Влияние некоторых экзогенных факторов на созревание ооцитов крупного рогатого скота IN VITRO тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат биологических наук Сметанина, Ирина Геннадьевна

• Сметанина, Ирина Геннадьевна
• кандидат биологических наук
• 2001

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Сметанина, Ирина Геннадьевна

Введение

1.0бзор литературы

1.1. Изменения белкового спектра ооцитов млекопитающих в процессе созревания in vivo и in vitro

1.2. Жирнокислотный состав ооцитов животных: и роль жирных кислот в процессах их созревания и развития

1.3. Влияние морфологического статуса яичника на созревание ооцитов крупного рогатого скота in vitro

1.4. Влияние сыворотки крови на созревание ооцитов и развитие эмбрионов крупного рогатого скота in vitro

1.5. Исследование роли циклического аденозинмонофосфата в процессах ядерного и цитоплазматического созревания ооцитов млекопитающих 31 2. Собственные исследования

2.1. Объекты и методы исследований

2.2.Результаты исследований и их обсуждение

2.2.1 .Влияние экзогенных гормонов и фолликулярных клеток на белковый спектр созревших in vitro ооцитов крупного рогатого скота

2.2.2.Изменение жирнокислотного состава общих липидов ооцитов крупного рогатого скота в процессе созревания in vitro

2.2.3.Созревание ооцитов крупного рогатого скота in vitro из яичников различного морфофункционального состояния

2.2.4.Влияние сыворотки крови на созревание ооцитов и развитие эмбрионов крупного рогатого скота in vitro

2.2.5. Изучение возможности синхронизации ядерного и цитоплазмати ческого созревания ооцитов крупного рогатого скота in vitro с использо ванием циклического аденозинмонофосфата

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние некоторых экзогенных факторов на созревание ооцитов крупного рогатого скота IN VITRO»

Актуальность темы. В последние годы быстрыми темпами развиваются биотехнологические программы по получению трансгенных животных, клонированию, криоконсервации генетических ресурсов.

Для успешного осуществления вышеназванных программ необходимо иметь в наличии значительное количество полноденных зрелых яйцеклеток и зигот на ранних стадиях развития.

Учитывая то, что крупный рогатый скот относится к малоплодным видам животных, получить in vivo достаточное количество яйцеклеток и зигот не представляется возможным. Решить эту проблему возможно только с помощью созревания ооцитов и оплодотворения яйцеклеток крупного рогатого скота вне организма.

На созревание ядра и цитоплазмы ооцитов in vitro влияет множество экзогенных факторов, которые являются составляющими in vitro культуральной системы. Несмотря на обширные данные по вопросу созревания яйцеклеток крупного рогатого скота, многие моменты изучены недостаточно полно.

Установлено, что ооциты, выделенные из фолликулярного окружения, in vitro вступают в спонтанный мейоз, но цитоплазма при этом может оставаться незрелой. Возможно, что такие ооциты могут быть даже нормально оплодотворены и разовьются в дальнейшем до преим-плантационных стадий. Но нет гарантий, что эти эмбрионы нормально приживутся и будет получено полноценное потомство. Если созревание ядра можно оценить как визуально (по наличию первого направительного тельца), так и с помощью приготовление классических суховоз-душных препаратов, то подходы к проблеме изучения полноценности созревания цитоплазмы разработаны недостаточно. 5

Одним из таких подходов может являться характеристика биохимических изменений, происходящих в цитоплазме ооцитов в период созревания, а сопоставление биохимических характеристик ооцитов, созревших in vivo и in vitro должно позволить в определенной степени судить об адекватности условий созревания ооцитов, создаваемых in vitro.

Целью настоящей работы являлось изучение влияния некоторых экзогенных факторов на ядерное и цитоплазматическое созревание in vitro ооцитов крупного рогатого скота (КРС) и поиск биохимических критериев оценки полноценности созревания цитоплазмы ооцитов.

В связи с этим ставились следующие задачи:

1. Исследовать влияние фолликулостимулирующего гормона, эст-радиола и клеток гранулезы больших неатретических фолликулов, как факторов наиболее широко используемых в культуральных системах созревания ооцитов КРС in vitro, на белковые спектры яйцеклеток и сопоставить их с белковыми спектрами яйцеклеток, созревшими in vivo.

2. Изучить жирнокислотный состав общих липидов ооцитов КРС из яичников различного морфофункционального состояния в связи с процессом созревания in vitro.

3. Выяснить способность к ядерному созреванию in vitro ооцитов КРС из яичников различного морфофункционального состояния.

4. Изучить влияние фетальной сыворотки на ядерное созревание ооцитов КРС in vitro и выяснить характер влияния эстральной сыворотки коров на развитие in vitro оплодотворенных яйцеклеток КРС в зависимости от времени ее включения в культуральную среду. 6

5. Изучить возможность синхронизации ядерного и цитоплазмати-ческого созревания ооцитов КРС in vitro с помощью циклического аде-нозинмонофосфата.

Научная новизна работы. Впервые установлена специфичность воздействия гормонов и фолликулярных клеток на белковый спектр ооцитов КРС при созревании in vitro. Показана возможность использования белкового спектра ооцитов для характеристики полноценности условий созревания их in vitro. Впервые установлены изменения жирно-кислотного состава общих липидов в процессе созревания ооцитов КРС in vitro. Установлено, что ооциты, выделенные из яичников различного морфофункционального состояния, обладают одинаковой способностью к ядерному созреванию in vitro. Показано, что время включения астральной сыворотки в синтетическую жидкость яйцевода оказывает существенное влияние на развитие эмбрионов КРС до стадии бластоцисты и вылупившейся бластоцисты.Установлено, что циклический адено-зинмонофосфат в концентрации ЮОмкМ в течение первых 6-ти часов не оказывает достоверного влияния на возобновление мейоза в ооцитах КРС in vitro и последующую нормальную пенетрацию яйцеклеток сперматозоидами.

Практическая значимость работы. Микроэлектрофоретическое разделение белков ооцитов млекопитающих, созревших in vivo и in vitro, позволяет определять адекватность культуральных систем, используемых для созревания ооцитов in vitro. В опытах по изучению процессов ядерного созревания in vitro представляется возможным использовать ооциты КРС, оцененные как морфологически нормальные, из яичников любого морфофункционального состояния. Данные по влиянию концентрации фетальной сыворотки на процесс ядерного созревания 7 ооцитов КРС и времени введения в среду культивирования эстральной сыворотки на развитие эмбрионов до стадии бластоцисты могут быть использованы для совершенствования системы культивирования in vitro.

