Исследование механизмов регуляции апоптоза лейкоцитов периферической крови у больных системной красной волчанкой тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Хассан Мохилдейн Абдел Маруф

• Хассан Мохилдейн Абдел Маруф
• кандидат биологических наук
• 2004

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Хассан Мохилдейн Абдел Маруф

Перечень основных сокращений, условных обозначений, символов, единиц и терминов.

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Апоптоз.

1.1.1. Определение.

1.1.2. Этапы апоптоза.

1.1.3. Биохимическая характеристика апоптоза.

1.1.4. Стадии апоптоза.;.

1.1.5. Апоптоз и клеточный цикл.

1.1.6. Роль апоптоза.

1.1.7. Апоптоз и заболевания.

1.2. Fas и Fas-L.

1.2.1. Функция Fas рецептора.

1.2.2. Структура Fas рецептора.

1.2.3. Растворимая форма Fas рецептора.

1.2.4. Экспрессия Fas рецептора.

1.2.5. Структура Fas лиганда (FasL).

1.2.6. Экспрессия Fas лиганда.2В

1.2.7. Fas-опосредованный апоптоз.

1.2.8. Формы Fas-L.

1.2.9. Функция Fas-L.

1.2.10. Fas может запускать пролиферацию.

1.2.11. Патология системы Fas/Fas-L.

1.3. Системная красная волчанка (скв).

1.3.1. Определение.

1.3.2. Эпидемиология.

1.3.3. Клинические проявления.

1.3.4. Аутоантигены и аутоантитела при СКВ.

1.3.5. Этиология. Причины появления аутоантител.

1.3.6. Патогенез СКВ и антитела.

1.3.7. Роль комплемента в патогенезе системной красной волчанки.

1.3.8. Апоптоз и СКВ.

1.3.9. Факторы влияющие на апоптоз при СКВ.

1.3.10. Лимфоциты и СКВ.

1.3.11. Нейтрофилы и СКВ.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1 .Использованные материалы и реактивы.

2.2. Группы обследованных больных.

2.3.Методика выделения мононуклеарных лейкоцитов, их фракций и гранулоиитов из периферической крови человека.

2.4.Исследование структуры ДНК прямым флуориметрическим методом.

2.5.Методы определения количества апоптотических клеток.

2.6. Методы определения Fas/FasL и растворимого s Fas.

2.7.Метод определения Вс1-2.

2.8. Определение общей гемолитической активности комплемента.

2.9.Статистическая обработка данных.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Повреждение структуры ДНК лейкоцитов периферической крови у больных системной красной волчанкой и другими аутоиммунными заболеваниями как маркер апоптогенной готовности.

3.1.1. Исследование уровня повреждений ДНК иммунокомпетентных клеток при СКВ.

3.1.2. Изучение апоптоза лимфоцитов и гранулоцитов при СКВ.

3.1.3. Исследование корреляции между титром аутоантител, уровнем повреждений ДНК и апоптозом клеток крови.

3.1.4. Исследование уровня апоптоза лимфоцитов в зависимости от суточной дозы преднизолона у больных СКВ.

3.1.5. Исследование динамического изменения повреждений ДНК в зависимости от терапии у больных СКВ.

3.1.6. Анализ субпопуляций лимфоцитов у больных СКВ.

3.2. Исследование роли системы Fas/Fas-L в регуляции апоптоза при СКВ.

3.2.1. Оценка уровня экспрессии Fas/Fas-L в лейкоцитах периферической крови при СКВ.

3.2.2. Исследование экспрессии CD95 (Fas) и оценка уровня апоптоза различных субпопуляций лимфоцитов.

3.2.3. Определение растворимого sFas в плазме больных СКВ.

3.2.4.0пределение зависимости относительного содержания sFas/Fas от содержания активированных лимфоцитов.

3.2.5. Изучение взаимосвязи уровня sFas и титра антиядерных антител.

3.2.6. Изучение системы комплемента у больных СКВ.

3.2.7. Изучение антифосфолипидного иммунного ответа.

3.2.8.0пределение экспрессии bcl-2 у больных СКВ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование механизмов регуляции апоптоза лейкоцитов периферической крови у больных системной красной волчанкой»

Актуальность проблемы. Системная красная волчанка (СКВ) представляет собой системное аутоиммунное заболевание, характеризующая широким спектром клинических и иммунологических нарушений. Этиопатогенез СКВ до настоящего времени неясен. Изучение пар близнецов указывает на важную роль в развитии заболевания, как генетической предрасположенности, так и факторов окружающей среды. Наряду с воздействием на иммунную систему различных вирусов и бактерий воздействие солнечного света описано как важный фактор окружающей среды, вызывающий как инициацию, так и распространение СКВ [85].

СКВ развивается, главным образом, у женщин детородного возраста и характеризуется поликлональной активацией В-лимфоцитов и продукцией широкого спектра антител к ядерным и цитоплазматическим антигенам. Предполагается, что при СКВ пролиферация В-клеток является Т-клеточно-зависимой и антиген-опосредованной. Считается также, что персистенция аутореактивных В- и Т-лимфоцитов ответственна за гипергаммаглобулинемию и продукцию аутоантител [52, 182].

Одиим из механизмов, благодаря которым осуществляется элиминация аутореактивных лимфоцитов, является программируемая клеточная гибель, также называемая апоптозом. Нарушения его регуляции может вносить определенный вклад в геиез данного аутоиммунного заболевания [153]. Одним из главных путей, запускающих апоптоз, является путь, начинающийся с активации Fas-рецептора. Fas, также известный как АРО-1 или CD95, является поверхностно-клеточным белком, имеющим размеры 45-48 кДа, принадлежащим к семейству рецепторов факторов TNF/NGF [154]. Fas экспрессируется на поверхности быстро делящихся клеток, и количество его на поверхности лимфоцитов в процессе активации жестко регулируется [148]. Перекрестное связывание Fas с лигандом FasL, мембранным гликопротеином размером 40 кДа [146], вызывает апоптоз с характерной цитоплазматической и ядерной конденсацией и фрагментацией ДНК [92]. Fas играет центральную роль в иммунном гомеостазе и опосредует передачу апоптотического сигнала в зрелых активированных лимфоцитах [131].

Существует предположение о возможной роли апоптотических клеток в развитии СКВ [10]. У больных СКВ показано возрастание уровня апоптотических лимфоцитов в периферической крови [170]. Кроме того, было установлено, что в процессе апоптоза аутоантигены выносятся на поверхность внешней мембраны апоптотических клеток. Это может определять продукцию аутоантитсл непосредственно к внутриклеточно локализованным антигенам [35]. В эксперименте было показано, что введение большого количества апоптотических клеток животным вызывает у них аутоиммунную реакцию [144].

Между тем, результаты исследований, посвященных апоптозу при СКВ, весьма разрозненны. С одной стороны, лимфоциты, полученные от людей, больных СКВ, проявляют увеличение уровня спонтанного апоптоза in vitro по сравнению со здоровыми донорами [59, 126]. Было выдвинуто предположение, что это обуславливается активацией мононуклеарных клеток периферической крови у больных СКВ, которая приводит к индукции клеточной гибели. Остается неясным, находится ли у больных СКВ уровень апоптоза в равновесии с возрастающим уровнем активированных лимфоцитов и с иммунореактивностью организма больного в целом. Неизвестно также, какие еще факторы, вызывающие апоптоз и сопутствующие ему, могут играть роль в патогенезе заболевания. Из литературы известно, что у ряда больных СКВ происходит возрастание концентраций апоптоз-ингибирующих факторов, таких как растворимый Fas (sFas), Bcl-2, и антител против Fas-L [41, 98,

183, 221, 228]. Апоптоз лимфоцитов может быть инициирован также использованием препаратов-иммуносупрессоров [219].

С другой стороны, на экспериментальных моделях мышей линий Ipr (лимфонролиферация) и gld (генерализованная лимфопролиферативная болезнь) показано, что развитие СКВ прямо связано с дефектами Fas-сигнального пули. У мышей обеих линий мутации в гене Fas и FasL приводят к развитию аутоиммунного синдрома с утратой Т-клеточной толерантности, В-клеточным нарушениям, гипергаммаглобулинемией и продукцией аутоантител. [182]. MRL-lpr/gld мыши имеют мутацию в гене Fas, что приводит в экспрессии мутантного белка и нарушению сплайсинга мРНК, в то время как C3H/HeJ-gld/gld мыши, дефицитны но функциональному лиганду FasL в результате одиночной мутации [126]. Дальнейшие исследования СКВ у человека также привели к обнаружению аналогичных дефектов в функционировании Fas и FasL. Однако, до настоящего времени не определена степень участия системы Fas - Fas-L в развитии и регуляции апоптоза при СКВ у человека [59].

