Цитоксичность и генотоксичность антител к ДНК сывороток крови больных системными аутоиммунными заболеваниями в культуре мононуклеарных клеток крови здоровых лиц тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.04, кандидат биологических наук Сабирзянова, Алсу Зуфаровна

• Сабирзянова, Алсу Зуфаровна
• кандидат биологических наук
• 2012

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Сабирзянова, Алсу Зуфаровна

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Системная красная волчанка

1.2. Этиология системной красной волчанки

1.3. Ревматоидный артрит

1.4. Этиология ревматоидного артрита

1.5. Биологическая роль аутоантител к ДНК

в норме и патогенезе аутоиммунных заболеваний

1.6. Каталитические ДНК-гидролизующие анитела

и их биологическая роль в организме человека

1.7. Влияние антител к ДНК на клетки организма

1.8. Апоптоз.

Роль апоптоза в иммунных процессах

1.9. Нарушение апоптоза при СКВ и РА 33 ЗАКЛЮЧЕНИЕ ПО ОБЗОРУ ЛИТЕРАТУРЫ 36 ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Объект исследования

2.2. Выделение AT к нДНК из крови человека

2.2.1. Получение сыворотки и осаждение AT сульфатом аммония

2.2.2. Обессоливание белков

2.2.3. Фракционирование антител сыворотки крови

на ДЭАЭ-целлюлозе

2.2.4. Получение субфракций AT к нДНК аффинной хроматографией на нДНК-целлюлозе микрокристаллической

2.3. Исследование влияния AT к нДНК на клетки in vitro

2.3.1. Выделение мононуклеарных клеток, лимфоцитов

и моноцитов из периферической крови человека

2.3.2. Исследование жизнеспособности клеток

2.3.3. Культивирование клеток в присутствии

сывороток крови человека

2.3.4. Культивирование клеток в присутствии

субфракций IgG-AT к нативной ДНК

2.3.5. Определение концентрации клеточного белка

2.3.6. Определение количества потребления

глюкозы клетками

2.3.7. Определение продукции

перекиси водорода моноцитами

2.3.8. Оценка уровня повреждения ДНК клеток

2.3.8.1. Оценка уровня повреждения ядерной ДНК

методом флуоресцентной спектрофотометрии

2.3.8.2. Оценка уровня повреждения ядерной ДНК

методом «ДНК-комет»

2.3.9. Оценка апоптоза клеток методом проточной цитометрии 47 2.4. Статистическая обработка результатов 48 ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Влияние AT сывороток на МНК здоровых лиц in vitro

3.2. Влияние AT сывороток

на моноциты здоровых лиц in vitro

3.3. Влияние субфракций IgG-AT к нДНК

на моноциты здоровых лиц

3.4. Генотоксичность субфракций IgG-AT к нДНК

3.5. Определение количества клеток на ранней стадии

апоптоза после инкубации с IgG-AT к нДНК

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЫ

ЛИТЕРАТУРА

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ААТ - аутоантитело

АИЗ - аутоиммунное заболевание

AT - антитело

МНС (HLA) - главный комплекс гистосовместимости

нДНК - нативная дезоксирибонуклеиновая кислота

ИдК - индекс ДНК-комет

МНК - мононуклеарные клетки

РА - ревматоидный артрит

РФ - ревматоидный фактор

СКВ - системная красная волчанка

ФНО - фактор некроза опухоли

ФСБ - фосфатно-солевой буфер

ЭБ - этидий бромид

BAFF - B-лимфоцит активирующий фактор

CD - cell differentiation antigens или cluster definition (антигены кластеров

дифференцировки клеток)

CDR - гипервариабельный регион Ig

Ig - иммуноглобулин

PI - пропидий йодид

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Цитоксичность и генотоксичность антител к ДНК сывороток крови больных системными аутоиммунными заболеваниями в культуре мононуклеарных клеток крови здоровых лиц»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы

Аутоиммунные заболевания (АИЗ) - это заболевания, возникающие вследствие гиперактивности иммунной системы, дисбаланса во взаимодействии ее звеньев и нарушения толерантности к молекулам собственного организма (Ройт, 2007).

Общим признаком АИЗ является гиперглобулинемия и избыточное образование широкого спектра ААТ (Насонов и Сура, 1988). Аутоантитела (ААТ) - это антитела (АТ), способные взаимодействовать хотя бы с одним аутоантигеном (антигеном собственных тканей).

При некоторых аутоиммунных патологиях, а также других заболеваниях и физиологических состояниях, таких как стресс, беременность наблюдается повышение содержания в крови больных аутоантител к нативной ДНК класса (^в-ААТ к нДНК), происхождение и биологическая роль которых на сегодняшний день остаются невыясненными.

Системная красная волчанка (СКВ) и ревматоидный артрит (РА) - это хронические тяжелые системные аутоиммунные заболевания с неясной этиологией и обширной картиной иммунопатогенеза.

Характерное повышение уровня 1^С-ААТ к нДНК в крови больных СКВ является одним из диагностических критериев данного заболевания. Российскими учеными было обнаружено, что АТ к ДНК при СКВ обладают ДНК-гидролизующей активностью (ОаЫЬоу е1 а1., 1994)

РА представляет собой наиболее распространенное АИЗ, поражающее 0,5-2% взрослого населения в работоспособном возрасте 35-55 лет (Каратеев, 2007). Было показано, что приблизительно у 25% пациентов с РА наблюдаются повышенный уровень АТ с ДНК-гидролизующей активностью (8исЬкоу, 2001; ваЫЬоу ег а1., 2006).

СКВ и РА снижают качество и продолжительность жизни населения,

поэтому входят в число важных биомедицинских и социальных проблем современности. К сожалению, с каждым годом число больных СКВ и РА возрастает (Арлеевская и др., 2010; Невзорова и Винтер, 2006).

Вероятно, развитие АИЗ является следствием сочетания многих факторов, среди которых в первую очередь необходимо выделить наследственную предрасположенность, гормональный статус человека и негативное воздействие физико-химических и биологических факторов окружающей среды. Согласно литературным данным, риск развития аутоиммунной патологии у родственников больных АИЗ в 2 раза выше, чем в остальной популяции (Silman and Pearson, 2002).

