Особенности регуляции апоптоза при опухолевых, вирусных и аутоиммунных заболеваниях тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, доктор биологических наук Белушкина, Наталья Николаевна

• Белушкина, Наталья Николаевна
• доктор биологических наук
• 2004

Оглавление диссертации доктор биологических наук Белушкина, Наталья Николаевна

Содержание

Список сокращений

Введение

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Апоптоз как общебиологический механизм гибели клеток

1.1.1. Морфологические изменения в процессе апоптоза

1.1.2. Молекулярно-биохимические изменения в процессе апоптоза

1.1.3. Пути передачи апоптотического сигнала в клетку

1.2. Белки семейства Вс1

1.2.1. Функциональные домены белков семейства Вс1-2 и их участие в формировании димеров

1.2.2.Пороформирующая активность белков семейства Вс1

1.2.3. Антиапоптотические белки

1.2.4.Проапоптотические мультидоменные белки

1.2.5.Влияние белков семейства Вс1-2 на прохождение по клеточному циклу

1.2.6. Механизм действия белков семейства Вс1

1.2.7. Взаимодействие различных путей апоптоза

1.3. Заболевания, связанные с нарушением регуляции апоптоза

1.3.1. Нарушение регуляции апоптоза при опухолевых заболеваниях.

1.3.2. Апоптоз и вирусная инфекция

1.3.3. Апоптоз и аутоиммунные заболевания

1.4. Принципы коррекции апоптоза клетки с использованием генно- 64 терапевтических подходов

ГЛАВА И. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Исследование регуляции апоптоза при онкологических заболеваниях

3.1.1. Исследование нарушений регуляции внутреннего пути апоптоза 113 при новообразованиях желудка и толстой кишки

3.1.1.1. Иммуногистохимическое исследование уровня 114 экспрессии белков семейства Вс1-2.

3.1.1.2. Выявление мутаций в (С)8-последовательности 3 экзона гена 128 Вах

3.1.2. Исследование нарушений регуляции внешнего пути апоптоза при 135 новообразованиях желудка и толстой кишки

3.1.2.1. Экспрессия Fas при новообразованиях желудка и толстой кишки

3.1.2.2. Экспрессия FasL при новообразованиях желудка и толстой кишки 140 3.2. Исследование регуляции апоптоза при вирусных заболеваниях

3.2.1. Исследование апоптоза в лимфоцитах периферической крови пациентов 146 с Т-клеточной лимфомой кожи.

3.2.1.1. Анализ геномов вирусов EBV, CMV, HSV1, HSV2 и HTLV, у 147 пациентов с Т-клеточными лимфомами кожи.

3.2.1.2. Исследование индукции апоптоза в первичной культуре 150 лимфоцитов пациентов с Т-клеточной лимфомой кожи под действием доксорубицина

3.2.2. Исследование уровня апоптоза и экспрессии белков Fas и FasL в ткани 156 печени больных хроническим вирусным гепатитом В и С.

3.2.2.1. Анализ основных клинико-лабораторных показателей 156 исследованной группы больных.

3.2.2.2. Исследование уровня апоптоза гепатоцитов и клеток лимфо- 158 гистиоцитарного инфильтрата в печени больных хроническим вирусным гепатитом В и С с помощью метода TUNEL in situ.

3.2.2.3. Иммуногистохимическое исследование уровня экспрессии белков

Fas и FasL в ткани печени больных хроническим вирусным гепатитом В и С.

3.2.2.4. Изучение взаимосвязи между уровнем апоптоза в клетках печени 168 и уровнем экспрессии белков Fas и FasL в этих клетках у больных хроническим вирусным гепатитом В и С. 3.2.3. Исследование уровня апоптоза в сравнении со степенью повреждения 170 ДНК в мононуклеарных и полиморфноядерных лейкоцитах периферической крови больных ХВГ В и С.

3.2.3.1. Исследование уровня апоптоза лейкоцитов периферической крови 173 больных хроническим вирусным гепатитом В и С непосредственно после выделения и после культивирования in vitro в течение суток.

3.2.3.2. Анализ уровня апоптоза лейкоцитов периферической крови в сравнении с уровнем сывороточного фактора некроза опухоли-a у 178 больных хроническим вирусным гепатитом.

3.3. Исследование регуляции апоптоза при аутоиммунной патологии.

3.3.1. Исследование уровня апоптоза клеток периферической крови при 181 системной красной волчанке.

3.3.1.1. Исследование взаимосвязи между уровнем повреждения ДНК и 182 апоптозом лейкоцитов.

3.3.1.2. Исследование корреляции между титром аутоантител, уровнем повреждений ДНК и апоптозом клеток крови.

3.3.1.3. Исследование предрасположенности к апоптозу различных ^^ субпопуляций лимфоцитов больных системной красной волчанке.

3.3.2. Исследование роли системы Fas/Fas-L в регуляции апоптоза при системной красной волчанке.

3.3.2.1. Исследование экспрессии CD95 (Fas) и оценка уровня апоптоза 192 различных субпопуляций лимфоцитов.

3.3.2.2. Определение растворимого sFas в плазме больных системной красной волчанке.

3.3.2.3.Определение зависимости относительного содержания sFas/Fas от содержания активированных лимфоцитов.

3.3.2.4. Изучение взаимосвязи уровня sFas и титра антиядерных антител

3.3.2.5. Изучение системы комплемента у больных СКВ.

3.3.2.6. Изучение антифосфолипидного иммунного ответа. ^^

3.4. Коррекция апоптоза на основе генной терапии

3.4.1. Изучение устойчивости клеточных линий к противоопухолевым 202 препаратам после трансфекции гена Bcl-2.

3.4.2. Регуляция устойчивости опухолевых клеток к противоопухолевым 208 препаратам с помощью антисмысловых олигонуклеотидов к гену Bcl-2.

3.4.3. Инактивация и сенсибилизация опухолевых клеток с помощью 213 трансфекции гена Вах.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Особенности регуляции апоптоза при опухолевых, вирусных и аутоиммунных заболеваниях»

Гибель клеток, наряду с пролиферацией и дифференцировкой, является фундаментальным процессом, определяющим жизнедеятельность многоклеточного организма. Интенсивные исследования клеточной гибели, выполненные в последнее десятилетие, привели к созданию определенных представлений о природе этого сложного явления, играющего важную роль в развитии ряда процессов в здоровом организме и при патологии. Вместе с тем, имеющиеся знания об особенностях биохимии алоптоза при различных патологических состояниях, в первую очередь при опухолевых, вирусных и аутоиммунных заболеваниях, явно неполны и недостаточны, что делает изучение особенностей регуляции программированной гибели клеток при этих заболеваниях весьма актуальным для медицинской биохимии.

Нарушение регуляции апоптоза сопровождает развитие различных заболеваний, связанных с усилением или, наоборот, ингибированием апоптоза. К заболеваниям, в основе которых лежит ингибирование апоптоза, относятся, в первую очередь различные опухолевые заболевания. При этом неспособность клеток вступать в апоптоз в ответ на физиологические стимулы приводит к дисбалансу между пролиферацией и гибелью клеток [17, 35, 75, 126, 206]. С нарушением регуляции апоптоза также связывают высокую устойчивость опухолевых клеток к различным химиотерапевтическим препаратам [19, 67, 75, 111, 196,203,255,258,280, 306, 334].

В последние десятилетия во многих странах мира, в том числе в России, отмечается рост заболеваемости злокачественными новообразованиями органов пищеварения, а также увеличение смертности от этих заболеваний. Наиболее часто опухолевые заболевания выявляются в пожилом возрасте (60 лет и старше), однако, все чаще подобный диагноз ставят в более молодом возрасте (40-50 лет).

Неудовлетворительное состояние онкологической помощи населению в Российской Федерации привело к росту числа лиц с IV стадией заболевания и увеличению уровня летальности на 1-ом году с момента установления диагноза. Около 80% злокачественных новообразований органов пищеварения приходится на рак желудка, поджелудочной железы и толстой кишки. Таким образом, заболевания раком желудка и толстой кишки не снижаются на протяжении многих лет. Прогресс в борьбе со злокачественными новообразованиями напрямую зависит от установления механизмов развития опухолей и их ранней диагностики [2, 6, 7, 20, 61].

Среди заболеваний, связанных с усилением апоптоза, особое внимание следует уделить вирусным и аутоиммунным заболеваниям. В последние годы широким кругом специалистов ведется интенсивное изучение проблемы хронических вирусных гепатитов В и С (ХВГ В и С), которая приобретает социальную значимость ввиду широкого распространения этих заболеваний, роста заболеваемости, особенно среди лиц молодого возраста, тяжести осложнений в виде цирроза печени и гепатоцеллюлярной карциномы и отсутствия эффективных методов лечения. Применение современных методов молекулярной и клеточной биологии позволило значительно расширить имеющиеся представления о биологии вирусов гепатита В и С (НВУ, НСУ) [76, 224, 318, 381]. Вместе с тем, многие вопросы патогенеза вирусных гепатитов остаются неясными, в частности, механизмы повреждения гепатоцитов - основной мишени действия вирусов. Открытие регулируемого процесса апоптоза [157] стимулировало изучение роли этого явления в патологии печени, в результате чего было обнаружено, что при развитии острых и хронических вирусных гепатитов на первых этапах гибель гепатоцитов происходит путем апоптоза [123, 211] Это также касается также ряда других заболеваний печени, включая аутоиммунные, лекарственные, алкогольные поражения печени. Предотвращение повреждения клеток печени при гепатите -одна из задач, которая стоит перед научными исследователями и медиками.

При вирусном гепатите апоптоз гепатоцитов может быть результатом как прямого повреждающего действия вирусной инфекции (цитопатическое действие), так и опосредованного, развивающегося в результате иммунных реакций. Цитопатическая активность вирусов гепатита В и С проявляется в процессе вирусной репликации в клетке. Традиционно считалось, что вирусы вызывают гибель клеток в результате узурпации механизмов транскрипции и трансляции и разрушения клеточной мембраны. Однако в настоящее время не вызывает сомнений, что большая часть вирусов индуцирует апоптоз инфицированной клетки [156, 352]. Существует, по крайней мере, два механизма, с помощью которых вирусы гепатита В и С активируют апоптоз:

1) путем непосредственного проапоптотического действия специфических вирусных белков, образующихся в процессе репликации вируса: X белка вируса гепатита В [158,261] и кор-белка вируса гепатита С [129, 151];

2) путем повышения концентрации на клеточной мембране тех рецепторов, через которые передается сигнал к индукции апоптоза, например, Fas [123], и увеличения чувствительности клеток к различным проапоптотическим стимулам, в частности, к TNF-a [320, 330, 380]. Таким образом, цитопатическая активность вирусов гепатита В и С проявляется в прямом или косвенном проапоптотическом действии вирусов на инфицированные клетки и вносит существенный вклад в патогенез поражения печени при вирусных гепатитах.

Известно, что в современной медицинской практике часто встречаются онкологические заболевания, ассоциированные с вирусной, например цитомегаловирусной или герпесной инфекцией. Изучение особенноствей регуляции апоптоза в таком сочетании представляет значительный интерес, т.к. позволяет судить о патогенезе сложных сочетанных форм заболеваний у конкретных больных.

Апоптоз также играет важную роль в развитии и функционировании иммунной системы [142, 172, 272]. Путем апоптоза в результате отрицательной селекции погибает 95-98% тимоцитов в период созревания тимоцитов в тимусе [297]. Апоптотическая гибель клеток иммунной системы наблюдается в периферических и центральных органах иммунной системы в процессе селекции лимфоцитов при лиганд-рецепторных взаимодействиях [146], при активации лимфоцитов [205, 332] и при уменьшении иммунного ответа после элиминации гаптена [3]. Апоптоз лимфоцитов является одним из основных механизмов поддержания толерантности к аутоантигенам путем клональной делеции аутореактивных Т- и В-лимфоцитов [222].

Известно, что аутоиммунные заболевания характеризуются поликлональной активацией В-лимфоцитов и продукцией широкого спектра антител к ядерным и цитоплазматическим антигенам. Одним из механизмов, благодаря которым осуществляется элиминация аутореактивных лимфоцитов, является апоптоз. Нарушения его регуляции вносит существенный вклад в генез аутоиммунного заболевания [221].

Понимание молекулярных механизмов клеточной гибели в норме и при различных патологиях позволяет не только понять причины заболеваний, но и осуществлять направленный поиск способов их лечения. Анализ современной литературы показывает, что основные исследования в области регуляции клеточной активности связаны с направленным введением генов в отдельные клетки человека. Учитывая важность апоптоза в функционировании органов и тканей организма, можно полагать, что ключевые гены этого процесса находятся в центре внимания исследователей [4, 5, 62, 94,237, 268, 283, 304, 335, 362].

В связи с вышеперечисленным, целью настоящего экспериментального исследования явилось изучение механизмов регуляции апоптоза при опухолевых, вирусных и аутоиммунных заболеваниях, а также исследование возможности коррекции апоптоза клеток с помощью регуляции уровня экспрессии генов белков семейства Вс1-2.

При этом были поставлены следующие задачи исследования:

1. Исследование регуляции апоптоза в новообразованиях желудка и толстой кишки с помощью проапоптотических и антиапоптотических белков семейства Вс1-2.

2. Изучение роли Вс1-2 в возникновении устойчивости клеточных линий к противоопухолевым препаратам.

3. Установление закономерности регуляции апоптоза в новообразованиях желудка и толстой кишки с помощью белков системы Рав/РавЬ.

4. Выяснение роли системы Раз/ТаБЛ в регуляции апоптоза при аутоиммунных заболеваниях на примере системной красной волчанки.

