Влияние иммунных комплексов на продукцию цитокинов клетками крови и на экспрессию поверхностных маркеров активации эндотелиальных клеток тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.36, кандидат биологических наук Кузнецова, Светлана Анатольевна

• Кузнецова, Светлана Анатольевна
• кандидат биологических наук
• 2003

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Кузнецова, Светлана Анатольевна

Сокращения, встречающиеся в тексте

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Биологическая роль иммунных комплексов

1.2. Влияние иммунных комплексов на продукцию цитокинов

1.3. Влияние иммунных комплексов на экспрессию поверхностных молекул клеток

1.4. Влияние иммунных комплексов на апоптоз

Глава 2. Материалы и методы исследования

2.1. Выделение и характеристика иммунных комплексов из образцов плазмы пациентов, страдающих ревматоидным артритом

2.2. Антигены, антитела и искусственно сформированные иммунные комплексы

2.3. Культуры клеток

2.3.1. Культуры цельной крови здоровых доноров

2.3.2. Выделение мононуклеаров из периферической крови здоровых доноров

2.3.3. Культуры перевиваемых линий

2.4. Методы определения цитокинов в культуральных жидкостях

2.4.1. Количественная оценка секреции цитокинов методом иммуноферментного анализа

2.4.2. Метод определения биологической активности TNFa в культуральных жидкостях

2.5. Оценка экспрессии фенотипических маркеров на поверхности эндотелиальных клеток методом иммуноферментного анализа

2.6. Методы статистического анализа

Глава 3. Влияние иммунных комплексов на секрецию цитокинов

3.1. Влияние иммунных комплексов, выделенных из плазмы больных ревматоидным артритом, на секрецию цитокинов в культурах цельной крови здоровых доноров

3.1.1. Характеристика иммунных комплексов, выделенных из плазмы больных (группа I)

3.1.2. Влияние пула иммунных комплексов, выделенных из плазмы больных ревматоидным артритом, на секрецию цитокинов в культурах цельной крови здоровых доноров

3.1.3. Влияние индивидуальных образцов иммунных комплексов, выделенных из плазмы больных ревматоидным артритом, на секрецию цитокинов в культурах цельной крови здоровых доноров

3.2. Влияние агрегированного IgM на секрецию провоспалительных цитокинов в культурах цельной крови здоровых доноров

3.3. Влияние иммунных комплексов, сформированных in vitro из дифтерийного анатоксина и кроличьих антител соответствующей специфичности, на секрецию провоспалительных цитокинов

3.4. Влияние иммунных комплексов, сформированных in vitro из тиреоглобулина и антитиреоглобулиновых моноклональных антител, на секрецию цитокинов. в культурах цельной крови здоровых доноров

3.5. Обсуждение

Глава 4. Влияние иммунных комплексов на экспрессию фенотипических маркеров активации эндотелиальных клеток

4.1. Адаптация метода иммуноферментного анализа для оценки экспрессии молекул на поверхности эндотелиальных клеток

4.2. Влияние иммунных комплексов, выделенных из плазмы больных ревматоидным артритом, на экспрессию фенотипических маркеров активации на поверхности клеток линии ECV304 '

4.2.1. Характеристика иммунных комплексов, выделенных из плазмы больных ревматоидным артритом (группа II)

4.2.2. Влияние иммунных комплексов, выделенных из плазмы больных ревматоидным артритом, на экспрессию ICAM-1 на поверхности клеток линии ECV

4.2.3. Влияние иммунных комплексов, выделенных из плазмы больных ревматоидным артритом, на экспрессию Fas-рецептора (CD95) на поверхности клеток линии ECV

4.2.4. Влияние иммунных комплексов, выделенных из плазмы больных ревматоидным артритом, на экспрессию HLA молекул на поверхности клеток линии ECY

4.3. Влияние агрегированных иммуноглобулинов человека на экспрессию ICAM-1 на поверхности эндотелиальных клеток

4.4. Влияние иммунных комплексов, сформированных in vitro, на экспрессию ICAM-1 на поверхности эндотелиальных клеток

4.5. Обсуждение 91 Заключение 98 Выводы 105 Список литературы

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

Аг - антиген Ат - антитело

ЗФР - забуференный фосфатами физиологический раствор, рН7,

ИК - иммунный комплекс

ИФА - иммуноферментный анализ

ИЦ - индекс цитотоксичности

ЛПС - липополисахарид

ОП - оптическая плотность

РА - ревматоидный артрит

СКВ - системная красная волчанка

ТГ - тиреоглобулин

ФМА - форболмиристатацетат

CD - Clasters of Differentiation

Fas-R/CD95/Apo-l - Fas-рецептор

FcR (CD 16, CD32, CD64) - Fc-рецептор

GM-CSF - гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор

HUVEC - эндотелиоциты пупочной вены человека ICAM/CD54 - intercellular adhesion molecule IFN - интерферон" Ig - иммуноглобулины IL - интерлейкин

TNFa - туморнекротизирующий фактор (фактор некроза опухоли) МНС - главный комплекс гистосовместимости

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние иммунных комплексов на продукцию цитокинов клетками крови и на экспрессию поверхностных маркеров активации эндотелиальных клеток»

Актуальность проблемы.

Циркулирующие в крови иммунные комплексы (ИК) непосредственно или опосредованно участвуют в патогенезе иммунокомплексных заболеваний. На основании экспериментальных и клинических исследований сформировалось мнение, что повреждения органов и тканей могут быть обусловлены формирующимися в кровяносном русле циркулирующими ИК, не свойственными здоровому организму и условно названными патогенными. При отложении в тканях эти комплексы могут вызывать их повреждения. Вместе с тем не исключена возможность образования ИК непосредственно в тканях [6]. Ревматоидный артрит (РА) входит в группу системных аутоиммунных заболеваний с преобладающим иммунокомплексным механизмом иммунопатогенеза [18]. Патогенетическую роль ИК при РА до сих пор связывали с активацией системы комплемента и мобилизацией нейтрофилов крови в очаги отложения (депозиции) ИК. Однако провоспалительный потенциал ИК синовиальной жидкости больных РА не коррелирует с их способностью активировать систему комплемента. Более того, у больных РА нередко наблюдается нарушение механизмов активации системы комплемента, что может служить причиной снижения активности удаления ИК фагоцитирующими клетками и эритроцитами через CR1. За последние годы в связи с изучением цитокиновой регуляторной сети ИК привлекли к себе внимание в качестве возможных индукторов синтеза цитокинов мононуклеарами крови или синовиальной жидкости. Появились публикации, свидетельствующие о способности модельных ИК индуцировать in vitro продукцию и секрецию ряда цитокинов разными клетками - продуцентами. Была показана способность ИК синовиальной жидкости больных ювенильным РА индуцировать продукцию и секрецию провоспалительных цитокинов: IL-ip, TNFa, IL-6, IL-8, GM-CSF мононуклеарами человеческой крови. Достаточно убедительно была продемонстрирована патогенетическая роль провоспалительных цитокинов в инициации и поддержании хронических синовиитов при РА, в деструкции тканей суставных поверхностей [49]. Однако спорным остается вопрос об участии циркулирующих в крови ИК в'индукции синтеза провоспалительных цитокинов.