Вместе с тем ранняя диагностика СКВ и РА является сложной задачей, так как симптомы часто неспецифичны и могут наблюдаться при широком спектре как ревматических, так и неревматических заболеваний.

В связи с этим важной задачей биохимии является разработка подходов и методов диагностики, прогнозирования течения патологического процесса, контроля эффективности комплексной терапии и мероприятий профилактики аутоиммунных заболеваний.

Для решения поставленной проблемы необходим поиск и анализ маркера, обладающего свойствами, специфичными для разных АИЗ, и отражающего изменение иммунного статуса человека задолго до развития полномасштабной картины патологического аутоиммунного процесса.

В ряде работ показано, что активность АИЗ (в частности, СКВ) не всегда коррелирует с уровнем ААТ к ДНК (Villalta et al., 2009; Becker-Merok et al., 2006). У многих пациентов с СКВ в период устойчивой ремиссии заболевания и отсутствии клинического синдрома сохраняется высокий уровень ААТ к ДНК по сравнению с нормой. Кроме того, повышенный уровень ААТ к ДНК наблюдается и при других АИЗ, например, РА с клиническими проявлениями, отличными от СКВ. Это наводит на мысль, что не только и не столько уровень, а в большей мере свойства ААТ к ДНК определяют течение патологического процесса при развитии АИЗ и могут

различаться при разнообразных аутоиммунных патологиях.

ААТ к ДНК, вероятно, являются участниками патологического процесса, но их роль в развитии и течении СКВ, РА и других АИЗ представляется исследователям неоднозначной.

Большинство авторов поддерживают мнение о патогенетической роли гетерогенной популяции ДНК-связывающих и ДНК-гидролизующих ААТ класса IgG в аутоиммунитете (Reefman et al., 2007; Jacob et al., 2006; Isenberg et al., 2007; Kowal et al., 2004; Невзорова, 2005). Но не исключено, что ААТ к нДНК, как часть пула естественных ААТ, в норме выполняют защитную функцию, способствуя удалению трансформированных и пораженных вирусами клеток, аутоантигенов, образующихся при разрушении тканей, и поддерживая гомеостаз организма (Полетаев и Чурилов, 2009).

В исследованиях последних лет показано, что ААТ к ДНК способны не только связывать растворимые антигены и рецепторы на поверхности клеток, но и проникать через мембрану внутрь клеток, взаимодействовать с органоидами и локализоваться в ядре, влияя на метаболические процессы (Yanase and Madaio, 2005; Rivadeneyra-Espinoza and Ruiz-Argüelles, 2006; Jang et al., 2009).

Предположительно, IgG-AAT к нДНК могут быть индукторами и участниками аутоиммунного синдрома, приводя к нарушению апоптоза клеток, следствием чего является увеличение содержания апоптотических телец и времени их циркуляции в кровотоке, что часто наблюдается при СКВ и является, по крайней мере, одной их причин утраты аутотолерантности иммунной системы (Lorenz et al, 2000).

И до сих пор среди исследователей нет единого мнения о роли поликлональных IgG-AAT к нДНК в нарушении баланса клеточной гибели при развитии СКВ и РА.

Целью работы явилось исследование влияния антител класса IgG к нативной ДНК при системной красной волчанке и ревматоидном артрите на мононуклеарные клетки здоровых лиц in vitro.

Были поставлены задачи:

1. Оценить влияние антител к ДНК сывороток крови доноров, больных системной красной волчанкой на стадии обострения и в период ремиссии заболевания, больных ревматоидным артритом и клинически здоровых родственников больных ревматоидным артритом на мононуклеарные клетки здоровых лиц in vitro;

2. Изучить зависимость влияния антител класса IgG к нативной ДНК на жизнеспособность и метаболизм мононуклеарных клеток in vitro от заряда молекулы антител и аффинности к нативной ДНК;

3. Оценить генотоксичность и влияние антител класса IgG к нативной ДНК в норме и при системных аутоиммунных заболеваниях на уровень апоптоза мононуклеарных клеток здоровых лиц in vitro.

Научная новизна

Впервые на первичной культуре мононуклеарных клеток здоровых лиц показано, что патогенетический потенциал поликлональных антител класса IgG к нативной ДНК может быть обусловлен изменением их физико-химических и иммунохимических свойств (суммарного заряда молекулы и аффинности к нативной ДНК) при развитии аутоиммунной патологии и отличается в разных группах системных аутоиммунных заболеваний.

Показано, что высокоочищенные свободные от иммунных комплексов антитела класса IgG к нативной ДНК здоровых доноров и больных СКВ на стадии обострения заболевания оказывают сходное влияние на мононуклеарные клетки периферической крови здоровых лиц in vitro. Обнаружено, что положительно заряженные антитела класса IgG к нативной ДНК больных СКВ в активной стадии заболевания обладают более выраженной цитотоксичностью и генотоксичностью по сравнению с антителами доноров.

Поликлональные антитела класса IgG к нативной ДНК больных СКВ в период ремиссии заболевания не оказывают значимого влияния на мононуклеарные клетки здоровых лиц in vitro.

Показано, что наряду с положительно заряженными низкоаффинными антителами, характерными для доноров и больных СКВ на стадии обострения заболевания, высокоаффинные антитела класса IgG к нативной ДНК больных ревматоидным артритом проявляют цитотоксичность и генотоксичность в культуре мононуклеарных клеток здоровых лиц in vitro.

Влияние субфракций антител класса IgG к нативной ДНК клинически здоровых родственников больных ревматоидным артритом сходно с влиянием антител больных ревматоидным артритом.

Поликлональные антитела класса IgG к нативной ДНК при системных аутоиммунных заболеваниях приводят к повышению уровня апоптоза мононуклеарных клеток здоровых лиц in vitro.

Практическая значимость

Изучение свойств антител класса IgG к нативной ДНК в культуре мононуклеарных клеток крови здоровых лиц способствует более глубокому пониманию фундаментальных основ работы иммунной системы человека в норме и при патологии. Материалы исследования представляют интерес в области биохимии, молекулярной биологии, иммунологии и могут быть использованы в учебном процессе высших учебных заведений на биологических и медицинских факультетах.