5. Исследование регуляции апоптоза при вирусных гепатитах В и С.

6. Изучение зависимости процесса апоптоза лимфоцитов от инфицированности вирусами герпетической группы у пациентов с Т-клеточной лимфомой.

7. Влияние антисмысловых олигонуклеотидов к гену Вс1-2 на устойчивость опухолевых клеток к противоопухолевым препаратам.

8. Исследование возможности генной терапии противоопухолевых клеток с помощью трансфекции гена В ах.

Научная новизна исследования. Впервые подробно исследованы особенности регуляции апоптоза при опухолевых заболеваниях ЖКТ. Определены полуколичественные показатели экспрессии белков семейства Вс1-2 и системы

Fas/FasL нетрансформированными и опухолевыми клетками, а также белков системы Fas/FasL лейкоцитами периферической крови у больных с новообразованиями желудка и толстой кишки. При исследовании экспрессии белков семейства Вс1-2 и системы Fas/FasL у больных с новообразованиями желудка и толстой кишки выявлено статистически значимое увеличение уровня экспрессии исследованных антигенов опухолевыми клетками по сравнению с нетрансформированными (р = 0,03). Установлены положительные достоверные корреляционные зависимости между процентным содержание антиген-экспрессирующих клеток и степенью экспрессии антигенов как в ^трансформированной (для Bcl-2, Вах, Bcl-X, Fas и FasL), так и в опухолевой ткани (для Bcl-2, Вах, Вс1-Х). Впервые в клеточной линии SKOV3 обнаружена мутация в гене Вах - она имеет генотип G7/G9, в отличие от нативного типа гена Вах - G8/G8, приводящая к инактивации проапоптотической активности гена Вах. Впервые обнаружено, что метастазирование регионарных лимфатических сосудов коррелирует с низкой степенью экспрессии Fas опухолевой тканью больных с новообразованиями желудка и толстой кишки.

Впервые проведено исследование уровня апоптоза клеток печени и лейкоцитов периферической крови больных ХВГ В и С как двух мишеней действия вирусов гепатита В и С. Изучен уровень апоптоза клеток печени (гепатоцитов и клеток лимфо-гистиоцитарного инфильтрата) в сравнении с уровнем экспрессии мембранных белков, участвующих в индукции апоптоза (Fas, FasL). Выявлена взаимосвязь между уровнем экспрессии FasL лимфоцитов внутрипеченочного инфильтрата и уровнем апоптоза гепатоцитов. Обнаружена защитная роль экспрессии FasL гепатоцитами от апоптоз-индуцирующего действия ЦТЛ. Впервые проведено одновременное исследование уровня апоптоза и степени повреждения ДНК мононуклеарных и полиморфноядерных ЛПК у больных ХВГ В и С.

Обнаружено, что у больных ХВГ В и С наблюдается достоверно более высокий по сравнению со здоровыми добровольцами уровень апоптоза мононуклеарных и полиморфноядерных ЛПК. Обнаружено, что наиболее высокий уровень апоптоза ЛПК наблюдался у больных с виремией и повышенным уровнем сывороточного TNF-a.

Выявлена достоверная корреляционная зависимость степени повреждения ДНК свежевыделенных ЛПК с долей клеток в состоянии апоптоза после их инкубации в культуральной среде в течение 24 часов, что свидетельствует о наличии в периферической крови не только клеток в состоянии апоптоза, но и клеток, коммитированных к нему. Впервые доказана прямая зависимость между уровнем антител к ДНК и ее фрагментам и степенью повреждения ДНК в лейкоцитах у больных системной красной волчанкой. Показано также, что уровень антиядерных антител и антител к ДНК у больных системной красной волчанкой зависел от выраженности заболевания и активности системы Fas - Fas-L. Продемонстрирована роль белка Вс1-2 в развитии лекарственной устойчивости к ряду химиотерапевтических препаратов, обусловленной гиперэкспрессией гена Bcl-2, что может играть решающую роль в химиотерапии опухолей с повышенным уровнем этого белка. Показано, что использование антисмысловых олигонуклеотидов может оказаться эффективным способом преодоления лекарственной устойчивости опухолевых клеток с высоким уровнем экспрессии Bcl-2. Впервые обнаружена высокая чувствительность клеток аденокарциномы яичника человека линии SKOV3 и клеток карциномы шейки матки человека линии HeLa к трансфекции гена Вах.

Научно-практическая значимость работы. Исследование имеет большое научно-практическое значение, так как в ходе работы проведено комплексное исследование нарушений регуляции апоптоза при новообразованиях желудка и толстой кишки, больных Т-клеточными лимфомами, вирусных гепатитах В и С, системной красной волчанкой. Установление механизмов блокирования процесса апоптоза в дальнейшем позволит установить причины нарушений и, следовательно, пути устранения последних. Показано, что регистрация однонитевых разрывов ДНК может являться тестом для выявления клеток, находящихся на ранних стадиях апоптоза или коммитированных к нему. Обнаруженный высокий уровень апоптоза гепатоцитов при ХВГ В, и особенно ХВГ С, и появление экспрессии FasL на гепатоцитах могут быть использованы в качестве новых прогностических критериев для оценки эффективности проводимой противовирусной и иммуномодулирующей терапии ХВГ. Информация о роли системы Fas - Fas-L в патогенезе СКВ, а также обнаруженная зависимость между уровнем антител к ДНК и ее фрагментам и степенью повреждения ДНК в лейкоцитах выражена в виде линейного уравнения регрессии, которое может быть использовано в клинической практике при планировании лечебных мероприятий и прогнозе исхода заболевания. Разработаны принципиальные подходы к коррекции патологии апоптоза генно-терапевтическими методами на основе трансфекции генов Вах и Вс1-2 в клетки и с помощью применения антисмысловых олигонуклеотидов к гену Вс1-2.

Апробация работы. Результаты исследований были доложены на VIII конференции "Новые направления биотехнологии» (апрель 1998, Москва), на V и VI Российской конференции «Гепатология сегодня» (март 2000 г., март 2001 г., Москва), на Всероссийском симпозиум «Клеточная биология на пороге XXI века» (октябрь 2000 г., октябрь 2001 г., Санкт-Петербург), на Научно-практическом симпозиуме «Технологии генодиагностики в практическом здравоохранении» в рамках Международной конференции «Геномика, протеомика и биоинформатика для медицины» (июнь 2002, Москва), на VIII Международном конгрессе по иммунореабилитации «Аллергия, иммунология и глобальная сеть» (апрель 2002,

Канны, Франция), на I Всероссийской научно-практической конференции «Биотерапия рака» (июнь 2002, Москва), на III международном симпозиуме «Genetic anticancer agents»(Фeвpaль 2002 г., Амстердам, Нидерланды), на специальной конференции FEBS «Signal Transduction» (июль 2003 г., Брюссель, Бельгия), на 18 конференции Европейской ассоциации по опухолевым исследованиям, июль 2004 г., Инсбрук, Австрия), на I международной конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность», а также неоднократно обсуждалась на научно-практических конференциях кафедры биохимии и НИИ молекулярной медицины ММА им. И.М. Сеченова.

Апробация работы состоялась на научно-практической конференции совместного заседания кафедры биохимии и НИИ молекулярной медицины ММА им. И.М. Сеченова 30 июня 2004 г.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 29 печатных работ в отечественных и зарубежных изданиях.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Белушкина, Наталья Николаевна

Выводы

1. При заболеваниях разной этиологии, сопровождающихся изменением иммунного статуса пациентов, нарушения апоптоза происходят как в области внешнего (система Fas/FasL), так и внутреннего пути регуляции (белки семейства Bel)

2. При развитии новообразований желудочно-кишечного тракта обнаружено увеличение антиапоптотической активности белков семейства Bel. Содержание белка Bcl-2 в опухолях желудка и тонкой кишки возрастает в полтора раза. Гиперэкспрессия белка Bcl-2 в опухолевой ткани приводила к развитию феномена лекарственной устойчивости. У 20% пациентов заболевание сопровождается наличием мутаций в третьем экзоне гена Вах. Полученные данные соотносятся с результатами исследований опухолевых клеточных линий.

3. Установлено, что уменьшение продукции белка Fas в опухолях желудочно-кишечного тракта с различной способностью к метастазированию сопровождается достоверным увеличением синтеза FasL.

4. Обнаружена более высокая чувствительность лимфоцитов больных Т-клеточной лимфомой кожи, содержащих вирус Эпштейн-Барра по сравнению с лимфоцитами, инфицированными вирусом Т-клеточной лейкемии I к индукции апоптоза, вызванного доксорубицином.

5. Показано, что увеличение апоптоза вирус-инфицированных клеток происходит за счет активации клеток иммунной системы. Доказано, что уровень апоптоза гепатоцитов при хроническом вирусном гепатите В и С прямо пропорционален степени экспрессии FasL клетками лимфо-гистиоцитарного инфильтрата в печени и обратно пропорционален уровню экспрессии FasL гепатоцитами.

6. Показано, что система Fas/FasL играет заметную роль в патогенезе системной красной волчанки. Уровень экспрессии Fas и FasL на лимфоцитах различных субпопуляций (CD3, CD4, CD8, CD 19) возрастает в зависимости от степени активности заболевания. При этом в крови пациентов было обнаружено достоверное увеличение уровня апоптоза лимфоцитов и обратная зависимость между содержанием в крови ингибитора Fas и стадией заболевания.

7. Показана принципиальная возможность использования антисмысловых олигонуклеотидов в качестве препаратов для преодоления лекарственной устойчивости опухолевых клеток, обусловленной высоким уровнем экспрессии Вс1-2.

8. Показана возможность применения подходов генной терапии на основе трансфекции Вах в качестве противоопухолевых препаратов: гиперэкспрессия Вах приводит к повышению их чувствительности к химиотерапевтическим средствам и к гибели клеток.

Заключение.

Одной из важных проблем, интересующих в настоящее время медицинскую и биологическую науку, является проблема апоптоза. Открытый более 30 лет назад этот феномен на протяжении последних лет подвергается пристальному вниманию, как со стороны биологов, так и со стороны клиницистов. Количество экспериментальных данных по исследованию программированной клеточной гибели растет стремительно и значительно опережает теоретическое осмысление полученных фактов. Сложность связана с тем, что процесс апоптоза является крайне разносторонним явлением, зависящий от типа клеток, от функционального состояния клетки (стадия дифференцировки и пролиферации, от активности репарирующей системы, окислительно-восстановительной системы и т.д). На регуляцию апоптоза также оказывают влияние межклеточные взаимодействия данной конкретной ткани и наличие или отсутствие различных регуляторных влияний.

Идентификация апоптоза также представляет существенные трудности, так как определение формы гибели клеток проводят не только по морфологическим критериям, но и по биохимическим и молекулярно-генетическим. Однако имеющиеся расхождения между различными критериями вносит неясности в описание явления апоптоза. Например, у некоторых типов клеток обнаружено несоответствие между морфологическими проявлениями апоптоза и межнуклеосомным расщеплением ДНК, которое долгое время считалось «классическим» биохимическим проявлением апоптоза. Такое положение следует считать нормальным, т.к. каждое явление имеет свою специфику, свои механизмы, свой уровень и нельзя ожидать обнаружения каких-либо универсальных выражений апоптоза, которые позволили бы создать единую картину. Огромный интерес к проблеме и интенсивные исследования молекулярных механизмов апоптоза приводят к обнаружению новых участников процесса и установлению деталей уже описанных сценариев апоптоза.

Нарушение регуляции апоптоза вызывает изменение гомеостаза и приводит к различным патологическим состояниям. Важная роль апоптоза установлена в возникновении опухолевых заболеваний, их прогрессии и чувствительности к химиотерапевтическим препаратам. Активно изучается регуляция апоптоза клеток при вирусных и аутоиммунных заболеваниях. Однако наличие индивидуальных определяющих механизмов в реализации апоптоза для разных типов клеток, а также существование общих и частных механизмов реализации программированной гибели клеток во многих случаях затрудняет интерпретацию экспериментальных результатов.

Исследование регуляции апоптоза при патологических состояниях, идентификация морфологических и биохимических маркеров апоптоза в перспективе способствует более глубокому пониманию механизмов патогенеза заболеваний, улучшению дифференциальной диагностики и созданию принципиально нового направления в терапии заболеваний.

В данной работе обобщены данные об особенностях регуляции апоптоза при онкологических, вирусных и аутоиммунных заболеваниях.

Исследована роль белков семейства Вс1-2 при опухолевых заболеваниях желудка и толстой кишки. Показано, что Вс1-2 экспрессируется подавляющим большинством клеток желудка и толстой кишки на достаточно высоком уровне. Обнаружено статистически значимое увеличение степени экспрессии Вс1-2 атипическими клетками по сравнению с нетрансформированными. Несмотря на то, что не выявлено статистически значимых различий в степени экспрессии Вс1-2 между гистологическими типами опухолей желудка и толстой кишки, при высокодифференцированных аденокарциномах наблюдается уменьшение степени экспрессии Вс1-2, что может отражать увеличение уровня апоптоза и, следовательно, более доброкачественное течение опухолевого процесса. При низкодифференцированных и недифференцированных опухолях желудка и толстой кишки обнаружено увеличение степени экспрессии Вс1-2, что может свидетельствовать о снижении уровня апоптоза и более злокачественном течение заболевания. Увеличение экспрессии гена Bcl-2 при низкодифференцированных и недифференцированных опухолях, по-видимому, играет важную роль в механизме онкотрансформации клеток и их резистености к химиотерапевтическим препаратам. Обнаружение мутаций в гене Вах свидетельствует о синтезе функционально неактивного проапоптотического белка, не способного выполнять программу реализации апоптоза. Нарушения регуляции апоптоза в опухолевых клетках также связаны с системой Fas/FasL. Уменьшение количества и уровня экспрессии Fas-положительных клеток в метастазирующих опухолях желудка и толстой кишки, способствовуют снижению уровня апоптоза при онкологических заболеваниях желудка и толстого кишечника. Увеличение уровня экспрессии FasL опухолевыми клетками желудка и толстой кишки обеспечивает «ускользание» опухоли от иммунного ответа. Обнаруженные особенности регуляции апоптоза клеток при опухолевых заболеваниях желудка и толстой кишки связаны со снижением уровня апоптоза в этих клетках, как за счет нарушения программы гибели клеток, так и за счет снижения иммунного ответа организма.

