Роль цитокинов в формировании устойчивости злокачественных клеток крови к ингибиторам рецепторных тирозинкиназ тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Хабушева Эльмира Рамилевна

• Хабушева Эльмира Рамилевна
• кандидат наук
• 2022

Оглавление диссертации кандидат наук Хабушева Эльмира Рамилевна

Введение

Актуальность темы исследования

Цели и задачи

Научная новизна

Теоретическая и практическая значимость работы

Методология и методы исследования

Положения, выносимые на защиту

Степень достоверности и апробация результатов

Обзор литературы

1. Острые миелоидные лейкозы

1.1 Диагностика

1.1.1 Исследование морфологии лейкозных клеток

1.1.2 Иммунофенотипирование с использованием многопараметрической (3-4-цветной) проточной цитометрии

1.1.3 Цитогенетические исследования (классический анализ хромосом)

1.1.4 Молекулярная цитогенетика - флуоресцентная гибридизация in situ (FISH)

1.1.5 Молекулярно-генетическое исследование клеток костного мозга

1.2 Хромосомные перестройки и мутации при лейкозах

1.2.1 Хромосомные перестройки

1.2.2 Мутации

1.3 Молекулярно-генетическая классификация ОМЛ - European LeukemiaNet 2017 (ELN 2017)

1.4 Терапевтические подходы и клинические испытания

1.4.1 Современная терапия ОМЛ

1.4.2 Перспективные препараты и клинические испытания

2. Рецепторные киназы в ОМЛ

2.1 РТК и злокачественные заболевания

2.2 Рецептор KIT и его лиганд SCF

2.2.1 Структура гена и белка KIT, его мутантные формы в злокачественных клетках

2.2.2 Регуляция экспрессии KIT в нормальных и злокачественных клетках

2.3 Рецептор FLT3 и его лиганд FLT3-L

2.3.1 Структура гена и белка FLT3 и его мутантные формы в злокачественных клетках

2.3.2 Регуляция экспрессии FLT3

2.4 Сигнальный путь РТК III типа

2.4.1 RAS/MAPK

2.4.2 PIK3K/AKT

2.4.3 SRC

3. Кроветворная ниша и строма костного мозга

3.1 Цитокины IL3 и GM-CSF

3.1.1 IL3 и его рецептор IL3Ra

3.1.2 GM-CSF и его рецептор GM-CSFR

3.3 THPO и его рецептор MPL

3.4 NGF и его рецептор TrkA

Материалы и методы

1. Данные секвенирования РНК злокачественных клеток пациентов и перевиваемых клеток, находящиеся в открытом доступе

2. Анализ данных секвенирования РНК злокачественных клеток пациентов и перевиваемых клеток

3. K-means кластеризация образов больных ОМЛ

4. Культуры клеток

5. Рекомбинантные белки

6. Ингибиторы

7. Клонирование кДНК генов в плазмидную ДНК

8. Продукция рекомбинантных лентивирусных частиц

9. Лентивирусная трансдукция и определение титра лентивирусных частиц

10. Оценка скорости пролиферации клеток

11. Измерение апоптоза в культуре клеток

12. Выделение, очистка РНК и синтез кДНК

13. Количественная полимеразная цепная реакция в реальном времени

14. Конфокальная микроскопия

15. Статистическая обработка и визуализация данных

Результаты и обсуждение

1. Определение генов, дифференциально экспрессируемых совместно с GATA1, GATA2, TAL1 в клетках пациентов с острым миелоидным лейкозом

2. Кластеризация больных с ОМЛ на основе уровня экспрессии GGT-генов

3. Кластеризация клеток ОМЛ на основе уровня экспрессии GGT-генов

4. Анализ уровня мРНК генов GATA1, GATA2, TAL1 в разных клеточных культурах

5. Получение клеток со сверхэкспрессией GATA1, GATA2, TAL1

6. Повышение уровня содержания мРНК гена NTRK1 при сверхэкспрессии GATA1 или GATA2

7. Перевиваемые клетки острого миелоидного лейкоза обладают разной чувствительностью к 5-азацитидину

8. 5-азацитидин индуцирует уровень содержания мРНК гена GATA1

9. 5-азацитидин индуцирует синтез мРНК генов NTRK1, ABCG1, JAM3

10. 5-азацидитин увеличивает чувствительность клеток лейкоза человека к ингибитору TrkA энтректинибу

11. Ингибирование РТК в клетках повышает экспрессию цитокиновых рецепторов

12. Цитарабин повышает уровень мРНК цитокиновых рецепторов

13. IL3 и GM-CSF (CSF2) стимулируют пролиферацию клеток Kasumi-1 и MV4-11....103 15. Ингибиторы киназ SRC и JAK2 блокируют действие IL3

Выводы

Заключение

Список сокращений и условных обозначений

Благодарности

Список литературы

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Роль цитокинов в формировании устойчивости злокачественных клеток крови к ингибиторам рецепторных тирозинкиназ»

Введение Актуальность темы исследования

Острые миелоидные лейкозы (ОМЛ) - гетерогенное заболевание кроветворной системы, которое составляет примерно 1.1% от всех диагностируемых злокачественных заболеваний, с характерным медианным возрастом пациентов - 68 лет. За 50 лет был достигнут заметный прогресс в понимании патофизиологии заболевания, в клиническую практику был введен ряд терапевтических подходов, было достигнуто увеличение вероятности пятилетней выживаемости до 25% для людей старше 65 лет и до 68% для людей младше 20 лет (по сравнению с 13% и 8% в 1970 году).

