Цитогенетическая характеристика гемопоэтических и стромальных клеток-предшественниц у больных миелодиспластическими синдромами тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.21, кандидат наук Пименова, Мария Анатольевна

• Пименова, Мария Анатольевна
• кандидат наук
• 2014

Оглавление диссертации кандидат наук Пименова, Мария Анатольевна

Оглавление

Список использованных сокращений

Введение

Актуальность проблемы

Цель исследования

Задачи исследования

Научная новизна и практическая ценность работы

Основные положения, выносимые на защиту

Структура диссертации

1. Обзор литературы

1.1. История знаний о МДС

1.2. Классификация МДС

1.3. Цитогенетические исследования при МДС

1.4. Клиническое значение хромосомных аномалий при МДС

1.4.1. Аномалии хромосомы 5

1.4.2. Аномалии хромосомы 7

1.4.3. Аномалии хромосомы 8

1.4.4. Комплексный кариотип и клональная эволюция МДС

1.5. МДС - клональное заболевание стволовой кроветворной клетки

1.5.1. Цитогенетические исследования кроветворных клеток-предшественниц

1.6. Роль стромального микроокружения

1.6.1. Строма костного мозга. Мезенхимальные стромальные клетки

1.6.2. Функциональные особенности стромы при МДС

1.6.3. Цитогенетические исследования клеток стромы

2. Материалы и методы

2.1. Дизайн исследования

2.2. Характеристика больных

2.3. Лабораторные исследования

2.3.1. Получение фракции мононуклеаров

2.3.2. Селекция CD34+ кроветворных клеток-предшественниц из костного мозга и периферической крови

2.3.3. Получение культуры МСК

2.3.4. Стандартное цитогенетическое исследование

2.3.5. Флюоресцентная in situ гибридизация

2.4. Статистический анализ

3. Результаты и обсуждение

3.1. Цитогенетическое исследование клеток костного мозга

3.2. Определение групп риска в соответствии с прогностическими шкалами IPSS, WPSS и IPSS-R

3.3. Результаты динамического наблюдения за больными МДС

3.4. Характеристика CD34+ клеток-предшественниц, полученных из костного мозга и периферической крови

3.4.1. Содержание CD34+ клеток в костном мозге и периферической крови

3.4.2. Исследование цитогенетических аномалий в CD34+ клетках

3.4.3. Хромосомные аномалии в CD34+ клетках в зависимости от клинического варианта заболевания

3.4.4. Хромосомные аномалии в CD34+ клетках в зависимости от их прогностической значимости

3.4.5. Хромосомные аномалии в CD34+ клетках в зависимости от клеточности костного мозга

3.4.6. Хромосомные аномалии в CD34+ клетках в зависимости от фиброза в костном мозге

3.5. Характеристика МСК костного мозга

3.5.1. Темпы роста культуры МСК у больных и здоровых лиц

3.5.2. Темпы роста культуры МСК в зависимости от клинического варианта заболевания, группы риска 1Р88-Я, клеточности костного мозга и наличия

фиброза

3.5.3. Стандартное цитогенетическое исследование МСК

3.5.4. Цитогенетическое исследование МСК методом FISH

3.5.5. Клиническое наблюдение пациента с клональными нарушениями

кариотипа МСК

Заключение

Выводы

Библиографический список

Приложение 1

Список используемых сокращений

МДС - миелодиспластический синдром СКК - стволовая кроветворная клетка МСК - мезенхимальные стромальные клетки РА - рефрактерная анемия РН - рефрактерная нейтропения РТ - рефрактерная тромбоцитопения РЦ - рефрактерная цитопения

РЦУД - рефрактерная цитопения с унилинейной дисплазией

РАКС - рефрактерная анемия с кольцевыми сидеробластами

РЦМД - рефрактерная цитопения с мультилинейной дисплазией

РАИБ - рефрактерная анемия с избытком бластов

РАИБ-Т - РАЖ в трансформации

OMJÏ - острый миелоидный лейкоз

XMMJI - хронический миеломоноцитарный лейкоз

КС - кольцевые сидеробласты

Алло-ТСГК - трансплантация аллогенных гемопоэтических стволовых клеток

HLA - человеческий лейкоцитарный антиген (главный комплекс гистосовместимости)

FAB - франко-американо-британская группа ПЦР - полимеразная цепная реакция IPSS - международная прогностическая шкала риска ВОЗ - Всемирная организация здравоохранения WPS S - прогностическая шкала риска ВОЗ

IPSS-R- пересмотренная международная прогностическая шкала риска

FISH - флюоресцентная in situ гибридизация

ХМПЗ - хронические миелопролиферативные заболевания

ЦСА - циклоспорин А

ч МНС - главный комплекс гистосовместимости

ЭПО - эритропоэтин Ага-С - цитозин-арабинозид Г-6-ДГ - глюкозо-6-дегидрогеназа СБ - кластер дифференцировки

Г-КСФ - гранулоцитарный колониестимулирующий фактор

ГМ-КСФ - гранулоцитарно-макрофагальный КСФ

ХМЛ - хронический миелолейкоз

ПЦР - полимеразная цепная реакция

1ЧК - натуральные киллеры

ММР - матриксные металлопротеиназы

ЭДТА - этилендиаминтетрауксусная кислота

ФГА - фитогемагглютинин

ЭПО - эритропоэтин

Ага-С - цитозин-арабинозид

АЧН - абсолютное число нейтрофилов

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Цитогенетическая характеристика гемопоэтических и стромальных клеток-предшественниц у больных миелодиспластическими синдромами»

Введение

Актуальность проблемы

Миелодиспластические синдромы (МДС) - группа клональных заболеваний системы крови, характеризующихся дисплазией одного или нескольких ростков миелопоэза, неэффективным кроветворением, которое проявляется цитопеническим синдромом, а также повышенным риском развития острого миелоидного лейкоза. Эффективное лечение МДС в настоящее время не разработано. Единственным методом биологического излечения является трансплантация аллогенных гемопоэтических стволовых клеток, однако ее эффективность ограничена как возможностью выполнения (отсутствие НЬА-совместимого донора, пожилой возраст и тяжелый соматический статус больного), так и частотой рецидивов заболевания. Результаты химиотерапевтического лечения остаются крайне неутешительными, что делает необходимым проведение дальнейших исследований в этой области гематологии с целью более глубокого понимания патогенетических путей развития заболевания и разработки принципиально новых подходов к терапии.

Известно, что развитие клональных нарушений, приводящих к диспластическим изменениям в костном мозге, изначально происходит в стволовой кроветворной клетке (СКК) и ранних гемопоэтических (кроветворных) клетках-предшественницах. В то же время функционирование, деление и дифференцировка незрелых кроветворных клеток обеспечивается их взаимодействием со стромальным микроокружением, которое строит «дом» для гемопоэтических клеток и во многом определяет их дальнейшую судьбу. Согласно данным многочисленных исследований функционирование стромы костного мозга при МДС нарушено, что может быть объяснено участием микроокружения в ходе развития заболевания.

Цитогенетическое исследование клеток костного мозга входит в перечень обязательного обследования на этапе установления диагноза МДС. Хромосомные аномалии выявляют примерно у половины больных, они являются

критерием подтверждения диагноза, фактором прогноза ответа на лечение и продолжительности жизни. Вместе с тем изучение цитогенетических особенностей как кроветворных, так и стромальных клеточных компонентов костного мозга имеет важное теоретическое значение для более глубокого понимания биологических процессов, лежащих в основе заболевания. Имеющиеся в литературе данные цитогенетических исследований клеток стромы костного мозга противоречивы. В связи с этим для получения более глубокого представления о биологических процессах, лежащих в основе заболевания, представляется важным изучение хромосомных аномалий не только в зрелых кроветворных клетках костного мозга, но и прицельно в популяциях ранних клеток-предшественниц, принимающих непосредственное участие в патогенезе МДС, - CD34+ гемопоэтических клетках и мезенхимальных стромальных клетках (МСК).

Цель исследования

Охарактеризовать цитогенетические особенности CD34+ гемопоэтических клеток-предшественниц костного мозга и периферической крови и мезенхимальных стромальных клеток костного мозга у больных миелодиспластическими синдромами.

Задачи исследования

1. Оценить частоту и спектр хромосомных аномалий у больных МДС в момент диагностики.

2. Сопоставить эффективность выявления хромосомных аномалий в клетках костного мозга методом стандартного цитогенетического исследования и флюоресцентной in situ гибридизации (FISH).

3. Охарактеризовать и сравнить изменения кариотипа в CD34+ гемопоэтических клетках-предшественницах костного мозга и периферической

крови с помощью метода FISH. Охарактеризовать изменения кариотипа в CD34+ клетках в зависимости от клинико-лабораторных данных.

4. Оценить свойства мезенхимальных стромальных клеток костного мозга по их росту в культуре и исследовать наличие связи с клиническим вариантом заболевания, группой риска IPSS-R и морфологическими особенностями МДС.

5. Изучить и сравнить цитогенетические изменения в МСК костного мозга методом стандартного цитогенетического исследования и FISH у больных МДС и здоровых лиц.

Научная новизна и практическая ценность работы

Полученные в исследовании результаты показали, что CD34+ клетки-предшественницы содержат хромосомные аберрации (аномалии), определяемые в общей популяции клеток костного мозга. Размер патологического клона в общей популяции клеток костного мозга и CD34+ клетках одинаков. Выраженность клональных изменений в циркулирующих клетках-предшественницах коррелирует с их выраженностью в клетках-предшественницах костного мозга. Это имеет практическое значение, так как использование клеток периферической крови для проведения цитогенетических исследований у больных может уменьшить кратность пункций костного мозга.

Установлено, что мезенхимальные стромальные клетки, полученные из костного мозга больных МДС, обнаруживают сниженную пролиферативную способность по сравнению с их аналогами у здоровых доноров костного мозга и проявляют генетическую нестабильность. Определяемые в МСК аномалии кариотипа отличны от аберраций в кроветворных клетках. Аномалии кариотипа МСК наряду с хромосомными нарушениями в клетках костного мозга могут являться факторами, ухудшающими прогноз у больных МДС. Полученные данные позволяют сделать вывод, что МСК костного мозга не являются частью патологического клона при МДС, вместе с тем проявляют функциональные нарушения, которые, несомненно, имеют значение в патогенезе заболевания.

Данные результаты имеют большое теоретическое значение и могут служить заделом для последующих исследований.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Клональные нарушения кариотипа СБ34+ клеток-предшественниц, полученных как из костного мозга, так и из периферической крови, соответствуют аномалиям кариотипа общей популяции клеток костного мозга при МДС.

