Влияние олигопептидов и аминокислот на культуры тканей молодых и старых крыс тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.53, кандидат биологических наук Анискина, Анна Игоревна

• Анискина, Анна Игоревна
• кандидат биологических наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Анискина, Анна Игоревна

Список сокращений.

Введение.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Роль биорегуляторных пептидов в функционировании 12 нейроиммунноэндокринной системы

1.1.1. Регуляция репаративных процессов

1.1.2. Значение регуляторных пептидов для функционирования 16 клеточных популяций

1.2 Влияние аминокислот на клеточную пролиферацию 25 и процессы апоптоза

1.2.1. Структура аминокислот и их содержание в тканях ^ организма. * " Транспорт аминокислот через плазматические мембраны.

1.3. Молекулярные механизмы апоптоза

Глава 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Состав питательной среды

2.2. Получение коллагена и коллагеновой подложки

2.3. Выделение тканей

2.4. Морфологические и морфометрические методы исследования 47 развития эксплантатов в органотипической культуре тканей

2.5. Определение эффективной концентрации аминокислот и 51 пептидов в органотипической культуре ткани

2.6. Иммуногистохимические методы исследования эксплантатов

2.6.1. Морфометрические исследования и компьютерный 55 анализ микроскопических изображений

2.7. Статистическая обработка экспериментальных данных

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. Влияние олигопептидов на культуру ткани-миокарда молодых и 57 старых крыс

3.2. Влияние аминокислот на культуру ткани миокарда молодых и 59 старых крыс

3.3. Действие олигопептидов в органотипической культуре ткани 62 подкорковых структур головного мозга молодых и старых крыс

3.4. Влияние аминокислот на культуру ткани подкорковых структур 63 головного мозга молодых и старых крыс

3.5. Влияние олигопептидов на культуру ткани поджелудочной 67 железы молодых и старых крыс

3.6. Влияние аминокислот на культуру ткани поджелудочной железы 68 молодых и старых крыс

3.7. Исследование процессов апоптоза и пролиферации в 71 эксплантатах миокарда и поджелудочной железы

3.8. Влияние олигопептидов и аминокислот, их составляющих, в 75 культуре ткани коры головного мозга крыс

3.9. Влияние олигопептидов и аминокислот, их составляющих, в 78 культуре ткани подкорковых структур головного мозга молодых крыс

3.10. Влияние олигопептидов и аминокислот, их составляющих, в 81 культуре ткани печени молодых крыс

3.11. Влияние олигопептидов и аминокислот, их составляющих, в 84 культуре ткани поджелудочной железы молодых крыс

3.12. Влияние олигопептидов и аминокислот, их составляющих, в 87 культуре ткани предстательной железы молодых крыс

3.13. Влияние олигопептидов и аминокислот, их составляющих, в 90 культуре ткани миокарда молодых крыс

Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние олигопептидов и аминокислот на культуры тканей молодых и старых крыс»

Актуальность исследования

Изучение механизмов, лежащих в основе регуляции важнейших гомеостатических функций организма, представляет собой одно из приоритетных направлений современной биологии и медицины.

Поддержание биологической целостности организма на клеточном уровне регулируется сигналами, которые позволяют сохранять сложное равновесное состояние между двумя основными физиологическими процессами - пролиферацией и программируемой клеточной гибелью (апоптозом). Функцию медиаторных межклеточных сигналов на пара- и аутокринном уровнях выполняют секреторные белки - цитокины [Пальцев М.А., 1996; Ярилин А.А., 1999], а также цитомедины - пептидные биорегуляторы, поддерживающие структурный и функциональный гомеостаз клеточных популяций, которые содержат и продуцируют этот фактор [Морозов В.Г., Хавинсон В.Х., 1981; Хавинсон В.Х., Морозов В.Г., Чалисова Н.И., Окулов В.Б., 1997]. На основании многочисленных экспериментальных и клинических данных стало известно, что пептидные биорегуляторы имеют большое значение в поддержании и координации различных функций организма [Морозов В.Г.и соавт., 2000; Хавинсон В.Х. и соавт., 2002; Коркушко О.В. и соавт., 2002; Рыжак Г.А., Коновалов С.С., 2004].

В Санкт-Петербургском Институте биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН, синтезированы тетрапептиды, являющиеся аналогами цитомединов и содержащие наиболее часто встречающиеся в соответствующих тканях аминокислоты. Из начальных или концевых частей этих тетрапептидов синтезированы также трипептиды. Недавние исследования [Чалисова Н.И. с соавт., 2000, 2003, 2006] показали, что не только олигопептиды, но и сами аминокислоты обладают разными регуляторными свойствами в отношении клеточной пролиферации и апоптоза в различных тканях.

Достаточно сложно определить роль пептидов и аминокислот в регуляции клеточных популяций без учета и анализа межклеточных взаимоотношений, интегрирующих системный ответ. Помощь в решении такой задачи может дать методология комплексного морфофункционального анализа, способная объективно изучать клеточную патологию и регенерацию тканей, верифицировать пролиферативную активность и программируемую гибель клеток (апоптоз), а также оценивать деятельность клеточных структур и межклеточных коммуникаций.

Одной из наиболее адекватных моделей для изучения влияния различных препаратов на структурный и функциональный гомеостаз клеточных популяций являются органотипические культуры, которые используются для тестирования биологической активности различных препаратов [Акоев Г.Н., Чалисова Н.И., 1990; Хавинсон В.Х., Чалисова Н.И., Морозов В.Г., Малинин В.В., 1999; Хавинсон В.Х., Чалисова Н.И., Окулов В.Б., 1998; Levi-Montalchini R, 1982]. В отсутствие нервных, гуморальных и других влияний, которые имеются в целостном организме, создаются условия для строгого дозирования испытуемых веществ по типу управляемого эксперимента.

