Влияние гуминовых кислот на устойчивость растений и микроорганизмов к воздействию тяжелых металлов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.27, кандидат биологических наук Семенов, Андрей Александрович

• Семенов, Андрей Александрович
• кандидат биологических наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Семенов, Андрей Александрович

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. Металл-гумусовые взаимодействия и природа биологического действия гуминовых кислот.

1.1. Взаимодействие ионов тяжелых металлов с гумусовыми кислотами

1.2. Устойчивость металл-гумусовых комплексов.

1.3. Функции гуминовых веществ в биосфере.

1.4. Биологическое действие гуминовых веществ.

1.5. Основные гипотезы природы биологического действия гуминовых веществ.

1.6. Детоксицирующие свойства гумусовых кислот по отношению к живым организмам, подвергнутым воздействию тяжелых металлов.

1.7. Использование биологических объектов в тестировании.

ГЛАВА 2. Объекты и методы.

2.1. Выделение и характеристика гуминовых кислот и препаратов гуматов

1.1. Источники, методы выделения и очистки гуминовых кислот.

1.2. Элементный состав гуминовых веществ.

1.3. Электронные спектры поглощения гуминовых веществ.

1.4. Инфракрасные спектры гуминовых веществ.

1.5. Молекулярно-массовые распределения гуминовых веществ.

1.6. Кислотно-основные свойства и содержание функциональных групп в гуминовых веществах.

2.1.7. Металл-гумусовые взаимодействия.

2.1.7.1. Потенциометрическое титрование гуминовых веществ с использованием ион-селективных электродов.

2.1.7.2. Определение констант устойчивости и максимальной емкости связывания гуминовых веществ с ионам Си" и Cd".

2.2. Биотестирование гуминовых кислот.

2.2.1. Эксперименты на культуре клеток дрожжей Saccharamyces cerevesiaeA

2.2.2. Эксперименты на семенах кресс-салата Lepidium sativum сорта "Дукат"

ГЛАВА 3. Результаты и обсуждение.

3.1. Характеристика гуминовых кислот и препаратов гуматов.

3.1.1. Элементный состав гуминовых веществ.

3.1.2. Электронные спектры поглощения гуминовых веществ.

3.1.3. Инфракрасные спектры гуминовых веществ.

3.1.4. Молекулярно-массовые распределения гуминовых веществ.

3.1.5. Кислотно-основные свойства и содержание функциональных групп в гуминовых веществах.

3.1.6. Величины констант устойчивости и максимальной емкости связывания гуминовых кислот с ионам Си и Cd

3.2. Биотестирование гуминовых кислот.

3.2.1. Биологическое действие ГК на дрожжи Saccharomyces cerevisiae

3.2.2. Детоксицирующие действие гуминовых кислот по отношению к ионам кадмия Cd (II).

3.2.3. Детоксицирующие действие гуминовых кислот на дрожжи, подвергнутые воздействию ионов меди Си (II).

3.2.4. Биологическое и детоксицирующее действия ГК на проростки кресссалата Lepidium sativum, подвергнутого действию тяжелых металлов.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние гуминовых кислот на устойчивость растений и микроорганизмов к воздействию тяжелых металлов»

Биологическая активность гуминовых кислот (ГК) интенсивно изучается в течение длительного времени. Многочисленные исследования позволяют констатировать наличие положительного отклика живых организмов на присутствие малых доз ГК в окружающей среде (Христева, 1951; Кононова, 1963; Александрова, 1972; Орлов, 1993; Горовая и др. 1995; Чуков, 2001; Попов, 2004; Куликова, 2008). В отличие от пестицидов и агрохимикатов гумусовые вещества являются естественными, жизненно необходимыми компонентами почвы, выполняющими в ней разнообразные функции (Орлов, 1993). Это сделало их крайне привлекательными для использования в различных отраслях народного хозяйства. Однако такие сложные по химическому строению вещества как ГК не могут не обладать двояким эффектом и оказывают в определенных условиях и негативное воздействие на живые организмы (КиНкоуа et а1., 2005).

В настоящее время на рынок поступает большое количество препаратов гуматов, для получения которых используются разные технологии и виды сырья. Ведется активная реклама и пропаганда их использования, однако до настоящего времени остается открытым вопрос о критериях оценки их качества и биологической активности. Использование только физико-химических методов для их характеристики не дает комплексную оценку этих сложных объектов. Поэтому в настоящее время остается актуальным вопрос о критериях контроля биологической активности гуматов и разработке методик биологического тестирования препаратов ГК. Вероятно, одним из первых шагов в решении этой проблемы является сравнительное исследование различных коммерческих препаратов гуматов и гуминовых кислот почв в аналогичных экспериментальных условиях, проводимых на одинаковых тест-объектах. Этот подход был использован рядом авторов (Жилин, 1998; Перминова, 2000), и предложен ряд способов оценки детоксицирующих свойств гуминовых веществ по отношению к экотоксикантам. Однако область использования предложенных критериев ограничена, и требуются дальнейшие исследования в этой области.

Настоящая работа посвящена исследованию протекторных свойств гуминовых кислот, выделенных из различных коммерческих образцов гуматов и почв, по отношению к ионам меди и кадмия, ингибирующих рост живых организмов.

Цель работы: исследование способности гуминовых кислот, выделенных из коммерческих препаратов гуматов и почв, снижать токсическое действие ионов меди и кадмия на живые организмы: проростки кресс-салата (Lepidium sativum) и дрожжи {Saccharomyces cerevisiae).