2. Хромосомные аберрации мезенхимальных стромальных клеток костного мозга выявлены у 9,5% больных МДС; они отличны от аномалий кариотипа кроветворных клеток.

Структура диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, собственных результатов и их обсуждения, заключения, выводов, библиографического списка и одного приложения.

1. Обзор литературы

Группа клональных заболеваний кроветворной ткани, объединенных общим названием МДС, характеризуется диспластическими изменениями в миелокариоцитах и неэффективным кроветворением, которое проявляется нарушением процессов образования, дифференцировки и запрограммированной гибели клеточных элементов костного мозга и картиной цитопении в периферической крови, а также повышенным риском трансформации в острый миелоидный лейкоз (ОМЛ). Как показано на рисунке 1, начальным звеном патогенеза заболевания является мутация в СКК, которая запускает механизм клонального кроветворения и повышает степень программированной клеточной гибели (апоптоза), приводящей к неэффективному кроветворению в костном мозге. Вместе с этим происходит нарушение функционирования стромального микроокружения, а также процессы гиперметилирования генов. В результате накопление продуктов клонального кроветворения приводит к эволюции опухолевого клона и трансформации заболевания в острый лейкоз.

Рисунок 1. Патогенез развития миелодиспластического синдрома

Несмотря на попытки детального изучения патогенетических особенностей заболевания и поиски новых подходов к терапии, результаты лечения больных МДС и продолжительность их жизни остаются неутешительными [6, 12, 79, 144, 146, 162]. В связи с чем, очевидна необходимость дальнейших исследований, которые могут внести вклад в понимание биологии заболевания и способствовать улучшению прогноза у больных МДС.

1.1. История знаний о МДС

Описания случаев стойкой анемии, не поддающейся доступным методам лечения (сырая печень, соли железа и фолаты), встречаются уже в начале XX века. Именно из-за неэффективности доступной в те времена терапии заболевание приобрело название «рефрактерной» анемии. В 1920е годы врач Военно-медицинской академии в г. Санкт-Петербурге М.И. Аринкин [21] впервые предложил метод прижизненной стернальной пункции костного мозга. Стали накапливаться знания об изменениях в кроветворной ткани при рефрактерных анемиях. В 1938 году С. Шюаёз [132] опубликовал исследование около 100 случаев рефрактерной анемии, в котором отмечено наличие у этих больных макроцитоза, тромбоцитопении, лейкопении и склонности к лихорадке и кровотечениям, заканчивающихся летальным исходом. Автором также подчеркивался приобретенный, не наследственный характер заболевания. Вероятно, часть описанных больных страдала другими заболеваниями (туберкулез, последствия воздействия токсических веществ, острый лейкоз или апластическая анемия), однако состояние остальных было обусловлено рефрактерной анемией, которая в современном понимании является вариантом МДС. Постепенно формулировались критерии дифференциальной диагностики макроцитарной пернициозной (В12-дефицитной) анемии и макроцитарной рефрактерной анемии на основании не только клинической картины, но и лабораторного обследования, включая диаметр эритроцитов, клеточность костного мозга и пр. [61].

В 1942 году были охарактеризованы нормальные сидероциты и «сидеробласты», нагруженные гранулами свободного железа, в костном мозге мышей [70]. Ученые обратили внимание на этот феномен и у людей, страдающих анемией: нарушение созревания нормобластов (эритроидных предшественников), увеличение их количества и накопление в цитоплазме гранул свободного железа, и дали описание рефрактерной анемии с кольцевыми сидеробластами - варианту МДС в современной классификации. Анемия у таких больных зачастую имела доброкачественный характер на протяжении нескольких лет [32].

Дальнейшее наблюдение за больными выявило, что у части из них до появления развернутой картины острого лейкоза имел место разный по длительности период анемии. Возникли термины «предлейкоз», «малопроцентный» и «тлеющий» лейкоз. [35, 76, 91]. Описывали клиническое течение сидеробластной анемии как проявления раннего этапа развития эритробластного лейкоза [44]. Тем не менее, не во всех случаях хронической анемии развивался острый лейкоз; исследователи предположили, что с прогрессированием заболевания связано увеличение клеточности в костном мозге, выраженность нарушений созревания и количественного содержания аномальных форм миелокариоцитов [64]. Таким образом, различия в клиническом течении рефрактерных анемий диктовали необходимость формулирования классификации этих синдромов с целью как уточнения диагностических критериев вариантов заболевания, так и определения тактики ведения больных.

1.2. Классификация МДС

Франко-американо-британская (FAB) группа исследователей в 1976 году охарактеризовала две классификационные категории «синдромов дисмиелопоэза» - рефрактерная анемия с избытком бластов (РАИБ) и хронический миеломоноцитарный лейкоз (XMMJI) [25]. В 1982 году классификация была расширена, термин «синдромы дисмиелопоэза» заменен на

миелодиспластические синдромы, который используют для обозначения заболевания и в настоящее время [44Bennett]. Согласно FAB-классификации 1982 года, было выделено 5 вариантов МДС: рефрактерная анемия (РА), рефрактерная анемия с кольцевыми сидеробластами (РАКС), РАИБ, РАИБ в трансформации (РАИБ-Т) и XMMJI. FAB-классификация использовалась гематологами всего мира на протяжении более 30 лет, ее актуальность не утрачена и до сих пор.

Однако, разнообразие клинических вариантов МДС требовало выбора различных терапевтических подходов, а, следовательно, определения критериев оценки риска трансформации заболевания. В 1997 году P.Greenberg с соавт. [45Greenberg,Cox] представили прогностическую шкалу риска IPSS (International Prognostic Scoring System), которая позволяла на основе трех критериев -количества бластных клеток в костном мозге, кариотипа и степени цитопенического синдрома - выделить 4 категории прогноза: категории низкого, промежуточного-1 и -2 и высокого риска (таблица 1).

Таблица 1

Прогностическая шкала IPSS (1997г.)

Количество баллов

Фактор 0 0,5 1 1,5 2

Властные клетки КМ (%) <5 5-10 - 11-19 20-30

Кариотип* Хороший Промежуточный Плохой - -

Цитопения** 0-1 2-3 - - -

Примечание: *Кариотип - хороший (нормальный кариотип и изолированные с1е1(5ц), с1е1(2(^) и -У); промежуточный (+8 и другие аномалии, сочетание двух аномалий); плохой (комплексный кариотип и аномалии хромосомы 7);

**Цитопения - гемоглобин < 100 г/л, АЧН (абсолютное число нейтрофилов) < 1,5x10%, тромбоциты < 100х109/л;

0 баллов - низкий риск, 0,5-1 балл - промежуточный-1 риск, 1,5-2 балла - промежуточный-2 риск, > 2,5 баллов - высокий риск.

ч Всемирной организацией здравоохранения (ВОЗ) в 2000 году была создана

новая классификация гематологических заболеваний, внесены изменения и в классификацию МДС: выделены варианты рефрактерной цитопении с мультилинейной дисплазией (РЦМД) с и без кольцевых сидеробластов, МДС с изолированной делецией 5q и неклассифицированный МДС, РАИБ разделена на категории РАИБ-1 и РАИБ-2 в соответствии с количеством бластных клеток, выделена отдельная категория МДС-МПЗ (миелопролиферативные заболевания), ХММЛ удален из классификации, пограничный процент бластных клеток между МДС и острым миелоидным лейкозом (ОМЛ) составил 20% вместо 30%, категория РАИБ-Т удалена [84]. Классификация ВОЗ дополнена в 2008 году: РА была включена в категорию рефрактерной цитопении с унилинейной дисплазией (РЦУД), внутри которой также выделены рефрактерная нейтропения (РН) и рефрактерная тромбоцитопения (РТ), варианты РЦМД с и без КС были объединены (таблица 2) [146].

Классификация МДС (ВОЗ 2008г.)

Тип МДС ПК КМ

1. Рефрактерная цитопения с унилинейной дисплазией (РА, РН, РТ) 1 - или 2-ростковая цитопения, БК< 1% Дисплазия одного ростка (> 10% клеток), БК < 5%

2. Рефрактерная анемия с кольцевыми сидеробластами (РАКС) Анемия БК< 1% > 15% КС, дисплазия красного ростка, БК < 5%

3. Рефрактерная цитопения с мультилинейной дисплазией (РЦМД) 2- или 3-ростковая цитопения, БК< 1%, моноциты < 1х109/л Дисплазия 2 или 3 ростков (> 10% клеток), БК < 5%, ~ 15% КС

4. Рефрактерная анемия с избытком бластов-1 (РАИБ-1) Цитопения, БК < 5%, моноциты < 1х109/л 1-, 2- или 3-ростковая дисплазия, БК - 5-9%

5. Рефрактерная анемия с избытком бластов-2 (РАИБ-2) Цитопения, БК = 5-19%, моноциты < 1х109/л, палочки Ауэра +/- 1-, 2- или 3-ростковая дисплазия, БК = 10-19%, палочки Ауэра +/-

6. МДС с изолированной с!е1^) ^-синдром) Анемия, нормальное или повышенное число тромбоцитов, БК < 1% Нормальное или увеличенное число мегакариоцитов, БК < 5%, изолированная ёе1(5ц)

7.МДС неклассифицированный (МДС-Н) Цитопения, БК < 1% Дисплазия < 10% клеток одного или нескольких ростков БК < 5%

Примечание: КС - кольцевые сидеробласты, БК - бластные клетки

Вместе с пересмотром классификации разрабатывались и более точные прогностические шкалы для больных МДС. Вносимые изменения, прежде всего, имели клиническое значение, так как со временем претерпевали изменения

подходы к лечению пациентов [125]. В 2007 году Ь.Ма1соуаАл с соавт. [101] разработали новую шкалу динамической оценки риска у больных МДС - \VPSS, в которой учитывались клинический вариант по классификации ВОЗ, кариотип и наличие зависимости от гемотрансфузий. Согласно этой шкале выделено 5 категорий риска: очень низкий, низкий, промежуточный, высокий и очень высокий (таблица 3).

Таблица 3

Прогностическая шкала \VPSS (2007г.)

Количество баллов

Фактор 0 1 2 3

Категория ВОЗ РА, РАКС, МДС с 5q- РЦМД, РЦМД-КС РАИБ-1 РАИБ-2

Кариотип хороший промежуточный плохой -

Зависимость от гемотрансфузий нет есть - -

Примечание: 0 баллов — очень низкий риск, 1 балл - низкий риск, 2 балла - промежуточный риск, 3-4 балла - высокий риск, 5-6 баллов - очень высокий риск.