При исследовании Т-клеточных лимфом обнаружено, что вирусное инфицирование клеток мишеней предрасполагает их к индукции апоптоза, вызванного антибиотиками. Данные о реализации программы апоптоза при хронических вирусных гепатитах В и С, выявленные в настоящей работе, подчеркивают важную роль системы Раз/ТазЬ в патогенезе данных заболеваний, способствующую интенсификации гибели гепатоцитов. Также обнаружено, поражение клеточного звена иммунитета, что вносит вклад в неспособность организма элиминировать инфекцию и способствует персистенции вирусов и хронизации заболевания. Полученные результаты расширяют имеющиеся представления о тканевом тропизме вирусов гепатита В и С и позволяют объяснить многообразие клинических, в том числе и внепеченочных, проявлений вирусных гепатитов В и С.

Также обнаружено нарушение регуляции апоптоза при системной красной волчанке в результате нарушения экспрессии системы Раз/Рая!,, что приводит к увеличенному апоптозу лимфоцитов РаБ-эксперссирующих клеток периферической крови и дисбалансу клеток иммунной системы. Появление в крови большого количества аутоантигенов, по-видимому, связано с нарушением терминальных стадий реализации апоптоза, связанных с утилизацией апоптозных телец.

Значимость изучения регулируемого процесса гибели клетки - апоптоза, как в плане фундаментальных, так и в плане прикладных аспектах несомненна. Биохимическую картину развития апоптоза можно гипотетически разделить на несколько этапов, включающих действие фактора, вызывающего апоптоз, передачу сигнала с рецепторной молекулы в клеточное ядро, активацию апоптоз-специфических генов, синтез апоптоз-специфических белков и заключительную, и вместе с тем определяющую, стадию - регулируемую активацию эндонуклеаз и фрагментацию ДНК (Рис. 38). В настоящее время считается, что если клетка погибает от апоптоза, то подразумевается возможность терапевтического вмешательства, если вследствие некроза - нет. На основе знаний регуляции программированной гибели клетки используется широкий ряд подходов с целью регуляции этого процесса в различных типах клеток. Обнадеживающим с точки зрения перспективности и эффективности является возможность управления процессом гибели клеток с помощью регуляции уровня экспрессии ключевых генов,

Повреждения ДНК

Удаление ростовых факторов

Связывание специфических рецепторов

Апоптоз-специфические протеазы I

ЭНДОНУКЛЕАЗЫ Е 1

Фрагментация ДНК

Рис. 38. Последовательность биохимических событий при индукции апоптоза. контролирующих процессы апоптоза в клетках. На основании результатов, приведенных в данной работе, перспективной мишенью для воздействия на апоптоз клетки являются гены белков семейства Вс1-2. Регуляция апоптоза на основе генно-терапевтических подходов возможно как с помощью введения апоптоз-специфических генов, так и с помощью уменьшения их экспрессии с помощью антисмысловых олигонуклеотидов.

На примере генов Вс1-2 и Вах была продемонстрирована возможность регуляции апоптоза. Ген Вс1-2 был клонирован в ретровирусный вектор и осуществлена трансфекция опухолевых клеточных линий полученной конструкцией. Изучен уровень индукции апоптоза и выживаемость трансфицированных линий клеток под действием цитотоксических препаратов. Повышение экспрессии гена Вс1-2 в результате трансфекции приводило к устойчивости клеток к действию цитотоксических препаратов в результате подавления процессов апоптоза.

Усиление процессов апоптоза достигалось снижением экспрессии Вс1-2 за счет применения специфических антисмысловых олигонуклеотидов, либо за счет увеличения экспрессии проапоптотического гена Вах за счет трансфекции этого гена в клетки. Проникновение свободных олигонуклеотилов в клетки возможно только при высоких концентрациях последних, что приводит к неспецифической токсичности олигонуклеотидов на клетки. Снизить действующую концентрацию олигонуклеотида позволяет технология использования липосомообразующих агентов. Для доставки антисенсов в клетки мы использовали новый липосомообразующий агент и^есйп-М, который характеризуется достаточно высокой эффективностью трансфекции и низкой токсичностью для клеток. Применение антисмысловых олигонуклеотидов к гену Вс1-2 приводит к повышению чувствительности онкотрансформированных клеток к цитостатическим препаратам. Клонирование гена Вах было осуществлено в плазмиду рВЛ322 и полученной конструкцией трансфицировали опухолевые клетки. При этом обнаружена интенсивная гибель (90%) трансфицированных геном Вах клеток линии БКОУЗ и умеренная гибель (34%) клеток НеЬа через 24 часа после трансфекции.

Полученные результаты демонстрируют возможность избирательного управления процессами апоптоза и регуляции интенсивности гибели клеток как при использовании различных цитотоксических препаратов, регулирующих изменение метаболических процессов клеток, так и при помощи введения в клетки отдельных генов, регулирующих процессов апоптоза. Представленные результаты получены на модели пролиферирующих линий клеток, для которых существенный вклад в процессы чувствительности клеток вносят особенности метаболизма, связанные с интенсивной пролиферацией и блоком клеточного цикла при действии повреждающих факторов. В то же время в покоящихся клетках, а в тканях и органах организма человека и животных именно такие клетки составляют основную массу, процессы апоптоза могут регулироваться несколько иначе. Именно этот аспект представляет несомненный интерес при переходе к организменному уровню.

Список литературы диссертационного исследования доктор биологических наук Белушкина, Наталья Николаевна, 2004 год

1. Аббасова С.Г., Липкин В.М., Трапезников H.H., Кушлинский Н.Е. Система Fas-FasL в норме и при патологии // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. 1999.- №3.- С.3-17

2. Аксель Е.М., Казубская Т.П., Белев Н.Ф. и др. Генетика рака желудочно-кишечного тракта. 2001. -№4.~ Т. З.-С. 141-145

3. Барышников. А.Ю. , Шишкин Ю.В. Иммунологические проблемы апоптоза //Москва.-2002. С. 18-37.

4. Баснакьян А.Г., Басков A.B., Соколов H.H., Борщенко И.А. Апоптоз при травматическом повреждении спинного мозга: перспективы фармакологической коррекции// Вопросы медицинской химии.- 2000.- № 5.-С.

5. Белецкий И.П., Сорокина О.В., Никонова Л.В. Генная терапия на основе системы Раз-антиген-Раз-лиганд // Вопросы биологической медицинской и фармацевтической химии 1999. - №4. - С.40-49

6. Воробьев Г.И., Одарюк Т.С., Шелыгин Ю.А. Диагностика и лечение рака толстой кишки // Русский медицинский журнал. 1998. -том 6. -№ 19. -с. 1244-1256

7. Гарькавцева Р.Ф., Давыдов М.И., Ушакова Т.И. и др. Злокачественные новообразования желудочно-кишечного тракта: основные статистические показатели и тенденции // Современная онкология. 2001. - №4. - Т. 3. - С. 151153

8. Жданов Р.И. Генная терапия: надежды и реалии // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. 1999. - №4. - С.3-6.

9. Змызгова A.B., Москалева Е.Ю., Максимов С.Л. и др. Структура ДНК лейкоцитов периферической крови и показатели клеточного иммунитета больных вирусным гепатитом В // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. -1999, №2, с. 16-19

10. Лунькова Л.К.,Макарова О.В., Каниболоцкий A.A., Миткова C.B. Морфология органов иммунной системы при наркомании // Архив патологии.-2002.-№4. -С.21-25

11. Лушников Е.Ф., Абросимов А.Ю. Гибель клетки (апоптоз). М.: Медицина, 2001. -192 с.

12. Молекулярная клиническая диагностика. Методы: Пер. с англ./ Под ред. С Херрингтона, Дж. Макги. М.: Мир, 1999. - 558 с.

13. Нестерова М.В., Чо-Чанг Ю.С., Северин Е.С. Роль антисмысловых олигонуклеотидов в регуляции клеточных процессов. // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. 1998. - №4. - С.3-14.

14. Петрова У. Н., Радыгина Т. В., Лыскина Г. А., Продеус А. П. Современные аспекты этиопатогенеза системной красной волчанки // вопр. Гематол. И иммунопатол. В педиатр. 2002. - Т. 1, № 1. -С.92-94.

15. Практическая химия белка: Пер. с англ./ Под ред. А. Дарбле. М.: Мир, 1989. - 623 с.

16. Программированная клеточная гибель под ред. Новикова B.C., Санкт-Петербург.-1996.

17. Северин С.Е. Биохимия и медицина новые подходы и достижения. - М.: Русский врач, 1998. - 96с.

18. Сладкова Л. В., Москалева Е. Ю., Посыпанова Г. А. и др. Устойчивость В-клеточных линий человека с разным уровнем экспрессии Вс1-2 к противоопухолевым препаратам / / Вопр. биол., мед. и фарм. химии. — 2000. — № 3, —С. 25-29.

19. Смирнов А.Б. Заболеваемость раком желудка. http://www.sci.aha.ru/ATL/ra531.htm. -1998

20. Федоров Н.А., Суханов Ю.С., Асади Мобархан А.Х., Артемьев М.И. Полимеразная цепная реакция (ПЦР). Методическое пособие для начинающих/Принципы и практические рекомендации для ее постановки с целью детекции микроорганизмов. - 1996.- 33 с.

21. Чемерис А.В., Ахунов Э.Д., Вахитов В.А. Секвенирование ДНК. М.: Наука, 1999. -429 с.

22. Ackermann Е. J., Taylor J. К., Narayana R. et al. The role of antiapoptotic Bcl-2 family members in endothelial apoptosis elucidated with antisense oligonucleotides // The journal of biological chemistry. 1999. - Vol. 274. - N. 16. - P. 11245-11252

23. Adrain C., Creagh E. M., Martin S. J. Apoptosis-associated release of Smac/DIABLO from mitochondria requires active caspases and is blocked by Bcl-2 // The EMBO journal.- 2001. Vol. 20. - N. 23. - P. 6627-6636

24. Akshay KV., Orlinick J R. The molecular basis for apoptotic defects in patients with CD95 (Fas/Apo-1) mutations// J Clin Invest. 1999. - Vol. 103, №. 3. - P. 355-363.

25. A1 Maini MH., Mountz JD., AlMohri HA., et al. Serum levels of soluble Fas correlate with induces of organ damage in systemic lupus erythematosus// Lupus. 2000. - Vol. 9. -P.132-139.

26. Almawi W.Y., Melemedjian O. K., and Abou Jaoude M. M. On the link between Bcl-2 family proteins and glucocorticoid-induced apoptosis // J. Leukoc. Biol. 2004. -V. 76. -P. 7-14

27. Ambar B.B., Frei K., Malipiero U. et al. Treatment of experimental glioma by administration of adenoviral vectors expressing Fas ligand //Hum Gene Ther.-1999.- V. 10,- P. 1641-1648.

28. Andrade F., Casciola-Rosen L., Rosen A. apoptosis in systemic lupus erythematosus. Clinical implications// Rheum Dis Clin North Am. 2000. - Vol.26. - P.215-27.

29. Antonsson B. Bax and other pro-apoptotic Bcl-2 family "killer-proteins" and their victim the mitochondrion // Cell Tissue Res. 2001. - Vol. 306. - N. 3. - P. 347-361

30. Antonsson B., Montessuit S., Sanchez B. et al. Bax is present as a high molecular weight oligomer/complex in the mitochondrial membrane of apoptotic cells // The journal of biological chemistry.-2001.-Vol. 276.-N. 15-P. 11615-11623

31. Aoki K., Akyurek L.M., San H., et al. Restricted expression of an adenoviral vector encoding Fas ligand (CD95L) enhances safety for cancer gene therapy// Mol Ther. -2000.-V.l.-P. 555-565

32. Arafat W.O., Gomez-Navarro J., Xiang J. et al. An adenovirus encoding proapoptotic Bax induces apoptosis and enhances the radiation effect in human ovarian cancer// Molecular Therapy.-2000.-V.1.-P. 545-554

33. Aral H., Gordon D., Nabel E. G., Nabel G. J. Gene transfer of Fas ligand induces tumor regression in vivo // Proc. nat. Acad. Sci. USA. 1997. - Vol. 94, N 25. - P. 1386213867.

34. Arends M. J., Wyllie A. H. Apoptosis. Mechanism and role in pathology // Inlern. Rev. Exp. Pathol. -1991. Vol.32. - P.223-254.