В настоящее время, острый миелоидный лейкоз не рассматривают как единое заболевание, а считают большой группой заболеваний кроветворной системы с различными патофизиологическими, клиническими, цитогенетическими и молекулярными особенностями. Поэтому актуальной задачей является выделение групп пациентов со сходными признаками, в том числе для подбора селективной терапии.

Обнаружение терапевтического действия цитарабина (ага-С) и антрациклинов при ОМЛ и их объединение в 1970-х годах в так называемая схема "3 + 7" (3 дня даунорубицина + 7 дней цитарабина) долгое время считалось стандартом лечения, что приводило к достижению ремиссии у порядка 40 % пациентов с ОМЛ. Раскрытие гетерогенности ОМЛ на клиническом, цитогенетическом и молекулярном уровнях позволило улучшить прогностические модели и привело к разработке методов лечения, специфичных для отдельных подгрупп ОМЛ. Например, применение трансретиноевой кислоты (ATRA) для лечения острого промиелоцитарного лейкоза (ОПЛ).

Среди перспективных подходов, находящихся в разработке в настоящее время или уже нашедших применение для отдельных пациентов, особый интерес, представляют: (1) комбинации гипометилирующих агентов (ГМА), таких как азацитидин, децитабин, с ингибитором В^2 (для пожилых пациентов или пациентов, которым противопоказана интенсивная химиотерапия); (2) добавление ингибиторов fms-подобной тирозинкиназы 3 (FLT3) (гилтеритиниб, мидостаурин, сорафениб, кизартиниб, креноланиб и др.) к интенсивной химиотерапии или к терапии ГМА/низкой интенсивности при ОМЛ с мутантным FLT3; (3) исследование эффективности сочетания таргетной терапии со стандартной интенсивной химиотерапией или вместо нее. При этом, необходимо а) создание новых вычислительных алгоритмов для предсказания ответа на терапию и определение групп пациентов, которые могут дать наибольший ответ на терапию; б) понимание молекулярных механизмов регуляции экспрессии генов, кодирующих мишени перспективных терапевтических препаратов; в)

исследование механизмов развития устойчивости к имеющимся в клинической практике препаратам.

Степень разработанности темы исследования

В 2010 году международная группа экспертов под названием European LeukemiaNet (ELN) впервые опубликовала рекомендации по диагностике и лечению острого миелоидного лейкоза (AML). Эти рекомендации нашли широкое применение в рамках клинических испытаний и при разработке регуляторных документов. В последние годы был достигнут значительный прогресс в понимании патогенеза заболевания, а также в разработке диагностических тестов и новых методов лечения. В 2017 году появились обновленные рекомендации, которые соответствуют принятой в настоящее время классификации миелоидных новообразований и острого лейкоза Всемирной Организации Здравоохранения (ВОЗ). Поиск генетических особенностей, определяющих течение заболевание и ответ на химиотерапию, также немаловажен. Так за последние 5 лет, была значительно расширена диагностическая панель генов, исследования которых необходимо проводить для оценки группы риска пациента с ОМЛ. Помимо анализа мутаций в генах NPM1, FLT3 и CEPBA, также рекомендовано исследовать гены RUNX1, SRSF2, ASXL1 и TP53. Однако по сей день необходим поиск новых значимых мутаций и в ранее не расматриваемых генах для увеличения эффективности прогнозирования заболевания и правильного выбора курса лечения.

Общий подход к современной терапии за последние годы существенно не изменился. Первоначально для пациента определяют возможность применения интенсивной химиотерапии, состоящей в трехдневном введении антрациклина и 7-дневном введении цитарабина (схема «3+7»). При таком лечении полный ответ достижим у 60-80% молодых людей и у 40-60% пожилых людей (60 лет или старше). Альтернативой интенсивной химиотерапии являются 5-азацитидин, децитабин, низкие дозы цитарабина, гидроксимочевина (поддерживающая терапия). Кроме того, в последние годы активно развивается таргетная терапия, включающая ингибиторы киназ, эпигенетические модуляторы, антитела, что требует определение групп пациентов, для которых тот или иной вид терапии будет наиболее эффективным. Например, в исследовании RATIFY оценивали интенсивную индукционную и консолидирующую химиотерапию в сочетании с ингибитором рецепторной тирозинкиназы FLT3 мидостаурином или плацебо и с последующей фазой поддерживающей терапии мидостаурином или плацебо в течение 1 года у 717 пациентов в возрасте от 18 до 60 лет с мутантным FLT3. Было показано, что использование мидостаурина увеличивало частоту полных ответов у пациентов. Таким образом, для пациентов

с мутантным FLT3 наиболее эффективной схемой лечения в настоящее время является сочетание интенсивной химиотерапии с мидостаурином.

