Модулирующее влияние аминокислот и пептидов на развитие хрящевой ткани в органотипической молодых и старых крыс тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.30, кандидат медицинских наук Смирнов, Андрей Валерьевич

• Смирнов, Андрей Валерьевич
• кандидат медицинских наук
• 2011

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Смирнов, Андрей Валерьевич

ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ВОЗРАСТНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ ХРЯЩЕВОЙ ТКАНИ обзор литературы) •

1.1. Структурно-функциональные особенности хрящевой ткани.

1.2. Дегенеративные возрастные изменения хрящевой ткани.

1.3. Изменения биохимического состава хряща при остеоартрозе.

1.4. Современные методы стимуляции регенерации хрящевой ткани.

1.5. Регуляторная роль аминокислот.

1.6. Роль биорегуляторных пептидов в функционировании тканей.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Состав питательной среды.

2.2. Получение коллагена и коллагеновой подложки.

2.3. Выделение тканей.

2.4. Морфологические и морфометрические методы исследования развития эксплантатов в органотипической культуре тканей.

2.5. Препараты, исследованные в культуре тканей.

2.5.1. Аминокислоты.

2.5.2. Трипептиды.

2.5.3. Комплексные пептиды.

2.5.3.1. Хондролюкс®.

2.5.3.2. Контрольные комплексные пептиды.

2.6. Определение эффективной концентрации аминокислот и пептидов в органотипической культуре тканей.

2.7. Иммуноцитохимические методы исследования эксплантатов.

2.7.1. Морфометрические исследования и компьютерный анализ микроскопических изображений.

2.8. Статистическая обработка экспериментальных данных.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Глава 3. ВЛИЯНИЕ АМИНОКИСЛОТ НА ОРГАНО-ТИПИЧЕСКУЮ КУЛЬТУРУ ХРЯЩЕВОЙ ТКАНИ МОЛОДЫХ И 46 СТАРЫХ КРЫС

3.1. Влияние аминокислот на рост эксплантатов хряща молодых и старых крыс.

3.2. Влияние сочетаний аминокислот на органотипическую культуру хрящевой ткани.

3.3. Исследование процессов пролиферации и апоптоза при действии аминокислот в эксплантатах хряща молодых и старых крыс.

Глава 4. ВЛИЯНИЕ ТРИПЕПТИДОВ НА ОРГАНОТИПИЧЕСКУЮ КУЛЬТУРУ ХРЯЩЕВОЙ ТКАНИ МОЛОДЫХ И 56 СТАРЫХ КРЫС

4.1. Исследование влияния трипептидов на развитие эксплантатов хряща молодых и старых крыс.

4.2. Сравнительное изучение трипептидов в органотипических культурах разных тканей.

Глава 5. ИССЛЕДОВАНИЕ ХОНДРОЛЮКСА В ОРГАНО-ТИПИЧЕСКОЙ КУЛЬТУРЕ ТКАНИ ХРЯЩА МОЛОДЫХ И СТАРЫХ КРЫС

5.1. Влияние Хондролюкса на рост эксплантатов хрящевой ткани молодых и старых крыс.

5.2. Тканеспецифические свойства Хондролюкса.

Глава 6. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Модулирующее влияние аминокислот и пептидов на развитие хрящевой ткани в органотипической молодых и старых крыс»

В связи с увеличением средней продолжительности жизни и доли пожилых людей в общей численности населения особое внимание специалистов в области биологии и медицины уделяется исследованию закономерностей развития возрастной патологии и разработке новых геропротекторных препаратов. В последнее время в научной литературе всё чаще встречается информация о заболеваниях суставов и позвоночника у лиц старших возрастных групп, что особенно актуально для решения тех задач, которые ставит перед собой геронтология. Идет постоянный поиск биологически активных веществ, позволяющих направленно корректировать функциональную активность клеток, снижающуюся при возрастной патологии. Регуляторные пептиды, влияющие на процессы развития тканей, широко распространены в живых организмах и выделяются различными клетками и тканями как эндокринные и аутокринные носители информации о локальном состоянии органа или ткани [Хавинсон В.Х. и соавт. 1985; Ашмарин И.П., Обухова М.Ф., 1986]. Поддержание биологической целостности организма на клеточном уровне регулируется сигналами, которые позволяют сохранять сложное равновесное состояние между двумя основными физиологическими процессами - пролиферацией и программируемой клеточной гибелью (апоптозом). Функцию медиаторных межклеточных сигналов на пара- и аутокринном уровнях выполняют секреторные белки - цитокины [Пальцев М.А., 1996; Ярилин A.A., 1999], а также цитомедины - пептидные биорегуляторы, выделенные из тканей животных и поддерживающие структурный и функциональный гомеостаз клеточных популяций, которые содержат и продуцируют этот фактор [Морозов В .Г., Хавинсон В.Х., 1981; Хавинсон В.Х. и соавт., 1997]. На основании многочисленных экспериментальных и клинических данных стало известно, что пептидные биорегуляторы имеют большое значение в поддержании и координации различных функций организма [Морозов В.Г.и соавт., 2000; Коркушко О.В. и соавт., 2002; Хавинсон В.Х. и соавт., 2002; Рыжак Г.А., Коновалов С.С., 2004]. Пептиды, в свою очередь, гидролизуются до аминокислот, также обладающих, как показано в последнее время, регуляторными свойствами в отношении клеточной пролиферации и апоптоза [Чалисова и соавт., 2002, 2005].

