Биологическое действие гуминовых кислот и его пространственная локализация в почве тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.27, кандидат биологических наук Бирюков, Михаил Владимирович

• Бирюков, Михаил Владимирович
• кандидат биологических наук
• 2006

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Бирюков, Михаил Владимирович

Введение.

Глава 1. О взаимодействии гуминовых веществ и живых организмов.

1.1. Функции гуминовых веществ в биосфере.

Ф 1.2. Биологическая активность гуминовых веществ.

1.3. Основные гипотезы природы биологического действия гуминовых веществ.

1.4. Использование биологических объектов в тестировании.

Глава 2. Объекты и методы исследования.

2.1. Химические свойства ГК.

2.2. Биологические объекты.

2.3. Методика эксперимента по сорбции гуминовых кислот клетками дрожжей.

2.4. Методики экспериментов на биологических объектах:.

2.4.1. Эксперименты на проростках пшеницы.

2.4.2. Эксперименты на клетках дрожжей.

2.4.3. Эксперименты с применением бактериального люминисцентного биотеста.

Глава 3. Результаты и обсуждение.

• 3.1 Характеристика использованных гуминовых кислот.

3.2. Сорбция гуминовых кислот клетками дрожжей.

3.3. Стимулирующие, адаптогенные и протекторные свойства гуминовых кислот.

3.3.1. Предварительный тест на биологическую активность.

3.3.2. Информативность параметров роста биомассы и интенсивности дыхания клеток для исследования биологических эффектов действия ГК

3.3.3. Стимулирующее действие гуминовых кислот на клетки дрожжей

3.3.4. Влияние гуминовых кислот на способность дрожжей к адаптации

3.3.5. Протекторные свойства гуминовых кислот, сорбированных на поверхности клеток.

3.4. Пространственная локализация биопротекторного действия гуминовых кислот в почве.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Биологическое действие гуминовых кислот и его пространственная локализация в почве»

Биологическая активность гуминовых кислот (ГК) интенсивно изучается в течение длительного времени. Результаты этих работ неоднократно обобщались в ряде обзорных статей и монографий (Христева, 1951; Кононова, 1963; Александрова, 1972; Орлов, 1993; Горовая'и др., 1995; Чуков, 2001; Попов, 2004). Многочисленные исследования позволяют констатировать наличие положительного отклика живых клеток на присутствие ГК в окружающей среде. В тоже время такие сложные по химическому составу и строению вещества как ГК не могут не обладать двояким эффектом и должны оказывать, в зависимости от условий, как положительное, так и отрицательное воздействие на живую клетку. В литературе встречаются довольно многочисленные данные о негативном влиянии ГК на состояние живых организмов (Тишкович и др., 1982; Peng et al., 1999; Nieman et al., 2005). Вероятно, это связано и с тем, что во многих случаях для оценки действия гуминовых веществ на живые объекты использовались различные тесты. Мало изученной областью в исследованиях биологической активности ГК является анализ конкретных механизмов транспорта макромолекул ГК внутрь клеток и, в частности, взаимодействия ГК с клеточными стенками и периплазматической мембраной клеток.

Физиологическая и биопротекторная активность относятся к важнейшим функциональным параметрам гумусовых веществ (Чуков, 2001). Благодаря этим свойствам ГВ играют особую роль как в обеспечении высокой биологической продуктивности наземных экосистем, так и в повышении устойчивости этих систем к неблагоприятным воздействиям. Эти функции в почве выполняет целостная, специфически организованная, в том числе и пространственно, система гуминовых веществ почвы. Гуминовые вещества, присутствующие в почвенных растворах и существующие в виде пленок на поверхности минеральных фаз и самостоятельных фаз, могут выполнять протекторную функцию по отношению к живым клеткам связывать токсичные вещества, предотвращая их поступление в клетку. Однако реальный вклад различных пулов гуминовых веществ в биопротекторную функцию почвы мало изучен. Фактически неизвестна роль ГВ, сорбированных клеточными стенками корней и почвенных микроорганизмов.

Исследование физиологического и биопротекторного действия ГВ имеют и значительную практическую ценность. В настоящее время на рынок поступает большое количество препаратов гуматов, для получения которых используются разные виды сырья и технологии. Ведется активная реклама и пропаганда их использования, однако до настоящего времени остается открытым вопрос о критериях оценки их качества и биологического действия. Использование только химических и физических методов не дает комплексную характеристику этих сложных объектов. В настоящее время становятся актуальными поиск надежных критериев контроля биологической активности гуматов, разработка методик экспрессного биотестирования препаратов, а так же выявление условий, в которых возможно проявление негативных эффектов от применения этих соединений.