В 2012 году группой ученых из 11 стран мира опубликованы результаты наблюдения более 7000 больных и предложена новая прогностическая шкала 1Р88-К [69]. Увеличено с 5 до 16 число специфических цитогенетических аномалий при МДС, определена клиническая значимость редких хромосомных нарушений, а также были учтены показатели возраста и коморбидности (таблица 4).

Прогностическая шкала IPSS-R (2012г.)

Параметр Категории и баллы

Группы риска, цитогенетика* Очень хороший Хороший Промежуточный Плохой Очень плохой

0 1 2 3 4

Властные клетки КМ (%) <2 > 2 - < 5 5-10 >10-<20

0 1 2 3

Гемоглобин (г/л) > 100 80-< 100 <80

0 1 1,5

АЧН (х109/л) >0,8 <0,8

0 0,5

Тромбоциты (х109/л) > 100 50-< 100 <50

0 0,5 1

Примечание: АЧН - абсолютное число нейтрофилов; *Кариотип - очень хороший (del(l lq) и -Y); хороший (нормальный кариотип, изолированные del(5q), del(12p) и del(20q), сочетание двух аномалий, одна из которых del(5q)); промежуточный (изолированные del(7q), +8, +19, i(17) и другие аномалии, сочетание двух аномалий); плохой (-7, inv(3)/t(3q), сочетание 2 аномалий, одна из которых -7/del(7q), комплексный кариотип: 3 аномалии); очень плохой (комплексный кариотип: > 3 аномалий);

0-1,5 балла - очень низкий риск, 2-3 баллов - низкий риск, 3,5-4,5 баллов - промежуточный риск, 5-6 баллов - высокий риск, > 6,5 баллов - очень высокий риск.

Необходимо отметить, что выше приведены не все существующие варианты стратификации риска у больных МДС. Их многочисленность обусловлена разнообразием клинических вариантов заболевания, однако ни одна шкала в полной мере не отражает всех особенностей МДС. В частности, в классификации ВОЗ не отражено значение гистологической картины костного мозга, вместе с тем показано, что увеличение клеточности и наличие фиброза являются важными факторами, ухудшающими прогноз у больных МДС. Более того, показана необходимость двустороннего исследования трепанобиоптатов подвздошных костей, по крайней мере, в дебюте заболевания [4]. Следует также

подчеркнуть, что прогностические шкалы определяют прогноз естественного течения заболевания у больных, не получающих специфическое лечение. А, следовательно, благодаря применению эффективных методов терапии, прогноз у пациентов с МДС может и должен быть изменен.

Анализ прогностической значимости новых исследований - проточной цитометрии [165] и исследования профиля генетических мутаций [24] - у пациентов с МДС продолжен, и, возможно, в скором времени будут предложены новые подходы к классификации и определению прогноза.

1.3. Цитогенетические исследования при МДС

В 1956 году двумя группами исследователей независимо друг от друга было установлено, что нормальный кариотип человека состоит из 23 пар хромосом: 22 пар аутосом и 1 пары половых хромосом [57, 152]. Началась эра клинической цитогенетики. Появление метода дифференциального окрашивания хромосом сделало возможным выделение и исследование каждой хромосомы в отдельности [38, 138]. Обработанные трипсином и далее окрашенные хромосомы приобретали специфическую для каждой пары исчерченность, обусловленную чередованием темных полос (G-полосы), содержащих интерстициальный гетерохроматин, и светлых участков. Метод стал стандартом цитогенетического исследования. В дальнейшем появление новых методик, в частности, флюоресцентной in situ гибридизации (FISH), позволило проводить хромосомный анализ в интерфазных (не делящихся) ядрах. Впервые методика была описана в начале 1980х годов [94]. Наряду с возможностью изучения аномалий морфологии хромосом методом стандартного цитогенетического исследования, метод FISH позволил проводить анализ конкретных специфических последовательностей ДНК и РНК. Методика представляет собой использование флюоресцентных проб (зондов), которые связываются с комплементарными участками ДНК при помощи реакции гибридизации. Метод позволяет более точно определить локализацию и выявлять малые клоны с хромосомными аномалиями.

Идеи о преимущественно клональной природе МДС возникли уже в 1960s годы. J.Grouchy с соавт. [46] описали аномалии хромосом F-группы (19-20 пары) у 5 из 6 пациентов с сидеробластной анемией (частичные делеции и перицентрические инверсии). Предполагалось, что гены, контролирующие процессы кроветворения, расположены в хромосомах указанной группы. R.E.Millard с соавт. [107] определили те же аномалии у больных истинной полицитемией, a R.M.Goodman [66] - у 79-летнего пациента с миелофиброзом. Однако позже стало очевидно, что эти соматические хромосомные аномалии могут быть определены в лимфоцитах периферической крови у лиц, не страдающих гематологическими заболеваниями, и ассоциированы с тяжелыми ментальными расстройствами [60, 51].

В середине 1970- годов были описаны клональные изменения в костном мозге у больных «предлейкозом» - трисомия 8, -7/del(7q), -5/del(5q) [124, 139]. Было подтверждено наличие клональных цитогенетических аномалий у пациентов с рефрактерной анемией, описаны аномалии 1 (дубликация lq), 2 (t(2;7), t(2;21)), 3 (del(3p)), 5 (del(5q)), 20 (del(20q)), 7, 8, 9, 19 и 21 хромосом (трисомии) [22].

1.4. Клиническое значение хромосомных аномалий при МДС

При цитогенетическом исследовании клеток костного мозга у больных МДС на момент установления диагноза клональные изменения кариотипа выявляют в 40-70% случаев в зависимости от варианта заболевания, при прогрессировании заболевания или развитии вторичной миелодисплазии они встречаются чаще - у 70-90% больных [68, 83, 106, 114, 134, 147, 164].

Сбалансированные хромосомные аберрации встречаются при МДС крайне редко; наиболее характерными являются аномалии с потерей (делеции, моносомии) или добавлением генетического материала (трисомии, изохромосомы, инсерции). Хромосомные аномалии, описанные при МДС, встречаются также и при OMJI de novo. Исключением является del(20q),

характерная для категории МДС низкого риска, которая описана также у больных ХМПЗ. При МДС не встречаются характерные хромосомные аномалии, соответствующие специфическому варианту OMJT - t(15;17), inv(16), t(8;21), t(9;ll). Аномалии кариотипа чаще определяют у пациентов с МДС категории высокого риска (РАИБ) в сравнении с категорией низкого риска (РЦ, РЦМД, РАКС). Однако за исключением del(5q), не выявлено связи конкретной хромосомной аномалии с клиническим вариантом МДС [83]. При МДС могут быть выявлены одновременно несколько патологических клонов, определяющихся в разных клетках [83]. Это явление не характерно для OMJI de novo.

Показана роль кариотипа как независимого фактора прогноза при МДС [83, 168]. Не всегда присутствие клональных нарушений ассоциировано с быстрой трансформацией в острый лейкоз. Согласно прогностической шкале IPSS кариотип клеток костного мозга распределен на 3 категории: благоприятный (нормальный кариотип, изолированные del(5q), del(20q), -Y), неблагоприятный (-7/del(7q), комплексный кариотип) и промежуточный (+8 и другие аномалии) [68]. Наиболее распространенными аномалиями кариотипа являются аномалии с вовлечением хромосом 5, 7 и 8, каждая из которых изолированно или в составе множественных нарушений кариотипа встречается примерно у 10% больных МДС.

1.4.1. Аномалии хромосомы 5

Делеция длинного плеча хромосомы 5 - самая частая аномалия, ее наличие определяют у 10-15% пациентов с МДС. Описан только интерстициальный тип делеции без транслокации генетического материала. Выделяют 3 типа делеции: 1-й тип - с вовлечением сегмента ql3-q31 или ql3-q33; 2-й тип - ql2-q31 или ql4-q31; 3-й тип - делеция минимального сегмента q23-q32. Какой бы ни был размер делеции, общим участком является регион 5q31, который в свою очередь неоднороден. Делеция может вовлекать центромерную часть региона, что чаще ассоциировано с плохим прогнозом, или теломерную часть (расположенную

ближе к региону 5q32), что обычно наблюдают при Sq-синдроме. На длинном плече хромосомы 5 расположены гены EGR-1 и а-катенина, их роль в развитии заболевания до конца не ясна. Классический 5q-CHHflpoM, или МДС с изолированной del(5q), - это вариант рефрактерной макроцитарной анемии с нормальным или увеличенным числом тромбоцитов, морфологическими признаками дизэритропоэза и увеличенным количеством голоядерных микроформ мегакариоцитов [48, 156]. Морфологические изменения в костном мозге у этих больных имеют сходство с проявлениями при хронических миелопролиферативных заболеваниях. У некоторых пациентов может быть выявлена мутация гена JAK2 в регионе V617F [146]. Заболевание чаще встречается у женщин, преобладает пожилой возраст - всего 15% больных моложе 50 лет. Классический 5q-CHHflpoM характеризуется хроническим стабильным течением, отсутствием признаков прогрессирования и трансформации в OMJI длительное время. Del(5q) может встречаться не только изолированно, но и в составе множественных аномалий кариотипа. Определение дополнительно к del(5q) второй хромосомной аномалии может существенно не ухудшить прогноз в сравнении с прогнозом при классическом 5q-cиндpoмe. В то же время сочетание del(5q) с аномалиями хромосомы 7 (-7/del(7q)), а также аномалии хромосомы 5 в составе комплексных нарушений кариотипа значительно ухудшают выживаемость больных. Терапией выбора для пациентов с del(5q) и благоприятным прогнозом в настоящее время является иммуномодулирующая терапия леналидомидом, эффективность которой составляет 80% [98].