В Санкт-Петербургском институте биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН на основе анализа аминокислотного состава экстрактов из различных органов и тканей животных синтезированы трипептиды.

Достаточно сложно определить роль пептидов и аминокислот в регуляции клеточных популяций без учета и анализа межклеточных взаимоотношений, интегрирующих системный ответ. Помощь в решении такой задачи может дать методология комплексного морфофункционального анализа, способная объективно изучать клеточную патологию и регенерацию тканей, верифицировать пролиферативную активность и программируемую гибель клеток (апоптоз), а также оценивать деятельность клеточных структур и межклеточных коммуникаций.

Одной из наиболее адекватных моделей для изучения влияния различных препаратов на структурный и функциональный гомеостаз клеточных популяций являются органотипические культуры, которые используются для тестирования биологической активности различных препаратов [Хавинсон В.Х. и соавт., 1998, 1999; ЬеуьМопЫсЫш К, 1982]. В отсутствие нервных, гуморальных и других влияний, которые имеются в целостном организме, создаются условия для строгого дозирования испытуемых веществ по типу управляемого эксперимента.

В то же время, способность влиять на скорость основных клеточных процессов - пролиферацию и апоптоз, и, как следствие, вызывать изменение количества клеток по сравнению с контролем является одним из общих свойств пептидов млекопитающих. Изменение количества клеток в культуре ткани может служить критерием первичной интегральной оценки биологической активности пептида и являться основанием для поиска других его эффектов.

Сравнительное изучение в культуре ткани действия пептидов и аминокислот на хрящевую ткань как в молодом возрасте, так и при старении, позволит более глубоко понять механизмы регулирования основных клеточных процессов в организме при старении. При этом создается база для синтеза новых пептидных биорегуляторов с учетом их влияния на хрящевую ткань при ее патологии, в том числе при заболеваниях, ассоциированных с возрастом.

Цель и задачи исследования

Целью работы было изучение влияния аминокислот, трипептидов и комплексного пептида хрящевой ткани на развитие эксплантатов хряща в органотипических культурах тканей молодых и старых крыс.

Для достижения цели исследования были поставлены и последовательно решены следующие задачи:

1. Исследовать влияние 20 стандартных аминокислот на клеточную пролиферацию в эксплантатах хряща от молодых и старых крыс в органотипической культуре ткани.

2. Исследовать влияние синтезированных трипептидов Т-31, Т-33, Т-34 и Т-38 на развитие эксплантатов хряща от молодых и старых крыс в органотипической культуре ткани.

3. Исследовать действие комплексного пептида хрящевой ткани Хондролюкса на клеточную пролиферацию в эксплантатах хряща от молодых и старых крыс в органотипической культуре ткани.

4. Исследовать иммуноцитохимическими методами влияние стандартных аминокислот, трипептидов и Хондролюкса на развитие процессов пролиферации и апоптоза в органотипической культуре хрящевой ткани от молодых и старых крыс.

Научная новизна работы

Впервые проведено изучение действия 20 стандартных аминокислот, трипептидов и комплексного пептида хрящевой ткани Хондролюкса в органотипических культурах тканей хряща, взятых от молодых и старых животных. Установлено стимулирующее влияние шести аминокислот (гистидина, глутамина, аргинина, лейцина, изолейцина и тирозина) на процессы пролиферации в культуре ткани хряща от молодых животных и уменьшение в 6 раз количества стимулирующих пролиферацию аминокислот в эксплантатах от старых животных. Впервые установлено, что трипептиды Т-31 и Т-38 стимулируют развитие эксплантатов хрящевой ткани молодых и старых крыс. Показано отсутствие тканеспецифических свойств трипептидов: короткие пептиды стимулируют процессы пролиферации в органотипических культурах нескольких тканей как молодых, так и старых животных.

Впервые показано, что комплексный пептид хрящевой ткани Хондролюкс эффективно стимулирует клеточную пролиферацию в эксплантатах хрящевой ткани, как молодых, так и старых животных. Хондролюкс обладает выраженным тканеспецифическим действием в отношении хрящевой ткани, не влияя на другие ткани. Комплексные пептиды, экстрагированные из тканей тимуса, головного мозга, шишковидной железы, сердца, поджелудочной железы, щитовидной железы, семенников, предстательной железы, почек, мочевого пузыря, сосудов, яичников, печени, сетчатки глаза, не оказывали достоверного влияния на органотипическую культуру хрящевой ткани.

Впервые проведено иммуноцитохимическое исследование эксплантатов хряща и выявлено уменьшение развития процессов апоптоза при стимуляции пролиферации Хондролюксом, трипептидами Т-31 и Т-38 и некоторыми аминокислотами. При этом показано, что увеличение индекса площади эксплантатов хрящей находится в положительной корреляции с увеличением площади экспрессии маркера пролиферации РСЫА и в отрицательной корреляции с уменьшением площади экспрессии проапоптозного белка р53.