Целыо диссертационного исследования было изучение механизмов регуляции апоптоза в лейкоцитах периферической крови больных СКВ.

В ходе исследования предполагалось решить следующие задачи:

1. Анализ иммунореактивности больных СКВ с количественным определением активированных лейкоцитов, основных субпопуляций лимфоцитов (CD3, CD4, CD8, CD20, CD25), индекса иммунорегуляции (CD4/CD8) и уровня общего комплемента.

2. Изучение зависимости количества различных субпопуляций лейкоцитов в состоянии апоптоза от степени активности заболевания. и

3. Исследование уровня экспрессии Fas и Fas-L в различных субпопуляциях лейкоцитов и содержания sFas в крови пациентов в зависимости от степени активности заболевания.

4. Анализ изменений ДНК лейкоцитов в качестве раннего маркера апоптоза в зависимости от степени выраженности заболевания.

Научная новизна исследования. Степень фрагментации ДНК на начальных стадиях апоптоза лейкоцитов периферической крови больных СКВ значительно превышает значения этого показателя у здоровых доноров. Увеличение числа повреждений ДНК при этом определяется стадией развития заболевания. Впервые доказана выраженная прямая зависимость между уровнем антител к ДНК и ее фрагментам и степенью повреждения ДНК в лейкоцитах. Показано также, что уровень антиядерных антител и антител к ДНК у больных системной красной волчанкой зависел от выраженности заболевания и активности системы Fas - Fas-L. Установлено, что уменьшение содержания В-лимфоцитов в периферической крови больных СКВ не является обязательным признаком.

Практическая значимость исследования. Информация о роли системы Fas - Fas-L в патогенезе СКВ, а также обнаруженная зависимость между уровнем антител к ДНК и ее фрагментам и степенью повреждения ДНК в лейкоцитах выражена в виде линейного уравнения регрессии, которое может быть использовано в клинической практике при планировании лечебных мероприятий и прогнозе исхода заболевания. Апробация работы. Основные результаты работы были доложены на заседании кафедры биологической химии ММА им. И.М. Сеченова г. Москва. Публикации. По теме диссертации опубликовано 5 научных работ.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Хассан Мохилдейн Абдел Маруф

Выводы

1. Обнаружено выраженное угнетение иммунореактивности у больных системной красной волчанкой, проявлявшееся в снижении уровня общего комплемента, количества CD4+ Т-клеток и иммунорегуляторного индекса (с 1.6 у здоровых доноров до 1.2 у больных). При этом было выявлено значительное возрастание уровня клеток, несущих CD25, что свидетельствует о повышенном содержании в периферической крови пациентов активированных Т, В- лимфоцитов и моноцитов.

2. Установлено, что количество лейкоцитов периферической крови в состоянии апоптоза у больных системной красной волчанкой зависит от степени активности заболевания и превышает значения этого показателя у здоровых доноров. Наиболее значительные достоверные изменения выявлены в лимфоцитарной фракции лейкоцитов, а именно в клетках, экспрессирующих CD4, CD8 и CD20. Была обнаружена корреляционная зависимость (г=0,6) уровня апоптоза лимфоцитов в зависимости от дозы преднизолона, используемого для лечения.

3. Система Fas - Fas-L играет заметную роль в патогенезе системной красной волчанки. Уровень экспрессии Fas и Fas-L на лимфоцитах различных субпопуляций (CD3, CD4, CD8, CD19) возрастает в зависимости от степени активности заболевания. При этом в крови пациентов было обнаружено достоверное увеличение апоптоза лимфоцитов и обратная зависимость между содержанием в крови ингибитора sFas и стадией заболевания.

4. Показано, что степень фрагментации ДНК на начальных стадиях апоптоза лейкоцитов периферической крови здоровых доноров составляет 20.1% в лимфоцитах и 11.2% в гранулоцитах. Больные системной красной волчанкой характеризуются достоверным более чем в 2 раза увеличением показателя в лимфоцитах. Рост числа повреждений ДНК лейкоцитов связан со степенью развития заболевания.

5. Доказана прямая зависимость, выраженная линейным уравнением регрессии, между уровнем антител к ДНК и ее фрагментам и степенью повреждения ДНК в лейкоцитах. Уровень антиядерных антител и антител к ДНК у больных системной красной волчанкой зависел от выраженности заболевания и активности системы Fas - Fas-L.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Патогенез СКВ до настоящего времени остается невыяснен. Последнее время большое внимание уделяется роли апоптоза в патогенезе СКВ. Созданы экспериментальные модели СКВ на мышах линий MRL/lpr и gld. Роль апоптоза в патогенезе СКВ была изучена Emlen et al [59], описавших апоптоз в лимфоцитах больных СКВ по сравнению с лимфоцитами от здоровых людей in vitro. Наша работа, как указывалось ранее, посвящена изучению механизмов регуляции апоптоза в иммунокомпетентных клетках у больных СКВ. В ходе исследований подробно изучены некоторые аспекты программируемой клеточной гибели лейкоцитов периферической крови, а именно: фрагментация ДНК в ходе апоптоза; роль компонентов системы Fas- Fas-L и продуктов генов семейства Вс1-2.

Поскольку фрагментация ДНК принята за биохимический признак апоптоза, мы исследовали повреждение ДНК у больных СКВ по сравнению со здоровыми донорами методом прямого флуоресцентного анализа. Мы обнаружили, что лимфоциты и гранулоциты больных СКВ имеют большую степень нарушений цепей ДНК. Более того, степень этих нарушения ДНК коррелирует с активностью протекания СКВ. Фрагментация ДНК позволяет говорить о том, что клетка находится в процессе гибели, в связи с этим мы полагаем, что разрывы ДНК могут рассматриваться как маркер готовности клеток к апоптозу у больных СКВ.

Мы изучали также повреждение ДНК у больного СКВ до и после лекарственного воздействия. В лимфоцитах и гранулоцитах этого больного с активной формой болезни (третья стадия) до начала лечения отмечалась высокая степень повреждений ДНК, в то время как после 30 дней применения преднизолона и циклофосфамида определялся более низкий уровень повреждений ДНК в этих же клетках. Снижение уровня повреждений ДНК сопровождалось снижением титра антиядерных антител и уменьшением активности клинических проявлений болезни до II стадии. Это позволяет предположить снижение апоптотической готовности остаточной популяции клеток после того как большинство из них уже подвергаются апоптозу в процессе терапии вследствие действия глюкокортикоидов и циклофосфамида Известно, что глюкокортикоиды являются мощными индукторами апоптоза тимоцитов [43]. Циклофосфамид также индуцирует митохондриальный каспаза-9-зависимый путь апоптоза как в опухолевых, так и в здоровых клетках. [Schwartz et al, 2001]. Само по себе снижение апоптотической готовности остаточной популяции может свидетельствовать как о приостановлении распространения апоптоза вследствие включения защитных механизмов по типу обратной связи, так и об образовании популяции клеток, резистентных к воздействию лекарственных препаратов. Наблюдения за динамикой показателей в течение длительного периода времени поможет прояснить ситуацию.

Изучая апоптоз в свежевыделенных лимфоцитах и гранулоцитах периферической крови и при культивировании их in vitro без сопутствующих факторов, привнесенных из крови, мы обнаружили, что клетки, выделенные от больных СКВ, особенно после культивирования in vitro в большей степени подвергаются апоптозу по сравнению с клетками здоровых людей. Это может отражать степень апоптоза in vivo в периферических Т-лимфоцитах больных СКВ. Более того, мы показали, что процент апоптотических лимфоцитов коррелирует со степенью выраженности заболевания и лекарственным воздействием. Мы не обнаружили выраженных изменений в степени апоптоза свежевыделенных лимфоцитов больных и здоровых людей. Это может объясняться быстрым фагоцитозом большинства лимфоцитов, подвергшихся апоптозу, либо ингибирующим эффектом растворимого Fas на Fas - опосредованный апоптоз.

В случае гранулоцитов, как в свежевыделенных клетках, так и после культивирования in vitro, не было отмечено достоверно значимых различий между степенью апоптоза в клетках больных и здоровых людей. Поскольку все больные принимали преднизолон, который оказывает ингибирующий эффект на апоптоз нейтрофилов, можно заключить, что глюкокортикоиды обладают протективным эффектом по отношению к нейтрофилам человека, обеспечивая более высокую их жизнеспособность, уменьшая вероятность апоптоза.