Изменение свойств антител класса IgG к нативной ДНК в норме, при различных аутоиммунных заболеваниях, а также на разных стадиях активности патологического процесса, проявляющееся в воздействии антител на мононуклеарные клетки здоровых лиц in vitro, является специфическим маркером, отражающим изменение иммунного статуса, что может быть

использовано для создания тест-системы выявления нарушений работы иммунной системы человека.

Практическая значимость работы определяется возможностью использования субфракций антител класса ^О к нативной ДНК в качестве инструмента, позволяющего диагностировать, прогнозировать развитие и течение, проводить мониторинг состояния больных аутоиммунными заболеваниями и оценивать эффективность терапии с использованием культуры клеток.

Положения, выносимые на защиту

1. Механизм цитотоксичности ДНК-связывающих и ДНК-гидролизующих антител класса в культуре мононуклеарных клеток здоровых лиц связан с нарушением структуры ДНК хроматина клеток;

2. Цитотоксичность и генотоксичность антител класса к нативной ДНК зависит от их физико-химических и иммунохимических свойств. Изменение свойств антител класса к нативной ДНК отражает нарушения в иммунной системе при аутоиммунных заболеваниях;

3. Антитела класса ^О к нативной ДНК вносят отрицательный вклад в развитие аутоиммунных заболеваний, приводя к повышению уровня апоптоза здоровых иммунокомпетентных клеток крови человека.

и

Апробация работы

Основные результаты исследований докладывались на Всероссийской Конференции с элементами научной школы для молодежи «Структура и динамика молекулярных систем» (Казань, 2009), Научно-практической конференции биохимиков, посвященной памяти профессора В.Г. Винтера «История и достижения Казанской биохимической школы» (Казань, 2009), XIII европейском симпозиуме студентов и аспирантов-биологов «Симбиоз-2009» (Казань, 2009), I Всероссийской виртуальной интернет-конференции «Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии» (Казань, 2010), I и II Международных научно-практических конференциях «Новые концепции механизмов воспаления, аутоиммунного ответа и развития опухоли» (Казань, 2010, 2011). По материалам диссертации опубликовано 9 научных работ, в том числе 2 публикации в рецензируемых изданиях, рекомендованных действующим перечнем ВАК.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Сабирзянова, Алсу Зуфаровна

ВЫВОДЫ

1. Антитела к ДНК сывороток крови больных системной красной волчанкой на стадии обострения заболевания, ревматоидным артритом и клинически здоровых родственников больных ревматоидным артритом проявляют цитотоксичность, генотоксичность и изменяют метаболизм мононуклеарных клеток здоровых лиц in vitro.

AT к ДНК сывороток крови здоровых доноров и больных системной красной волчанкой в период ремиссии заболевания значимого влияния на мононуклеарные клетки здоровых лиц in vitro не оказывают;

2. Положительно заряженные низкоаффинные и высокоаффинные к нативной ДНК антитела класса IgG доноров и больных системной красной волчанкой на стадии обострения заболевания проявляют цитотоксичность в культуре мононуклеарных клеток здоровых лиц и приводят к нарушению клеточного метаболизма. Антитела класса IgG к нативной ДНК больных системной красной волчанкой на стадии обострения заболевания оказывают более выраженное негативное влияние на жизнеспособность и метаболизм мононуклеарных клеток здоровых лиц in vitro;

3. Субфракции антител класса IgG к нативной ДНК больных системной красной волчанкой в период ремиссии заболевания значимого влияния на мононуклеарные клетки здоровых лиц in vitro не оказывают;

4. Высокоаффинные антитела класса IgG к нативной ДНК больных ревматоидным артритом и клинически здоровых родственников больных ревматоидным артритом приводят к гибели мононуклеарных клеток здоровых лиц in vitro и нарушению клеточного метаболизма;

Цитотоксичные субфракции IgG-антител к нативной ДНК доноров, больных системной красной волчанкой на стадии обострения заболевания, больных ревматоидным артритом и клинически здоровых родственников больных ревматоидным артритом проявляют генотоксичность в культуре мононуклеарных клеток здоровых лиц in vitro. Антитела класса IgG к нативной ДНК приводят к гибели мононуклеарных клеток здоровых лиц in vitro путем апоптоза.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Сабирзянова, Алсу Зуфаровна, 2012 год

ЛИТЕРАТУРА

1. Акберова, Н.И. Описательная статистика. Интервальные оценки / Н.И. Акберова. - Казань: Издательство КГУ, 2004а. - 40 с.

2. Акберова, Н.И. Сравнение данных. II Непараметрические критерии значимости / Н.И. Акберова. - Казань: Издательство КГУ, 20046. - 50 с.

3. Анисимов, А.Г. Обработка синхронизированных клеток К562 тетрафторалюминатом не модулирует флуоресценцию бромистого этидия и 4,6-диамидино-2-фенилиндола при связывании с нуклеоидной ДНК / А.Г. Анисимов, И.А. Болотников // Цитология - 1999. - Т.41. - №8. - С. 680-684.

4. Арлеевская, М.И. Диагностические и прогностические маркеры ревматоидного артрита с точки зрения патофизиолога / М.И. Арлеевская, А.Г. Габдулхакова, А.П. Цибулькин. - Казань: Шип. 2010.-128 с.

5. Аффинная хроматография. Методы / отв. ред. П. Дин, У. Джонсон, Ф.Мидл - М.: Мир. 1988. - 278 с.

6. Бабурин, И.Н. Ревматоидный артрит: обратимость изменений / И.Н. Бабурин // Лечащий Врач. - 2007. - №5. - С. 78.

7. Бойчук, C.B. Механизмы дексаметазон-индуцированного апоптоза при атопической бронхиальной астме / C.B. Бойчук, И.Г. Мустафин, P.C. Фассахов // Пульмонология. - 2003. - №2. - С. 10-16.

8. Бунева, В.Н. Динамика уровня нуклеазной активности антител крови женщины во время беременности и лактации / В.Н. Бунева, А.Н. Кудрявцева, A.B. Гальвита [и др.] // Биохимия. - 2003. - Т.68. - №8. - С. 1088-1100.

9. Галактионов, В.Г. Иммунология / В.Г. Галактионов - М.: Изд. Центр Academia, 2004. - 528 с.