Практическая значимость работы

Впервые получены экспериментальные данные, свидетельствующие о том, что при старении уменьшается спектр аминокислот, активно действующих на пролиферативные процессы в хрящевой ткани. Напротив, Хондролюкс и трипептиды Т-31 и Т-38 проявляют стимулирующие пролиферацию свойства в отношении хрящевой ткани у животных как молодого, так и старого возраста. Выявленное тканеспецифическое действие Хондролюкса на хрящевую ткань создает основу для его дальнейшего изучения в качестве лекарственного средства, предназначенного для профилактики и лечения патологических состояний суставного хряща, в том числе при болезнях, ассоциированных с возрастом. Установленное стимулирующее действие трипептидов в отношении клеточной пролиферации в тканях хряща создает базу для целенаправленного синтеза коротких пептидов, предназначенных для лечения патологии суставов в гериатрической практике.

Положения, выносимые на защиту

1. Аминокислоты - гистидин, глутамин, аргинин, лейцин, изолейцин и тирозин обладают способностью стимулировать пролиферативные процессы в хрящевой ткани молодых животных. Спектр аминокислот, проявляющих активность в отношении клеточной пролиферации в хрящевой ткани, уменьшается в тканях от старых животных.

2. Трипептиды Т-31 и Т-38 стимулируют пролиферативные процессы в органотипической культуре хрящевой ткани молодых и старых животных. Трипептиды не проявляют тканеспецифические свойства и стимулируют пролиферативную активность в органотипических культурах нескольких тканей как молодых, так и старых животных.

3. Комплексный пептид хрящевой ткани Хондролюкс стимулирует клеточную пролиферацию в эксплантатах хрящевой ткани как молодых, так и старых животных, обладая выраженным тканеспецифическим действием в отношении хрящевой ткани.

4. Площадь экспрессии маркера пролиферации РСИА находится в положительной, а площадь экспрессии проапоптозного белка р53 - в отрицательной корреляции с изменением индекса площади эксплантатов в органотипической культуре хрящевой ткани при введении аминокислот, трипептидов и комплексного пептида хрящей Хондролюкса.

5. Трипептиды Т-31 и Т-38 и комплексный пептид из хрящевой ткани Хондролюкс являются перспективными препаратами для изучения в качестве лекарственных средств, предназначенных для лечения возраст-ассоциированной патологии опорно-двигательного аппарата.

Связь с планом НИР

Диссертационная работа выполнена в рамках основного плана НИР Санкт-Петербургского института биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН.

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 11 печатных работ, в том числе 5 статей в журналах, включенных в перечень Высшей аттестационной комиссии Минобрнауки РФ и рекомендованных для опубликования материалов диссертационных исследований.

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы с описанием материалов и методов, 3 глав собственных исследований, главы обсуждения результатов, выводов и указателя литературы. Текст диссертации изложен на 106 страницах, содержит 8 таблиц, иллюстрирован

Заключение диссертации по теме «Геронтология и гериатрия», Смирнов, Андрей Валерьевич

выводы

1. Аминокислоты гистидин, глутамин, аргинин, лейцин, изолейцин и тирозин обладают способностью стимулировать пролиферативные процессы в хрящевой ткани молодых животных.

2. Спектр аминокислот, активных в отношении клеточной пролиферации, уменьшается в тканях от старых животных в 6 раз, активной аминокислотой остается только лизин.

3. Трипептиды Т-31 и Т-38 стимулируют пролиферативные процессы в органотипической культуре ткани хряща, как молодых, так и старых животных. Трипептид Т-33 стимулирует пролиферативные процессы в органотипической культуре ткани хряща молодых животных. Трипептид Т-34 не обладает пролиферативной активностью в отношении органотипической культуры хряща.

4. Трипептиды не обладают тканеспецифическими свойствами и стимулируют пролиферацию в органотипических культурах нескольких тканей как молодых, так и старых животных.

5. Комплексный пептид из хрящевой ткани Хондролюкс оказывает выраженное стимулирующее действие на клеточную пролиферацию в эксплантатах хрящевой ткани как молодых, так и старых животных.

6. Экспрессия маркера пролиферации РСМА находится в положительной, а экспрессия проапоптозного белка р53 — в отрицательной корреляции с увеличением индекса площади эксплантата под действием аминокислот, трипептидов и комплексного пептида хрящевой ткани Хондролюкса.

7. Хондролюкс обладает выраженной тканеспецифичностью в отношении хрящевой ткани. Добавление эффективной концентрации Хондролюкса в культуры других тканей молодых и старых животных не приводило к достоверному увеличению зоны роста эксплантатов. Добавление эффективных концентраций комплексных пептидов, экстрагированных из других тканей животных, в культуру хрящевой ткани молодых и старых крыс не вызывало достоверного увеличения индекса площади эксплантатов.

8. Стимуляция пролиферации клеток хрящевой ткани молодых и старых животных при действии комплексного пептида из хрящевой ткани Хондролюкса и синтезированных пептидов Т-31 и Т-38 свидетельствует о перспективности разработки на их основе лекарственных средств для применения в гериатрической практике.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1.Выявленное тканеспецифичное действие Хондролюкса на хрящевую ткань создает основу для его дальнейшего изучения в качестве лекарственного средства, предназначенного для профилактики и лечения патологических состояний суставного хряща, в том числе при болезнях, ассоциированных с возрастом.