Положения, выносимые на защиту:

1. Сопоставление белковых спектров яйцеклеток крупного рогатого скота, созревших in vivo и in vitro, позволяет определять адекватность культуральных систем, используемых для созревания ооцитов in vitro, условиям созревания ооцитов in vivo.

2. Созревание ооцитов крупного рогатого скота in vitro связано с некоторыми устойчивыми изменениями в жирнокислотном составе их общих липидов. Эти изменения независимы от морфофункционального состояния яичника, то есть могут быть отнесены непосредственно к биохимическим механизмам, контролирующим процесс первого мейо-тического деления.

3. Морфофункциональный статус яичника не влияет на способность ооцитов крупного рогатого скота завершать первое мейотическое деление in vitro.

4. Присутствие циклического аденозинмонофосфата в концентрации 1 ООмкМ в течение первых 6-ти часов в среде созревания не оказывает влияния на возобновление мейоза в ооцитах крупного рогатого скота и последующую нормальную пенетрацию яйцеклеток сперматозоидами. 8

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Сметанина, Ирина Геннадьевна

ВЫВОДЫ

1. При созревании in vitro под воздействием гормонов и клеток грануле-зы в ооцитах крупного рогатого скота происходит синтез различных белков, аналогичных белкам, составляющим белковый спектр яйцеклеток, созревших in vivo. При этом фолликулостимулирующий гормон вызывает образование белка с молекулярной массой около 20кДа, клетки гранулезы - белка с молекулярной массой около ЗОкДа, эстра-диол - высокомолекулярного белка массой более 67кДа.

2. Сопоставление белковых спектров яйцеклеток, созревших in vivo и in vitro, позволяет определить адекватность культуральных систем, используемых для созревания ооцитов in vitro, условиям созревания ооцитов in vivo.

3. В процессе созревание ооцитов крупного рогатого скота in vitro происходят достоверные изменения жирнокислотного состава их общих липидов, характеризующиеся снижением уровня линолевой, линоле-новой и арахидоновой кислот в яйцеклетках, завершивших первое мейотическое деление.

4. Морфофункциональный статус яичника оказывает влияние на общее количество извлекаемых ооцитов и количество морфологически нормальных пригодных для культивирования ооцитов. Однако, способность морфологически нормальных ооцитов достигать in vitro стадии метафаза II не зависит от морфофункционального состояния яичника.

5. Фетальная сыворотка крупного рогатого скота, добавленная в культу-ральную среду в концентрации 5%, не оказывает влияния на возобновление в ооцитах процесса мейоза, но влияет на ядерное созревание ооцитов при переходе от стадии метафаза I к метафазе II.

6. Время включения эстральной сыворотки коров в культуральную среду оказывает существенное влияние на развитие эмбрионов крупного рогатого скота in vitro до стадии бластоцисты и вылупившейся бла-стоцисты. Эстральная сыворотка, введенная в культуральную среду сразу после оплодотворения, достоверно ингибирует развитие зигот до стадии бластоцисты, по сравнению с введением ее после первого деления дробления эмбрионов.

7. Циклический аденозинмонофосфат, вводимый в среду культивирования в концентрации ЮОмкМ в течение первых 6 часов созревания in vitro не оказывает влияние на возобновление мейоза в ооцитах крупного рогатого скота и последующую нормальную пенетрацию яйцеклеток сперматозоидами.

93

Практические предложения

1. Микроэлектрофоретическое разделение белков ооцитов млекопитающих, созревших in vivo и in vitro, может быть использовано для оценки адекватности и оптимизации культуральных систем, применяемых для созревания ооцитов in vitro.

2. В опытах по изучению процесса созревания in vitro представляется возможным использовать морфологически нормальные ооциты крупного рогатого скота из яичников любого морфофункционального состояния.

3. Для повышения выхода эмбрионов крупного рогатого скота на стадии бластоцисты из ооцитов крупного рогатого скота, созревавших in vitro, целесообразно вводить в синтетическую жидкость яйцевода 20% эстральной сыворотки КРС через 22 часа после начала культивирования.

94

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В созревающих ооцитах млекопитающих происходят не только ядерные, но также и цитоплазматические изменения, необходимые для оплодотворения и последующего эмбрионального развития. Если созревание ядра можно оценить как визуально (по наличию первого направительного тельца), так и с помощью приготовления классических сухо-воздушных препаратов, то поиск биохимических критериев оценки полноценности созревания цитоплазмы ооцитов еще только ведется. Известно, что в течение созревания ооцитов млекопитающих главные изменения происходят в белковом синтезе (Cran D.G., 1985), особенно это необходимо для возобновления цитоплазматического созревания. Однако, в проблеме смены белков в процессе созревания ооцитов КРС существует много нерешенных вопросов. Отсутствуют данные по влиянию различных экзогенных составляющих культуральных сред (гормонов, фолликулярных клеток) на белковый профиль ооцитов КРС. Нами впервые установлена специфичность воздействия гормонов и фолликулярных клеток на белковый спектр ооцитов КРС при созревании in vitro (Сметанина И.Г. и др.,2000). Нами также продемонстрировано, что микроэлектрофоретическое разделение белков ооцитов млекопитающих, созревших in vivo и in vitro, позволяет определять адекватность культуральных систем, используемых для созревания ооцитов in vitro. Особо следует отметить, что белковые спектры ооцитов КРС методом микроэлектрофореза были получены впервые в России в лаборатории клеточной инженерии и трансплантации эмбрионов ВНИИФБиП с/х животных под руководством кандидата биологических наук Журавлевой Н.И.