Недостаточно изученным остается вопрос о роли ИК в индукции синтеза противовоспалительных цитокинов.

Ревматоидный артрит (РА), как и другие иммунокомплексные заболевания, является многофакторным процессом, в патогенезе которого играют роль: изменения экспрессии некоторых поверхностных молекул, обеспечивающих взаимодействие клеток иммунной системы; дисбаланс продукции цитокинов, регулирующих экспрессию большинства поверхностных рецепторов, нарушение взаимодействия протоонкогенов, регулирующих апоптоз; особенности генотипа и ряд других факторов [133]. Основной мишенью воспалительного процесса при РА является синовиальная оболочка, гиперплазия которой лежит в основе гистопатологических изменений и характерна для этого заболевания [50]. Исследованиями последних лет было показано, что синовиальный микрососудистый эндотелий играет центральную роль в поддержании воспаления, а именно, в обеспечении хемотаксиса, адгезии и инфильтрации лейкоцитов. Адгезия воспалительных клеток к эндотелию и другим компонентам синовиальной ткани опосредована адгезионными молекулами, экспрессия которых увеличена при РА. В литературе есть данные о вовлечении ICAM-1/CD54 в патогенез РА. Альтернативным процессом в ревматоидном синовиуме, лимитирующим гиперплазию синовиальной ткани, является апоптоз. По литературным данным синовиоциты при РА усиленно экспрессируют на своей поверхности Fas-рецептор (CD95/APO-1), который после связывания с соответствующим Fas-лигандом индуцирует апоптоз. В основе системных проявлений РА лежат различной тяжести васкулиты, индуцированные циркулирующими ИК [18]. Патогенетическая роль ИК синовиальной жидкости пораженных суставов у больных РА изучена достаточно подробно. В отличие от этого, мнения исследователей по поводу участия циркулирующих ИК в патогенезе РА расходятся.

Цель работы: изучить патогенетическую роль иммунных комплексов при их взаимодействии с клетками крови и эндотелиальными клетками.

Задачи исследования:

1. Модифицировать стандартный метод выделения ИК из плазмы больных РА и изучить их основные биохимические характеристики.

2. Изучить возможность индукции ИК, выделенными из плазмы больных РА, секреции цитокинов (TNFa, IL-ip, IL-8, IL-10) клетками крови здоровых доноров.

3. Исследовать особенности индукции секреции тех же цитокинов клетками крови здоровых доноров при использовании разных по составу искусственно сформированных ИК.

4. Определить возможность индукции ИК, выделенными из плазмы больных РА, экспрессии молекул ICAM-1, Fas-peqenTOpa/CD95, HLA-A,-B,-C и HLA-DR на поверхности человеческих эндотелиальных клеток перевиваемой линии ECV304.

5. Оценить особенности индукции экспрессии молекул ICAM-1 на поверхности клеток ECV304 при использовании разных по составу искусственно сформированных ИК в присутствии и в отсутствие комплемента.

Научная новизна и теоретическая значимость работы.

В работе впервые показана способность иммунных комплексов, выделенных из плазмы крови больных ревматоидным артритом, индуцировать секрецию провоспалительных цитокинов (TNFa, IL-ip и IL-8) клетками крови здоровых доноров. Повышение уровней провоспалительных цитокинов, индуцированных этими ИК в присутствии нейтрализующей IL-10 антисыворотки, косвенно свидетельствует в пользу сопутствующей индукции синтеза IL-10. Показаны возможности селективной оценки биологической активности циркулирующих в крови иммунных комплексов.

Впервые показана способность иммунных комплексов, выделенных из плазмы крови больных ревматоидным артритом, индуцировать экспрессию ICAM-1, Fas-рецептора (CD95), HLA-A,-B,-C и HLA-DR на поверхности человеческих эндотелиальных клеток перевиваемой линии ECV304.

Впервые выявлены корреляционные связи между конкретными биохимическими характеристиками иммунных комплексов, выделенных из плазмы крови больных ревматоидным артритом, и способностью этих иммунных комплексов индуцировать экспрессию молекул - маркеров активации на поверхности эндотелиальных клеток.

Полученные в процессе реализации работы данные позволяют конкретизировать патогенетическую роль иммунных комплексов при их взаимодействии с клетками крови и эндотелиальными клетками.

Практическая значимость результатов работы. В ходе исследований был разработан модифицированный вариант иммуноферментного анализа - "клеточный ИФА" с использованием моноклональных антител отечественного производства для количественной оценки экспрессии фенотипических маркеров активации на поверхности эндотелиальных клеток человека. При индивидуальном изучении иммунных комплексов, выделенных из плазмы больных ревматоидным артритом, были обнаружены корреляционные связи между итенсивностью индукции экспрессии молекул на поверхности эндотелиальных клеток и конкретными биохимическими характеристиками иммунных комплексов. Относительные показатели биохимических характеристик иммунных комплексов: процентное содержание IgM от общего уровня белка и соотношение концентраций IgG и IgM в большей степени связаны с их биологической активностью, чем концентрация белка, концентрации иммуноглобулинов разных изотипов, антикомплементарность.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

- Иммунные комплексы, выделенные из плазмы крови больных ревматоидным артритом, в культурах цельной крови здоровых доноров индуцируют секрецию провоспалительных цитокинов (TNFa, IL-ip и IL-8). О сопутствующей индукции синтеза IL-10 теми же иммунными комплексами косвенно свидетельствует повышение уровней секреции провоспалительных цитокинов в присутствии антисыворотки, нейтрализующей IL-10.

- Иммунные комплексы, выделенные из плазмы крови больных ревматоидным артритом, индуцируют усиление экспрессии ICAM-1, Fas-рецептора (CD95), HLA-A,-B,-C и HLA-DR на поверхности человеческих эндотелиальных клеток перевиваемой линии ECV304. Уровни индуцированной экспрессии этих молекул коррелируют с конкретными биохимическими характеристиками иммунных комплексов.

- Способность нскусствено сформированных иммунных комплексов индуцировать продукцию провоспалительных цитокинов в культурах цельной крови здоровых доноров и усиливать экспрессию поверхностных маркеров активации на эндотелиальных клетках зависит от состава иммунных комплексов: особенностей антигенов, антител и, частично, от присутствия комплемента.

Реализация работы. По теме диссертации опубликовано 13 работ.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы представлены на международной конференции "5th IUBMB conference on the biochemistry of health and diseases" (Иерусалим, Израиль, 1998), на юбилейной конференции молодых ученых и специалистов, посвященной 200-летию Военно-медицинской Академии (Санкт-Петербург, 1998), "5th world congress on trauma, shock, inflammation and sepsis -pathophysiology, immune consequences and therapy" (Мюнхен, Германия, 2000), доложены на 4-й английской школе иммунологов им. Дж. Хэмфри (Пущино, 1998), 9-й Европейской конференции студентов и молодых ученых (Берлин, Германия, 1998), 3-й научной конференции с международным участием "Дни иммунологии в Санкт-Петербурге" (Санкт-Петербург, 1999), международном симпозиуме "Nordic-Russian St. Petersburg workshop on cell biology and normoxia" (Санкт-Петербург, 2000), 4-й научной конференции с международным участием "Дни иммунологии в Санкт-Петербурге" (Санкт-Петербург, 2000), международной конференции "Vascular Endothelium: Source and Target of Inflammatory Mediators" (Крит, Греция, 2000).