Наличие ответа на определенный вид терапии определяют не только генетические характеристики клеток. Немаловажный вклад могут вносить цитокины и факторы роста, продуцируемые непосредственно злокачественными клетками, клетками микроокружения, иммунными клетками. Их вклад в прогрессию ОМЛ, а также в эффективность терапии у пациентов остается малоизученным. В основном, миелоидные факторы роста используют для снижения нежелательных эффектов, вызванных химиотерапией. Например, гранулоцитарный колониестимулирующий фактор G-CSF и гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор GM-CSF на протяжении многих лет использовали для уменьшения продолжительности нейтропении, вызванной химиотерапией, и, таким образом, снижения частоты и тяжести инфекций при лечении ОМЛ и острого лимфобластного лейкоза (ОЛЛ). Эти факторы роста также использовали для введения клеток миелоидного лейкоза, находящихся в фазе покоя, в S фазу клеточного цикла, чтобы повысить их чувствительность к противолейкозным препаратам, таким как цитарабин. В многочисленных проспективных рандомизированных исследованиях изучалась эффективность и безопасность добавления факторов роста до, во время и после химиотерапии. К сожалению, только в немногих исследованиях сообщалось об увеличении продолжительности безрецидивной выживаемости или общей выживаемости пациентов. Однако, возможное участие цитокинов в нарушении эффектвиности терапии, а также их вклад в развитие резистености начали изучать сравнительно недавно. В ряде исследований влияние цитокинов на прогрессию лейкозов связывают с характером их действия, - провоспательным или противовоспалительным. Так, провоспалительные медиаторы, такие как IL-ip, TNF-a и IL-6, как правило, повышают агрессивность течения ОМЛ, тогда как противовоспалительные медиаторы, такие как TGF-P и IL-10, могут препятствовать прогрессии ОМЛ.

Одна из значимых работ, направленных на исследование ответа клеток лейкоза человека на противоопухолевые препараты, в особенности ингибиторы киназ, была опубликована в 2018 году Мартином Кэроллом и другими (Martin Carroll). В ней впервые была продемонстрирована способность GM-SCF и IL3 снижать цитотоксическое действие ингибитора FLT3-iTD кренолатиниба.

Таким образом, актульной задачей является разработка вычислительных алгоритмов, направленных на оценку эффективности терапевтического подхода для отдельных групп пациентов и выявление их генетических и транскриптомных характеристих. Также необходимо

исследование молекулярных механизмов развития устойчивости клеток лейкоза человека к имеющимся в клинической практике препаратам.

Цели и задачи

Основными целями работы было выявление механизмов, определяющих выживание клеток острого миелоидного лейкоза при терапии лейкозов ингибиторами рецепторных тирозинкиназ и ответственных за развитие рецидивов, для создания новых более эффективных подходов к терапии острого миелоидного лейкоза

Для достижения целей было необходимым решить следующие задачи:

1. Выявить факторы транскрипции, регулирующие экспрессию отдельных рецепторных тирозинкиназ в клетках острого миелоидного лейкоза;

2. Выявить цитокины и их рецепторы, снижающие антипролиферативную активность ингибиторов рецепторных тирозинкиназ в клетках острого миелоидного лейкоза;

3. Протестировать ряд ингибиторов внутриклеточных киназ для выявления препаратов, способных (а) усиливать действие ингибиторов рецепторных тирозинкиназ и (б) предотвращать цитокин-зависимое спасение клеток острого миелоидного лейкоза от токсического действия ингибиторов рецепторных тирозинкиназ.

Научная новизна

Было впервые показано, что факторы транскрипции GATA1 и GATA2 регулируют экспрессию гена рецептора фактора роста нервов NTRK1 (он же ген нейротрофной рецепторной тирозинкиназы TrkA) в клетках ОМЛ. Впервые установлено, что ингибитор ДНК-метилтрансфераз 5-азацитидин одновременно активирует экспрессию GATA1 и NTRK1, а также повышает чувствительность клеток лейкоза человека к ингибитору TrkA энтректинибу. Это свидетельствует о возможности использования энтректиниба в качестве одного из лекарственных препаратов, применяемых при сочетанной противолейкозной терапии. Было впервые показано, что цитокины IL3 и GM-CSF снижают эффективность действия ингибиторов рецепторных тирозинкиназ, таких как мидостаурин, кизартиниб, иматиниб и дазатиниб, используемых в клинической практике, в том числе, для лечения острых миелоидных лейкозов, в отношении клеток с мутациями в генах рецепторных тирозинкиназ. Впервые было показано, что применение ингибиторов внутриклеточных тирозинкиназ SRC и JAK2 усиливает цитотоксический эффект ингибиторов рецепторных тирозинкиназ, а также

способность этих ингибиторов в нецитотоксических концентрациях частично блокировать IL3 и GM-CSF-зависимое выживание лейкозных клеток.

Таким образом, полученные результаты являются основой для развития новых эффективных подходов к комбинированной терапии острых миелоидных лейкозов.