1.4.2. Аномалии хромосомы 7

Вторая по частоте аномалия при МДС - полная утрата хромосомы 7 (моносомия) или интерстициальная/терминальная делеция участка длинного плеча del(7q) - определяется у 8-11% пациентов. При del(7q) принципиальна потеря регионов 7q22, 7q31-32 и 7q36; в этих регионах расположены гены EZH2

и MLL5, отвечающие за эпигенетическую регуляцию процессов клеточной дифференцировки [50, 78, 96]. Опубликованы данные о мутации генов семейства RAS, гена AML1 и гиперметилировании pl5INK4B у больных этой цитогенетической категории [41, 42]. Клиническое течение МДС с аномалией хромосомы 7 характеризуется короткой средней продолжительностью жизни больных, выраженным цитопеническим синдромом, тяжелыми инфекционными осложнениями и высокой частотой развития OMJI [46, 123]. Значимых отличий клинического течения заболевания при различных локализациях делецированного участка q-плеча хромосомы 7 не выявлено, однако согласно последним данным продолжительность жизни короче и риск трансформации в OMJI выше у пациентов с моносомией 7, чем у пациентов с del(7q) [136]. В настоящее время терапией выбора у больных МДС группы высокого риска является применение гипометилирующих препаратов (децитабин, азацитидин) с последующей трансплантацией аллогенных гемопоэтических стволовых клеток, а также проведение трансплантации в качестве первой линии терапии, так как химиотерапевтическое воздействие в большинстве случаев оказывается неэффективным, а продолжительность полученных ремиссий короткой.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Пименова, Мария Анатольевна, 2014 год

Библиографический список

1. Бочков Н.П. Цитогенетика стволовых клеток человека. / Бочков Н.П., Никитина В.А. // Молекулярная медицина. - 2008. - N 3. - с. 40-47.

2. Гайдамака, Н.В. Экспрессия матриксных металлопротеиназ и их ингибиторов в костном мозге у больных острыми лейкозами / Н.В. Гайдамака, E.H. Паровичникова., Л.Э. Завалишина, В.Г. Савченко, Г.А. Франк // Гематология и трансфузиология - 2009. - N 2. - р. 3-10.

3. Григорян, A.C. Спонтанная злокачественная трансформация мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток в культуре - происходит ли она в действительности?/ A.C. Григорян, П.В. Кругляков. // Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. - 2009. -N 4. - с. 78-82.

4. Кохно, A.B. Терапия рефрактерных анемий и острых малопроцентных лейкозов. Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук: 14.00.29 / Кохно Алина Владимировна. - М. 2001. - 135 с.

5. Кохно, A.B. Эффективность терапии циклоспорином у больных миелодиспластическим синдромом / A.B. Кохно, E.H. Паровичникова, Е.А. Михайлова, E.H. Устинова, И.Б. Капланская, В.Н. Двирнык, Ю.В. Ольшанская, Е.В. Домрачева, В.Г. Савченко // Терапевтический архив. - 2010. - N 8. - с. 4853.

6. Кохно, A.B. Миелодиспластичкий синдром / A.B. Кохно, E.H. Паровичникова, В.Г. Савченко // Клиническая геронтология. - 2009. - N 3. - с. 33-46.

7. Лубкова, О.Н. Экспрессия VCAM-1 на стромальных клетках из костного мозга больных миелодиспластическими синдромами / О.Н. Лубкова, Н.В. Цветаева, К.С. Момотюк, В.М. Белкин, Т.Е. Манакова // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2011. -N 1.-е. 17-20.

8. Манакова, Т.Е. Функциональные нарушения кроветворного микроокружения при различных формах миелодиспластического синдрома / Т.Е. Манакова, Л.П. Герасимова, Н.В. Цветаева, К.С. Момотюк // Бюллетень

экспериментальной биологии и медицины. - 2000. -N 9. - с. 255-258.

9. Манакова, Т.Е. Дефект адгезии и хоминга кроветворных предшественников из костного мозга больных миелодисплазиями к стромальным клеткам из культур нормального костного мозга / Т.Е. Манакова, Н.В. Цветаева, В.М. Белкин, К.С. Момотюк, Н.Д. Хорошко // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины - 2005. -N 1. - с. 11-14.

10. Ольшанская, Ю.В. Хромосомные перестройки при миелодиспластическом синдроме / Ю.В. Ольшанская, Е.В. Домрачева, А.И. Удовиченко // Терапевтический архив. - 2005. -N 7. - с. 27-33.

П.Савченко, В.Г. Эффективность лечения циклоспорином А больных миелодиспластическими синдромами в зависимости от формы заболевания / В.Г. Савченко, E.H. Паровичникова, A.B. Кохно, Е.А.Михайлова, Ю.В.Ольшанская, И.Б.Капланская // Современная онкология. - 2001. - N 2. - с. 55-56.

12. Савченко, В.Г. Миелодиспластический синдром: некоторые вопросы патогенеза и лечения / В.Г. Савченко, E.H. Паровичникова, Е.А. Михайлова, Ю.В. Ольшанская, E.H. Устинова, Е.О. Грибанова, Г.А. Франк, Л.Ю. Тихонова, A.B. Кохно и др. // Терапевтический архив. - 1996. -N 7. - с. 31-37.

13. Свинарева, Д.А. Экспансия кроветворных клеток-предшественников ех vivo на подслое, обработанном паратиреоидном гормоном / Д.А. Свинарева, H.H. Нифонтова, И.Л. Чертков, Н.И. Дризе // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2005. - N 9. - с. 320-324.

14. Свинарева, Д.А. Основные свойства мезенхимных стромальных клеток из костного доноров: поверхностные маркеры / Д.А. Свинарева, H.H. Шипунова, Ю.В. Ольшанская, К.С. Момотюк, Н.И. Дризе, В.Г. Савченко // Терапевтический архив. -2010.-N 7-с. 52-56.

15.Шалыгина Ю.А. Сравнительный цитогенетический анализ мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток ранних пассажей и лимфоцитов человека / Шалыгина Ю.А., Ефимова O.A., Кругляков П.В., Пендина A.A., Григорян A.C., Кузнецова Т.В., Полынцев Л.Г., Баранов B.C. // Клеточная трансплантология и тканевая медицина. - 2009. -N 2. - с. 63-69.

16. Чертков, И.JI. Стволовая кроветворная клетка и ее микроокружение / И.Л. Чертков, О.А. Гуревич // Медицина. - 1984. - 238 с.

17. Чертков, И.Л. Схема кроветворения / И.Л. Чертков, Н.И. Дризе, А.И. Воробьев // Терапевтический архив. - 2006. -N 7. - с. 5-12.

18. Щеголеватая, О.О. Развитие острого миелоидного лейкоза из донорских клеток после аллогенной трансплантации периферических стволовых кроветворных клеток у больной острым монобластным лейкозом / О.О. Щеголеватая, Е.Н. Паровичникова, И.А. Демидова, В.Г. Исаев, А.Н. Соколов, Е.И. Желнова, И.В. Алексеева, В.А. Жеребцова, Т.В. Гапонова, Е.В. Домрачева и др. // Терапевтический архив. -2011.-N3.-c. 57-62.

19. Alvi, S. Successful establishment of long-term bone marrow cultures in 103 patients with myelodysplastic syndromes / S. Alvi, A. Shaher, V. Shetty, B. Henderson, B. Dangerfield, F. Zorat, L. Joshi, S. Anthwal, L. Lisak, L. Little et al. // Leuk Res. - 2001. - N 25. - p. 941-954.

20. Andrews. R.G. Monoclonal antibody 12.8 recognizes a 115-Kd molecule present on both unipotent and multipotent hematopoietic colony-forming cells and their precursors / R.G. Andrews, J.W. Singer, I.D. Bernstein // Blood. - 1986. - N 67. -p. 842-845.

21.Arinkin, M.I. Dieintravitale Untersuchungsmethodik des Knochenmarks / M.I. Arinkin // Folia Haematol (Leipzig). - 1929. -N 38. - p. 233-240.

22. Ayraud, N. Cytogenetic study of 88 cases refractory anemia / N. Ayraud, M. Donzeau, S. Raynaud, J.C. Lambert // Cancer Genet Cytogenet. - 1983. - N 8. - p. 243-248.

23. Baumann, M.A. Concurrent myelodysplasia and lymphoproliferation: a disorder of the true pluripotential stem cell? / MA. Baumann, J.A. Libnoch, R.M. Hansen, M.G. Heckman, G.A. Hanson // Q J Med. - 1985. -N 55. - p. 199-211.

24. Bejar, R. Clinical effect of point mutations in myelodysplastic syndromes / R. Bejar, K. Stevenson, O. Abdel-Wahab, N. Galili, B. Nilsson, G. Garcia-Manero, H. Kantarjian, A. Raza, R.L. Levine, D. Neuberg, B.L. Ebert // N Engl J Med. - 2011. -N364.-p. 2496-2506.

25. Bennett, J.M. Proposals for the classification of the acute leukaemias. French-American-British (FAB) co-operative group / J.M. Bennett, D. Catovsky, M.T. Daniel et al. // Br J Haematol. - 1976. -N 33. - p. 451-458.

26. Bennett, J.M. Proposals for the classification of the myelodysplastic syndromes / J.M. Bennett, D. Catovsky, M.T. Daniel, G. Flandrin, D.A. Galton, H.R. Gralnick, C. Sultan // Br J Haematol. - 1982. - N 51. - p. 189-199.

27. Berenson, R.J. Antigen CD34+ marrow cells engraft lethally irradiated baboons / R.J. Berenson, R.G. Andrews, W.I. Bensinger, D.F. Kalamasz, G. Knitter, C.D. Buckner, I.D. Bernstein // J Clin Invest. - 1988. -N 81. - p. 951-955.

28. Bernardo, M.E. Human bone marrow derived mesenchymal stem cells do not undergo transformation after long-term in vitro culture and do not exhibit telomere maintenance mechanisms / M.E. Bernardo, N. Zaffaroni, F. Novara, A.M. Cometa, M.A. Avanzini, A. Moretta, D. Montagna, R. Maccario, R. Villa, M.G. Daidone, O. Zuffardi, F. Locatelli // Cancer Res. -2007. -N 67. - p. 9142-9149.

29. Berneman, Z.N. A myelodysplastic syndrome preceding acute lymphoblastic leukaemia / Z.N. Berneman, D. Van Bockstaele, P. de Meyer, M. van der Planken, F. Vertessen, R. de Bock, M.E. Peetermans // Br J Haematol. - 1985. - N 60. - p. 353354.

30. Beyer, V. Systematic screening at diagnosis of -5/del(5)(q31), -7, or chromosome 8 aneuploidy by interphase fluorescence in situ hybridization in 110 acute myelocytic leukemia and high-risk myelodysplastic syndrome patients: concordances and discrepancies with conventional cytogenetics / V. Beyer, C. Castagne, D. Muhlematter, V. Parlier, J. Gmur, U. Hess, T. Kovacsovics, S. Meyer-Monard, A. Tichelli et al. // Cancer Genet Cytogenet. - 2004. - N 152. - p. 29-41.

31. Bhatia, R. Abnormal function of the bone marrow microenvironment in chronic myelogenous leukemia: Role of malignant stromal macrophages/ R. Bhatia, P.B, McGlave, G.W. Dewald, B.R. Blazar, C.M. Verfaillie // Blood. - 1995. - N 85. -p. 3636-3645.