Диссертационная работа апробирована на научной конференции отдела иммунологии НИИЭМ РАМН 28 апреля 2000 года.

Объем и структура диссертации. Объем работы составляет 120 страниц машинописного текста, включая 20 таблиц и 10 рисунков. Список литературы состоит из 140 наименований, из них 18 работ принадлежит отечественным авторам и 122 - зарубежным.

Заключение диссертации по теме «Аллергология и иммулология», Кузнецова, Светлана Анатольевна

ВЫВОДЫ

1. Иммунные комплексы, выделенные из плазмы крови больных ревматоидным артритом, индуцируют секрецию TNFa, IL-1J3 и IL-8 в культурах цельной крови здоровых доноров. В присутствии антител, нейтрализующих IL-10, достоверно возрастают уровни секреции TNFa и IL-ip, но не IL-8, индуцированной этими же иммунными комплексами.

2. Агрегированный IgM, представляющий собой экспериментальную модель иммунных комплексов, индуцирует в культурах цельной крови здоровых доноров секрецию TNFa, IL-lp, IL-6 и IL-8.

3. Искусственно сформированные из дифтерийного анатоксина и специфических антител иммунные комплексы индуцируют секрецию провоспалительных цитокинов (TNFa, IL-ip, IL-6) мононуклеарами периферической крови и в культурах цельной крови здоровых доноров. В тех же условиях индукция секреции IL-8 иммунными комплексами не превышает индуцирующих эффектов отдельно взятых антигена и антител.

4. Индуцирующие эффекты иммунных комплексов, искусственно сформированных из тиреоглобулина и специфических антител, на секрецию TNFa и IL-ip не превышают индуцирующих эффектов самого тиреоглобулина в той же модельной системе.

5. Иммунные комплексы, выделенные из плазмы крови больных ревматоидным артритом, индуцируют значительное повышение уровней экспрессии ICAM-1, Fas-рецептора (CD95), HLA-A,-B,-C и HLA-DR на поверхности человеческих эндотелиальных клеток перевиваемой линии ECV304. Уровни экспрессии ICAM-1, индуцированные этими иммунными комплексами в присутствии комплемента, достоверно возрастают только в половине случаев, причем вне зависимости от уровней комплементсвязывающей активности этих комплексов.

6. Уровни экспрессии ICAM-1, Fas-рецептора (CD95), HLA-A,-B,-C и HLA-DR, индуцированной иммунными комплексами, выделенными из плазмы крови больных ревматоидным артритом, коррелируют с конкретными биохимическими характеристиками этих комплексов: с процентным содержанием IgM от общего

106 уровня белка и с соотношением уровней IgG и IgM в составе иммунных комплексов.

7. Агрегированный IgM,. в отличие от мономерного или агрегированного IgG, индуцирует повышение экспрессии ICAM-1 и Fas-рецептора (CD95) на поверхности человеческих эндотелиальных клеток перевиваемой линии ECV304. Индуцирующие эффекты иммунных комплексов, искусственно сформированных из корпускулярного антигена коксиелл Бернета и специфических антител, на экспрессию ICAM-1 в той же модельной системе не превышают индуцирующих эффектов отдельно взятого антигена.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

При изучении патогенетических механизмов развития таких иммунокомплексных заболеваний как РА до сих пор основное внимание уделялось иммунным комплексам синовиальной жидкости и синовиоцитам как клеткам-мишеням [65,69]. Циркулирующие в крови больных иммунные комплексы, их взаимоотношения с клетками крови и с эндотелием сосудов привлекли наше внимание, так как они оставались менее изученными.

В связи с тем, что выделенные из плазмы крови отдельных больных ИК не удалось ранжировать на основании изученных биохимических свойств, мы позволили себе пулировать ряд образцов ИК для ориентировочного изучения их влияния на секрецию цитокинов в культурах цельной крови здоровых доноров. В работе впервые была показана способность ИК, выделенных из плазмы больных РА, индуцировать секрецию провоспалительных цитокинов (TNFa, IL-ip и IL-8) клетками крови здоровых доноров. Полученные результаты позволяют объяснить литературные данные, свидетельствующие о способности лейкоцитов активироваться и секретировать провоспалительные цитокины в кровяном русле еще до попадания в очаг воспаления [10,105,109,121,138]. Противоречивость литературных данных, среди которых встречаются аргументы в пользу продукции и секреции провоспалительных цитокинов только в синовиальной жидкости, но не в циркуляции, может быть связана с параллельной продукцией активированными клетками крови противовоспалительного цитокина IL-10, ингибирующего продукцию провоспалительных цитокинов. У больных РА неоднократно была описана усиленная продукция IL-10 [62,98,107,109]. В связи с этим мы проверили, как изменится индукция секреции провоспалительных цитокинов ИК в присутствии антисыворотки, нейтрализующей IL-10. Дозозависимое действие специфической антисыворотки, нейтрализующей IL-10, проявлялось возрастанием уровней секреции всех трех провоспалительных цитокинов. Эти результаты косвенно свидетельствуют о сопутствующей индукции ИК, выделенными из плазмы крови больных РА, продукции и секреции клетками крови IL-10 и подчеркивают деликатный баланс между провопалительными и противовоспалительными цитокинами, нарушения которого лежат в основе многих иммунопатологических процессов. Этот противовоспалительный цитокин с одной стороны обладает широким спектром ингибиторных функций, с другой стороны может стимулировать повышенную и пролонгированную экспрессию Fcy-рецепторов на поверхности моноцитов для дополнительного прикрепления ИК, чем замыкается петля позитивной регуляции с обратной связью, ведущей к самоподдержанию иммунокомплексной патологии [84,45].

Использование ИК, выделенных из плазмы больных РА, в качестве индукторов цитокинов и клеток крови здоровых доноров в качестве продуцентов цитокинов позволяет проводить сравнительную оценку провоспалительного потенциала циркулирующих в крови ИК. Следует отметить, что оценивается ответ на контакт с ИК лейкоцитов крови здоровых доноров, а лейкоциты крови больного РА могут отличаться от лейкоцитов здоровых лиц по экспрессии рецепторов для прикрепления ИК или по способности продуцировать и секретировать цитокины.