2. Установленное стимулирующее действие трипептидов Т-31 и Т-38 в отношении клеточной пролиферации и апоптоза в тканях хряща создает базу для целенаправленного синтеза коротких пептидов, предназначенных для лечения патологии суставов в гериатрической практике.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Смирнов, Андрей Валерьевич, 2011 год

1. Анисимов В.Н. Эпиталамин замедляет скорость старения Drosophila melanogaster/ В.Н. Анисимов, C.B. Мыльников, В.Х: Хавинсон и др. // Геронтологические аспекты пептидной регуляции функций организма.- СПб.: Наука, 1996. С. 17-18.

2. Астапенко М.Г. Клинико-лабораторная характеристика синовита при деформирующем остеоартрозе/ М.Г. Астапенко, Т.Н. Копьева, В.А. Дуляпин // Ревматология. 1984. - № 4. - С. 10-13.

3. Астахова JI.B. Морфологические закономерности регенерации костного мозга трубчатых костей/ JI.B. Астахова, И.Н. Курилов, Д.Н. Джинчвеладзе. // Сб. научных работ «Лазерные технологии в медицине». Челябинск, 2003. - С. 273-278.

4. Ашмарин И.П. Регуляторные пептиды, функционально-непрерывная совокупность/ И.П. Ашмарин, М.Ф. Обухова. // Биохимия. 1986.№51.-С. 531-545.

5. Белокрылов Г.А. Различия в иммунном ответе, фагоцитозе и детоксицирующих свойствах под влиянием пептидных и аминокислотных препаратов/ Г.А. Белокрылов, О.Н. Деревнина, О.Я. Попова // Бюл. эксперим. биол. и мед. 1995. - № 118 (2). - С. 509-512.

6. Бойко Н.И Изучение антимикробной активности препарата простаты/ Н.И. Бойко, О.Н. Корнюшенко. // Материалы симпозиума «Пептидные биорегуляторы — цитомедины». Воен.-мед. акад. им. С.М. Кирова. -СПб., 1992.-С. 32-33.

7. Бондаренко Л.А. Возрастные особенности влияния эпиталамина на метаболизм серотонина в шишковидной железе у крыс/ Л.А. Бондаренко, В.Н. Анисимов. // Бюлл. эксперим. биологии и медицины.- 1992. Т. 107, № 2. - С. 194-195.

8. Вальдман A.B. Короткие пептиды как регуляторы катехоламинергических процессов/ A.B. Вальдман // Фармакология нейропептидов. М., 1982. - С. 9-30.

9. Володина Т.Т. Коллаген суставного хряща человека при деформирующем артрозе/ Т.Т. Володина, Т.Н. Печенова, В.В. Пляцко, Ю.А. Ставинский, А.К. Шимановская, H.A. Носаль, Е.В. Солодова. // Укр. биохим. журн. 1991. - Т. 63, № 4. - С. 47-51.

10. Ю.Гайдук B.C. Гистофизиология синовиальных оболочек и суставных хрящей (учебно-методические указания для самостоятельной работы студентов)/ B.C. Гайдук . Минск: МГМИ, 1999. - 86 с.

11. Гомазков O.A. Физиологические активные пептиды: Справочное руководство/ O.A. Гомазков. М., 1995. - 150 с.

12. Гомазков O.A. Современные тенденции в исследовании физиологически активных пептидов/ O.A. Гомазков. // Успехи соврем, биологии. 1996. - Т. 116, вып. 1. - С. 60-68.

13. Гречко А.Т. Изучение кардиомодулирующего действия различных групп низкомолекулярных пептидов/ А.Т. Гречко, В.Н. Калихевич, З.А. Ардемасова и др.// Бюлл. эксперим. биологии и медицины 1996. - Т. 121, №7.-С. 43-44.

14. Григорьев С.Г. Многомерные методы статистического анализа категорированных данных медицинских исследований/ С.Г. Григорьев и соавт. СПб.: BMA, 2002. -103 с.

15. Казанцева С.Т. Сравнительное изучение физико-химических свойств цитомединов Роль пептидных биорегуляторов (цитомединов) в регуляции гомеостаза/ С.Т. Казанцева // Тез. докл. науч. конф. Воен.-мед. акад. им. С.М. Кирова. Д., 1987. - С. 46.

16. Кветной И.М. Окрашивание ткани эндокринных желез и элементов ' АПУД-системы/ И.М. Кветной, В.В. Южаков. // Микроскопическаятехника: Руководство / Ред. Д.С. Саркисов, Ю.Л. Петров. М.: Медицина, 1996. - С. 375-418.

17. Коркушко О.В. Пептидные препараты тимуса и эпифиза в 1 профилактике ускоренного старения/ О.В. Коркушко, В.Х. Хавинсон,

18. Г.М. Бутенко, В.Б. Шатило СПб.: Наука, 2002. - 202 с.

19. Косягин Д.В. Аминокислотный состав белка протеогликанов суставного хряща человека в норме и при патологии/ Д.В. Косягин. // Укр. биохим. журн. 1984. - № 5. - С. 549-551.

20. Косягин Д.В. Концентрация ГАГ в неизменном и дегенеративно измененном хряще людей разного возраста/ Д.В. Косягин. // Вопр. мед. химии. 1986. - Т. 32, вып. 3. - С. 73-75.

21. Кузник Б.И. Тканеспецифические полипептиды и система комплемента/ Б.И. Кузник, В.Г. Морозов, В.Х. Хавинсон и др. // Система комплемента. М., 1988. - С. 25-27.