Задачи:

1. Исследовать химический состав и свойства гуминовых кислот, выделенных из коммерческих препаратов гуматов и почв.

2. Изучить реакции комплексообразования гуминовых веществ с ионами меди и кадмия.

3. Исследовать биологическое действие гуминовых кислот на тест-культуры: проростки кресс-салата {Lepidium sativum) и дрожжи ()Saccharomyces cerevisiae).

4. Исследовать действие ионов меди и кадмия на проростки кресс-салата {Lepidium sativum) и дрожжи {Saccharomyces cerevisiae).

5. Оценить эффективность протекторного действия гуминовых кислот на проростки кресс-салата {Lepidium sativum) и дрожжи {Saccharomyces cerevisiae), подвергнутые воздействию ионов меди и кадмия.

Научная новизна работы. Исследована взаимосвязь химического состава гуминовых препаратов, выделенных из различных источников, с их биологическим действием и детоксицирующей способностью на тест-культуры: проростки кресс-салата (Lepidium sativum) и дрожжи (Saccharomyces cerevisiae), подвергнутые действию ионов меди и кадмия. Исследование протекторных свойств гуминовых кислот показало, что ГК, имеющие более высокие показатели максимальной емкости связывания металлов и стимулирующего действия, обладают более эффективными детоксицирующими свойствами. Эти свойства ГК проявляются в тех случаях, когда в комплексы с ГК связываются более 20% свободных ионов металла от исходного содержания в растворе.

Практическая значимость работы. Полученные данные можно использовать для увеличения эффективности применения различных типов гуминовых препаратов в промышленном и декоративном растениеводстве, биотехнологических процессах, рекультивации сельскохозяйственных земель и городских территорий, загрязненных тяжелыми металлами, а также для разработки систем контроля и мониторинга качества коммерческих гуминовых препаратов.

Апробация работы. Материалы диссертации были доложены на конференции студентов и аспирантов по фундаментальным наукам «Ломоносов-2009», на заседаниях кафедры химии почв.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 3 печатные работы, в том числе 1 в реферируемом журнале ВАК.

Заключение диссертации по теме «Почвоведение», Семенов, Андрей Александрович

выводы

1. Исследованные гуминовые вещества различаются по ряду химических показателей: элементному составу; содержанию функциональных групп; молекулярно-массовому распределению и оптическим свойствам.

2. Исследование комплексообразования гуминовых кислот с ионами меди и кадмия показало, что константы устойчивости комплексов меди на 2-3 порядка выше аналогичных величин для кадмия, а параметры максимальной

2+ емкости связывания ионов металлов ГК лежат в интервале 50-100 мг (Me )/г ГК.

3. Установлено, что ГК в концентрации 5 мг/л стимулируют рост дрожжей Saccharomyces cerevisiae, для проростов кресс-салата Lepidium sativum эта концентрация составляет 10 мг/л, при более высоких концентрациях ГК начинают проявлять ингибирующие свойства. Наибольшим стимулирующим эффектом обладают гуминовые кислоты, выделенные из чернозема, торфа и угля (ГКУ).

4. Исследование роста дрожжей Saccharomyces cerevisiae и проростов кресс-салата Lepidium sativum в присутствии ионов меди и кадмия показало, что ионы меди оказывают больший токсический эффект во всем диапазоне исследованных концентраций.

5. Исследование протекторных свойств гуминовых кислот в оптимуме биологического действия (5-10 мг ГК/л) показало, что гуминовые кислоты могут защищать дрожжи Saccharomyces cerevisiae и кресс-салат Lepidium sativum при концентрации ионов кадмия и меди в растворе 0,1-5 мг/л, когда в комплексы с ГК связываются 20 - 100% ионов металла от исходного содержания в растворе.

6. Препараты гуминовых кислот, имеющие более высокие показатели максимальной емкости связывания металлов и стимулирующего действия, обладают более эффективными детоксицирующими свойствами, что может быть использовано для оценки сравнительной эффективности коммерческих препаратов.

Благодарности

Автор выражает благодарность за помощь и поддержку доктору биологических наук, профессору С.Я. Трофимову,сотруднику Института экологического почвоведения МГУ к.б.н. В.В.Демину, а также сотрудникам кафедры химии почв ф-та почвоведения МГУ д.б.н. Т.А. Соколовой, к.б.н. Ю.А. Завгородней, к.б.н. М.С. Розановой, а также аспирантам кафедры биологии почв A.B. Якушеву и В.В. Тихонову.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Суммируя полученные данные по биологическому действию гуминовых кислот на тест-культуры: проростки кресс-салата (Lepidium sativum) и дрожжи {Saccharomyces cerevisiae), можно отметить, что оптимум положительного действия этих биополимеров находится в области концентраций 5 мг ГК/л для клеток дрожжей и 10 мг ГК/л для кресс-салата. В данной концентрации ГК оказывают детоксицирующее действие в отношении изученных тест-объектов, подвергнутых действию ионов Си2+ и Cd" (в концентрации 0,1 - 1 мг/л), за счет совместного вклада стимулирующего и деактивирующего эффекта. При более высоких концентрациях металлов в растворе (5 — 10 мг/л) детоксикация может происходить только при высокой концентрации ГК, когда на первый план выходит их способность связывать ионы металлов в нетоксичные соединения.