В то же время способность влиять на скорость основных клеточных процессов - пролиферацию и апоптоз, - и, как следствие, вызывать изменение количества клеток по сравнению с контролем является одним из общих свойств пептидов млекопитающих. Изменение количества клеток в культуре ткани может служить критерием первичной интегральной оценки биологической активности пептида и являться основанием для поиска других его эффектов.

Сравнительное изучение в культуре ткани действия тетра-, трипептидов и аминокислот на ткани мезо-, энто- и эктодермального происхождения, как в молодом возрасте, так и при старении, позволит более глубоко понять механизмы регулирования основных клеточных процессов в организме. При этом создается база для синтеза новых пептидных биорегуляторов с учетом их влияния на ткани организмов в молодом и старом возрасте.

Цель и задачи исследования.

Целью работы было изучение влияния тетрапептидов, трипептидов и аминокислот на развитие эксплантатов тканей мезодермального, энтодермального и эктодермального происхождения в органотипических культурах тканей молодых и старых крыс.

Для достижения цели исследования поставлены и последовательно решены следующие задачи:

1. Исследовать влияние тетрапептидов, трипептидов и 20 стандартных аминокислот на развитие эксплантатов миокарда (ткань мезодермального генеза) от молодых и старых крыс в органотипической культуре ткани.

2. Исследовать влияние тетрапептидов, трипептидов и 20 стандартных аминокислот на развитие эксплантатов подкорковых структур головного мозга (ткань эктодермального генеза) от молодых и старых крыс в органотипической культуре ткани.

3. Исследовать влияние тетрапептидов, трипептидов и 20 стандартных аминокислот на развитие эксплантатов поджелудочной железы (ткань энтодермального генеза) от молодых и старых крыс в органотипической культуре ткани.

4. Провести сравнительный анализ влияния тетрапептидов, трипептидов и аминокислот, их составляющих, на развитие эксплантатов тканей мезо-, энто- и эктодермального происхождения.

Научная новизна работы.

Впервые проведено подробное изучение действия тетрапептидов, трипептидов и 20 стандартных аминокислот в органотипических культурах тканей мезо-, энто- и эктодермального происхождения, взятых от молодых и старых животных. Впервые установлено влияние трипептидов на процессы пролиферации и апоптоза в культуре ткани. Показано, что трипептид Т-31 стимулирует развитие эксплантатов подкорковых образований и миокарда молодых и старых крыс. Трипептид Т-33 стимулирует развитие эксплантатов коры головного мозга и селезенки молодых и старых животных, но ингибирует зону роста в эксплантатах миокарда. Трипептид Т-34 обладает стимулирующим влиянием на эксплантаты подкорковых структур головного мозга и печени молодых и старых животных. Трипептид Т-3 5 стимулирует развитие только эксплантатов печени от молодых и старых животных. Трипептид Т-3 6 оказывает выраженное стимулирующее влияние на развитие эксплантатов подкорковых структур головного мозга, селезенки, предстательной железы и коры головного мозга. Такое же распространенное влияние выявлено у трипептида Т-38, который стимулирует пролиферацию в эксплантатах селезенки, печени, предстательной железы и вызывает апоптоз в эксплантатах миокарда.

Результаты исследования влияния данных трипептидов на органотипическую культуру тканей молодых и старых крыс создают основу для их дальнейшего изучения в качестве лекарственных средств, предназначенных для профилактики и лечения патологических процессов, в том числе ассоциированных с возрастом, в различных тканях.

Показано, что аминокислоты не обладают такой специфичностью действия на пролиферацию и апоптоз, которая наблюдается у три- и тетрапептидов.

Установлено, что наибольшей тканеспецифичностью обладают тетрапептиды. Трипептиды занимают промежуточное положение между аминокислотами и тетрапептидами по степени их влияния на основные клеточные процессы. Специфичность действия на клеточные процессы пролиферации и апоптоза изученных биологически активных веществ усиливается по мере усложнения их структуры.

Практическая значимость работы

Впервые получены экспериментальные данные, свидетельствующие о том, что при старении уменьшается спектр аминокислот, активно действующих на пролиферативные процессы в тканях. Напротив, тетрапептиды проявляют тканеспецифические свойства в отношении отдельных органов и тканей, причем как у животных молодого, так и старого возраста. Трипептиды Т-31,Т-38, Т-32, Т-33, Т-34, Т-35, Т-36 также сохраняют тканеспецифические свойства в органотипической культуре ткани старых животных. Это открывает перспективы целенаправленного изучения три- и тетрапептидов для разработки лекарственных средств, предназначенных для профилактики и лечения возрастной патологии.

Положения, выносимые на защиту.

1. Тетрапептиды панкраген, кардиоген и эпиталон стимулируют рост эксплантатов поджелудочной железы, миокарда, подкорковых структур головного мозга при органотипическом культивировании тканей, как молодых, так и старых животных.

2. Трипептиды стимулируют пролиферативные процессы в органотипической культуре тканей молодых и старых животных, однако не обладают той специфичностью стимулирующего действия на ткани, которой обладают тетрапептиды.

