Влияние микрогравитации на межклеточное взаимодействие иммунокомпетентных клеток человека с клетками-мишенями (К-562) in vitro тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.32, кандидат биологических наук Григорьева, Ольга Владимировна

• Григорьева, Ольга Владимировна
• кандидат биологических наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Григорьева, Ольга Владимировна

Список сокращений

Введение

Глава 1. Обзор литературы. ■

1.1. Влияние факторов космического полета на иммунный статус 11 человека.

1.2. Влияние микрогравитации на состояние 20 иммунокомпетентных клеток in vitro.

1.3. Воздействие клиностатирования как модели эффектов 30 микрогравитации in vitro на иммунные клетки.

1.4. Особенности функционирования лимфоцитов - 35 естественных киллеров.

Глава 2. Материалы и методы исследования.

2.1. Приготовление среды и суспензий клеток.

2.2. Описание укладки «Фибробласт-1».

2.3. Предполетное снаряжение укладки «Фибробласт-1» 57 биологическими пробами.

2.4. Снаряжение укладки «Фибробласт-1 М».

2.5. Определение цитотоксической активности лимфоцитов - 60 естественных киллеров.

2.6. Изучение субпопуляционного состава и жизнеспособности 61 суспензии клеток (проточная цитофлуориметрия).

2.7. Определение уровня интерлейкинов в среде 63 культивирования (ELISA)

2.8. Моделирование эффектов микрогравитации методом 64 клиностатирования.

2.9. Статистическая обработка результатов.

Глава 3. Результаты и обсуждение.

3.1. Модификация метода изучения цитотоксической активности 66 лимфоцитов - естественных киллеров применительно к условиям космического полета.

3.2. Анализ субпопуляционного состава используемых культур 72 лимфоцитов человека.

3.3. Разработка схемы полетного эксперимента и укладки 76 «Фибробласт-1».

3.4. Результаты полетных экспериментов «Межклеточное 81 взаимодействие», проведенных на борту Международной космической станции (МКС-7 - МКС-12).

3.5. Изучение цитотоксической активности лимфоцитов - 93 естественных киллеров in vitro при наземном моделировании эффектов микрогравитации методом клиностатирования.

3.6. Изучение продукции интерлейкинов суспензией 96 лимфоцитов в условиях измененной гравитации.

3.7. Индивидуальные особенности цитотоксической активности 99 лимфоцитов человека.

3.8. Стимуляция цитотоксической активности интерлейкином-2 102 в наземных модельных экспериментах.

3.9. Изучение цитотоксической активности лимфоцитов 106 человека в рамках программы KUBIK Европейского космического агентства (эксперимент NKA).

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние микрогравитации на межклеточное взаимодействие иммунокомпетентных клеток человека с клетками-мишенями (К-562) in vitro»

В результате проведенных многолетних исследований на космических кораблях и орбитальных станциях было установлено, что космические полеты оказывают существенное влияние на функциональное состояние всех систем организма человека [Газенко О.Г., 1984; Григорьев А.И., 2001; Moore D., Bie Р. et al., 1996]. В том числе, в этих условиях и система иммунитета подвергается воздействию факторов, негативно сказывающихся на резистентности организма человека к различным инфекционным агентам [Константинова И.В., 1988; Мешков Д.О., 2001; Konstantinova I.V., Fuchs В.В., 1991; Sonnenfeld G., Shearer W.T., 2002]. Исследование иммунной системы космонавтов после завершения полетов различной продолжительности выявило ряд изменений функциональных свойств и количества иммунокомпетентных клеток. Так, воздействие микрогравитации проявлялось качественными и количественными сдвигами в популяциях клеток белой крови, включая нейтрофилию, эозинопению и лимфоцитопению [Taylor G.R., Dardano J.R., 1983; Cogoli A., Tschopp P., 1985; Kaur I., Simons E.R. et al., 2004; Stowe R.P., Sams C.F. et al., 1999].

Наиболее существенным изменениям в условиях космического полета подвергается клеточный иммунитет человека, ответственность за который несут Т-лимфоциты, осуществляющие прямой контакт с чужеродными антигенами и разрушающие их. Исследования, проведенные после длительных космических полетов, позволили выявить ряд закономерностей в изменениях Т-системы иммунитета [Константинова И.В., 1988; Kimzey S.L., 1977; Konstantinova I.V., Sonnenfeld G. et al., 1991]. Было, в частности, показано, что воздействие факторов космического полета приводит к снижению митоген-индуцированной пролиферативной активности лимфоцитов (ФГА-реактивности) - одного из основных показателей функционального состояния Т-клеток. У части космонавтов отмечали также снижение количества этих клеток в периферической крови

Константинова И.В., 1972; Leach C.L., Rambaut P.C., 1974; Kimzey S.L., 1977; Taylor G.R., 1993]. Эксперименты in vitro подтвердили, что микрогравитация может сама по себе изменять функциональный статус Т-клеток, нарушая проведение сигнала и ремоделируя цитоскелет [Lewis M.L., Reynolds J.L. et al., 1991; Cogoli A., Bechler В., 1993].

B-клеточная система иммунитета, играющая ключевую роль в развитии гуморального иммунного ответа и вырабатывающая антитела -специфические белки (иммуноглобулины), способные обезвреживать возбудителей инфекционных заболеваний и их токсины, после длительных полетов претерпевала наименьшие изменения под воздействием условий микрогравитации. Об этом свидетельствовало отсутствие почти во всех случаях изменений суммарного содержания в крови популяции В-лимфоцитов [Konstantinova I.A., Fuchs В.В., 1991].