В исследовании детоксицирующего действия гуминовых кислот были использованы 2 разных типа тест-объектов: высшие растения (проростки кресс-салата) и эукариотные микроорганизмы (дрожжи). Обнаруженные закономерности в биологическом действии ГК оказались сходны для изученных объектов. Вероятно, это может происходить в силу того, что клеточные стенки любого живого организма включают органические соединения, в состав которых входят О- и N-содержащие полярные группировки, а также различные гидрофобные фрагменты. Реакции ГК с такими соединениями могут протекать неспецифично за счет водородных связей и гидрофобных взаимодействий, и, следовательно, общие закономерности должны соблюдаться для различных типов живых организмов.

Следовательно, использованный подход к биотестированию гуминовых препаратов, учитывающий одновременно как физиологическое действие гуминовых веществ, так и их способность деактивировать токсиканты, можно распространить на более широкий круг тест-объектов. Данный подход, на наш взгляд, целесообразно использовать и при разработке технологий применения промышленных гуматов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Семенов, Андрей Александрович, 2009 год

1. Александрова И. В. О физиологической активности гумусовых веществ и продуктов метаболизма микроорганизмов // Органическое вещество целинных и освоенных почв М.: Наука, 1972. - С.30-69

2. Алёшин С.Н., Тюнеева Т.Н. О питании растений молекулярными органическими соединениями почвы // Изв. Тимирязев, с.-х. акад. 1956 Вып.2(12)

3. Альберте Б., Брей Д., Льюис Дж. Молекулярная биология клетки. М.: Мир, 1987.-Т.5.-231 с.

4. Аляутдинова Р.Х., Гагарин С.Г., Екатеринина JI.H. Корреляция физиологической активности и физико-химических свойств гуминовых препаратов//Химия твердого топлива, 1991, №3, с. 16-21

5. Антипов-Каратаев И.Н., Цюрупа И.Г. О формах и условиях миграции веществ в почвенном профиле: (обзор иностранной литературы)//Почвоведение. 1961, N 8, с. 1-12.

6. Б амбалов H.H., Лукошко Е.С. Состав и свойства гуминовых кислот начального периода торфообразования // Химия твердого топлива, 1988, №5, с.3-7

7. Баталкин Г.А., Галушко A.M., Махно Л.Ю., Христева Л.А. О природе действующего начала физиологически активных гуминовых кислот. // Тр. Междунар. симпоз. IV и II Комис. МТО «Торф, его свойства и перспективы применения». Минск, 1982. С. 115-117.

8. Бобырь Л.Ф. Влияние физиологически активных гумусовых веществ на фотосинтетические процессы у растений; Автореф. Дис. канд. биол. наук. -Кишинев, 1984. 24 с.

9. Варшал Г.М., Велюханова Т.К., Кощеева И.Я. Геохимическая роль гумусовых кислот в миграции элементов. В кн.: Гуминовые вещества в биосфере. -М.: Наука, 1993. С.97-117.

10. Вахмистров Д.Б., Зверкова O.A., Дебец Е.Ю., Мишустина Н.Е. Гуминовые кислоты: Связь между поверхностной активностью и стимуляцией роста растений // Докл. АН СССР. 1987, Т.293, №5. - С.1277-1280.

11. Гаузе Г.Ф. Борьба за существование. М.: Изд-во РХД, 2002. — 159 с.

12. Гедройц К.К. Избранные научные труды.- М. Наука, 1975. -640 с.

13. Горбатов B.C. Трансформация соединений и состояние цинка, свинца и кадмия в почвах. Канд. дис. М., 1983.

14. Горовая А.И. Роль физиологически активных гуминовых веществ в адаптации растений к действию ионизирующей радиации // Гуминовые вещества в биосфере. М.: Наука, 1993. - С. 144-150.

15. Горовая А.И., Орлов Д.С., Щербенко О.В. Гуминовые вещества. Строение, функции, механизмы действия, протекторные свойства, экологическая роль. — Киев: Наукова думка, 1995. — 304 с.

16. Григорьева З.В., Королева Р.П., Ларина Н.К., Назарова H.H., Недошивин Ю.Н., Касаточкин В.Н. Физико-химические исследования взаимодействия гуминовых кислот с солями металлов.//Химия тв. топлива. -1967, N2.

17. Григорьева К.В., Караваев Н.М. Влияние условий щелочной экстракции углей на состав гуминовых кислот // Доклады АН СССР, 1969, т.188, №1, с.160-169

18. Гринберг A.A. Введение в химию комплексных соединений. -JL: Химия, 1971.-632 с.

19. Гуминский С.А. Механизм и условия физиологического действия гумусовых веществ на растительный организм // Почвоведение. 1957, № 12. с. 72-78

20. Детерман Г. Гель-хроматография. М.: Мир, 1970.

21. Дорфман Э.М. Природа соединений ионов железа и алюминия с гумусовыми кислотами почв. Автореф. Дис. канд. биол. наук. М., 1968.

22. Драгунов С.С. Образование гуминовых кислот в различных природных условиях // В кн.: Генезис твердых горючих ископаемых. М., 1959, с.5-15

23. Дроздова Т.В. Значение гуминовых кислот в концентрировании редких элементов в почвах //Почвоведение. 1968, N 10. - С.60-64.