3. Аминокислоты обладают способностью стимулировать или ингибировать пролиферативные процессы в различных тканях. В тканях экто- и мезодермального генеза аспарагиновая кислота вызывает выраженную стимуляцию клеточной пролиферации, а в тканях энтодермального генеза эта же аминокислота проявляет ингибирующую активность. Пролин влияет на ткани так же, как аспарагиновая кислота, за исключением его угнетающего действия на ткани эктодермального происхождения. Аргинин обладает стимулирующей активностью во всех типах тканей.

4. Специфичность действия аминокислот, трипептидов, тетрапептидов в органотипической культуре тканей молодых и старых животных возрастает по мере усложнения структуры этих веществ: аминокислоты влияют на основные клеточные процессы в тканях экто-, мезо- и энтодермального генеза, в то время как тетрапептиды демонстрируют тканеспецифическое действие.

5. Спектр аминокислот, проявляющих активность в отношении клеточной пролиферации или апоптоза в органотипической культуре миокарда, подкорковых структур головного мозга, поджелудочной железы уменьшается в тканях от старых животных.

Связь с планом НИР.

Диссертационная работа является темой, выполняемой по основному плану НИР Санкт-Петербургского института биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН.

Публикации.

По материалам диссертации опубликовано 22 печатные работы: 8 статей и 14 тезисов, среди них 7 статей в журналах, включенных в перечень Высшей аттестационной комиссии Минобрнауки Российской Федерации и рекомендованных для опубликования материалов диссертационных исследований.

Структура и объем диссертации.

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы с описанием материалов и методов, главы собственных исследований, главы обсуждения результатов, выводов и указателя литературы. Текст диссертации изложен на 124 страницах, содержит 14 таблиц, иллюстрирован 22 рисунками. Список литературы содержит 135 источников, из них отечественных - 65, зарубежных — 70.

Заключение диссертации по теме «Геронтология и гериатрия», Анискина, Анна Игоревна

выводы

1. Тетрапептиды панкраген, кардиоген и эпиталон стимулируют рост эксплантатов поджелудочной железы, миокарда, подкорковых структур головного мозга при органотипическом культивировании, как у молодых, так и старых животных.

2. Трипептиды Т-31,Т-38, Т-32, Т-33, Т-34, Т-35, Т-36 влияют на пролиферативные процессы в органотипической культуре тканей, однако не обладают такой специфичностью действия, как тетрапептиды, стимулируя каждый развитие нескольких тканей, что происходит в эксплантатах и от молодых, и от старых животных.

3. Аминокислоты обладают способностью стимулировать или ингибировать пролиферативные процессы в различных тканях, однако не обладают, в отличие от олигопептидов, специфическим действием в отношении какой-либо одной ткани. В тканях экто- и мезодермального генеза аспарагиновая кислота вызывает выраженную стимуляцию клеточной пролиферации, а в тканях энтодермального генеза эта же аминокислота проявляет ингибирующую активность. Пролин влияет на ткани так же, как аспарагиновая кислота, за исключением его угнетающего действия на ткани эктодермального происхождения. Аргинин обладает стимулирующей активностью во всех типах тканей.

4. При сравнительном анализе влияния тетра-, трипептидов и аминокислот, их составляющих, на развитие эксплантатов тканей различного генеза показано, что специфичность действия этих биологически активных веществ возрастает по мере усложнения структуры этих веществ, т.е. наименьшую специфичность демонстрируют аминокислоты, а наибольшую - тетрапептиды, как у молодых, так и старых животных.

5. Спектр аминокислот, проявляющих активность в отношении клеточной пролиферации и апоптоза, значительно уменьшается в органотипической культуре тканей старых крыс, по сравнению с эксплантатами тканей молодых крыс. Это свидетельствует о перспективности применения в гериатрии олигопептидов, которые оказывают активное воздействие на эксплантаты как от молодых, так и от старых животных.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Установленное специфичное действие синтезированных трипептидов (Т-31, Т-33, Т-34, Т-35, Т-36 и Т-38), а также тетрапептидов (кортагена, эпиталона, кардиогена, простамакса, ливагена, панкрагена) создает основу для их дальнейшего изучения в качестве лекарственных средств, предназначенных для профилактики и лечения патологических состояний различных органов и систем, в том числе ассоциированных с возрастом.

2. Выявленная активность 20 аминокислот в отношении клеточной пролиферации и апоптоза в тканях разного генеза создает базу для целенаправленного синтеза олигопептидов, влияющих на процессы развития различных тканей.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Анискина, Анна Игоревна, 2008 год

1. Аббасова С. Г, Липкин В. М., Трапезников Н. Н., Кушлинский Н. Е. Исследование аминокислотного состава крови при критических состояниях. // Вопр. биол. мед. и фарм. химии. — 1999. — № 3. — С. 3 — 17

2. Акмаев И.Г. Современные представления о взаимодействиях регулирующих систем: нервной эндокринной и иммунной // Успехи физиол.наук 1996. Т. 27, № 1. С. 3-19

3. Акоев Г.Н., Чалисова Н.И. Нейротрофические факторы, выделяемые из центральной нервной системы // Успехи физиол. наук 1990. Т. 21, № 4. С. 138-142

4. Анисимов В.Н, Хавинсон В.Х., Заварзина Н.Ю. и др. Влияние петидных биорегуляторов и мелатонина на показатели биологического возраста и продолжительность жизни мышей \\ Успехи геронтологии. 2000. Вып. 4. С. 88-97

5. Анисимов В.Н., Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. Увеличение продолжительности жизни и снижение частоты опухолей у мышей СзН/Sn под влиянием полипептидных факторов тимуса и эпифиза // Докл. АН СССР. 1982. Т. 263, № 3. С. 742-745

