХДД в системе in vitro, а также аномальной экспрессией рецептора к ИЛ-2 и ассоциированного с апоптозом Fas/APO-1 гликопротеина. Обнаружено, что изменения параметров иммунного статуса могут определяться различными изомерами ПХДД/ПХДФ, входящими в структуру загрязнения.

Вся совокупность полученных результатов позволила выявить типичные изменения иммунного статуса у лиц, характеризующихся длительной контаминацией ПХДД/ПХДФ, и их связь с уровнем и профилем загрязнения.

Практическая значимость

Результаты исследования позволяют определить критерии нарушений иммунного статуса при длительном воздействии ПХДД/ПХДФ и сформировать необходимый оптимум параметров и методические подходы в оценке иммунореактивности в группах риска. Изученные особенности иммунного статуса позволяют определить показания к иммунокорригирующей терапии и прогнозировать ее возможные побочные эффекты.

Внедрение

По материалам диссертации опубликовано 11 печатных работ. Материалы диссертации вошли в комплексные научно-практические отчеты по программе "ДИОКСИН"- Ситуация с диоксинами в Республике Башкортостан, Уфа, 1995-1998 и включены в нормативные критерии, характеризующие экологическую ситуацию города. Материалы работы вошли в методическое руководство для практических врачей "Иммунофенотипирование лимфоцитов в клинической практике", Уфа, 1997.

Апробация работы

Основные результаты исследования доложены на Российских, региональных и республиканских научно-практических конференциях "Эколого-гигиенические проблемы Уральского региона", Уфа, 1997; "Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях", Челябинск, 1997; "Экология и здоровье женщин и детей в Республике Башкортостан"; Уфа, 1998; Международных рабочих конференциях "DIOXIN-96", "DIOXIN-97", "DIOXIN-98", XIII Международном конгрессе фармакологов, секция иммунотоксикология (Мюнхен, 1998), а также заседаниях Общества иммунологов Республики Башкортостан.

Положения, выносимые на защиту

У лиц, характеризующихся высоким уровнем профессиональной контаминации ПХДД/ПХДФ не выявлено статистически значимых различий в структуре основных субпопуляций лимфоцитов (CD3+, CD4+, CD8+, CD72+, CD 16+) и содержании лимфоцитов, экспрессирующих индуцибельные антигены (CD25+, HLA-DR+, CD71+, CD25+), но обнаруживается повышенное количество лимфоцитов, экспрессирующих антиген фенотипически незрелых В-клеток - CD 10 при отсутствии морфологических признаков незрелости.

Лимфоциты лиц с высоким уровнем контаминации организма ПХДД/ПХДФ характеризуются неселективным нарушением пролиферативного ответа при воздействии различных митогенов, аномальной экспрессией рецептора к ИЛ-2 и Fas/APO-1-рецептора в процессе активации и более высокой, в сравнении с контрольным уровнем, устойчивостью к иммунотоксическому эффекту 2,3,7,8-ТХДД в системе in vitro, что свидетельствует об измененной реактивности иммуноцитов.

При использовании статистических методов многомерного анализа данных (факторный анализ, дискриминантный анализ и кластерный анализ) выявлены типичные особенности иммунного статуса лиц с высоким уровнем

10 контаминации ПХДД/ПХДФ и взаимосвязь нарушений ряда параметров иммунограммы с уровнем загрязнения определенными изомерами ПХДД/ПХДФ, что имеет прогностическое значение при изучении групп риска.

Структура и объем работы

Диссертация изложена на 143 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований и их обсуждения, заключения, списка литературы. Работа иллюстрирована 10 таблицами, 11 рисунками, 7 протоколами химико-аналитического и 7 протоколами иммунологического исследований, библиография включает 190 литературных источников.

Заключение диссертации по теме «Аллергология и иммулология», Курчатова, Нелли Наилевна

ВЫВОДЫ

1. Выявлены уровень и профиль контаминации 2,3,7,8-ТХДД и другими изомерами ПХДД/ПХДФ жителей г. Уфы в возрасте 40-60 лет, не имевших профессиональной экспозиции полихлорированными ароматическими соединениями, и когорты профессионально контаминированных лиц. Обнаружено, что уровень контаминации жителей г. Уфы, выраженный в TEQ ,составил 64 ppt, когорты - 126 ppt.

2. Установлено отсутствие статистически значимых различий в содержании основных субпопуляций лимфоцитов (CD3+, CD4+, CD8+, CD72+, CD16+) и лимфоцитов, экспрессирующих индуцибельные активационные антигены (CD25+, HLA-DR+, CD71+, CD95+) между контрольной группой и когортой; однако при этом методом многомерного факторного анализа выявлена взаимосвязь между суммарным уровнем контаминации 1,2,3,4,7,8-ГкХДД, 2,3,7,8-ТХДФ, 2,3,4,7,8-ПнХДФ, 1,2,3,4,7,8-ГкХДФ, 1,2,3,6,7,8-ГкХДФ, 1,2,3,7,8,9-ГкХДФ, 2,3,4,6,7,8-ГкХДФ, ОХДФ и содержанием С072+-В-лимфоцитов и НЬА-ОК+-лимфоцитов.

3. В периферической крови лиц, высоко контаминированных ПХДД/ПХДФ, выявлены лимфоциты, экспрессирующие мембранную энкефалиназу CD 10 (CALLA/J5), характерную для фенотипически незрелых форм, без признаков морфологической незрелости, что причинно связано с уровнями загрязнения 2,3,7,8-ТХДД, а также 1,2,3,7,8-ПнХДД, 1,2,3,6,7,8-ГкХДД, 1,2,3,7,8,9-ГкХДД и ОХДД.

4. Лимфоциты лиц с высоким уровнем контаминации ПХДД/ПХДФ, характеризуются неселективным нарушением пролиферативного ответа на митогены, что выражается более высоким уровнем спонтанной пролиферативной активности, падением индекса стимуляции и нарушением доза-зависимого ответа на митогены. Нарушение пролиферативного ответа обусловлено, в основном, контаминацией организма 1,2,3,7,8-ПнХДД, 1,2,3,6,7,8-ГкХДД, 1,2,3,7,8,9-ГкХДД и ОХДД.

5. В системе in vitro лимфоциты когорты характеризуются устойчивостью к иммунотоксическому действию 2,3,7,8-ТХДД и аномальной экспрессией рецепторов к ИЛ-2 и ассоциированного с апоптозом гликопротеина Fas/APO-1 в ответ на активацию митогенами.

6. Установлено отсутствие статистических различий между уровнями содержания основных классов иммуноглобулинов у лиц контрольной группы и когорты; но при использовании методов многомерного анализа выявлена взаимосвязь между суммарным уровнем контаминации 1,2,3,4,7,8-ГкХДД, 2,3,7,8-ТХДФ, 2,3,4,7,8-ПнХДФ, 1,2,3,4,7,8-ГкХДФ, 1,2,3,6,7,8-ГкХДФ, 1,2,3,7,8,9-ГкХДФ, 2,3,4,6,7,8-ГкХДФ, ОХДФ и уровнем содержания сывороточного IgA и между суммарным уровнем контаминации 1,2,3,7,8-ПнХДД, 1,2,3,6,7,8-ГкХДД, 1,2,3,7,8,9-ГкХДД, ОХДД и уровнем содержания IgG.