Снижение цитотоксической активности лимфоцитов - естественных киллеров было показано многими исследователями как после длительных космических полетов, так и после кратковременных экспедиций [Vorobyov Ye.I., Gazenko O.G. et al., 1983; Konstantinova I.V., Sonnenfeld G. et al., 1991; Konstantinova I.V., Rykova M.P. et al., 1993; Mehta S. K., Kaur I. et al., 2001]. Отмечена высокая степень вариабельности данного показателя у различных космонавтов (астронавтов), однако тенденция к снижению была явно выражена после завершения космического полета. Анализ системы естественных киллеров позволил установить, что в результате воздействия факторов космического полета угнетаются такие функции, как способность распознавать и образовывать конъюгаты с клетками-мишенями, способность к повторным взаимодействиям с чужеродными клетками, а также интегральная цитотоксическая активность популяции естественных киллеров [Константинова И.В., 1988; Мешков Д.О., 1989; Лесняк А.Т., Рыкова М.П. и др., 1998]. Такие изменения могут явиться пусковым фактором не только для развития злокачественных новообразований, но и заболеваний инфекционной, в первую очередь, вирусной природы у космонавтов, как во время космического полета, так и после его завершения, поскольку лимфоциты - естественные киллеры (ЕК) являются первой линией обороны против инфекционных агентов и трансформированных клеток [Herberman R.B., Ortaldo J.R., 1981]. Лимфоциты данной субпопуляции распознают и убивают некоторые опухолевые клетки и клетки, инфицированные вирусом, а также соматические клетки при нарушении их цитодифференцировки без предварительной сенсибилизации.

Основу механизма взаимодействия лимфоцитов - естественных киллеров с клетками-мишенями, согласно современным представлениям, составляет распознавание "потерявших себя клеток", под которыми подразумеваются клеточные мишени с нарушениями структуры или экспрессии классических и неклассических молекул главного комплекса гистосовместимости I класса (МНС-1) [Ljunggren H.G., Karre К., 1990; Trinchieri G., 1994; Yokoyama W.M., 2002]. Было установлено, что названные молекулы вступают во взаимодействие с особыми рецепторами, присутствующими на мембране ЕК и определяющими как подавление, так и активацию эффекторных функций этих клеток [Warren H.S., Campbell A.J. et al., 2001; Ying H.Y., Shen X. et al., 2000]. В результате возникает баланс активирующих и ингибирующих сигналов, следствием которого является функциональное состояние ЕК в каждый конкретный момент.

Однако, несмотря на интенсивно проводимые исследования системы естественной цитотоксичности, многие механизмы ее иммунорягуляторных и цитотоксических эффектов остаются во многом неясными. Исследование влияния микрогравитации на лимфоциты - естественные киллеры in vitro позволяет приблизиться к более глубокому пониманию процессов взаимодействия этих иммунокомпетентных клеток с клетками-мишенями и выяснению механизмов изменений в системе иммунитета, регистрируемых после космического полета.

Цель работы:

Исследование влияния микрогравитации на межклеточное взаимодействие лимфоцитов человека и клеток-мишеней in vitro.

Основные задачи исследования:

1. Разработать метод и бортовую укладку для определения цитотоксической активности лимфоцитов - естественных киллеров периферической крови человека применительно к условиям космического полета на борту Международной космической станции.

2. Определить влияние микрогравитации на цитотоксичность лимфоцитов - естественных киллеров in vitro при совместном культивировании с клетками К-562.

3. Исследовать влияние клиностатирования на взаимодействие лимфоцитов - естественных киллеров с клетками-мишенями.

4. Изучить продукцию цитокинов суспензией иммунокомпетентных клеток при взаимодействии с клетками линии К-562 в условиях измененной гравитации.

5. Разработать бортовую укладку для оценки влияния биологически активных веществ (в частности, IL-2) на межклеточные взаимодействия культуры лимфоцитов человека и культуры клеток линии К-562 в условиях космического полета.

Научная новизна работы.

Впервые проведено изучение цитотоксической активности изолированных лимфоцитов - естественных киллеров периферической крови человека in vitro в условиях космического полета на борту Международной космической станции. Показано, что микрогравитация не подавляет межклеточные взаимодействия лимфоцитов и клеток-мишеней, в качестве которых использовалась суспензионная линия человеческих эритролейкемических лимфобластоидных клеток К-562.

Полученные результаты анализа синтеза цитокинов изолированными иммунокомпетентными клетками, экспонированными в условиях микрогравитации, при совместном культивировании с клетками-мишенями показали, что условия микрогравитации оказывают разнонаправленное действие на изменение уровня цитокинов (TNF-a, IL-la, IL-2, IL-4, IL-6) у различных доноров.

Практическая и научная значимость работы.

Проведенные исследования позволили разработать новый подход к исследованию роли регуляторных стимулов в функционировании иммунокомпетентных клеток in vitro в условиях микрогравитации. Результаты работы дополняют теоретические представления о влиянии условий микрогравитации на межклеточные взаимодействия лимфоцитов-естественных киллеров и клеток мишеней линии К-562. Полученные данные позволяют обосновать методологические подходы к исследованию состояния противовирусного иммунитета космонавтов непосредственно во время космического полета, что является основанием для разработки средств медицинского контроля на различных этапах длительных экспедиций.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. В результате лабораторных испытаний и проведенных полетных экспериментов показана возможность использования и эффективность применения модифицированного метода изучения цитотоксической активности лимфоцитов - естественных киллеров in vitro и разработанной укладки («Фибробласт-1») для проведения исследований межклеточного взаимодействия в условиях космического полета.

2. В условиях микрогравитации функциональная активность лимфоцитов - естественных киллеров, выражающаяся в способности к цитолизу клеток-мишеней при совместном культивировании в течение 24 часов и продукции ряда цитокинов, не угнетается, более того, наблюдается тенденция к увеличению цитотоксической активности in vitro в условиях реального космического полета.

3. Выявлены широкие индивидуальные различия в профиле продукции цитокинов суспензией лимфоцитов in vitro различных доноров, а также в степени активации цитотоксической активности при клиностатировании и в условиях микрогравитации (от 2,5% до 171,7%).

Апробация работы и публикации.