6. Анисимов В.Н., Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. Влияние полипептидных факторов тимуса, костного мозга, эпифиза и сосудов на продолжительность жизни и развитие опухолей у мышей // Докл. АН СССР. 1987. Т. 293, № 4. С. 1000-1004

7. Анисимов В.Н., Мыльников С.В., Опарина Т.И., Хавинсон В.Х. Влияние мелатонина и эпиталамина на продолжительность жизни и перекисное окисление липидов у Drosophila Melanogaster // Докл. РАН. 1997. Т. 3526 №5. С. 704-707

8. Анисимов В.Н., Мыльников С.В., Хавинсон В.Х. и др. Эпиталамин замедляет скорость старения Drosophila melanogaster // Геронтологическиеаспекты пептидной регуляции функций организма. СПб.: Наука, 1996. С. 17-18

9. Ашмарин И.П. Нейромедиаторы и нейромодуляторы. Эволюция соединений и эволюция гипотез // Журн. эволюц. биохимии и физиологии. 1979. Т. 15, № 3. С. 279-282

10. Ашмарин И.П. Биохимия мозга. СПб.: Издательство СПбГУ, 1995.-325 с

11. Ашмарин И.П., Кулачев А.П., Чепурнов С.А. Каскадные однонаправленные регуляторные процессы, осуществляемые короткоживущими пептидами // Физиол. журн. СССР им. И.М. Сеченова. 1989. Т. 75, №5. С. 627-632

12. Ашмарин И.П., Обухова М.Ф. Регуляторные пептиды, функционально-непрерывная совокупность // Биохимия. 1986. Т.51, №4. С.531-545

13. Белокрылов Г.А., Деревнина О.Н., Попова О .Я. и др. Различия в иммунном ответе, фагоцитозе и детоксицирующих свойствах под влиянием пептидных и аминокислотных препаратов// Бюл.эксп.биол.мед. 1995. Т.118, №2. С.509-512.

14. Беспалов В.Г., Александров В.А., Анисимов В.Н. Влияние полипептидных факторов тимуса, эпифиза, костного мозга и переднего гипоталамуса на реализацию трансплацентарного канцерогенеза // Эксперим. Онкология. 1984. Т. 6, №5. С. 27-30

15. Бойко Н.И., Корнюшенко О.Н. Изучение антимикробной активности препарата простаты // Симпозиум: Пептидные биорегуляторы-цитомедины, Воен.-мед. акад. им. С.М. Кирова. СПб., 1992. С. 32-33.

16. Бондаренко Л.А., Анисимов В.Н. Возростные особенности влияния эпиталамина на метаболизм серотонина в шишковидной железе у крыс // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1992. Т.107, № 2. С. 194-195

17. Вальдман А.В. Короткие пептиды как регуляторы катехоламинергических процессов // Фармакология нейропептидов. М., 1982. С. 9-30.

18. Гиллемии Р. Мозг как эндокринный орган // Нейрохимия. 1982.Т.18, № 4. С. 324-334.

19. Гланц С. "Медико-биологическая статистика". Пер. с англ., М: Практика 1999; 459 с

20. Гомазков О. А. Физиологические активные пептиды: Справочное руководство. М., 1995. 150 с.

21. Гомазков О.А. Современные тенденции в исследовании физиологически активных пептидов // Успехи соврем, биологии. 1996. Т. 116, вып. 1. С. 60-68.

22. Гречко А.Т., Калихевич В.Н., Ардемасова З.А. и др. Изучение кардиомодулирующего действия различных групп низкомолекулярных пептидов // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1996. Т.121, № 7. С. 4344.

23. Григорьев М.Ю., Имянитов Е.Н., Хансон К.П. Апоптоз в норме и патологии. // Медицинский академический журнал. 2003. - Т. 3, № 3. -С. 3—11.

24. Зайратьянц О.В., Морозов В.Г., Москвичева И.В. и др. Выявление иммуномодулирующих пептидов в клетках тимуса человека иммуноферментным методом// Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1987. Т.97, № 3. С. 327-330.

25. Казанцева С.Т. Сравнительное изучение физико-химических свойств цитомединов Роль пептидных биорегуляторов (цитомединов) врегуляции гомеостаза: Тез. докл. науч. конф. Воен.-мед. акад. им. С.М. Кирова. Л., 1987. С. 46.

26. Климов П.К., Барашкова Г.М. Эндогенные пептиды как единая система регуляторных веществ // Физиол. журн. СССР им. И.М. Сеченова. 1993. Т. 79, №3. С. 80-87.

27. Коркушко О.В., Хавинсон В.Х., Бутенко Г.М., Шатило В.Б. Пептидные препараты тимуса и эпифиза в профилактике ускоренного старения. — СПб.: «Наука», 2002. 202 с.

28. Кузник Б.И., Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. и др. Тканеспецифические полипептиды и система комплемента // Система комплемента. М., 1988. С. 25-27

29. Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. Влияние экстракта из эпифиза на течение экспериментальных опухолей и лейкозов // Эксперим. Хирургия и анестезтология. 1974. №1. С. 34-38

30. Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. Характеристика и изучение механизма действия фактора тимуса (тимарина) // Докл. АН СССР. 1978. Т. 240, №4. С. 1004-1007.

31. Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. Выделение, очистка и идентификация иммуномодулирующего полипептида, содержащегося в тимусе телят и человека // Биохимия. 1981, N 9. С. 1652-1659.