24. Евдокимова Г.А., Морозова Н.М. Миграция тяжелых металлов из почвы в сельскохозяйственные культуры. В сб.: Тяжелые металлы в окружающей среде и охрана природы. Мат. II Всесоюзн. конф., 28-30 дек. 1987 г., ч. II, М., 1988, с. 204-209.

25. Жилин Д.М. Исследование реакционной способности детоксицирующих свойств гумусовых кислот по отношению к соединениям ртути (II). Автореф. Дис. канд. хим. наук. Москва, 1998, с.22

26. Жмакова H.A., Наумова Г.В., Косоногова JI.B. Влияние окисления на физико-химические свойства гуминовых кислот торфа // В кн.: Гуминовые вещества в биосфере. М.: Наука, 1993, с.45-49

27. Заварзина А.Г., Демин, В.В. Кислотно-основные свойства гуминовых кислот различного происхождения по данным потенциометрического титрования // Почвоведение. 1999, №10. - С. 1246-1254.

28. Ибрагимов Ш.К., Фокин А.Д. Поступление в растения индивидуальных органических веществ в условиях естественного ценоза на почвах подзолистого типа // Изв. Тимирязев, с.-х. акад. 1974, Вып. 4.

29. Кабата-Пендиас А., Пендиас X. Микроэлементы в почвах и растениях. М., 1989, 439 с.

30. Карпухин А.И. Влияние фульвокислот на урожай некоторых сельскохозяйственных растений // Изв. Тимирязев, с.-х. акад. — 1979, Вып. 2.

31. Колесников М.П., Егоров И.А. Металлпорфирины в отложениях докембрия.//Докл. АН СССР. 1977, Т.233, N 3.

32. Комиссаров И.Д., Климова A.A., Логинов, Л.Ф. Влияние гуминовых препаратов на фотосинтез и дыхание растений // Науч. труды Тюменьского с.-х. ин-та. 1971, Т. 14.

33. Комиссаров И.Д., Логинов Л.Ф. Химическая природа и молекулярное строение гуминовых кислот. В сб.: Химия гумусовых кислот: Их роль в природе и перспективы использования в народном хозяйстве: Тез. докл. зональной науч.-техн. конф. Тюмень, 1981, С.4.

34. Кононова М.М. Органическое вещество почвы. М.: Изд-во АН СССР, 1963.-314 с.

35. Корнилович Б.Ю., Пшинко Г.Н., Ковальчук И.А. Влияние фульвокислот на взаимодействие U (VI) с глинистыми компонентами почв. Радиохимия, 2001, 43, № 5, 464.

36. Красильников H.A. Микроорганизмы почвы и высшие растения. М., 1958

37. Краткий справочник по геохимии. М.:Недра, 1977. - 184с.

38. Куликова H.A. Защитное действие гуминовых веществ по отношению к растениям в водной и почвенной средах в условиях абиотических стрессов. Автореф. Дис. докт. биол. наук. Москва, 2008. с.43-46.

39. Кухаренко Т.А. Реакции гуминовых кислот с нейтральными солями. Сообщение 1.//Химия тв. топлива. 1937, Т.VIII, Вып.9.

40. Кухаренко Т.А. Реакции гумусовых кислот с солями тяжелых металлов.//Ж. прикладной химии. 1946, T.XIX, N. 2.

41. Кухаренко Т.А. Изменение структуры и свойств гуминовых кислот в углеобразовательном процессе // В кн.: Генезис твердых горючих ископаемых. М., 1959, с.319-337

42. Кухаренко Т.А. Исследование кинетики реакции обмена гуминовых кислот с уксуснокислым кальцием как характеристика их коллоидно-химической природы.// Труды ин-та гор. ископ. АН СССР. -1950, Т. 2.

43. Кухаренко Т.А., Бороздина Л.А. К вопросу о сущности реакции обмена гуминовых кислот с ацетатом кальция./ЛСолл. журнал. -1949, Т.П. N.4.

44. Кухаренко Т.А., Екатеринина Л.Н. Сравнительное исследование растворимых и не растворимых в ацетоне фракций гуминовых кислот торфов, бурых и выветрившихся углей // Химия твердого топлива, 1968, №3, с. 12-18

45. Кухаренко Т.А., Толчинская Р.Я., Чеснокова Т.В., Левина И.В. Особенности окисления бурых углей Канско-Ачинского бассейна в пласте//Химия твердого топлива, 1967, с.22-25

46. Ларина Н.К., Касаточкин В.Н. Ионный обмен и строение гуминовых кислот.//Почвоведение. 1957, N 9. с.28-32

47. Лебедев К.К. О роли минеральных компонентов в формировании торфяных отложений // В кн.: Генезис твердых горючих ископаемых. М., 1959, с.16-30

48. Линник П.Н., Набиванец Б.И. Формы миграции металлов в пресных поверхностных водах. Гидрометеоиздат. Л., 1986, 268 с.

49. Лурье Ю. Ю. Справочник по аналитической химии. М.: Химия. 1979., с. 328-341.

50. Мажуль В.М., Прокопова Ж.В., Ивашкевич Л.С. Механизм действия гуминовых препаратов из торфа на структурное состояние мембран и функциональную активность клеток дрожжей. В кн.: Гуминовые вещества в биосфере. М.: Наука, 1993. - С. 151-157.