Основные результаты и положения работы были доложены и опубликованы в материалах III и IV Конференции молодых ученых, специалистов, аспирантов и студентов, посвященных дню космонавтики (Москва, 2004, 2005); 6-ой международной научно-практической конференции «Пилотируемые полеты в космос» (Звездный городок, 2005); 13-ой конференции «Космическая биология и авиакосмическая медицина» (Москва, 2006); 55th International Astronautical Congress (Канада, Ванкувер, 2004); International Society of Gravitational Physiology (ISGP) Joint Life Science Conference (Германия, Кельн, 2005); Science on European Soyuz Mission to the International Space Station (2001-2005) ESA Conference (Испания, Толедо, 2006).

По теме диссертации опубликовано 9 научных работ, в том числе 3 статьи в журналах. Диссертация апробирована на заседании секции Ученого совета ГНЦ РФ - ИМБП РАН «Космическая физиология и биология» (протокол №9 от 7 сентября 2007 г.)

Заключение диссертации по теме «Авиационная, космическая и морская медицина», Григорьева, Ольга Владимировна

выводы

1. Разработана методика и специальная укладка («Фибробласт-1») для изучения цитотоксической активности лимфоцитов - естественных киллеров in vitro в условиях реального космического полета с использованием культуры лимфоцитов человека и опухолевых миелобластов линии К-562.

2. Лимфоциты ЕК, выделенные из периферической крови человека, сохраняли способность распознавать и контактировать с клетками-мишенями (миелобласты линии К-562) в суспензии во время инкубации в условиях микрогравитации и реализовать свой цитотоксический эффект при взаимодействии с высокоспецифическими клетками-мишенями.

3. В условиях микрогравитации показана четкая тенденция к повышению цитотоксичности ЕК клеток человека при их инкубации in vitro с клетками К-562. Выявленные отличия в степени активации лимфоцитов доноров могут зависеть от исходных потенциальных возможностей клеток - естественных киллеров и индивидуальных особенностей донора.

4. При моделировании условий микрогравитации методом клиностатирования показано сходное увеличение цитотоксического индекса лимфоцитов по сравнению с контрольными пробами, которое было менее выражено по сравнению с результатами, полученными в космическом полете.

5. Изучение продукции цитокинов суспензией лимфоцитов человека показало, что условия микрогравитации оказывают неоднозначное влияние на изменение уровня цитокинов (TNF-a, IL-la, IL-2, IL-4, IL-6) у различных доноров.

6. Эксперименты, проведенные в условиях микрогравитации с применением lg-контроля на борту МКС в рамках программы KUBIK (ESA), по изучению цитотоксической активности лимфоцитов - естественных киллеров in vitro подтвердили полученные ранее данные о том, что микрогравитация не ингибирует функциональную активность ЕК лимфоцитов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В экспериментах проведенных в условиях космического полета, а также при обследовании космонавтов и астронавтов до и после экспедиций различной продолжительности, было показано угнетение функций иммунной системы человека, в том числе изменение количества и функции нейтрофилов, снижение цитотоксической активности NK-клеток, изменение продукции цитокинов (снижение синтеза интерлейкина-2 и интерферона-у), изменение фенотипа мононуклеаров периферической крови, изменение (снижение) пролиферации лимфоцитов, снижение реакции лимфоцитов в ответ на митогенный стимул, уменьшение количества лимфоцитов, уменьшение количества эозинофилов, изменение субпопуляционного состава суспензии лимфоцитов [Константинова И.В., 1988; Мешков Д.О., 1989; Лесняк А.Т., Рыкова М.П. и др., 1998; Taylor G.R., Dardano J.R., 1983; Cogoli A., Tschopp P., 1985; Kaur I., Simons E.R. et al., 2004; Stowe R.P., Sams C.F. et al., 1999]. Однако в условиях целостного организма трудно выявить влияние непосредственно фактора микрогравитации на функционирование иммунной системы, так как все наблюдаемые изменения могут быть опосредованы многоуровневой регуляцией, как нервной, так и гуморальной. Так стресс во время взлета и посадки, изоляция и другие стресс-индуцирующие факторы во время космического полета могут вызывать некоторые из этих эффектов. Стресс-гормоны, например, такие как кортизол, который повышается во время полета [Ларина И.М., 2001], как известно, влияют на продукцию гуморальных иммунных факторов и популяцию иммунных клеток, включая моноциты и лимфоциты.

Таким образом, для анализа механизмов клеточных эффектов исследования in vitro представляются перспективным направлением, так как позволяют выявить непосредственные эффекты воздействия микрогравитации на иммунные клетки, в частности, на лимфоциты человека. На иммунокомпетентных клетках in vitro также было показано негативное влияние микрогравитации на жизнеспособность клеток: увеличивалось количество апоптотических клеток по сравнению с наземным контролем [Lewis M.L., Reynolds J.L. et al., 1998], а также на проведение сигнала и организацию цитоскелета [Cogoli-Greuter М. et al., 1994; Schmitt D. A., Hatton J. P., 1996; Lewis M.L., Cubano L.A., 2001]. В результате проведенных нами исследований было показано, что сам по себе фактор микрогравитации не оказывал угнетающего влияния на функцию лимфоцитов - естественных киллеров и на продукцию цитокинов суспензией лимфоцитов in vitro. Кроме того, в эксперименте NKA, проведенном в рамках программы KUBIK (ESA) с использованием lg-контроля на борту МКС были подтверждены полученные ранее в серии экспериментов «Межклеточное взаимодействие» данные о том, что микрогравитации не снижает функциональной активности одной из важных субпопуляций лимфоцитов, являющихся важными факторами противовирусной и противоопухолевой защиты, особенно на ранних этапах иммунных процессов.