Известно, что вопросы, касающиеся биохимических преобразований в ооцитах КРС в процессе ядерного созревания in vitro изучены

87 недостаточно. Установлено, что процесс ядерного созревания ооцитов КРС как in vivo, так и in vitro связан с изменениями в различных фракциях белков (Kastrop Р.М.М. et al.,1990, 1991). В то же время известно, что жирные кислоты обладают многочисленными физиологическими функциями. Однако, их роль в созревании, оплодотворении и развитии яйцеклеток млекопитающих практически неизучена. Есть сообщения, связывающие липидный метаболизм с развитием преимплантационных эмбрионов млекопитающих. Мы в своей работе впервые в мире исследовали жирнокислотный состав общих липидов ооцитов КРС из яичников различного морфофункционального состояния в связи с процессом их ядерного созревания in vitro. Нами установлено, что в содержании некоторых жирных кислот в ооцитах КРС в связи с процессом ядерного созревания in vitro происходят устойчивые изменения вне зависимости от морфофункционального состояния яичника, что позволяет отнести эти изменения непосредственно к биохимическим механизмам, регулирующим процесс первого мейотического деления. Наблюдается тенденция к устойчивому уменьшению содержания некоторых ненасыщенных жирных кислот (линолевой, линоленовой и арахидоновой) в ооцитах, завершивших первое мейотическое деление. Этот факт может свидетельствовать об увеличении синтеза простагландинов. Арахидоновая кислота, как известно, является непосредственным предшественником простагландинов. Основная физиологическая функция простагландинов состоит в модулировании активности аденилатциклазы (Марри Р. И др., 1993). Возможно, что именно посредством такого модулирования про-стагландины участвуют в процессах созревания ооцитов млекопитающих а, именно, снижают уровень цАМФ до определенной пороговой концентрации, что приводит к снятию блока мейоза и инициации ядерного созревания.

88

Таким образом, не вызывает сомнений, что изучение биохимических преобразований в ооцитах млекопитающих в процессе созревания как in vivo, так и in vitro, имеет важное значение как в понимании механизмов оогенеза, так и в определении оптимальных условий культивирования ооцитов in vitro.

Ввиду того, что у большей части ооцитов, выделенных из яичников коров, происходит преждевременное мейотическое деление ядра без соответствующего созревания ооплазмы, возникает необходимость в синхронизации процессов созревания ядра и цитоплазмы. Существует мнение, что как и других видов млекопитающих, уровень цАМФ внутри ооцита КРС может являться финальным медиатором в модулировании возобновления мейоза, поскольку установлено, что ооциты КРС обладают аденилатциклазной активностью (Kuyt J.R.M. et al., 1988) и обратимо реагируют на изменения в концентрациях цАМФ (Sirard М.А., First N.L., 1988; Нота S.T.,1988). Учитывая, что ингибирующее действие цАМФ и его аналогов на ядерное созревание ооцитов млекопитающих проявляется только до GVBD (Cho W.U. et al., 1974) и то, что зародышевый пузырек в ооцитах КРС in vitro сохраняется в течение 6.6часов (Sirard М.А. et al., 1989), мы попытались использовать культивирование ооцитов КРС с цАМФ в первые бчасов созревания их in vitro с целью изучения возможности синхронизации ядерного и цитоплазматического созревания ооцитов КРС in vitro.

Нами установлено, что присутствие 1 ООмкМ цАМФ в среде в течение первых бчасов созревания не сказывается на возобновлении мейоза ооцитами КРС и на проценте общей пенетрации и нормальной пенетрации сперматозоидами яйцеклеток. Отсутствие разницы между группамикак по проценту ооцитов, возобновивших мейоз, так и по проценту нормального оплодотворения, еще не говорит об идентичности этих яйцеклеток, в частности с точки зрения биохимии. Есть данные

89

Журавлева Н.И., Рябых В.П., 1990), что добавление ЮОмкМ цАМФ в первые 6-7 часов культивирования вызывает снижение содержания низкомолекулярных фракций в белковом спектре ооцитов (менее 20кДа) по сравнению с белковым спектром незрелых ооцитов до уровня зрелых. Возможно, что разница в биохимических показателях ооцитов, созревавших в различных культуральных системах, скажется на более поздних стадиях развития эмбрионов. Необходимо дальнейшее изучение влияния цАМФ и механизмов его действия на культивируемые ооциты и эмбрионы КРС, а именно, уточнение концентраций данного циклического нуклеотида и (его аналогов) для работ по синхронизации ядерного и цитоплазматического созревания ооцитов и исследование воздействия данного фактора на развитие эмбрионов КРС до преимплантационных стадий.

Наряду с вопросами, касающимися биохимических аспектов созревания ооцитов КРС, исследователями ощущается необходимость дальнейшего изучения функции яичника, понимания механизмов роста, дифференциации и атрезии фолликула.

Надежные критерии отбора для предсказания компетенции к развитию ооцит-кумулюсных комплексов имеют большое значение в биотехнологических программах с использованием животных. Одним из таких критериев отбора могут являться морфологические особенности используемых в опыте яичников. Имеются данные, что морфология яичников может отражать его функциональное состояние, а именно, наличие подавляющих факторов, переводящих ооциты в атрезию. Источником таких атретогенных факторов может быть: 1) доминирующий фолликул (Hodgen G.D.,1986; Ireland J.J., Roche J.F.,1987); 2) функционирующее желтое тело (Baird D.T.,1987; Fujimori К. et al.,1987); 3) кис-тозное образование (Rettori V. et al.,1984). Исходя из вышеприведенных исследований, нами была предложена классификация, учитывающая на

90 личие следующих морфологических особенностей яичников, возможно связанных с их функциональным состоянием (с точки зрения существования и действия предполагаемых факторов атрезии): 1) фолликула диаметром более 10мм; 2) функционирующего желтого тела или желтого тела от прошлого цикла; 3) фолликулярного кистозного образования; 4) пула фолликулов различного диаметра (менее 10мм). В настоящем исследовании было показано, что от морфофункционального состояния яичника может зависеть как общее количество извлекаемых ооцитов, так и количество морфологически пригодных для культивирования ооцитов. Что касается влияния морфофункционального состояния на ядерное созревание ооцитов, показано отсутствие зависимости процента морфологически нормальных яйцеклеток, достигших МП, от морфофункционального состояния яичника. Таким образом, можно сделать вывод, что ооциты, подвергавшиеся в организме воздействию различных биологически активных веществ (гормонов, атретогенных факторов и так далее), в условиях in vitro обладают одинаковой способностью к ядерному созреванию. Однако, необходимо учитывать возможное влияние морфофункционального состояния яичника на цитоплазматическое созревание ооцитов и дальнейшее развитие эмбрионов in vitro. Эти вопросы требуют дополнительного изучения.

Таким образом, для успешной реализации различных биотехнологических программ, необходимо создание оптимальных культуральных систем, обеспечивающих полноценное созревание и развитие оплодотворенных вне организма ооцитов. Для этого необходимо дальнейшее изучение процессов созревания и развития яйцеклеток млекопитающих, что позволит лучше понять механизмы нормального оо-и эмбриогенеза.