Возрастание апоптоза в лимфоцитах больных СКВ может рассматриваться как источник аутоантигенов для В-клеток при образовании антител, являющихся важным проявлением заболевания. В связи с этим мы исследовали титры антител dsDNA, ssDNA в сыворотке больных СКВ и их корреляцию с процессами апоптоза в лимфоцитах и наличием повреждений ДНК в лимфоцитах и гранулоцитах. Мы обнаружили положительную корреляцию между титром dsDNA, ssDNA и количеством апоптотических лимфоцитов после культивации in vitro. Мы также заметили положительную корреляцию между титром антител dsDNA и уровнем повреждений ДНК в лимфоцитах и гранулоцитах. Кроме того, мы обнаружили, что большинство больных СКВ III стадии характеризуются высоким титром антител dsDNA и высоким титром антинуклеарных факторов по сравнению с пациентами I и II стадий. Этот факт доказывает связь между титрами этих антител и степенью проявления болезни, и подтверждает наши предыдущие результаты, касающиеся соотношения уровня повреждений ДНК и процента апоптотических лимфоцитов и их корреляции со степенью выраженности СКВ.

Наши результаты показывают, что после культивирования in vitro в отсутствие привнесенных из крови регуляторных факторов возрастает процент апоптотоза нефракционированных лимфоцитов. При фенотипическом анализе различных фракций лимфоцитов не было обнаружено значительных различий между процентным содержанием CD3+, CD8+, CD20+ у больных СКВ и здоровых людей. Однако, у больных СКВ по сравнению со здоровыми донорами было отмечено значительное снижение процентного содержания С04+Т-клеток.

Мы предположили, что это нарушение фенотипа может быть связано с изменением уровня активации лимфоцитов. В связи с этим мы исследовали процентное содержание активированных лимфоцитов путем измерения маркеров активации CD25+ клеток (рецептор интерлейкина - 2), которые были обнаружены в более высокой концентрации у больных СКВ.

В этой связи, снижение содержания С04+Т-клеток может рассматриваться как протективный механизм для защиты определенных органов от повреждения, которое может быть результатом образования и отложения- иммунного комплекса. Обнаруженная гиперактивность В-лимфоцитов при СКВ может зависеть от клеточной активации, в частности от циркуляции С04+Т-клеток [Huang et al, 1988].

На следующем этапе мы исследовали экспрессию Fas, FasL на поверхности клеток и Вс1-2 в клетках. Мы выбрали для исследования эти белки потому, что вышеописанная экспериментальная модель СКВ на мышах основывается на генетических изменениях именно в этих генах. Среди нефракционированных клеток, свежевыделенных от больных СКВ, было обнаружено большее количество лимфоцитов и гранулоцитов, экспрессирующих эти белки по сравнению со здоровыми людьми. Также была обнаружена корреляция между степенью экспрессии этих белков, с одной стороны и выраженностью заболевания с другой стороны. Высокая степень экспрессии Fas и FasL в клетках больных СКВ является индикатором активации иммунной системы у этих больных, поскольку покоящиеся Т-клетки периферической крови не экспресируют FasL и умеренно экспрессируют Fas, в то время как активированные Т-лимфоциты вырабатывают повышенное количество FasL и Fas [153]. В связи с тем, что Fas может включать сигнальные пути, приводящие к апоптозу, обнаруженное явление указывает на то, что у больных СКВ функционируют Fas-рецепторные сигнальные пути. Полученные результаты соотносятся с данными изучения СКВ на модели мышей линии MRL/lpr [155].

У больных СКВ было показано нарушение равновесия между различными фракциями лимфоцитов по сравнению со здоровыми донорами. Мы отметили также, что все фракции лимфоцитов, выделенные от больных СКВ, подвержены апоптозу в большей степени по сравнению с клетками здоровых доноров. Кроме того, CD+4 Т-клетки составляют наибольший объем апоптотических клеток, в сравнении с друг ими фракциями лимфоцитов. Мы можем предположить, что CD+4 Т-клетки более подвержены апоптозу благодаря активизации системы Fas-Fas-L (CD95). В работе показана высокая экспрессия Fas во всех фракциях лимфоцитов. Так как перекрестное взаимодействие Fas через связывание с Fas-L вызывает индукцию апоптоза [5,6], мы можем прийти к выводу, что высокий уровень экспрессии Fas и активации апоптоза в различных фракциях лимфоцитов вносит вклад в развитие лимфопении, которая является самым выраженным первоначальным нарушением клинико-лабораторных показателей при СКВ.

Длительно продолжающийся процесс апоптоза может привести к возрастанию уровня апоптотических клеток и аутоантигенов в циркулирующей крови. Появление фосфатидилсерина на внешней части бислоя плазматической мембраны клеток, подвергшихся апоптозу, обеспечивает передачу целевого сигнала к фагоцитам помимо рецептор-лигандных систем. Существуют данные, свидетельствующие о том, что при СКВ антитела к фосфолипидам ухудшают утилизирующую функцию фагоцитов по отношению к апоптотическим клеткам [85]. В данной работе было проведено определение титров антифосфолипидных антител, в частности антител к кардиолипину классов IgG и IgM. Было обнаружено возрастание титра антикардиолипиновых антител в 64% (для IgG) и 32,4 % (в случае IgM) больных СКВ . Как уже было указано, эти антитела могут ухудшать процесс элиминации клеток, подвергшихся апоптозу внутри кровеносного русла, что способствует воспалению и характерным для СКВ аутоиммунным проявлениям.

Считается постулатом, что высокий уровень аутоантител, наблюдаемых у больных СКВ, может быть результатом патологически длительной продолжительностью жизни поликлональных активированных В-лимфоцитов. Это может сопровождаться повышенной продукцией Вс1-2 белка, который, в свою очередь, может повышать выживаемость лимфоидных клеток, регулируя процессы апоптоза. У трансгенных мышей, гиперэкспрессирующих Вс1-2 в В-клетках, наблюдается развитие аутоиммунного синдрома, соответствующего клинической картине СКВ. Мы изучали экспрессию Вс1-2 у больных СКВ. Только три пациента с СКВ имели повышенный уровень Вс1-2 по сравнению со здоровыми донорами. В целом не было отмечено статистически достоверного отличия по этому показателю у больных СКВ и здоровых доноров. Уровень Вс1-2 не коррелировал с проявлениями заболевания у больных СКВ.

Одной из важных физиологических функций классического биохимического пути активации комплемента является клиренс циркулирующих иммунных комплексов путем ингибирования образования преципитирующих иммунных комплексов в плазме. Альтернативный путь активации комплемента приводит к растворению уже образовавшихся иммунных комплексов, которые образовались или накопились в тканях организма [171]. В данной работе было обнаружено, что 67,5 % изучаемых больных СКВ имели общий уровень комплемента 12,5-18,4 мг% (при нормальном уровне 20-40мг%). Это снижение уровня комплемента может привести к нарушению процесса клиренса иммунных комплексов, что приводит к возрастанию накопления иммунных комплексов в тканях и последующему воспалению, сопровождающемуся повышением уровня аутоантигенов, приводящему к аутоиммунному ответу и развитию аутоиммунного заболевания. Вместе с тем, 13 больных (32, 5%) имели нормальный уровень системы комплемента, что не позволяет рассматривать механизм нарушения функционирования системы комплемента как универсальное звено патогенеза СКВ.

Защитные механизмы, служащие для предупреждения накопления аутоантител в организме, основываются на положительной и отрицательной селекции лимфоцитов в центральной и периферической иммунной системе. Отрицательная селекция лимфоцитов реализуется путем апоптоза. Нарушения в работе этого механизма играет важную роль в изменениях, вызванных системой Fas/FasL, в частности, выражается присутствием в крови больных СКВ растворимых форм Fas (sFas) [41 J. sFAS может ингибировать апоптоз путем взаимодействия с Fas-L, ухудшая процессы удаления апоптотических клеток. При исследованиях sFas в плазме больных СКВ и здоровых доноров было обнаружено возрастание уровня sFas у больных, которое может привести к продукции аутоантител и, как следствие, к персистенции аутореактивных лимфоцитов. Между sFas и экспрессией Fas на лимфоцитах имеется положительная корреляция. Возрастание sFas у больных СКВ коррелирует со степенью клинической выраженности заболевания и может изменяться в результате терапевтического воздействия.

Таким образом, при изучении системной красной волчанки у человека отмечается повышение чувствительности лимфоцитов периферической крови больных СКВ к апоптозу in vitro, что позволяет предположить также повышение их чувствительности к активации апоптоза in vivo. Вслед за возрастанием продукции апоптотических клеток происходит снижение клиренса этих клеток из циркулирующей крови, что может вносить определенный вклад в патогенез заболевания. Эти процессы при их одновременном протекании приводят к накоплению апоптотических клеток и последующем образовании аутоантител к присутствующим аутоантигенам. Среди прочих аутоантител наиболее важный вклад вносят аутоантитела к dsDNA. Ведущим механизмом, приводящим лейкоциты периферической крови в состояние апоптоза является активизация системы Fas- Fas-L. Наиболее ярким маркером апоптогенной готовности изученных клеток является уровень повреждений ДНК.