Более того, в наших исследованиях была выявлена тенденция к повышению цитотоксической активности лимфоцитов - естественных киллеров, выделенных из периферической крови здоровых доноров, против клеток-мишеней линии К-562. Величина этой активности не зависела от базальной цитотоксической активности и от количества ЕК лимфоцитов в популяции иммунокомпетентных клеток. Можно предположить, что продукция цитокинов в условиях микрогравитации не влияет на данный процесс, так как не было выявлено корреляции между содержанием цитокинов в среде культивации после взаимодействия и эффектом активации цитотоксической активности в условиях космического полета.

Исследование цитотоксической активности изолированных лимфоцитов крови человека при совместном культивировании с культурой клеток линии К-562 в присутствии биологически активных веществ с использованием укладки «Фибробласт-1М», вероятно, позволит перейти к более глубокому пониманию некоторых процессов, лежащих в основе межклеточных контактов в условиях невесомости. Также целесообразно было бы использование методов молекулярной биологии для уточнения механизмов данного процесса на молекулярном уровне, например, изучение в условиях микрогравитации тирозинкиназной активности.

Так как известно, что линия К-562 с ее чрезвычайно выраженной чувствительностью к литическому действию ЕК является МНС-1-негативной и, следовательно, не может быть источником ингибиторных сигналов [Ье ВоШеШег Р., Вагакопу1 А. & а!., 2002], соответственно единственным вариантом для увеличения цитотоксической активности является усиление активирующих сигналов, которые запускаются с участием тирозинкиназы 8ук. Механизм реализации этого эффекта непрямой, он связан со структурой иммунорецепторного тирозинсодержащего активирующего участка, включенного в состав гликолипидобогащенного мембранного комплекса, что приводит, в конечном счете, к росту тирозинкиназной активности на внутренней стороне мембраны и, как следствие, к мобилизации кальция, продукции эйкозаноидов и транскрипции генов, ведающих синтезом цитокинов [ТотасеНо Е., 01сезе Ь. е1 а!., 1998; СИепутзИ Н. е1 а1.,

2000].

Еще одна возможность, по которой цитотоксический индекс может увеличиваться в условиях микрогравитации, - это чисто «механическая» теория. Вероятно, что в условиях космического полета, а также при постоянном изменении вектора гравитации (клиностатировании) клетки не оседают под влиянием гравитации, а постоянно находятся во взвешенном состоянии, за счет чего облегчается процесс контакта лимфоцита -естественного киллера с клеткой-мишенью. Косвенным подтверждением этого является тот факт, что в проведенных нами исследованиях с использованием динамического контроля (шейкера), было обнаружено повышение цитотоксической активности сопоставимое с увеличением данного показателя при клиностатировании. В обоих случаях имело место постоянное перемешивание среды, что, вероятно, облегчает процесс распознавания клеток-мишеней лимфоцитами и установление межклеточных контактов при данном соотношении эффектор : мишень (10:1).

Представляет безусловный интерес возможность сопоставления результатов, полученных при исследовании лимфоцитов здорового человека в различных экспериментах, проведенных в течение трех лет. Было обнаружено, что высокая вариабельность функциональной организации системы естественной цитотоксичности человека проявляется не только на половом, возрастном и популяционных уровнях [Чекнев С.Б., 1998; 2004], но также показана на уровне отдельного индивидуума. При этом анализ субпопуляционного состава лимфоцитов на протяжении трех лет, дважды в год показал стабильность в соотношении популяций лимфоцитов у данного донора. Однако выявленная высокая изменчивость активности естественных киллеров служит проявлением действия механизмов, поддерживающих выраженную пластичность популяции ЕК, связанную с филогенетически закрепленным полиморфизмом рецепторных структур этих клеток, и обеспечивающих высокие компенсаторные возможности.

Созданная на базе укладки «Фибробласт-1» модифицированная укладка «Фибробласт-1М», предназначенная для изучения влияния биологически активных веществ, в частности, интерлейкина-2 на межклеточные взаимодействия культуры лимфоцитов человека и перевиваемой суспензионной культуры клеток линии К-562 в условиях микрогравитации, не только сохраняет все преимущества ранее разработанной модели, но и предоставляет дополнительные удобства для использования. Применение данной укладки в экспериментах в условиях реального космического полета позволит более детально изучить воздействие микрогравитации на контактное взаимодействие ЕК с клетками-мишенями в суспензионных клеточных культурах.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Григорьева, Ольга Владимировна, 2007 год

1. Антипов В.В., Григорьев А.И., К. Лич Хантун. Космическая биология и медицина. // Наука. 1997.

2. Бережная Н.М. Интерлейкины и формирование иммунологического ответа при злокачественном росте. // Аллергология и иммунология. -2000.-Том 1. №1 -С.45-61.

3. Буравкова Л.Б., Романов Ю.А. и др., 2005.

4. Газенко О.Г. Человек в космосе. // Космическая биология и авиакосмическая медицина. 1984. - Том 18. №1. - С. 3-8.

5. Григорьев А.И., Бугров С.А. Егоров А.Д., 1990.

6. Григорьев А.И., Космическая биология и медицина. Орбитальная станция «Мир». Москва. 2001. - 660 с.

7. Давтян Т.К. Аванесян Л.А. О взаимоотношении иммунного и адаптивного ответов. // Успехи современной биологии. 2001. - Том 121. №3.-С. 275-286.

8. Игнатьева Г.А. Иммунная система и патология. // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 1997. - №2. - С. 26-38.

9. Игнатьева Г.А. Современные представления об иммунитете (контуры общей теории). // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 2003. - №2. - С. 2-7.

10. Ильин В.К., Воложин А.И., Виха Г.В. Колонизационная резистентность организма в измененных условиях обитания. Москав. Наука. 2005. -273с.

11. Кашкин К.П. Цитокины иммунной системы: основные свойства и иммунобиологическая активность (лекция). // Клиническая лабораторная диагностика. 1998. -№11. - С. 21-32.

12. Ковальчук Л.В., Ганковская Л.В., Рубакова Э.И. Система цитокинов. Москва. 1999 -78 с.