22. Кузник Б.И. Цитомедины и их роль в регуляции физиологических функций/ Б.И. Кузник, В.Г. Морозов, В.Х. Хавинсон // Успехи совр. биологии. 1995. Т. 115, вып. 3. - С. 353-367.

23. Кузник Б.И. Цитомедины. 25-летний опыт экспериментальных и клинических исследований/ Б.И. Кузник, В.Г. Морозов, В.Х. Хавинсон СПб.: Наука, 1998. - 310 с.

24. Т&.Курилов И.Н. Морфологическая характеристика процесса регенерации костной ткани у молодых и старых животных/ И.Н. Курилов, Г.А. Рыжак // Успехи геронтологии. 2009. - Т. 22, № 4. - С. 622-625.

25. Курилов И.Н. Особенности репаративного процесса в костной ткани старых животных/ И.Н. Курилов, Г.А. Рыжак // Бюлл. эксперим. биол. и мед. 2007. - Т. 143, № 6. - С. 682-685.

26. ЪО.Курилов И.Н. Стимулирующий эффект сингенного хряща на восстановление посттравматического дефекта черепа у старых крыс/ И.Н.Курилов // Омский научный вестник. 2006. - № 7 (43). - С. 51-52

27. Морозов В.Г. Влияние экстракта из эпифиза на течение экспериментальных опухолей и лейкозов/ В.Г. Морозов, В.Х. Хавинсон. // Эксперим. хирургия и анестезиология. 1974. - № 1. - С. 34-38.

28. Морозов В.Г. Характеристика и изучение механизма действия фактора тимуса (тимарина)/ В.Г. Морозов, В.Х. Хавинсон. // Докл. АН СССР. -1978. Т. 240, № 4. - С. 1004-1007.

29. Морозов В.Г. Выделение, очистка и идентификация иммуномодулирующего полипептида, содержащегося в тимусе телят и человека/ В.Г. Морозов, В.Х. Хавинсон. // Биохимия. — 1981. № 9. - С. 1652-1659.

30. Морозов В.Г. Новый класс биологических регуляторов многоклеточных систем цитомедины/ В.Г. Морозов, В.Х. Хавинсон. // Успехи современной биологии. - 1983. - Т. 96, № 3. - С. 339-346.

31. Морозов В.Г. Пептидные биорегуляторы (25-летний опыт экспериментального и клинического изучения)/ В.Г. Морозов, В.Х. Хавинсон. -СПб.: Наука, 1996. 74 с.

32. Насонова В.А. Реабилитация артрологических больных/ В.А. Насонова, М.Г. Астапенко. // Клиническая ревматология. 1989. - № 4. - С. 432436.

33. Некачалов В.В. Патология костей и суставов/ В.В. Некачалов. Руководство. СПб.: Сотис, 2000. - 288 с.

34. Павлова В.Н. Синовиальная среда суставов/ В.Н. Павлова. М.: Медицина, 1980. - 146 с.

35. Павлова В.Н. Хрящ/ В.Н. Павлова, Т.Н. Копьева, Л.И. Слуцкий, Г.Г. Павлов. М., Медицина, 1988. - 320 с.

36. Пальцев М.А. Цитокины и их роль в межклеточных взаимодействиях/ М.А. Пальцев. // Архив патологии. 1996. - Т. 53, № 6. - С. 3-7.

37. Пальцев М.А. Руководство по нейроиммуноэндокринологии/ М.ПА. Пальцев, И.М. Кветной. М.: Медицина, 2006. - 384 с.

38. Папава K.M. Использование кортексина в клинике/ K.M. Папава. // Успехи физиол. наук.- 1994. Т. 25, № 4. - С. 9.

39. Прокопенко Н.П. Характеристика кислотного экстракта эпифиза и его фракций/ Н.П. Прокопенко, P.A. Тигранян, Г.Л. Муратова и др. // Вопр. мед. химии. 1989. - № 4. - С. 79-81.

40. Поворознюк В.В. Изучение влияния пептидных регуляторов на структурно-функциональное состояние костной ткани крыс при старении/ В.В. Поворознюк, В.Х. Хавинсон, A.B. Макогончук, Г.А.

41. Рыжак, Е.А. Креслов, И.В. Гопкалова // Успехи геронтологии. 2007. -Т. 20, №2.-С. 134-137.

42. Подрушняк Е.П. Возрастные изменения суставов человека/ Е.П. Подрушняк. Киев, 1972. - 128 с.

43. Полак Дж., Ван Норден С. Введение в иммуноцитохимию: современные методы и проблемы. / Пер. с англ. М.: Мир, 1987. - С. 74.

44. Рыжак Г.А. Геропротекторы в профилактике возрастной патологии/ Г.А. Рыжак, С.С. Коновалов. СПб.: «прайм-ЕВРОЗНАК», М.: «ОЛМА-ПРЕСС», 2004. - 160 с.

45. Северин Е.С Биохимические основы патологических процессов/ Е.С. Северин, Е.С. Северина, H.H. Белушкина, T.JI. Алейникова, JI.B. Авдеева. М.: «Медицина», 2000. - 304 с.

46. Ткачук В.Н. Применение простатилена при лечении больных хроническим простатитом/ В.Н. Ткачук, А.Г. Горбачев, В.Х. Хавинсон. // Урология и нефрология. 1991. - № 6. - С. 40-43.