Судьба ИК в организме и их патогенетическая роль в значительной степени определяется величиной ИК, а величина, в свою очередь, зависит от участия в формировании ИК иммуноглобулинов разных, изотипов. При иммунокомплексной патологии циркулирующие ИК кроме IgG в большинстве случаев содержат IgM, которые, как правило, образуют наиболее крупные ИК [6]. В связи с этим кроме природных ИК, выделенных из плазмы больных РА, были использованы в качестве экспериментальной модели ИК агрегированный IgM и искусственно сформированные ИК с известным составом. В настоящей работе с использованием трех независимых моделей искусственно сформированных иммунных комплексов было продемонстрировано их влияние на секрецию провоспалительных цитокинов клетками крови здоровых доноров, которая зависела от состава иммунных комплексов. Полученные результаты свидетельствуют о способности агрегированного IgM индуцировать существенное усиление секреции TNFa, IL-lp, IL-6 и IL-8 в культурах цельной крови здоровых доноров.

Используя искусственные ИК, сформированные из дифтерийного анатоксина и антител соответствующей специфичности, мы продемонстрировали способность ИК индуцировать секрецию TNFa, IL-lp, IL-6 в культурах цельной крови здоровых доноров. Полученные результаты согласуются с ранее опубликованными литературными данными, указывающими на способность разных по составу искусственных ИК индуцировать продукцию и секрецию провоспалительных цитокинов клетками разных типов [34,41,66,78,106,120,127]. При изучении индукции теми же ИК секреции IL-8 в культурах цельной крови мы столкнулись с ситуацией, когда предварительно сформированные ИК индуцировали прирост секреции IL-8, но он не превосходил приростов секреции, индуцированных отдельно взятыми дифтерийным анатоксином или отдельно добавленными специфическими антителами. Это заставило нас расширить спектр исследуемых искусственных ИК.

В качестве экспериментальной модели ИК, содержащих аутоантиген, использовали ИК, сформированные из тиреоглобулина и специфических моноклональных антител. Тиреоглобулин является одним из основных тиреоидных антигенов и благодаря особенностям своего строения способен индуцировать сильный иммунный ответ. Было показано, что лимфоциты, несущие рецепторы к тироидным антигенам, постоянно присутствуют в крови не только больных аутоиммунным тиреоидитом, но и здоровых людей. Патогенетическое значение антитиреоглобулиновых антител и циркулирующих ИК у больных аутоиммунным тиреоидитом оценивается противоречиво, его связывают со способностью ИК усиливать воспаление, которое наблюдается при данной патологии [6]. Полученные результаты показали, что сам антиген обладает выраженной цитокининдуцирующей активностью, а соединение его с антителами не отражалось на способности индуцировать секрецию TNFa и-IL-ip. Секреция IL-8, индуцированная этими же ИК, была достоверно больше, чем индуцированная отдельно взятыми Аг и Ат.

Сравнение цитокининдуцирующей активности природных и искусственных ИК позволяет прийти к заключению о зависимости эффектов ИК от особенностей антигенов и антител, входящих в их состав. Очевидна наиболее выраженная цитокининдуцирующая активность агрегированного IgM. Однако, и искусственные ИК, содержащие антитела, относящиеся к изотипу IgG, индуцировали секрецию провоспалительных цитокинов. Была показана необходимость участия целых молекул антител, включающих Fc-фрагменты, в формировании ИК для проявления ими цитокининдуцирующей активности. Наименее выраженной цитокининдуцирующей активностью характеризуются искусственные ИК, включающие тиреоглобулин и специфические антитела. В данном случае цитокининдуцирующая активность самого антигена - тиреоглобулина доминирует и не изменяется при вхождении его в состав

ИК. Баланс между про- и противовоспалительными цитокинами, которые продуцируются в ходе аутоиммунного процесса может быть изменен большим количеством факторов и циркулирующие ИК, по-видимому, являются одними из них.

Очевидно, что продукция цитокинов, индуцированная ИК, происходит в условиях очень сложных межклеточных взаимодействий, в том числе, взаимодействия лейкоцитов крови с эндотелиальными клетками. Формирование очага воспаления связано, прежде всего, с мобилизацией лейкоцитов из кровяного русла. Выходу лейкоцитов из сосудов предшествуют процессы их адгезии к эндотелию и трансэндотелиальной миграции [1,42]. Исследованиями последних лет было показано, что эндотелий играет центральную роль в поддержании воспаления при иммунокомплексных заболеваниях, а именно, в обеспечении адгезии, хемотаксиса и трансэндотелиальной миграции лейкоцитов. Цитокины являются необходимыми трансмиттерами межклеточного взаимодействия как в норме, так и при патологии. Они формируют сеть коммуникационных сигналов между клетками иммунной системы и клетками других органов и тканей. Помимо цитокинов и факторов роста межклеточные взаимодействия обеспечиваются адгезивными межклеточными и клеточно-матриксными молекулами. Достаточно подробно изучена способность провоспалительных цитокинов индуцировать экспрессию адгезионных молекул на эндотелиальных клетках. Однако непосредственное влияние ИК на фенотип эндотелиальных клеток до сих пор не было изучено, что и привлекло наше внимание.

При индивидуальном тестировании ИК, выделенных из плазмы больных РА, в концентрациях, соответствующих исходным в организме больного, было обнаружено, что все образцы ИК достоверно увеличивали экспрессию адгезионных молекул ICAM-1/CD54 на поверхности человеческих эндотелиальных клеток перевиваемой линии ECV304. В присутствии комплемента только в половине случаев уровни индукции экспрессии ICAM-1 достоверно увеличивались по сравнению с собственными эффектами ИК и не зависели от антикомплементарной активности этих комплексов.

Помимо главной своей функции молекулы адгезии, которая заключается в обеспечении физического контакта между клетками, ICAM-1 является молекулой, проводящей дополнительный стимулирующий сигнал [12]. Поскольку ICAM-1 является неотъемлемой частью таких межклеточных взаимодействий, как презентация антигена, адгезия и миграция лейкоцитов, клеточно-опосредованная цитотоксичность, индукция апоптоза клеток, то повышение экспрессии этих молекул может отражаться на всех этих процессах.

Кроме того, было показано индуцирующее действие этих же образцов ИК, выделенных из плазмы больных РА, на экспрессию молекул МНС I и II классов и Fas-peuenTopa/CD95 на поверхности эндотелиальных клеток перевиваемой линии ECV304. Уровни экспрессии всех четырех поверхностных молекул, индуцированные индивидуальными образцами ИК- больных РА в концентрациях, соответствующих исходным в организме больного, коррелировали между собой. Вместе с тем были выявлены существенные различия между индивидуальными образцами ИК по способности индуцировать экспрессию фенотипических маркеров активации эндотелиальных клеток. При сопоставлении изученной биологической активности ИК с биохимическими характеристиками тех же ИК были обнаружены статистически достоверные корреляционные связи между уровнями индуцированной экспрессии этих молекул и некоторыми характеристиками состава иммунных комплексов и клинико-лабораторными показателями у больных (Таблица 20).

При изучении влияния агрегированных иммуноглобулинов человека, использованных в качестве экспериментальной модели ИК, на экспрессию ICAM-1 на поверхности эндотелиальных клеток, было обнаружено, что агрегированный IgM, но не мономерный или агрегированный IgG, индуцировал значительное увеличение экспрессии адгезионных молекул. Присутствие комплемента способствовало дальнейшему увеличению уровней экспрессии ICAM-1 на поверхности эндотелиальных клеток, индуцированной агрегированным IgM.