91

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Сметанина, Ирина Геннадьевна, 2001 год

1. Архипенко Ю.В., Каган В.Е., Козлов Ю.П., Ритов В.Б. Патология мембранной проницаемости.- М.- 1975.- С.13.

2. Бохински Р. Современная биохимия.- М.- 1988.

3. Бугров А.Д., Ткачева И.В. Зависимость выхода и качества ооцитов от типоразмеров яичников коров// Зоотехния.- 1999.- N6.- С.30-32.

4. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах.- М:Наука.- 1972.

5. Дыбан А.П. Раннее развитие млекопитающих.- JI: Наука.- 1988.

6. Журавлева Н.И. Усовершенствование способа окрашивания электро-фореграмм белка в полиакриламидном геле при помощи серебра/ Удостоверение на рационализаторское предложение от 16 .1. 1990г.

7. Кривохарченко А.С., Вильянович Л.И., Татаринова Л.В., Рябых В.П. Развитие мышиных эмбрионов in vitro в среде без белка в зависимости от количества зародышей в микрообъеме среды// Онтогенез.-1993.- Т.24 N6. - С.53-60.

8. Лейбниц Э., Штруппе X. Руководство по газовой хроматографии.- М: Мир.- 1988.

9. Ю.Маленко Г.П., Сметанина И.Г., Иванова Л.Б. Устройство для выделения ооцитов из яичников млекопитающих/ Заявка на изобретение N 951 00852 от 19.01.1995г.// Положительное решение экспертов ВНИИГПЭ вынесено 30.10. 1995.95

10. П.Марри Р., Греннер Д., Мейес П., Родуэлл В. Биохимия человека.- М: Мир.- 1993.

11. Плохинский Н.А. Алгоритмы биометрии.- Изд-во Моск. ун-та.- 1980.

12. Прейнберг Г.А., Тирманис И.Я., Турка J1.K. Количественная и качественная оценка изолированных овоцитов у коров.- Ставрополь.-1981.- С.12-20.

13. Санталов Б.Ф., Ларин В.Т, Розанов С.И., Хохлов A.M. Новые методы и устройства для микроэлектрофореза в ПААГ/ Приборы для исследований в области физико-химической биологии и биотехнологии. -Пущино. 1984.-С.23.

14. Скоблина М.П. Созревание in vitro ооцитов животных. II. Структурные и биохимические преобразования, способность к оплодотворению //Онтогенез.-1982.-Т. 13 .-С. 18-27.

15. Страйер Л. Биохимия.- М.- 1985.

16. Abuimeilch N.M., Elson С.Е. The infuence of linoleic acid on electron transport system components//Lipids.- 1980.- V.15.- P.925-931.

17. Anderson G.B. Advances in large mammalian embryo culture/ Methods in Mammalian Reproduction. In: Daniel J.C. Jr.(ed).- N.Y.Academic Press.-1978.- P.273-284.96

18. Baird D.T. A model for follicular selection and ovulation lessons from superovulation// J. Steroid. Biochem.- 1987.- V.27.- P. 15-23.

19. Baker T.G. Oogenesis and ovulation/ Reproduction in mammals// Germ cells and fertilization ( eds C.R. Austin, R.Y. Short). Cambridge. - 1982.-V.I.- P. 17-46.

20. Ball G.D., Leibfried M.L., Lenz R.W., Ax R.L., Bavister B.D., First N.L. Factors affecting successful in vitro fertilization of bovine follicular oocytes //Biol. Reprod.- 1983.- V.28.- P.717-725.

21. Bavister B.D., Rose-Hellekant Т., Pinyopummintr T. Development of in vitro matured/ in vitro fertilized bovine embryos into morulae and blastocysts in defined culture medium// Theriogenology. 1992. - V.37.-P.127.

22. Bavister B.D., Leibfried M.L., Lieberman G. Development of preimplantation embryos of the golden hamster in a defined culture medium// Biol.Reprod.- 1983.- V.28.- P.235-247.

23. Bavister B.D., Yanagimachi R. The effect of sperm extract and energy sources on the motility and acrocome reaction of hamster sperm in vitro// Biol. Reprod.- 1977.-V.16.- P.228-237.

24. Bavister B.D. A consistently successful procedure for in vitro fertilization of golden hamster egg// Gamete Research.- 1989.- V.23.- P.139-158.

25. Blondin P., Sirard M.A. Oocyte and follicular morphology as determining characteristics for developmental competence in bovine oocytes// Mol. Reprod. Dev.- 1995.- V.41.- P.54-62.

26. Boediono A., Takagi M., Saha S., Suzuki T. Influence of day-0 and day-7 superovulated cow serum during development of bovine oocyte in vitro// Reprod. Fertil. Dev.- 1994.- V.6.- P.261-264.

27. Carolan C., Lonergan P ., Van Langendonckt A., Mermillod P. Factors affecting bovine embryo development in synthetic oviduct fluid97following oocyte maturation and fertilization// Theriogenology.- 1995. -V.43. P.l 115-1128.

28. Cho W.U., Stern S., Biggers J.D. Inhibitory effect of dibutyryl с AMP on mouse oocyte maturation in vitro// J.exp.Zool.- 1974.- V.187.- P. 783-786.

29. Choi T.S., Mori M., Kohmoto K., Shoda Y. Benefical effect of serum on the fertilizability of mouse oocytes matured in vitro// J. Reprod. Fert.-1987.- V.79.- P.565-568.

30. Сгап D.G. Moor R.M., Hay M.F. Fine structure of the sheep oocytes during antral follicle development// J. Reprod. Fert.- 1980.- V.59.- P. 125132.

31. Cran D.G. Qualitative and quantitative structural changes during pig oocytes maturation// J. Reprod. Fert.- 1985. V.74.- P.237-245.

32. Crister E.S., Leibfried-Rutledge M.L., Eyestone W.H., Northy D.L., First N.L. Acquisition of developmental competence during maturation in vitro// Theriogenology.- 1986.- Y.5.- P.150.

33. Crosby J., Osborn J., Moor R. Changes in protein phosphorylation during the maturation of mammalian oocytes in vitro// J. exp. Zool.- 1984.-V.229.- P.459-466.

34. Cross P.C., Brinster R.L. In vitro development of mouse oocytes// Biol. Reprod.- 1970.- V.3.-P.298-307.

35. Cross P.C. The role of cumulus cells and serum in mouse maturation in vitro//J.Reprod. Fert.- 1973.- V.3.- P.298-307.