51. Малама A.A., Храменко Г.Б., Орлов Д.С., Юхнин A.A. Элементный состав и инфракрасные спектры меланиновых пигментов некоторых микроорганизмов // Известия АН СССР. Сер. биол., 1975, №5, с.766-768

52. Манская СМ., Дроздова Т.В., Емельянова М.М. Связывание меди различными формами природных органических соединений .//Почвоведение. 1958, N6. с. 41-48

53. Маякова Е.Ф. Синтез биологически активного препарата БСТ из торфа и его применение. — В кн.: Теория действия физиологически активных веществ: Тр. ДСХИ. Днепропетровск, 1983, т. VIII, с. 87—89.

54. Мидгли Д., Торренс К. Потенциометрический анализ воды. М.: Мир, 1980,512 с.

55. Милановский Е.Ю. Применение ионного детергента в гель-хроматографии гумусовых кислот почв//Почвоведение, 1984, №8, с. 142146

56. Мотовилова Л.В., Хренкова Г.М. Состав и свойства ГК, полученных при механодеструкции бурых углей//Химия твердого топлива, 1988, №2, с.36-41

57. Наумова, Г.В., Райцина, Г.И., Лях, В.В. Биологическое действие торфяных гидролизатов на дрожжи. , В кн.: Гуминовые удобрения. Теория и практика их применения: Тр. ДСХИ. Днепропетровск, 1983, т. IX, с. 102-105.

58. Овчинникова Т.Ф. Влияние гидрогумата гуминового препарата из торфа на пролиферативную активность и метаболизм дрожжевых микроорганизмов// Научн. докл. высш. школы, Серия биол. науки. - 1991, № 10. - С.87-90.

59. Овчинникова Т.Ф., Кудряшов А.П., Мажуль В.М., Наумова Г.В., Райцина Г.И. О мембранотропной активности гидрогумата гуминового препарата из торфа // Научн. докл. высш. школы, Серия биол. науки.- 1991, № 10.-С.103-109.

60. Озол A.A. Исследование поглощения из растворов глинистыми коллоидами тяжелых металлов методом электронного парамагнитногорезонанса./Физические методы исследования осадочных пород и минералов.- М. :Изд-во МГУ, 1962.

61. Орлов Д.С, Нестеренко Н. В. Образование гуматов кобальта, никеля, меди и цинка. //Научные докл. высш. школы. Серия биол. науки. 1960, N 3.

62. Орлов Д.С. Гумусовые кислоты почв и общая теория гумификации -М.: Изд-во МГУ, 1990. 325 с.

63. Орлов Д.С. Гумусовые кислоты почв. М.: Изд-во МГУ, 1974, 334 с.

64. Орлов Д.С. Кинетическая теория гумификации и схема вероятного строения гуминовых кислот.//Научн. докл. высш. школы, Серия биол. науки.- 1977, N9.

65. Орлов Д.С. Свойства и функции гуминовых веществ // Гуминовые вещества в биосфере М.: Наука, 1993. - С.16-27

66. Орлов Д.С. Теоретические и прикладные проблемы химии гумусовых веществ./Итоги науки и техники, Серия почвоведение и агрохимия. М., 1979.-Т. 2.

67. Орлов Д.С., Гришина Л.А. Практикум по химии гумуса М.: Изд-во Моск. ун-та, 1981.-272 с.

68. Орлов Д.С., Демин В.В., Завгородняя Ю.А. Влияние молекулярных параметров гуминовых кислот на их физиологическую активность // Доклады Академии Наук, 1997. 354, 6 - С.843-845

69. Орлов Д.С. Химия почв. М.: МГУ, 1992, 399с.

70. Перминова И.В. Анализ, классификация и прогноз свойств гумусовых кислот. Автореф. Дис. докт. хим. наук. Москва, 2000.

71. Пивоваров Л.Р. , Ярчук И.И. Ответные реакции дрожжей на гумусовые вещества В кн.: Гуминовые удобрения. Теория и практика их применения: Изд-во «Урожай», Киев-34, 1967, т. IX,

72. Покуль Т.В., Парамонова Т.Г., Крюкова В.Н., Мицук Г.Е. Гуминовые вещества бурых углей Хандинского месторождения // В кн.: Гуминовые вещества в биосфере. М.: Наука, 1993, с.54-57

73. Попов А. И. Гуминовые вещества: свойства, строение, образование -СПб.: Изд-во С.-Петерб. ун-та, 2004. 248 с.

74. Прат С. Влияние гумусовых соединений на метаболизм растений// Вестн. Моск. ун-та. 1965. Сер.6, №1

75. Прат С. Воздействие гумусовых веществ на растения. Л., 1963.

76. Прат С. Проблема проникновения и воздействия гумусовых веществ на клетки растений. JL, 1963

77. Рыжиков С.В., Стрелков В.М., Ведерников H.A., Гайлитис Ю.Н. Фракционный состав продуктов механохимической деструкции гуминовых веществ торфа // Научн. докл. высш. школы, Серия биол. науки. 1991, № 10. - С.23-28.

78. Семенов A.A., Демин В.В., Бирюков М.В., Завгородняя Ю.А. Локализация биопротекторного действия гуминовых веществ в почвах // Естественные технические науки, 2008, №4, стр. 84-93.

79. Славинская Г.В., Селеменев В.Ф. Фульвокислоты природных вод. Воронеж: Воронеж. Ун-т., 2001, 165с.