32. Морозов В.Г, Хавинсон В.Х. Новый класс биологических регуляторов многоклеточных систем цитомедины // Успехи современной биологии. 1983. Т.96, № 3. С. 339-346.

33. Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. Пептидные биорегуляторы (25-летний опыт экспериментального и клинического изучения). СПб.: Наука , 1996. 74 с.

34. Морозов В.Г., Хавинсон В.Х., Малинин В.В. Пептидные тимомиметики. СПб.: Наука, 2000. 158 с.

35. Осиповский С.А., Полесская М.М. Молекулярные механизмы участия пептидов в функциях нервных клеток //Успехи физиологических наук. 1982.Т.13, №4. С.74-99.

36. Пальцев М.А. Цитокины и их роль в межклеточных взаимодействиях. // Архив патологии. 1996. - т. 53, № 6. - С. 3 - 7

37. Папава К.М. Использование кортексина в клинике // Успехи физиол. наук. 1994. Т. 25, № 4. С. 9.

38. Прокопенко Н.П., Тигранян Р.А., Муратова Г.Л. и др. Характеристика кислотного экстракта эпифиза и его фракций // Вопр. мед. химии. 1989. № 4. С. 79-81.

39. Рыжак Г.А., Иванов М.В. Разработка технологии и организации производства биологически активных добавок к пище, выделенных из органов и тканей животных // Геронтологические аспекты пептидной регуляции функций организма. СПб.: Наука, 1996. С. 73-74

40. Рыжак Г.А., Коновалов С.С. Геропротекторы в профилактике возрастной патологии. — СПб.: «ПРАЙМ-ЕВРОЗНАК», 2004. 160 с

41. Сапин М.Р., Этинген Л.Е. Иммунная система человека. М. : Медицина, 1996. 304 с

42. Слепушкин В.Д., Анисимов В.Н., Хавинсон В.Х. и др. Эпифиз, иммунитет и рак: Теоретические и клинические аспекты. Томск, 1990. 148 с

43. Ткачук В.Н., Горбачев А.Г., Хавинсон В.Х. Применение простатилена при лечении больных хроническим простатитом // Урология и нефрология. 1991. № 6. С. 40-43

44. Усачев В.В. Влияние кортексина на электрофизиологические показатели зрительного нерва при пигментной амбиотрофии сетчатки // Геронтологические аспекты пептидной регуляции функций организма. СПб.: Наука, 1996. С. 82

45. Фрейдлин И.С. Иммунная система и ее дефекты: Руководство для врачей.

46. Хавинсон В.Х. Итоги изучения и применения пептидных биорегуляторов в геронтологии // Геронтологические аспекты пептидной регуляции функций организма. СПб.: Наука, 1996. С. 84-85

47. Хавинсон В.Х., Малинин В.В., Чалисова Н.И., Григорьев Е.И. Тканеспецифическое действие пептидов в культуре тканей крыс разного возраста // Успехи геронтол. 2002. Вып.9. С.95-100.

48. Хавинсон В.Х., Морозов В.Г. Пептиды эпифиза и тимуса в регуляции старения. СПб.: Фолиант, 2001. 159 с.

49. Хавинсон В.Х., Морозов В.Г., Кузник Б.И. Цитомедины и их роль в регуляции физиологических функций //Успехи современной биологии. 1985. Т.115, N 3. С. 353-367.

50. Хавинсон В.Х, Морозов В.Г., Чалисова Н.И., Окулов В.Б. Влияние пептидов головного мозга на клетки нервной ткани in vitro // Цитология. 1997. Т. 39, N 7 .С. 571-578.

51. Хавинсон В.Х., Чалисова Н.И., Морозов В.Г., Малинин В.В. Роль пептидов тимуса в регуляции роста лимфоидной ткани у крыс разного возраста //Докл.АН. 1999. Т. 369, N 5. С.701

52. Хавинсон В.Х., Чалисова Н.И., Окулов В.Б. Исследование натуральных и синтетических цитомединов в культуре нервной ткани// Бюлл. эксперим. биол. и медицины. 1998. Т. 125. N 3. С. 332-336.

53. Чалисова Н.И., Мелькишев В.Ф., Акоев Г.Н., Людыно М.И., Куренкова Т.Ю. Стимулирующее влияние пролактина на рост нейритов чувствительных нейронов в органотипической культуре // Цитология. 1991. Т.ЗЗ, №2. С. 29-31.

54. Чалисова Н.И., Пеннияйнен В.А., Ноздрачев А.Д. Стимулирующее действие малых доз ингибирующих веществ в органотипической культуре нервной и лимфоидной ткани. // Доклады Академии наук, 2002, Т.383, N 2, С. 1-4.

55. Чалисова Н.И., Пеннияйнен В.А., академик Ноздрачев А.Д. Взаимодействие цитокинов и их компонентов в культуре нервной и лимфоидной ткани // Доклады Академии наук. 2002. Т. 384. № 5. С. 1-4.

56. Чалисова Р.И., Пеннияйнен В.А., Хаазе Г. Регулирующая роль некоторых аминокислот при развитии апоптоза в культуре нервной и лимфоидной ткани. Российский Физиологическ. журн. им. Сеченова, 2002, Т. 88, N 5, С. 627-633.

57. Чалисова Н.И., Хавинсон В.Х Исследование цитокинов в культуре нервной ткани// Российский Физиол. журн. 1999. Т. 85, N1.C. 2936.

58. Чалисова Н.И., Хавинсон В.Х., Пеннияйнен В.А., Григорьев Е.И. Влияние полипептидных фракций тимуса на развитие органотипической культуры вилочковой железы и селезенки крысы // Цитология. 1999. Т. 41, № 10. С.889- 894.