7. При использовании кластерного анализа выявлены типовые особенности иммунного статуса лиц, характеризующихся повышенным уровнем контаминации ПХДД/ПХДФ, свидетельствующие о системной перестройке иммунореактивности и отражающие особенности структуры загрязнения различными изомерами ПХДД/ПХДФ.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Загрязнение окружающей среды ксенобиотиками - чужеродными химическими соединениями - в настоящее время представляет собой глобальную экологическую проблему, стоящую в центре внимания многих исследователей из различных стран. В общем комплексе мероприятий, направленных на борьбу с загрязнением окружающей среды важная роль принадлежит биологическим исследованиям, оценивающим влияние вредных химических факторов на организм человека и животных. Среди техногенных факторов загрязнения одно из основных мест занимают полихлорированные дибензодиоксины и дибензофураны, часто объединяемые под общим названием диоксиноподобные суперэкотоксиканты.

Анализ работ, посвященных токсическому действию диоксинов показывает, что основная опасность этих соединений заключается не столько в их острой токсичности, сколько в их высоких кумулятивных свойствах. Эффект биоконцентрирования ПХДД/ПХДФ в живых системах усугубляется их чрезвычайной стабильностью, устойчивостью к химическому и физическому расщеплению, длительным периодом полувыведения, а также их высоким сродством к специфическому арилуглеводородному рецептору.Практически все проявления токсического действия ПХДД/ПХДФ - генотоксичность, канцерогенность, иммунотоксичность, гепатотоксичность, нарушение метаболизма гормонов, обмена углеводов, витаминов и других соединений - так или иначе опосредованы АЬ-рецептором и связаны с индукцией цитохрома Р 450 (Р 4501 А1-2). Тесная сопряженность АЬ-рецептора со стероидным рецептором, генами, контролирующими синтез цитокинов предполагает вмешательство ПХДД/ПХДФ в интимные механизмы регуляции гомеостаза ^Ы1;1ок 1Р., 1994). Подобные выводы получены в работах с экспериментальными животными и подтверждаются исследованиями в области изучения токсического действия данного класса соединений на организм человека.

Оценить токсическое действие ПХДД/ПХДФ на организм человека и, в частности на его иммунную систему, являющуюся по мнению многих исследователей главной мишенью "диоксинового удара", чрезвычайно сложно. Изучение доступной литературы, посвященной влиянию ПХДД/ПХДФ на иммунную систему человека, показало, что нет единого мнения о характере этого воздействия. Ряд исследователей описывает эффект воздействия 2,3,7,8-ТХДД и родственных ему соединений как иммуносупрессивный, связанный в первую очередь с нарушением созревания тимоцитов и индукцией их апоптоза. Другие авторы документируют изменение количественного состава основных субпопуляций лимфоцитов, обусловленное нарушением процесса внутритимусной дифференцировки CD4- и СБ8-клеток, явления дисиммуноглобулинемии, повышение уровня ЦИК, накопление в крови антител к собственным тканям. Общепризнанно, что наибольшей чувствительностью обладает детский организм, особенно в эмбриональный и лактационный периоды (Weisglas-Kuperus N. et al., 1988). Это подтвердилось и результатами обследования уникальной пары "контаминированная мать - дети, контаминированные в период естественного вскармливания" (раздел 3.3). При отсутствии существенных нарушений иммунного статуса у матери у обоих детей выявлен иммунопатологический синдром и нарушения параметров иммунного статуса. Другими исследователями сообщается, что не найдено четких взаимосвязей между экспозицией ПХДД/ПХДФ и ухудшением иммунного статуса (Evans R.G. et al., 1988; Webb K.B. et al., 1989; Tonn T. et al., 1996), a эффект иммуносупрессии, вызванный дибензодиоксинами/дибензофуранами является временным (Lan S.-J., 1990).

Причиной описанных противоречий является трудность экстраполяции данных, полученных в опытах на лабораторных животных и экспериментах in vitro, различия в степени выраженности влияния ПХДД/ПХДФ на иммунные органы, клетки и их функции, обусловленные уровнем и длительностью контакта с ксенобиотиками.

Как правило, исследования в области иммунотоксического действия диоксинов на людей связаны с инцедентами, вызванными выбросами хлорсодержащих ароматических пестицидов в окружающую среду, либо с авариями на производстве этих соединений. При этом организм человека контаминируется целым рядом изомеров ПХДД/ПХДФ, различных по своим токсикокинетическим характеристикам, вступающим между собой как в синергические, так и в антагонистические взаимодействия. В этой связи наиболее опасным представляется комбинированное действие диоксинов. Поэтому для адекватной оценки иммунотоксического действия ПХДД/ПХДФ наибольшую актуальность приобретает корректное проведение химико-аналитической процедуры определения содержания изомеров этих соединений в крови обследуемых (Birnbaum L., 1997).

В настоящей работе нами была сделана попытка выявления взаимосвязи отношений между уровнем загрязнения ПХДД/ПХДФ и нарушениями иммунологического статуса организма в условиях длительной контаминации с помощью современных методов химико-аналитического и биологического исследования. Весьма важным моментом представлялся поиск адекватных биоиндикаторов иммунотропного действия данного класса соединений и его наиболее токсичного изомера - 2,3,7,8-ТХДД. Самостоятельную научно-практическую ценность имело документированное химико-аналитическое подтверждение высокого уровня контаминации ПХДД/ПХДФ когорты работников цеха N19 ПО "Химпром", а также определение среднего "фонового" уровня контаминации жителей города Уфы в возрасте 45-60 лет, не имевших профессионального контакта с полихлорированными ксенобиотиками.

В процессе проведения иммунологического исследования стало ясно, что использование рутинных методов корреляционного анализа вряд ли позволит решить поставленные нами задачи. Обследованные группы не отличались статистически достоверно по процентному и абсолютному содержанию зрелых СБЗ+-лимфоцитов, что подтвердилось также при выборочном сравнении количества клеток, экспрессирующих и другие, характерные для Т-клеток, антигены. Имелась тенденция к повышению количества СБ4+-лимфоцитов (хелперы/индукторы), В-клеток, экспрессирующих антигены СБ72+ и НЬА-БК+, а также клеток, несущих на мембране ассоциированный с процессом апоптоза гликопротеин Рав/АРСМ (СБ95) у лиц с высоким уровнем контаминации ПХДД/ПХДФ. В то же время в крови лиц когортной группы было обнаружено статистически значимое увеличение числа лимфоцитов, экспрессирующих антиген СБ10 (СА1ХАЯ5), характерный для фенотипически незрелых форм и являющийся мембранной энкефалиназой. При этом признаков морфологической незрелости не было выявлено; признаки наличия лимфопролиферативных заболеваний в анамнезе не отмечались. На сегодняшний день этот феномен трудно объяснить. Однако можно предполагать воздействие ПХДД/ПХДФ как на процесс дифференцировки В-лимфоцита, так и на аномальную экспрессию фермента в результате нарушения биохимизма клеточной мембраны. Появление в периферической крови лимфоцитов, экспрессирующих антигены фенотипически незрелых клеток без признаков морфологической незрелости описана у клинически здоровых детей, проживающих на территории, зараженной радионуклидами вследствие аварии на Чернобыльской АЭС, а также в период ремиссии острых лимфобластных лейкозов (Г.Н.Зубрихина с соавт., 1994).

Анализ функциональной активности лимфоцитов при использовании широкого спектра Т- и В-клеточных митогенов показал, что пролиферация лимфоцитов в когорте была выше, чем в донорской группе, причем это касалось как спонтанного уровня бластообразования, так и ответа клеток на использованные митогены. При этом в когорте наблюдалось угнетение пролиферации клеток, оцениваемое по индексу стимуляции. Различия в реактивности клеток также подтвердились при изучении доза-зависимости ответа, которая в когортной группе была нарушена: были менее выражены различия на максимальные и минимальные дозы митогенов.