13. Константинова И.В. Исследование некоторых сторон иммунного ответа при действии экстремальных факторов, присущих космическому полету

14. Цитохимия иммуногенеза в ординарных и экстремальных условиях. М. Медицина. 1973. - С. 100-250.

15. Константинова И.В. Космические полеты человека и иммунная система: Кратковременные полеты. // Иммунная система в экстремальных условиях. Космическая иммунология. М. Наука. 1988. - С.104-124.15. Константинова И.В., 1972.

16. Константинова И.В., Антропова E.H. Иммунологическая реактивность организма при обитании в герметичных помещениях. // Проблемы космической биологии. 1980. - Том 42. - С. 191-213.

17. Константинова И.В., Антропова E.H., Зажирей В.М., Легоньков В.И. Изучение реактивности лимфоидных клеток у членов экипажей космических кораблей «Союз-6», «Союз-7», «Союз-8» до и после полета. // Космическая биология и медицина. 1973. - №6. - С. 35-40.

18. Константинова И.В., Антропова E.H., Рыкова М.П. и др. Клеточный и гуморальный иммунитет у космонавтов при действии факторов космического полета. // Вестн.АМН СССР. 1985. - №8. - С. 52-58.

19. Ларина И.М. Гормональная регуляция. В кн. Орбитальная станция «Мир». Космическая биология и медицина. 2001. Том. 1. - С. 603-606.

20. Лесняк А.Т., Рыкова М.П., Мешков Д.О., Антропова E.H., Митирев Г.Ю., Воротникова И.Е., Константинова И.В. Клеточный иммунитет человека и космический полет. // Авиакосмическая и экологическая медицина. 1998. - Том 32. №1. - С. 29-35.

21. Ляшенко A.A., Уваров В.Ю. К вопросу о систематизации цитокинов. // Успехи современной биологии. 2001. - Том 121. №6. - С. 589-603.

22. Манских В.Н. Натуральные киллеры отдельный класс иммунокомпетентных клеток или совокупность функциональных популяций. // Иммунология. - 2006. - №1. - С. 56-57.

23. Медуницын Н.В. Цитокины и аллергия. // Иммунология. 1999. - №5. -С. 5-9.

24. Мешков Д.О. Влияние факторов космического полета на иммунитет. // Авиакосмическая и экологическая медицина. 2001. - Том 35. №2. - С. 14-21.

25. Мешков Д.О. Влияние факторов космического полета на эффекторные механизмы естественной цитотоксичности. Автореферат диссертации .канд. мед. наук. Москва. 1990.

26. Пальцев М.А., Иванов A.A. Межклеточные взаимодействия. Москва. Медицина. 1995. - 224 с.

27. Петров Р.В. Иммунология. Москва. Медицина. 1987. - 368 с.

28. Пол У.Е. Иммунология. В 3 т. Москва. Мир. 1987.

29. Рыкова М.П. Влияние факторов космического полета на функциональную активность лимфоцитов нормальных киллеров. Автореферат диссертации.канд. мед. наук. Москва. - 1984.

30. Рыкова М.П., Антропова E.H., Мешков Д.О. Иммунологическое обследование. В кн. Орбитальная станция «Мир». Космическая биология и медицина. -2001. Том. 1. С. 615-618.

31. Рязанцева Н.В., Новицкий В.В., Белоконь В.В., Зима А.П., Жукова О.Б., Наследникова И.О., Литвинова JT.C., Колобовникова Ю.В., Часовских Н.Ю. Цитокины и противовирусный иммунитет. // Успехи Физиологических наук. 2006. - Том 37.№4. - С.34-44.

32. Семененя И.Н. Естественные киллерные клетки (ЕКК) как звено в иммунной системе человека. // Иммунология. 1991. - №4. - С.4-6.

33. Сепиашвили Р.И., Балмасова И.П. Естественные киллеры и биогенные амины: паракринная регуляция в иммунной системе. // Российскийфизиологический журнал им. Сеченова. 2005. - Том 91. №8. - С. 927941.

34. Сепиашвили Р.И., Балмасова И.П. Естественные киллеры и их рецепторы, специфичные к МНС-1. // Иммунология. 2006. - №1. - С. 46-51.

35. Сепиашвили Р.И., Балмасова И.П. Физиология естественных киллеров. Москва.-2005.-с.

36. Таирбеков М.Г. Гравитационная биология клетки (теория и эксперимент). Москва. 1997. - 128 с.

37. Таирбеков М.Г. Молекулярные и клеточные основы гравитационной чувствительности. Москва. 2002. - 104 с.

38. Тейлор Г.Р., Дардано Д.Р. Клеточная иммунореактивность у человека после космического полета. // Космическая биология и авиакосмическая медицина, 1984.-№1.-С. 74-80.

39. Фрейдлин И.С. Паракринные и аутокринные механизмы цитокиновой иммунорегуляции. // Иммунология. -2001. № 5. - С. 4-7.

40. Фукс Б.Б., Константинова И.В. Цитохимия иммуногенеза в ординарных и экстремальных условиях. М. Медицина. 1973. - С. 170-189.

41. Хаитов P.M. Физиология иммунной системы. Москва. ВИНИТИ РАН. 2001, С.

42. Хаитов P.M., Пинегин Б.В. Оценка иммунного статуса человека в норме и при патологии. // Иммунология. 2001. - №4. - С. 4-6.

43. Чекнев С.Б. Вариабельность активности естественных киллеров в динамике иммунотерапии. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.-2004.-Том 137. №2.-С. 194-197.

44. Чекнев С.Б., Горожанина Е.С. Изменение протекания цитотоксической реакции в результате взаимодействия на клетку-мишень. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2005. - Том 139. №3. - С. 325-329.

45. Ярилин А.А. Гомеостатические процессы в иммунной системе. Контроль численности лимфоцитов. // Иммунология 2004. - №5. - С. 312-320.

46. Ярилин А.А. Основы иммунологии. Москва. Медицина. 1999. - С.