10. Генералов, И.И. Поликлональные каталитические антитела и их возможное биологическое значение / И.И. Генералов, Д.К.Новиков // Успехи соврем, биологии. - 1998.-Т. 118.-№2.-С. 178-193.

11. Дурнев, А.Д. Применение метода щелочного гель-электрофореза

изолированных клеток для оценки генотокеических свойств природных и синтетических соединений: Методические рекомендации / А.Д. Дурнев, А.К. Жанатаев, Е.А. Анисина [и др.]. - М: Издательство, 2006. - 27 с.

12. Дядык, А.И. Системная красная волчанка: современное состояние проблемы / А.И. Дядык // Украинский ревматологический журнал. - 2002. -Т.7. -№1. - С. 23-29.

13. Инжутова, А.И. Регистрация блеббинга плазматической мембраны лимфоцитов периферической крови как экспресс-метод оценки тяжести состояния больных осложненными формами гипертонической болезни / А.И. Инжутова, А.Б. Салмина, М.М. Петрова [и др.] // Бюллетень СО РАИН - 2007. - Т. 123. - №1. - С. 6-10.

14. Каратеев, Д.Е. Лефлуномид в современной патогенетической терапии раннего ревматоидного артрита / Д.Е. Каратеев // РМЖ - 2007. -Т. 15. -№26. - С. 2042-2046.

15. Комов, В.П. Биохимия / В.П. Комов, В.Н. Шведова - М.: Дрофа, 2004. - 640 с.

16. Леках, И.В. Антитела к ДНК в препаратах иммуноглобулинов и сыворотках крови здоровых людей находятся в свободном и связанном состояниях / И.В. Леках, А.М. Поверенный // Молекуляр. биология. - 1996. -Т.30. -№3. - С. 707-713.

17. Насонов, Е.Л. Современные подходы к иммунологической диагностике аутоиммунных и иммунокомплексных болезней / Е.Л. Насонов, В.В. Сура // Территориальный архив. - 1988. - №6. - С. 144-150.

18. Невзорова, Т.А. ДНК-гидролизующая активность антител к ДНК при системной красной волчанке: Дис. ... канд. биол. наук: 03.00.04: защищена 24.03.05:утв. 03.06.05 / Невзорова Татьяна Александровна. -Казань, 2005. - 170с.

19. Невзорова, Т.А. Особенности ДНК-гидролизующей активности антител при системной красной волчанке /Т.А. Невзорова, Д.А.Темников, В.Г. Винтер // Биохимия. - 2003. - Т.68. - №12. - С. 1616-1623.

20. Невзорова, Т.А. Происхождение и биологическая роль аутоантител к ДНК / Т.А. Невзорова, В.Г. Винтер // Ученые записки Казанского государственного университета. - 2006. - Т. 148. - Книга 3, Серия «Естественные науки» [Текст]. - С. 35-52.

21. Невзорова, Т.А. Механизм действия ДНК-гидролизующих AT к ДНК из крови пациентов с системной красной волчанкой / Т.А. Невзорова, В.Г. Винтер, O.A. Коновалова, М.Х. Салахов // Биохимия. - 2006. - Т.71. -№.11. -С. 1238-1246.

22. Невинский, Г.А. Каталитически активные антитела (абзимы), индуцированные химически стабильными аналогами переходных состояний / Г.А. Невинский, Д.В. Семенов, В.Н. Бунева // Биохимия. - 2000а. - Т.65. -№11.-С. 1459-1472.

23. Невинский, Г.А. Природные каталитически активные антитела (абзимы) в норме и при патологии / Г.А. Невинский, Т.Г. Канышкова, В.Н. Бунева // Биохимия. - 20006. - Т.65. -№11.- С. 1473-1487.

24. Остерман, JI.A. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот: электрофорез и ультрацентрифугирование / JI.A. Остерман - М.: Наука, 1981.-286с.

25. Пелевина, И.И. Адаптивный ответ в разных митотических циклах после облучения / И.И. Пелевина, A.B. Алещенко, М.М. Антощина [и др.] // Цитология. - 2009. - Т.5. - №1. - С. 78-83.

26. Полетаев, А.Б. Физиологическая иммунология, аутоиммунитет и здоровье / А.Б. Полетаев, Л.П. Чурилов // Вестник Международной Академии наук (Русская секция). - 2009. - №1. - С. 11-16.

27. Практическая химия белка / отв. ред. А. Дарбре - М.: Мир. 1989.-621 с.

28. Ройт, А. Иммунология / А. Ройт - М. : Мир, 2007. - 592с.

29. Рыжов, C.B. Молекулярные механизмы апоптотических процессов / C.B. Рыжов, В.В. Новиков // Российский биотерапевтический журнал - 2002. - Т. 1. - №.3. - С. 27-33.

30. Семёнов, Д.В. Иммуноглобулины класса G молока человека гидролизуют нуклеотиды / Д.В. Семёнов, Т.Г. Канышкова, Ю.Я. Кит [и др.] // Биохимия. - 1998.-Т.63.-№8.-С. 1097-1106.

31. Сидорик, JI.JI. Белковый синтез и аутоиммунитет / JT.JL Сидорик // Биополимеры и клетка. - 1992. - Т.8. - №4. - С. 3-19.

32. Сорочинская, У.Б. Применение метода ДНК-комет для оценки повреждений ДНК, вызванных различными агентами окружающей среды / У.Б. Сорочинская, В.М. Михайленко // Онкология. - 2008. - Т. 10. - №3. - С. 303-309.

33. Темников, Д.А. Антитела к ДНК сохраняют способность гидролизовать ДНК после инкубации при повышенной температуре / Д.А. Темников, Т.А. Невзорова, В.Г. Винтер // Казан, ун-т. - Казань, 2002. - Деп. в ВИНИТИ 05.03.02; №424-В2002. - 12 С.

34. Тувик, П. Ревматоидный артрит. Инструкция для пациентов / П. Тувик - Таллинн, 2008. - с. 8-11.

35. Хаитов, P.M. Иммунология / P.M. Хаитов, Г.А. Игнатьева, И.Г. Сидорович - М.: Медицина. 2000. - 432 с.