Нами было обнаружено, что лимфоциты лиц когорты и контрольной группы характеризуются различным характером взаимодействия с 2,3,7,8-ТХДД в условиях in vitro. При изучении функциональной реактивности клеток, стимулированных ФГА и аллоантигеном (анти-СБЗ-антитела) через Т-клеточный рецептор было обнаружено, что 2,3,7,8-ТХДД в обоих случаях вызывал угнетение пролиферации в контрольной группе; лимфоциты профессиональных экспозитов были менее чувствительны к ингибирующему процесс пролиферации воздействия ксенобиотика, что связывается нами с включением адаптационных механизмов, поддерживающих гомеостаз организма в условиях длительной контаминации. Кроме того, лимфоциты лиц когортной группы характеризовались аномальной экспрессией активационных маркеров - рецепторов к ИЛ-2 и Fas/APO-1 гликопротеина. В присутствии 2,3,7,8-ТХДД в культуре лимфоциты контаминированных лиц характеризовались непропорционально высокой интенсивностью экспрессии интерлейкинового рецептора CD25 в ответ на стимуляцию ФГА, что хорошо согласуется со способностью ТХДД изменять транскрипцию гена, контролирующего синтез ИЛ-2 (Jeon M-S., Esser С., 1997). Что касается Fas-рецептора, то уровень экспрессии этих молекул в лимфоцитах, стимулированных анти-СБЗ антителами, в когорте был достоверно более низким, чем у неэкспонированных лиц, что свидетельствует о нарушении механизмов негативной селекции у лиц, контаминированных ПХДД/ПХДФ. Способность ТХДД увеличивать пролиферацию клеток и ингибировать процесс апоптоза может служить непрямым механизмом канцерогенеза. Это хорошо согласуется с наличием у контаминированных лиц лимфоцитов с маркером фенотипической незрелости.

У лиц когортной группы прослеживалась тенденция к гипериммуноглобулинемии по классу IgA, а также к увеличению уровней IgE и антител к двуспиральной ДНК. Лица, длительно контаминированные

ПХДД/ПХДФ, отличались также несколько большим содержанием диформазан-позитивных нейтрофилов.

Наибольший интерес представлял анализ взаимосвязи тех или иных изменений параметров иммунного статуса от уровня контаминации различными изомерами ПХДД/ПХДФ. В этой связи большое значение приобретает современный подход к оценке ксенотоксичности (иммунотоксичности), позволяющий корректно определить не только интегральные последствия воздействия суммы ксенобиотиков, но и понять дифференциированный характер влияния отдельных ксенобиотиков, а также их комплекса. Однако оценка биологического эффекта каждого изомера на организм человека и, в частности, на иммунную систему практически невозможна. Поэтому одним из возможных методологических подходов является применение многомерного статистического анализа данных. Эти исследования пока только начинаются (Клгтап W.R. е! а1., 1997).

Использование математического аппарата многомерного факторного анализа позволило нам выявить скрытые, но объективно существующие закономерности путем сжатия информации и выявления общих факторов (комплексных переменных) и раскрыть взаимосвязь между этими комплексными переменными и признаками при независимом характере реагирования остальных параметров в анализируемом признаковом пространстве. С помощью метода многомерного статистического анализа данных было обнаружено, что структура загрязнения ПХДД/ПХДФ формируется из различных источников загрязнения для каждого из обследуемых. Было выявлено три фактора, объединяющих родственные переменные, характеризующие структуру контаминации организма. Принципиальные различия между группами были обусловлены только одним фактором - тем самым, который объединял переменные, отражающие уровень контаминации 2,3,7,8-ТХДД и уровень суммарного эквивалентного загрязнения (1-ТЕС)) и был тесно связан с анамнестическими данными о перенесенном хлоракне.

Нами были также выявлены факторы, характеризующие структуру отдельных звеньев иммунной системы: субпопуляционной структуры лимфоцитов, пролиферативной активности лимфоцитов, уровня содержания иммуноглобулинов, поглотительной и метаболической активности фагоцитов.

В процессе анализа взаимосвязи между выявленными комплексными переменными - факторами - была обнаружена прямая статистически значимая корреляция между уровнем загрязнения 2,3,7,8-ТХДД и появлением в крови лимфоцитов, экспрессирующих мембранную энкефалиназу CALLA/J5, характерную для фенотипически незрелых клеток. Кроме того, появление в крови клеток с маркером CD 10 определялось действием фактора, включающего в себя переменные, отражающие уровень контаминации ОХДД, 1,2,3,7,8-ПнХДД и 1,2,3,6,7,8- и 1,2,3,7,8,9-ГкХДД. Также была выявлена взаимосвязь между фактором, отражающим контаминацию тетра-, пента- и гексахлорированными фуранами, и факторами, характеризующими структуру субпопуляции В-клеток (процентное содержание зрелых CD72+-лимфоцитов и лимфоцитов, экспрессирующих антигены гистосовместимости 2-го класса). Этот же фактор контаминации был связан с переменными, объединяющими спонтанную пролиферативную активность и абсолютные значения пролиферативной активности в процентах, а также с фактором, отражающим уровень содержания IgG в крови. Фактор, характеризующий содержание сывороточного IgA, коррелировал со структурой загрязнения полихлорированными дибензофуранами.

Таким образом, несмотря на отсутствие статистически значимых отличий в иммунологических параметрах между лицами когорты и контрольной группы, многомерные методы статистического анализа позволили установить взаимосвязи между структурой загрязнения ПХДД/ПХДФ и основными характеристиками иммунного статуса организма.

Характер реагирования иммунной системы связан с ее сложной сетевой организацией и взаимосвязью всех ее составных структур, что приводит не только к прямому, но и опосредованному биоэффекту неблагоприятного экотоксиканта. Так, дальнейший анализ взаимосвязей между комплексными переменными показал существование статистически значимой корреляции между факторами, объединяющими С012+- и НЬА-БЯ+-лимфоциты, и фактором, отражающим содержание 1§0, взаимосвязь между СБ25+ В- и Т-клеток и уровнем ^А, корреляции между фактором, в который входит переменная, характеризующая ответ клеток на митоген лаконоса (Т-зависимые В-лимфоциты), и фактором, характеризующим уровни содержания ^А и ^С. Эти факты свидетельствуют в пользу того утверждения, что В-лимфоциты являются основной мишенью иммунотоксического действия 2,3,7,8-ТХДД, и о возможности опосредованного воздействия диоксиноподобных ксенобиотиков на процессы антителогенеза,связанные с возможной функциональной неполноценностью СОЮ+-В-клеток, выявленных у контаминированных лиц.