59. Чалисова Н.И., Пеннияйнен В.А. Модулирующая роль незаменимых и заменимых аминокислот в органотипической культуре тканей у крыс разного возраста // Российский Физиологич. журнал им. Сеченова, 2003, Т.89, № 5, С. 591-597.

60. Чалисова Н.И., Пеннияйнен В.А., академик Ноздрачев А.Д. Регулирующее действие аминокислот в органотипической культуре лимфоидных тканей с различной степенью иммунологической зрелости // Доклады Академии наук, 2003. Т.389, N 5, С.714-717.

61. Чалисова Н.И., Князькин И.В., Кветной И.М. Нейроиммуноэндокринные механизмы действия пептидов и аминокислот в тканевых культурах. СПб.: ДЕАН, 2005. - 165 с.

62. Чалисова Н.И., Анискина А.И, Закуцкий А.Н., Комашня А.В., Филиппов С.В., Зезюлин П.Н. Влияние аминокислот на клеточную пролиферацию и апоптоз в органотипической культуре тканей молодых и старых крыс. Успехи геронтол.—2006.—Вып. 19.—С. 55-59

63. Шатаева Л.К., Хавинсон В.Х., Ряднова И.Ю. Пептидная саморегуляция живых систем (факты и гипотезы). — СПб.: Наука, 2003. — 222 с.

64. Ярилин А.А. Основы иммунологии. — М.: «Медицина», 1999. 608 с.

65. Arai Т., Hiromatsu К., Nishimura Н., Hamid G. Endogenous interleukin 10 prevents apoptosis in macrophages during Salmonella infection. // Biochem. Biophys. Res. Communs. 1995. - Vol. 213, № 2. - P. 600— 607.

66. Arends M.J., Wyllie A.H. Apoptosis: mechanisms and roles in pathology. // Int. Revol. Exp. Pathol. — 1991. — Vol. 32. — P. 223 — 254.

67. Arends M .J., Morris R. G., Wyllie A. N. Apoptosis. The role of the endonuclease. // Amer. J. Path.— 1990. — Vol. 136. — P. 593— 608.

68. Atwood C. S., Ikeda M., Vonderhaar В. E. Involution of mouse mammary glands in whole organ culture: a model for studying programmed cell death. // Biochem. Biophys. Res. Commun. — 1995. — Vol. 207. — P. 860 — 867.

69. Barbul A., Lazarou S.A., Efron D.T. et al. Arginine enhances wound healing end lymphocge immune responses in humans. // Surgery.- — 1990. —Vol. 108, №2. — P. 331 — 337.

70. Bing W., Junbao D., Jianguang Q., Jian L., Chaoshu T. L -arginine impacts pulmonary vascular structure in rats with an aortocaval shunt. // J. Surg. Res. 2002. - Vol. 108, № 1. - P. 20—31.

71. Booth P. J, Humpherson P. G, Watson T. J, Leese H. J. Amino acid depletion and appearance during porcine preimplantation embryo development in vitro. Reproduction, November 1, 2005; 130(5): 655 668

72. Bowen ID, Lockshin RA (1981) Cell Death in Biology and Pathology. Chapman and Hall: New York, P. 301

73. Bowie J.U., Pakula A.P., Simon M. The Three-Dimensional Structure of the Aspartate Receptor from Escherichia coli. // Acta Crystallogr. D. Biol. Crystallogr. 1995.-Vol. 51.-P. 145— 15

74. Branton B.L., Clarke О. Apoptosis in primary cultures of E14 rat ventral mesencephala: time course of dopaminergic cell death and imlications for neural transplantation. // ExP. Neurol. 1999 - Vol. 160, №1. - P. 88— 98.

75. Cid C., Alvarez-Cermeno J.C., Regidor I., Salinas M., Alcazar A. Low concentrations of glutamate induce apoptosis in cultured neurons: implications for amyotrophic lateral sclerosis. // J. Neurol. Sci.— 2003. — Vol. 206, № l.-P. 91— 95

76. Curran P.F. Active transport of amino acids and sugars. // Arch. Intern. Med. — 1972.— Vol. 129. P. 258— 269.

77. Cutler R. Human longevity and aging: possible role of reactive oxygen species. // Ann. N. Y. Acad. Sci. — 1991. — Vol. 621. — P. 1— 28.

78. Demoly P., Simony-Lafontaine J., Chanez P., Pujol J.L., Lequeux N., Michel F.B., Bousquet J. Cell proliferation in the bronchial mucosa of asthmatics and chronic bronchitics. // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 1994 -Vol. 50, № l.-P. 214—217.

79. Dilman V.M. et al. Study of the antitumor effect of polypeptide pineal extract// Oncology. 1979. Vol. 36, N 6. P. 274-280

80. Dragovich Т., Rudin C.M., Thompson C.B. Signal transduction pathways that regulate cell survival and cell death. // Oncogene. 1998. - Vol. 17, №25.-P. 3207—3213.

81. Dutta A., Ruppert J.M., Aster JC., Winchester E. Inhibition of DNA replication factor RPA by p53. // Nature. —1993. — Vol. 365. — P. 79 — 82.

82. Evan G., Littewood T. A matter of life and cell death. // Science. — 1998. — Vol. 281.— P. 1317 — 1322.

83. Fabris N., Mocchegiani E. Endocrine control of thymic serum factor production in young adult and old mice // Cell Immunol. 1985. Vol. 91. P. 325-335

84. Fratelli M., Gagliardini V., Galli G. et al. Autocrine interleukin-1 beta regulates both proliferation and apoptosis in EL4-6.1 thymoma cells// Blood. 1995. Vol. 85, № 12.P. 3532-3537.