Для получения завершенной картины патогенеза системной красной волчанки требуется проведение дальнейших наблюдений над больными в течение ряда лет, с изучением процессов фагоцитарного клиренса апоптотических клеток, путей активации системы комплемента и всех его компонентов, гормонального и цитокинового профиля больных СКВ в зависимости от применяемого лечения. Исследования в этих областях могут принести новый вклад в фундаментальные знания о патогенезе аутоиммунных заболеваний и приведут к разработке новых, современных подходов к их лечению.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Хассан Мохилдейн Абдел Маруф, 2004 год

1. Барышников. А.Ю., Шишкин Ю.В. Иммунологические проблемы апоптоза //Москва.-2002. С. 18-37.

2. Петрова У. Н., Радыгина Т. В., Лыскина Г. А., Продеус А. П. Современные аспекты этиопатогенеза системной красной волчанки//вопр. Гематол. И иммунопатол. В педиатр. -2002.-Т. 1,№ 1. -С.92-94.

3. Adania JM., Cory S. The Bcl-2 protein family: arbiters of cell survival// Science. 1998. - Vol. 281. -P. 1322-6.

4. Aggarwal, ВВ., Singh S., LaPushin R., Totpal K. Fas antigen signals proliferation of normal human diploid fibroblasts and its mechanism is different from tumor necrosis factor receptor// FEBS Lett.-1995.-Vol. 364.-P. 5-8.

5. Akshay KV., Orlinick J R. The molecular basis for apoptotic defects in patients with CD95 (Fas/Apo-1) mutations// J Clin Invest. 1999. - Vol. 103, №. 3. - P. 355-363.

6. Al Maini MH., Mountz JD., AlMohri HA., et al. Serum levels of soluble Fas correlate with induces of organ damage in systemic lupus erythematosus// Lupus. 2000. - Vol. 9. - P. 132-9.

7. Albanese J., Sarkis M., Maria K., et al. Biologically Active Fas Antigen and Its Cognate Ligand Are Expressed on Plasma Membrane-Derived Extracellular Vesicles// Blood. 1998. - Vol. 91. No. 10. - P. 3862-3874.

8. Andrade F., Casciola-Rosen L., Rosen A. apoptosis in systemic lupus erythematosus. Clinical implications// Rheum Dis Clin North Am. 2000. - Vol.26. - P.215-27.

9. Andrew H., Wyllie and Pierre Golstein. More than one way to go// Proc. Natl. Acad. Set. USA. -2001. -Vol. 98, Issue l.-P. 11-13.

10. Ara J., Ali R. Reactive oxygen species modified DNA fragments of varying size are the preferred antigen for human anti-DNA autoantibodies// Immunol Lett. 1992. -Vol. 34. -P. 195-200.

11. Arce E., Jackson D G., Gill M A., et al. Increased Frequency of Pre-germinal Center В Cells and Plasma Cell Precursors in the Blood of Children with Systemic Lupus Erythematosus//J. Immunology. 2001. -Vol.167. - P. 2361-2369.

12. Arnold R., Seifert M., Asadullah K., Volk HD. Crosstalk between Keratinocytes and T Lymphocytes via Fas/Fas Ligand Interaction: Modulation by Cytokines// J. Immunology. -1999. Vol. 162. -P. 7140-7147.

13. Asherson RA., Higenbottam TW., Dinh-Xuan AT., et al. Pulmonary hypertension in a lupus clinic: experience with twenty-four patients//J Rheumatol. 1990. -Vol.17. -P.1292-1298.

14. Ayukawa K., Taniguchi S., Masumoto J., et al. La Autoantigen Is Cleaved in the COOH Terminus and Loses the Nuclear Localization Signal during Apoptosis// J. Biol. Chem. 2000. -Vol.275. -P.34465-34470.

15. Bamberger A., Schulte HM., Thuneke I., et al. Expression of the apoptosis-inducing Fas ligand (FasL) in human first and third trimester placenta and choriocarcinoma cells// J. Clin. Endocrinol. Metab.1997. -Vol. 82. -P. 3173-3175.

16. Bechmann, 1. FasL (CD95L, ApolL) is expressed in the normal rat and human brain-evidence for the existence of an immunological brain barrier// Glia.- 1999. -Vol.27. -P. 62-74.

17. Bellgrau D., Gold, D., Selawry, H„ et al. Nature (London). 1995. -Vol.377. -P. 630-632.

18. Biancone L., De Martino A., Orlandi V P. et al. Development of Inflammatory Angiogenesis by Local Stimulation of Fas In Vivo//J. Exp. Med.- 1997.-Vol. 186, No. 1. P. 147-152.

19. Bijl M„ Lopik TV., Limburg PC., et al. Do elevated levels of serum soluble Fas contribute to the persistence of activated lymphocytes in systemic lupus erythematosus// J autoimmunity. 1998. -Vol.11.-P.0896-8411.

20. Boerrigter ME., Mullaart ET., Van der Schans G. P., Vijg I. Quiescent human peripheral blood lymphocytes do not contain a sizable amount of preexistent DNA single-strand breaks // Exp. Cell Res. 1989. - Vol. 180. - P. 569 - 573.

21. Boerrigter M. E. Т. I., Mullaart E., Van der Schans G. P., Vijg I. Illusory DNA breaks in quiescent lymphocytes? //Cancer Res. 1990. - Vol. 188. - P. 1 -4.

22. Bortner С. D., Nicklas В. E., Cidlowski J. A. The role of DNA fragmentation in apoptosis// Trends Cell Biol. 1995. - Vol. 5. - P. 21 -26.

23. Bradley M., Zeytun A., Rafi-Janajreh A., et al. Role of Spontaneous and lnterleukin-2-Induced Natural Killer Cell Activity in the Cytotoxicity and Rejection of Fas* and Fas- Tumor Cells// Blood. -1998. -Vol. 92 No. 11. -P. 4248-4255.

24. Buckley CD,, Pilling D., Henriquez NV., et al. RGD peptides induce apoptosis by direct caspase-3 activation// Nature. 1999. -Vol.397. -P.534-9.

25. Buendia В., Santa-Maria A., Courvalin JC. Caspase-dependent proteolysis of integral and peripheral proteins of nuclear pore complex proteins during apoptosis//J. Cell sci. -1999. -Vol. -112. -P. 17431753.

26. Buttke TM., Sandstrom PA. Oxidative stress as a mediator of apoptosis/ZImmunoI Today. 1994. -Vol. 15. -P.7-10.

27. Cairns A P., Crockard AD., McConnell J R., et al. Reduced expression of CD44 on monocytes and neutrophils in systemic lupus erythematosus: relations with apoptotic neutrophils and disease activity// Ann Rheum Dis. 2001. -Vol. 60. -P.950-955.

28. Cairns D., Shelley L., Burke WMT., et al. The differing patterns of interstitial lung involvement in connective tissue diseases// J Rheumatol. 1992. -Vol. 19. -P. 1089-1095.

29. Callen JP. Mucocutaneous changes in patients with lupus erythematosus: the relationship of these lesions to systemic disease// Rheum Dis Clin North Am. 1988. -Vol. 14. -P.79-97.

30. Candi E., Sergio O., Terrinoni A., et al. Transglutaminase 5 Cross-links Loricrin, Involucrin, and Small Proline-rich Proteins in Vitro//J. Biol. Chem. 2001. -Vol.276. -P.35014-35023.

31. Carroll MC. A protective role for innate immunity in autoimmune disease// Linical immunology. -2000. -Vol.95. -P.S30-S38.

32. Carson DA., Ribeiro JM. Apoptosis and disease//Lancet. 1993. -Vol.341. -P. 1251-4.

33. Casciola-Rosen LA., Anhalt G., Rosen A. Autoantigens targeted in systemic lupus erythematosus are clustered in two populations of the surface structures on apoptotic keratinocytes// J Exp Med. 1994. -Vol.179. -P. 1317-30.

34. Casciola-Rosen LA., Anhalt GJ., Rosen A. DNA-dependent protein kinase is one of a subset of autoantigens specifically cleaved early during apoptosis//J. Exp. Med. 1995. -Vol.182. -P. 16251634.

35. Casiano CA., Martin SJ., Green DR., Tan EM. Selective cleavage of nuclear autoantigens during CD95 (Fas/APO-1)- mediated T cell apoptosis// J. Exp. Med. -1996. -Vol. 184. -P. 765-770.

36. Cervera R., Font J., Pare C., et al. Cardiac disease in systemic lupus erythematosus: prospective study of 70 patients//Ann Rheum Dis. 1992. -Vo!.51. -P.156-159.