Цель работы. Изучить взаимодействие ГК с поверхностью живых клеток и исследовать биологические эффекты, возникающие в результате этого взаимодействия.

В задачи работы входило:

• Количественно оценить связывание ГК на поверхности клеток;

• Изучить возможность использования параметров роста и интенсивности дыхания клеток для исследования биологических эффектов действия ГК;

• Изучить протекторные свойства ГК, связанных на поверхности клеток;

• Разработать схему пространственной локализации биопротекторного действия ГК в почве.

Научная новизна работы. Впервые проведена количественная оценка сорбции ГК на поверхности клеток дрожжей. На основании проведенных экспериментов установлен полимолекулярный характер сорбции ГК живыми клетками. Показано, что молекулярные слои ГК, образующиеся на поверхности живых клеток в результате сорбции последних из растворов, могут играть роль активных фильтров, связывающих молекулы токсикантов, присутствующих в почве. ГК, находящиеся во внеклеточной среде в концентрациях, лежащих в области оптимума биологической активности ГК (0,1 - 1 мг/л), не только стимулируют клеточный рост, но и увеличивают адаптивные способности клеток. В качестве основного критерия биологической активности гуминовых кислот предложено рассматривать показатели, которые непосредственно описывают рост и состояние биомассы, в частности, величину биомассы и скорость ее удвоения.

Практическая значимость работы. Результаты работы могут быть использованы для разработки критериев тестирования биологической активности промышленных препаратов гуматов, оптимизации технологий получения этих препаратов, расчетов доз гуматов при их использовании в биореакторах и сельскохозяйственной практике. Благодарности

Автор выражает глубокую признательность сотруднице кафедры общего земледелия Куликовой H.A., сотруднику института почвоведения МГУ Дёмину В.В., сотруднице кафедры химии почв Завгородней Ю.А., сотруднику кафедры биологии почв Вызову Б.А., сотруднице кафедры микробиологии Зарубиной А.П., за постоянное внимание, ценные консультации и помощь в работе. Автор выражает глубочайшею признательность сотрудникам кафедр общего земледелия, биологии почв и химии почв за сотрудничество и поддержку.

Заключение диссертации по теме «Почвоведение», Бирюков, Михаил Владимирович

Выводы

1. Клеточные стенки дрожжей связывают до 7-8 мг/м молекул ГК в диапазоне равновесных концентраций 0,8-80 мг/л. Расчеты показывают, что при содержании ГК в растворе 0,1-1 мг/л, близком к их концентрациям в почвенных и поверхностных водах, сорбция ГК может приводить к образованию монослоя из молекул ГК на поверхности клеток.

2. Слой молекул ГК, связанных на поверхности клеток, выступает в роли «активного фильтра», препятствующего поступлению в клетки из внешней среды тех ксенобиотиков, которые способны к взаимодействию с ГК (например, детергентов).

3. Установлено, что ГК в концентрациях 0,1-1 мг/л стимулируют ф увеличение биомассы дрожжей до 15-35% по сравнению с контролем.

4. Гуминовые кислоты, находящиеся во внеклеточной среде в высоких концентрациях (100 мг/л), частично подавляют рост дрожжей, но при этом происходит отбор наиболее жизнеспособных клеток.

5. Гуминовые кислоты в концентрациях, соответствующих оптимуму биологической активности, одновременно со стимуляцией роста биомассы увеличивают устойчивость клеток дрожжей к стрессовым воздействиям.

6. Показано, что при изучении биологического действия ГК наиболее информативны параметры роста и состояния биомассы, (величина биомассы и скорость её генерации). Менее информативны в этом отношении косвенные показатели, такие как интенсивность дыхания или узкоспециализированные тесты, в частности, биолюминисценция.