При изучении влияния модельных ИК, сформированных из коксиеллезного антигена в различных соотношениях с антикоксиеллезными антителами, на экспрессию ICAM-1, мы столкнулись с ситуацией, в которой ИК индуцировали разные уровни экспрессии адгезионных молекул в зависимости от соотношений компонентов в составе ИК. Сам по себе корпускулярный антиген коксиелл Бернета достоверно и дозозависимо индуцировал усиление экспрессии ICAM-1 на клетках линии ECV304. По мере увеличения доли антител в составе ИК их способность индуцировать экспрессию ICAM-1 на эндотелиальных клетках снижалась вплоть до полной ее утраты.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Кузнецова, Светлана Анатольевна, 2003 год

1. Александров А.В., Джексон A.M., Румянцев А.Г. Анализ механизма модуляции межклеточных молекул адгезии ICAM.// Иммунология,- 1997,- №1.- С.4-12.

2. Волчков В.А. Краткое практическое руководство по биометрии для врачей.-Санкт-Петербург,- 1998,- 63 с.

3. Досон Р., Элиот Д., Элиот У., Джонс К. // Справочник Биохимика.-М., 1991,-С.466.

4. Кетлинский С.А., Симбирцев А.С., Воробьев А.А. Эндогенные иммуномодуляторы.-СПб.:-Гиппократ, 1992. -256.

5. Ковальчук JI.B., Чередеев А.Н. Иммунорегуляторная роль моноцитов в норме и при иммунопатологии. //Итоги науки и техники (серия «Иммунология»), 1991, 27: 220с.

6. Константинова Н.А. Иммунные комплексы и повреждение тканей.-М.: Медицина, 1996.-256с.

7. Косицкая JI.C., Софронов Б.Н. Новый простой способ определения циркулирующих иммунных комплексов.// Иммунология.-1986.-№4.-С.64-66.

8. Лаврова Т.Р., Родштейн О.А., Косицкая Л.С. Антикомплементарность и криоглобулины сыворотки крови больных ревматоидным артритом.// Тер.архив.-1978.-№9.-С.68-72.

9. Лакин Г.Ф. Биометрия : Учебн. Пособие для биологич. Спец. Вузов,- 3-у изд., перераб,- М.: Высш. Школа, 1980.-293 с.

10. Ю.Мазуров В.И., Шемеровская Т.Г., Лила A.M., Кузнецов И.А., Демина Р.Я. и др. Учение В.И.Иоффе и актуальные проблемы аутоиммунных заболеваний.// Медицинская иммунология.- 1999.-Т.1, №1-2,- С. 109-118.

11. Насонов Е.Л., Самсонов М.Ю., Тилз Г.П., Никифорова Е.Л., Чичасова Н.В. и др. Растворимые молекулы адгезии (Р-селектин, ICAM-1 и ICAM-3) при ревматоидном артрите.// Тер. Архив,- 1999,- №5,- С. 17-20.

12. Пальцев М.А., Иванов А.А. Межклеточные взаимодействия.- М.: Медицина, 1995,- 224 с.

13. Программированная клеточная гибель . Под. Ред. Проф. B.C. Новикова. -СПб.: Наука, 1996 276 с.

14. Ройт А. Основы иммунологии.-М.:Мир, 1991,- 328 с.

15. Федосеева В.Н., Порядин Г.В., Ковальчук JI.B., Чередеев А.Н., Коган В.Ю. Руководство по иммунологическим и аллергологическим методам в гигиенических исследованиях,- 1993. М,- «Промедэк».- 320 с.

16. Фрейдлин И.С. Иммунная система и ее дефекты.- Калининград, 1998,- 110 с.

17. Фримель Г. Иммунологические методы.-М.:Медицина.-1987.- 472 с.

18. Шулутко Б.И. Внутренняя медицина: Руководство для врачей. -СПб.:"Левша.Санкт-Петербург".-1999.-Т.2.- 488 с.

19. Abbas A., Lichtman A., Pober J. Cellular and molecular immunology. -New York.: W.B.Saunder Company, 1991,- 420 p.

20. Abbot S.E., Kaul A., Stevens C.R., Blake D.R. Isolation and culture of synovial microvascular endothelial cells.// Arthritis. Rheum.- 1992,- Vol.35, No.4.- P.401-406.

21. Aggarwal В., Pocsik E. Cytokines: from clone to clinic. // Arch. Biochem. Biophys.-1992,- Vol.292.- P.335-345.

22. Aguillon J.C., Ferreira V., Nunez E., Paredes L., Molina M.C. et al. Immunomodulation of LPS ability to induce the local Shwartzman reaction.// Scan. J. Immunol.- 1996,- Vol.44, No.6.- P.551-555.

23. Andres В., Cardaba В., del Pozo V., Martin-Orozco E., Gallardo S. et al. Modulation of the Fc gamma RII and Fc gamma RIII induced by GM-CSF, IFN-gamma and IL-4 on murine eosinophils.// Immunlogy.- 1994,- Vol.83, No.l.- P. 155-160.

24. Andres В., Mueller A.L., Blum A., Weinstock J., Vetbeek S. et al. Fc gammaRII (CD32) is linked to apoptotic pathways in murine granulocyte precursors and mature eosinophils.// Blood.- 1997,- Vol.90, No.3.-P. 1267-1274.

25. Arnold R., Werner F., Humbert В., Werchau H., Konig W. Effect of respiratory sycytial virus-antibody complexes on cytokine (IL-8, IL-6, TNF-a) release and respiratory burst in human granulocytes.// Immunology.- 1994,- Vol.82.- P. 184-191.

26. Ararett F.C., Edworth S.M., Bloch D.A., McShane D.J., Fries J.F. et al. The American Rheumatism Association 1987 revised criteria for the classification of rheumatoid arthritis.// Arthritis. Rheum.- 1988,- Vol.31.- P.315-324.

27. Asshman R.F., Peckham D., Stunz L.L. Fc Receptor off-signal in the В cell involves apoptosis.// J Immunol.- 1996.- Vol.157.- P.5-11.

28. Azzoni L., Anegon I., Calabretta В., Perussia B. Ligand binding to FcyR induces c-myc-Dependent apoptosis in IL-2-stimulated NK cells.// J Immunol.- 1995,-Vol.154.- P.491-499.

29. Barcy S., Wettendorff M., Leo O., Urbain J., Kruger M. et al. FcR cross-linking on monocytes results in impaired T cell stimulatory capacity.// Int.immunol.- 1995,-Vol.7, No.2.-P. 179-185.

30. Barrett A.J., Brown M.A., Sayer C.A. The electrophoretically "slow" and "fast" form of the microglobulin molecule.// J. Biochem.- 1979.- Vol. 181,- P.401-418.

31. Batteux F., Palmer P., Daeron M., Weill В., Lebon P. Fcgamma RII (CD32) -dependent induction of interferon-alpha by serum from patients with lupus erythematosus.// Eur Cytokine Netw.- 1999,- Vol. 10, No.4.- P.509-514.