37. Chan FK., Chun H J., Zheng L., et al. A domain in TNF receptors that mediates ligand-independent receptor assembly and signaling// Science. 2000. -Vol.288. -P. 2351 -2354.

38. Cheng J., Zhou T. Protection from Fas-mediated apoptosis by a soluble form of Fas molecule // science. 1994. - Vol. 263. - P. 1759-1762.

39. Clerici M., Shearer GM. The Thl-Th2 hypothesis of HIV infection: new insights// Immunol Today. -1994. -Vol. 15. -P.575-581.

40. Cohen JJ., DUKE R C. Glucocorticoid activation of a calcium- dependent endonuclease in thymocyte nuclei leads to cell death//J. Immunol. 1984. - Vol. 132. - P. 38.

41. Cohen GM. Caspases: the executioners of apoptosis//J. Biochem. 1997. -Vol.326. -P. 1-16.

42. Cohen, J J. Programmed cell death in the immune system//Adv. Immunol. — 1991. —Vol.50. —P.55-85.

43. Collins R. J., Harman В. V., Souvlis J. K. Effect of cycloheximide on B- chronic lymphocytic leukaemic and normal lymphocytes in vitro: induction of apoptosis// Br. J. Cancer. 1991. - Vol. 64. - P. 518-5220.

44. Costallat LT., Coimbra AM. Systemic lupus erythematosus: clinical and laboratory aspects to age at disease onset// Clin Exp Rheumatol. 1994. -Vol.12. -P.603-607.

45. Courtney PA., Crockard AD., Williamson K., et al. Lymphocyte apoptosis in systemic lupus erythematosus: relationship with Fas expression, serum soluble Fas and disease activity// Lupus. 1999. -Vol.8. -P.508-513.

46. Cremesti A., Paris F., Grassme H., et al. Ceramide Enables Fas to Cap and Kill// J. Biol. Chem. -2001. -Vol. 276, Issue 26. -P. 23954-23961.

47. Dc Maria R., Testi R. Fas/FasL interactions: A common pathogenetic mechanism in organ-spcciflc autoimmunity// Immunol Today. 1998. -Vol.19. -P. 121.

48. Dean GS., Tyrrell-Price J., Crawley E., Isenberg D A. Cytokines and systemic lupus erythematosus// Ann Rheum Dis. 2000. -Vol.59. -P.243-251.

49. Desbarats J., Duke RC., Newel. MK. Newly discovered role for Fas ligand in the cell-cyclc arrest of CD4+ T cells// Nat Med. 1998. -Vol.4. -P.1377-82.

50. Diamond В., Katz JB., Paul E., Aranow C., et al. The role of somatic mutation in the pathogenic anti-DNA response// Annu Rev Immunol. 1992. -Vol.10. -P.731-757.

51. Doherty DG., Ireland R., Demaine AG., et al. Major histocompatibility complex genes and susceptibility to systemic lupus erythematosus in southern Chinese// Arthritis Rheum. 1992. -Vol.35.-P.641-646.

52. Drake CG., Kotzin BL. Superantigens: biology, immunology, and potential role in disease// J Clin Immunol. 1992. -Vol. 12. -P.149-162.

53. Dudich E., Semenkova L„ Dudich I., et al Q' Fetoprotein causes apoptosis in tumor cells via a pathway independent of CD95, TNFR1 and TNFR2 through activation of caspase-3-like proteases// Eur. J. Biochem. -1999. -Vol.266. -P. 750-761.

54. Duke R C., Chervenak R., Cohen J J. Endogenous endonuclease-induced DNA fragmentation: an early event in cell-mediated cytolysis// Proc Natl Acad USA. 1983. -Vol. 80. -P. 6361-6365.

55. Elmen W„ Neibur J., Kadera R. Accelerated in vitro apoptosis of lymphocytes from patients with systemic lupus erythematosus//J. Immunol. 1994. - Vol. 152. - P. 3685-3692.

56. Enari M., Talanian RV., Wong WW., Nagata S. Sequential activation of ICE-like and CPP32-like proteases during Fas-mediated apoptosis/ZNature (London). 1996. -Vol.380. -P. 723-726.

57. Evan G., Littlewood T. A matter of life and cell death// Science. 1998. -Vol.281. -P. 1317-22.

58. Famularo G., Nucera E., Marcellini S., De Simone C. Fas/Fas ligand on the road: an apoptotic pathway common to AIDS, autoimmunity, lymphoproliferation and transplantation//Med Hypotheses. 1999. -Vol.53. —P.50-62.

59. Fisher GH., et al. Dominant interfering Fas gene mutation impair apoptosis in a human autoimmune Ly mphoprol iferati ve syndrome// Cell. -1995. -Vol. 81. -P. 935-946.

60. French LE., Tschopp J. Thyroiditis and hepatitis: Fas on the road to disease// Nat Med. -1997,-VoI. 3. -P.387.

61. Fronek Z., Timmerman LA., Alper CA., et al. Major histocompatibility complex genes and susceptibility to systemic lupus erythematosus//Arthritis Rheum. 1990. -Vol.33. -P.1542-1553.

62. Furie RA., Chartash EK. Tendon rupture in systemic lupus erythematosus// Semin Arthritis Rheum. -1988. -Vol.18.-P.127-133.

63. Georgescu L., Vakkalanka RD., Elkon КВ., et al. Interleukon-10 promotes activation-induced cell death of SLE lymphocytes mediated by Fas ligand//J Clin invest. -1997. -Vol.100. -P.2622-2633.

64. Gershwin ME., Steinberg AD. Qualitative characteristics of anti-DNA antibodies in lupus nephritis// Arthritis Rheum. 1974. -Vol.17. -P.947-954.

65. Golstein P., Ojcius DM., Young J. D. Cell death mechanisms and the immune system//Immunol. Rev. 1991.-Vol. 121. -P.29-65.

66. Grana X., Garriga J., Mayol X. Role of the retinoblastoma protein family, pRB, pi 07 and pi 30 in the negative control of cell death// Oncogene. 1998. -Vol.17. -P.3365-3383.

67. Green DR. Apoptotic pathways: the road to ruin //Cell. 1998. -Vol. 94. -P.695-698.

68. Green DG„ Reed JL. Mitochondria and apoptosis// Science. 1998. -Vol.281. -P. 1309-1312.

69. Griffith TS., Brunner Т., Fletcher S., et al. Fas ligand-induced apoptosis as a mechanism of immune privilege // Science. 1995. -Vol. 270. -P. 1189-1192.

70. Haanen, C., Vermes 1. Apoptosis and inflammation// Med. Inflamm. -1995. -Vol. 4. -P. 5-15.

71. Hako N., Koji Т., Kobayash N., et al. Fas/APO-l/CD95 system as a mediator of granulose cell apoptosis in ovarian follicle atresia// Endocrinology. 1996. -Vol.137. -P. 1938-1948.

72. Haneji N. Nakamura Т., Takio K., et al. Identification of -Fodrin as a Candidate Autoantigen in Primary Sjogren's Syndrome // Science. -1997. -Vol. 276. -P. 604-607.

73. Hanson VG., Horowitz M., Rosenbluth D., et al. Systemic lupus erythematosus patients with central nervous system involvement show antibodies to a 50-kD neuronal membrane protein// J Exp Med. -1992. -Vol.176. -P.565-573.

74. Harley JB., Scofield RH. Systemic lupus erythematosus: RNA-protein autoantigens, models of disease heterogeneity, and theories of etiology//J Clin Immunol. 1991. -Vol.11. -P.297-316.

75. Hasegawa D., Kojima S., Tatsumi E., et al. Elevation of the Serum Fas Ligand in Patients With Hemophagocytic Syndrome and Diamond-Blackfan Anemia//Blood. -1998. Vol. 91 No. 8. -P. 27932799.

76. Hatzistilianou M., Hitoglou S., Gougoustamou D., et al. Effects of immunoregulatory drugs of human peripheral blood T lymphocytes function in vitro// Archive of oncology. 2002. -Vol. 10, No. 1. -P. 19-23.

77. Haupt MM., Moore CW„ Hutchins GM. The lung in systemic lupus erythematosus: analysis of the pathologic changes in 120 patients // Am J Med. -1981. -Vol.71. -P.791 -798.

78. Hay EM., Black D., Huddy A., et al. Psychiatric disorder and cognitive impairment in systemic lupus erythematosus// Arthritis Rheum. 1992. -Vol.135. -P.411-416.

79. Hayes MP., Berrebi GA., Henkart PA. Induction of target cell DNA release by the cytotoxic T lymphocyte granule protease granzyme A//J Exp Med. 1989. -Vol.170. -P.933—46.