85. Frommel C. The apolar surface area of amino acids and its empirical correlation with hydrophobic free energy. // J. Theor. Biol. — 1984. -Vol.111-P. 247—260

86. Fu Y.M, Yu Z.X, Li Y.Q. et al. Specific amino acid dependency regulates invasiveness and viability of androgen-independent prostate cancer cells// Nutr. Cancer. 2003. Vol. 45 №1. P 60-73.

87. Galao A.O., Pinheiro da Costa B.E., d'Avila D.O., Poli de Figueiredo C.E. L-arginine erythrocyte transport increases during pregnancy and immediately postpartum. // Obstet. Gynecol. 2004. - Vol. 191, № 2. — P. 572— 575.

88. Goel M.M., Goel R., Mehrotra A., Nath P., Agarwal P.K., Singh K., Mehrotra R. Immunohistochemical localization and correlation of p53 and PCNA expression in breast carcinoma. // Indian J. ExP. Biol. 2000. - Vol. 38, № 3. - P. 225— 230.

89. Gu S., Villegas C.J., Jiang J.X. Differential regulation of amino acid transporter SNAT3 by insulin in hepatocytes. // J. Biol. Chem. 2005. — Vol. 280, № 28. — P. 26055— 26062.

90. Harman D. Free-radical theory of aging. Increasing the functional life span. // Ann. N. Y. Acad. Sci. — 1994. — Vol. 717.— P. 1— 15.

91. Hatzoglou M., Fernandez J., Yaman I. Regulation of cationic amino acid transport: the story of the CAT-1 transporter. // Annu. ReVol. Nutr. -2004.-Vol. 24.— P. 377—399

92. Hsueh A. J., Billig H., Tsafriri A. // Endocr. ReVol.— 1992. — Vol. 15. —P. 707 — 723

93. Itoh N., Yonehara S., Ishii A., Yonehara M., Mizushima S., Sameshima M., Hase A., Seto Y., Nagata S. The polypeptide encoded by the cDNA for human cell surface antigen Fas can mediate apoptosis. // Cell. 1991. - Vol. 66, № 2. - P. 233— 243

94. Jacobson M.D. Reactive oxygen species and programmed cell death. // Trends Biochem Sci. 1996. - Vol. 21, № 3. - P.83— 86с

95. Janas Т., Yarns M. A membrane transporter for tryptophan composed of RNA.//RNA. 2004. -Vol. 10, № 10.-P.l 541— 1549.

96. Jayaraman J., Prives C. Activation of p53 sequence-specific DNA binding by short single strands of DNA requires the p53 C-terminus. Cell. 1995 Jun 30;81(7): 1021-1029

97. Jefferson L.S., Kimball S.R. Amino Acid Regulation of Gene Expression. Journal of Nutrition. 2001; 131: p. 2460-2466

98. Kawano M.M., Mihara K, Huang N., Tsujimoto Т., Kuramoto A. Differentiation of early plasma cells on bone marrow stromal cells requires interleukin-6 for escaping from apoptosis. // Blood.— 1995. — Vol. 85, № 2. — P. 487 — 494

99. Kerr J.F, Wyllie A.H, Currie A.R. Apoptosis: a basic biological phenomenon with wide-ranging implications in tissue kinetics. // Brit. J. Cancer. —1972. — Vol. 26, № 4. — P. 239 — 257.

100. Kilberg M.S, Handlogten M.E, Christensen H.N. Characteristics of an amino acid transport system in rat liver for glutamine, asparagine, histidine, and closely related analogs. // J. Biol. Chem. 1980. — Vol. 255, № 9. - P. 4011—4019.

101. Kim KY, Moon JI, Lee EJ, Lee YJ, Kim IB, Park CK, Oh SJ, Chun MH. The effect of L-arginine, a nitric oxide synthase substrate, on retinal cell proliferation in the postnatal rat. Dev Neurosci. -2002;24(4):313-21

102. Kirkwood Т. B. L. The evolution of aging and longevity. // Phil. Trans. Roy. Soc. London. — 1997. — Vol. B352. — P. 1765— 1772.

103. Kroemer G. The proto-oncogene Bcl-2 and its role in regulating apoptosis.// Nature Med. — 1997. — Vol. 3, № 6. — P. 614 — 620

104. Kulasingam V., Diamandis E.P. Proteomic analysis of conditioned media from three breast cancer cell lines: A mine for biomarkers and therapeutic targets.// Mol Cell Proteomics. 2007. - Vol. 5. -, P. 132-137

105. Lee EJ, Jameson JL Cell-specific Cre-mediated activation of the diphtheria toxin gene in pituitary tumor cells: potential for cytotoxic gene therapy. Human Gene Therapy 2002 13 533-542.

106. Leonardi M.G., Comolli R. Alanine transport in rat liver plasma membrane vesicles during the acute-phase response in young and old rats. // Mech. Ageing Devol. 1995 - Vol. 77,№3.-P.159— 168.

107. Levi-Montalchini R.,Developmental neurobiology and natural history of nerve growth factor // Ann. Rev. Neurosci., 1982. Vol. 5. P. 341-362.