36. Шкляева, O.A. Противоопухолевая и антиметастатическая активность siPHK, РНКазы А и ДНКазы I - препаратов, способных специфически и неспецифически вызывать деградацию нуклеиновых кислот: Автореферат дис. ... канд. биол. наук: 03.00.04: / Шкляева Ольга Александровна. - Новосибирск, 2009. - 22с.

37. Шустер, A.M. Антиидиотипические и природные каталитически активные антитела/ A.M. Шустер, Г.Б. Гололобов, O.A. Квашук, А.Г. Габибов // Молекулярная биология. - 1991. - Т. 25. - №3. - С. 593-602.

38. Щуров Д.В. Каталитические антитела / Д.В. Щуров // Молекулярная биология. - 1997. - Т.31. - №1. - С.5-15.

39. Яременко, О.Б. Этиология и иммунопатогенез ревматоидного артрита / О.Б. Яременко // Клиническая иммунология. Аллергология. Инфектология. - 2005. - №1. - С. 48-51.

40. Ярилин, A.A. Апоптоз и его роль в целостном организме / A.A. Ярилин // Глаукома. - 2003а. - № 1. - С. 61-69.

41. Ярилин, A.A. Апоптоз и его роль в целостном организме / A.A. Ярилин // Глаукома. - 20036. - № 2. - С. 46-54.

42. Abedi-Valugerdi, М. Mercury-induced anti-nucleolar autoantibodies can transgress the membrane of living cells in vivo and in vitro / M. Abedi-Valugerdi, H. Hu, G. Moller // Int. Immunol. - 1999. - V.l 1. - №5. - P. 605-615.

43. Alarcon-Segovia D., Ruiz-Arguelles A., Fishbein E. Antibody to nuclear ribonucleo-protein penetrates live human mononuclear cells through Fc receptors / D. Alarcon-Segovia, A. Ruiz-Arguelles, E. Fishbein // Nature. - 1978. -V.271. - №5640. - P. 67-69.

44. Ardoin, S.P. Developments in the scientific understanding of lupus / S.P. Ardoin, D.S. Pisetsky // Arthritis Research & Therapy. - 2008. - V.10. - № 5. -P. 218-225.

45. Avalle, B. Enzymes and abzymes relationships / B. Avalle, A. Friboulet, D. Thomas // J. Mol. Catal. B: Enzymatic. - 2000. - V.l0. - P.39-45.

46. Ballestar, E. The epigenetic face of systemic lupus erythematosus / E. Ballestar, M. Esteller, B.C. Richardson // J. Immunol. - 2006. - V.176. - №12. -P. 7143-7147.

47. Barbas, S.M. Human autoantibody recognition of DNA / S.M. Barbas, H.J. Ditzel, E.M. Saloneh [et al.] // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. - 1995. - V.92. -№7.-P. 2529-2533.

48. Baumann, I. Impaired uptake of apoptotic cells into trigible body macrophages in germinal centres of patients with systemic lupus erythematosus / I. Baumann, W. Kolowos, R.E. Voll [et al.] //Arthritis and Rheumatism - 2002. -V.46.-P. 191-201.

49. Becker-Merok, A. B-lymphocyte activating factor in systemic lupus erythematosus and rheumatoid arthritis in relation to autoantibody levels, disease measures and time / A. Becker-Merok, C. Nicolaisen, H.C. Nossent // Lupus. -2006. -V.15.- 570-576.

50. Böhm, I. LE cell phenomenon: nuclear IgG deposits inhibit enzymatic cleavage of the nucleus of damaged cells and support its phagocytic clearance by PMN /1. Böhm // Biomedicine & Pharmacotherapy. - 2004. - V.58. - P. 196-201.

51. Carty, S.M. Should infection still be considered as the most likely triggering factor for rheumatoid arthritis? / S.M. Carty, N. Snowden, A.J. Silman // Ann Rheum Dis. - 2004. - V.63 - P. 46-49.

52. Chan, T.M. Identification of endothelial cell membrane proteins that bind anti-DNA antibodies from patients with systemic lupus erythematosus by direct or indirect mechanisms / T.M. Chan, I.K.P. Cheng // J. Autoimmun. - 1997. -V.10.-P. 433-439.

53. Chatenoud, L. Immune therapies of autoimmune diseases: are we approaching a real cure? / L. Chatenoud // Current opinion in immunology - 2007. -V.18.-P. 710-717.

54. Chernysheva, A.D. T cell proliferation induced by autologous non-T cells is a response to apoptotic cells processed by dendritic cells / A.D. Chernysheva, K.A. Kirou, M.K. Crow // J Immunol - 2002. - V.169. - P. 1241-1250.

55. Cook, P.R. Spectrofluorometric measurement of the binding of ethidium to superhelical DNA from cell nuclei / P.R. Cook, I.A. Brazell // Eur. J. Biochem. - 1998. - V.84. - P. 465-477.

56. Crow, M.K. Developments in the clinical understanding of lupus / M.K. Crow // Arthritis Res Ther. - 2009. - V. 11. - №5. - P. 245-255.

57. Engeland, M. Annexin V-Affinity Assay: A Review on an Apoptosis Detection System Based on Phosphatidylserine Exposure / M. Engeland, L.J.W. Nieland, F.C.S. Ramaekers // Cytometry. - 1998. - V.31. - P. 1-9.

58. Elmore, S. Apoptosis: a review of programmed cell death, toxicologic / S. Elmore // Pathology - 2007. - V.35. - №4. - P. 495-516.

59. Foster, M.H. Molecular and structural analysis of nuclear localizing anti-DNA lupus antibodies / M.H Foster, T Kieber-Emmons, M. Ohliger, M.P. Madaio // Immunol. Res. - 1994. - V. 13. - P. 186-206.

60. Frisoni, L Nuclear autoantigen translocation and autoantibody

opsonization lead to increased dendritic cell phagocytosis and presentation of nuclear antigens: a novel pathogenic pathway for autoimmunity? / L. Frisoni, L. Mcphie, L. Colonna [et al.] // J. Immunol. - 2005. - V. 175. - P. 2692-2701.

61. Gabibov, A.G. DNA-hydrolyzing autoantibodies / A.G. Gabibov, G.V. Gololobov, O.I. Makarevich [et al.] // Appl. Biochem. Biotech. - 1994. -V.47. -P.293-303.