36. Dekel N., Beers W.H. Rat oocyte maturation in vitro: relief of cyclic AMP inhibition by gonadotropins// Proc. Nat. Acad.Sci. U.S.A.- 1978.- V.75.-P.4369-4373.

37. De Loos F., van Vliet C., van Maurik P., Kruip Th.A.M. Morphology of immature bovine oocytes// Gam. Res.- 1989.- V. 24. -P. 197-204.

38. Edwards R.G. Maturation in vitro of mouse, sheep, cow, pig, rhesus monkey and human ovarian oocytes// Nature.- 1965.- V.208.- P.349-351.98

39. Eppig J.J. Preimplantation embryonic development of spontaneous mouse parthenotes after oocytes meiotic maturation in vitro// Gam. Res.- 1981.-V.4.- P.3-13.

40. Eppig J.J., Downs S.M. Chemical signals that regulate mammalian oocyte maturation//Biol.Reprod. 1984.- V.30.-P.1-11.

41. Eppig J.J., Schroeder A.C. Culture systems for mammalian oocyte development: Progress and prospects// Theriogenology.- 1986,- V.25.- P. 97-106.

42. Fleming W.N., Saacke R.G. Fine structure of the bovine oocytes from the mature Graafian follicle// J. Reprod. Fert.- 1972.- V.29.-P.203-213.

43. Flynn T.J., Hillman N. The metabolism of exogenous fatty acids by preimplantation mouse embryos developing in vitro// J. Emb.Exp. M. -1980.- V.56.- P.157-168.

44. Frei R.E., Schultz G.A., Church R.B. Qualitative and quantitative changes in protein synthesis occur at the 8-16-cell stage of embryogenesis in the cow //J.Reprod.Fertil.- 1989.-V.86.- P.637-641.

45. Fujimori K., Nakamura R.M., Tonetta S.A., di Zerega G.S. Cessation of transition-phase follicle growth in the guinea pig by follicle-regulatory protein//Biol. Reprod. 1987.- V.37.- P.812-822.

46. Fukui Y., Fukushima M.,Terawaki Y., Ono H. Effects of gonadotropins, steroids and culture media on bovine oocyte maturation in vitro //Theriogenology.- 1982.- V.18.- P.161-175.

47. Fukui Y., Ono H. Effects of sera, hormones and granulosa cells added to culture medium for in vitro maturation, fertilization, cleavage and development of bovine oocytes// J. Reprod. Fertil.- 1989.- V.86.- P.501-506.

48. Fukushima M., Fukui Y. Effects of gonadotropins and steroids on the subsequent fertilizability of extrafolliclar bovine oocytes cultured in vitro// Anim. Reprod. Sci.- 1985.- V.9.- P.323-332.99

49. Funahashi H., Cantley T.C., Day B.N. Synchronization of meiosis in porcine oocytes by exposure to dibutyryl cyclic adenosine monophosphate improves developmental competence following in vitro fertilization// Biol. Reprod. 1997.- V.57.- P.49-53.

50. Gandolfi F., Luciano A.M., Modina S., Ponzini A., Pocar P., Armstrong D.T., Lauria A. The in vitro developmental competence of bovine oocytes can be related to the morphology of the ovary// Theriogenology. 1997.-V.48.- P.1153-1160.

51. Garratini S., Dimimmo G., DeGaetano G. Hemostasis, Prostaglandins and Renal Disease (eds Remuzzi G., Mecca G., DeGaetano G.).- N. Y. Raven Press.- 1980.- P.217-233.

52. Golbus M.S., Stein M.P. Qualitative patterns of protein synthesis in the mouse oocyte//J. exp. Zool.- 1976.- V.198.- P.337-342.

53. Gurr M.I., Harwood J.L. Lipid Biochemistry/ An Introduction. Chapman and Hall, London-New York-Tokio-Melburne-Madras.-1991.

54. Hamano S., Koikeda A. Developmental capacity of F1 Hybrid embryo by in vitro fertilization between different breeds of Japanese beef cattle// J. Reprod.Dev.- 1995. V.41.- P. 149-152.

55. Hawkins D.J., Brash A.R. Lipoxygenase metabolism of polyunsaturated fatty acid in oocytes of the frog Xenopus laevis// Archives of Biochemistry and Biophysics.- 1989.- V.268.- P.447-455.

56. Hodgen G.D. Ovarian function for multiple follicle maturation// Clin. Obstet. Gynecol.- 1986.- V.29.- P.127-140.

57. Homa S.T. Effects of cyclic AMP on the spontaneous meiotic maturation of cumulus-free bovine oocytes cultured in chemically defined medium// J.Exp.Zool 1988.- V.248.- P.222-231.

58. Нота S.T., Brown C.A. Changes in linoleic acid during follicular development and inhibition of spontaneous breakdown of germinal100vesicles in cumulus-free bovine oocytes// J. Reprod. Fertil.- 1992.-V.94.-P. 153-60.

59. Homa S.T., Racowsky C., McGaughey R.W. Lipid analysis of immature pig oocytes// J.Reprod.Fert. 1986. - V.77. - P. 425-434.

60. Hunter A.G., Moor R.M. Stage-dependent effects of inhibiting ribonucleic acids and protein synthesis on meiotic maturation of bovine oocytes in vitro // J. Dairy Sci.- 1987.- V.70.- P. 1646-1651.

61. Hyttel P., Xu K.P., Smith S., Greve T. Ultrastructure of in vitro oocyte maturation in cattle// J. Reprod. Fert. 1986.- V.78.- P.615-625.

62. Jacques H., Veerkamp O., Rene J.A. Paulssen. Fatty acid transport in muscle: The role of fatty acid binding proteins// Biochemical Society Transactions.- 1983.- V.15.- P.701-712.

63. Kalous J., Sutovsky P., Rimkevicova Z., Shioja Y., Lie B.L., Motlik J. Pig membrana granulosa cells prevent resumption of meiosis in cattle oocytes// Mol. Reprod. Dev.- 1993.- V.34.- P.58-64.

64. Kane M.T. Fatty acids as energy sources for culture of one-cell rabbit ova to viable morulae//Biol.Reprod. 1979. - V.20.- P.323-332.

65. Kane M.T., Headon D.R. The role of commercial bovine serum albumin preparations in the culture of one-cell rabbit embryos to blastocyst// J.Reprod.Fert. 1980. - V.60. - P.469-475.

66. Kastrop P.M.M., Bevers M.M., Destree O.H.J., Kruip T.A.M. Analysis of protein synthesis in morphologically classified bovine follicular oocytes101before and after maturation in vitro// Mol. Reprod. Dev.- 1990a.- V.26.-P.222-226.