80. Hengartner MO. The biochemistry of apoptosis// Nature. -2000. Vol. 407. -P. 770-776.

81. Herrmann M., Voll R. E., Zoller О. M., et al. Impaired Phagocytosis of apoptotic cell material by mobnocyte-derived macrophages from patients with systemic lupus erythematosus // Arthr. and Rheum. 1998. - Vol. 41. - P. 1241-1250.

82. Hochberg MC. Systemic lupus erythematosus// Rheum Dis Clin North Am. 1990. - Vol.16. - P.617-639.

83. Hoffman Bl., Katz WA. The gastrointestinal manifestations of systemic lupus erythematosus: a review of the literature// Semin Arthritis Rheum. 1980. -Vol.9. -P.237-247.

84. Hofmann K., Bucher P., Tschopp J. The CARD domain: a new apoptotic signalling motif// Trends Biochem Sci. 1997. -Vol.22. -P. 155-6.

85. Huang В., M. Bested ET., Olejniczak RP„ et al. NMR structure and mutagenesis of the Fas (APO-1/CD95) death domain//Nature (Lond.). 1996. -Vol. 384. -P. 638-641.

86. Isenberg DA., Meyrick-Thomas D., Snaith ML., et al. A study of migraine in systemic lupus erythematosus// Ann Rheum Dis. 1982. -Vol.41. -P.30-3.

87. Iverson GL. Psychopathology associated with systemic lupus erythematosus: a methodological review// Semin Arthritis Rheum. 1993. -Vol.22. -P.242-251.

88. Jason R.O., Akshay V., Elkon КВ., et al. Requirement of Cysteine-rich Repeats of the Fas Receptor for Binding by the Fas Ligand//J. Biol. Chem -1997. Vol. 272, No.46. -P. 28889-28894.

89. Jerrold S., Koh LS. The role of apoptosis in autoimmunity: Immunogen, antigen, and accelerant// Seminars in Nephrology. 1999. -Vol.19. -P.34-47.

90. Jodo S., Kobayashi S., Kayagaki N., et al. Serum levels of soluble Fas/Apo-1 (CD95) and its molecular structure in patients with systemic lupus erythematosus (SLE) and other autoimmune diseases//Clin Exp immunuol. 1997. -Vol. 107. -P. 89-95.

91. Kagi D., Ledermann В., Burki K., et al. Molecular mechanisms of lymphocyte-mediated cytotoxicity and their role in immunological protection and pathogenesis in vivo// Annu Rev Immunol. -1996. -Vol. I4.-P.207.

92. K3gi D., Vignaux F., Ledermann В., Burki K., et aLFasand perforin pathways as major mechanisms of T cell-mediated cytotoxicity//Science. -1994.-Vol. 265.-P.528.

93. K.ahl LE. The spectrum of pericardial tamponade in systemic lupus erythematosus: report often patients//Arthritis Rheum. 1992. -Vol.35. -P. 1343-1349.

94. Kalden JR., Winkler TH., Herrmann H., KrapfF. Pathogenesis of SLE: immunopathology in man// Rheumatol Int. 1991.-Vol.11.-P.95-100.

95. Kasten MM., Giordano A. pRb and the Cdks in apoptosis and the cell cycle// Cell Death Differ. -1998. -Vol.5. -P.I32-140.

96. Kerr JF., Wyllie AH., Currie AR. Apoptosis: a basic biological phenomenon with wide-ranging implications in tissue kinetics// Br J Cancer. 1972. -Vol. 26. -P.239-57.

97. Kerr, JFR., Harmon BV. (1991) in Apoptosis: The Molecular Basis of Death (Tomci, L. D., and Cope, F. O., eds)// Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY . -1991. P. 5-29.

98. Krammer PH., Dhein J., Walczak H., et al. Immunol. Rev. -1994. -Vol. 142. -P.175-19I.

99. Lacki JK., Leszczynski P., Kelemen J., et al. Cytokine concentration in serum of lupus erythematosus patients: the effect on acute phase response//.!. Med. 1997. -Vol.28. -P.99-107.

100. Li PD., Nijhawan, IB., Srinivasula SM. et al. Cytochrome с and dATP-dependent formation of Apaf-l/caspase-9 complex initiates an apoptotic protease cascade// Cell. -Vol. 91. -P.479-489.

101. Liang MH., Partridge AJ., Daltroy LH., et al. Strategies for reducing excess morbidity and mortality in blacks with systemic lupus erythematosus//Arthritis Rheum.- 1991. -Vol.34. -P. 1187-1196.

102. Lieberthal W., Levine J S. Mechanisms of apoptosis and its potential role in renal epithelial cell injury// Am J Physiol. 1996. -Vol.271. -P. F477-F488.

103. Liem LM., Lopik Т., Annemarie EM., et al. soluble Fas levels in sera of bone marrow transplantation recipients are increased during acute graft-versus-host disease but not during infections// Blood. -1998. -Vol.91.-P. 1464-1468.

104. Liles WC., Dale DC., Klebanoff SJ. Glucocorticoids inhibit apoptosis of human neutrophils//Blood. -1995. -Vol.86. -P.3181-3188.

105. Liles WC., Kiener PA., Ledbetter JA., et al. Differential expression of Fas (CD95) and Fas ligand on normal human phagocytes: implications for the regulation of apoptosis in neutrophils// J. Experimental Medicine. -1996. -Vol. 184. -P. 429-440.

106. Lorenz HM., Grunke M., Hieronymus Т., et al. In vitro apoptosis and expression of apoptosis-related molecules in lymphocytes from patients with systemic lupus erythematosus and other autoimmune diseases// Arthritis Rheum. 1997. -Vol.40. -P.306-317.

107. Lorenz HM., Herrmann M, Winkler Т., et al. Role of apoptosis in autoimmunity//Apoptosis. 2000. -Vol. 5. -P.443-9.

108. Love PE., Santoro SA. Antiphospholipid antibodies: anticardiolipin and the lupus anticoagulant in systemic lupus erythematosus (SLE) and in non-SLE disorders: prevalence and clinical significance// Ann Intern Med. 1990. -Vol.112.-P.682-698.

109. Loweth AC., Williams GT., James RF., et al. Human islets of Langerhans express Fas ligand and undergo apoptosis in response to interleukin-1 beta and Fas ligation// Diabetes. 1998. -Vol. 47. -P.727-32.

110. Luo KX., Zhu YF., Zhang LX., et al. In situ investigation of Fas/FasL expression in chronic hepatitis В infection and related liver diseases//J. Viral Hepat. 1997. -Vol.4. -P.303-7.

111. Lynch DH., Ramsdell F., Alderson MR. Fas and FasL in the homeostatic regulation of immune responses// Immunol Today. -1995. -Vol. 16. -P.569.

112. Maeda Т., Yamada Y., Moriuchi R., et al. Fas Gene Mutation in the Progression of Adult T cell Leukemia//J. Exp. Med.-1999. Vol. 189, No. 7.-P. 1063-1071.

113. Magil AB., Ballon HS., Chan V., et al. Diffuse proliferative lupus glomerulonephritis: determination of prognostic significance of clinical, laboratory and pathologic factors// Medicine (Baltimore). -1984. -Vol.63. -P.210-220.

114. Majno G., Joris I. Apoptosis, oncosis, and necrosis//Am J Path.- 1995.-Vol. 146.-P.3-15.

115. Malefyt RD„ Yssel H., J. de Vries Direct effects of IL-10 on subsets of human CD4+ Tcell clones and resting T cells. Specific inhibition of IL-2 production and proliferation// J. Immunol. -1993. -Vol. 150. -P. 4754-4765.

116. Maria R De., Testa U., Luchetti L., et al. Apoptotic Role of Fas/Fas Ligand System in the Regulation of Erythropoiesis// Blood. -1999. Vol. 93, No. 3. -P. 796-803.

117. Marin S., O'Brien G., Nishioka, W., et al. Proteolysis of Fodrin (Non-erythroid Spectrin) during Apoptosis// J. Biol. Chem. -1995. -Vol. 270. -P. 6425-6428.

118. Mark JA., Andrew H. Apoptosis: Mechanism and roles in pathology// International review of experimental pathology. 1991. -Vol. 32.-P. 223-254.

119. Matsumoto K., Schleimer RP., Saito H., et al. Induction of apoptosis in human eosinophils by anti-Fas antibody treatment in vitro// Blood. -1995.-Vol. 86.-P.1437.

120. McHugh NJ. Systemic lupus erythematosus and dysregulated apoptosis-what is the evidence?// Rheumatology. 2002. -Vol.41. -P.242-245.

121. McLaughlin J., Gladman DD., Urowitz MB., et ai. Kidney biopsy in systemic lupus erythematosus. II. Survival analyses according to biopsy results//Arthritis Rheum. 1991. -Vol.34. -P. 1268-1273.