62. Gabibov, A.G. Catalytic autoantibodies in clinical autoimmunity and modern medicine / A.G. Gabibov, N.A. Ponomarenko, E.B. Tretyak [et al.] // Autoimmun Rev. - 2006. - V.5. - №5. - P. 324-330.

63. Gill, J.M. Diagnosis of systemic lupus erythematosus / J.M. Gill, A.M. Quisel, P.V. Rocca, D.T. Walters // Am. Fam. Physician. - 2003. - V.68 - P. 2179-2186.

64. Gregersen, P.K. Genetics of rheumatoid arthritis: confronting complexity / P.K. Gregersen // Arthritis Res. - 1999. - V. 1. - №1. - P. 37-44.

65. Hartmann, A. Use of the alkaline in vivo Comet assay for mechanistic genotoxicity investigations / A. Hartmann, M. Schumacher, U. Plappert-Helbig [et al.] // Mutagenesis - 2004. - V. 19. - №. 1. - P. 51-9.

66. Heaton, P.R. Application of single-cell gel electrophoresis (comet) assay for assessing levels of DNA damage in canine and feline leukocytes / P.R. Heaton, R. Ransley, C.J. Charlton [et al.] // J Nutr. - 2002. - V.132. - №.6. - P. 1598-1603.

67. Isenberg, D. A. Fifty years of anti-ds DNA antibodies: are we approaching journey's end? / D. A. Isenberg, J. J. Manson, M. R. Ehrenstein, A. Rahman // Rheumatology. - 2007. - №.46. - P. 1052-1056.

68. Jacob, C.O. Paucity of clinical disease despite serological autoimmunity and kidney pathology in lupus-prone New Zealand mixed 2328 mice deficient in BAFF // C.O. Jacob, L Pricop, C. Putterman et al. // J. Immunol. -2006. - V. 177 - №.4. - P. 2671-80.

69. Jang, E.J. Mouse monoclonal autoantibodies penetrate mouse macrophage cells and stimulate NF-kappa B activation and TNF-alpha release /E.J.

Jang, D.H. Nahm, Y.J. Jang. 11 Immunol Lett. - 2009. - V. 124. - №.2. - P. 70-76.

70. Klareskog, L. Genes and environment in arthritis: can RA be prevented? / L. Klareskog, J. Lorentzen, L. Padyukov et al. // Arthritis Res. - 2002. -V.4.-P. 31-36.

71. Koren, E. Murine and human antibodies to native DNA that cross-react with the A and D SnRNP polypeptides cause direct injury of cultured kidney cells / E. Koren, M. Koscec, M. Wolfson-Reichlin [et al.] // J. Immunol. - 1995. -V.154.-P. 4857-4867.

72. Kowal, C. Cognition and Immunity: Antibody Impairs Memory / C. Kowal, L.A. DeGiorgio, T. Nakaoka [et al.] // Immunity - 2004. - V.21.-P. 179-188.

73. Kozyr, A.V. Anti-DNA autoantibodies reveal toxicity to tumor cell lines / A.V. Kozyr, L.P. Sashchenco, A.V. Kolesnicov [et al.] // Immunol. Lett-2002.-V.80.-P. 41-47.

74. Kubota, T. Enhancement of oxidative cleavage of DNA by the binding sites of two anti-double-stranded DNA antibodies / T. Kubota, N. Watanabe, Y. Kanai, B.D.Stollar // J. Biol. Chem. - 1996. - V.271. -№.11. - P. 6555-6561.

75. Lapteva, L. Anti-N-Methyl-D-Aspartate receptor antibodies, cognitive disfunction, and Depression in systemic lupus erythematosus / L. Lapteva, M. Nowak, C.H. Yarboro [et al.] // Arthritis and Rheumatism. - 2006. - V.54. - №.8. -P. 2505-2514.

76. Lee, E-J. Cell-penetrating autoantibody induces caspase-mediated apoptosis through catalytic hydrolysis of DNA / E-J. Lee, E-J. Jang, E. Lee [et al.] // Bioorganic and Medicinal Chemistry. - 2007. - V. 15. - P. 2016-2023.

77. Lee, W-R. Gene silencing by cell-penetrating, sequence-selective and nucleic-acid hydrolyzing antibodies / W-R. Lee, J-Y. Jang, J-S. Kim [et al.] // Nucleic Asids Research. - 2010. - V.38. - №.5. - P. 1596-1609.

78. Limaye, N. Pathogenicity of anti-DNA/glomerular autoantibodies -weighing the evidence / N. Limaye, C. Mohan // Drug Discovery Today: Disease Models. - 2004. - V.l. - №.4. - P. 395-403.

79. Lorenz, H.M. Role of apoptosis in autoimmunity / H.M. Lorenz, M.

Herrmann, T. Winkler [et al.] // Apoptosis. - 2000. - V.5. - №.5. - P. 443-449.

80. Madaio, M.P. Cellular penetration and nuclear localization of anti-DNA antibodies: mechanisms, consequences, implications and applications / M.P. Madaio, K. Yanase // J. Autoimmun. - 1998. - V.l 1. - P.535-538.

81. Mandhyan, D.D. A genome-wide ordered-subset linkage analysis for rheumatoid arthritis / D. D. Mandhyan, X. Kim-Howard , M. Gaines, S.K. // Nath. BMC Proceedings. -2007. - V.l. - P. 101-107.

82. Maniati, E. Control of apoptosis in autoimmunity / E. Maniati, P. Potter, N.J. Rogers, B.J. Morley // J. Pathol. - 2008. - V.214. - №2. - P. 190-198.

83. Mason, L. Stable expression of a recombinant human antinucleosome antibody to investigate relationships between antibody sequence, binding properties, and pathogenicity / L. Mason, A. Lambrianides, J. Haley [et al.] // Arthritis Res Ther - 2005. - V.7. - P. 71-83.

84. Marlin, D.J. Application of the Comet Assay for Investigation of Oxidative DNA Damage in Equine Peripheral Blood Mononuclear Cells / D.J. Marlin, L. Johnson, D.A. Kingston [et al.] // J. Nutr. - 2004. - V.134. - P. 2133-2140.