47. Усачев В.В. Влияние кортексина на электрофизиологические показатели зрительного нерва при пигментной амбиотрофии сетчатки/ В.В. Усачев. // Геронтологические аспекты пептидной регуляции функций организма. СПб.: Наука, 1996. С. 82

48. Хавинсон В.Х. Итоги изучения и применения пептидных биорегуляторов в геронтологии/ В.Х. Хавинсон // Геронтологические аспекты пептидной регуляции функций организма. СПб.: Наука, 1996.- С. 84-85.

49. Хавинсон В.Х. Возрастная инволюция органов и тканей/ В.Х. Хавинсон, И.М. Кветной, И.Э. Ингель, А.Т. Марьянович. // Успехи физиологических наук. 2003. - Т.34, № 1, С.79-92.

50. Хавинсон В.Х. Механизмы геропротекторного действия пептидов/ В.Х.' Хавинсон, В.В. Малинин. // Бюл. эксп. биол. и мед. 2002. - № 1. - С. 4-10.

51. Хавинсон В.Х. Средство, нормализующее функции хрящевой ткани, и способ его получения/ В.Х. Хавинсон, В.В. Малинин, Г.А. Рыжак. -Патент РФ № 2302872. 2007.

52. Хавинсон В.Х. Пептид, нормализующий метаболизм в костной и хрящевой тканях, фармацевтическая композиция на его основе и способ ее применения. / В.Х. Хавинсон, В.В. Малинин, Е.И. Григорьев, Г.А. Рыжак. Патент РФ № 2299741 от 27.05.2007.

53. Хавинсон В.Х. Пептид, стимулирующий регенерацию нейронов центральной нервной системы, фармацевтическая композиция на его основе и способ ее применения/ В.Х. Хавинсон, В.В. Малинин, Е.И. Григорьев, Г.А. Рыжак. Патент РФ № 2301678 от 27.06.2007.

54. Хавинсон В.Х. Пептид, обладающий иммуногеропротекторным действием, фармацевтическая композиция на его основе и способ ее применения/ В.Х. Хавинсон, В.В. Малинин, Е.И. Григорьев, Г.А. Рыжак. Патент РФ № 2301074 от 20.06.2007.

55. Хавинсон В.Х. Пептид, повышающий резистентность капилляров, фармацевтическая композиция на его основе и способ ее применения/ В.Х. Хавинсон, В.В. Малинин, Е.И. Григорьев, Г.А. Рыжак. Патент РФ № 2295970 от 27.03.2007.

56. Хавинсон В.Х. Тканеспецифическое действие пептидов в культуре тканей крыс разного возраста/ В.Х. Хавинсон, В.В. Малинин, Н.И. Чалисова, Е.И. Григорьев. // Успехи геронтол. 2002. - Вып. 9. - С.95-100.

57. Хавинсон В.Х. Пептидная регуляция гомеостаза при старении/ В.Х. Хавинсон, В.Г. Морозов // Успехи геронтол. 2000: - Вып. 4. - С. 7579.

58. Хавинсон В.Х., Морозов В.Г. Пептиды эпифиза и тимуса в регуляции старения/ В.Х. Хавинсон, В.Г. Морозов. СПб.: Фолиант, 2001. 159 с.

59. Хавинсон В.Х. Цитомедины и их роль в регуляции физиологических функций/ В.Х. Хавинсон, В.Г. Морозов, Б.И. Кузник. //Успехи современной биологии. 1985. - Т. 115, № 3. - С. 353-367.

60. Хавинсон В.Х. Влияние пептидов головного мозга на клетки нервной ткани in vitro/ В.Х. Хавинсон, В.Г. Морозов, Н.И. Чалисова, В.Б. Окулов. // Цитология. 1997. - Т. 39, № 7. - С. 571-578.

61. Хавинсон В.Х. Роль пептидов тимуса в регуляции роста лимфоидной ткани у крыс разного возраста/ В.Х. Хавинсон, Н.И. Чалисова, В.Г. Морозов, В.В. Малинин. // Докл. АН. 1999. - Т. 369, № 5. - С. 701.

62. Хавинсон В.Х. Исследование натуральных и синтетических цитомединов в культуре нервной ткани/ В.Х. Хавинсон, Н.И. Чалисова, В.Б. Окулов. // Бюлл. эксперим. биол. и медицины. 1998. - Т. 125, № 3. - С. 332-336.

63. Чалисова Н.И: Нейроиммуноэндокринные механизмы действия пептидов и аминокислот в тканевых культурах/ Н.И. Чалисова, И.В. Князькин, И.М. Кветной. СПб.: ДЕАН, 2005. - 165 с.

64. Чалисова Н.И. Регулирующая роль некоторых аминокислот при развитии апоптоза в культуре нервной' и лимфоидной ткани/ Н.И. Чалисова; В.А. Пеннияйнен, Г. Хаазе// Российский Физиологическ. журн. им. Сеченова 2002. - № 88 (5). - С. 627-633.

65. Чалисова Н.И. Модулирующий и протекторный эффект пептидов тимуса в культуре лимфоидной ткани/ Н.И. Чалисова, В.Х. Хавинсон,

66. A.Д. Ноздрачев // Доклады Академии наук. 1999.' - № 379 (3). С. 411413.

67. Шатаева JI.K. Пептидная саморегуляция живых систем/ Л.К. Шатаева,

68. B.Х. Хавинсон, И.Ю. Ряднова. СПб.: Наука, 2003. - 209 с.

69. Ярилин А.А. Основы иммунологии/ А.А. Ярилин. — М.: Медицина, 1999.-608 с.