Дальнейшим этапом нашей работы явилась попытка создания рабочей классификации, позволяющей прогнозировать принадлежность вновь выявленных объектов к той или иной группе. Эта задача была решена с помощью использования математического аппарата кластерного анализа, разработанного Б.Г.Миркиным в рамках программы "С1а88ша81ег, версия 1.1". Признаки, вошедшие в массив данных кластерного анализа, включали количественные параметры субпопуляционной структуры лимфоцитов, их пролиферативной активности, уровня содержания сывороточных иммуноглобулинов. В результате проведенного анализа было выявлено два крупных альтернативных кластера, различающихся по ключевому признаку -наличие профессиональной контаминации. Особенности иммунологических показателей, характеризующих кластер, в который вошло большинство объектов - профессиональных экспозитов, заключались в более высоких значениях количества хелперов/индукторов, зрелых В-лимфоцитов и клеток, экспрессирующих на мембране рецептор к ИЛ-2 и Ра8/АРО-1 гликопротенн, связанный с процессом апоптоза, резком увеличении содержания лимфоцитов, экспрессирующих маркер фенотипически незрелых клеток СБ 10, депрессии количества МК-клеток. Функциональная активность лимфоцитов характеризовалась более высокой, по сравнению со средневыборочной спонтанной пролиферативной активностью, снижением индекса стимуляции в РБТЛ; уровень содержания сывороточных иммуноглобулинов не отличался от средневыборочного. Выявленные в исследовании характерные особенности субпопуляционной структуры и митогенного ответа лиц контрольной группы и когорты нашли четкое отражение при построении классификации в рамках кластерного анализа. Таким образом, оценивая направленность вектора иммунотоксического действия 2,3,7,8-ТХДД и родственных соединений на отдельные звенья иммунореактивности и иммунную систему в целом, мы пришли к выводу, что можно рассматривать его сдвиг в сторону анормальной активации иммунитета.

Правомерность классификации по типам реагирования иммунной системы была проверена при помощи процедуры поэтапного дискриминантного анализа, позволяющей предположить высокий уровень контаминации ПХДД/ПХДФ по выявленным особенностям иммунного статуса. Результаты проверки работоспособности нашей классификации показали высокую степень ее корректности, позволившей со 100%-ой точностью выявить объекты с высоким уровнем контаминации на основании анализа параметров иммунограммы.

Таким образом, анализ иммунотропного действия 2,3,7,8-ТХДД и родственных ему соединений позволяет охарактеризовать его как ксенобиотик с системным иммунотоксическим действием. Необходимо отметить, что наблюдаемые биоэффекты связаны исключительно с длительным действием и множеством одновременно действующих факторов. Поздние биоэффекты носят вероятностный и нелинейный характер.

121

Хронический экозависимый стресс со стохастическими исходами приводит к изменению адаптационных и регуляторных механизмов функционирования иммунной системы и всего организма в целом.

Новый развивающийся подход комплексной оценки биологических эффектов неблагоприятных экологических факторов, использование сочетанных методов смежных наук помогает объяснить многие, на первый взгляд противоречивые, стороны этих эффектов. Проведенное нами исследование представляет собой попытку осмыслить взаимосвязи между уровнями загрязнения поллютантами и развитием нарушений иммунологической реактивности, дать адекватную оценку нестабильности под действием химического фактора. Несомненно, данный подход будет дополнятся новыми, позволяющими в дальнейшем развивать знания, непосредственно связанные с проблемой взаимоотношения человека и окружающей среды.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Курчатова, Нелли Наилевна, 1999 год

1. Амирова З.К., Круглов Э.А. Ситуация с диоксинами в Республике Башкортостан. Уфа: Государственное изд-во науч.-техн. лит-ры "Реактив", 1998,- 115с.

2. Арчаков А.Н. Микросомальное окисление. М.: Наука, 1975. - 327с.

3. Баранов Г.М. Диоксины и производство лекарств// Решение актуальных задач фармации на совр. этапе: Тезисы докладов науч. конференции, посвящ. 50-летию НИИ фармации.-М.,1994.-С.З-5.

4. Барышников А.Ю., Тоневицкий А.Г. Моноклональные антитела в лаборатории и клинике.-М.-1997.-211с.

5. Беломытцева Л.А. Состояние здоровья работающих в производстве бутилового эфира 2,4,5-трихлорфеноксиуксусной кислоты. Отчет НИР/ УфНИИГиПЗ.-Уфа, 1984.-20с.

6. Брондз Б.Т. Т-лимфоциты и их рецепторы в иммунологическом распознавании. М.: Наука, 1987. - 471с.

7. Жамбю М. Иерархический кластер-анализ соответствий.-М., 1984.- 204с.

8. Иберла К. Факторный анализ: Пер. с нем. -М.:Статистика, 1980,- 399с.

9. Ю.Игнатьева Л.П. Гигиеническая оценка и разработка критериев опасности диоксинов в окружающей среде.// Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук.- Иркутск, 1997.

10. Иванова О.В., Кожухаров Т.Н., Порошенко Г.Г. Диоксины и туберкулез// Туберкулез и экология,-1995.-N4.-0.72-75.

11. Канценович Л.А., Рузыбакиев P.M., Федорина Л.А. Т- и В-системы иммунитета у больных с интоксикацией пестицидами// Гиг. труда и профзабол. 1971. - N2. - С. 152.

12. Каюмова А.Ф. Нарушения в системе крови, вызванные гербицидом -аминной солью 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты (экспериментальное исследование).// Автореферат на соискание ученой степени доктора медицинских наук.- Челябинск, 1996.

13. Киселев A.B., Худолей В.В. Отравленные города// Евразия: Экол. мониторинг.-1995.-N3.-C.28-3 6.

14. Клюев H.A. Современное состояние эколого-аналитического контроля диоксинов в Российской Федерации// Диоксины суперэкотоксиканты 21 в.: пробл. N1. М., 1997. -С.84-101.

15. Ковалев И.Е., Мусабаев Э.И., Ахмедова М.Д. Иммунохимическая функциональная система гомеостаза при инфекционной патологии. -Ташкент: "Навруз", 1994. 196с.

16. Круглов Э.А, Амирова З.К., Сибиряк C.B. Ситуация с диоксинами в Республике Башкортостан. Диоксины в биологических тканях человека (поступление, накопление и воздействие) Уфа: Государственное изд-во науч.-техн. лит-ры "Реактив", 1996.- 45с.

17. Крюков E.H., Мавликаев Р.К., Лавров А.Л. Воздействие 2,3,7,8-тетрахлордибензо-п-диоксина на формирование поствакцинального иммунитета к болезни Ньюкасла у цыплят// Ульян, с.-х. ин-т.-Ульяновск, 1995.-С.67-70.

18. Маянский А.Н. Комплексная оценка функции фагоцитов при воспалительных заболеваних: Методические рекомендации.-Новосибирск, 1985.

19. Мельникова Л.А., Новикова Д.К., Гресь A.A., Доценко Э.А. Изменение индуцированной фитогемагглютинином экспрессии рецепторов к ИЛ-2 на лимфоцитах под влиянием иммуномодуляторов// Иммунология. -1994. -N5. -С.57-59.

20. Мельнов С.Б., Дударенко О.И., Савицкий В.П. Экспрессия антигена Fas/Apo-1 у детей, больных раком щитовидной железы, проживающих на загрязненных радионуклидами территориях//Иммунология.-1998,- N2,-С.52-53.

21. Московкин A.C. Образование диоксинов в результате химических аварий и методы анализа этих соединений в объектах окружающей среды// Медицина катастроф. -1997.-N3.-C.116-122.

22. Новиков B.C. Программированная клеточная гибель. Санкт-Петербург. -Наука. -1996. -С.44.

23. Новиков Ю.В., Румянцев Г.И., Минин Г.Д., Сайфутдинов М.М. Диоксины в среде обитания человека новая гигиеническая проблема //Гигиена и санитария.- 1994.- N 3,- С.36-40.