47. Ярилин А.А. Система цитокинов и принципы ее функционирования в норме и патологии. // Иммунология. 1997. - № 5. - С. 7-14.

48. Bakos A., Varkonyi A., Minarovits J., Batkai L. Production of cytokines by human PBMCs in simulated micrograviry. // Journal Gravit Physiology. -2005.-Vol. 12. №1.-P. 163-164.

49. Bechler В., Cogoli A., Cogoli-Greuter M., Muller O., Hunzinger E., Criswell S.B. Activation of microcarrier-attached lymphocytes in microgravity. // Biotech. Bioeng. 1992. - Vol. 40. - P. 991-996.

50. Bonavida В., Wright S.C. Role of natural killer cell cytotoxic factors in the mechanism of target-cell killing by natural killer cells. // Journal Clin. Immunology. 1986. - Vol. 6. - P. 1-8.

51. Carson W.E., Fehniger T.A., Caligiuri M.A. CD56 bright natural killer cell subsets: characterization of distinct functional responses to interleukin-2 and the c-kit ligand // European Journal of Immunology. 1997. - Vol. 27. - P. 354-360.

52. Cogoli A. Gravitational physiology of human immune cells: A review of in vivo, ex vivo and in vitro studies. // Journal Gravitational Physiology. 1996. -Vol. 3. № l.-P. 1-9.

53. Cogoli A. The effect of hypogravity and hypergravity on cells of immune system. // Journal of Leukocyte Biology. 1993. - Vol. 54. - P. 259-268.

54. Cogoli A., Bechler В., Cogoli-Greuter M., Criswell S.B., Joller H., Hunzinger E., Muller O. Mitogenic signal transduction in T lymphocytes in microgravity. // Journal of Leukocyte Biology. 1993. - Vol. 53. - P. 569-575.

55. Cogoli A., Tschopp A. Lymphocyte reactivity during spaceflight. // Immunology Today. 1985. - Vol. 6, № 1. - P. 1-4.

56. Cogoli A., Valluchi-Morf M., Muller M., Briegleb W. The effect of hypogravity on human lymphocyte activation. // Aviation Space and Environmental Medicine. 1980. - Vol. 51. - P. 29-34.

57. Cogoli-Greuter M., Galleri G., Meloni M.A., Liuzzo M.I., Cogoli A., Pippia P. A quantitative analisis of human monocytes motility in modelled low gravity conditions. // Journal Gravit Physiology, Vol. 12, No 1, 2005, P. 243244.

58. Cogoli-Greuter M., Lovis P., Vadrucci S. Signal transduction in T cells. An overview. // Journal Gravit Physiology. 2004. - Vol. 11. № 2. - P. 53-56.

59. Cooper D., Pellis N. R. Suppressed PHA activation of T lymphocytes in simulated microgravity is restored by direct activation of protein kinase C. // Journal of Leukocyte Biology. 1998. - Vol. 63. - P. 550-562.

60. Cooper M.A., Fehniger T.A., Turner S.C. et al. Human natural killer cells: a unique innate immunoregulatory role for the CD56 (bright) subset // Blood. — 2001.-Vol. 97.-P. 3146-3151.

61. Crucian B. E., Cubbage M. L., Sams C. F. Altered cytokine production by specific human peripheral blood cell subsets immediately following space flight. // Journal of Interferon and Cytokine Research. 2000. - Vol. 20. P. 547-556.

62. Dohring C, Colonna M. Human natural killer cell inhibitory receptors bind to HLA class I molecules // European Journal of Immunology. 1996. - Vol. 26. -P. 365-369.

63. Hashemi B.B., Penkala J.E., Vens C., Hüls H., Cubbage M., Sams C. F. T cell activation responses are differentially regulated during clinorotation and in spaceflight. // The FASEB Journal. 1999. - Vol. 13. - P. 2071-2082.

64. Hata K, Zhang X.R., Iwatsuki S., Van Thiel D.H., Herberman R.B., Whiteside T.L. Isolation, phenotyping, and functional analysis of lymphocytes from human liver. // Clinical Immunology and Immunopathology. 1990. -Vol. 56. №3.-P. 401-419.

65. Hauser T.A., Malyguine A.M., Dawson J. R. Conformation dependence of MHC class I in the modulation of target cell sensitivity to natural killing // Human Immunology. 1998. - Vol. 59. - P. 71-76.

66. Herberman R.B., Ortaldo J.R. Natural killer cells: their roles in defenses against disease. // Science. 1981. - Vol. 214. №2. - P. 24-30.

67. Hercend D.T., Schmidt R.E. Characteristics and used of natural killer cells. // Immunology Today. 1988. - Vol. 9. - P.291-293.

68. Jacobs R., Hintzen G., Kemper A. et al. CD56bright cells differ in their KIR repertoire and cytotoxic features from CD56dim NK cells // European Journal of Immunology. 2001. - Vol. 31. - P. 3121 -3127.

69. Kaur I., Simons E. R., Castro V. A., Ott C. M., Piersonc D. L. Changes in neutrophil functions in astronauts. // Brain, Behavior, and Immunity. 2004. -Vol. 18.-P. 443-450.

70. Kimzey S.L. Hematology and immunology studies. // Biomedical Results from Skylab. Washington. NASA. 1977. - P.249-282.

71. Kogure T., Fujinaga H., Niizawa A. et al. Killer-cell inhibitory receptors, CD158a/b, are upregulated by interleukin-2, but not interferon-gamma or interleukin-4 // Mediators of Inflammation. 1999. - Vol. 8. - P. 313-318.

72. Konstantinova I.V. Immune resistance of man in space flight. // Acta Astronáutica. 1991.-Vol. 23.-P. 123-127.

73. Konstantinova I.V., Fuchs B.B. The immune system in space and other extreme conditions. // Harwood Acad. Publ. 1991. - P. 112-144.

74. Konstantinova I.V., Rykova M.P., Lesnyak A.T. Antropova E.A. Immune changes during long-duration mission. // Journal of Leukocyte Biology. -1993.-Vol. 54.-P. 189-201.