Теоретическая и практическая значимость работы

В ходе работы были полученые новые данные об участии факторов транскрипции GATA1, GATA2, TAL 1 в регуляции экспрессии генов, таких как рецептор фактора роста нервов NTRK1. Был показан вклад экспрессии 109 генов в прогноз развития заболевания.

На основе приведенных выше данных, было показано, что оценка экспрессии 109 генов может быть использована для предсказания вероятности выживания пациентов с ОМЛ. Кроме того, были разработаны и апробированы in vitro два принципиально новых подхода к комбинированной терапии острых миелоидных лейкозов, основанных а) на сочетании гипометилирующего агента 5-азацитидина с энтректинибом, ингибитором рецептора фактора роста нервов TrkA б) на сочетании ингибиторов рецепторных тирозинкиназ FLT3 и KIT с ингибиторами внутриклеточных киназ JAK2 и SRC для предотвращения цитокин-зависимого спасения клеток и усиления цитотоксической активности агентов по отдельности.

Методология и методы исследования

Для выполнения работы были использованы современные методы молекулярной и клеточной биологии, а также современные вычислительные методы анализа данных секвенирования РНК. Анализ экспрессии данных секвенирования РНК пациентов с ОМЛ проводили, используя методы кластеризации (k-средних) и множественных t-тестов. Клетки лейкоза человека модифицировали, используя псевдолентивирусные векторные частицы, несущие гены, кодирующие факторы транскрипци GATA1, GATA2 и TAL1 и маркерные гены флуоресцентных белков GFP и mCherry. Сравнительный анализ уровня мРНК проводили методом ПЦР в реальном времени с использованием праймеров, дизайн которых был осуществлен нами. Белки выявляли с помощью соответствующих специфических антител и определяли их локализацию методом конфокальной микроскопии. Оценку жизнеспособности клеток проводили Cell Proliferation assay и при окрашивании аннексином V и пропидий йодидом с последующим анализом клеток на проточном цитофлуориметре.

Положения, выносимые на защиту

1. Ряд генов, экспрессия которых повышена одновременно с экспрессией генов транскрипционных факторов GATAI, GATA2, и TAL1, определяют неблагоприятный прогноз течения острого миелоидного лейкоза.

2. Эктопическая экспрессия GATA1 и GATA2 приводит к увеличению содержания мРНК и белка гена рецепторной нейротрофной тирозинкиназы 1 NTRK1 в клетках ОМЛ.

3. 5-азацитидин активирует экспрессию генов GATA1 и NTRK1. 5-азацитидин увеличивает чувствительность клеток к ингибитору TrkA энтректинибу.

4. Ингибирование рецепторных тирозин киназ FLT3 и KIT индуцирует экспрессию генов рецепторов IL3Ra, CSF2R, NTRK1 в клетках с мутантными рецепторными тирозинкиназами FLT3 и KIT.

5. IL3 снижает цитотоксическое действие ингибиторов рецепторных тирозикиназ -мидостаурина, кизартиниба и иматиниба.

6. Ингибиторы внутриклеточной киназы SRC (бозутиниб, саракатиниб) усиливают чувствительность клеток линий MV4-11 и Kasumi-1 с активирующими мутациями в генах рецепторных тирозинкиназ FLT3 и KIT к ингибиторам рецепторных тирозинкиназ.

Степень достоверности и апробация результатов

Основные результаты были представлены автором диссертации на 15 международных и отечественных конференциях и на обьединенном коллоквиуме Лаборатории клеточных основ развития злокачественных заболеваний, Лаборатории конформационного полиморфизма белков в норме и патологии, Лаборатории молекулярных основ действия физиологически активных соединений, Лаборатории регуляции внутриклеточного протеолиза, Лаборатории биохимии вирусных инфекций и Лаборатории пролиферации клеток Федерального государственного бюджетного учреждения науки Института молекулярной биологии им. В.А.Энгельгардта Российской академии наук. По материалам диссертации опубликованы 9 тезисов, представленных на международных и отечественных конференциях, и 9 научных статей в рецензируемых отечественных и международных научных журналах.

Обзор литературы

1. Острые миелоидные лейкозы

Острые миелоидные лейкозы (ОМЛ) - гетерогенная группа злокачественных заболеваний кроветворной системы. ОМЛ возникает в результате злокачественной трансформации незрелых клеток крови - стволовых и клеток-предшественников [1]. Частота возникновения ОМЛ увеличивается с возрастом. Так, заболеваемость ОМЛ для людей до 65 лет составляет примерно ~1,3 случая на 100 000 человек, для людей старше 65 лет встречаемость возрастает до 12,2 случая на 100 000 человек. ОМЛ может развиться у пациентов с прогрессирующим гематологическим заболеванием (например, миелодиспластическим синдромом, МДС) или в результате противоопухолевой терапии (например, ингибиторами топоизомераз II, алкилирующими агентами или облучением) [2]. Однако, в большинстве случаев ОМЛ возникает de novo, то есть у ранее здоровых людей, в результате накопления мутаций в незрелых кроветворных клетках. Вне зависимости от происхождения, патогенез ОМЛ включает нарушение нормальной пролиферации и дифференцировки клона миелоидных клеток-предшественников.