24. Новикова М.С., Митерев Г.Ю., Морозова Н.Г., Шахбазян Г.П., Булычева Т.И. Создание панели моноклональных антител для иммунологического прогнозирования развития рецидивов острого лимфобластного лейкоза// Иммунология,- 1990. -N5.-C.23-26.

25. Поздняков С.П., Румак B.C., Софронов Г.А. Биологически обоснованный феноменологический подход к оценке риска от воздействия диоксинсодержащих экотоксикантов// Тропцентр-98. Кн.2:Ч.З/Совмест. Рос.-Вьет. троп. н.-и. центр.- М.Д997.-С.40.

26. Порядин Г.В., Салмаси Ж.М., Макарко А.И. К вопросу о снижении числа С08+-лимфоцитов при атопии: поиск компромисса// Иммунология.-1997,-N3.-С.35-38.

27. Румак B.C., Поздняков С.П. Методологические проблемы токсикометрии диоксинсодержащих воздействий внешней среды// Диоксины суперэкотоксиканты 21 в.:пробл. N1.-M.-1997.C.62-84.

28. Середенин С.Б., Дурнев А.Д. Фармакологическая защита генома. М.: ВИНИТИ, 1992. -162с.

29. Зб.Самойлина H.JI. Морфологический метод оценки бластной трансформации лимфоцитов в культуре// Лабораторное дело.-1970.- N8,-С.455-463.

30. Сибиряк C.B. Взаимодействие иммунной системы и монооксигеназной системы печени в фармакологическом эффекте иммуностимуляторов: теоретические и прикладные аспекты: Дис. д-ра мед наук.-Уфа.-1996.-256с.

31. Сидоров К.К. Какое из химических веществ считается в настоящее время наиболее токсичным?// Токсиколог. вестн.-1996.-Т2.-С.28.

32. Симонова A.B., Лиознер Л.А., Сидоренко И.В. Анализ субпопуляций лимфоцитов методом проточной цитометрии в разных группах доноров. Иммунология. -1998. -N6.-C.72-75.

33. Федоров Л.А. Диоксины как экологическая опасность: ретроспектива и перспективы //М. "Наука".- 1993.

34. Филатов A.B., Бачурин П.С., Маркова H.A., Кирюхин А.Ю. Исследование субпопуляционного состава лимфоцитов человека с помощью панели моноклональных антител//Гематол. тансфузиол.- 1990.-N4.-С.16-19.

35. Флауэр Р., Дейл М. Противовоспалительное действие кортикостероидов// Руководство по иммунофармакологии/ Под ред. М.Дейла, Дж.Формана: Пер. с англ. М.: Медицина, 1997. -С.246-259.

36. Фримель Г. Иммунологические методы,- М. "Медицина",-1987.- С. 120121.

37. Харламова Т. Химический СПИД.//Диоксины в научной литературе/Под ред. Л.М.Карамовой. Уфа, 1997. - С. 30-31.

38. Щербаков В.М., Тихонов А.В. Изоформы цитохрома Р-450 человека.-1995.-90с.

39. Ядзовский В.В., Дмитриева Н.Г., Алексеев Л.П. Динамика пролиферативного ответа лимфоцитов на митогенные лектины и анти-CD3-антитела в культурах цельной крови и выделенных клеток у здоровых людей// Иммунология.-N5.-C.21 -24.

40. Abraham К., Papke OV/Organohalogen Compounds. 1994. - Vol.21. - Р.21.

41. Autrup H., Harris С., Stones G., Selkirk J., Schafer P., Trump B. Metabolism of 3H.benzopyrene by cultured human bronchus and cultured human pulmonary alveolar macrophages// Lab. Invest. 1978. - Vol.38,N3. - P.217-224.

42. Badesha J.S., Maliji G., Flans B. Immunotixic effects of exposure of rats to xenobiotics via maternal lactaition. Part 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo- p-dioxin (TCDD)// Int.J.Exp.Pathol.-1995.-Vol.76,N6.-P.425-439.

43. Bargmann R. Signikanzuntersuchungen der einfanchen Struktur in der Faaktoren-Analise// Mitt. Math/ Statist. -1955 -Vol.7.- P.-1-24.

44. Basharova G.R., Roitman S.I., Khavkin Yu.A. Some immunologic indicators in persons exposed to chloracne// Organohalogen Compounds. -1996. Vol.30.-P.319-323.

45. Birnbaum L.S. Beyong TEFs:Mixtures of dioxins and non-dioxins// Organohalogen Compounds. -1997. -Vol.34.-P. 199-202.

46. Blaylock B.L., Holladay S.D., Comment C.E., Heidel J.J., Luster M.I. Exposure to TCDD älteres fetal thymocyte maturation// Toxicol. Appl. Pharmacol.-1992 -Vol.112. -P.207-213.

47. Blumich M.J. PCDD und PCDF bei der Verbrennung von kommunaiem Abfall // Nachr.Chem., Tectn. und Lab. -1990. H.38, N3. -S.324, 326-328.

48. Boyum A. Separation of leucocytes from bblood and bone marrow// Scand. J. Clin. Lab. Investig.-1968.-Vol.267.-P.95-99.

49. Brand-Rauf P.W., Papke O., Shecter A. Plasma epidermal growth faktor receptor as a biomarker of dioxins exposure// Organohalogen Compounds. -1998. -Vol.38. -P.83.

50. Brinder C., Hiddeman W. Programmed cell death many questions still to be answered//Ann. Hematol.-1994.-Vol.69,Nl. -P.45-55.

51. Brunner T., Yoo T.S., Ferguson T.A., Green D.R. Regulation of CD95 ligand expression: a key element in immune regulation?// Behring Inst. Mitt. -1996.-Vol.97.-P.161-174.

52. Chao W.-Y., Hsu C.-C., Cuo Y. L. Viddle-ear desease in children exposed prenatally to polichlorinated bifenils and pol ¡chlorinated dibenzofurans// Arch. Environ. Health.-1997,- Vol.52,N4.-P.257-262.

53. Chem. Eng. News//Dioxin Report: Special issue. -1983.-Vol.61,N23.-P.23-64.

54. Cheredeev A.N., Kovalchuk L.V. Pathogenetic priciple of immune sistem evaluation in human: Posititive and negative aktivation// Russion J.Immunology -1997. -Vol. 2.N2.-P. 85-90.

55. Chim. e ind.(ItaL)// Effetti della diossina sulla populasione di Seveso. -The analytical rewie.-l 992,-Vol.74.-P.709.

56. Cikrit P. Die Gefahrdung des Menschen durch Dioxin und vervandte Verbindungen.// Nachr. Chem. Tech, und Lab.-1991.- Vol.39, N6.- P.650-656.

57. Clare G.C., Blanc J.A., Germolec D.R., Luster M.I. 2,3,7,8-TCDD stimulation of tyrosine phosforylation in B-lymphocytes: potential role in immunosupression// Mol.Pharmacol.-1991.- Vol.39,N4. -P495-501.

58. Couture L.A., Abbot B.D., Brinbaum L.S. A clinical review of the developmental toxiciti and teratogenecity of 2,3,7,8-TCDD: Recent advances toward understanding the mechanism// Teratology. -1990. -Vol. 42, N6. -P.619-627.

59. Devine O.J., Karon J.M., Flanders W.D. Relationships between concentrations of 2,3,7,8-TCDD serum and personal characteristics in U.S. Army Vietnam veterans//Chemosphera.- 1990,- Vol.20,N6. -P681-691.