32. Bjorkman, S.E. Chronic refractory anemia with sideroblastic bone marrow: a study of four cases / S.E. Bjorkman // Blood. - 1956. -N 11. - p. 250-259.

33. Blau, O. Mesenchymal stromal cells of myelodysplastic syndrome and acute myeloid leukemia patients have distinct genetic abnormalities compared with leukemic blasts / O. Blau, C.D. Baldus, W.K. Hofmann, G. Thiel, F. Nolte, T. Burmeister, S. Turkmen, O. Benlasfer, E. Schumann et al. // Blood. - 2011. - N 118. - p. 5583-5592.

34. Blau, O. Chromosomal aberrations in bone marrow mesenchymalstroma cells from patients with myelodysplastic syndrome and acute myeloblasticleukemia /

0. Blau, W.R. Hofmann, C.D. Baldus, G. Thiel, V. Serbent, E. Schumann, E. Thiel,

1.W. Blau // Exp Hematol. - 2007. - N 35. - p. 221-229.

35. Block, M. Preleukemic acute human leukemia / M. Block, O. Leon, O. Jacobson, W.F. Bethard//JAMA. - 1953.-N 152.-p. 1018-1028.

36. Borgstrom, G.H. Clinical implications of monosomy 7 in acute nonlymphocytic leukemia / G.H. Borgstrom, L. Teerenhovi, P. Vuopio, A. de la Shapelle, H. Van Den Berghe, L. Brandt, H.M. Golomb, A. Louwagie, F. Mitelman et al. // Cancer Genet Cytogenet. - 1980. -N 2. - p. 115-126.

37. Braulke, F. FISH analysis of circulating CD34+ cells as a new tool for genetic monitoring in MDS: verification of the method and application to 27 MDS patients / F. Braulke, J. Schanz, K. Jung, K. Shirneshan, K. Schulte, C. Schuetze, R. Steffens, L. Trumper, D. Haase // Leuk Res. - 2010. -N 34. - p. 1296-1301.

38. Caspersson, T. Identification of human chromosomes by DNA-binding fluorescent agents / T. Caspersson, L. Zech, C. Johansson, E.J. Modest // Chromosoma. - 1970. -N 30. - p. 215-227.

39. Chagraoui, H. Pathogenesis of myelofibrosis with myeloid metaplasia: Insight from mouse models / H. Chagraoui, F. Wendling, W. Vainchenker // Best Pract Res Clin Haematol. - 2006. - N 19. - p. 399-412.

40. Chamberlain, G. Concise review: mesenchymal stem cells: their phenotype, differentiation capacity, immunological features, and potential for homing / G. Chamberlain, J. Fox, B. Ashton, J. Middleton // Stem cells. - 2007. - N 25. - p. 27392749.

41. Christiansen, D.H. Mutations of AML1 are common in therapy-related myelodysplasia following therapy with alkylating agents and are significantly

associated with deletion or loss of chromosome arm 7q and with subsequent leukemic transformation / D.H. Christiansen, M.K. Andersen, J. Pedersen-Bjergaard // Blood. -

2004.-N 104.-p. 1474-1481.

42. Christiansen, D.H. Methylation of pl5INK4B is common, is associated with deletion of genes on chromosome arm 7q and predicts a poor prognosis in therapy-related myelodysplasia and acute myeloid leukemia / D.H. Christiansen, M.K. Andersen, J. Pedersen-Bjergaard // Leukemia. - 2003. -N 17. -p. 1813-1819.

43. Chute, J.P. Soluble factors elaborated by human brain endothelial cells induce the concomitant expansion of purified human BM CD34+CD38" cells and SCID-repopulating cells / J.P. Chute, G.G. Muramoto, J. Fung, C. Oxford // Blood. -

2005.-N 105.-p. 576-583.

44. Dameshek, W. Sideroblastic anaemia: is this a malignancy? / W. Dameshek //Br J Haematol. - 1965.-N 11.-p. 52-58.

45. Deans, R.J. Mesenchymal stem cells: Biology and potential clinical uses / R.J. Deans, A.B. Moseley // Exp Hematol. - 2000. -N 28. - p. 875-884.

46. De Grouchy, J. Analysis chromosomiques dans l'anemie sideroblastique idiopathique acquise / J. de Grouchy, C. de Nava, R. Zittoun, J. Bousser // Nouv Rev Fr Hematol. - 1966.-N 6.-p. 367-389.

47. De Smet, D. Diagnostic Potential of CD34+ Cell Antigen Expression in Myelodysplastic Syndromes / D. de Smet, F. Trullemans, K. Jochmans, W. Renmans, L. Smet, O. Heylen, A.M. Bael, R. Schots, B. Leus, M. de Waele // Am J Clin Pathol. -2012. -N 138.-p. 732-743.

48. Dewald, G.W. Clinical characteristics and prognosis of 50 patients with a myeloproliferative syndrome and deletion of part of the long arm of chromosome 5 / G.W. Dewald, M.P. Davis, R.V. Pierre, J.R. O'Fallon, H.C. Hoagland // Blood. - 1985. -N 66. - p. 189-197.

49. Doan, P.L. The vascular niche: home for normal and malignant hematopoietic stem cells / P.L. Doan, J.P. Chute // Leukemia. - 2012. - N 26. - p. 5462.

50. Ernst, T. Inactivating mutations of the histone methyltransferase gene EZH2

in myeloid disorders / T. Ernst, A.J. Chase, J. Score, C.E. Hidalgo-Curtis, C. Bryaent, A.V. Jones, K. Waghorn, K. Zoi, F.M. Ross et al. // Nat Genet. - 2010. - N 42. - p. 722-726.

51. Faed, M. Ring F chromosome mosaicism (46,XY,20r/46,XY) in an epileptic child without apparent hematological disease / M. Faed, H.G. Morton, J. Robertson // J Med Genetics. - 1972. -N 9. - p. 470-472.

52. Fialkow, P.J. Chronic myelocytic leukemia: origin of some lymphocytes from leukemic stem cells / PJ. Fialkow, A.M. Denman, R.J. Jacobson, M.N. Lowenthal // J Clin Invest. - 1978. -N 62. - p. 815-823.

53. Fialkow, P.J. Chronic myelocytic leukemia: clonal origin in a stem cell common to the granulocyte, erythrocyte, platelet and monocyte/macrophage / P.J. Fialkow, R.J. Jacobson, T. Papayannopoulou // Am J Med. - 1977. - N 63. - p. 125130.

54. Flores-Figueroa, E. Mesenchymal stem cells in myelodysplastic syndromes: phenotypic and cytogenetic characterization / E. Flores-Figueroa, R.M Arana-Trejo, G. Gutierrez-Espindola, A. Perez-Cabrera, H. Mayani // Leuk Res. - 2005. - N 29. - p. 215-224.

55. Flores-Figueroa, E. Functional analysis of myelodysplastic syndromes-derived mesenchymal stem cells / E. Flores-Figueroa, J.J. Montesinos, P. Flores-Guzman, G. Gutierrez-Espindola, RM. Arana-Trejo, S. Castillo-Medina, A. Perez-Cabrera, E. Hernandez-Estevez, L. Arriaqa, H. Mayani // Leuk Res. - 2008. - N 32. -p. 1407-1416.

56. Flores-Figueroa, E. Distinctive contact between CD34+ hematopoietic progenitors and CXC12+ CD271+ mesenchymal stromal cells in benign and myelodysplastic bone marrow / E. Flores-Figueroa, S. Varma, K. Montgomery, P.L. Greenberg, D. Gratzinger // Lab investig. - 2012. -N 92. - p. 1330-1341.

57. Ford, C.E. The chromosomes of man / C.E. Ford, J.L. Hamerton // Nature. -1956.-N 10.-p. 1020-1023.

58. Fuchigami, K. Absolute number of circulating CD34+ cells is abnormally low in refractory anemias and extremely high in RAEB and RAEB-t; novel pathologic

features of myelodysplastic syndromes identified by highly sensitive flow cytometry / K. Fuchigami, H. Mori, T. Matsuo, M. Iwanaga, K. Nagai, K. Kuriyama, M. Tomonaga // Leuk Res. - 2000. -N 24. - p. 163-174.

59. Gangenahalli, G.U. Hematopoietic stem cell antigen CD34: role in adhesion or homing / G.U. Gangenahalli, VK. Singh, Y.K. Verma, P. Gupta, R.K. Sharma, R. Chandra, P.M. Luthra // Stem Cell Dev. -2006. -N 15. - p. 305-313.

60. Genest, P. Partial deletion of a group-F (19-20) chromosome in a physically handicapped psychiatric male patient / P. Genest, M. Bouchard, J. Poty // J Med Genetics. -1971.-N8.-p. 374-377.

61. Geneva, A. Daland. Differentiation of pernicious anemia and certain other macrocytic anemias by the distribution of red blood cell diameters / Geneva A. Daland, Clark W. Heath, George R. Minot // Blood. - 1946. - N 1. - p. 67-75.

62. Gerritsen, W.R. Clonal analysis of myedysplastic syndrome: monosomy 7 is expressed in the myeloid lineage,but not in the lymphoid lineage as detected by fluorescent in situ hybridization / W.R. Gerrit'sen, J. Donohue, J. Bauman, S.C. Jhanwar, N.A. Kernan, H. Castro-Malaspina, R.J. O'Reilly, J.H. Bourhis // Blood. -1992.-N80.-p. 217-224.

63. Geyh, S. Analysis of mesenchymal stromal cells and their interactions with CD34 stem and progenitor cells in patients with myelodysplastic syndromes / S. Geyh, P.R. Cadeddu, J. Frobel, I. Bruns, F. Zohren, A.N. Hünerlitürkoglu, G. Kobbe, N. Germing, R. Haas, T. Schroeder // Blood, ASH Annual Meeting Abstracts. - 2011. -N 118. - abstr. 2393.

64. Gilbert, H.S. A reappraisal of the "myeloproliferative disease" concept / H.S. Gilbert // Mt Sinai J Med. - 1970. - N 37. - p. 426-435.

65. Glenn, L.D. Failure of karyotypic instability to predict clinical progression in patients with dysmyelopoietic syndromes / L.D. Glenn, W.G. Sanger, A. Kessinger, W.P. Vaughan // Hematol Pathol. - 1988. - N 2. - p. 239-248.

66. Goodman, R.M. Unusual chromosomal findings in a case of myelofibrosis / R.M. Goodman, B.A. Bouroncle, F. Miller, C. North // J Hered. - 1968. - N 59. - p. 348-350.