75. Konstantinova I.V., Sonnenfeld G., Lesnyak A.T. et al. Cellular immunity and lymphokine production during spaceflights. // Physiologist. 1991. - Vol. 34.№1. - P. S52-S56.

76. Lanier L.L., Corliss B., Wu J., Phillips J.H. Association of DAP 12 with activating CD94/NKG2C NK cell receptors // Immunity. 1998. - Vol. 8. -P. 693-701.

77. Leach C.L., Rambaut P.C. Biomedical responses of the Skylab crewmen. // Proc. Skylab Life Sciences Symposium. 1974. - P. 1-4.

78. Lewis M.L., Cubano L.A., Zhao B., Dinh H.-K., Pabalan J. G., Piepmeier E. H., Bowman P. D. cDNA microarray reveals altered cytoskeletal gene expression in space-flown leukemic T lymphocytes (Jurkat). // The FASEB Journal.-2001.-Vol. 15.-P. 1783-1785.

79. Lewis M.L., Reynolds J. L., Cubano L.A., Hatton J. P., Lawless B. D., Piepmeier E. H. Spaceflight alters microtubules and increases apoptosis inhuman lymphocytes (Jurkat). // The FASEB Journal. 1998. - Vol. 12. - P. 1007-1018.

80. Lewis M.L., Reynolds J.L. et al., 1991.

81. Licato L. L., Grimm E. A. Multiple interleukin-2 signaling pathways differentially regulated by microgravity. // Immunopharmacology. 1999. -Vol. 44. - P. 273-279.

82. Limouse M., Manie S., Konstantinova I.V., Ferrua B., Schaffar L. Inhibition of phorbol-ester-induced cell activation in microgravity. // Experimental Cell Research. 1991,-Vol. 197.-P. 82-86.

83. Lindberg J., Martin-Fontecha A., Hoglund P. Natural killing of MHC class I(-) lymphoblasts by NK cells from long-term bone marrow culture requires effector cell expression of Ly49 receptors // International Immunology. -1999.-Vol. 11.-P. 1239-1246.

84. Ljunggren H.G., Kane K. In search of the "missing self. MHC molecules and NK cell recognition // Immunology. Today. — 1990. Vol. 11. - P. 237-244.

85. Lopez-Botet M., Bellon T., Llano M. et al. Paired inhibitory and triggering NK cell receptors for HLA class I molecules. // Human Immunology. 2000. -Vol. 61.-P. 7-17.

86. Lowin-Kropf B., Held W. Positive impact of inhibitory Ly49 receptor-MHC class I interaction on NK cell development // Journal of Immunology. 2000. -Vol. 165.-P. 91-95.

87. Makrigiannis A.P., Anderson S.K. Regulation of natural killer cell function. // Cancer Biol. Therapy. 2003. - Vol. 2. - P. 610-616.

88. Mehta S. K., Kaur I., Grimm E. A., Smid C., Feeback D. L., Pierson D. L. Decreased non-MHC-restricted (CD56+) killer cell cytotoxicity afterspaceflight. // Journal of Applied Physiology. 2001. - Vol. 91. - P. 18141818.

89. Meloni M.A., Galleri G., Camboni M.G., Pippia P., Cogoli A., Cogoli-Greuter M. Modeled microgravity affects motility and cytoskeletal structures. // Journal Gravit Physiology. 2004. - Vol. 11. №2. - P. 197-198.

90. Menier C, Riteau B., Carosella E. D., Rouas-Freiss N. MICA triggering signal for NK cell tumor lysis is counteracted by HLA-Gl-mediated inhibitory signal // International Journal of Cancer. 2002. - Vol. 100. - P. 63-70.

91. Meshkov D.O., Rykova M.P. The natural cytotoxity in cosmonauts on board space stations. // Acta Astonaut. 1995. - Vol. 36. - P. 719-726.

92. Mills P. J., Meek J. V., Waters W. W., D'Aunno D., Ziegler M. G. Peripheral Leukocyte Subpopulations and Catecholamine Levels in Astronauts as a Function of Mission Duration. // Psychosomatic Medicine. 2001. - Vol. 63. -P. 886-890.

93. Mognato M., Celotti L. Modeled microgravity affects cell survival and HPRT mutant frequency, but not the expression of DNA repair genes in human lymphocytes irradiated with ionising radiation. // Mutation Research. 2005. -Vol. 578.-P. 417-429.

94. Moore D., Bie P., Oser H. Biological and medical research in space. Springer. -1996.-P.

95. Natarajan K., Dimasi N., Wang J. et al. Structure and function of natural killer cell receptors: multiple molecular solutions to self, nonself discrimination // Annual Review of Immunology. 2002. - Vol. 20. - P. 853-885.

96. Perussia B. Lymphokine-activated killer cells, natural killer cells and cytokines. // Curr. Opin. Immunology. 1999. - Vol. 3. - P49-55.

97. Risin D., Pellis N.R. Modeled microgravity inhibits apoptosis in peripheral blood lymphocytes. // In vitro Cellular and Developmental Biology. 2001. -Vol. 37.-P. 66-72.

98. Riteau B., Rouas-Freiss N. Menier C. et al. HLA-G2, -G3, and -G4 isoforms expressed as nonmature cell surface glycoproteins inhibit NK and antigen specific CTL cytolysis // Journal of Immunology. 2001. - Vol. 166. - P. 5018-5026.

99. Roitt I., Brostoff J., Male D. Immunology. London, 1996.

100. Schmitt D. A., Hatton J. P., Emond C., Chaput D., Paris H., Levade T., Cazenave J.-P., Schaffar L. The distribution of protein kinase C in human leukocytes is altered in microgravity. // The FASEB Journal. 1996. - Vol. 10.-P. 1627-1634.