35. Aschoff A. P., Ott U., Funfstuck R. et al. Colocalisation of Bax and Bcl-2 in small intestine and kidney biobsies with different degrees of DNA fragmentation // Cell Tissue Res. 1999.-Vol. 296.-P. 351-357

36. Ashkenazi A., Pai, R.C., Fong S. et al. Safety and antitumor activity of recombinant soluble Apo2 ligand// Clinical Investigation. 1999.- V. 104. - P. 155-162

37. Ayhan A., Yasui W., Yokozaki H. et al. Loss of heterozygosity at the Bcl-2 gene locus and expression of Bcl-2 in human gastric and colorectal carcinomas // Jpn. J. Cancer research. 1994. - Vol. 85. - N. 6. - P. 584-591

38. Bardelli A. HGF receptor associates with the anti-apoptotic protein Bag-1 and prevents cell death // The EMBO journal. 1996. - Vol. 15. - P. 6205-6212

39. Basanez G., Nechushtan A., Drozhinin O. et al. Bax, but not Bcl-XL, decreases the lifetime of planar phospholipid bilayer membranes at subnanomolar concentrations // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1999. - Vol. 96. - N. 10. - P. 5492-5497

40. Basanez G., Zhang J., Chau B. N. et al. Pro-apoptotic cleavage products of Bcl-XL form cytochrome c-conducting pores in pure lipid membranes // The journal of biological chemistry. 2001. - Vol. 276. - P. 31083-31091

41. Batteux F., Tourneur L, Trebeden H. et al. Gene therapy of experimental autoimmune thyroiditis by in vivo administration of plasmid DNA coding for Fas ligand // J. Immunol. — 1999. — Vol. 162, N 1. P. 603-608.

42. Baumann H., Gearing D., Ziegler S. F. Signaling by the cytoplasmic domain of hematopoietin receptors involves two distinguishable mechanisms in hepatic cells // J. Biol. Chem. — 1994,- Vol. 269, N 23. P. 16297-16304.

43. Bellgrau D., Gold D., Selawry H. et al. A role for CD95 ligand in preventing graft rejection // Nature. — 1995. — Vol. 377, N 6550. P. 630-632.

44. Bennett M.W., O'Connell J., Houston A. et al. Fas ligand upregulation is an early event in colonic carcinogenesis // J. Clin. Pathol. 2001. - Vol. 54. - N. 8. - P. 598-604

45. Bennett M.R. Apoptosis in the cardiovascular system// Heart.- 2002.-V. 87.- № 5.-P. 480-487

46. Bennett M.W., O'connell J., O'sullivan G.C. et al. Expression of Fas ligand by human gastric adenocarcinomas: a potential mechanism of immune escape in stomach cancer // Gut. 1999.-Vol. 44.-N. 2.-P. 156-162

47. Berke G. Killing mechanisms of cytotoxic lymphocytes. Curr Opin Hematol 1997;4:32-40

48. Berman M. L, Silhavy T. J., Enquist L. W. Experiments with gene fusions. — New York, 1984.

49. Biswas S. K., Huang J., Persaud S., and Basu A. Down-regulation of Bcl-2 is associated with cisplatin resistance in human small cell lung cancer H69 cells //Mol. Cancer Ther.-2004.-V.3.-P. 327-334

50. Bodmer J. TRAIL receptor-2 signals apoptosis through FADD and caspase-8 //Nature Cell Biology. 2000. - V. 2.- P. 241-243

51. Boerrigter ME., Mullaart ET., Van der Schans G. P., Vijg I. Quiescent human peripheral blood lymphocytes do not contain a sizable amount of preexistent DNA single-strand breaks // Exp. Cell Res. 1989. - Vol. 180. - P. 569 - 573.

52. Boerrigter M. E. T. I., Mullaart E., Van der Schans G. P., Vijg I. Illusory DNA breaks in quiescent lymphocytes? // Cancer Res. 1990. - Vol. 188. - P. 1 -4.

53. Bonavida B., Ng C.P., Jazirehi A., Schiller G., and Mizutani Y. Selectivity of TRAIL-mediated apoptosis of cancer cells and synergy with drugs: the trail to non-toxic cancer therapeutics //International Journal of Oncology.-1999.-V. 15. P. 793-802

54. Bortner C D et al. The role of DNA fragmentation in apoptosis. Trends in cell biology 1995;5:21-26.

55. Bosari S., Moneghini L., Graziani D. et al. bcl-2 oncoprotein in colorectal hyperplastic polyps, adenomas, and adenocarcinomas // Hum. Pathol. 1995. - Vol. 26. - N. 5. - P. 534-540

56. Brada M. Bcl-2 gene: current relevance to clinical oncology // Eur. J. Cancer. 1992. -Vol. 28. - P. 270-272.

57. Brady H.J.M., Gil-Gomez G. Molecules in focus Bax. The pro-apoptotic Bcl-2 family member, Bax // The international journal of boichemistry and cell biology. 1998. - Vol. 30. - P. 6407-650

58. Branet F., Brousset P., Krajevski S. Expression of the cell death inducing gene Bax in carcinomas developed from the follicular cells of the thyroid gland // Journal of clinical endocrinology and metabolism. 1996. - Vol. 81. -N. 7. - P. P2726-P2730

59. Bresalier R. S. Colorectal cancer // Cancer and metastases reviews.-2004.-V.23.-P.7-10

60. Bunnel B.A., Morgan R.A. Gene therapy for infectious diseases // Clin. Microb. Rev. -1998. V.l 1. - N.l. - P.42-56

61. Butler L.M., Hewett P.J., Butler W.J. et al. Down-regulation of Fas gene expression in colon cancer is not a result of allelic loss or gene rearrangement // Br. J. Cancer. 1998. -Vol. 77.-N. 9.-P. 1454-1459

62. CandeC., Vahsen N., Garrido C., Kroemer G. Apoptosis-inducing factor (AIF)- caspase independent after all //Cell death. 2004. - V.l 1 - P.591-595

63. Chandra D., Liu J.-W., Tang D. G. Early Mitochondrial activation and cytochrome c up-regulation during apoptosis // The journal of biological chemistry. 2002. - Vol. 277. -N. 52.-P. 50842-50854

64. Chang B. S., Minn A. J., Muchmore S.W. et al. Identification of a novel regulatory domain in Bcl-XL and Bcl-2 // The EMBO journal. 1997. - Vol. 16. - N. 5. - P. 968977

65. Chao D. T., Korsmeyer S. J. Bcl-2 family: regulators of cell death // Annu. Rev. Immunol. 1998. - Vol. 16. - P. 395-419

66. Charalambous G. K., Gomatos I. P., Konstadoulakis M. M. et al. Protein expression of Bax, Bcl-2, and p53 in patients with non-Hodgkin's gastric lymphoma: prognostic significance // World j. Surg. 2000. - Vol. 24. - P. 608-614

67. Chen Y., Wilson J. M. Fas ligand — a double-edged sword // Nature Biotechnol. 1998. -Vol. 16, N 11.-P. 1011-1012.

68. Cheng J., Zhou T. Protection from Fas-mediated apoptosis by a soluble form of Fas molecule // science. 1994. - Vol. 263. - P. 1759-1762.

69. Chinnaiyan A.M., O'Rourke K., Lane B.R., Dixit V.M. Interaction of Ced-4 with Ced-3 and Ced-9: a molecular frame for cell death // Science. 1997. - Vol. 275. - P. 1122-1126

70. Chizari FV, Ferrari C. Hepatitis B virus immunopathogenesis//Annu Rev Immunol 1995, 13.29-60

71. Ciardiello F. and Tortora G. Inhibition of bcl-2 as cancer therapy // Ann. One. 2002.-V.13(4). - P. 501 -502

72. Cohen J. Apoptosis: the physiologic pathway of cell death // Hosp. Pract. 1993. -Vol.28.-N12.- P.35-43.

73. Crovatto M., Pozatto G., Zorat F. et al. Peripheral blood neutrophils from hepatitis C virus-infected patients are replication sites of the virus//Haematologica 85 (4), 356-361 (2000)

74. Cuconati A., White E. Viral homologs of BCL-2: role of apoptosis in the regulation of virus infection // Genes Dev. 2002. - Vol. 16. - N. 19. - P. 2465-2478.

75. Curiel D.T., Douglas J.T. Adenoviral Vectors for Gene Therapy. Academic Press. 2002. - C.677

76. Dutton G. Debating Gene Therapy's Future // Genetic Engineering News. 2000. -V.20. - № 1.

77. Eissa S., Seada L.S. Quantitation of Bcl-2 protein in bladder cancer tissue by enzyme immunoassay: comparison with Western blot and immenohistochemistry // Clinical chemistry. 1998. - Vol. 44. -N. 7. - P. 1423-1429

78. Eskes R., Antonsson B.,Osen-Sand A. et al. Bax-induced cytochrome c release from mitochondria is independent of the permeability transition pore but highly dependent on Mg2+ ions // The journal of cell biology. 1998. - Vol. 143. - P. 217-224

79. Eskes R., Desagher S., Antonsson B. Bid induces the oligomerization and insertion of Bax into the outer mitochondrial membrane // Molecular and cellular biology. 2000. -Vol. 20. -N. 3. - P. 929-935

80. Fadok V.A., Bratton D.L., Henson P.M. Phagocyte receptors for apoptotic cells: recognition, uptake, and consequences// J. Clin. Invest.- 2001.-V. 108.-№7.-P.957-962.

81. Farid P., Gomb S.Z., Peter I. et al. Bcl-2, p53 and Bax in thyroid tumors and their relation to apoptosis // Neoplasma. 2001. - Vol. 48. -N. 4. - P. 299-301

82. Ferrante A., Thong Y.H. A rapid one-step procedure for purification of mononuclear and polymorphonuclear leukocytes from human blood using a modification of the Hypaque-Ficoll technique // J. Immunol. Methods. 1978. - Vol. 24. - P. 389-393

83. Ferraro E., Corvaro M., Cecconi F. Physiological and pathological roles of Apafl and apoptosome// J.Cell.Mol.Med.- 2003,- V.7.-P.21-34

84. Feudis P., Vignati S., Rossi C., et al., Driving p53 response to Bax activation greatly enhances sensitivity to taxol by inducing massive apoptosis.//Neoplasia. 2000. - Vol.2. - P.202-207.

85. Finucane D. M., Bossy-Wetzel E., Waterhouse N. J. et al. Bax induced caspase activation and apoptosis via cytochrome c release from mitochondria is inhibitable by Bcl-XL // The journal of biological chemistry. 1999. - Vol. 274. - N. 4. - P. 2225-2233

86. Franziska Oberhammer et al. Apoptotic death in epithelial cells: cleavage of DNA to 300 and/or 50kb fragments prior to or in the absence of internucleosomal fragmentation. EMBO 1993; 12: 3679-3684.

87. Friess H., Lu Z., Graber H. U. et al. Bax, but not Bcl-2, influences the prognosis of human pancreatic cancer // Gut. 1998. - Vol. 43. - P. 414-421

88. Galle PR, Hoffmann WJ, Walsczac H et al. Involvement of the CD 95 (APO-l/Fas)receptor and ligand in liver damage. J Exp Med 1995; 182: 1223-30

89. Gaumann A., Tews D.S., Mayer E. et al. Expression of apoptosis-related proteins, p53, and DNA fragmentation in sarcomas of the pulmonary artery // Cancer. 2001. - Vol. 92.-N. 5.-P. 1237-1244

90. Gene Medicine Therapy Clinical Trials// www.wiley .co.uk

91. Gewirtz M. Oligonucleotide Therapeutics: A Step Forward // J. Clin. Oncol. 2000.-V. 18(9).-P. 1809- 1811

92. Gil J., Yamamoto H., Zapata J. M. et al. Impairment of the proapoptotic activity of Bax by missense mutations found in gastrointestinal cancers // Cancer research. 1999. -Vol. 59.-P. 2034-2037

93. Glaser V. Antisense Drug Hope to Enter the Mainstream // Genetic Ingineering News. -2003.- Vol.23.- No.18.-P.l-14

94. Golstein P. Controlling cell death // Sceince 1997, v.275, p.1081-1082.

95. Gong B., Chen Q., Endlich B. et al. Ionizing radiation induced Bax mediated cell death is dependent on activation of cysteine and serine proteases // Cell Growth & Differentiation. -1999.-Vol. 10.-P. 491-502

96. Grady W.M. Genomic instability and colon cancer// Cancer and metastases reviews.-2004.-V.23.-P. 11-27

97. Green D. R., Ware C. F. Fas-ligand: privilege and peril // Proc. nat. Acad. Sci. USA. 1997. - Vol. 94, N 12. - P. 59865990

98. Griffith T.S., Brunner T., Fletcher S.M., Green D.R. and Ferguson T.A. Fas ligand-induced apoptosis as a mechanism of immune privilege// Science.- 1995.-V. 270.-P. 1189-1192

99. Groeger A.M., Esposito V., Cassandro R. et al. A model of BAX gene delivery to human lung cancer// Anticancer Res. 2001.- V.21(5).- P.3627-3630

100. Gross A., Jockel J., Wei M.C., Kosmeyer S.J. Enforced dimerization of Bax results in its translocation, mitochondrial disfunction and apoptosis. // EMBOj. 1998. -Vol.17. - P.3878 - 3885.

101. Gross A., McDonnell J. M., Korsmeyer S. J. Bcl-2 family members and the mitochondria in apoptosis // Genes Dev. 1999. - Vol. 13. - N. 15. - P. 1899-1911

102. Gu J., Zhang L., Huang X., Lin T. et al. A novel single tetracycline-regulative adenoviral vector for tumor-specific Bax gene expression and cell killing in vitro and in vivo //Oncogene. -2002.-V. 18-21(31).-P.4757-4764

103. Guo B., Godzik A., Reed Y.R. Bcl-G, a novel pro-apoptotic member of the Bcl-2 family // The journal of biological chemistry. 2001. - Vol. 276. - N. 4. - P. 2780-2785

104. Guo Bin, Cao Sh., Toth K. et al. Overexpression of Bax enchances antitumor activity of chemotherapeutic agents in human head and neck squamous cell carcinoma.// Clin Cancer Res. 2004 - Vol.6. - P.718-724.