67. Greaves, M.F. 'Target' cells, differentiation and clonal evolution in chronic granulocytic leukaemia: a 'model' for understanding the biology of malignancy. / M.F. Greaves // In: New York: Praeger Publishers. - 1982. - p. 15-47.

68. Greenberg, P.L. International scoring system for evaluating prognosis in myelodysplasia syndromes / P.L. Greenberg, C. Cox, M.M. LeBeau, P. Fenaux, P. Moreal, G. Sanz, M. Sanz, T. Vallespi, T. Hamblin et al. // Blood. - 1997. - N 89. - p. 2079-2088.

69. Greenberg, P.L. Revised International Prognostic Scoring System (IPSS-R) for myelodysplastic syndromes / P.L. Greenberg, H. Tuechler, J. Schanz, G. Sanz, G. Garcia-Manero, F. Sole, J.M. Bennett, D. Bowen, P. Fenaux et al. // Blood. - 2012. -N 120.-p. 2454-2465.

70. Gruneberg, H. The anemia of flexed-tailed mice (Mus musculus L.) / H. Gruneberg // Journal of Genetics. - 1942. - N 44. - p. 246-272.

71.Guba, S.C. Bone marrow stromal fibroblasts secrete interleukin-6 and granulocyte-macrophage colony-stimulating factor in the absence of inflammatory stimulation: Demonstration by serum-free bioassay, enzyme-linked immunoabsorbant assay and reverse transcriptase polymerase chain reaction / S.C. Guba, C.I. Sartor, L.R. Gottschalk, J. Ye-Hu, T. Milligan, S.C. Emerson // Blood. - 1992. - N 80. - p. 1190-1198.

72. Haase, D. Cytogenetic features in myelodysplastic syndrome. / D. Haase // Ann Hematol. - 2008. - N 87. - p. 515-526.

73. Haase, D. Evidence for malignant transformation in acute myeloid leukemia at the level of early hematopoietic stem cells by cytogenetic analysis of CD34+ subpopulations / D. Haase, M. Feuring-Bruske, S. Konemann, C. Fonatsch, C. Troff, W. Verbeek, A. Pekrun, W. Hiddemann, B. Wormann // Blood. - 1995. -N 86. - p. 2906-2912.

74. Haase, D. Cytogenetic analysis of CD34+ subpopulations in AML and MDS characterized by the expression of CD38 and CD117 / D. Haase, M. Feuring-Buske, C. Schafer, Schoch C, C. Troff, B. Gahn, W. Hiddemann, B. Wormann // Leukemia. -1997.-N l.-p. 674-679.

75. Haase, D. Involvement of CD34+ Stem Cells in Malignant Transformation in AML and MDS — Genetic Analysis of Sorted Subpopulations by Classical and Molecular Cytogenetics / D. Haase, M. Feuring-Buske, C. Schoch, C. Schafer, F. Griesinder, C. Troff, B. Gahn, W. Hiddemann, B. Wormann // Hematol blood transfusion. - 1998.-N39.-p. 19-28.

76. Hamilton-Paterson, J.L. Pre Leukaemic Anaemia / J.L. Hamilton-Paterson // Acta Haematol. - 1949. -N 52. - p. 309-316.

77. Healy, L. The stem cell antigen CD34 functions as a regulator of hemopoietic cell adhesion / L. Healy, K. Gale, F. Grosveld, M. Greaves, T. Enver // Proc Natl Acad USA. - 1995. -N 92. - p. 12240-12244.

78. Heuser, M. Loss of MLL5 results in pleiotropic hematopoietic defects, reduced neutrophil immune function, and extreme sensitivity to DNA demethylation / M. Heuser, D.B. Yap, M. Leung, T.R. de Algara, A. Tafech, S. McKinney, J. Dixon, R. Thresher, B. Colledge et al. //Blood. - 2009. -N 113. - p. 1432-1443.

79. Hofman, W.K. Myelodysplastic syndromes / W.K. Hofman, M. Lubbert, D. Phillip, H. Koeffer // The Hematology Journal. - 2004. -N 5. - p. 1-8.

80. ISCN (2005): An international system for human cytogenetic nomenclature / L.G. Shaffer, N. Tommerup // S. Karger, Basel. - 2005. - 130 p.

81.1wata, M. Reduced expression of inducible gelatinase B/matrix metalloproteinase-9 in monocytes from patients with myelodysplastic syndrome: correlation of inducible levels with the percentage of cytogenetically marked cells and with marrow cellularity / M. Iwata, M. Pillai, A. Ramakrishnan, R.C. Hackman, H.J. Deeg, G. Opdenakker, B. Torok-Storb // Blood. - 2007. - N 109. - p. 85-92.

82. Jacobs, A. Myelodysplastic syndromes: pathogenesis, functional abnormalities, and clinical implications. / A. Jacobs // J Clin Pathol. - 1985. - N 38. -p. 1201-1217.

83. Jacobs, R.H. Prognostic implications of morphology and karyotype in primary myelodysplastic syndromes / R.H. Jacobs, M.A. Cornbleet, J.W. Vardiman, R.A. Larson, M.M. le Beau, J.D. Rowley // Blood. - 1986. - N 67. - p. 1765-1772.

84. Jaffe, E.S. WHO classification of tumours of haematopoietic and lymphoid

tissues / E.S. Jaffe, N.L. Harris, H. Stein, J.W. Vardiman // 3rd edn. Lyon. IARC Press.-2001.-352 p.

85. Jaju, R.J. Combined immunophenotyping and FISH identifies the involvement of B-cells in 5q-syndrome / R.J. Jaju, M. Jones, J. Boultwood, S. Kelly, D.Y. Mason, J.S. Wainscoat, L. Kearney // Genes Chromosomes. - 2000. - N 29. - p. 276-280.

86. Janssen, J.W. Clonal analysis of myelodysplastic syndromes: Evidence of multipotent stem cell origin / J.W. Janssen, M. Buschle, M. Layton, H.G. Drexler, J. Lyons, H. van den Berghe, H. Heimpel, B. Kubanek, E. Kleihauer, G.J. Mufti et al. // Blood. - 1989. - N 73. - p. 248-254.

87. Kere, J. Monosomy 7 in Granulocytes and Monocytes in Myelodysplastic Syndrome. / J. Kere, T. Ruutu, A. de la Chapelle // N Engl J Med. - 1987. - N 316. -p. 499-503.

88. Kiladjian, J.J. Cytolytic function and survival of natural killer cells are severely altered in myelodysplastic syndromes / J.J. Kiladjian, E. Bourgeous, I. Lobe, T. Braun, G. Visentin, J.H. Bourhis, P. Fenaux, S. Chouaib, A. Caignard // Leukemia. -2006.-N20.-p. 463-470.

89. Kim, M. Quantity of clonal cells detected by conventional cytogenetic analysis correlates with bone marrow blasts and survival in myelodysplastic syndrome / M. Kim, S. Chung, S.-S. Yooh, B.K. Kim, H.K. Kim, D.S. Lee // Leuk Res. - 2012. -N36.-p. 163-168.

90. Klaus, M. Reserves, functional, immunoregulatory, and cytogenetic properties of bone marrow mesenchymal stem cells in patients with myelodysplastic syndromes / M. Klaus, E. Stavroulaki, M.-C. Kastrinaki, P. Fragioudaki, K. Giannikou, M. Psyllaki, C. Pontikoglou, D. Tsoukatou, C. Mamalaki, H.A. Papadaki // Stem Cells Develop. - 2010. - N 19.-p. 1043-1054.

91. Knospe, W.H. Smouldering acute leukaemia / W.H. Knospe, S.A. Gregory // Arch Intern Med. - 1971.-N 127.-p. 910-918.

92. Kronke, J. Biology of myelodysplastic syndrome / J. Kronke, B.L. Ebert // Hematology Education: the education program for annual congress of the EHA. -

2012.-N 6.-p. 237-244.

93. Lancrin, C. The haemangioblast generates hematopoietic cells through a haemogenic endothelium stage / C. Lancrin, P. Sroczynska, C. Staphenson, T. Allen, V. Kouskoff, G. Lacaud // Nature. - 2009. - N 457. - p. 892-895.

94. Langer-Safer, P.R. Immunological method for mapping genes on Drosophila polytene chromosomes / P.R. Langer-Safer, M. Levine, D.C. Ward // Proc Natl Acad Sci USA. - 1982. -N 79. - p. 4381-4385.

95. Lanza, F. Structural and functional features of the CD34 antigen: an update / F. Lanza, L. Healy, D.R. Sutherland // J Biol Regul Homeost Ag. - 2001. - N 15. - p. 1-13.

96. Le Beau, M.M. Cytogenetic and molecular delineation of a region of chromosome 7 commonly deleted in malignant myeloid diseases / M.M. le Beau, R. Espinosa, E.M. Davis, J.D. Eisenbart, R.A. Larson, E.D. Green // Blood. - 1996. - N 88.-p. 1930-1935.

97. Linder, D. Glucose-6-phosphate dehydrogenase mosaicism: utilization as a cell marker in the study of leiomyomas / D. Linder, S.M. Gartler // Science. - 1965. -N 150.-p. 67-69.

98. List, A. Lenalidomide in the myelodysplastic syndrome with chromosome 5q deletion / A. List, G. Dewald, J. Bennett, A. Giagounidis, A. Raza, E. Feldman, B. Powell, P. Greenberg, D. Thomas et al. // New Engl J Med. - 2006. - N 355. - p. 1456-1465.

99. López-Holgado, N. Analysis of hematopoietic progenitor cells in patients with myelodysplastic syndromes according to their cytogenetic abnormalities / N. López-Holgado, J.L. Arroyo, C. Pata, E. Villarón, F. Sánchez Guijo, A. Martín, J.M. Hernández Rivas, A. Orfao, J.F. San Miguel, M.C. Del Cañizo Fernández-Roldán // Leuk Res. - 2004. -N 28. - p. 1181-1187.

100. Lopez-Villar, O. Both expanded and uncultured mesenchymal stem cells from MDS patients are genomically abnormal, showing a specific genetic profile for the 5q- syndrome / O. Lopez-Villar, J.L. Garcia, F.M. Sanchez-Guijo, C. Robledo, E.M. Villaron, P. Hernandez-Campo, N. Lopez-Holqado, M. Diez-Campelo, M.V.

Barbado et al. // Leukemia. - 2008. - N 23. - p. 664-672.

101. Maleovati, L. Impact of the degree of anemia on the outcome of patients with myelodysplastic syndrome and its integration into the WHO classification-based Prognostic Scoring System (WPSS) / L. Malcovati, M.G. Delia Porta, C. Strupp, I. Ambaglio, A. Kuendgen, K. Nachtkamp, E. Travaglino, R. Invernizzi, C. Pascutto et al. // Haematologica. - 2011. - N 96. - 1433-40.