Исследования на животных моделях привели к разработке "двухударной" ("two-hit") модели возникновения лейкоза, согласно которой развитие лейкоза происходит в результате совместного действия мутаций, приводящих к гиперактивации пролиферативных путей (мутации класса I) и мутаций, нарушающих нормальную дифференцировку кроветворных клеток в ходе гемопоэза (мутации класса II).

Мутации, обнаруживаемые в клетках ОМЛ, можно разделить на предлейкозные, лейкозные (возникающие в ходе течения заболевания) и поздние, в соответствии с моментом их возникновения [3]. Следует отметить, что соматические мутации, выявляемые при злокачественных заболеваниях крови, могут быть обнаружены и у здоровых людей с частотой, которая увеличивается с возрастом [4] [5]. Наличие этих соматических мутаций при отсутствии общепринятых диагностических критериев ОМЛ определяют как

клональный гемопоэз неопределенного потенциала (КГНП, CHIP). Риск возникновения ОМЛ на фоне КГНП сравнительно невысокий и составляет 0.5-1% [6]. Мутации в генах DNMT3A, TET2, ASXL1 - наиболее часто выявляемые при КГНП [7] [8].

Существуют и генетические предпосылки к развитию ОМЛ. При синдроме Дауна вероятность возникновения ОМЛ повышена более чем в 10 раз.

В настоящее время, молекулярные механизмы, ответственные за формирование устойчивых к терапии клонов клеток ОМЛ, остаются не до конца изученными.

1.1 Диагностика 1.1.1 Исследование морфологии лейкозных клеток

Исследования аспирата костного мозга - часть рутинного диагностического обследования пациента с подозрением на ОМЛ. Считают, что трепанобиопсия костного мозга необязательна, и ее следует проводить только у пациентов с сухим проколом (dry tap, punctio sicca) или при наличии скудного пунктатата костного мозга. Морфологию клеток в мазках периферической крови и костного мозга исследуют, окрашивая препараты по Маю-Грюнвальду, Поппенгейму или Райту-Гимзе. При этом рекомендуют подсчитывать не менее 200 лейкоцитов в мазках переферической крови и 500 ядерных клеток в мазках костного мозга. Диагноз ОМЛ ставят при наличии 20% и более бластных клеток в образцах костного мозга или периферической крови за исключением ОМЛ с t(15; 17), t(8; 21), inv(16) или t(16; 16), и некоторых случаев эритролейкоза. При обнаружении менее 5-19% бластных клеток в образце костного мозга выполняют повторный забор и исследование через 7 дней, и, если доля бластных клеток не превышает 20% ставят диагноз миелодиспластический синдром с избытком бластов.

Миелобласты, монобласты и мегакариобласты входят в подсчет бластов. При ОМЛ с моноцитарной или миеломоноцитарной дифференцировкой монобласты и промоноциты, но не аномальные моноциты, считаются бластами. Эритробласты не считаются бластами, за исключением редких случаев эритроидного лейкоза.

Для определения подтипа лейкоза у больного в некоторых странах по-прежнему используют цитохимический анализ, а не иммунофенотипирование с помощью проточной цитофлуориметрии (Таблица 1). Такой анализ состоит в сочетании окрашивания миелопероксидазой (МПО) или суданом черным с неспецифичной эстеразой (НСЭ).

Таблица 1. Красители, используемые для морфологических исследований пациентов с подозрением на ОМЛ.

КРАСИТЕЛЬ ДЕТЕКТИРУЕМЫЙ КЛЕТОЧНЫЙ ЭЛЕМЕНТ ОПРЕДЕЛЯЕМЫЙ ТИП КЛЕТОК

Миелопероксидаза Нейтрофильные гранулы Миелобласты - много Монобласты - мало

Судан черный B Фосфолипиды Миелобласты - много Монобласты - мало

Специфическая эстераза Фермент Миелобласты

Неспецифическая эстераза Фермент Монобласты

Окрашивание по Шиффу Гликоген Лимфобласты, пронормобласты

Берлинская лазурь Железо Сидеробласты

Обнаружение МПО (окрашено >3% бластов) указывает на миелоидную дифференцировку клеток, что позволяет отличать ОМЛ от острого лимфобластного лейкоза (ОЛЛ) (Рисунок 1Б). Однако отсутствие окраски не исключает миелоидного происхождения клеток, поскольку в ранних миелобластах и монобластах МПО может отсутствовать. МПО - фермент лизосом нейтрофилов, который локализован в гранулах нейтрофилах. Судан черный В окрашивает фосфолипиды и является аналогом МПО, однако менее специфичным красителем. Неспецифическая эстераза диффузно окрашивает цитоплазму монобластов (Рисунок 1В). Берлинская лазуль позволяет выявить признаки анемии у пациента (Рисунок 1Г).