60. Dewailli E., Bruneau S., Laliberte C., Belles M., Weber J., Ayotte P., Roy R. Breast milk contamination by PCBs and PCDDs/PCDFs in Arctic Cquebeq: Preliminary results on the immune status of inuit infants// Short paper in:

61. Dioxin'93. -13th International symposium on chlorinated dioxins and related compounds, Vienna.-P.403-406.

62. Dickson L.C., Buzic S.C. Health risk of "dioxins": A rewie of environmental and toxicological considerations// Vet. and Human Toxicol. 1993. - 35, N1.-P.68-77.

63. Dooley R., Holsaple M. Elucidation of cellular targets recponsible for TCDD-induced supression of antybody response// Immunopharmacology.-1988.-Vol.16.-P. 167-180.

64. Enan E., Matsumura F. 2,3,7,8-TCDD-induced changes in glucose transporting activity in gunea pigs, mice and rats in vivo and in vitro// J.Biochem.Toxicol.-1994.-Vol.9,N2.-P97-106.

65. Esser C., Lai Z., Kremer J. Interference of dioxins with thymocyte development and T-cells function// Zentralbe Hyg. Und Umweltmed.-1994.-Vol. 195,N3.-P226-227.

66. Evans R.G., Webb K.B. A medical follow-up of the health effects of longterm exposure to 2,3,7,8-TCDD// Arch. Environ. Hlth. -1988.- Vol.43, N4. -P.273-278.

67. Ezzel C. Clearifying dioxin's cellular invasion// Sci. News. -1991.-Vol. 131 ,N20.-P308.

68. Fine J., Gasiwicz T., Fiore N. Prothymocyte activaties reduced by perinatal 2,3,7,8-TCDD exposure// J. Pharmacol, and Exp. Ther. -1990. -Vol. 255, N1. -P.128-132.

69. Fine J.,Silverstone A.E., Gasiewich T.A. The impaiment of prothymocite activity by 2,3,7,8-TCDD//J. Immunology. -1990. -Vol.144,N4. -P.l 169-1176.

70. Flasch-Janis D. Becher H. // Toxicol. Environ. Health. 1996. Vol.47. - P.363.

71. Fraizier D.E., Silverstone A.E., Gasiewich T.A. 2,3,7,8-TCDD-indused thymic atrophy and lymphoyte stem cell alterations by mechanisms independent of the estrogen receptor// Biochem. Pharmacol.-1994.-Vol.47,N11.-P.2039-2048.

72. Funseth E., Ilback N.-G. Effects of 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo- p-dioxin on blood and spleen natural killer (NK) cell activity in the mouse// Toxicol.Lett.-1992.-Vol.60,N3.-P.237-256.

73. Fürst P., Beck H., Theelen R. Assesment of human intake of PCDDs PCDFs from different environmental sourses// Toxic Sust. 1992. Vol. 12,N2-1. P. 133150.

74. Galio M.A., Scheuplein R.J., Heijden K.E. Biological basis for risk to dioxins and related compounds// Lab. Press, -1991. -Vol.16. -P.501.

75. Germolec D., Adams N., Luster M. Comparative assesment of metabolic enzime level in macrophage populations on the F344 rats// Biochem.Pharmac.-1995.-Vol.80,N9.-P1495-1504.

76. Hagenmaier H. Belasting der Umwelt mit polychlorierten Dibenzodioxinen und polychlorierten Dibenzofuranen//Tibingen. -1987.-135s.

77. Harper N., Connor K., Safe S. Immunotoxic potencies of polychlorinated bifenil (PCB), dibenzofuran (PCDF) and dibenzo-p-dioxin (PCDD) congeres in C57B1/6 and DBA/2 mice// Toxicology. -1993. -Vol.80. -N2-3. -P.217-227.

78. Harper N., Steinberg M., Safe S. Effects of allogenetic serum on the in vitro immune response// J.Cell Biochem. -1995. -Suppl.19a.-P.194.

79. Heinzlow B. Dioxine in der Frauenmilk// Padiat Prax.-1991.-Vol.42,N3.-P.515-522.

80. Hirota Y., Tokugunaga S., Kataoka K., Shinohara S.// Fukuoka igaku zasshi=Fukuka acta med.-1997.-Vol.88,N5.-P.220-225.

81. Hirschhorn K., Hirschhorn R. Mechanisms of limphosyte activation. Mechanisms of cell-mediated immunity// Ed. McCluskey R., Cohen S.- J.Wiley & Sons: Ney York.-1974.

82. Hoffman R.E., Stehr-Green P.A., Webb K.B., Evans R.G., Knutsen A.P., Schraw W.F., Staake J.L., Gibson B.B., Steinberg K.K. Health effects of longtime exposure to 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin// j Am. med. Assoc.-1986,- Vol.255.-P.2031-2038.

83. Holsapple M.P., Morris D.L., Wood S., Snyder N.// 2,3,7,8- tetrachlorodibenzo -p- dioxin -induced changes in immunocompetence : Possible mechanisms// Annu. Dev. Pharmacol, and Toxicol. -1991 Vol.31.-P.73-100.

84. Houk V.N. Discussion of Vietnam veteran and agent orange issues //Biol. Basis Risk Assessm. Dioxin and Relat.Compaunds. Cold Spring Harbor (NY).-1991.-P259-275.

85. Houk V.N. Dioxin risk assesment for human health: Scientificially defensible of or //Qual. Assur.: Good Pract., Regul. and Law. -1992. -Vol.1,N2. -P. 104114.

86. Houk V.N. Rewie of research on health effects of PCDDs and PSDFs to develop human risk assesment// Toxic. Subst.J.- 1992.-12,N2-4.-P.81-190.

87. Houk V.N. The health effects of dioxin on humans //Qual. Assur.: Good Pract.,Regul.and Law.-1992.-Vol.l,N2. -P.97-103

88. Huff J.E., Salmon A.G., Hooper N.K. Long-term carcincinogenesis studies of 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin and hexachloro -dibenzo -p-dioxins// Cell Biol, and Toxicol. -1991. -Vol.7,N1. -P.67-94.

89. Hutzenger O., Fiedler H. Formation of dioxins and related compounds in industrial processes//NATO/CCMC.-Report N173.-74p.

90. Ilkeda M. Clinical Pictures of Occupatationna PCB Poisoning and Yusho/Yo-Cheng cases: Are the Same? //Dioxin'94. -Vol.21. -P.51-56.

91. Illera V.A., Perandones C.E., Stanz L.L., Mower D.A., Ashman R.F. Apoptosis in Splenic B-lymphocytes.//Journal of Immunology.-1993.-Vol. 151. -P.2965-2973.

92. Iton N., Yonehara S., Ishii A. The polypeptide encoded by the cDNA for human cell surface antigen Fas can mediate apoptosis // Cell. -1991. Vol.66.-P.223.

93. Jager G„ Lan B.// Dormer-Leuk. Res. -1982. -Vol.6. -P.421-423.

94. Jennings A.M., Wild G., Ward J.D., Ward A. Immunological abhormalities 17 years after accidental exposure to 2,3,7,8-TCDD //Brit. J.industr. -1988. -Vol.45, N10. -P.701-704.

95. Jeon M.-S., Esser C. Induction of IL-2 by 2,3,7,8-TCDD in fetal thimocytes and T-cells of mouse//Organohalogen Compounds.-1997. -Vol.37.-P. 100-103.

96. Kimbrogh R.D. Tolerable daily inlake of 2,3,7,8- tetrachlorodibenzo-p-dioxin: recent data on mechanism and animal carcinogenecity// Toxic Subsr,J. -1992. -Vol.12, N2-4. -P.295-306.