32. Benjamini E., Sunshine G., Leskowitz S. Immunology, a short course. WELEY-LISS, New York.- 1996.- 451 p.

33. Beynon H.L.C., Davies K.A., Haskard D.O., Walport M.J. Erythrocyte complement receptor type 1 and interactions between immune complexes, neutrophils, and endothelium.// J Immunol.- 1994.- Vol. 153,- P.3160-3167.

34. Bian H., Reed E.F. Alloantibody-mediated class I signal transduction in endothelial cells and smooth muscle cells: enhancement by IFN-y and TNF-a.// J Immunol.-1999,-Vol.163.-P.1010-1018.

35. Blank M., Krause I., Goldkorn Т., Praprotnik S., Livneh A. et al. Monoclonal anti-endothelial cell antibodies from a patient with Takayasu arteritis activate endothelial cells from large vessels.//Arthritis. Rheum.- 1999.-Vol.42, No.7.- P. 1421-1432.

36. Bloom B.J., Miller L.C., Tucker L.B., Schaller J.G., Blier P.R. Soluble adhesion molecules in juvenile rheumatoid arthritis.// J. Rheumatol.- 1999,- Vol.26, No.9,-P.2044-2048.

37. Bona C., Bonilla F. Textbook of immunology, second ed., Harwood Acad. Publ.-Amsterdam.- 1996,- 406 p.

38. Cines D.B., Pollak E.S., Buck C.A., Loscalzo J., Zimmerman G.A. et al. Endothelial cells in physiology and in the pathophysiology of vascular disorders.// Blood.- 1998,-Vol.91, No. 10,- P.3527-3561.

39. Dawe C.J., Potter M. Morphologic and biologic progression of a lymphoid neoplasm of the mouse in vivo and in vitro.// Am J Pathol.- 1957,- Vol.33, No.3.- P.603.

40. Donnely R.P., Dickensheets H., Finbloom D.S. The Interleukin-10 signal transduction pathway and regulation of gene expression in mononuclear phagocytes.// J Interferon Cytokine Res.- 1999,- Vol.19.- P.563-573.

41. Doukas J., Pober J.S. IFN-y- Enhances endothelial activation induced by Tumor Necrosis Factor but not IL-1.// J Immunol.- 1990,- Vol.145, No.6.- P.1727-1733.

42. Esparza I., Green R., Schreiber R.D. Inhibition of macrophage tumoricidal activity by immune complexes and altered erythrocytes.// J Immunol.- 1983,- Vol.131, No.5,-P.2117-2121.

43. Feldman M., Brennan F.M., Maini R.N. Role of cytokines in rheumatoid arthritis.// Annu.Rev.Immunol.- 1996,- Vol.14.- P.397-440.

44. Firestein G.S. Starving the synovium: angiogenesis and inflammation in rheumatoid arthritis.//J Clin Invest.- 1999,- Vol.103, No.l.- P.3-4.

45. Freidlin I., Kolesova O. TNF-alpha mediates activating effect of IFN-gamma In:8th International Congress of Immunology. Budapest, 1992:148.

46. Fridman W. Fc receptors and immunoglobulin binding factors.// FASEB J.- 1991,-Vol.5, No. 12,- P.2684-2690.

47. Gamberale R., Geffner J.R., Trevani A., Chernvsky A., Scolnik M. et al. Immune complexes inhibit apoptosis of chronic lymphocytic leukaemia В cells.// Br. J. Haematol.- 1999.- Vol.107, No.4.- P.870-876.

48. Gamberale R., Giordano M., Trevani A.S., Andonegui G., Geffiier J.R. Modulation of human neutrophil apoptosis by immune complexes.// J Immunol.- 1998,- Vol. 161,-P.3666-3674.

49. Gessner J.E., Heiken H., Tamm A., Schmidt R.E. The IgG Fc receptor family.// Ann Hematol.- 1998.- Vol.76.- P.231-248.

50. Gomez-Guerrero C., Lopez-Armada M.J., Gonzales E., Egido J. Soluble IgA and IgG aggregates are catabolized by cultured rat mesangial cells and induce production of TNF-a and IL-6, and proliferation.// J. Immunol.- 1994,- Vol. 153,- P. 5247-5255.

51. Groger M., Sarmay G., Fiebiger E., Wolff K., Petzelbauer P. Dermal microvascular endothelial cells express CD32 receptors in vivo and in vitro.// J. Immunol.- 1996,-Vol. 156,-P. 1549-1556.

52. Hashimoto Y., Nakano K., Yoshonoya S., Tanimoto K., Itoh K. Endothelial cell destruction by polymorphonuclear leukocytes incubated with sera from patients with systemic lupus erythematosus (SLE).// Scan J Rheumatol.- 1992,- Vol.21, No.5.-P.209-214.

53. Hebert M.J., Gullans SR., Mackenzie H.S., Brady H.R. Apoptosis of endothelial cell is associated with paracrine induction of adhesion molecules.// Am. J. Pathol.- 1998,-Vol.152, No2.- P.523-532.

54. Isomaki P., Luukkainen R., Saario R, Toivanen P.,Punnonen J. Interleukin-10 as an antiinflammatory cytokine in rheumatoid synovium.// Arthritis Rheum.- 1996,-Vol.39, No.3.- P.386-395.

55. Izui S., Fulpius Т., Reininger L., Pastore Y., Kobayakawa T. Role of neutrophils in murine cryoglobulinemia.// Inflamm res -1998.- Vol.47, No.3 Suppl.- P.S145-S150.

56. Janeway Ch.A., Travers P. Immunobiology. London.: Current Biology Ltd. 1994,516 p.

57. Jarvis J.N., Wang W., Moore H.T., Zhao L., Xu C. In vitro induction of proinflammatory cytokine secretion by juvenile rheumatoid arthritis synovial fluid immune complexes.// Arthr. Rheum.-1997.- Vol.40, No. 11.- P.2039-2046.

58. Jarvis J.N., Xu C., Wang W., Petty H.R., Gonzalez M. Et al. Immune complex size and complement regulate cytokine production by peripheral blood mononuclear cells.// Clin Immunol.- 1999,- Vol.93, No.3.- P.274-282.

59. Jensen T.S., Matre R. Fcy-receptor activity in the developing human placenta.// APMIS.- 1995.- Vol. 103.- P.433-438.

60. Jones S.L., Wang J., Turck C.W., Brown E.J. A role for the actin-bundling protein L-plastin in the regulation of leukocyte integrin function.// Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-1998,-Vol.95.-P.9331-9336.

61. Kocher М., Siegel M.E., Edberg J.C., Kimberly R.P. Cross-linking of Fc gamma receptor Iia and Fc gamma receptor Illb induces different proadhesive phenotypes on human neutrophils.// J Immunol.- 1997,- Vol.159, No.8.- P. 3940-3948.

62. Krenn V., Schedel J., Doring A., Huppertz H.-I., Gohlke F. et al. Endothelial cells are the major source of sICAM-1 in rheumatoid synovial tissue.// Rheumatol Int.- 1997.-Vol.17.- P. 17-27.