70. Arai Т. Endogenous interleukin 10 prevents apoptosis in macrophages during Salmonella infection/ T. Arai, K. Hiromatsu, H. Nishimura, G. Hamid// Biochem. Biophys. Res. Communs. 1995 - N 213 (2). P. 600607.

71. Arnold W.I. Arthroscopy in the diagnoses and therapy of. Arthritis/ W.I. Arnold // Hosp. Pract. — 1992. —Vol. 27.-N. ЗА. P.43.

72. Asari A. Molecular weight dependent effects of Hyaluronate on the arthritic synovium/ A. Asari, S. Miyauchi. // Arch. Histol. Cytol. - 1998. -Vol. 61.-N.2.-P. 125-135.

73. Aviad A.D. The molecular weight of therapeutic hyaluronan (sodium hyaluronate): how significant is it?/ A.D. Aviad, J.B. Houpt //S. Rheumatol.- 1994.-Vol. 21.-P. 297-301.

74. Ayral X. Chondroscopy: a new .method for scoring chondropathy/ X. Ayral, M. Dougados et al. // Semin. Arthritis. Rheum. 1993. - Vol. 22, N 5.- P. 289-297.

75. Ahiback S. Osteoarthritis of the knee: a radiographic investigation/ S. Ahiback// Acta Radid. 1968. - Vol. 272. - P. 7-72.

76. Baici A. Interaction between human,leukocyte.cluster and: chondroitinsulfate/ A. Baici, P. Bradamante //Chem. Biol. Interact. 1984. - Vol. 51. -P. 467-477.

77. Backhouse M.E. Economic evaluation bibliography/ M.E. Backhouse, R.S. Mackhouse, S.A. Edey // Health Econ. 1992. - № 1. - P. 230-236.

78. Balazs E.A.The reological properties and biological function of hyaluronic acid. Chemistry and Molecular Biology of the Intercellular Matrix/ E.A. Balazs, D.A. Gibbs. // ed E.A. Balazs. London, New-York. -1970. P. 1241-1254/

79. Bandley M.E. The economic burden of muskuloskelethal disorders in Canada is similar to that for cancer, and may be higher/ M.E. Bandley. // S. Rheumatol. 1995. - P. 204-206. '

80. Bassleer G. In vitro assays of chondrocyte function: the influence of drugs and hormone/ G. Bassleer, Y. Henrotin, P. Franchimont. //Scarid. J. Rheum. 1990.-Vol. 81.-P. 13-20.

81. Bellamy N. Osteoarthritis clinical trials: candidate variables and clinimetric properties/N. Bellamy //Ibid. 1977. - Vol. 2. - P. 768-778.

82. Bergman A.G. Osteoarthritis of the knee correlation of subchondral MR signal abnormalities mith historpathologie and radiographic (features)/ A.G. Bergman, H.K. Willen et al. // Sceletal. Radiol. 1994. -Vol. 23.-N6.-P. 445-448.

83. Bing W. L-arginine impacts pulmonary vascular structure in rats with an aortocaval shunt/ W. Bing, D. Junbao, Q. Jianguang et al. // J. Surg Res. -2002.-N108(1).-P. 20-31.

84. Booth P.J. Amino acid depletion and appearance during porcine preimplantation embryo development in vitro/ P.J. Booth, P.G. Humpherson, T.J. Watson et al.// Reproduction. 2005. -N 130 (5). P. 655-668.

85. Cid C. Low concentrations of glutamate induce apoptosis in cultured neurons: implications for amyotrophic lateral sclerosis/ C. Cid, J.C. Alvarez-Cermeno, I. Regidor.// J. Neurol. Sci. 2003. - N 206 (1). - P. 91-95.

86. Chen R.W. Regulation of c-Jun N-terminal kinase, p38 kinase and AP-1 DNA binding in cultured brain neurons: roles in glutamate excitotoxicity and lithium neuroprotection/ R.W. Chen, Z.H. Qin, M.J. Ren. // J. Neurochem. 2003. -N 84 (3)/ - P. 566-575.

87. Carlson C.S. Ischemic necrosis of cartilage in spontaneous and experimental lesions of osteochondrosis/ C.S. Carlson, D.J. Meuten, D.C. Richardson. //J. Orthop. Res. 1991. -N May, 9(3). - P. 317-329.

88. Cutler R. Human longevity and aging: possible role of reactive oxygen species/ R. Cutler. // Ann. N. Y. Acad. Sci. — 1991. — Vol. 621. — P. 1—28.

89. Davis M.A. Knee osteoarthritis and physical functioning: evidence from NHANES 1 epidemiologic followup study/ M.A. Davis, W.H. Ettinger, J.M. Neuhaus, K.P. Mallon. //J. Rheumatol. 1991. -N 18. -P. 591-598.

90. Felson D.T. The epidemiology of knee osteoarthritis: results from the Framingham osteoarthritis study/ D.T. Felson // Sem. Arthritis Rheum. -1990.-N20.-P. 42-50.

91. Fratelli M. Autocrine interleukin-1 beta regulates both proliferation and apoptosis in EL4-6.1 thymoma cells./ M. Fratelli, V. Gagliardini, G. Galli et al.// Blood. 1995. - N 85 (12). - P. 3532-3537.