67. Kastrop P.M.M., Bevers M.M., Destree O.H.J., Kruip Th.A.M. Changes in protein synthesis and phosphorylation patterns during bovine oocyte maturation in vitro// J. Reprod. Fert.-1990b.- V.90.- P.305-310.

68. Kastrop P.M., Bevers M.M., Destree O.H., Kruip T.A. Protein synthesis and phosphorylation patterns of bovine oocytes maturing in vivo// Mol. Reprod. Dev. -1991.- V.29.- P. 271-275.

69. Khandoker M.Y., Tsujii H., Karasawa D. Fatty acid analysis of oocytes, oviductal and uterine fluids of rabbit// Anim.Sci.Technol.(Jpn.). 1996. -V.67. -P.549-553.

70. Khandoker M.Y., Tsujii H., Karasawa D. Fatty acid compositions of oocytes, follicular, oviductal and uterine fluids of pig and cow// Asian-Australian J. Anim. Sci. 1997a. - V.10. - P.523-527.

71. Khandoker M.Y., Tsujii H., Karasawa D. Fatty acid composition of blood serum, oocytes, embryos and reproductive tract fluids of rat and comparison with BSA// Anim. Sci. Technol.(Jpn.). 1997b. - V.68. -P.1070-1074.

72. Kruip T.A.M., Cran D.G.,Van Beneden Т.Н., Dielemann S.J. Structural changes in bovine oocytes during final maturation in vivo// Gam. Res.-1983.-V.8.-P.29-47.

73. Kuyt J.R.M., Kruip T.A.M., De Jong-Brink M. Cytochemical localization of adenylate cyclase in bovine cumulus-oocyte complexes// Exp. Cell Res.-1988.- V.174.- P. 139-145.

74. Leibfried M.L, First N.L. Characterization of bovine follicular oocytes and their ability to mature in vitro//J. Anim. Sci.- 1979.-V.48.- P.76-86.

75. Leibfried-Rutledge M.L., Crister E.S., First N.L. Fertilization potential of follicular oocytes classified by stage of cycle and size of follicle// Theriogenology.- 1985.- V.23.-P.753-759.102

76. Leibfried-Rutledge M.L., Crister E.S., First N.L. Effects of fetal calf serum and bovine serum albumin on in vitro maturation and fertilization of bovine and hamster cumulus-oocyte complexes// Biol. Reprod.- 1986.-V.35.-P.850-857.

77. Leibfried-Rutledge M.L., Crister E.S., Eyestone W.H., Northey D.L., First N.L. Developmental potential of bovine oocytes matured in vitro or in vivo II Biol. Reprod.- 1987.- V.36.- P.376-383.

78. Lonergan P., Carolan C., Mermillod P. Development of bovine embryos in vitro following oocyte maturation under defined conditions// Reprod. Nutrit. Develop.- 1994.- V.34.- P.329-339.

79. Lu K.H., Gordon I., Gallagher M., McGovern H. Pregnancy established in cattle by transfer of embryos derived from in vitro fertilization of oocytes matured in vitro// Vet. Rec.- 1987.-V.121.- P.259-260.

80. Magnusson C., Hillensjo T. Inhibition of maturation and metabolism of rat oocytes by cyclic AMP// J.exp. Zool.- 1977.- V.201.- P. 138-147.

81. Malenko G.P. An improved method for preparing whole specimens from bovine preimplantation embryos: a technique note// Theriogenology. -1994.- V.41.- P.1207-1210.

82. Matorras R., Ruiz J.I., Mendoza R., Ruiz N., Sanjurjo P., Rodriduez-Escudero F.J. Fatty acid composition of fertilization-failed human oocytes// Hum. Reprod.- 1998.- V.13.- P.2227-30.

83. Mattioli M., Galeati G., Barboni В., Seren E. Concentration of cyclic AMP during the maturation of pig oocytes in vivo and in vitro// J. Reprod. Fert.- 1994.- V.100.- P.403-409.103

84. Meijer L., Maclouf J., Bryant R.W. Arachidonic acid metabolism in starfish oocytes// Devel. Biol.- 1986a.- У.114.- P.22-33.

85. Meijer L., Maclouf J., Bryant R.W. Contrasting effects of fatty acids on oocytes maturation in several starfish species// Prostagland., Leukotrien and Med.- 1986b.-Y.23.- P. 179-184.

86. Menezo Y., Testart J., Khatchadourian C., Frydman R. Human preovulatory follicular fluid: the lipids. Are they the trigger for capacitation? // Int.J.Fert.- 1984.- V.29.- P.61-64.

87. Menezo Y., Renard J.P., Delobel В., Pageaux J.F. Kinetic study of fatty acid composition of day 7 to day 14 cow embryos// Biol.Reprod. 1982. -V.26. - P. 787-790.

88. McGaughey R., Van Blerkom J. Patterns of polypeptide synthesis of porcine oocytes during maturation in vitro// Devel. Biol.- 1977.- V.56.-P.241-254.

89. Mikhaeljan H.G., Sirotkin A.V., Golubev A.K. The role of cAMP and Ca2+ dependent intracellular mechanisms in the regulation of bovine oocyte maturation in vitro// J. Reprod. Fert.- 1992.- Series 9.- abstr. 54.-P.50.

90. Moor R.M.,Tronson A.O. Hormonal and follicular factors affecting maturation of sheep oocytes in vitro and their subsequent developmental capacity// J. Reprod. Fert.- 1977.-V.49.- P.101-109.

91. Moor R.M., Smith M.W. Amino acid transport in mammalian oocytes// Exp. Cell Res.- 1979.- V.l 19.- P.333-341.

92. Moor R.M., Polge C., Willadsen S.M. Effect of follicular steroids on the maturation and fertilization of mammalian oocytes// J. Embryol. exp. Morph.- 1980.-V.56.- P. 319-335.

93. Moor R.M., Osborn J., Cran D. Selective effect of gonadotropins on cell coupling, nuclear maturation and protein synthesis in mammalian oocytes// J. Embryol. exp. Morphol.- 1981.- V.61.- P.347-365.104

94. Moor R.M., Crosby I.M. Protein requirements for germinal vesicle breakdown in ovine oocytes// J. Embryol. exp. Morph.-1986.- V.94.-P.207-220.