102. Mallo, M. Fluorescence in situ hybridization improves the detection of 5q31 deletion in myelodysplastic syndromes without cytogenetic evidence of 5q- / M. Mallo, L. Arenillas, B. Espinet, M. Salido, J.M. Hernández, E. Lumbreras, M. del Rey, E. Arranz, S. Ramiro et al. // Haematologica. - 2008. -N 93. - p. 1001-1008.

103. Marsh, J.C. Recurrent graft failure following syngeneic bone marrow transplantation for aplastic anaemia / J.C. Marsh, N. Harhalakis, C. Dowding, E.C. Gordon-Smith, J.M. Hows // Bone Marrow Transplant. - 1989. - N 4. - p. 581-585.

104. Marcondes, A.M. Myeloid malignancies and marrow microenvironment: some recent studies in patients with MDS / A.M. Marcondes, A. Ramakrishman, H.J. Deeg // Curr Cancer The Rev. - 2009. - N 5. - p. 310-314.

105. Marisavljevic, D. Biological implications of circulating CD34+ cells in myelodysplastic syndromes / D. Marisavljevic, N. Kraguljac-Kurtovic // J Buon. -2010.-N 15.-p. 753-757.

106. Michels, S.D. Therapy-related acute myeloid leukemia and myelodysplastic syndrome: a clinical and morphologic study of 65 cases / S.D. Michels, R.W. McKenna, D.C. Arthur, R.D. Brunning // Blood. - 1985. - N 65. - p. 1364-1372.

107. Millard, R.E. Further observations on patients with a chromosomal abnormality associated with polycythaemia vera / R.E. Millard, S.D. Lawler, H.E. Kay, C.B. Cameron//Br J Haematol. - 1968.- N 14.-p. 363-374.

108. Mitsiades, C.S. The role of the bone microenvironment in the pathophysiology and therapeutic management of multiple myeloma: interplay of growth factors, their receptors and stromal interactions / C.S. Mitsiades, N.S. Mitsiades, N.C. Munshi, P.G. Richardson, K.C. Anderson // Eur J Cancer. - 2006. - N

42.-p. 1564-1573.

109. Miura, I. Involvement of natural killer cells in patients with myelodysplastic syndrome carrying monosomy 7 revealed by the application of fluorescence in situ hybridization to cells collected by means of fluorescence-activated cell sorting / I. Miura, Y. Kobayashi, N. Takahashi, K. Saitoh, A.B. Miura // Br J Haematol. - 2000. - N 110. - p. 876-879.

110. Monreal, M.B. Increased immature hematopoietic progenitor cells CD34+/CD38dim in myelodysplasia / M.B. Monreal, M.L. Pardo, M.A. Pavlovsky, I. Fernandez, C.S. Corrado, I. Giere, S. Sapia, S. Pavlovsky // Cytometry B Clin Cytom. -2006.-N70.-p. 63-70.

111. Mueller, M.M. Friends and foes - bipolar effects of the tumor stroma in cancer / M.M. Mueller, N.E. Fusenig // Nature Rev Cancer. - 2004. - N 4. - p. 834849.

112. Mufti, G.J. Coexistent myelodysplasia and plasma cell neoplasia / G.J. Mufti, T.J. Hamblin, G.P. Clein, C. Race // Br J Haematol. - 1983. -N 54. - p. 91-96.

113. Muguruma, Y. Reconstitution of the functional human hematopoietic microenvironment derived from human mesenchymal stem cells in the murine bone marrow compartment / Y. Muguruma, T. Yahata, H. Miyatake, T. Sato, T. Uno, J. Itoh, S. Kato, M. Ito, T. Hotta, K. Ando //Blood. - 2006. -N 107. - p. 1878-1887.

114. Musilova, J. Chromosome study of 85 patients with myelodysplastic syndrome / J. Musilova, K. Michalova / Cancer Genet Cytogenet. - 1988. - N 33. - p. 39-50.

115. Naveiras, O. Bone marrow adipocytes as negative regulators of the hematopoietic microenvironment / O. Naveiras, V. Nardi, P.L. Wenzel, P.V. Hauschka, F. Fahey, G.Q. Daley // Nature. - 2009. - N 460. - p. 259-263.

116. Nilsson, L. Involvement and functional impairment of the CD34+CD38' Thy+ hematopoietic stem cells pool in myelodysplastic syndromes with trisomy 8 / L. Nilsson, I. Astrand-Grundstrom, K. Anderson, I. Arvidsson, P. Hokland, D. Bryder, L. Kjeldsen, B. Johansson, E. Hellstrom-Lindberg et al. // Blood. - 2002. - N 100. - p. 259-267.

117. Nilsson, L. Isolation and characterization of hematopoietic progenitor/stem cells in 5q-deleted myelodysplasia syndromes: evidence for involvement at the hematopoietic stem cell level / L. Nilsson, I. Astrand-Grundstrom, I. Arvidsson, B. Jacobsson, E. Hellstrom-Lindberg, R. Hast, SE. Jacobsen // Blood. - 2000. - N 96. -p. 2012-2021.

118. Nimer, S.D. MDS: A stem cell disorder - but what exactly is wrong with the primitive hematopoietic cells in this disease? / S.D. Nimer // Hematology ASH Education Program. - 2008. - p. 43-51.

119. Nowell, P.C. A minute chromosome in human chronic granulocytic leukemia / P.C. Nowell, D.A. Hungerford// Science. - 1960. -N 132. - p. 1497-1501.

120. Omatsu, Y. The essential functions of adipo-osteogenic progenitors as the hematopoietic stem and progenitor cell niche / Y. Omatsu, T. Sugiyama, H. Kohara, G. Kondoh, N. Fujii, K. Kohno, T. Nagasawa // Immunity. - 2010. - N 33. - p. 387-399.

121. Paget S. The distribution of secondary growths in cancer of the breast / S. Paget//The Lancet. - 1889.-N l.-p. 571-573.

122. Pang, W.W. Hematopoietic stem cell and progenitor cell mechanisms in myelodysplasia syndromes / W.W. Pang, J.V. Pluvinagea, E.A. Price, K. Sridhar, D.A. Arber, P.L. Greenberg, S.L. Schrier, C.Y. Park, I.L. Weissman // Proc Natl Acad Sci USA.-2013.-N 110.-p. 3011-3016.

123. Pasquali, F. Pathogenetic significance of "pure" monosomy 7 in myeloproliferatie disorders. Analysis of 14 cases / F. Pasquali, P. Bernasconi, R. Casalone, M. Fraccaro, C. Bernasconi, M. Lazzarino, E. Morra, E.P. Alessandrino, M.A. Marchi, R. Sanger // Hum Genet. - 1982. - N 62. - p. 40-51.

124. Pierre, R.V. Cytogenetic studies in preleukemia: Studies before and after transition to acute leukemia in 17 subjects / R.V. Pierre // Blood Cells. - 1975. - N 1. -p. 163-170.

125. Pilo, F. The evolving clinical scenario of myelodysplastic syndrome: The need for a complete and up to date upfront diagnostic assessment / F. Pilo, A.A. di Tucci, P. Dessalvi, A. Caddori, E. Angelucci // Eur J of Int Med. - 2010. - N 2. - p. 490-495.

126. Pittenger, M.F. Multilineage potential of adult human mesenchymal stem cells / M.F. Pittenger, A.M. Mackay, S.C. Beck, R.K. Jaiswal, R. Douglas, J.D. Mosca, M.A. Moorman, D.W. Simonetti, S. Craig, D.R. Marshak // Science. - 1999. -N 284. -p. 143-147.

127. Prchal, J.T. A common progenitor for myeloid and lymphoid cells / J.T. Prchal, D.W. Throckmorton, A.J. Carrol, E.W. Fuson, R.A. Gams, J.F. Prchal // Nature. - 1978.-N274.-p. 590-591.

128. Raaijmakers, M. Bone progenitor dysfunction induces myelodysplasia and secondary leukemia / M. Raaijmakers, S. Mukherjee, S. Guo, S. Zhanq, T. Kobayashi, J.A. Schoonmaker, B.L. Ebert, F. Al-Shahrour, R.P. Hasserjian et al. // Nature. - 2010. -N464.-p. 852-857.

129. Ramakrishman, A. The stromal component of the marrow microenvironment is not derived from the malignant clone in MDS / A. Ramakrishman, N. Awaya, E. Bryant, B. Torok-Storb // Blood. - 2006. - N 108. - p. 772-773.

130. Ramakrishnan, A. A novel role for the marrow microenvironment in initiating and sustaining hematopoietic disease / A. Ramakrishnan, H.J. Deeg // Expert Opin Biol Ther. - 2009. - N 9. - p. 21-28.

131. Raskind, W.H. Evidence for a multistep pathogenesis of a myelodysplastic syndrome / W.H. Raskind, N. Tirumali, R. Jacobson, J. Singer, P.J. Fialkow // Blood. - 1984.-N63.-p. 1318-1323.

132. Rhoads, C.P. Refractory anemia: analysis of 100 cases / C.P. Rhoads, W.H. Barker//JAMA. - 1938.-N 110.-p. 794-796.

133.Rigolin, G.M. Clinical importance of interphase cytogenetics detecting occult chromosome lesions in myelodysplastic syndromes with normal karyotype / G.M. Rigolin, R. Bigoni, R. Milani, F. Cavazzini, M.G. Roberti, A. Bardi, P. Agostini, M. Delia Porta, A. Tieghi // Leukemia. - 2001. -N 15. - p. 1841-1847.

134. Rowley, J.D. Nonrandom chromosome abnormalities in acute leukemic and dysmyelopoietic syndromes in patients with previously treated malignant disease / J.D. Rowley, H.M. Golomb, J.W. Vardiman // Blood. - 1981. -N 58. - p. 759-67.

135. Saitoh, K. Fluorescence in situ hybridization of progenitor cells obtained by fluorescence-activated cell sorting for the detection of cells affected by chromosome abnormality trisomy 8 in patients with myelodysplastic syndromes / K. Saitoh, I. Miura, N. Takahashi, A.B. Miura // Blood. - 1998. - N 92. - p. 2886-2892.

136. Schanz, J. New comprehensive cytogenetic scoring system for primary myelodysplastic syndromes (MDS) and oligoblastic acute myeloid leukemia after MDS derived from an international database merge / J. Schanz, H. Tu chler, F. Sol e, M. Mallo, E. Luno, J. Cervera, I. Granada, B. Hildebrandt, M.L. Slovak et al. // J Clin Oncol. - 2012. - N 30. - p. 820-829.