63. Kronborg G. Lipopolysaccharide (LPS), LPS-immune complexes and cytokines as inducers of pulmonary inflammation in patients with cystic fibrosis and chronic Pseudomonas aeruginosa lung infection.// APMIS Supplementum.- 1995.- Vol.103, No.50.-P.l-30.

64. Letterio J., Geiser A.G., Kulkarni A.B., Dang H.,Kong L. Et al. Autoimmunity asociated with TGF-pi-deficiency in mice is dependent on MHC Class II antigen expression.// J Clin Invest.- 1996,- Vol.98.- P.2109-2119.

65. Lopez-Pedrera C., Jardi M., Ingles-Esteve J., Munoz-Canoves P. Dorado G. et al Characterization of tissue factor expression on the human endothelial cell line ECV304.// Am J Hematol.- 1997,- Vol.56.- P.71-78.

66. MacCormac L.P., Grundy. Human cytomegalovirus induces an Fc у receptor (FcyR) in endothelial cells and fibroblasts that is distinct from the human cellular FcyRs.// J Infect Diseases.- 1996,- Vol. 174,- P. 1151-1161.

67. Mantovani A., Garlanda C., Introna M., Vecchi A. Regulation of endothelial cell function by pro- and anti-inflammatory cytokines.// Transpl. Proceed.- 1998,-Vol.30.- P.4239-4243.

68. Marsh C.B., Lowe M.P., Rovin B.H., Parker J.M.,Liao Z. et al. Lymphocytes produce IL-ip in response to Fey receptor cross-linking: effects on parenchymal cell IL-8 release.// J Immunol.- 1998,- Vol.160.- P.3942-3948.

69. Marsh C.B., Pomerantz R.P., Parker J.M., Wirmard A.V., Mazzaferri E.L. et al. Regulation of monocyte survival in vitro by deposited IgG: role of macrophade colony-stimulating factor.// J-Immunol.- 1999,- Vol. 162, No. 10,- P.6217-6225.

70. Matsumoto K. Effect of various cytokines, lipopolysaccharide, and soluble immune complexes on the release of IL-8 by monocytes from patients with IgA nephropathy.// Nephron.- 1995,- Vol.69.- P.352-353.

71. Matz J., Williams J., Rosenwasser L.J., Borish L.C. Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor stimulates macrophages to respond to IgE via the low affinity IgE receptor (CD23).// J Allergy Clin Immunol.- 1994,- Vol.93.- P.650-657.

72. Meager A., Leung H., Woolley J. Assays for tumor necrosis factor and releted cytokines.// J Immunol Methods.- 1989,- Vol.116.- P.l-17.

73. Montinaro V., Hevey K., Aventaggiato L., Esparza A., Chen A. et al. Extrarenal cytokines modulate the glomerular response to IgA immune complexes.// Kidney frit.1992,- Vol.42, No.2.- P.341-353.

74. Moore K.W., O'Garra A., Waal Malefyt R, Vieira P., Mosmann T.R. Interleukin-10. // Annu. Rev. Immunol.- 1993,- Vol.11.- P. 165-190.

75. Mozaffarian N., Berman J.W., Casadevall A. Immune complexes increase nitric oxide production by interferon-gamma-stimulated murine macrophage-like J774.16 cells.// J Leukoc Biol.- 1995,- Vol.57, No.4.- P.657-662.

76. Mulligan M.S., Hevel J.M., Marietta M.A., Ward P.A. Tissue injury caused by deposition of immune complexes is L-arginine dependent.// Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 1991,-Vol.88, No. 14,-P.633.8-6342.

77. Mulligan M.S., Jones M.L., Bolanowski M.A., Baganoff M.P., Deppeler C.L. et al. Inhibition of lung inflammatory reactions in rats by an antihuman IL-8 antibody.// J.Immimol.- 1993,- Vol.150 ,No.l2.- P.5585-5595.

78. Mulligan M.S., Jones M.L., Voporciyan A.A., Howard M.C., Ward P.A. Protective effects of IL-4 and IL-10 against immune complex-induced lung injury.// J.Immunol.1993,- Vol.151, No. 10,- P.5666-5674.

79. Mulligan M.S., Ward P.A. Immune complex-induced lung and dermal vascular injury. Differing requirements for tumor necrosis factor-alpha and IL-1.// J.Immunol.-1992,- Vol.149, No.l.- P.331-339.

80. Mutin M., Dignat-Gearge F., Sampol J. Immunologic phenotype of cultured endothelial cells: quantitativ analysis of cell surface molecules.// Tissue Antigens. -1997,- Vol.50, No.5.- P.449-458.

81. Nakajima H., Gleich G.J., Kita H. Constitutive production of IL-4 and IL-10 an stimulated production of IL-8 by normal peripheral blood eosinophils.// J.Immunol.-1996. Vol.156.- P.4859-4866.

82. Neves S.M.F., Rezende S.A., Goes A.M. Nitric oxide-mediated immune complex-induced prostaglandin E2 production by peripheral blood mononuclear cells of humans infected with Schistosoma mansoni.// Cell Immunol.- 1999,- Vol.195.- P.37-42.

83. O'Reilly L.A., Strasser A. Apoptosis and autoimmune disease.// Inflamm. res.- 1999,-Vol.48.-P.5-21.

84. Oliver J.C., Bland L.A., Oettinger C.W., Arduino M.J., McAllister S.K. et al. Cytokine kinetics in an vitro whole blood model following an endotoxin challenge.// Lymphokine Cytokine Res.- 1993,- Vol.12, No.2.- P. 115-120.

85. Pascual M., French L. Complement in human diseases: looking towards the 21st century.// Immunol. Today.- 1995,- Vol.16, No.2.- P. 58-61.

86. Patry C., Herbelin A., Lehuen A., Bach J.F., Monteiro R.C. Fc alpha receptors mediate release of tumor necrosis factor-alpha and interleukin-6 by human monocytes following receptor aggregation.// Immunology.- 1995,- Vol.86, No.l.- P. 1-5.

87. Rezende S.A., Gollob K.J., Correa-Oliveira R, Goes A.M. Down modulation of MHC surface on В cells by suppressive immune complexes obtained from chronic intestinal schistosomiasis patient.// Immunol Lett.- 1998,- Vol.62, No2.- P.67-73.

88. Richard C.A., Gudewicz P.W., Loegering D.J. IgG-coated erythrocytes augment the lipopolysaccharidestimulated increase in serum tumor necrosis factor-alpha.// Am J Physiol.- 1999,- Vol.276(l Pt2).- P.R171-R177.

89. Rose M.L. Endothelial cells as antigen-presenting cells: role in human transplant rejection.// Cell. Mol. Life Sci.- 1998,- Vol.54.- P.965-978.

90. Sanchez-Mejorada G., Rosales C. Fey Receptor-mediated mitogen-activated protein kinase activation in monocytes is independent of Ras.// J Biol Chem.- 1998-Vol.273, No.42.- P.27610-27619.