Рисунок 1. Исследование морфорологии клеток крови пациента с ^8;16) ОМЛ. А) Окрашивание по Маю-Грюнвальду-Гимзе. Б) Окрашивание миелопероксидазой (МПО). В) Окрашивание неспецифичной эстеразой (НСЭ). Г) Окрашивание берлинской лазурью клеток крови пациента с принаками анемии.

Иллюстрации А-В из [9]; Г - из [10].

Для диагностирования острого эритроидного лейкоза используют окрашивание по Шиффу, которое приводит к детекции гликогена. Окрашивание берлинской лазурью используют для того, чтобы различить нормальные сидеробласты (эритробласты) от кольцевидных сидеробластов, являющихся признаком сидеробластной анемии у пациента.

1.1.2 Иммунофенотипирование с использованием многопараметрической

(3-4-цветной) проточной цитометрии

Многоцветная многопараметрическая проточная цитометрия используется для определения вовлеченности клонов клеток вновь диагностированного острого лейкоза в прогрессию злокачественного заболевания (Таблица 2).

Таблица 2. Маркеры клеток, используемые для иммунофенотипирования бластных клеток ОМЛ. Адаптированный перевод из [11].

ТИП КЛЕТОК ПОВЕРХНОСТНЫЕ БЕЛКИ

ОМЛ

Прекурсорные CD34, CD38, CD117 (KIT), CD133, HLA-DR

Гранулоциторные CD13, CD15, CD16, CD33, CD65, MPO (цитоплазматический)

Моноцитарные НСЭ, CD11c, CD14, CD64, лизоцим, CD4, CD11b, CD36, гомолог NG2

Мегакариоцитарные CD41 (гликопротеин IIb, IIIa), CD61 (гликопротеин IIIa), CD42 (гликопротеин 1b)

Эритроидные CD235a (гликопротеин А)

Лейкоз смешанного фенотипа

Миелоидные МПО или другие моноцитарные маркеры (хотя бы 2 из НСЭ, CD11c, CD14, CD64, лизоцим)

B-клеточные CD 19 (много) и один или больше из следующих маркеров (CD79a, cCD22, CD10, CD10) Или CD19 (мало) и один или больше из следующих маркеров CD79a, cCD22, CD10

15

Т-клеточные CD3 (цитоплазматический или

поверхностный)

В настоящее время не существует единого протокола, регламентирующего долю окрашенных клеток, необходимую для установления наличия данного маркера в популяции клеток. Для большинства маркеров обычно используемый критерий - 20% или более лейкозных клеток, имеющих маркер, тогда как для некоторых определенных маркеров (например, цитоплазматических CD3, МРО, TdT, CD34, CD117) используют более низкое пороговое значение (10%).

Количественная оценка характера представленности нескольких поверхностных и цитоплазматических антигенов необходима для определения количества клонов, участвующих в развитии ОМЛ, а также диагностики острого лейкоза со смешанным фенотипом и выявления атипичного фенотипа, что в дальнейшем также позволяет измерить минимальную остаточную болезнь у пациента. Определение количества бластов методом проточной цитометрии не является заменой морфологическому анализу образцов, а используется в качестве дополнения.

1.1.3 Цитогенетические исследования (классический анализ хромосом)

Выявление хромосомных перестроек является одним из этапов анализа клеток пациентов с ОМЛ в ходе диагностики, определяющего выбор терапевтического подхода [12] [13]. Цитогенетический анализ является обязательным компонентом диагностической оценки пациента с подозрением на острый лейкоз. Классический анализ хромосом основан на анализе хромосом клеток в метафазе набором красителей (по Касперссону акрихин-ипритом; по Романовскому-Гимзе; акридином оранжевым и др.) которые связывают различные участки хромосом и, таким образом, происходит неравномерное окрашивание с образованием характерного полосчатого изображения.

Анализ как минимум 20 клеток в метафазе из костного мозга обязателен для установления нормального кариотипа и рекомендуется для выявления аномального кариотипа. При выявлении 20% или более бластных клеток в костном мозге или периферической крови комплексного кариотипа (3 хромосомных аномалии и более), несбалансированных перестроек: -7 или del(7q); -5 или del(5q); или t(17p); -13 или del(13q); del(11q); del(12p) или ^12р);

del(9q); idic(X)(q13); сбалансированных перестроек (транслокаций): ^11;16) ^23;р13.3); t(3;21)(q26.2;q22.1); 1(1;3)(р36.3;д21.1); 1(2;11) (р21;д23); t(5;12)(q33;p12); t(5;7)(q33;q11.2); t(5;17)(q33;p13); t(5;10)(q33;q21); t(3;5)(q25;q34); признаков мультилинейной дисплазии; отсутствие «устойчиво выявляемых хромосомных аномалий»; отсутствии ранее проведенной

химиотерапии на фоне злокачественного заболевания считаются достаточными для постановки диагноза «ОМЛ с признаками, связанными с миелодисплазией» (ВОЗ, Министерство здравоохранения РФ).

Восемь сбалансированных хромосомных перестроек и инверсий, а также их генетические варианты, включены в категорию ВОЗ "ОМЛ с рецидивирующими генетическими аномалиями" [14][15].