97. Kimbrough R.D., Jensen A.A.//Top. Environ. Hlth. -1989.- Vol.4.-2nd Ed., Amserdam.

98. Kirman W.R., Long T.F., Gargas M.I., Paustenbash D.J. A heuristic model for the molecular mechanism of action for dioxin-likes compounds: a view incide the "Black Box"// Organohalogen Compounds.-1997. -Vol.34.-P.323-327.

99. Koga N., Kuroki H., Masuda Y.// Fukuoka acta med. -1991. -Vol.82,N5,-P. 197-206.

100. Kozlov I., Yemelyanov A. CD anigens: Reviw of data obtaned by April'98// Rus. J. Immunol.-1998.-Vol.3.-P.-108-132.

101. Kronenberg S. 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin leads to development of mature CD8 cells in MHC-deficient mice//Organohalogen Compounds. -Vol.34. -P. 104-107.

102. Krowke R., Abraham K., Wiestmuller T., Hagemaier H., Neubert D. Transfer of varios PCDDs and PSDFs via placenta and mother's milk to marmoset offspring//Chemosphere. -1990. -Vol.20,N7. -P.1065-1070.

103. Kurl R.N., Lund J. Poellinger L. Differential effect of 2,3,7,8-TCDD on nuclear RNA polymerase activity in the rat liver and thymus// Biochem. Pharmacol. -1982. -Vol.31, N15. -P.2459-2462.

104. Lan S.-J., Yen Y.-Y., Lan J.-L., Chen E.-R., Ko Y.-C. Immunity of PSB transplacentar Yu-Cheng children in Tiwan// Bull. Environ. Contam. Toxicol.-1990.-Vol.44.-P.224-229.

105. Lang D.S., Becker S., Delvin R.B., Koren H.S. Lack of evidence for direct effects of 2,3,7,8-TCDD on human peripherial blood lymphocite subcets// Zentrable Hyg. und Umveltmed. -1995. -Vol.l98,Nl.-P22.

106. Lang D.S., Becker S., Clare G.C., Delvin R.B., Koren H.S. Lack of direct immunosupressive effects of 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) on human peripherial blood limphocite subcets in vitro// Arch. Toxicol.- 1994. -Vol.68,N5.-P.-196-302.

107. Liu P.C., Matsumura F. Differential effects of 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin on the "adipose-type" and "brain-type" glucose transporter in mice// Mol. Pharmacol. -1995. Vol.47,N1.-P.65-73.

108. Long B.D., Anders G.J., Idenburg M.J. Influence of eritrosyte contamination on optimal phytohaemagglutinin concentration in Chinese hamster limphocyte cultures//J. Immunol. Meth.- 1983.-Vol.61, T1.-P.43-48.

109. Lu Y.-C., WuY.C. Clinical findings and immunological abnormalities in Yu-Cheng patients// Environ. Health Perspect. -1985.-Vol.59.-P. 17-29.

110. Lundberg K., Grovik K.O., Dencker L. 2,3,7,8-TCDD indused supression of the local immune responce// Int.J.Immunopharmacol. -1991. -Vol.13,N4. -P357-368.

111. Luster M., Germolec D., Clare G., Weigan G., Rosental C. Selective effects of 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin and corticosteroid on in vitro limphocite maturaition// J.Immunol.- 1988.-Vol.l40.-P928-935.

112. McConkey D.J., Ovenius S. 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin (PCDD) hills glucocorticoidsensitive thymocytes in vivo// Biochem. and biophys. res. commun. -1989. -Vol.160, N3. -P. 1003-1008.

113. Miyawaki T., Uehara T., Nibu R. Differential expression of apoptosis-related Fas Antigen on limphocyte subpopulation in human peripherial blood// J. Immunol.-1992. -Vol. 149,N11. P.3753-3758.

114. Mei-Lin M., Iyh-Wei S., Wu-Chiang C., Yueliand L.G. The immunologic evaluation of the Yu-Cheng children// Organohalogen Compounds.-1996.-Vol.30.-P.360-365.

115. Mocarelly P., Marocchi A., Brambilla P., Gerthoux P.M., Colombo L., Mondonico A., Meazza L. Effects of dioxin exposure in humans at Seveso, Italy// BBRADRC.-CSH (NY),1991.-P.95-119.

116. Mocarelly P., Marocchi A., Brambilla P., Gerthoux P.M., Beretta P., Colombo L., Bertona M., Sarto C., Tramacere P., Mondonico A. Human data deived from the Seveso accident releance for human risk assesment// Toxic. Subst.-1992.-12, N2-4.-P.151-173.

117. Nacanishi Y., Nomoto Y., Matsuki A., Kunitake R., Hara N. Effect of polychlorinated bifenils and pollychlorinated dibensofurans on leucocytes in peripherial blood and bronchoalveolar lavage fluid// Fukuoka acta med. -1995. -Vol.86, N5. -P.261-266.

118. Nagata Sh., Suda T. Fas and Fas-ligand// Immunol. Today.-1995.- Vol.16.-P.39-43.

119. Nagayama J. Effects of lactational exposure to clorinated dioxins and related chemicals on limphocyte subpopulations and thiroid functions in Japanese babies// Organohalogen Compounds. -1996. -Vol.30.-P.228-233.

120. Neuberger M., Kundi M., Jager R., Piegler B., Rapple C., Smith Langzeitbeobachtung von Chlorahnenefallen nach dioxinbelastung-vorlaufige Ergebnisse// Zentralbe Hyg. Und Umweltmed.-1997.-Vol.l99,N5.-P.431.

121. Neubert D. Evaluation of toxicity of 2,3,7,8-TCDD in animals as a basis for human risk assesment// Toxic Subst. -1992. -Vol.l2,N2-4.-P.237-276.

122. Nicoladis T., Brunstorm B., Dencer L., Veroma T. TCDD ihibits the support of B-cell development by the bursa of Fabricius//Pharmacol. and Toxicol.-1990.-Vol.67,Nl .-P.22-26.

123. Ott M.G., Zober A., Germann H. Laboratory results for selected target organs in 138 individuals occupationaly exposed to TCDD// Chemosphere.-1994.-Vol.29.-P.2423-2437.

124. Parke D., Ioannides C., Lewis D. The role of the cytichromes P 450 in the detoxication and activation of drugs and other chemicals// Can. J. Physiol. Pharmacol. -1991.- Vol.69. -P.537-549.

125. Parker J., Lukes R. Neoplasms of the immune sistem// Basic and clinical immunology/Ed. Stites D.P., Terr A.I., Parslow T.G. Norwalk, Connecticut: Appleton and Lange, 1994.-P.588-622.

126. Parslow T.G. Immunoglobulin genes, B cells and humoral immune response // Basic and clinical immunology/Ed. Stites D.P., Terr A.I., Parslow T.G. -Norwalk, Connecticut: Appleton and Lange, 1994.-P.80-93.

127. Parslow T.G. Limphocytes and limphoid tissue // Basic and clinical immunology/Ed. Stites D.P., Terr A.I., Parslow T.G. Norwalk, Connecticut: Appleton and Lange, 1994.-P.22-40.

128. Perdew G.H., Hollenback C.E. Characterisation of Ah-receptor forms in HeLa cells// Organohalogen Compounds. -1991.-S.15.-P.175.

129. Poellinger L., Wilhelmsson A., Cuthill S., Pongratz I.Modulation of dioxins receptor function by protein-protein interaction//Biol. Basis Risk Assessm. Dioxin and Relat.Compaunds.- Cold Spring Harbor (NY).-1991.-P311-320.