80. Стрелков В.М., Гайлитис Ю.Н., Шмит У.Я. Стимулирующее влияние продуктов механохимической деструкции гуминовых веществ торфа на рост кормовых дрожжей // Научн. докл. высш. школы, Серия биол. науки. 1991, № Ю.-С.81-87.

81. Тишкович A.B., Бамбалов H.H., Шатихина Т.А., Стригуцкий В.П., Навоша Ю.Ю. Исследование физико-химических свойств и физиологической активности некоторых фракций гуминовых кислот низинного торфа //Весщ АН БССР, сер. сельскагспадарчых навук, №3, Минск

82. Ткаченко Л.К., Филиппова Т.В., Горовая А.И., Давыдовский A.A., Сулиман Г.Ф. и Христева Л.А.//Гуминовые удобрения. Теория и практика их применения в растениеводстве и животноводстве, 1977, 6, С.31-45.

83. Тэнфорд Ч. Физическая химия полимеров. М.: Химия, 1965, 572 с.

84. Фокин А.Д., Бобырь Л.Ф., Епишина, Л.А., и др. О проникновении гумусовых веществ в клетки растений / Гуминовые удобрения: Теория ипрактика их применения. Днепропетровск: Изд-во Днепропет. с.-х. ин-та, 1975. - С.57-58.

85. Христева JI.A. Об участии гуминовых кислот и других органических веществ в питании высших растений. Почвоведение, 1953, №10

86. Христева Л.А. Роль гуминовой кислоты в питании растений и гуминовые удобрения // Труды Почв, ин-та им. В.В. Докучаева. 1951, Т.38. -С.108-184.

87. Христева JI.A. Физиологическая функция гуминовой кислоты в процессах обмена веществ высших растений. В кн.: Гуминовые удобрения. Теория и практика их применения. Изд-во Харьковского ун-та, 1957

88. Христева Л.А., Горовая А.И. // Способ детоксикации ядохимикатов. Авторское свидетельство №460037, 1974.

89. Христева Л.А. Действие физиологически активных гуминовых веществ на растения при неблагоприятных внешних условиях //Гуминовые удобрения. Теория и практика их применения. Изд. Днепропетровского с.-х. инст-та, 1973, Т4, С.5-23.

90. Чуков С.Н. Структурно-функциональные параметры органического вещества почв в условиях антропогенного воздействия. СПб.: Изд-во С.-Петерб. ун-та, 2001. - 216 с.

91. Adhikari M., Chakravorty G., Harza G.C. //Agrochemica. -1977, Vol.21, No. 1-2. -P. 134-139.

92. Adhikari M., Chakravorty G., Harza G.C. Stadles on chela-tlon of alcohol soluble soil organic matter fractions with me-tals//J. Indian Chem. Soc. 1972 6, Vol.49, No. 5. - P. 499-508.

93. Adhikari M., Harza G.G. Humus-metal complex: spectral studies.//J. Indian Chem. Soc. 1976, Vol.53, No. 5. - P. 513-515.

94. Adhikari M., Chakravorty G., Harza G.C. Fulvic and metal complexes/Л. Indian Soc. Soil Scl. 1972, Vol.20, No. 4. -P. 311-321.

95. Andrzejewski M., Rosikiewicz D. Badania nad notavzenlam substaneji prochnivznych roznego pochodzenia z kilku mickroele-mentami. //Rocz. nauk. vol. 1974, A 100,No.l. -P. 17-29.

96. Banerjee S.K., Sengupta M. Studies on the interaction of some metal ions with different fractions of humic acid.//Fertil. Technol. 1977, Vol.14, N0.3. - P. 279-282.

97. Bartoc Katalin, Trif E. Les complexes chelatiques de l'acid humique etudies par la methode.//Trav. Mus.hist hatur. Ar-tipa. 1978, Vol.19. - P. 35-38.

98. Bloom P.R., McBride M.B. Metal ions binding and exchange with hydrogen ions in acid-washed peat.//Soil Sci.Soc.AmerJ. 1979, Vol.43, No. 4. P. 687-692.

99. Blume H. P., Brummer G. Prediction of heavy metal behavior in soil by means of simple field tests Ecotoxic. Environ. Saf., 1991, v. 22, p. 265-285.

100. Boyd S.A., Sommers I.E., Nelson D.W. Copper(II) and iron(III) complexation by the carboxylate group of humic acid.//Soil Sci. Soc. Amer. J. -1981, Vol.45, No.6.

101. Buchwalter, D.B., G. Linder, and L.R. Curtis. Modulation of cupric ion activity by pH and fiilvic acid as determinants of toxicity in Xenopus laevis embryos and larvae. Environ. Toxicol. Chem. 1996, Vol. 15(4): 568-573.

102. Butler J.H.A., Ladd J.N. Effect of extractant and molecular size on the optical and chemical properties of soil humic acids//Aust. J. Soil Res., 1969, V.7, p.229-239

103. Cacco G., DellAgnola G., Plant growth regulator activity of soluble humic complexes // Can. J. Soil. Sci. 1984, Vol. 64, No. 1.

104. Chen Y., Senesi N., Schnitzer M. Information provided on humic substances by E4/E6 ratios // Soil Sci. Am. J., 1977, V.41, p.352-358

105. Davis H., Mott C.J.B. Titrations of fulvic acid fractions. I: Interactions influencing the dissociation / reprotonation equilibria // Journal of Soil Science, 1981, N 32, p.379-391

106. Ephraim J.H., Boren H., Arsenie I., Pettersson C., Allard B. A combination of acid-base titrations and derivatization for functional group determinations of an aquatic fulvic aci. Sci. Total Environ., 1989, v. 81/82, p. 615-624.