105. Guo Y., Srinivasula S. M., Druilhe A. et al. Caspase-2 induces apoptosis by releasing proapoptotic proteins from mitochondria// The journal of biological chemistry. 2002. - Vol. 277. - P. 13430-13437

106. Hague A., Moorghen M., Hicks D. et al. Bcl-2 expression in human colorectal adenomas and carcinomas // Oncogene. — 1994. Vol. 9. - P. 3367-3370.

107. Hall W.W., Lin C.R., Shneewind O. Detected HTLV1 in blood and cutaneous lesions of patients with mycosis fungoides // Science. 1991. - V.253. - P.317-320

108. Hardwick J.M. Virus-induced apoptosis // Adv. Pharmacol. -1997, v.41, p.295-336.

109. Harima Y., Harima K., Shikata N. et al. Bax and Bcl-2 expressions predict response to radiotherapy in human cervical cancer // J. Cancer research. Clin. Oncol. 1998. - Vol. 124.-P. 503-510

110. Harris M. H., Heiden M. G. V., Kron S. J. et al. Role of oxidative phosphorylation in Bax toxicity // Molecular and cellular biology. 2000. - Vol. 20. - N. 10. - P. 35903596

111. Haunstetter A., Izumo S. Apoptosis: basic mechanisms and implications for cardiovascular disease// Circ. Res.- 1998-V. 82.- №1 l.-P.l 111-1129

112. Hay S., Kannourakis G. A time to kill: viral manipulation of the cell death program// J. Gen. Virol.- 2002.-V. 83.-P. 1547-1564

113. Hayashi, N., E. Mita. Fas system and apoptosis in viral hepatitis. J. Gastroenterol. Hepatol. 12: S223-S226, 1997

114. Hedlund T.E., Meech S.J., Srikanth S., Kraft A.S., Miller G.J., Schaack J.B. and Duke R.C. Adenovirus-mediated expression of Fas ligand induces apoptosis of human prostate cancer cells // Cell Death Differ.- 1999.-V. 6. P. 175-182

115. Heiden M. G. V., Chandel N. S., Li X. X. et al. Outer mitochondrial membrane permeability can regulate coupled respiration and cell survival // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2000. - Vol. 97. - N. 9. - P. 4666-4671

116. Hengarten O.M. The Biochemistry of apoptosis // Nature. 2000. - Vol.407. -P.770-775.

117. Hersh E. M., Stopeck A. T. Advances in the biological therapy and gene therapy of malignant disease//Clin. Cancer Res. —1997. Vol. 12, Pt 2. - P. 2623-2639.

118. Hiramatsu N, Hayashi N, Katayama K et al. Immunohistochemical detection of Fas antigen in liver tissue of patient with chronic hepatitis C. //Hepatology. 1994.- V. 19.-P.1354-1359

119. Hirotani M., Zhang Y., Fujita N. et al. NH2-terminal BH4 domain of Bcl-2 is functional for heterodimerization with Bax and inhibition of apoptosis // The journal of biological chemistry. 1999. - Vol. 274. - N. 29. - P. 20415-20420

120. Ho V., Baadsgaard O., Lee P.Y.P., Genotipic analysis of T-cell clones arrived from cutaneous T-cell lymphoma lesions demonstrates selective growth of tumor infiltrating T-lymphocytes // J.Invest.Derm. 1990. - V.95. - P.4-8

121. Hockenbery D. Defining apoptosis. Review // Amer. J. Pethol. 1995. - Vol.146. - P.16-19.

122. Hoetelmans R.W.M., Slooten H-J, Keijzer R. et al. Bcl-2 and Bax proteins are present in interphase nuclei of mammalian cells. //Cell death and Different. 2000. -Vol.7.-P.384-392.

123. Holler N., Tardivel A., Kovacsovics-Bankowski M. et al. Two adjacent trimeric Fas ligands are required for Fas signaling and formation of a death-inducing signaling complex // Molecular and Cellular Biology. 2003. - Vol. 23. - N. 4. - P. 1428-1440

124. Honda M, Kaneko S, Shimazaki T. et al. Hepatitis C virus core protein induces apoptosis and impairs cell-cycle regulation in stably transformed Chinese hamster ovary cells// Hepatology 2000, 31(6), 1351-1359,

125. Honda T., Kagawa S., Spurgers K.B. et al. A recombinant adenovirus expressing wild-type Bax induces apoptosis in prostate cancer cells independently of their Bcl-2 status and androgen sensitivity// Cancer Biol. Ther. 2002.- V.I(2).-P. 163-167

126. Hsu Y.-T., Youle R. J. Nonionic detergents induce dimerization among members of the Bcl-2 family // The journal of biological chemistry. 1997. - Vol. 272. - N. 21. -P. 13829-13834

127. Huang D.C.S., O'Reilly L. A., Strasser A. et al. The anti-apoptosis function of Bcl-2 can be genetically separated from its inhibitory effect on cell cycle entry // The EMBO journal.- 1997.-Vol. 16.-N. 15.-P. 4628-4638

128. Huang D.C.S., Hahne M., Schroeter M. et al. Activation of Fas by FasL induces apoptosis by a mechanism that cannot be blocked by Bcl-2 or Bcl-XL // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1999. - Vol. 96. - P. 14871-14876

129. Huang X., Lin T., Gu J. et al. Combined TRAIL and Bax gene therapy prolonged survival in mice with ovarian cancer xenograft //Gene Ther. 2002.- V.9(20).-P.1379-1386.

130. Huh W.K., Gomez-Navarro J., Arafat W.O., Xiang J., Mahasreshti P.J., Alvarez R.D. Bax-induced apoptosis as a novel gene therapy approach for carcinoma of the cervix//J. Gynecol Oncol. 2001V.83(2).-P.370-377

131. Ilyas M., Hao X.P., Wilkinson K. et al. Loss of Bcl-2 expression correlates with tumour recurrence in colorectal cancer // Gut. 1998. - Vol. 43. - N. 3. - P. 383-387

132. Inohara N., Ekhterae D., Garcia I. et al. Mtd a novel Bcl-2 family member activates apoptosis in the absence of heterodimerization with Bcl-2 and Bcl-XL // The journal of biological chemistry. - 1998. - Vol. 273. -N. 15. - P. 8705-8710

133. Ionov Y., Yamamoto H., Krajewski S. et al. Mutational inactivation of the proapoptotic gene Bax confers selective advantage during tumor clonal evolution // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2000. - Vol. 97. -N. 20. - P. 10872-10877

134. Jansson A., Sun X.F. Bax expression decreases significantly from primary tumor to metastasis in colorectal cancer // J. Clin. Oncol. 2002. - Vol. 20. - N. 3. - p. 811-816

135. Jeremias, I. and Debatin, K.M. TRAIL induces apoptosis and activation of NF kappa B // European Cytokine Network. 1998. - V. 9. -P. 687-688.

136. Jeremy McNally et al. Fas ligand expression and function in systemic lupus erythematosus. J. Immunol. 1997; 159: 4628-4636.

137. Jerrold S., Koh LS. The role of apoptosis in autoimmunity: Immunogen, antigen, and accelerant// Seminars in Nephrology. 1999. -Vol.19. -P.34-47.

138. Johnson A. L. Editorial: Mcl-1 just another antiapoptotic Bcl-2 homolog? // Endocrinology. - 1999. - Vol. 140. - N. 12. - P. 5465-5468

139. Joyner A.L. Gene Targeting. Oxford. 2003. - C.293

140. Ju S T. et al. Fas (CD95)/FasL interactions required for programmed cell death after activation. Nature 1995; 373: 444

141. Kagawa S., Pearson S.A., Ji L. et al. A binariy adenoviral vector for expressing high levels on the proapoptotic gene bax.// Gene Ther. 2000. - Vol.7. - P.75-79.

142. Kagawa Sh., Gu J., Swisher S., et al. Antitumor effect of adenovirus-mediated Bax gene transfer on p53-sensitive and p53-resistant cancer lines. // Cancer Res. 2000. -Vol.60. -P.l 157-1161.

143. Kaklamanis L., Savage A., Whitehouse R. et al. Bcl-2 protein expression: association with p53 and prognosis in colorectal cancer // Br. J. Cancer. 1998. - Vol. 77.-N. 11.-P. 1864-1869

144. Kaliberov S.A., Buchsbaum D.J., Gillespie G.Y. et al. Adenovirus-mediated transfer of BAX driven by the vascular endothelial growth factor promoter induces apoptosis in lung cancer cells // Mol. Ther. 2002.- V.6(2).-P. 190-198

145. Kalkeri G, Khalap N, Garry RF et al. Hepatits C virus protein expression induced apoptosis in HepG2 cells//Virology 2001, 282(1), 26-37

146. Kang P.M., Izumo S. Apoptosis and heart failure: A critical review of the literature// Circ. Res.- 2000.-V. 86,- № 11 .-P. 1107-1113

147. Kang S. M., Schneider D. ., Lin Z. et al. Fas- ligand expression in islets of Langerhans does not confer immune privilege and instead targets them for rapid destruction //Nature Med. —1997. Vol. 3, N 7. - P. 738-743.

148. Kato N, Yoshida H, Kioko Ono-Nita S. et al. Activation of intracellular signaling by hepatitis B and C viruses: C-viral core is the most potent signal inducer//Hepatology 2000, 32(2), 405-412

149. Kawaguchi Y., Takebayashi H., Kakizuka A. et al. Expression of Fas-estrogen receptor fusion protein induces cell death in pancreatic cancer cell lines II Cancer Lett. — 1997.— Vol. 116, N 1. P. 53-59.

150. Kawanishi M. Epstein-Barr virus induces fragmentation of chromosomal DNA during lytic infection// J. Virol. 67 (12), 7654-7658 (1993)

151. Kerr JF, et al: Apoptosis: a basic biological phenomenon with wide-ranging implications in tissue kinetics. Br. J. Cancer 26:239, 1972

152. Kim H, Lee H, Yun Y. X-gene product of hepatitis B virus induces apoptosis in liver cells//J Biol Chem 1998,273(1), 381-385,

153. Kim T.-H., Zhao Y., Barber M. J. et al. Bid induced cytochrome c release is mediated by a pathway independent of mitochondrial permeability transition pore and Bax // The journal of biological chemistry. 2000. - Vol. 275. - N. 50. - P. 39474-39481

154. Kingham P. J., Pocock J. M. Microglial apoptosis induced by chromogranin A is mediated by mitochondrial depolarisation and the permeability transition but not bycytochrome с release // Journal of neurochemistry. 2000. - Vol. 74. - N. 4. - P. 14521462

155. Kirsch D.G., Doseff A., Chau B. N. et al. Caspase-3-dependent cleavage of Bcl-2 promotes release of cytochrome с // The journal of biological chemistry. 2001. - Vol.274.-N. 30.-P. 21155-21161

156. Kluck R.M., Bossy-Wetzel E., Green D.R. et al. The release of cytochrome с from mitochondria: a primary site for Bcl-2 regulation of apoptosis // Science. 1997. - Vol.275.-P. 1132-1136

157. Knodell RG et al. Formulation and application of numerical scoring system for assesing histological activity in asymptomatic chronic active hepatitis//Hepatology 1981; 1 (5): 431-435

158. Komatsu K., Suzuki S., Ohara S. et al. Expression of Bcl-2 and Bax in human gastric cancer tissue // Nippon Rinsho. 1996. - Vol. 54. - N. 7. - P. 1929-1934

159. Kondo S., Shinomura Y., Kanayama S. et al. Over-expression of Bcl-XL gene in human gastric adenomas and carcinomas // Int. J. Cancer. 1996. - Vol. 68. - N. 6. - P. 727-730

160. KorbuttG. S., Elliott J. F., Rajotte R. Cotransplantation of allogeneic islets with allogeneic testicular cell aggregates allows long-term graft survival without systemic immunosuppression//Diabetes. 1997. - Vol. 46, N 2. - P. 317-322.