130. Purkop J., Shulz D. Dioxine und Furane. Ihr. Eiflub auf Umwelt und Gesundheit// Chir. Prax. -1994. -Vol.48,N2. -P.359-366.

131. Reggiani G. Medical problems raised by the TCDD contamination in Seveso, Italy//Arch. Toxicol.- 1978.-Vol.40.-P.161-188.

132. Roumak V.S., Poznyacov S.P., An N., Chi Kim. Epidemiological and laboratory studies on health consequnces of agent orange in the South Vietnam //Dioxin'92. -1992. -Vol. 10. -P.275-278.

133. Roumak V.S., Poznyacov S.P., Antonyuk V.V. Consistent deterioration of general health status in South and North Vietnamese exposed to agent orange //Dioxin'95.Canada. -1995. -Vol.25. -P.161-167.

134. Ryan J.J., Mashuda Y.// Proc. 9th Intern. Symp. on chlorinated dioxins and related compouns.-Toronto, 1989.-Rep. Tox.06.

135. Ryan J., Schecter A., Lizotte R.// Chemosphere.-1985, Vol.14, N6/7.-P.929-932.

136. Ryan J., Schecter A., Amirova Z. Russian phenoxyherbicide production workers: exposure to and eliminations of dioxins// Organohalogen Compounds.-1997.-Vol.33.-P.390.

137. Scand J. Clorinated dioxins and dibenzofurans in the environment a hazard to public health? //Work, Environ. And Healht.-1989.- Vol.15, N6.- P.377-382.

138. Schecter A. Dioxins and related chemicals in humans and in the environment// BBRADRC.- CSH (N.Y.). -1991. -P.169-214.

139. Schecter A.,Papke O., Furst P., Ryan J. Temporal changes in dioxin and dibenzofuran levels in general population human blood and milk from Germany and US// Organohalogen Compounds.- 1997. Vol.33. -P.473-478.

140. Schecter A., Ryan J.J., Papke O. Elevated dioxin blood levels in Russian chemical workers and their children following maternal exposure// Chemoshere. -1993. -Vol.29, N9-11.- P.2361-2370.

141. Schmitz H.-J., Womer W., Schrenk D. Apoptosis as a target for the tumor-promoting of 2,3,7,8-TCDD//Organohalogen Compounds.-1998.-Vol.37.-P.63-66.

142. Sci. News. -1995.-Vol. 147,N14.-P.214.

143. Silverstone A., Fraizer D., Fiore N. // Toxicol, appl. Pharmacol. -1994. -Vol.126. -P.248-259.

144. Silverstone A., Lay Z.-W., Staples J., Hahn P., Gassiewich T. 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin affects thymocyte development in multiple ways without apoptosis//Organohalogen Compounds.-1997.-Vol.34.-P.95-99.

145. Smith D.K., Xue H. Sequence prolifes of immunogloglobulin-like domainns//J. Mol. Biol. 1997.-Vol.274,N4. -P.530-545.

146. Smith W.G., Ursinger W.R., Splitter G.A. Bovine Con A indused supressor cells. Generation, macrophage requrements and possible mechanisms of regulatory action// Immunology.-1981.- Vol.43 .P.-91-100.

147. Stahnke K., Hecker S., Kohne E., Debatin K.M. CD95 (Apo-l/Fas)-mediated apoptosis in cytocine-activated hematopoietic cells// Exp. Hematol. -1998,- Vol.26,N9.-P.844-850.

148. Stites D.P. Clinical laboratory methods for delection of cellular immunity // Basic andclinical immunology / Ed. Stites D.P., Terr A.I., Parslow T.G. -Norwalk, Connecticut: Appleton and Lange, 1994.-P.203-210.

149. Swaak A.J. Prognostic value of anti-dsDNA in SLE// Ann. Reumatic Diseases. 1982. - Vol.41. P.-388-395.

150. Tomar R.S., Kerkviet N.I. Reduced T-helper cell function in mice exposed to 2,3,7,8 -tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD)// Toxicol. lett.-1991.-Vol.57,Nl .-P.55-64.

151. Tonn T., Esser C., Scheider E. Persistence of decreased T-helper function in industrial workers 20 years after exposure to 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin// Environ. Health. Perspectives.-1996.-Vol.l04.-P.422-426.

152. Tryon R.C. Person-clusters on intellectual abilities and on MMPI-attributies//Multivar. Behav. Res. -1967. -Vol.2.- P.325-348.

153. Van Birgelen A., Birnbaum L. Synergistic effects of mixtures of dioxin-likes and non-dioxin-likes compounds in rodent// Organohalogen Compounds. -1997. -Vol.37.-P.207-208.

154. Van Leeuven F., Yones M. WHO resises the Tolerable Daily Intake (TDI) for dioxins // Organohalogen Compounds. -1998. -Vol.38. -P.93-97.

155. Vogel G., Abel J. Effect of 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin on growth factor expression in human breast cancer cell line MCF-7// Arch.Toxicol.-1995.-Vol.69,N4.-P.259-265.

156. US EPA, Method 1613: Tetra-throught octa chlorinated dioxin and furans by isotope dilution HRGC/HRMS// EPA 821-005. - 1994.

157. Waithe W., Michard M., Harper P., Okey A., Anderson A. The Ah-receptor, cytichrom P-4501 A1 mRNA induction and arilhydrocarbonhydroxilase in human limphoblastoid cell line// Biochem. Pharmacol.-1991.-Vol.44.-P.85-92.

158. Webb K.B., Evans R.G., Knudsen A.P., Roodman S.T. Medical evaluation of subjects with known body levels of 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin// J. Toxicol, environ.

159. Health.- 1989.-Vol.28.-P. 183-193.

160. Wen Y.C., Chen-Chin H. Middle aar abdormallities in Yucheng Children //Dioxin'94.- 1994,- Vol.21. -P.501-505.

161. Westing A.H. Herbicides in war. The long-term ecological and human consequences/ Ed. A.H.Westing.-London:Taylor and Francis, 1984.-P.3-24.

162. Whitlock J.P. Mechanism of dioxin action: relevance to risk assessment.// Biol.Basis Risk Assessm. Dioxins and Relat.Compauunds.-Cold Spring Harbor (N.Y.).- 1991.-P.351-366.

163. Wang P.W., Brachney W.R., Ressah I.L. Ortho-substituted polychlorinated bifenils after microsomal calcium transport by direct interaction with rianoid receptors of mammalian brain// J. biol. Chem.-1997.-Vol.272,N24.-P. 1514515153.

164. Weller M., Kleihues P., Dichgans J., Ohgaki H. CD95 ligand: Lethal weapon against malignant glioma?// Brain Pathol.-1998.- Vol.8,N2.-P.285-293.

165. Yang J.H., Vogel C., Abel J. Malignant TCDD-transformed human cell exhibit altered expressions og growth regulatory factors// Organohalogen Compounds.-1997.-Vol.34.-P.276-280.

166. Yonehara S., Ishi A., Yonehara M. A cell killing monoclonal antibody (anti-Fas) to a cell surface antigen co-downregulated with the receptor of tumor necrosis factor// J. Exp. Med.- 1989. -164. -1747.

167. Yong A.C., Calcagni J.A., Thaklen C.E. The toxicolology, enviromental fate and human risk of herbicide orange and its assocated dioxins //USAF.OEHL.Technical Rep.TR-78-92.- Texas, 1978.