85. McKelvey-Martin, V.J. Two potential clinical applications of the alkaline single-cell gel electrophoresis assay: (1). Human bladder washings and transitional cell carcinoma of the bladder; and (2). Human sperm and male infertility / V.J. McKelvey-Martin, N. Melia, I.K. Walsh [et al.] // Mutat Res. - 1997. - V.375. -№2.-P. 93-104.

86. Metealf, J.A. Laboratory manual of neutrophil function / J.A. Metcalf, J.I. Gallin, W.M. Nauseef, R.K. Root-N.Y., 1985,191 p.

87. Morley, N. UVA-indused apoptosis studied by the new apo/necro-Comet-assay wich distinguishes viable, apoptotic and necrotic cells / N. Morley, A. Rapp, H. Dittmar [et al.] // Mutagenesis. - 2006. - V.21. - №.2. - P. 105-114.

88. Moscato, S. Endothelial cell binding by systemic lupus antibodies: functional properties and relationship with anti-DNA activity / S. Moscato, F. Pratesi, F. Bongiorni [et al.] // J. Autoimmun. - 2002. - V.18. - P. 231-238.

89. Nakahara, H. Anti-interleukin-6 antibody therapy in rheumatic

diseases / H. Nakahara, N. Nishimoto // Endocr Metab Immune Disord Drug Targets. - 2006. - V.6. - №.4. - P. 373-381.

90. Nevinsky, G.A. Effect of different drugs on the level of DNA-hydrolyzing polyclonal IgG antibodies in sera of patients with Hashimoto's thyroiditis and nontoxic nodal goiter / G.A. Nevinsky, A.A. Breuzov, A.G. Baranovskii [et al.] // Med. Sei. Monit. - 2001. - V.7. - №2. - P. 201-211.

91. Oliveri, M. DNase I behaves as a transcription factor which modulates Fas expression in human cells / M. Oliveri 1, A. Daga, C. Lunardi [et al.] // Eur. J. Immunol. - 2004. - V.34. -P. 273-279.

92. Patel, V.A. Apoptotic cells, at all stages of the death process, trigger characteristic signaling events that are divergent from and dominant over those triggered by necrotic cells: Implications for the delayed clearance model of autoimmunity / V.A. Patel, A. Longacre, K. Hsiao [et al.] // J Biol Chem. - 2006. -V.281. - №.8. - P. 4663-4670.

93. Pavlovic, M. Pathogenic and epiphenomenal anti-DNA antibodies in SLE / M. Pavlovic, A. Kats, M. Cavallo [et al.] // Autoimmune Dis. - 2010. -V.2010. - 18p.

94. Pisetsky, D.S. Antibody responses to DNA in Normal Immunity and Aberrant Immunity / D.S. Pisetsky // Clin. Diagn. Lab. Immunol. - 1998. - V.5. -№1. - P. 1-6.

95. Pizato, N. Fish pil alters T-lymphocyte proliferation and macrophage responses in Walker 256 tumor-bearing rats / N. Pizato, S. Bonnato, M. Piconcelli [et al.] // Nutr. - 2006. - V.22. - P. 425-432.

96. Portales-Perez, D. Penetrating anti-DNA monoclonal antibodies induce activation of human peripheral blood mononuclear cells / D. Portales-Perez, D. Alarcon-Segovia, L. Liorente // J. of Autoimmunity. - 1998. - V.l 1. - P. 563-571.

97. Reefman, E. Opsonization of late apoptotic cells by Systemic lupus erythematosus autoantibodies inhibits their uptake via an Fc-receptor-dependent mechanism / E. Reefman, G. Horst, M.T. Nijk [et al.] // Arthritis & rheumatism -2007. - V.56. -№ 10.-P. 3399-3411.

98. Reichlin, M. Characterization of anti-dsDNA antibodies: cross-reaction with SnRNP polypeptides and cell-binding abilities / M. Reichlin, B. Hahn, E. Koren // The Immunologist. - 1995. - V.3. - №3. - P.84-88.

99. Rivadeneyra-Espinoza, L. Cell-penetrating anti-native DNA antibodies trigger apoptosis through both the neglect and programmed pathways / L. Rivadeneyra-Espinoza, A. Ruiz-Argtielles // J Autoimmun. - 2006. - V.26. - №1. -P. 52-56.

100. Rubin, R.L. Anti-DNA activity of IgG F(ab')2 from normal human serum. / R.L. Rubin, R.I. Carr. // J Immunol. - 1979. - V. 122 - №.4. - P. 1604-1607.

101. Ruiz-Arguelles, A. Novel facts about an old marker: the LE cell / A. Ruiz-Arguelles, D. Alarcon-Segovia // Scand. J. Clin. Lab. Invest. - 2001. - V.61. -P. 31-37.

102. Ruiz-Arguelles, A. Penetration of anti-DNA antibodies into immature live cell / A.Ruiz-Arguelles, B. Perez-Romano, [et al.] // J. Autoimmun. - 1998. -V.ll.-P. 547-556.

103. Schmidt-Acevedo, S. LE cells result from phagocitosis of apoptptic bodies induced by antinuclear antibodies / S Schmidt-Acevedo, B. Perez-Romano, A. Ruiz-Arguelles // J. Autoimmun. - 2000. - V. 15. - P. 15-20.

104. Scolding, N.J. The neuropathology and pathogenesis of systemic lupus erythematosus / N.J. Scolding , F.G. Joseph // Neuropathol Appl Neurobiol. -2002. - V.28. - №.3. - P. 173-189.

105. Seddiki, N. Calreticulin, a potential surface receptor involved in cell penetration of anti-DNA antibodies / N. Seddiki, F. Nato, P. Lafaye [et al.] // J. Immunol. - 2001. - V.166. - P. 6423-6429.

106. Shoenfeld, Y. The idiotypic network in autoimmunity: antibodies that bind antibodies that bind antibodies / Y. Shoenfeld // Nature Medicine - 2004. -V.10. -№1. -P. 17-18.

107. Shuster, A.M. Bogomolova A.E. et al. DNA hydrolyzing autoantibodies / A.M. Shuster, G.V. Gololobov, O.A. Kvashuk, // Science. - 1992. -V.256.-P. 665-667.

108. Silman, A.J. Epidemiology and genetics of rheumatoid arthritis / A.J. Silman, J.E. Pearson // Arthitis Res. - 2002. - V.4. - P. 265-272.