161. Kornblau S.M., Vu H.T., Ruvolo P. et al. Bax and PKCa modulate the prognostic impact of Bcl-2 expression in acute myelogenous leukemia // Clinical cancer research. -2000.-Vol. 6.-P. 1401-1409

162. Koyama S., Koike N., Adachi S. Fas receptor counterattack against tumor-infiltrating lymphocytes in vivo as a mechanism of immune escape in gastric carcinoma // J. Cancer research. Clin. Oncol. 2001. - Vol. 127. - N. 1. - P. 20-26

163. Koziel MJ. The role of immune responses in the pathogenesis of hepatitis С virus infection//J Viral Hepat 1997;4 Suppl 2:31-41

164. Krajewska M., Fenoglio-Preiser C.M., Krajewski S. et al. Immunohistochemical analysis of Bcl-2 family proteins in adenocarcinomas of the stomach // American journal of pathology. 1996. - Vol. 149. -N. 5. - P. 1449-1457

165. Krajewska M., Moss S.F., Krajewski S. et al. Elevated expression of Bcl-X and reduced Bak in primary colorectal adenocarcinomas // Cancer research. 1996. - Vol. 56.-N. 10.-P. 2422-2427

166. Krammer P. H. CD95's deadly mission in the immune system // Nature. 2000. -Vol. 407. - P. 789-795

167. Krueger A., Baumann S., Krammer P. H., Kirchhoff S. FLICE-inhibitory proteins: regulators of death receptor-mediated apoptosis // Molecular and cellular biology. 2001. - Vol. 21. - N. 24. - P. 8247-8254

168. Kurabayashi A., Furihata M., Matsumoto M. et al. Expression of Bax and apoptosis-related proteins in human esophageal squamous cell carcinoma including dysplasia // Mol. Pathol. 2001. - Vol. 306. -N. 3. - P. 741-747

169. Lam M., Bhat M. B., Nunez G. et al. Regulation of Bcl-XL channel activity by calcium // The journal of biological chemistry. 1998. - Vol. 273. - N. 28. - P. 1730717310

170. Lau H. Yu M., FontanaA., Stoeckert C. J., Jr. Prevention of islet allograft rejection with engineered myoblasts expressing FasL in mice // Science. 1996. - Vol. 273.1. P. 109-112

171. Lebedeva I.V., Stein C.A. Antisense Downregulation of the Apoptosis-related Bcl-2 and Bcl-XL proteins: a new approach to cancer therapy// Molecular Biol.- 2000.-V.34.-N.6.-P.875-888/

172. Lee S.S., Cho K.J., Hong S.I. et al. Nuclear overexpression of Bcl-2 oncoprotein during the progression of human stomach cancer // J. Korean. Med. Sci. 1998. - Vol. 13.-N. 2.-P. 153-158

173. Leithauser RF, Dhein J, Mechtersheimer G et al. Constitutive and induced expression of APO-1, a new member of the nerve growth factor/tumor necrosis factor receptor superfamily, in normal and neoplastic cells // Lab. Invest.- 1993.- V. 69. -P. 415-429

174. Li X. K., Okuyama Tamura A. et al. Prolonged survival of recipient rats with Fas-ligand-transfected liver allografts by using HVJ-liposome // Transplant. Proc. — 1998. —Vol. 30, N4.

175. Liang Y., Nylander K. D., Yan C., Schor N. F. Role of caspase 3-dependent Bcl-2 cleavage in potentiation of apoptosis by Bcl-2 // Mol. Pharmacol. 2002. - Vol. 61. - P. 142-149

176. Lian-Jun Y., Wen-Liang W. Expression of Bcl-2 and Bax proteins in hepatocellular carcinoma tissue // J. Fourth Mil. Med. Univ. 2002. - Vol. 23. - P. 337340

177. Lim M.L., Minamikawa T., Nagley P. The protonophore CCCP induces mitochondrial permeability transition without cytochrome c release in human osteosarcoma cells // FEBS Lett. 2001. - Vol. 503. - N. 1. - P. 69-74

178. Lim S.C. Fas-related apoptosis in gastric adenocarcinoma // Oncol. Rep. 2003. -Vol. 10. -N. 1. - P. 57-63

179. Lindblom B, Holmlund G. Rapid DNA purification for restriction fragment length polymorphism analysis // Gene Anal. Tech. 1988. - Vol. 5. - N. 5. - P. 97-101.

180. Ling Y.-H., Tornos C., Perez-Soler R. Phosphorylation of Bcl-2 is a marker of M fhase events and not a determinant of apoptosis // The journal of biological chemistry. -1998. Vol. 273. - N. 30. - P. 18984-18991

181. Liu F.-T., Goff L. K., Hao J.-H et al. Increase in the ratio of mitochondrial Bax/Bcl-XL induces Bax activation in human leukemic K562cell line// Apoptosis.-2004.-V.9.-P.377-384

182. Liu Q. and Gazitt Y. Potentiation of dexamethasone-, paclitaxel-, and Ad-p53-induced apoptosis by Bcl-2 antisense oligodeoxynucleotides in drug-resistant multiple myeloma cells // Blood. 2003. - V. 101. - P. 4105-4114

183. Liu X.-H., Castelli J. C., Youle R. J. Receptor-mediated uptake of an extracellular Bcl-XL fusion protein inhibits apoptosis // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1999. - Vol.96. -N. 17. - P. 9563-9567

184. Lock R. B. Bcl-2 inhibits a Fas induced conformational change in the Bax N-terminus and Bax mitochondrial translocation // The journal of biological chemistry. -2000. Vol. 275. -N. 23. - P. 17225-17228

185. Lorenz HM., Herrmann M, Winkler T., et al. Role of apoptosis in autoimmunity//Apoptosis. 2000. -Vol. 5. -P.443-9.

186. Lowe S.L., Rubinchik S., Honda T., McDonnell T.J., Dong J.Y., Norris J.S. Prostate-specific expression of Bax delivered by an adenoviral vector induces apoptosis in prostate cancer cells //GeneTher.- 2001.- V.8(18).-P.1363-1371

187. Lynch DH., Ramsdell F., Alderson MR. Fas and FasL in the homeostatic regulation of immune responses// Immunol Today. -1995. -Vol. 16. -P.569.

188. MacFarlane M., Merrison W., Bratton S. B. et al. Proteasome-mediated degradation of Smac during fpoptosis: XIAP promotes Smac ubiquitination in vitro // The journal of biological chemistry. 2002. - Vol. 277. - P. 36611-36616

189. Marani M., Tenev T., Hancock D. et al. Identification of novel isoforms of the BH3 domain protein Bim which directly activate Bax to trigger apoptosis // Molecular and cellular biology. 2002. - Vol. 22. - N. 11. - P. 3577-3589

190. Markowitz D., GoffS., Bank A. Construction and use of a safe and efficient amphotropic cell line // J. Virol. — 1988. — Vol. 167. P. 400-406.

191. Marone M., Scambia G., Mozzetti S. et al. Bcl-2, Bax, Bcl-XL, and Bcl-XS expression in normal and neoplastic ovarian tissues // Clinical cancer research. 1998. -Vol. 4.-P. 517-524

192. Martin A. G., Fearnhead H. O. Apocytochrome c blocks caspase-9 activation and Bax-induced apoptosis // The journal of biological chemistry. 2002. - Vol. 277. - P. 50834-50841

193. Martin S., Toquet C., Oliver L. et al. Expression of Bcl-2, Bax and Bcl-XL in human gliomas: a re-appraisal // J. Neurooncol. 2001. - Vol. 52. - N. 2. - P. 129-139

194. Matsuyama S., Schendel S. L., Xie Z. et al. Cytoprotection by Bcl-2 requires the pore-forming a5 and a6 helices // The journal of biological chemistry. 1998. - Vol. 273. -N. 47. - P. 30995-31001

195. Maurer C.A., Friess H., Buhler S.S. et al. Apoptosis inhibiting factor Bcl-XL might be the crucial member of the Bcl-2 gene family in colorectal cancer // Dig. Dis. Sci. 1998. - Vol. 43. -N. 12. - P. 2641-2648

196. McDonnel J., Bechm A., Sarkiss M. et al. Importance of the Bcl-2 family in cell death regulation // Experientia. 1996. - Vol. 52. - P. 1008-1017

197. McDonnell T. J., Troncoso P., Brisbay S. M. et al. Expression of the protooncogene bcl-2 in the prostate and its association with emergence of androgen-independent prostate cancer // Cancer Res. 1992. - Vol. 52. - P. 6940-6944.

198. McGinnis K. M., Gnegy M. E., Wang K. K. W. Endogenous Bax translocation in SH-SY5Y human neuroblastoma cells and cerebellar granule neurons undergoing apoptosis // Journal of neurochemistry. 1999. - Vol. 72. - N. 5. - P. 1899-1906

199. Mei X W et al. Induction and detection of apoptosis in human periphery blood T-cells. J. Immunological methods 1997; 206: 153162.

200. Meier P., Finch A., Evan G. Apoptosis in development // Nature. 2000. -Vol.407.-P.796-801.

201. Meijerink J. P.P., Mensink E. J.B.M., Wang K. et al. Hematopoietic malignancies demonstrate loss-of-iunction mutations of Bax // Blood. 1998. - Vol. 91. - N. 8. - P. 2991-2997

202. Mercatane D.R., Bortner C.D., Cidlowski J.A. et al. Modification of alternative splicing of Bcl-X pre-mRNA in prostate and breast cancer cells // The journal of biological chemistry. 2001 - Vol. 276. - P. 16411-16417

203. Miller S., Simon J., Vesfig J. Interdisciplinary approaches to gene therapy. Berlin-Heidelberg-New York: Springer, 1997.

204. Misao J., Hayakawa Y., Ohno M. et al. Expression of Bcl-2 protein an inhibitor of apoptosis and Bax an accelerator of apoptosis in ventricular myocytes of human hearts with myocardial infarction // Circulation. 1996. - Vol. 94. - P. 1506-1512

205. Mita E, Hayashi N, Lio S et al. Role of fas ligand in apoptosis induced by hepatits C infection // Biochem. Boiphis. Res. Commun. 1994. - 204. - P. 468-474

206. Mochizuki K, Hiramatsu N, Hayashi N et al. Fas antigen expression in in liver tissues of patient with chronic hepatitis B //J. Hepatol.- 1996.-V. 24.- P. 1-7

207. Mok C.-L., Gil-Gomez G., Williams O. et al. Bad can act as a key regulator of T cell apoptosis and T cell development // The Journal of Experimental Medicine. 1999. -Vol. 189. -N. 3.-P. 575-586

208. Morris M. J., Tong W. P., Cordon-Cardo C. et al. Phase I Trial of BCL-2 Antisense Oligonucleotide (G3139) Administered by Continuous Intravenous Infusion in Patients with Advanced Cancer //Clin. Cancer Res.- 2002. -V. 8(3).- P. 679 683

209. Morrow WJ., Nelson L., Watts R, Isenberg DA. Autoimmune rheumatic disease. 2nd.// Oxford: Oxford University Press. 1999.

210. Mossman T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and cy-totoxicity assays // J. Immunol. Meth. — 1983. — Vol. 65. — P. 55-63.

211. Mounier N., Briere J., Gisselbrecht C. et al. Rituximab plus CHOP (R-CHOP) overcomes bcl-2—associated resistance to chemotherapy in elderly patients with diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL) // Blood. 2003. -V.101. - P. 4279-4284

212. Mountz J.D., Wu J., Cheng J., Zhou T. Autoimmune disease: A problem of defective apoptosis// Arthritis Rheum. 1994. -Vol. 37. -P. 1415-1420.

213. Mountz J D et al. The role of programmed cell death as an emerging new concept for the pathogenesis of autoimmune diseases. Clinical immunology and immunopathology 1996; 80: S2-S14.

214. Mullauer L., Gruber P., Sebinger D. et al. Mutations in apoptosis genes: a pathogenetic factor for human disease // Mutat Res. 2001. - Vol. 488. - N. 3. - P. 211231

215. Muller HM, Pfaff E, Goeser T. et al. Peripheral blood leukocytes as a possible extrahepatic site for hepatits C replication. J. Gen. Virol., 1993, 74: 669-676)

216. Murphy K/M., Ranganathan V., Farnsworth M.L. et al Bcl-2 inhibits Bax translocation from cytosol to mitochondria during drug-induced apoptosis of human tumor cells. //Cell death and Different. 2000. - Vol.7. - P.102-111.

217. Muzio M., Salvesen G.S. and Dixit V.M. FLICE induced apoptosis in a cell-free system. Cleavage of caspase zymogens// J. Biol Chem. 1997. - V. 272. - P. 29522956.

218. Nadal-Ginard B., Kajstura J., Anversa P., Leri A. A matter of life and death: cardiac myocyte apoptosis and regeneration// J, Clin. Invest.- 2003 .-V. 111.- №10.-P.1457-1459

219. Nagata S., Golstein P. The Fas death factor// Science. 1995. -Vol. 267. -P. 1449-56.

220. Nagata S., Suda T.Fas and Fas ligand: lpr and gld mutations// Immunol Today. -1995.-Vol. 16.-P.39.

221. Nagata S. Apoptosis by death factor // Cell. 1997. - Vol. 88. - P. 355-365.

222. Nagata S. Fas ligand- induced apoptosis// Ann. Rev. Genet. 1999. -Vol. 33. - P. 29-55.

223. Nakamuro M., Matute-Bello G., Liles W.C. et al. Differential response of human lung epithelial cells to FAS-induced apoptosis // Am. J. Pathol.-2004.-V.164. P.1949-1958

224. Narasimhan S. R., Yang L., Gerwin B. I. et al. Resistance of pleural mesothelioma cell lines to apoptosis relation to expression of Bcl-2 and Bax // Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 1998. - Vol. 275. -N. 1. - P. L165-L171

225. Narita M., Shimizu S., Ito T. et al. Bax interacts with the permeability transition pore to induce permeability transition and cytochrome c release in isolated mitochondria // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998. - Vol. 95. -N. 25. - P. 14681-14686

226. Nauman U., M. Weller. Retroviral В AX gene transfer fails to sensitise malignant glioma cells to CD95L-induced apoptosis and cancer chemotherapy.// Int. J. Cancer. -1998. -Vol.77. -P.645-648.

227. Nechushtan A., Smith C.L., Lamensdorf I. et al. Bax and Bak coalesce into novel mitochondria-associated clusters during apoptosis // The journal of cell biology 2001. -Vol. 153.-N. 6.-P. 1265-1276

228. Nicolson W.D. From bench to clinic with apoptosis-based therapeutic agents // Nature. 2000. - Vol.407. - P.810-816.

229. Nishimoto I., Okamoto Т., Gramorella U., Iwatsubo T. Apoptosis in neurodegenerative disease // Adv.Pharmacol. 1997, v.41, p.337-369.