1.1.4 Молекулярная цитогенетика - флуоресцентная гибридизация in situ

(FISH)

Анализ FISH in situ - цитогенетический метод, позволяющий детектировать локализацию последовательностей ДНК в интерфазных ядрах. Этот анализ служит важным дополнением к классическому анализу хромосом и необходим для детектирования определенных химерных генов, например, PML и RARA при подозрении на острый промиелоцитарный лейкоз (Рисунок 2).

Рисунок 2. Слитный ген PML-RARA.

А) Экзон-интронное строение генов RARA и PML и их локализация на хромосомах 17 и 15 человека. Указаны области, в которых происходят перестройки (bcrl, bcr2, bcr3 - в гене PML,

break-point region - в гене RARA). Б) Химерные гены PML/RARA.

B, Г) Изображение PML (красным), RARA (зеленым) и PML/RARA (желтым), полученное методом флуоресцентной гибридизации in situ - FISH.

Адаптированный перевод из [16].

Для проведения анализа FISH используют образцы, приготовленные из осадка клеток, фиксированных метанолом/уксусной кислотой, предназначенных для долговременного хранения. Кроме того, таким методом обнаруживают слитые гены RUNX1-RUNX1T1, CBFB-MYH11, химерные гены, содержащие MLL и EVI1, делеции хромосом 5q и 7q [17] [18]. FISH используют для идентификации партнеров слияния MLL в транслокациях 11q23 [19]. 24-цветный FISH используют для определения комплексного кариотипа ОМЛ (3 хромосомные перестройки и более). Метод FISH также может быть использован для выявления остаточного заболевания после терапии ОМЛ. Он более чувствителен и специфичен, чем цитогенетический анализ, но менее чувствителен, чем ПЦР или иммунофенотипирование.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Хабушева Эльмира Рамилевна, 2022 год

Список литературы

1. Bonnet D., Dick J.E. Human acute myeloid leukemia is organized as a hierarchy that originates from a primitive hematopoietic cell // Nat. Med. 1997. Vol. 3, № 7. P. 730-737.

2. Sill H. et al. Therapy-related myeloid neoplasms: pathobiology and clinical characteristics. // Br. J. Pharmacol. Br J Pharmacol, 2011. Vol. 162, № 4. P. 792-805.

3. Tuval A., Shlush L.I. Evolutionary trajectory of leukemic clones and its clinical implications // Haematologica. 2019. Vol. 104, № 5. P. 872-880.

4. Grimm J. et al. Clinical impact of clonal hematopoiesis in acute myeloid leukemia patients receiving allogeneic transplantation // Bone Marrow Transplant. Nature Publishing Group, 2019. Vol. 54, № 8. P. 1189-1197.

5. Xie M. et al. Age-related mutations associated with clonal hematopoietic expansion and malignancies. // Nat. Med. Nat Med, 2014. Vol. 20, № 12. P. 1472-1478.

6. Steensma D.P. et al. Clonal hematopoiesis of indeterminate potential and its distinction from myelodysplastic syndromes. // Blood. Blood, 2015. Vol. 126, № 1. P. 9-16.

7. Buscarlet M. et al. DNMT3A and TET2 dominate clonal hematopoiesis and demonstrate benign phenotypes and different genetic predispositions // Blood. American Society of Hematology, 2017. Vol. 130, № 6. P. 753-762.

8. Genovese G. et al. Clonal hematopoiesis and blood-cancer risk inferred from blood DNA sequence. // N. Engl. J. Med. N Engl J Med, 2014. Vol. 371, № 26. P. 2477-2487.

9. Haferlach T. et al. AML with translocation t(8;16)(p11;p13) demonstrates unique cytomorphological, cytogenetic, molecular and prognostic features // Leukemia. Nature Publishing Group, 2009. Vol. 23, № 5. P. 934-943.

10. Caudill J.S. et al. Congenital sideroblastic anemia associated with germline polymorphisms reducing expression of FECH // Haematologica. 2008. Vol. 93, № 10. P. 1582-1584.

11. Dohner H. et al. Diagnosis and management of acute myeloid leukemia in adults: recommendations from an international expert panel, on behalf of the European LeukemiaNet // Blood. American Society of Hematology, 2010. Vol. 115, № 3. P. 453-474.

12. Mrózek K., Heerema N.A., Bloomfield C.D. Cytogenetics in acute leukemia. // Blood Rev. Blood Rev, 2004. Vol. 18, № 2. P. 115-136.

13. Grimwade D. et al. Refinement of cytogenetic classification in acute myeloid leukemia: determination of prognostic significance of rare recurring chromosomal abnormalities among 5876 younger adult patients treated in the United Kingdom Medical Research Council trials // Blood. American Society of Hematology, 2010. Vol. 116, № 3. P. 354-365.

14. Arber D.A. et al. The 2016 revision to the World Health Organization classification of myeloid neoplasms and acute leukemia // Blood. American Society of Hematology, 2016. Vol. 127, № 20. P. 2391-2405.

15. Swerdlow S .H., World Health Organization, International Agency for Research on Cancer. WHO classification of tumours of haematopoietic and lymphoid tissues. 585 p.