95. Motlik Y., Fulka Y. Breakdown of the germinal vesicle in pig oocytes in vivo and in vitro// J.exp.Zool.- 1976.- V.198.- P.155-162.

96. Nagyova E., Kalous J., Sutovsky P., Motlik J. Is cAMP decrease essential for resumption of meiosis in mouse oocytes?// Reprod. Nutr. Dev.- 1993.- V.33.- P.419-428.

97. Necola N.W., Moore-Smith D. Failure of gonadotropins to induce in vitro maturation of mouse oocytes treated with dibutyrylic cyclic AMP// J.exp. Zool.- 1975.- V.194.-P.529-534.

98. Newcomb R., Christie W.B., Rowson L.E.A. Birth of calves, after in vivo fertilization of oocytes removed from follicles and matured in vitro// Yet. Rec.-1978.- Y. 102.-P.461 -462.

99. Noble R.C., Shand J.H., Drummond J.T., Moore J.H. "Protected" polyunsaturated fatty acid in the diet of the ewe and the essential fatty acid status ofthe neonatal lamb//J.Nutr.-1978.- V.108.- P.1868-1876.

100. Parrish J.J., Susko-Parrish J.L., First N.L. Effect of heparin and chondroitin sulfate on the acrosome reaction and fertility of bovine sperm in vitro//Theriogenology.- 1985.- V. 24,- P. 237-249.

101. Pinyopummintr Т., Bavister B.D. Development of bovine embryos in a cell-free culture medium: effects of type of serum , timing of its inclusion and heat-inactivation//Theriogenology. -1994.- V.41.-P. 1241-1249.

102. Racowsky C. Androgenic modulation of cyclic adenosine monophosphate (cAMP)-dependent meiotic arrest// Biol. Reprod. -1983.-V.28.- P.774-787.

103. Rettori V., Van Sickle M., Steinberger A., Asch R.H. Follicle stimulating hormone binding inhibiting activity and inhibin properties of human ovarian cystic and porcine follicular fluid// Acta Eur. Fertil.- 1984.- V.15.-P.93-97.

104. Reuven R. Mechanisms involved in follicular rupture in the rat/ Horm. Contr. Hypothalamo-Pituitary-Gonadal Axis// Proc. 11th Annu. Meet. Int. Found Biochem. Endocrinol., Rehovot, 2-7 Oct., 1983. New York-London.- 1984.- P.337-353.

105. Rice C., McGaughey R.W. Effect of testosterone and dibutyryl cAMP on the spontaneous maturation of pig oocytes// J. Reprod. Fert.- 1981.- V.62.-P. 245-256.

106. Rodman Т., Bachvarova R. RNA synthesis in preovulatory mouse oocytes// J. Cell Biol.- 1976.- V. 70.- P.251-257.

107. Rorie R.W., Lester T.D., Miller et al. Effect of protein source and co-culture on bovine embryo development in synthetic oviductal fluid medium// Theriogenology.- 1994. V.42. - P. 385-395.106

108. Saeki К., Hoshi M., Leibfried-Rutledge M.L., First N.L. In vitro fertilization and development of bovine oocytes matured in serum-free medium//Biol. Reprod.- 1991.- V.44.- P.256-260.

109. Saeki K., Leibfried-Rutledge M.L., First N.L. Are fetal calf serum and hormones necessary during in vitro maturation of cattle oocytes for subsequent development?// Theriogenology.- 1990,- V.33.- P.316.

110. Sanbuissho A., Threlfall W.R. The influence of serum and gonadotropins on in vitro maturation and fertilization of bovine oocytes// Theriogenology.- 1990.- V.34.- P.341-348.

111. Sanbuissho A., Threlfall W.R. The effect of serum and gonadotropins on bovine oocyte maturation in vitro// Theriogenology-1988.-V.29.-abstr.301.

112. Sanbuissho A., Threlfall W.R. The effect of estrous cow serum on the maturation and fertilization of bovine follicular oocytes in vitro// Theriogenology.-1985.- V.23.- P.226.

113. Sata R., Tsujii H., Abe H., Yamashita S., Hoshi H. Fatty acid composition of bovine embryos cultured in serum-free and serum-containing medium during early embryonic development// J. Reprod. Dev. 1999.-V.45.-P.97-103.

114. Schellander K., Fuhrer F., Brackett B.G., Korb H., Schleger W. In vitro fertilization and cleavage of bovine oocytes matured in medium supplemented with estrous cow serum// Theriogenology. 1990. - V.33.-P.477-485.

115. Schroeder A.C., Eppig J.J. The developmental capacity of mouse oocyte that matured spontaneously in vitro is normal// Dev. Biol.- 1984.- V.102.-P.493-97.

116. Schultz R.M., Wasserman P.M. Biochemical studies of mammalian oogenesis: protein synthesis during oocyte growth and meiotic maturation in the mouse// J. Cell Sci.- 1977.- V. 24.- P.167-194.107

117. Schultz R.M., Letourneau G.E., Wassarman P.M. Meiotic maturation of mouse oocytes in vitro: protein synthesis in nucleate and enucleate oocytes fragments//J. Cell Sci.- 1978.- V.30.- P.251-264.

118. Schultz R.M., Wassarman P.M. Specific changes in the pattern in protein synthesis during meiotic maturation of mammalian oocytes in vitro// Proc. Nat. Acad. Sci. USA.- 1977.-V.74.- P.538-541.

119. Schultz R.M., Montgomery R.R., Belanoff J.R. Regulation of mouse oocyte meiotic maturation: implication of a decrease in oocyte с AMP and protein dephosphorylation in commitment to resume meiosis// Dev. Biol.-1983 a.- V.97.- P.264-273.

120. Schultz R.M., Montgomery R.R., Ward-Bailey P.F., Eppig J.J. Regulation of oocyte maturation in the mouse: possible roles of intercellular communication, cAMP and testosterone// Dev. Biol.- 1983b.- V.95.-P.294-304.

121. Setty B.N.Y., Ramaiah T.R. Effect of phostaglandins and inhibitors of phostaglandin biosynthesis on oviposition in the Silkmoth Bombyx mori L. // Ind.J.Exp. Biol.- 1980.- V.18.-P.539-541.

122. Shalgi R., Dekel N., Kraicer P.F. The effect of LH on the fertilizability and developmental capacity of rat oocytes matured in vitro// J. Reprod. Fertil.-1979.- V.55.- P.429-435.

123. Shiigi S.M., Mishell R.M. Sera and the in vitro induction of immune responses. I. Bacterial contamination and the generation of good fetal bovine sera// J. Immunol.- 1975.- V.l 15.- P.741-744.