230. Nomura M., Shimizu S., Ito T. et al. Apoptotic cytosol facilitates Bax translocation to mitochondria that involves cytosolic factor regulated by Bcl-2 // Cancer research. 1999. - Vol. 59. - P. 5542-5548

231. NorrisJ.S., HyerM.L., Voelkel-Johnson C. etal. The use of Fas Ligand, TRAIL and Bax in gene therapy of prostate cancer // Curr Gene Ther.- 2001.-V1(1).-P. 123-136

232. O'Connell J., Bennett M.W., Nally K. et al. Altered mechanisms of apoptosis in colon cancer: Fas resistance and counterattack in the tumor-immune conflict // Ann. N. Y. Acad. Sci.-2000. Vol. 910. - P. 178-192

233. Ogasawara J, Watanabe-Fukunaga R, Adachi M et al. Lethal effect of the anti-Fas antibody in mice//Nature 1993 Aug 26;364(6440):806-809

234. Ogura E., Senzaki H., Yamamoto D. et al. Prognostic significance of Bcl-2, Bcl-XL/S, Bax and Bak expressions in colorectal carcinomas // Oncol. Rep. 1999. - Vol. 6. -N. 2.-P. 365-369

235. Okamoto K., Asahara H., Kobayashi T. et al. Induction of apoptosis in the rheumatoid synovium by Fas ligand gene transfer// Gene Ther. 1998. - Vol. 5, N 3. - P. 331-338.

236. Osaki M., Kase S., Kodani I. et al. Expression of Fas and Fas ligand in human gastric adenomas and intestinal-type carcinomas: correlation with proliferation and apoptosis // Gastric cancer. 2001. - Vol. 4. - N. 4. - P. 198-205

237. Oto M., Miyake S., and Yuasa Y. Optimization of nonradioisotopic single strand conformation polymorphism analysis with a conventional minislab gel electrophoresis apparatus // Analytical biochemistry. 1993. - Vol. 213. - P. 19-22

238. Ouyang H., Furukawa T., Abe T. et al. The Bax gene, the promoter of apoptosis, is mutated in genetically unstable cancer of the colorectum, stomach, and endometrium // Clinical cancer research. 1998. - Vol. 4. - P. 1071-1074

239. Owen-Shaub L. Fas/APO-1: a cell surface protein mediating apoptosis // Cancer Bull. 1994.-Vol. 46. - P.141-145.

240. Ozvaran M.K., Cao X. X., Miller S. D. et al. Antisense oligonucleotides directed at the bcl-xl gene product augment chemotherapy response in mesothelioma //Mol. Cancer Ther. 2004. -V. 3. -P. 545-550

241. Pan H. Yin C., Dyke T. Apoptosis and cancer mechanisms // Cancer Surveys.1997.-Vol. 29.- P.305-327.

242. Pastorino J.G., Chen S.T., Tafani M. et al. The overexpression of Bax produces cell death upon induction of the mitochondrial permeability transition. // J. Biol. Chem.1998. Vol.273. - P.7770-7775.

243. Peiro G., Diebold J., Mayr D. et al. Prognostic relevance of hMLHl, hMSH2, and Bax protein expression in endometrial carcinoma // Mol. Pathol. 2001. - Vol. 14. - N. 8. - P. 777-783

244. Pepper C., Bentley P., Hoy T. Regulation of clinical chemore-sistance by bcl-2 and bax oncoproteins in B-cell chronic lym-phocytic leukaemia // Br. J. Haematol. — 1996. —Vol.95. —P. 513-517.

245. Perlman H., Sata M., Le Roux A. et al. Bax mediated cell death by the Gax homeoprotein requires mitogen activation but is independent of cell cycle activity // The EMBO journal. 1998. -Vol. 17.-P. 3576-3586

246. Petrella G. T., Beylot-Barry M., Joly P. et al. Bcl-2 protein expression is the strongest independent prognostic factor of survival in primary cutaneous large B-cell lymphomas // Blood. 2004. - V. 103(10). -P. 3662 - 3668

247. Pezzella F., Turley H., Keizer I. et al. Bcl-2 protein in non-small-cell carcinoma// N. Engl. J. Med. 1993. - Vol. 329. - P. 690-694.

248. Pinkoski M. J., Brunner T., Green D. R. et al. Fas and Fas ligand in gut and liver // Gastrointestinal and liver physiology. 2000. - Vol. 278. - N. 3. - P. G354-G366

249. Pirccftnac E.C., Nassirpour R., Yang M. Et al. Bax-induction gene therapy of pancreatic cancer// J. Surg. Res. -2002.- V. 106(2).- P.346-51.

250. Pollicino T., Terradillos O, Lecoeur H. et al. Pro-apoptotic effect of the hepatitis B virus X gene//Biomed Pharmacoter, 1998, 52 (9), 363-368;

251. Poulaki V., Mitsiades N., Romero M. E. and M. Tsokos Fas-mediated Apoptosis in Neuroblastoma Requires Mitochondrial Activation and Is Inhibited by FLICE Inhibitor Protein and bcl-2 // Cancer Res. June 1.- 2001,- V. 61(12).- P. 4864 - 4872

252. Proussakova O.V., Rabaya N.A., Moshnikova A.B. et al. Oligomerization of soluble Fas antigen induces its cytotoxicity // The journal of biological chemistry. 2003. - Vol. 278. -N. 38. - P. 36236-36241

253. Pryde J. G., Walker A., Rossi A. G. et al. Failure of Bax insertion into mitochondria at 15 °C prevents the release of cytochrome c // The journal of biological chemistry. 2000. - Vol. 275. - N. 43. - P. 33574-33584

254. Rajagopalan S., Somers E. C., Brook R. D. et al. Endothelial cell apoptosis in systemic lupus erythematosus: a common pathway for abnormal vascular function and thrombosis propensity // Blood. 2004.- V. 103. - P. 3677-3683

255. Rampino N., Yamamoto H., Ionov Y., Li Y., Sawai H., Reed J.C., Perucho M. Somatic frameshift mutations in the Bax gene in colon cancers of the microsatellite mutator phenotype // Science. 1997. - Vol. 275. - P. 967-969

256. Reed J. C. Balancing cell life and death: Bax, apoptosis, and breast cancer // J. Clin. Invest. 1996. - Vol. 97. - N. 11. - P. 2403-2404

257. Reed J.C. Apoptosis-based therapies // Nat. Rev. Drug Discov. 2002. - Vol. 1. -N. 2. -P.111-121.

258. Reed J.C. Potential functions of Bcl-2 family proteins. // Advances in pharmacology. 1997. -Vol.41. - P. 510-514.

259. Rehermann B, Chang K, McHutchison JG. et al Quantitative analysis of the peripheral blood cytotoxic T lymphocyte response in patients with chronic hepatitis C virus infection//J.Clin.Invest. 1996. 98.1432-1440

260. Rieux-Laucat F., et al. Mutations in Fas associated with human Lymphoproliferative syndrome and autoimmunity// Science. -1995. -Vol. 268. -P. 13471349.

261. Rose LM., Latchman DS., Isenberg DA. Apoptosis in peripheral lymphocytes in systemic lupus erythematosus: a review// British J. Rheumatol. -1997. Vol. 36. -P. 158163.

262. Roya S., Nicholsona D. W. Cross-talk in cell death signaling // The Journal of Experimental Medicine. 2000. - Vol. 192. - N. 8. - P. F21-F26

263. Rudin C. M., Otterson G. A., Mauer A. M. et al. A pilot trial of G3139, a bcl-2 antisense oligonucleotide, and paclitaxel in patients with chemorefractory small-cell lung cancer// Ann. One.- 2002.- V. 13(4).-P. 539 545

264. RudnerlJ., Lepple-Wienhues A., Budachl W. et al. Wild-type, mitochondrial and ER-restricted Bcl-2 inhibit DNA damage-induced apoptosis but do not affect death receptor-induced apoptosis // Journal of Cell Science. 2001. - Vol. 114. - P. 4161-4172

265. Ruvolo P.P., Deng X., May W.S. Phosphorylation of Bcl-2 and regulation of apoptosis // Leukemia. 2001. - Vol. 15. -N. 4. - P. 515-522

266. Saegusa M., Takano Y., Okayasu I. Bcl-2 expression and its association with cell kinetics in human gastric carcinomas and intestinal metaplasia // J. Cancer research. Clin. Oncol. 1995. - Vol. 121. - N. 6. - P. 357-363

267. Saeterdal I., Bjorheim J., Lislerud K. et al. Frameshift-mutation-derived peptides as tumor-specific antigens in inherited and spontaneous colorectal cancer // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-2001. Vol. 98.-N. 23.-P. 13255-13260

268. Sahara S., Aoto M., Eguchi Y. et al. Acinus is a caspase-3-activated protein required for apoptotic chromatin condensation // Nature. 1999. - Vol. 401. - N. 6749. -P. 168-173

269. Sakuragi N., Ohkouchi T., Hareyama H. et al. Bcl-2 expression and prognosis of patients with endometrial carcinoma // Int. J. Cancer. 1998. - Vol. 79. - P. 153-158.

270. Salmon M., Gordon C. The role of apoptosis in systemic lupus erythematosus/ZRheumatology. 1999. -Vol. 38. -P.l 177-1183.

271. Savill J., Fadok V. Corpse clearance defines the meaning of cell death // Nature. 2000. - Vol. 407. - P.784-788.

272. Sawa H., Kobayashi T, Mukai K. et al. Bax overexpression of enhances cytochrome c release from mitochondria and sensitizes gastric cells to chemotherapeutic agent-induced apoptosis.// Intern. J. Oncol. 2000. - Vol.16 - P.745-749.

273. Schaich M., Illmer T., Seitz G. et al. The prognostic value of Bcl-XL gene expression for remission induction is influenced by cytogenetics in adult acute myeloid leukemia // Haematologica. 2001. - Vol. 86. - N. 5. - P. 470-477

274. Schelwies K., Sturm I., Grabowski P. et al. Analysis of p53/Bax in primary colorectal carcinoma: low Bax protein expression is a negative prognostic factor in UICC stage III tumors // Int. J. Cancer. 2002. - Vol. 99. -N. 4. - P. 589-596

275. Schendel S. L., Xie Z., Montal M. O. et al. Channel formation by antiapoptotic protein Bcl-2 // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1997. - Vol. 94. - P. 5113-5118

276. Schlesinger P. H., Gross A., X.-M. Yin et al. Comparison of the ion channel characteristics of proapoptotic Bax and antiapoptotic Bcl-2 // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1997.-Vol. 94.-P. 11357-11362

277. Schmollinger J. C., Dranoff G. Targeting melanoma inhibitor of apoptosis protein with cancer immunotherapy// Apoptosis.-2004.-V.9.-P.309-314

278. Schon M. P., Schon M. Immune modulation and apoptosis induction: Two sides of the antitumoral activity of imiquimod// Apoptosis.-2004.-V.9.-P.291-298

279. Schwandner O., Schiedeck T.H., Bruch H.P. et al. p53 and Bcl-2 as significant predictors of recurrence and survival in rectal cancer // Eur. J. Cancer. 2000. - Vol. 36. -N. 3.-P. 348-356

280. Sharma S., Saltz L. B. Oral chemotherapeutic agents for colorectal cancer // The Oncologist. 2000. - Vol. 5. -N. 2. - P. 99-107

281. Shaw-Stiffel T.A. Chronic hepatitis //Principles and practice of infectious diseases/Mandell, 5th ed„ 2000.-P.1298-1320

282. Sheehan K.M., O'Donovan D.G., Fitzmaurice G. Prognostic relevance of Fas (Apo-l/CD95) ligand in human colorectal cancer // Eur. J. Gastroenterol. Hepatol. -2003. Vol. 15. - N. 4. - P. 375-380

283. Shi Y. Caspase Activation: revisiting the induced proximity model // Cell.- 2004.-V.l 17.-P.855-858

284. Shibasaki T., Kondo E., Akagi T., McKeon F. Suppression of signalling through transcription factor NF-AT by interaction between calcineurin and Bcl-2 // Nature. -1997.-Vol. 386.-P. 728-731

285. Shigekazu N. Apoptosis by death factor. Cell 1997; 88: 355-365.

286. Shilkaitis A., Graves J., Mehta R. R. et al. Bcl-2 and Bax are differentially expressed in hyperplastic premalignant and malignant lesions of mammary carcinogenesis // Cell Growth Differ. 2000. - Vol. 11. - P. 437-445

287. Shimoyama M., Kanda T., Liu L. et al. Expression of Fas ligand is an early event in colorectal carcinogenesis // J. Surg. Oncol. 2001. - Vol. 76. - N. 1. - P. 63-68

288. Shinoura N., Saito K., Yoshida Y. et al. Adenovirus-mediated transfer of Bax with caspase-8 controlled by myelin basic protein promoter exerts an enhanced cytotoxic effect in gliomas.//Cancer Gene Ther. 2000. - Vol.7. - P.739-748.

289. Shinoura N., Yoshida Y., SadataA. et al. Apoptosis by retrovirus- and adenovirus-mediated gene transfer of Fas ligand to glioma cells: implications for gene therapy // Hum. Gene Ther. —1998. Vol. 9, N 14. - P. 1983-1993.

290. Shugar D. Perspectives in antisense Therapeutics // Pharmacol. Ther., 1997, v.76, p.151-160.

291. Siegel RM.,. Frederiksen J K., Zacharias D A., et al. Fas pre-association required for apoptosis signaling and dominant inhibition by pathogenic mutations//Science. -2000. -Vol. 288. -P.2354-2357.

292. Silvestrini R., Veneroni S., Daidone M. G. et al. The Bcl-2 protein: a prognostic indicator strongly related to p53 protein in lymph node negative breast cancer patients // J. Natl. Cancer Inst. 1994. - Vol. 86. - P. 499-504.