Заключение

Можно предположить, что современные живые организмы, с одной стороны, обладают способностью нивелировать возможные негативные эффекты присутствия во внешней среде гуминовых веществ, а с другой -эффективно использовать возможности сосуществования с ними. Так химическое строение и пространственная организация клеточных стенок позволяет эффективно связывать полимеры типа гуминовых кислот. Клеточные мембраны не пропускают эти соединения и достаточно устойчивы к природным полимерам-детергентам. Гетеротрофное питание клеток, происходящее за счет эндоцитоза, позволяет использовать пептиды, аминокислоты, полинуклиотиды и полисахариды, входящие в состав гуминовых кислот или захваченные ими, для клеточного метаболизма.

Положительное биологическое действие ГК на живые организмы обусловлено тем, что интактные молекулы ГК и высокомолекулярные остатки их внутриклеточного переваривания локализуются в клеточных стенках или в слое, непосредственно примыкающем к цитоплазматической мембране. Таким образом, на поверхности живой клетки возникает подобие активного фильтра, выполняющего следующие функции:

• связывать ионы тяжелых металлов в устойчивые комплексы хелатного типа, в том числе и ионы Ре(Н)/Ге(Ш), являющиеся катализаторами перекисного окисления липидов;

• перехватывать молекулы пестицидов и других органических ксенобиотиков;

• связывать свободные радикалы, образующиеся в плазматической мембране, в результате перекисного окисления липидов.

Общим результатом описанных взаимодействий ГК с живыми клетками является высвобождение энергии, которая вместо того, чтобы расходоваться на компенсацию неблагоприятных воздействий внешней среды, может быть затрачена клеткой на рост и размножение, что в конечном итоге приводит к усилению конкурентоспособности данного организма, как на уровне популяции, так и при межпопуляционных отношениях.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Бирюков, Михаил Владимирович, 2006 год

1. Александрова И. В. О физиологической активности гумусовых веществи продуктов метаболизма микроорганизмов // Органическое вещество целинных и освоенных почв М.: Наука, 1972. - С.30-69

2. Алёшин, С.Н. , Тюнеева, Т.Н.О питании растений молекулярнымиорганическими соединениями почвы// Изв. Тимирязев, с.-х. акад. 1956 Вып.2(12) , С. 25"-2g

3. Альберте, Б., Брей, Д., Льюис, Дж.Молекулярная биология клетки. М.:1. Мир, 1987.-Т.5.-231 с.

4. Аляутдинова, Р.Х., Гагарин, С.Г., Екатеринина, Л.Н.Корреляцияфизиологической активности и физико-химических свойств гуминовых препаратов//Химия твердого топлива, 1991, №3, с. 16-21

5. Баталкин, Г.А., Галушко, A.M., Махно, Л.Ю., Христева, Л.А.О природедействующего начала физиологически активных гуминовых кислот. // Тр. Междунар. симпоз. IV и II Комис. МТО «Торф, его свойства и перспективы применения». Минск, 1982. С.115-117.

6. Бобырь, Л.Ф.Влияние физиологически активных гумусовых веществ нафотосинтетические процессы у растений; Автореф. Дис. . канд. биол. наук. Кишинев, 1984. - 24 с.

7. Варшал, Г.М., Велюханова, Т.К., Кощеева, И.Я.Геохимическая рольгумусовых кислот в миграции элементов. В кн.: Гуминовые вещества в биосфере. М.: Наука, 1993. - С.97-117.

8. Вахмистров, Д.Б., Зверкова, O.A., Дебец, Е.Ю., Мишустина,

9. Н.Е.Гуминовые кислоты: Связь между поверхностной активностью и стимуляцией роста растений // Докл. АН СССР. 1987, Т.293, №5. -С.1277-1280.

10. Ганшин, В.М. , Данилов, В.С.Клеточные сенсоры на основебактериальной биолюминесценции. //Сенсорные системы. 1997. Т. 11. №. 6. С.245-255.

11. Гаузе, Г.Ф.Борьба за существование. М.: Изд-во РХД, 2002. - 159 с.

12. Горовая, А.И., Орлов, Д.С., Щербенко, О.В.Гуминовые вещества.

13. Строение, функции, механизмы действия, протекторные свойства, экологическая роль. Киев: Наукова думка, 1995. - 304 с.

14. Горовая, А.И.Роль физиологически активных гуминовых веществ вадаптации растений к действию ионизирующей радиации // Гуминовые вещества в биосфере. М.: Наука, 1993. - С. 144-150.