122. McNeil HP., Chesterman CN., Krilis SA. Immunology and clinical importance of antiphospholipid antibodies//Adv Immunol. 1991.-Vol.49.-P. 193-280.

123. Meikrantz W„ Robert S. Suppression of Apoptosis by Dominant Negative Mutants of Cyclin-dependent Protein Kinases//J. biological Chem.-1996. Vol. 271, No. 17.-P. 10205-10209.

124. Mevorach D., Mascarenhas Jo., Gershov D., Elkon KB. Complement-dependent clearancc of apoptotic cells by human macrophages// J Exp Med. 1998. -Vol.188. -P.2313-2320.

125. Meyaard L, Otto SA., Jonker RR., et al. Programmed death of T cells in HIV infection// Science. -1992.-Vol.257. -P.2I7-219.

126. Micheau О., Eric S., Arlette . Marie-Therese D. Fas Ligand-independent, FADD-mediated Activation of the Fas Death Pathway by Anticancer Drugs//J Biol Chem. -1999. Vol. 274, Issue 12. -P.7987-7992.

127. Mitsiades N., Vassiliki P., Vassiliki K., et al. Fas Ligand Is Present in Tumors of the Ewing's Sarcoma Family and Is Cleaved into a Soluble Form by a Metalloproteinase// American J. of Pathology. 1998. -Vol. 153. -P.1947-1956.

128. Miyawaki Y., UeharaT., Nibu R., etal. Differential expression of apoptosis-related Fas antigen on lymphocyte subpopulationsin human peripheral blood// J Immunol. 1992. -Vol. 149. -P.3753.

129. Mohan C., Adams S., Stanik V., Datta Sk. Nucleosome: a major immunogen for pathogenic autoantibody-inducing T cells of lupus// J. Exp Med. 1993. -Vol.177. -P. 1376-1381.

130. MorG., Gutierrez L., Eliza M., et al. Fas-Fas ligand system induced apoptosis in human placenta and gestational trophoblastic disease//Am. J. Reprod. Immunol. -1998. -Vol. 40. -P.89-95.

131. Morgan BP., Walport MJ. Complement deficiency and disease// Immunol Today. 1991. -Vol. 12,-P.301-6.

132. Morrow WJ., Nelson L., Watts R, Isenberg DA. Autoimmune rheumatic disease. 2nd.// Oxford: Oxford University Press. 1999.

133. Mountz J.D., Wu J., Cheng J., ZhouT. Autoimmune disease: A problem of defective apoptosis// Arthritis Rheum. 1994. - Vol. 37. -P. 1415-1420.

134. Nagata S., Golstein P. The Fas death factor// Science. 1995. -Vol. 267. -P. 1449-56.

135. Nagata S., Suda T.Fas and Fas ligand: Ipr and gld mutations// Immunol Today. -1995. -Vol. 16. -P.39.

136. Nagata S. Apoptosis by death factor//Cell. 1997. - Vol. 88. - P. 355-365.

137. Nagata S. Fas ligand- induced apoptosis// Ann. Rev. Genet. 1999. -Vol. 33. - P. 29-55.

138. Nambu Y., Steven J H., Rehemtulla A., Daniel et al. Lack of Cell Surface Fas/APO-1 Expression in Pulmonary Adenocarcinomas//J. Clin. Invest. -1998. Vol. 101, No. 5. -P. 1102-1110.

139. Newmeyer DD., Farschon DM., Reed JC. Cell-free apoptosis in xenopus egg extracts: inhibition by Bcl-2 and requirement for an organelle fraction enriched in mitochondria //Cell. 1994. -Vol.79. -P.353-64.

140. Orlinick JR., Vaishnaw AK., Elkon КВ., Chao MV. Requirement of cysteine-rich repeats of the Fas receptor for binding by the Fas ligand// J. Biol. Chem. -1997. -Vol. 272. -P.28889-28894.

141. Osborne BA. Apoptosis and maintenance of homeostasis in the immune system// Curr. Opin. Immunol. 1996. -Vol. 8. -P.245-254.

142. Paliogianni F., Ahuja SS., Balow JP., et al. Novel mechanism for inhibition of human T cells by glucocorticoids// J Immunol. 1993.-Vol. 151. -P.4081-4089.

143. Papo Т., Parizot C., Ortova M., et al. Apoptosis and expression pf soluble Fas mRNA in systemic lupus erythematosus// Lupus. — 1998. -Vol.7. -P.455-461.

144. Peitsch M.C., Muller C., Tschopp J. DNA fragmentation during apoptosis is causcd by frequent single-strands cuts// Nucleic Acids Research. 1993. -Vol.21, №18. -P.4206-4209.

145. Pistiner M., Wallace DJ., Nessim S., et al. Lupus erythematosus in the 1980s: a survey of 570 patients// Semin Arthritis Rheum. 1991. -Vol.21. -P.55-64.

146. Raff MC. Social controls on cell survival and cell death// Nature. 1992. -Vol. 356. -P. 397-400.

147. Rao L., Perez D., white E. Lamin proteolysis facilitates nuclear events during apoptosis//J. cell biol. -1996,-Vol.135.-P.1441-1455.

148. Reed J C. Mechanisms of apoptosis// Am. J. Pathology. 2000. -Vol. 157. -P. 1415-1430.

149. Reed JC. Cytochrome C: can't live with it; can't live without it// Cell. 1997. -Vol.91. -P.559-562.

150. Renehan AG., Catherine Booth., Christopher S P., What is apoptosis, and why is it important?// BMJ. 2001. -Vol. 322. -P. 1536-1538.

151. Reynolds JC., Inman RD., Kimberly RP., et al. Acute pancreatitis in systemic lupus erythematosus: report of twenty cases and a review of the literature//Medicine (Baltimore). — 1982. -Vol.61. -P.25-32.

152. Rieux-Laucat F., et al. Mutations in Fas associated with human Lymphoproliferative syndrome and autoimmunity// Science. -1995. -Vol. 268. -P. 1347-1349.

153. Rose LM., Latchman DS., Isenberg DA. Apoptosis in peripheral lymphocytes in systemic lupus erythematosus: a review// British J. Rheumatol. -1997. Vol. 36. -P. 158-163.

154. Rose LM., Latchman DS., Isenberg DA. Elevated soluble Fas production in SLE correlates with HLA status not with disease activity// Lupus. 1997. -Vol. 6. -P. 717-722.

155. Sachs L., Lotem J. Control of programmed cell death in normal and leukemic cells: new implications for therapy// Blood. 1993. -Vol. 82. -P.15-21.

156. Sakahira H., Enari M., Nagata S. Cleavage of CAD inhibitor in CAD activation and DNA degradataion during apoptosis//Nature (London). 1998. -Vol.391. -P.96-99.

157. Salmon M., Gordon C. The role of apoptosis in systemic lupus erythematosus//Rheumatology. 1999. -Vol. 38.-P. 1177-1183.

158. Salvesen GS., Dixit V M. Caspases: intracellular signaling by proteolysis//Cell. -1997. -Vol. 91. -P.443-446.

159. Savill JS., et al. Macrophage phagocytosis of aging neutrophils in inflammation. Programmed cell death in the neutrophil leads to its recognition by macrophages// J. Clin. Invest. -1989. -Vol. 83. -P. 865.

160. Scaife JF. The effect of lethal doses of x-irradiation on the enzymatic activity of mitochondrial cytochrome c// Can J Biochem. 1966. -Vol.44. -P.433-48.

161. Shinagawa Т., Yoshioka K., Kakumu S., et al. Apoptosis in cultured rat hepatocytes: the effects of tumour necrosis factor alpha and interferon gamma// J. Pathol. 1991. -Vol. 165. -P.247-53.

162. Shvidel L., Duksin C., Tzimanis A., et al. Cytokines released by activated T cells in large granular lyphocytic leukemia associated with autoimmune disorders// J. hematology . 2002. -Vol.3. -P.32-37.

163. Sjostr6m J., Jonas B. How apoptosis is regulated, and what goes wrong in cancer// BMJ. 2001. -Vol.322.-P. 1538-1539.

164. Smith CA., Farrah Т., Goodwin RG. The TNF receptor superfamily of cellular and viral proteins: activation, costimulation, and death// Cell. 1994. -Vol. 76. -P.959-62.

165. Smyth MJ., Trapani JA. Granzymes: Exogenous proteinases that induce target cell apoptosis// Immunol Today. -1995. -Vol. 16. -P.202.

166. Song J., Eva S., Wendi В., et al." Roles of Fas and Fas ligand during mammary gland remodeling//J Clin Invest. 2000. - Vol. 106, No. 10. -P. 1209-3220.