101. Schwarzenberg M., Cossu G., Cogoli-Greuter M., Meloni M.A., Pippia P., Cogoli A. Gravitational effects on the response to different stimulatory signals in T cells. // Journal Gravit Physiology. 2000. - Vol. 7. № 2. - P. 9-11

102. Semov A., Semova N., Lacelle Ch., Marcotte R., Petroulakis E., Proestou G., Wang E. Alterations in TNF- and IL-related gene expression in space-flown WI38 human fibroblasts. // The FASEB Journal. 2002.

103. Sinkovics J.G., Horvath J.C. Human natural killer cells: A comprehensive review. // International Journal of Oncology. 2005. - Vol. 27. - P. 5-47.

104. Sonnenfeld G. The immune system in space and microgravity. // Medicine & Science in Sports & Exercise. 2002. - Vol. 34. №. 12. - P. 2021-2027.

105. Sonnenfeld G., Butel J.S., Shearer W.T. Effects of the space flight environment on the immune system. // Reviews on Environmental Health. -2003.-Vol. 18.№1. P. 1-17.

106. Sonnenfeld G., Mandel A.D., Konstantinova I.V., Berry W.D., Taylor G.R., Lesnyak A.T., Fuchs B.B., Rakhmilevich A.L. Space flight alters immune cell function and distribution. // Journal of Applied. Physiology. 1992. - Vol. 73. -P. 191-195.

107. Sonnenfeld G., Shearer W. T. Immune Function during Space Flight. // Nutrition. 2002. - Vol. 18.№10 - P. 899-903.

108. Stowe R.P., Sams C.F., Mehta S.K., Kaur I., Jones M.L., Feeback D.L., Pierson D.L. Leukocyte subsets and neutrophil function after short-term spaceflight. // Journal of Leukocyte Biology. 1999. - Vol. 65. - P. 179-186.

109. Sundaresan A., Risin D., Pellis N. R. Modeled microgravity-induced protein kinase C isoform expression in human lymphocytes. // Journal of Applied. Physiology. 2004. - Vol. 96. - P. 2028-2033.

110. Taylor G.R. Immune changes during short-duration missions. // Journal of Leukocyte Biology. 1993. - Vol. 54. №3. - P. 202-208.

111. Taylor G.R., Dardano J.R. Human cellular immune responsiveness following space flight. // Aviation, Space, and Environmental Medicine. 1983. - Vol. 57.-P. S55-S59.

112. Taylor G.R., Konstantinova I.V., Sonnenfeld G., Jennings R. Changes in the immune system during and after spaceflight. // Advances in Space Biology and Medicine. 1997. - Vol. 6. - P. 1-32.

113. Taylor G.R., Neale L.S., Dardano J.R. Immunological analisis of US space shuttle crew memders. // Aviation, Space, and Environmental Medicine. -1986.-Vol. 57.-P. 213-217.

114. Tomacello E., Olcese L., Vely F. et al. Gene structure, expression pattern, and biological activity of mouse killer cell activating receptor-associated protein (KARAP)/DAP-12 // The Journal of Biological Chemistry. 1998. - Vol. 273.-P. 115-119.

115. Trapani J.A., Smyth M.J. Functional significance of the perforin/granzyme cell death pathway. // Nature Reviews Immunology. 2002. - Vol. 2. - P. 735-747.

116. Trinchieri G. Biology of natural killer cells // Adv. Immunology. 1994. -Vol. 47.-P. 187-376.

117. Vadrucci S., Lovis P., Henggeler D., Lambers B., Cogoli A. Effects of vector-averaged gravity on the response to different stimulatory signals in T-cells. // Journal Gravit Physiology. 2005. - Vol. 12. №1.-P. 177-178.

118. Vales-Gomez M., Reyburn H., Strominger J. Molecular analyses of the interactions between human NK receptors and their HLA ligands // Human Immunology. 2000. - Vol. 61. - P. 28—38.

119. Vorobyov Ye.I., Gazenko O.G., Genin A.M., Yegorov A.D. Medical results of Salyu-6 manned space flights. // Aviation, Space, and Environmental Medicine. 1983. - Vol. 54. - P. S31-S40.

120. Wagtmann N., Rajagopalan S., Winter C.C. et al. Killer cell inhibitory receptors specific for HLA-C and HLA-B identified by direct binding and by functional transfer // Immunity. 1995. - Vol. 3. - P. 801-809.

121. Walther I., Pippia P., Meloni M. A., Turrini F., Mannu F., Cogoli A. Simulated microgravity inhibits the genetic expression of interleukin-2 and its receptor in mitogen-activated T lymphocytes. // FEBS Letters. 1998. - Vol. 436.-P. 115-118.

122. Warren H. S. NK cell proliferation and inflammation. // Immunology and Cell Biology. 1996. - Vol. 74. - P. 473-480.

123. Warren H. S., Campbell A. J., Waldron J. C, Lanier L. L. Biphasic response of NK cells expressing both activating and inhibitory killer Ig-like receptors // International Immunology. 2001. - Vol. 13. - P. 1043-1052.

124. Whiteside T.L., Herberman R.B. Role of Human Natural Killer Cells in Health and Disease. // Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. -1994.-Vol. l.№2.-P. 125-133.

125. Whiteside T.L., Herberman R.B. The Biology of Human Natural Killer Cells. //Ann. Ital. Inst. Health. 1990. - Vol. 26. -P.335-348.

126. Wu J., Cherwinski H., Spies T. et al. DAP10 and DAP12 from distinct, but functionally cooperative, receptor complexes in natural killer cells // The Journal of Experimental Medicine. 2000. - Vol. 192. - P. 1059-1068.

127. Ying H.Y., Shen X., Ding R.R. Research progress in natural killer cell receptors // Sheng Li Ke Xue Jin Zhan. 2000. - Vol. 31. - P. 25-29.

128. Yokoyama W.M. The search for the missing "missing-self' receptor on natural killer cells. // Scandinavian Journal of Immunology. 2002. - Vol. 55. -P.233-237.