91. Schlaak J.F., Buschenfelde K.H., Marker-Hermann E. Different cytokine profiles in the synovial fluid of patients with osteoarthritis, rheumatoid arthritis and seronegative spondylarthropathies.// Clin.Exp.Rheum.- 1996,- Vol.14, No.2.- P. 155162.

92. Schlondorff V. Roles of the mesangium in glomerular function.// Kidney Int.-1996,- Vol.49, No.6.- P. 1583-1585.

93. Schulze-Koops H., Davis L.S., Kavanaugh A.F. Elevated cytokine messenger RNA levels in the peripheral blood of patients with rheumatoid arthritis suggestdifferents degrees of myeloid cell activation.// Arthr. Rheum.- 1997,- Vol.40, No.4.-P.639-647.

94. Scott C.B., Ratcliffe D.R., Cramer E.B. Human monocytes are unable to bind to or phagocytize IgA and IgG immune complexes formed with influenza virus in vitro.// J.Immunol.- 1996,- Vol.157.- P.351-359.

95. Sutterwala F.S., Noel G.J., Clynes R, Mosser D.M. Selective suppression of interleukin-12 induction after macrophage receptor ligation.// J Exp Med.- 1997,-Vol.185, No. 11,- P1977-1985.

96. Suzuki T. Signal transduction mechanisms through Fey receptors on the mouse macrophage surface.//FASEB J.- 1991.- Vol.5.- P. 187-193.

97. Takahasi K., Sawasaki Y. Rare spontaneously transformed human endothelial cell line provides useful research tool.// In vitro Cell. Dev. Biol.- 1992,- Vol. 28,- P.380-382.

98. Tebib J.G., Boughaba H., Lebroublon M.C., Bienveme J., Noel E. et al. Serum IL-2 level in rheumatoid arthritis: correlation with joint destruction and disease progression.// Eur. Cytokine Netw.- 1991,- Vol.2, No.4.- P.239-243.

99. Thomson A. (Ed.) The Cytokine Handbook, Academic Press, London. 1992. -418 p.

100. Timmerman J.J., Van Gijlswijk-Janssen D.J., Van Der Kooij S.W., Daha M.R. Antigen-antibody complexes enhance the production of complement component C3 by human mesangial cells.// J. Amer. Society of Nephrology.- 1997,- Vol.8, No.8.-P. 1257-1265.

101. To S.S.T., Newman P.M., Hyland V. J., Robinson B.G., Schrieber L. Regulation of adhesion molecule expression by human synovial microvascular endothelial cells in vitro.// Arthritis. Rheum.- 1996.- Vol.39, No.3.- P.467-477.

102. Tripp C., Beckerman K.P., Unanue E.R. Immune complexes inhibit antimicrobial responses through Interleukin-10 production.// J Clin Invest.- 1995,- Vol.95.- P. 16281634.

103. Trotta R., KanaJkaraj P., Perussia B. FcyR-dependent mitogen-activated protein kinase activation in leukocytes: a common signal transduction event necessary for expression of TNFa and ealy activation genes.// J.Exp.Med.- 1996,- Vol. 184.-P. 1027-1035.

104. Ueki Y., Miyake S., Tominaga Y., Eguchi K. Increased Nitric Oxide levels in patients with rheumatoid arthritis.// J.Pheumatol.-1996.- Vol.23.- P.230-236.

105. Van der Pol W.-L., Van de Winkel G.I. IgG receptor polymorphisms: risk factors for disease.// Immunogenetics.- 1998,- Vol.48.- P.222-232.

106. Vaporcian A.A., Mulligan M.S., Warren J.S., Barton P.A., Miyasaka M., Ward P.A. Up-regulation of lung Vascular ICAM-1 in rats is complement dependent.// J. Immunol.- 1995,- Vol.155.- P. 1442-1449.

107. Vaughn D.E., Milburn C.M., Penny D.M., Martin W.L., Johnson J.L., Bjorkman P.J. Identification of critical IgG binding epitopes on the neonatal Fc receptor.// J. Mol. Biol.- 1997,-Vol. 174,- P.597-607.

108. Virgin H.W.IV, Unanue E.R. Suppression of immune response to listeria monocytogenes. I. Immune complexes inhibit resistance.// J. Immunol.- 1984,-Vol.133, No.l.- P.104-109.

109. Wang J., Brown E.J. Immune complex-induced integrin activation and L-plastin phosphorylation require protein kinase A.// J Biol Chem.- 1999,- Vol.274, No.34.-P.24349-24356.

110. Wang J., Lenardo M.J. Essential Lymphocyte Function Associated 1 (LFA-1): Intercellular Adhesion Molecule Interactions for T Cell-mediated В Cell Apoptosis by Fas/Apo-l/CD95.// J Exp Med.- 1997,- Vol.186, No. 7,- P. 1171-1176.

111. Warren J.S. Intrapulmonary interleukin 1 mediates acut immune complex alveolites in the rat.// Biochem. Biophys. Res. Commun.- 1991,- Vol.175, No.2.-P.604-610.

112. Weyand C.M., Goronzy J.J. The molecular basis of rheumatoid arthritis.// J Mol Med.- 1997,- Vol.75.- P.772-785.

113. Wharram B.L., Fitting K., Kunkel S.L., Remick D.G., Merritt S.E., Wiggins R.C. Tissue factor expression in endothelial cell/monocyte cocultures stimulated by lypopolysaccharide and/or aggregated IgG.// J. Immunol.- 1991,- Vol.146, No.5.-P. 1437-1445.

114. Williams R.C., Malone C.C., Kao K.-J. IgM Rheumatoid Factors React with Human Class IHLA Molecules.// J Immunol.- 1996,- Vol. 156.- P. 1684-1694.

115. Willis H.E., Browder В., Feister A.J., Mohanakumar Т., Ruddy S. Monoclonal antibody to human IgG Fc receptors.// J Immunol.- 1988,- Vol. 140, No. 1,- P.234-239.

116. Woods J.M., Haines G.K., Shah M.R., Rayan G., Koch A.E. Low-level production of interleukin-13 in synovial fluid and tissue from patients with arthritis.// Clin.Immunol.Immunopathol.- 1997,- Vol.85, No.2.- P.210-220.

117. Yentis S.M., Gooding R.P., Riches P.G. The effects of IgG and immune complexes on the endotoxin-induced cytokine response.// Cytokine.- 1994,- Vol.6, No.3.- P.247-254.

118. Выражаю сердечную благодарность Тихомирову И. И. за помощь в работе с клиническим материалом, полезные советы и консультации.

119. Огромное спасибо П.Г. Назарову и Е.П. Киселевой за рецензирование работы, полезные советы и замечания. Хочется выразить благодарность всем сотрудникам отдела иммунологии НИИЭМ РАМН, за внимание и неоценимую помощь при выполнении этой работы.

120. Особую благодарность автор выражает своему научному руководителю Ирине Соломоновне Фрейдлин за переданные мне знания, профессиональный опыт и помощь на всех этапах работы.

121. Пользуясь случаем, хочется поблагодарить моих дорогих родителей за понимание, терпение и поддержку.