109. Solt, P. Quantification of the influence of cigarette smoking on rheumatoid arthritis / P. Solt, C. Bengtsson, B. Nordmark et al. // Ann. Rheum. Dis. - 2003. - V.62. - №9. - P. 835-841.

110. Speit, G. The comet assay: a sensitive genotoxicity test for the detection of DNA damage and repair / G. Speit, A. Hartmann // Methods Mol Biol. -2006.-V.314.-P. 275-86.

111. Stuart, L. Apoptosis and autoimmunity / L. Stuart, J. Hughes // Nephrol. Dial. Transplant. - 2002. - V.17. - №5. - P.697-700.

112. Suchkov, S.V. Comparative study of catalytic (DNA-hydrolyzing) and cytotoxic properties of anti-DNA autoantibodies / S.V. Suchkov // Bull. Exp. Biol. Med. -2001.-V.131.-№4.-P. 353-355.

113. Suzuki, A. Citrullination by peptidylarginine deiminase in rheumatoid arthritis / A. Suzuki, R. Yamada, K. Yamamoto // Ann N Y Acad Sei. - 2007. -V.1108.-P. 323-39.

114. Tas, S.W. Macrophages from patients with SLE and rheumatoid arthritis have defective adhesion in vitro, while only SLE macrophages have impaired uptake of apoptotic cells / S.W. Tas, P. Quartier, M. Botto, L.A. Fossati-Jimack // Rheum Dis. - 2006. - V.65. - №.2. - P. 216-221.

115. Thiébault, C Uranium induces apoptosis and is genotoxic to normal rat kidney (NRK-52E) proximal cells / C. Thiébault, M. Carrière, S. Milgram [et al.] // Toxicol Sei. - 2007. - V.98. -№2. - P. 479-487.

116. Van Helden, P.D. Autoantibodies from patients with systemic lupus erythematosus can affect DNA and RNA synthesis in cultured cells / P.D. Van Helden, L. Van Lill, A.J. Bester, E. Hoal-Van Helden // Biochim. Biophis. Acta. -1989. - V. 1009. - №2. - P. 137-142.

117. Villalta, D. Anti-dsDNA antibody avidity determination by a simple reliable ELISA method for SLE diagnosis and monitoring / D. Villalta, P.B. Romelli, C. Savina [et al.] // Lupus. - 2003. - V. 12. - P. 31-36.

118. Vlahacos, D. Murine monoclonal anti-DNA antibodies penetrate cells, bind to nuclei, and induce glomerular proliferation and proteinuria in vivo / D. Vlahacos, M.H. Foster, A.A. Ucci [et al] // J. Am. Soc. Nephrol. - 1992. - V.2. - P. 1345-1354.

119. Wajed, J. Prevention of cardiovascular disease in systemic lupus erithematosus - proposed guidelines for risk factor mamagement / J. Wajed, Y. Ahmad, P.N. Durrington. I.N. Bruce // Rheumatology. - 2004. - V.43. - P. 7-12.

120. Walport, M.J. Lupus, DNase and defective disposal of cellular debris / M.J. Walport / Nature Genetics. - 2000. - V.25. - P. 135-136.

121. Watanabe, N. Enhancement of hidroxyl radical DNA cleavage by serum anti-dsDNA antibodies in SLE / N. Watanabe, T.Kubota, N. Miyasaka, Y.Kanai // Lupus. - 1998. - V.7. - P. 108-112.

122. Yadav, P. Antibodies Elicited in Response to EBNA-1 May Cross-React with dsDNA / P. Yadav, H. Tran, R. Ebegbe // PLoS ONE. - 2011. - V.6. -№.1.-P. 1-14.

123. Yanase, K. Receptor-mediated cellular entry of nuclear localizing anti-DNA antibodies via myosin 1 / K. Yanase, R.M. Smith, A. Puccetti [et al.] // J. Clin. Invest. - 1997. - V. 100. - № 1. - P. 25-31.

124. Yanase, K. Nuclear localizing anti-DNA antibodies enter cells via caveoli and modulate expression of caveolin and p53 / K. Yanase, M.P. Madaio // J. Autoimmun. - 2005. - V.24. - №2. - P. 145-151.

125. Yanase, K.A Subgroup of murine monoclonal anti-deoxyribonucleic acid antibodies traverse the cytoplasm and enter the nucleus in a time- and temperayure-dependent manner / K. Yanase, R.M. Smith, B Cizman [et al.] // Lab. Invest. - 1994. - V.71. - № 1. - P. 52-60.

126. Yen, J.H. Major histocompatibility complex class I-recognizing receptors are disease risk genes in rheumatoid arthritis / J.H. Yen, B.E. Moore, T. Nakajima [et al.] // J. Exp. Med. - 2001. - VI93. - №10. - P. 1159-1167.

127. Yildirim, K. Associations between acute phase reactant levels and disease activity score (DAS28) in patients with rheumatoid arthritis / K. Yildirim, S. Karatay,

M.A. Melikoglu [et al.] // Ann Clin Lab Sci. - 2004. - V.34. - №4. - P. 423-426.

128. Yung, S. Anti-DNA antibodies in the pathogenesis of lupus nephritis -

i

the emerging mechanisms / S.Yung, T.M. Chan // Autoimmun Rev. - 2008. - V.7. -№4. -P. 317-321

129. Yung, S. Effect of human anti-DNA antibodies on proximal renal tubularepithelial cell cytokine expression: implications on tubulointerstitial inflammation in lupus nephritis / R.C. Tsang, Y. Sun, J.K. Leung, T.M. Chan // J. Am. Soc. Nephrol. - 2005. - V. 16. - №11. - P. 3281-3294.

130. Zein, H.S. Structure-function analysis and molecular modeling of DNase catalytic antibodies /H.S. Zein, J.A. Teixeira da Silva, K. Miyatake // Immunol Lett. - 2010. - V. 129. - №1. - P. 13-22.

131. Zhao, Z. Cross-reactivity of human lupus anti-DNA antibodies with a-actinin and nephritogenic potential / Z. Zhao, E. Weinstein, M. Tuzova // Arthritis and Rheumatism. - 2005. - V.52. - №2. - P. 522-530.