15. Григорьева, К.В. , Караваев, Н.М.Влияние условий щелочнойэкстракции углей на состав гуминовых кислот // Доклады АН СССР, 1969, т.188, №1, с.160-169

16. Гуминский, С.А.Механизм и условия физиологического действиягумусовых веществ на растительные организмы // Почвоведение. -1957, № 12; С.72-7&.

17. Гуминский, С.А.Современные точки зрения на механизмфизиологических эффектов, вызываемых в растительных организмах гумусовыми веществами // Почвоведение. 1968, № 9; с. 92, ~3 8.

18. Данилов В. С. и др. Сенсорные биолюминесцентные системы на основе1их-оперонов разных видов люминесцентных бактерий // Вестник Московского ун-та.Сер.16, Биология 2002,2002. с.20-24

19. Данилов, В.С. , Егоров, Н.С.Бактериальная биолюминесценция. //М.1. МГУ. 1990. 152 с.18. де Дюв К.Лизосома / Структура и функции клетки. М.: Мир, 1964. 1. С.90-103.

20. Детерман, Г.Гель-хроматография. М.: Мир, 1970; 450с.

21. Заварзина, А.Г. , Демин, В.В.Кислотно-основные свойства гуминовыхкислот различного происхождения по данным потенциометрического титрования // Почвоведение. 1999, №10. - С.1246-1254.

22. Зарубина А. П. и др. Бактериальный люминесцентный биотест //

23. Сенсорные системы, №3,2005. с. 14-21

24. Ибрагимов, Ш.К. , Фокин, А.Д.Поступление в растения индивидуальныхорганических веществ в условиях естественного ценоза на почвах подзолистого типа // Изв. Тимирязев, с.-х. акад. 1974, Вып. 4,с.З 6 '

25. Карпухин, А.И.Влияние фульвокислот на урожай некоторыхсельскохозяйственных растений // Изв. Тимирязев, с.-х. акад. 1979, Вып. 2, с. 12-21.

26. Комиссаров, И.Д. , Логинов, Л.Ф.Химическая природа и молекулярноестроение гуминовых кислот. В сб.: Химия гумусовых кислот: Их роль в природе и перспективы использования в народном хозяйстве: Тез. докл. зональной науч.-техн. конф. Тюмень, 1981, С.4.

27. Комиссаров, И.Д., Климова, A.A., Логинов, Л.Ф.Влияние гуминовыхпрепаратов на фотосинтез и дыхание растений // Науч. труды Тюменьского с.-х. ин-та. 1971, Т.14; с . 200-Z 12.

28. Кононова, М.М.Органическое вещество почвы. М.: Изд-во АН СССР,1963.-314 с.

29. Красильников, Н.А.Микроорганизмы почвы и высшие растения. М.,1958, 46 3 с.

30. Куликова H.A. Связывающая способность и детоксицирующие свойствагумусовых кислот по отношению к атразину. Автореф. дисс. на соискание уч. ст. к.б.н. М., 1999. 29с.

31. Кухаренко, Т.А. , Екатеринина, Л.Н.Сравнительное исследованиерастворимых и не растворимых в ацетоне фракций гуминовых кислот торфов, бурых и выветрившихся углей // Химия твердого топлива, 1968, №3, 12-18

32. Кухаренко, Т.А., Толчинская, Р.Я., Чеснокова, Т.В., Левина,

33. И.В.Особенности окисления бурых углей Канско-Ачинского бассейна в пласте//Химия твердого топлива, 1967, с.22-25

34. Мажуль, В.М., Прокопова, Ж.В., Ивашкевич, Л.С.Механизм действиягуминовых препаратов из торфа на структурное состояние мембран и функциональную активность клеток дрожжей. В кн.: Гуминовые вещества в биосфере. -М.: Наука, 1993. С. 151-157.

35. Маякова, Е.Ф.Синтез биологически активного препарата БСТ из торфа иего применение. — В кн.: Теория действия физиологически активных веществ: Тр. ДСХИ. Днепропетровск, 1983, т. VIII, с. 87—89.

36. Методы почвенной микробиологии и биохимии / Под. ред. Д. Г.

37. Звягинцева. М.: Изд-во МГУ, 1991. - 304 с.

38. Мидгли, Д. , Торренс, К.Потенциометрический анализ воды. М.: Мир,1980,512 с.