137. Schroeder, T.M. Functional impairment and decreased osteogeneic differentiation capacity of mesenchymal stromal cells (MSC) from patients with myelodysplastic syndromes (MDS) result in insufficient stromal support for CD34 Hematopoietic Stem and Progenitor Cells (HSPC) / T.M. Schroeder, S. Geyh, R.-P. Cadeddu, J. Frobel, S. Arends, A.-N. Hunerliturkoglu, A. Kundgen, D. Hemsen, R. Fenk et al. // Onkologie. - 2012. - N 35. — p. 16-17.

138. Seabright, M. Rapid banding technique for human chromosomes / M. Seabright // The Lancet. - 1971. -N 2. - p. 971-972.

139. Second International Workshop on Chromosomes in Leukemia: Chromosomes in preleukemia. Cancer Genet Cytogenet. - 1979. -N 2. - p. 108-113.

140. Sloand, E.M. Preferential suppression of trisomy 8 compared with normal hematopoietic cell growth by autologous lymphocytes in patients with trisomy 8 myelodysplastic syndrome / E.M. Sloand, L. Mainwaring, M. Fuhrer, S. Ramkissoon, A.M. Risitano, K. Keyvanafar, J. Lu, A. Basu, A.J. Barrett, N.S. Young // Blood. -2005.-N 106.-p. 841-51.

141. Sloand, E.M. CD34 cells from patients with trisomy 8 myelodysplastic syndrome (MDS) express early apoptotic markers but avoid programmed cell death by up- regulation of antiapoptotic proteins / E.M. Sloand, L. Pfanes, G. Chen, S. Shah, E.E. Solomou, J. Barrett, N.S. Young // Blood. - 2007. -N 109. - p. 2399-2405.

142. Soenen-Cornu, V. Mesenchymal cells generated from patients with myelodysplastic syndromes are devoid of chromosomal clonal markers and support

short - and long-term hematopoiesis in vitro / V. Soenen-Cornu, C. Tourino, M.L. Bonnet, M. Guillier, S. Flamant, R. Kotb, A. Bernheim, J.H. Bourhis, C. Preudhomme, P. Fenaux, A.G. Turhan // Oncogene. - 2005. - N 24. - p. 2441-2448.

143. Song, L.-X. Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells in Myelodysplasia Syndromes: Cytogenetic Characterization / L.-X. Song, J. Guo, Q. He, L.-P. Yang, Sh.-Ch. Gu, X. Zhang, L.-Y. Wu, X. Li, Ch.-K. Chang // Acta Haematol. - 2012. - N 128.-p. 170-177.

144. Steensma, D.P. Historical perspectives on myelodysplastic syndromes / D.P. Steensma//LeukRes.-2012.-N36.-p. 1441-1452.

145. Stier, S. Osteopontin is a hematopoietic stem cell niche component that negatively regulates stem cell pool size / S. Stier, Y. Ko, R. Forkert, C. Lutz, T. Neuhaus, E. Grunewald, T. Cheng, D. Dombkowski, L.M. Calvi, S.R. Rittling, D.T. Scadden // J Exp Med. - 2005. -N 201. - p. 1781-1791.

146. Swerdlow, S.H. WHO Classification of tumors of haematopoietic and lymphoid tissues / S.H. Swerdlow, E. Campo, N.L. Harris, E.S. Jaffe, S.A. Pileri, H. Stein, J. Thiele, J.W. Vardiman // 4th edn, Lyon: IARC Press. - 2008. - 439 p.

147. Suciu, S. Results of chromosome studies and their relation to morphology, course, and prognosis in 120 patients with de novo myelodysplastic syndrome / S. Suciu, R. Kuse, H.J. Weh, D.K. Hossfeld // Cancer Genet Cytogenet. - 1990. - N 4. -p. 15-26.

148. Sugiyama, T. Maintenance of the hematopoietic stem cell pool by CXCL12-CXCR4 chemokine signaling in bone marrow stromal cell niches / T. Sugiyama, H. Kohara, M. Noda, T. Nagasawa // Immunity. - 2006. - N 25. - p. 977988.

149. Sullivan, S.A. Circulating CD34 cells: an adverse prognostic factor in the myelodysplastic syndromes / S.A. Sullivan, K.A. Marsden, R.M. Lowenthal, D.M. Jupe, M.E. Jones // Am J Hematol. - 1992. -N 39. - p. 96-101.

150. Taichman, R.S. Human osteoblasts support human hematopoietic progenitor cells in vitro bone marrow cultures / R.S. Taichman, M.J. Reilly, S.G. Emerson//Blood. - 1996.-N87.-p. 518-524.

151. Tehranchi, R. Persistent malignant stem cells in del(5q) myelodysplasia in remission / R. Tehranchi, P.S. Woll, K. Andreson, N. Buza-Vidas, T. Mizukami, A.J. Mead, I. Astrand-Grundstrom, B. Strombeck, A. Horvat, H. Ferry et al. // N Engl J Med.-2010.-N363.-p. 1025-1037.

152. Tjio, J.H. The chromosome number of man / J.H. Tjio, A. Levan // Hereditas.- 1956.-N42.-p. 1-6.

153. Tomonaga, M. Sequential karoyotypic evolutions and bone marrow aplasia preceding acute myelomonocytic transformation from myelodysplastic syndrome / M. Tomonaga, Y. Tomonaga, M. Kusano, M. Ichimaru // Br J Haematol. - 1984. - N 58. -p. 53-60.

154. Tricot, G. The myelodysplastic syndromes: different evolution patterns based on sequential morphological and cytogenetic investigations / G. Tricot, M.A. Boogaerts, C. de Wolf-Peeters, H. van den Berghe, R.L. Verwilghen // Br J Haematol. - 1985.-N59.-p. 659-670.

155. Trost, D. Molecular cytogenetic profiling of complex karyotypes in primary myelodysplastic syndromes and acute myeloid leukemia / D. Trost, B. Hildebrandt, M. Beier, N. Müller, U. Germing, B. Royer-Pokora // Cancer Genet Cytogenet. - 2006. - N 165. - p. 51-63.

156. Van den Berghe, H. The 5q- Anomaly / H. van den Berghe, K. Vermaelen, C. Mecucci, D. Barbieri, G. Tricot // Cancer Genet Cytogenet. - 1985. -N 17.-p. 189-255.

157. Van Epps, D.E. Harvesting, characterization, and culture of CD34+ cells from human bone marrow, peripheral blood, and cord blood / D.E. van Epps, J. Bender, W. Lee, M. Schilling, A. Smith, S. Smith, K. Unverzagt, P. Law, J. Burgess // Blood cells. - 1994. -N 20. - p. 411-423.

158. Varga, G. Inappropriate Notch activity and limited mesenchymal stem cell plasticity in the bone marrow of patients with myelodysplastic syndromes / G. Varga, J. Kiss, J. Varkonyj, V. Vas, P. Paloczi, F. Uher // Pathol Oncol Res. - 2007. - N 13. -p. 311-319.

159. Vehmeyer, K. Increased peripheral stem cell pool in MDS: an indication of

disease progression? / K. Vehmeyer, D. Haase, F. Alves // Leuk Res. - 2001. - N 25. -p. 955-959.

160. Walkley, C.R. A microenvironment-induced myeloproliferative syndrome caused by retinoic acid receptor gamma deficiency / C.R. Walkley, G.H. Olsen, S. Dworkin, S.A. Fabb, J. Swann, G.A. McArthur, S.V. Westmoreland, P. Chambon,

D.T. Scadden, L.E. Purton//Cell. - 2007. - N 129-p. 1097-1110.

161. Waller, E.K. The 'common stem cell' hypothesis reevaluated: human fetal bone marrow contains separate populations of hematopoietic and stromal progenitors /

E.K. Waller, J. Olweus, F. Lund-Johansen, S. Huang, M. Nguyen, G.R. Guo, L. Terstappen // Blood. - 1995. -N 85. - p. 2422-2435.

162. Warlick, E.D. Myelodysplasia Syndromes: Review of Pathophysiology and Current Novel Treatment Approaches / E.D. Warlick, B.D. Smith // Curr Cane Drug Targ. - 2007. - N 7. - p. 541-558.

163. Watt, F.M. Out of eden: Stem cell and their niches / F.M. Watt, B.L. Hogan // Science. - 2000. -N 287. - p. 1427-1430.

164. Werner, M. Chromosome analysis in patients with myelodysplastic syndrome: correlation with bone marrow histopathology and prognosis significance / M. Werner, H. Maschek, V. Kaloutsi, H. Chritz, A. Georgii // Virchows Arch A Pathol Anat Histopathol. - 1992. - N 421. - p. 47-52.

165. Westers, T.M. Standardization of flow cytometry in myelodysplastic syndromes: a report from an International Consortium and the European Leukemia Net Working Group / T.M. Westers, R. Ireland, W. Kern, C. Alhan, J.S. Balleisen, P. Bettelheim, K. Burbury, M. Cullen, J.A. Cutler, M.G. Delia Porta et al.// Leukemia. -2012.-N26.-p. 1730- 1741.

166. White, NJ. Deletion of chromosome 20q in myelodysplasia can occur in a multipotent precursor of both myeloid cells and B cells / N.J. White, E. Nacheva, F.A. Asimakopoulos, D. Bloxham, B. Paul, A.R. Green // Blood. - 1994. -N 83. - p. 28092816.

167. Will, B. Stem and progenitor cells in myelodysplastic syndromes show aberrant stage-specific expansion and harbor genetic and epigenetic alterarions / B.

Will, L. Zhou, Т.О. Vogler, S. Ben-Neriah, С. Schinke, R. Tamari, Y. Yu, T.D. Bhagat, S. Bhattacharyya et al. // Blood. - 2012. -N 120. - p. 2076-2086.

168. Yunis, J.J. Refined chromosome analysis as an independent prognostic indicator in de novo myelodysplasia syndromes / J.J. Yunis, R.E. Rydell, M.M. Oken, M.A. Arnesen, M.G. Mayer, M. Lobell // Blood. - 1986. -N 67. - p. 1721-1730.

169. Zhang, Z.X. Cytogenetic analysis of human bone marrow derived mesenchymal stem cells passaged in vitro / Z.X. Zhang, LX. Guan, K. Zhang, S. Wang, P.C. Cao, Y.H. Wang, Z. Wang, L.J. Dai // Cell Biol Int. - 2007. - N 31. - p. 645-648.