92. Fu Y.M. Specific amino acid dependency regulates invasiveness and viability of androgen-independent prostate cancer cells/ YlM. Fu, Z.X. Yu, Y.Q. Li et al.// Nutr. Cancer. 2003. -N 45(1). - P. 60-73.

93. Gerarde H.W. Protein synthesis and amino acid turnover in tissue culture/ H.W. Gerarde, M. Jones, T.J. Winnick// J. Biol. Chem. 1966. - N 1.-P. 51-68.

94. Guccione A.A. The effects of specific medical conditions on the functional limitations of elders in the Framingham Study/ A.A. Guccione, D.T. Felson, J.J. Anderson et al.// Am. J. Public Health. 1994. - N 84. - P. 351-8.

95. Gullberg B. Osteoporos/ B. Gullberg, J. Johnell, J.A. Kanis. Int, 1997.-N7.-P. 407-13.

96. Kniazieva M.V. Some characteristics of metabolism in osteoarticular, cardiovascular, and liver tissues in "experimental osteochondrosis"/ M.V. Kniazieva, P.A. Kaliman, O.P. Tymoshenko.// Ukr. Biokhim. Zh. 1995. -Nov-Dec;67(6). - P. 66-75.

97. Kniazyeva M.V. Disintegration of collagen metabolism between the various organs as a possible reason for their pathology FEBS/ M.V. Kniazyeva, A.V. Prokopyuk.// Journal 272 (si). 2005. - Dl. - P. 26-30.

98. Komandenko N. I. Modeling of osteochondrosis of the spinal column/ N.I. Komandenko, A.I. Ryzhovet al. // Byulleten' Eksperimental'noi Biologii i Meditsiny. 1998. - Vol. 125, No. 6. - P. 706-708.

99. Kim K.Y. The effect of L-arginine, a nitric oxide synthase substrate, on retinal cell proliferation in the postnatal rat/ K.Y. Kim, J.I. Moon, E.J. Lee et al. // Dev. Neurosci. 2002. - N 24(4). - P. 313-21.

100. Kimball S.R. New functions for amino acids: effects on gene transcription and translation/ S.R. Kimball, L.S. Jefferson. // Am. J. Clin. Nutr. 2006. - N 83(2). - P. 500-507.

101. Kimura M. Effects of branched-chain amino acids on DNA synthesis and proliferation in primary cultures of adult rat hepatocytes/ M. Kimura, M. Ogihara.// Eur. J. Pharmacol. 2005. - N 510(3). - P. 167-180.

102. Levi-Montalchini R. Developmental neurobiology and natural history of nerve growth factor/ R. Levi-Montalchini. // Ann. Rev. Neurosci. 1982. -Vol. 5.-P. 341-362.

103. Morozov V.G. Natural and sythetic thymic peptides as therapeutics for immune disfunction/ V.G. Morozov, V.Kh. Khavinson. // Int. J. Immunopharmacology. 1997. - Vol. 19, N 9/10. - P. 501-505.

104. Nordin B.E.C. Nutrition, osteoporosis, and aging/ B.E.C. Nordin, A.G. Need, T. Steurer et al. // Annals of the New York Academy of Sciences. 1998. -N. 854. - P. 336-351.

105. Oehler R. Regulative capacity of glutamine/ R. Oehler, E. Roth. // Curr. Opin. Clin. Nutr. Metab. Care. 2003. -N 6(3). - P. 277-82.

106. Peyron J.G. The epidemiology of osteoarthritis// In: Moskowitz R.W.S, Goldberg V M,Mankin H J, eds. Osteoarthritis: diagnosis and medical surgical management, 2nd edn./ J.G. Peyron, R.D. Altman. -Philadelphia: W B Saunders Company, 1992. P. 15-37.

107. Philip R. Arginine deprivation, growth inhibition and tumour cell death: 2. Enzymatic degradation of arginine in normal and malignant cell cultures/ R. Philip, E. Campbell, D.N.Br. Wheatley //. J. Cancer. 2003. -N 88(4).-N613-623.

108. Proud C.G. Amino acids and mTOR signalling in anabolic function/ C.G. Proud.//Biochem. Soc. Trans.-2006.-N 35(5).-P. 1187-1190.

109. Suschek C.V. Critical role of L-arginine in endothelial cell survival during oxidative stress/ C.V. Suschek, O. Schnjrr, K. Hemmrich et al. // Circulation. 2003. -N 107(20). - P. 2607-2014.

110. Suryawan A. Leucine stimulates protein synthesis in skeletal muscle of neonatal pigs by enhancing mTORCl activation/ A. Suryawan, A.S. Jeyapalan, R.A. Orellana et al.// Am. J. Physiol. Endocrinol, etab. 2008. -N295(4).-P. 868-875.

111. Trulsson L. The Influence of a load of L-arginine on serum amino acids and pancreatic apoptosis/proliferation and ATP levels in the rat/ L. Trulsson, P. Sandstrom, T. Sundqvist et al. // Pancreas. 2004. - N 29(4). -P. 113-120.

112. Vary T. Oral leucine enhances myocardial protein synthesis in rats acutely administered ethanol/ T. Vary. // J. Nutr. 2009. - N 139(8). - P. 1439-44.