39. Милановский, Е.Ю., Шеин, Е.И., Степанов, А.А.Лиофильно-лиофобныесвойства органического вещества и структура почвы // Почвоведение, 1993, №6, с.122-126

40. Милановский, Е.Ю.Применение ионного детергента в гельхроматографии гумусовых кислот почв//Почвоведение, 1984, №8, с. 142-146

41. Мотовилова, Л.В. , Хренкова, Г.М.Состав и свойства ГК, полученныхпри механодеструкции бурых углей // Химия твердого топлива, 1988, №2, с.36-41

42. Наумова, Г.В., Райцина, Г.И., Лях, В.В.Биологическое действиеторфяных гидролизатов на дрожжи. , В кн.: Гуминовые удобрения. Теория и практика их применения: Тр. ДСХИ. Днепропетровск, 1983, т. IX, с. 102-105.

43. Овчинникова, Т.Ф., Кудряшов, А.П., Мажуль, В.М., Наумова, Г.В.,

44. Райцина, Г.И.О мембранотропной активности гидрогумата гуминового препарата из торфа // Биологические науки. 1991, № 10. -С.103-109.

45. Овчинникова, Т.Ф.Влияние гидрогумата гуминового препарата изторфа на пролиферативную активность и метаболизм дрожжевых микроорганизмов // Биологические науки. 1991, № 10. - С.87-90.

46. Орлов Д. С. Гумусовые кислоты почв М.: Изд-во МГУ, 1974. - 336 с.

47. Орлов Д. С. Гумусовые кислоты почв и общая теория гумификации М.:1. Изд-во МГУ, 1990.-325 с.

48. Орлов Д. С. Свойства и функции гуминовых веществ // Гуминовыевещества в биосфере М.: Наука, 1993. - С. 16-27

49. Орлов Д. С., Гришина Л. А. Практикум по химии гумуса М.: Изд-во1. Моск. ун-та, 1981.-272 с.

50. Орлов Д. С., Демин В. В., Завгородняя Ю. А. Влияние молекулярныхпараметров гуминовых кислот на их физиологическую активность // Доклады Академии Наук, 1997. 354, 6 - С.843-845

51. Перт С. Дж. Основы культивирования микроорганизмов и клеток М.:1. Мир, 1978. 335 с.

52. Пивоваров, JI.P. , Ярчук, И.И.Ответные реакции дрожжей на гумусовыевещества В кн.: Гуминовые удобрения. Теория и практика их применения: Изд-во «Урожай», Киев-34, 1967, т. IX,C.134

53. Плохинский, Н.А.Алгоритмы биометрии. М.: Изд-во Моск. ун-та, 1980.-150 с.

54. Попов А. И. Гуминовые вещества: свойства, строение, образование

55. СПб.: Изд-во С.-Петерб. ун-та, 2004. 248 с.

56. Прат, С.Влияние гумусовых соединений на метаболизм растений//

57. Вестн. Моск. ун-та. 1965. Сер.6, №1, с. 7-12 .

58. Прат, С.Проблема проникновения и воздействия гумусовых веществ наклетки растений. JL, 1963

59. Ревазова Ю. А. и др. Определение токсичности химических соединений,полимеров, материалов и изделий с помощью люминесцентного бактериального теста. // Сенсорные системы, 2003. -61,1 1-9

60. Рыжиков, С.В., Стрелков, В.М., Ведерников, H.A., Гайлитис,

61. Ю.Н.Фракционный состав продуктов механохимической деструкции гуминовых веществ торфа // Биологические науки. -1991, № 10. С.23-28.

62. Стрелков, В.М., Гайлитис, Ю.Н., Шмит, У.Я., и др.Стимулирующеевлияние продуктов механохимической деструкции гуминовых веществ торфа на рост кормовых дрожжей // Биологические науки. -1991, № 10. С.81-87.

63. Сэги, Й.Методы почвенной микробиологии. М.: Колос, 1983. 296с.

64. Тишкович, A.B., Бамбалов, H.H., Шатихина, Т.А., Стригуцкий, В.П.,

65. Навоша, Ю.Ю.Исследование физико-химических свойств и физиологической активности некоторых фракций гуминовых кислот95низинного торфа //Весщ АН БССР, сер. сельскагспадарчых навук, №3, Минск, C.46-SZ.

66. Фокин, А.Д., Бобырь, Л.Ф., Епишина, JI.A., и др.О проникновениигумусовых веществ в клетки растений / Гуминовые удобрения: Теория и практика их применения. Днепропетровск: Изд-во Днепропет. с.-х. ин-та, 1975. - С.57-58.