293. Simonian P.L., Grillot D.A.M., Andrews D.W. et al. Bax homodimerization is not required for Bax to accelerate chemotherapy-induced cell death // The journal of biological chemistry. 1996. - Vol. 271. -N. 50. - P. 32073-32077

294. Simonian P.L., Grillot D.A.M., Nunez G. Bcl-2 and Bcl-XL can differentially block chemotherapy-induced cell death // Blood. 1997. - Vol. 90. - N. 3. - P. 12081216

295. Sinkovics J. G., Horvath J. Can virus therapy of human cancer be improved by apoptosis induction? // Med. Hypothes. —1995. Vol. 44, N 5. - P. 359-368.

296. Smith A.E. Gene therapy where are we // The Lancet. - 1999. - V.354. (Suppl. 1). - P.1-4

297. Socie G., Mary J -Y., Lemann M. Et al.Prognostic value of apoptotic cells and infiltrating neutrophils in graft-versus-host disease of the gastrointestinal tract in humans: TNF and Fas expression // Blood. 2004. - V. 10. - P. 50-57

298. Soini Y., Kinnula V., Kaarteenaho-Wiik R. et al. Apoptosis and expression of apoptosis regulating proteins Bcl-2, Mcl-1, Bcl-X and Bax in malignant mesothelioma // Clinical cancer research. 1999. - Vol. 5. - P. 3508-3515

299. Song E., Chen J., Ouyang N. et al. Soluble Fas ligand released by colon adenocarcinoma cells induces host lymphocyte apoptosis: an active mode of immune evasion in colon cancer // Br. J. Cancer. 2001. - Vol. 85. - N. 7. - P. 1047-1054

300. Srinivas G., Kusumakumary P., Krishnan M. et al. Mutant p53 protein, Bcl-2/Bax ratios and apoptosis in paediatric acute lymphoblastic leulaemia // J. Cancer research. Clin. Oncol. 2000. - Vol. 126. - P. 62-67

301. Steinberg AD., Krieg AM., Gourley MF., Klinman DM. Theoretical and experimental approaches to generalized autoimmunity// Immunol Rev. 1990. -Vol.118. -P. 129-163.

302. Steinberg AD., Gourley MF., Klinman DM., et al. Systemic lupus erythematosus// Ann Intern Med. 1991. -Vol. 115. -P.548-559.

303. Stoll-Becker S, Repp R, Glebe D et al. Transcription of hepatitis B virus in peripheral blood mononuclear cells from persistently infected patients//J. Virol 1997, 71 (7), 5399-407

304. Strack P.R. Apoptosis mediated by HIV protease is preceded by cleavage of Bcl-2 // Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 1996, v. 93, p. 9571-9576

305. Su F., Schneider R.J. Hepatitis B virus HBx protein sensitizes cells to apoptotic killing by tumor necrosis factor alpha//Proc Natl Acad Sei 1997, 94(16), 8744-8749

306. Swenson K. M., Ke ., Wang T. et al. Fas ligand gene transfer to renal allografts in rats: effects on allograft survival // Trans plantation. 1998. - Vol. 65, N 2. - P. 155-160.

307. Szymkowski D.E., Developing antisense oligonucleotides from the laboratory to clinical trials. // Drug Discovery Today. 1996. - V.l. - N. 10. - P.415-428

308. Takahashi ., Tanaka M., Ogasawara J. et al. Swapping between Fas andgranulocyte colony-stimulating factor receptor // J. Biol. Chem. 1996. - Vol. 271, N 29. - P. 17555-17560.

309. Takebayashi H., Oida H., Fujisav/a K. et al. Hormone-induced apoptosis by Fas-nuclear receptor fusion proteins: novel biological tools for controlling apoptosis in vivo // Cancer Res. —1996. Vol. 56, N 18. - P. 4164-4170.

310. Tanaka M., Suda T., Takahashi T., Nagata S. Expression of the functional soluble form of human Fas ligand in activated lymphocytes// EMBO. 1995. -Vol.14. -P.l 1291135.

311. Tanaka M., Suda T., Haze K., et al. Fas ligand in human serum// Nat Med. -1996. -Vol. 2. -P.317.

312. Terradillos O, Pollicino T, Lecoeur H. p53-independent apoptotic effects of the hepatitis B virus HBx protein in vivo and in vitro//Oncogene 1998, 17(16). 2115-2123

313. Tokano Y., Miyake S., Kayagaki., N et al. Soluble Fas molecule in serum of patients with systemic lupus erythematosus// J Clin immunol . -1996. -Vol.16. -P.261-265.

314. Toshio Miyawaki et al. Differential expression of apoptosis-related Fas Antigen on lymphocyte subpopulations in human peripheral blood. J. Immunology 1992; 149: 3752-3758

315. Trent RJ. Molecular medicine // 1997. P.154-173

316. Tron V. A., Krajewski S., Klein-Parker H. et al. Immunohisto-chemical analysis of Bcl-2 protein regulation in cutaneous melanoma // Am. J. Pathol. 1995. - Vol. 146. -P. 643-650.

317. Tsuruta Y., Mandai M., Konishi I., et. Al Combination effect of adenovirus-mediated proapoptotic bax gene transfer with cisplatin or paclitaxel treatment in ovarian cancer cell lines. //European J. Cancer. 2001. - Vol.37. - P.531-541.

318. Ulvik A., Aarskog N.K., Ogreid D. Detection and identification of Ki-ras exon 1 mutations by minigel single-strand conformation polymorphism // Analytical biochemistry. 1995. - Vol. 232. - P. 137-138

319. Van Lopik Т., Bijl M., Hart M., et al. Patients with systemic lupus erythematosus with high plasma levels of sFas risk relapse// J Rheumatol. 1999. -Vol.26. -P.60-67.

320. Vaux D.L., Strasser A. The molecular biology of apoptosis // Proc. Natl. Acad. Sci. 1996, v.93, p.2239-2244.

321. Viruses & Apoptosis By C. L. Alonso, C. Alonso Hardcover / March 2004

322. Wagenaar-Miller R.A., Gorden L., Matrisian L.M. Matrix metalloproteinases in colorectal cancer: Is it worth talking about?// Cancer and metastases reviews.-2004.-V.23.-P. 119-135

323. Walers C. Molecular mechanism of neuronal cell death // Neurotransmissions. -1997.-Vol. XIII,- P. 1-7.

324. Wallach D. Placing death under control // Nature, 1997, v.388, p.123-126.

325. Wang X. The expanding role of mitochondria in apoptosis // Genes Dev. 2001. -Vol. 15. - N. 22. - P. 2922-2933

326. Wang Z.H., Ding M.X., Chew S.B. et al. Bcl-2 and Bax proteins are nuclear matrix associated proteins.// Anticancer Res 1999. - Vol.19. - P.5445-5450.

327. Waters J.S., Webb A., Cunningham D. et al. Phase I Clinical and Pharmacokinetic Study of Bcl-2 Antisense Oligonucleotide Therapy in Patients With Non-Hodgkin's Lymphoma// J. Clinical Oncology.-2000.-V. 18.-P. 1812-1823

328. Webb A., Cunningham D., Cotter F et al. Bcl-2 antisense therapy in patient with non-Hodgkin lymphoma//Lancet. -1997.- V.349.-P.1137-1141.

329. Webster K.A. and Bishopric N. H. Apoptosis Inhibitors for Heart Disease //Circulation. 2003. - V. 108. - P. 2954-2956

330. Weller M., Malipiero U., Rensing-Ehl A. et al. Fas/APO-1 gene transfer for human malignant glioma//Cancer Res. — 1995,- Vol. 55, N 13. P. 2936-2944.

331. Werner A.B., Vries E., Tait S.W.G. et al. Bcl-2 family member Bfl-l/Al sequesters truncated Bid to inhibit its collaboration with pro-apoptotic Bak or Bax // The journal of biological chemistry. 2002. - Vol. 277. - P. 22781-22788

332. White E. Regulation of apoptosis by transforming genes of the DNA tumor virus adenovirus//Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1993, 204(1), 30-39)

333. Wohlfart S., Sebinger D., Gruber P. et al. FAS (CD95) mutation are rare in gastric MALT Lymphoma but occur more frequently in primary gastric diffuse large B-cell Lymphoma//Am. J. Pathol.-2004.-V.164. P.1081-1089

334. Wolf H.K., Stober C., Hohenfellner R. et al. Prognostic value of p53, p21/WAFl, Bcl-2, Bax, Bak and Ki-67 immunoreactivity in pTl G3 urothelial bladder carcinomas // Tumour Biol. 2001. - Vol. 22. - N. 5. - P. 328-336

335. Woodruff Emlen et al. accelerated in vitro apoptosis of lymphocytes from patients with systemic lupus erythematosus. J. immunol. 1994; 152: 3685-3692.

336. Wu M.-S., Lee C.-W., Shun C.-T. et al. Clinicopathological significance of altered loci of replication error and microsatellite instability-associated mutations in gastric cancer // Cancer research. 1998. - Vol. 58. - P. 1494-1497358. www.genta.com

337. Wyllie A.N., Kerr J.F., Currie A.R. Cell death: the significance of apoptosis//Intern. Rev.Cytol.-1980.- V.68. P.251

338. Xiang H., Kinoshita Y., Knudson C. M. et al. Bax involvement in p53 mediated neuronal cell death // The journal of neuroscience. 1998. - Vol. 18. - N. 4. - P. 13631373

339. Xiang J., Chao D.T., Korsmeyer S.J. Bax-induced cell death may not require interleukin 1 p-converting enzyme-like proteases. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. - Vol.93. - P.14559-14563.

340. Xiang J., Gomez-Navarro J., Arafat W. et al. Pro-apoptotic treatment with an adenovirus encoding Bax enchances the effect of chemotherapy in ovarian cancer.// J. Gene Medicine. 2000. - Vol.2. - P.97-106.

341. Xiang J., Piche A., Rancourt C., et al. An inducible recombinant adenoviral vector ancoding Bax selectively induces apoptosis in ovarian cancer cells. // Tumor targeting. -1999.-Vol. 4.-P. 84-91.

342. Xiong H.Q., Ajani J.A. Treatment of colorectal cancer metastasis: The role of chemotherapy // Cancer and metastases reviews.-2004.-V.23.-P. 145-163

343. Yagi O.K., Akiyama Y., Nomizu T., Iwama T., Endo M., and Yuasa Y. Proapoptotic gene Bax is frequently mutated in hereditary nonpolyposis colorectal cancers but not in adenomas// Gastroenterology. 1998. - Vol. 114. - P. 268-274

344. Yamaguchi H., Wang H.-G. Bcl-XL protects BimEL-induced Bax conformational change and cytochrome c release independent of interacting with Bax or BimEL // The journal of biological chemistry. 2002. - Vol. 277. - P. 41604-41612

345. Yamamoto H., Sawai H., Weber T.K. et al. Somatic frameshift mutations in DNA mismatch repair and proapoptotic genes in hereditary nonpolyposis colorectal cancer // Cancer research. 1998. - Vol. 58. - P. 997-1003

346. Yamamoto K., Ichijo H., Korsmeyer S. J. Bcl-2 is phosphorylated and inactivated by an ASKl/Jun N-terminal protein kinase pathway normally activated at G2/M // Molecular and cellular Biology. 1999. - Vol. 19. - N. 12. - P. 8469-8478

347. Yang H.B., Chow N.H., Sheu B.S. et al. The role of Bcl-2 in the progression of the colorectal adenoma-carcinoma sequence // Anticancer Res. 1999. - Vol. 19. - N. IB.-P. 727-730

348. Yang J., Liu X., Bhalla K. Et al. Prevention of apoptosis by Bcl-2: release of cytochrome c from mitochondria blocked // Science. 1997. - Vol. 275. - P. 1129-1132

349. Yao M., Cowie A., Wasfy G.W. et al. EBV in latent infection // EMBO J. -1985.-V.15.-P.4130-4141

350. Yokota J. Tumor progression and metastasis // Carcinogenesis. 2000. - Vol. 21. -N.3.-P. 497-503

351. Zeuner A., Pedini F., Signore M. et al. Stem cell factor protects erythroid precursor cells from chemotherapeutic agents via up-regulation of BCL-2 family proteins // Blood. 2003. -V.102. - P. 87-93.

352. Zha J., Harada H., Yang E., Joket J., Korsmeyer S.J. Serine phosphorylation of death agonist Bad in response to survival factor results in binding to 14-3-3 not Bcl-XL // Cell. 1996. - Vol. 87. - P. 619-628

353. Zhang H., Xu Q., Krajewski S. et al. Bar: An apoptosis regulator at the intersection of caspases and Bcl-2 family proteins // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2000. - Vol. 97. - P. 2597-2602

354. Zhang H., Yang Y., Horton J. L. et al. Amelioration of collagen-induced arthritis by CD95 (Apo-1 /Fas)-ligand gene transfer // J. Clin. Invest. 1997. - Vol. 100, N 8. - P. 1951-1957.

355. Zhao W-L., Daneshpouy M. E., Moimier N. Et al.Prognostic significance of bcl-xL gene expression and apoptotic cell counts in follicular lymphoma // Blood. 2004. -V. 103.-P. 695-697

356. Zhu N., Khoshnan A, Schneider R. et al. Hepatitis C virus core protein binds to the cytoplasmic domain of TNF receptor 1 and enhances TNF-induced apoptosis// J.Virol. 1998, 72(5), 3691-3697

357. Zignego AL, Masshia D, Monti M. et al. Infection of peripheral mononuclear blood cells by hepatitis C. J.Hepatol., 1992,15: 382- 386

358. Zucker S., Vacirca J. Role of matrix metalloproteinases (MMPs) in colorectal cancer // Cancer and metastases reviews.-2004.-V.23.-P. 101-117