107. Fitch A, Stevenson F. J. and Chen Y. Complexation of Cu(II) with a soil humic acid: Response characteristics of the Cu(II) ion-selective electrode and ligand concentration effects. // Org. Geochem. Vol. 9, No. 3, pp. 109-116, 1986.

108. Gamble D.S., Schnitzer M., Skinner D. S.//Can. J. Soil Sci. 1977, Vol.57, No. l.-P. 47-53.

109. Giesy, J. P., Newell, A., and Leversee, G. J. Copper speciation in soft, acid, humic waters: effects on copper bioaccumulation by and toxicity to Simocephalus Serrulatus (Daphnidae) // Sci. Total. Environ., 1983,28: 23-36.

110. Gjessing E.T. The effect of aquatic humus on the biological availability of cadmium. //Arch Hydrobiol, 1981, 91:144-149.

111. Goodman B.A., Cheshire M.V. The occurence of copper-porp-hyrin complexes in soil humic acids.//J.Soil Sci. 1976, Vol.27, N0.3. - P. 337-347.

112. Hammock D., Huang C. C., Mort G., and Swinehart, J. H. The effect of humic acid on the uptake of mercury(II), cadmium(II), and zinc(II) by chinook salmon (Oncorhynchus tshawytscha) eggs. // Arch. Environ. Contam. Toxicol., 2003, 44: 83-88.

113. Irving H.M.N.H; Williams RJ.P. (1953). The stability of transition-metal complexes. // J. Chem. Soc.: p. 3192-3210.

114. Khan S.U. Interaction between the humic acid fraction of soils and certain metalic cations.//Soil Sci.Soc.Amer.Proc. 1969. Vol.33, No. 6.

115. Koukal B., Gueguen C., Pardos M., and Dominik J. Influence of humic substances on the toxic effect of cadmium and zinc to the green algae Pseudokirchneriella subcapitata. // Chemosphere, 2003, 53: p. 953-961.

116. Krebs F.The luminescent bacteria test for clean water legislation. //Schriftenr. Ver. Wasser Boden Lufthyg. 1992. V. 89. P. 591-297.

117. Kulikova N.A., Stepanova E.V., Koroleva O.V. Mitigation activity of humic substances: direct influence on biota. In: Use of Humic Substances to Remediate

118. Polluted Environments: From Theory to Practice. I.V. Perminova et al. (eds.) -Netherlands, Springer, 2005. P.285-309.

119. Lakatos B., Tibai T., Meisel J. Comparative studies on EPR spectra of transition metal complexes of peat humic substances and polyuronic acids./Proc. 5th Int. Peat Congr. Poznan 1976. Warszawa, 1976, Vol.2. -P. 330.

120. Levesque M., Schnitzer M. Organo-metallic interactions in soils. 6. Preparation and properties of fiilvic acid metal phosphates. //Soil Sci. 1967, Vol.103.-P. 183-190.

121. Manning P.E., Ramamoorthy S. Equilibrium studies of metal Ion complexes of Interest to natural waters. VII //J.Inorg.Nucl.Chem. 1973, Vol.35. - P. 15771581.

122. Marinsky J.A.; Wolf A.; Bunzl K. The binding of trace amounts of lead(II), copper(II), cadmium(II), zink(II), and calcium(II) to soil organic matter. J. Talant. 1980, 27, 461.

123. Masini J.C. Evaluation of neglecting electrostatic interactions on the determination and characterisation of the ionizable sites in humic substances // Analytica Chimica Acta, 1993, V.283, p.803-810

124. Mato M.C., Olmedo M.G., Mendez J. Inhibition of indolleacetic acidoxidase by soil humic acids fractionated on Sephadex // Soil Biol. Biochem. 1972, Vol. 4.

125. McBride M. B. Exchange and hydratatlon properties of Cu~ on mixed-ion Na+-Cu2+ smectites.//Soil Sci.Soc.Amer.J. 1976, Vol.40, No. 3. - P. 452-456.

126. McBride M. B. Retention of Cu2+, Ca2+, Mg2+ and Mn2+ by amorphose aluminia.//Soil Sci.Soc. Amer. J. 1978. Vol. 42, No.l. - P. 27-31.

127. McBride M.B. Copper(II) interactios with kaolinite: factors controlling adsorption.//Clays and Clay Miner. 1978, Vol.26, No. 2. - P. 101-102.

128. McBride M.B. Cu2+-adsorption characteristics of aluminium hydroxide and oxyhydroxides. //Clays and Clay Miner. 1982, Vol.30, No. 1. - P.21-28.

129. McBride M.B. Hydrolysis and dehydrotation reactions of exchangable Cu on hectorite.//Clays and Clay Miner. 1982, Vol.30, No.3. - P. 200-206.

130. McBride M.B. Origin and position of exchange sites in kaolinite: an ESR study.//Clay and Clay Miner. 1976, Vol.24, No. 2. - P. 88-92.

131. McBride M.B. Transition! metal bonding in humic acid: an ESR study.//Soil Sci. 1978, Vol.126, No. 4. - P. 200-209.

132. McBride M.B., Mortland M.M. Copper(II) interactions with montmorillonite. Evidence from physical methods.//Soil Sci.Soc. Amer.Proc. -1974, Vol.38.-P. 408-415.