167. Sontheimer RD. Subacute cutaneous lupus erythematosus: a decade's perspective//Med Clin North Am. 1989. -Vol.73.-P.1073-1090.

168. Spronk PE., Horst G., Van Der Gun ВТ., etal. Anti-dsDNA production coincides with concurrcnt В and T cell activation during development of active disease in systemic lupus erythematosus (SLE)// Clin Exp Immunol. 1996. -Vol.104. -P.446-53.

169. Starling GC., Jiirgen В., John E., et al. Identification of Amino Acid Residues Important for Ligand Binding to Fas//J. Exp. Med. -1997. Vol. 185, No. 8. -P. 1487-1492.

170. Steinberg AD., Gourley MF., Klinman DM., et al. Systemic lupus erythematosus// Ann Intern Med. -1991.-Vol. 115.-P.548-559.

171. Steinberg AD., Krieg AM., Gourley MF., Klinman DM. Theoretical and experimental approaches to generalized autoimmunity// Immunol Rev.- 1990.-Vol.118.-P.129-163.

172. Steller H. Mechanisms and genes of cellular suicide//Science. 1995.-Vol. 267.-P. 1445-1449.

173. StolI ML., Gavalchin J. systemic lupus erythematosus-messages from experimental models// Rheumatology. 2000. -Vol.39. -P.18-27.

174. Strand S., Hofmann WJ., Hug H., et al. Lymphocyte apoptosis induced by CD95 (APO-l/Fas) ligand-expressing tumor eel Is—A mechanism of immune evasion? //Nat Med. -1996. -Vol. 2. -P. 1361.

175. Sun-Mi PA., Ho-Sung C., et al Non-apoptotic Signaling Pathways Activated by Soluble Fas Ligand in Serum-starved Human Fibroblasts // Biol. Chem. -2001. Vol. 276, Issue 50. -P. 47100-47106.

176. Suzuki A., Enari M-, Eguchi Y., etal. Involvement ofFas in regression of vaginal epithelia ovariectomy and during an estrous cycle// EMBO. -1996. -Vol. 15. -P. 211-215.

177. Taga K., Mostowski H., Tosato G. Human interleukin-10 can directly inhibit T cell growth// Blood. -1993. -Vol. 81. -P. 2964-2971.

178. Tanaka M., Suda Т., Haze K.,et al. Fas ligand in human serum//Nat Med. -1996.-Vol. 2.-P.317.

179. Tanaka M., Suda Т., Takahashi Т., Nagata S. Expression of the functional soluble form of human Fas ligand in activated lymphocytes//EMBO.- 1995. -Vol. 14.-P.l 129-1135.

180. Tatsuta Т., Akio S. Mountz J.D. The Prodomain of Caspase-I Enhances Fas-mediated Apoptosis through Facilitation of Caspase-8 Activation// J Biol Chem. -200. Vol. 275, Issue 19. -P. 1424814254.

181. S.Taylor P., Carugati A., Fadok VA., et al. A hierachical role for classical pathway complement proteins in the clearance of apoptotic cells in vivo//J. exp Med. 2000. -Vol. 192. -P.359-366.

182. Thompson СВ. Apoptosis in the pathogenesis and treatment of disease// Science. 1995. - Vol. 267. -P. 1456-1462.

183. Thornberry NA., lazebnik Y. Caspases: enemies within// Science. -1998. -Vol. 281. -P.1312-1316.

184. Tokano Y., Miyake S., Kayagaki., N et al. Soluble Fas molecule in serum of patients with systemic lupus erythematosus//J Clin immunol. -1996. -Vol.16. -P.261-265.

185. Tsokos GC. Overview of cellular immune function in systemic lupus erythematosus. Lahita RG, ed. Systemic lupus erythematosus// New York: Churchill Livingstone. 1992. -P.15.

186. Utz PJ., Anderson P. Posttranslational protein modifications, apoptosis, and the bypass of tolerance to Autoantigens// Arthritis Rheum. 1998. -Vol.41. -P.I 152-60.

187. Utz PJ., Hottelet M., Schur PH., Anderson P. Proteins phosphorylated during stress-induced apoptosis are common targets for autoantibody production in patients with systemic lupus erythematosus// J Exp med.- 1997.-Vol.185.-P.843-54.

188. Valerie A F., Aimee de C., David LD., et al. Loss of Phospholipid Asymmetry and Surface Exposure of Phosphatidylserine Is Required for Phagocytosis of Apoptotic Cells by Macrophages and Fibroblasts//J. Biol. Chem. 2001.-Vol. 276.-P. 1071-1077.

189. Van der Linden MW., Lopik Т., Aarden LA., et al. Soluble CD95 concentrations are increased in patients with severe systemic lupus erythematosus, but not in their first-degree relatives// Ann Rheum Dis. 2001. - Vol.60. -P.237-241.

190. Van Lopik Т., Bijl M., Hart M., et al. Patients with systemic lupus erythematosus with high plasma levels of sFas risk relapse// J Rheumatol. 1999. -Vol.26. -P.60-67.

191. Villunger A., Alexander E., Ingrid M., .et al. Constitutive Expression of Fas (Apo-l/CD95) Ligand on Multiple Myeloma Cells: A Potential Mechanism of Tumor-Induced Suppression of Immune Surveillance// Blood. -1997. Vol. 90. No. 1. -P. 12-20.

192. Watanabe-Fukunaga R., Brannan CI., Itoh N. et al. The cDNA structure, expression, and chromosomal assignment of the mouse Fas antigen//J. Immunol. -1992. -Vol. 148. -P. 1274-1279.

193. Waterhouse N., Kumar S., Song Q., et al. Heteronuclear Ribonucleoproteins CI and C2, Components of the Spliceosome, Are Specific Targets of Interleukin 1-converting Enzyme-like Proteases in Apoptosis// J. Biol. Chem. -1996. -Vol. 271. -P.29335-29341.

194. Weaver V., Carson C., Walker P., et al. Degradation of nuclear matrix and DNA cleavage in apoptotic thymocytes// J. Cell Sci. -1996.-Vol. 109. -P. 45-56.

195. Wener MH., Mannik M., Schwartz MM., Lewis EJ. Relationship between renal pathology and the size of circulating immune complexes in patients with systemic lupus erythematosus// Medicine (Baltimore). 1987. -Vol.66. -P.85-97.

196. Wiedemann HP., Matthay RA. Pulmonary manifestations of systemic lupus erythematosus// J Thorac Imaging. 1992. -Vol.7. -P. 1-18.

197. Wilcox PG., Stein HB., Clarke SD., et al. Phrenic nerve function in patients with diaphragmatic weakness and systemic lupus erythematosus// Chest. 1988. -Vol.93. -P.352-358.

198. Wong KL., Woo EKW., Yu YL., Wong RWS. Neurological manifestations of systemic lupus erythematosus: a prospective study//Q J Med. 1991.-vol.81. -P.857-870.

199. Wyllie AH. Glucocorticoid-induced thymocyte apoptosis is associated with endogenous endonuclease activation// Nature. -1980. -Vol. 284. -P.555.

200. Yagita H„ Hanabuchi S., Asano Y., et al. Immunol. Rev. -1995. -Vol.l46. -P. 223-239.

201. Yamada Т., Ohyama H. Radiation-induced interphase death of rat thymocytes is internally programmed (apoptosis)// Int J Radiat Biol Relat Stud Phys Chem Med. 1988. -Vol.53. -P.65-75.

202. Yoong KF.S imon CA., Satinder R., et al. Fas/Fas Ligand Interaction in Human Colorectal Hepatic Metastases A Mechanism of Hepatocyte Destruction to Facilitate Local Tumor Invasion// American Journal of Pathology. 1999. -VoJ.154. -P.693-703.

203. Young RA. Stress proteins and immunoIogy//Annu Rev Immunol. 1990. -Vol.8. -P.401-420.

204. Zeytun A., Mona H., Mitzi N., et al. Fas-Fas Ligand-Based Interactions Between Tumor Cells and Tumor-Specific Cytotoxic T Lymphocytes: A Lethal Two-Way Street//Blood. -1997. Vol. 90 No. 5. -1952-1959.

205. Zhang J., Beiyang MM., Alan F. Characterization of a Novel Cis-element That Regulates Fas Ligand Expression in Corneal Endothelial Cells//J Biol Chem. -1999. Vol. 274, Issue 37. -P. 26537-26542.

206. Zhang L., Kevin J M., Marcia I D., et al. Evidence for the Involvement of Retinoic Acid Receptor RARQi-dependent Signaling Pathway in the Induction of Tissue Transglutaminase and Apoptosis by Retinoids// J. Biol. Chem. 1995. -Vol. 270. -P. 6022-6029.