67. Химическая энциклопедия. М.: Советская энциклопедия, 1990, т.2

68. Христева, JI.A.06 участии гуминовых кислот и других органическихвеществ в питании высших растений. Почвоведение, 1953, №10, с, Ъ5-Щ.

69. Христева, Л.А.Роль гуминовой кислоты в питании растений игуминовые удобрения // Труды Почв, ин-та им. В.В. Докучаева. 1951, Т.38. - С.108-184.

70. Христева, Л.А.Физиологическая функция гуминовой кислоты впроцессах обмена веществ высших растений. В кн.: Гуминовые удобрения. Теория и практика их применения. Изд-во Харьковского ун-та, 1957, с. 73-75,

71. Чуков, С.Н.Структурно-функциональные параметры органическоговещества почв в условиях антропогенного воздействия. СПб.: Изд-во С.-Петерб. ун-та, 2001. - 216 с.

72. Baldwin, Т.О., Christopher, J.A., Raushel, F.M., Sinclair, J.F., Ziegler, M.M.,

73. Fisher, A.J., Rayment, I.Structure of bacterial luciferase. //Curr. Opin. Struct. Biol. 1995. V. 5. P. 798-809.

74. Bringmann, G. & Kuhn, J.Comparisons of the toxicity thresholds of waterpollutants to bacteria, alga and protozoa in the cell multiplication inhibition testy/Wat. Res. 1980. V. 14. № 1. P. 231-241.

75. Bulich, A.A., Tung, K.K., Scheibner, G.The luminescent bacteria toxicity test:its potential use as an in vitro alternative. //Biolum. Chemilum. 1990. V. 5. №2. P. 71-77.

76. Burton, S.A. & Petersen, R.V.Comparison of in vivo bacterialbioluminescence and tissue culture bioassays and in vivo tests for evaluating acute toxicity of biomaterials. //Biomed. Materials Res. 1986. V. 20. P. 827838.

77. Cacco, G. & Dell'Agnola, G.Plant growth regulator activity of soluble humiccomplexes // Can. J. Soil. Sci. 1984, Vol. 64, No. 1.

78. Chatterjee, J. & Meighen, E.A.Biotechnological applications of bacterialbioluminescence (lux) genes. //Photochem. Photobiol. 1995. V. 62. № 4. P. 641-650.

79. Coleman, R.N. & Quereshi, A.A.Microtox and Spirillum volutans tests forassessing toxicity of environmental samples. // Bull. Environ. Contam. Toxicol., 1995. V. 35 P. 443-451.

80. Gast, R. & Lee, J.Isolation of the in vivo emitter in bacterial bioluminescence.

81. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1978. V.75. № 2. P. 833-837.

82. Harvey, G.R. & Boran, D.A.Geochemistry of humic substances in seawater.1.: Humic Substances in Soil, Sediment and Water, eds. G.R, Aiken, D.M. McKnight, R.L. Wershow, and P. MacCarthy. New York: John Wiley and Sons, 1985.-P. 233-247

83. Hastings, J.W., Potrikus, C., Gupta, S., Kurfurst, M., Makemson,

84. J.Biochemistry and physiology of bioluminescent bacteria. //Adv. Micr. Physiol. 1985. № 26. P. 235-291.

85. Kaiser, K.L.Correlation of Vibrio fischeri bacteria test data with bioassay datafor other organisms. //Environ. Health Perspect. 1998. V. 106. № 2. P. 583591.

86. Korpela, M., Mantasala, P., Lilius, E.M., Karp, M.Stable light - emitting

87. Esherichia coli as a biosensor. //Biolum. Chemilum. 1989. № 4. P. 551-554

88. Krebs, F.The luminescent bacteria test for clean water legislation. //Schriftenr.

89. Ver. Wasser Boden Lufthyg. 1992. V. 89. P. 591-297.

90. Mato, M.C., Olmedo, M.G., Mendez, J.Inhibition of indolleacetic acidoxidaseby soil humic acids fractionated on Sephadex // Soil Biol. Biochem. 1972, Vol.4, p. 69-73.