124. Sirard M.A., Bilodeau S. Granulosa cells inhibit the resumption of meiosis in bovine oocytes in vitro// Biol. Reprod. 1990.- V.43.- P.777-783.

125. Sirard M.A., First N.L. In vitro inhibition of oocyte nuclear maturation in the bovine// Biol. Reprod.- 1988.- V.39.- P.229-234.108

126. Sirard M.A.,Florman H.M., Leibfried-Rutledge M.L., Barnes F.L., Sims M.L., First N.L. Timing of nuclear progression and protein synthesis necessary for meiotic maturation of bovine oocytes// Biol. Reprod.- 1989.-V.40.- P.1257-1263.

127. Smith L.C., Olivera-Angel M.,Groome N.P. et al. Oocyte quality in small antral follicles in the presense or absense of a large dominant follicles in cattle// J. Reprod. Fert.- 1996.- V.106.- P. 193-199.

128. Spector A.A. Fatty acid binding to plasma albumin// Rev. J. Lipid Res.-1975.-V.16.- P. 165-179.

129. Staigmiller R.B., Moor R.M. Effect of follicle cells on the maturation and developmental competence of ovine oocytes matured outside the follicle//Gam. Res.- 1984.- V.9.- P.221-229.

130. Stanley-Samuelson D.W., Dadd R.H. Long-chain polyunsaturated fatty acid: patterns of occurence in insects// Insect. Biochem.- 1983. V.13.-P.549-558.

131. Stern S., Wassarman P.M. Meiotic maturation of the mammalian oocyte in vitro: Effect of dibutyryl cyclic AMP on protein synthesis// J. Exp. Zool.- 1974.- V.189.- P.275-281.

132. Sun F.Z.,Moor R.M. Nuclear cytoplasm interactions during ovine oocyte maturation// J. Reprod. Fert.- 1988.- Abstr.Ser.- V.L- abstr.9.

133. Suss H., Wuthrich K., Stransinger J.G. Chromosome configurations and time sequence of the first meiotic division in bovine oocytes matured in vitro// Biol. Reprod.- 1988.- V.38.- P.871-880.

134. Takagi Y., Mori K., Tomizawa M., Takahashi Т., Sugawara S., Masaki J. Development of bovine oocytes matured, fertilized and cultured in a serum-free, chemically defined medium// Theriogenology.- 1991.-V.35.-P. 1197-1207.

135. Tarkowski A.K. An air-drying method for chromosome preparation from mouse eggs//Cytogenetics. 1966.-V.5.-P.394-400.109

136. Tervit H.R., Whittingham D., Rowson 1. Successful culture in vitro of sheep and cattle ova// J. Reprod. Fertil.- 1972.- V.30.- P.493-497.

137. Thibault Ch. Final stages of mammalian oocytes maturation/ Oogenesis (eds J.Biggers, A. Schultz)- Baltimor.- 1972.- P. 397-411.

138. Tornell J., Hillensjo T. Effect of cyclic AMP on the isolated human oocyte-cumulus complex//Hum. Reprod.- 1993.- V.8.- 737-739.

139. Van Blerkom J., McGaughey R.W. Molecular differentiation of the rabbit ovum during oocyte maturation in vivo and in vitro// Dev. Biol.-1978.-V.63.-P. 139-150.

140. Van Blerkom J. Protein synthesis during oogenesis and early embryogenesis in the mammals/ Biology of Fertilization (eds A. Monroy, C.Metz.) N.Y.- 1983.- P.289-320.

141. Wang G., Tsujii H., Khandoker M.Y. Fatty acid compositions of mouse embryo, oviduct and uterine fluid// Anim. Sci.Technol. (Jpn.).- 1998-V.69. P.923-928.

142. Warnes G.M., Moor R.M., Johnson M.H. Changes in protein synthesis during maturation of sheep oocytes in vivo and in vitro// J. Reprod. Fert.-1977.- V.49.-P.331-335.

143. Wassarman P.M., Letourneau G. RNA synthesis in fully-grown mouse oocytes//Nature.- 1976a.- V.261.-P.73-74.

144. Wassarman P.M., Letourneau G. Meiotic maturation of mouse oocytes in vitro: association of newly synthesized proteins with condensing chromosomes// J. Cell Sci.- 1976b.- V.20.- P.549-568.110

145. Wassarman P.W., Schultz R., Letourneau G. Protein synthesis during meiotic maturation of mouse oocytes in vitro. Synthesis and phosphorylation of a protein localized in the germinal vesicle// Dev. Biol.-1978.- V. 69.-P.94-107.

146. Westholf G., Westholf K.F., Ahmad N., diZerega G.S. Alteration of follicular steroid secretion and thecal morphology after in vitro exposure of individual pig follicles to follicle regulatory protein// J. Reprod. Fert.-1989.- V.87.- P.133-140.

147. Xu K.P., Greve Т., Smith S., Hyttel P. Chronological changes of bovine follicular oocytes maturation in vitro// Acta Vet. Scand.- 1986.-V.27.-P.505-519.

148. Yang Z., Miron P., Gu Z., Cortvrindt R., Smith J., Van Steirteghem A., Goff A. Changes in protein synthesis during in vitro maturation of human and bovine oocytes// Hum. Reprod. 1997.- V.12.- Abstract Book 1.-P.15.

149. Yoshioka K., Othman A.M., Tamiguchi T. et al. Differential pattern of blastulation in bovine morulae cultured in synthetic oviduct fluid medium containing FCS or BSA// Theriogenology.- 1997.- V.48- P. 997-1006.

150. Younis A.I., Brackett B.G., Fayrer-Hosken R.A. Influence of serum and hormones on bovine oocyte maturation and fertilization in vitro// Gam. Res.- 1989.- V.23.- P. 189-201.

151. Zhang X., Armstrong D.T. Fertilization of rat oocytes is enhanced by FSH during in vitro maturation of oocyte-cumulus complexces// Theriogenology.- 1989.- V.31.- abstr. 277.

152. Выражаю благодарность моему научному руководителю Рябых Владимиру Павловичу за предложенную тему и руководство при выполнении настоящей работы.

153. Выражаю благодарность кандидату биологических наук Лысову Александру Викторовичу за оказание большого содействия в проведении исследовательской части работы.

154. Благодарю за консультации и советы, оказанные во время написания диссертации, кандидата биологических наук Журавлеву Нину Ильиничну.