108. Llansola M. Bosca L, Felis о V, Hortelano S. Ammonia prevents glutamate-induced but not low K(+)-induced apoptosis in cerebellar neurons culture. //Neuroscience. -2003. Vol. 117, №4. -P. 899-907

109. Mendes Ribeiro A.C., Brunini T.M. L-Arginine transport in disease.// Chem. Cardiovasc. Hematol. Agents. 2004. -Vol. 2, № 2. - P. 123— 131.

110. Morozov V.G., Khavinson V.Kh. Natural and sythetic thymic peptides as therapeutics for immune disfunction // Int. J. Immunopharmacology. 1997. Vol.19, N 9/10. P. 501-505.

111. Nelson W.G., Kastan M.B. DNA strand breaks: the DNA template alterations that trigger p53-dependent DNA damage response pathways. // Mol. Cell. Biol. 1994. - Vol. 14. - P. 1815— 1823

112. Oehler R., Roth E. Regulative capacity of glutamine. // Curr. Opin. Clin. Nutr. Metab. Care. 2003. -Vol. 6, № 3. - P. 277— 282.

113. Pacitti A.J., Inoue Y., Plumley D.A., Copeland E.M., Souba W.W. Growth hormone regulates amino acid transport in human and rat liver. // Ann. Surg. 1992.-Vol. 216. №3.- P. 353—361.

114. Pierpaoli W., Besedowski H.O. Role of the thymus in programming of neuroendocrine functions // Clin. Exp. Immunol. 1975. Vol. 20. P. 232-238

115. Schwartzman R.A., Cidlowski J.A. Glucocorticoid-induced apoptosis of lymphoid cells. // Int. Arch. Allergy Immunol. — 1994. — Vol. 105. №4. — P. 347 — 354

116. Seeburg P.H. Excitatory aminoacids: from genes to therapy. — Berlin etc: Springer, 1998. -210 p.

117. Shataeva L.K., Chernova A.A. Khavinson V. Kh. Molecular informational system "Peptide-DNA". // Abstr. Advances in gerontology. 2007 -Vol. 20, № 3, P. 70

118. Soh H., Wasa M., Wang H.S., Fukuzawa M. Glutamine regulates amino acid transport and glutathione levels in a human neuroblastoma cell line. // Pediatr. Surg. Int. 2005 -Vol. 21, № 1. - P.29— 33

119. Sweet R.M., Eisenberg D. Correlation of sequence hydrophobicities measures similarity in three-dimensional protein structure. // J. Mol. Biol. — 1983.-Vol. 171— P. 479—488

120. Tollefson L., Bullock K. Dual-label retrodrate transport : CNS Innervation of the mouse thymus distinct from other mediastinum viscera //J. Neurosci. Res. 1989. Vol.84, N 3. P. 334-352

121. Trotta P.P. The clinical potential of recombinant human interleukin 4 and alfa-2b interferon. // Am. J. Reprod. Immunol. — 1991.— Vol. 25, №3.1. P. 124— 128

122. Vinardell M.P. Age influences on amino acid intestinal transport. // Biochem. Physiol. Сотр. Physiol. 1992. — Vol. 103. № 1. - P. 169— 171.

123. Wang X.W., Yeh H., Schaeffer L., Roy R., Moncollin V., Egly J.M., Wang Z., Freidberg E.C., Evans M.K., Taffe B.G. p53 modulation of TFIIH-associated nucleotide excision repair activity. // Nature Genet. — 1995.

124. Vol. 10.№ 2. — P. 188 — 195

125. Wu X., Fan Z., Masui H. et al. Role for Bcl-XL in the regulation of apoptosis by EGF and TGF-1 in c-myc overexpressing mammary epithelial cells. // J. Clin. Invest. 1995. - Vol. 95. - P. 1897— 1905

126. Wyllie A.H. Glucocorticoid-induced thymocyte apoptosis is associated with endogenous endonuclease activation. // Nature. — 1980. — Vol. 284.—P. 555—556

127. Xie W., Wong YC., Tsao SW. Correlation of increased apoptosis and proliferation with development of prostatic intraepithelial neoplasia in ventral prostate of the Noble rat. // Prostate. 2000.'— Vol. 44. - P. 31— 39.

128. Zafra F., Gimenez C. Characteristics and adaptive regulation of glycine transport in cultured glial cells. // Biochem. J. 1989. — Vol. 258. - P. 403—408.

129. Zhou R., Ao S.Z. A Novel cDNA Encoding Ubiquitin-conjugating Enzyme of Homo sapiens. // Sheng Wu Hua Xue Yu Sheng Wu Wu Li Xue Bao (Shanghai) 1998. - Vol. 30, №2 - P. 125— 131

130. Zou H., Henzel W.J., Liu X., Lutschg A., Wang X. Apaf-1, a human protein homologous to C. elegans CED-4, participates in cytochrome c-dependent activation of caspase-3. // Cell. — 1997.— Vol. 90, №3 — P. 405 — 413

131. Выражаю благодарность коллективу Института биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН, возглавляемому член-корреспондентом РАМН, профессором Хавинсоном Владимиром Хацкелевичем.

132. Выражаю искреннюю признательность руководителю научной работы доктору биологических наук Чалисовой Наталье Иосифовне за предоставленную тему исследования и неоценимую помощь в работе.

133. Приношу благодарность профессору Кветному Игорю Моисеевичу, руководителю лаборатории патоморфологии НИИ акушерства и гинекологии им. Д.О. Отта РАМН, за ценную консультативную помощь в научной работе.

134. Выражаю сердечную признательность доктору медицинских наук, профессору Рыжак Галине Анатольевне, за ценную критику и помощь в работе.