133. Nardi S., Pizzeghello D., Muscolo A., Vianello A. Physiological effects of humic substances on higher plants: review // Soil Biol. Biochem. 2002, Vol. 34, N 11.

134. Ong H.L., Bisque R.E. Coagulation of humic colloids by metal ions.//Soil Sci. 1968, Vol.106, No.3. - P. 220-224.

135. Peng A. The role of humic substances in drinking water in Kashin-Beck disease in China // Environ.Health Perspect. SKLEAC, Research Center for Eco-environmental Sciences, Chinese Academy of Sciences, Beijing 100085, P. R. China, 1999. 107,4 ,p.293-296

136. Perdue E.M. Analytical constraits on the structural features of humic substances. //Geochim. Cosmochim. Acta, 1984, 48, p.1435.

137. Perminova I.V. Size-exclusion chromatography of humic substances: complexities of data interpretation attributable to non-size exclusion effects. // Soil Science, 1999, V. 164(11), P.834-840.

138. Piccolo A., Nardi S., Conchieri G. Structural characteristics of humic substances as related to nitrate uptake and growth regulation in plant system // Soil Biol. Biochem. 1992, Vol. 24.

139. Piccolo A., Stevenson F.J. Infrared spectra of Cu2+ Pb2+ and Ca2+ complexes of soil humic substances.// Geoderma. 1982, Vol.27, No.3. - P. 195-208.

140. Ramamoorthy S., Manning P. G. Uptake of Zn,Cd and Hg by Fish in the presence of competing compartments J. Inorg. Nucl. Chem., 1973, v. 35, No. 5, p.1577-1585.

141. Rashid M.A. Geochemistry of marine humic compounds. Springer-Verlag, Oxford, 1985, 243 p.

142. Rerabek J. The relation of humic acids to the inhibition of plant straight growth // Naturwissenschaften 1963, Bd. 50.

143. Rice J.A., McCarthy P. Statistical evaluation of the elemental composition of humic substances//Org. Geochem., 1991, V.17, N 5, p.635-648.

144. Rossel R.A. Materia organica y sustancias humicas del suelo. II//Cienc. e envest. 1970, Vol.26, No. 4. - P. 167-173.

145. Saar R. A. and Weber J. H. Complexation of cadmium(II) with water- and soil-derived fulvic acids: Effect of pH and fulvic acid concentration. //Can. J. Chem. 57, p.1263-1268, 1979.

146. Schnitzer M. Humic substances: chemistry and reactions // Soil organic matter. Elsevier, Amsterdam, 1978. P. 1-64.

147. Schnitzer M. Reactions between organic matter and Inorganic soil constltutlents./9-to Int. Congr. Soil Sei. Trans., Adelaide, 1968. Vol.1. Sydney e.a., 1968.-P. 635-644.

148. Schnitzer M. Recent advances in humic acid research. /Proc. Int. Peat Syrap. Bemidji. Minn. Oct. 21-23, 1981. -. Bemidji, Minn., 1982. P.17-44.

149. Schnitzer M., Skinner S. Organo-metallic interactions in soil. 4. Carboxyl and hydroxyl groups in organic matter and me-tall retention.//Soil Sei. 1965, Vol.99, No.4. - P. 278-284.

150. Steelink C. & Tollin G. Free radicals in soil // Soil Biochemistry. New York: Marcel Dekker, 1967. - P. 147-169.

151. Stevenson F.J. Geochemistry of soil humic substances. In Humic Sabstances in Soil, Sediment, and Water: Geochemistry, Isolation, and Characterization. Eds. Aiken G.R., McKnight D.M., Wershaw R.L., MacCarthy P. John Wiley & Sons, New York, 1985, 13.

152. Stevenson FJ. Humus chemistry. Genesis, composition, reactions. A Willey-Interscience Publication, New York, 1982.

153. Stevenson F.J. Nature of divalent transition metal complexes of humic acids as revealed by a modified Potentiometrie titration method. // Soil Sei. 1977, Vol.123, No. 1.-P. 10-17.

154. Takamatsu T., Yoshida T. Determination of stability constants of metal-humic acid complexes by Potentiometrie titration and ion-selective electrodes // Soil Science, 1978, V.125, N 6, p.377-386

155. Tan K.H. Infrared spectra of humic and fulvic acids, contaning silica, metal ions, and hydroscopic moisture. // Soil Sei. -1977, Vol.123, No. 4. P. 235-240.

156. Tuschall Jr. J. R. and Brezonik P. L. Application of continuous-flow ultrafiltration and competing ligand/ differential spectrophotometry for measurement of heavy metal complexation by dissolved organic matter. //Anal. Chim. Acta 149, 47-58, 1983.

157. Vaughan D., Ord, B.G. Uptake and incorporation of C-labelled soil organic matter by roots of Pisum sativum L. // J. Experimental Bot. 1981, Vol.32.

158. Vinkler P., Lakatos B., Meisel G. Infrared Spectroscopic Investigations of Humic Substances and their Metal Complexes // Geoderma. 1976, Vol.15, No.3. -P. 231-242.

159. Visser S.A. Effect of humic substances on mitochondrial respiration and oxidative phosphorylation // Sei. Total Environment. 1987, Vol. 62.

160. Vymazal J. Short-term uptake of heavy metals by periphyton algae //Hydrobiologie 1984,119, p. 171-179.