91. McElroy, W.D. & Green, A.Enzymatic properties of bacterial luciferase.

92. Arch. Biochem. Biophys. 1955. V. 56. №1. P. 240-255.

93. Meighen, E.A.Molecular biology of bacterial bioluminescence. //Micr. Rev1991. V. 55. № l.P. 123-142.

94. Microtox instructions for operating. Hundred per cent effluent, colorcorrection. //Microtox bulletin 6984. Becman Instruments. Inc. Carsbad. Calif. USA. 1980.

95. Nardi, S., Pizzeghello, D., Muscolo, A., Vianello, A.Physiological effects ofhumic substances on higher plants: review // Soil Biol. Biochem. 2002, Vol. 34, N11, p. 79 -87.

96. Pardos, M.A., Benninghoff, C., Thomas, R.L., Dobrowolski, J., Dominik,

97. J.Water ecotoxicity studies in Cracow (Poland) using Hydra attenuata, Selenastrum capricornutum, and Microtox toxicity texts. //Lak. Reserv. Res. Manag. 2000. V. 5. № 2. P.75-81.

98. Peng A. et al. The role of humic substances in drinking water in Kashin-Beckdisease in China // Environ.Health Perspect. SKLEAC, Research Center for

99. Eco-environmental Sciences, Chinese Academy of Sciences, Beijing 100085, P. R. China, 1999. 107,4 - 293-296

100. Piccolo, A., Nardi, S., Conchieri, G.Structural characteristics of humicsubstances as related to nitrate uptake and growth regulation in plant system //Soil Biol. Biochem.- 1992, Vol. 24, p, 373 -380,

101. Quereshi, A.A., Flood, K.W., Thompson, S.R., Janhurst, S.M., Innis, C.S.,

102. Rokosh, D.A.Comparison of a luminescent bacterial test with other bioassays for determining toxicity of pure compounds and complex effluents. //Fourth conference "Aquatic toxicology and hazard assessment". Philadelphia 1982. P. 179-195.

103. Rerabek, J.The relation of humic acids to the inhibition of plant straightgrowth//Naturwissenschaften 1963, Bd. 50.

104. Ribo, J.M. & Kaiser, K.L.E.Effects of selected chemical to photoluminescentbacteria and their correlation with acute and sublethal effects on other organisms. //Chemosphere. 1983. V. 12 .№ 11/12. P. 1421-1442.

105. Riendeau, D. & Meighen, E.Co-induction of fatty acid reductase andluciferase during development of bacterial bioluminescence. //Biol. Chem. 1989. V. 264. № 20. P. 12060-12065.

106. Schnitzer, M.Humic substances: chemistry and reactions // Soil organicmatter. Elsevier, Amsterdam, 1978. P. 1-64.

107. Steelink, C. & Tollin, G.Free radicals in soil // Soil Biochemistry. New

108. York: Marcel Dekker, 1967. P. 147-169.

109. Steinberg, S.M., Poziomek, E.J., Engelmann, W.H., Rogers, K.R.A review ofenvironmental applications of bioluminescence measurements. //Chemosphere. 1995. V. 30. № 11 P. 2155-2197.

110. Stevenson, F.J.Humus chemistry. Genesis, composition, reactions. A Willey1.terscience Publication, New York, 1982; p. 3 65".

111. Stewart, G.SJn vivo bioluminescence: new potentials for microbiology. //Lett.

112. Appl. Microbiol. 1990. V. 10. P. 1-8.

113. Swift, R.S.Molecular weight, size, shape and charge characteristics of humicsubstances: some basic considerations / Humic substances II. In search of structure. New York: John Wiley and Sons, 1989. - P.450-465.

114. Vaughan, D. & Ord, B.G. Uptake and incorporation of C-labelled soil organicmatter by roots of Pisum sativum L. // J. Experimental Bot. -1981, Vol.32, p-^J-^j

115. Visser, S.A.Effect of humic substances on mitochondrial respiration andoxidative phosphorylation // Sci. Total Environment. 1987, Vol. 62; p. 51,

116. Wershaw R. L. Application of a membrane model to the sorptive interactionsof humic substances // Environ.Health Perspect. U.S. Geological Survey, Arveda, CO 80002,1989. 83, - 191-203

117. Zavgorodnyaya, Yu.A., Demin, V.V., Kurakov, A.V.Biochemical degradation of soil humic acids and fungal melanins. // Organic Geochemistry. 2002, Vol.33. - P.347-355.1. Состав питательной среды