16. Kim K.-H. et al. Novel PML-RARA Fusion Gene on Chromosome 17 in Acute Promyelocytic Leukemia with Normal Chromosome 15 and 17 // Korean J. Hematol. Korean Society of Hematology; Korean Society of Blood and Marrow Transplantation; Korean Society of , 2007. Vol. 42, № 3. P. 296.

17. Frohling S. et al. Comparison of cytogenetic and molecular cytogenetic detection of chromosome abnormalities in 240 consecutive adult patients with acute myeloid leukemia. // J. Clin. Oncol. J Clin Oncol, 2002. Vol. 20, № 10. P. 2480-2485.

18. Lugthart S. et al. High EVI1 levels predict adverse outcome in acute myeloid leukemia: prevalence of EVI1 overexpression and chromosome 3q26 abnormalities underestimated. // Blood. Blood, 2008. Vol. 111, № 8. P. 4329-4337.

19. van der Burg M. et al. Rapid and sensitive detection of all types of MLL gene translocations with a single FISH probe set. // Leukemia. Leukemia, 1999. Vol. 13, № 12. P. 2107-2113.

20. Mrozek K. et al. Comparison of cytogenetic and molecular genetic detection of t(8;21) and inv(16) in a prospective series of adults with de novo acute myeloid leukemia: a Cancer and Leukemia Group B Study. // J. Clin. Oncol. J Clin Oncol, 2001. Vol. 19, № 9. P. 2482-2492.

21. Meyer C. et al. The MLL recombinome of acute leukemias in 2013. // Leukemia. Leukemia, 2013. Vol. 27, № 11. P. 2165-2176.

22. Tang J.-L. et al. AML1/RUNX1 mutations in 470 adult patients with de novo acute myeloid leukemia: prognostic implication and interaction with other gene alterations. // Blood. Blood,

2009. Vol. 114, № 26. P. 5352-5361.

23. Kelly L.M. et al. FLT3 internal tandem duplication mutations associated with human acute myeloid leukemias induce myeloproliferative disease in a murine bone marrow transplant model. // Blood. Blood, 2002. Vol. 99, № 1. P. 310-318.

24. Cancer Genome Atlas Research Network L. et al. Genomic and epigenomic landscapes of adult de novo acute myeloid leukemia. // N. Engl. J. Med. N Engl J Med, 2013. Vol. 368, № 22. P. 2059-2074.

25. Metzeler K.H. et al. Spectrum and prognostic relevance of driver gene mutations in acute myeloid leukemia // Blood. American Society of Hematology, 2016. Vol. 128, № 5. P. 686-698.

26. Patel J.P. et al. Prognostic relevance of integrated genetic profiling in acute myeloid leukemia. // N. Engl. J. Med. N Engl J Med, 2012. Vol. 366, № 12. P. 1079-1089.

27. Patel J.P. et al. Prognostic Relevance of Integrated Genetic Profiling in Acute Myeloid Leukemia // N. Engl. J. Med. Massachusetts Medical Society , 2012. Vol. 366, № 12. P. 1079-1089.

28. Figueroa M.E. et al. Leukemic IDH1 and IDH2 mutations result in a hypermethylation phenotype, disrupt TET2 function, and impair hematopoietic differentiation. // Cancer Cell. Cancer Cell,

2010. Vol. 18, № 6. P. 553-567.

29

30

31

32

33

34

35

36

37

38

39

40

41

42

43

Papaemmanuil E. et al. Genomic Classification and Prognosis in Acute Myeloid Leukemia // N. Engl. J. Med. Massachusetts Medical Society, 2016. Vol. 374, № 23. P. 2209-2221.

Bolouri H. et al. The molecular landscape of pediatric acute myeloid leukemia reveals recurrent structural alterations and age-specific mutational interactions. // Nat. Med. Nat Med, 2018. Vol. 24, № 1. P. 103-112.

Encyclopedic Reference of Cancer.

Shi X. et al. Distinct cellular properties of oncogenic KIT receptor tyrosine kinase mutants enable alternative courses of cancer cell inhibition. // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. National Academy of Sciences, 2016. Vol. 113, № 33. P. E4784-93.

Verzijl A. et al. C-kit Asp-816-Val mutation analysis in patients with mastocytosis. // Dermatology. Dermatology, 2007. Vol. 214, № 1. P. 15-20.

Sotlar K. et al. Detection of c-kit mutation Asp 816 to Val in microdissected bone marrow infiltrates in a case of systemic mastocytosis associated with chronic myelomonocytic leukaemia. // Mol. Pathol. Mol Pathol, 2000. Vol. 53, № 4. P. 188-193.

Ning Z.Q., Li J., Arceci R.J. Signal transducer and activator of transcription 3 activation is required for Asp(816) mutant c-Kit-mediated cytokine-independent survival and proliferation in human leukemia cells. // Blood. Blood, 2001. Vol. 97, № 11. P. 3559-3567.

Jawhar M. et al. KIT D816 mutated/CBF-negative acute myeloid leukemia: a poor-risk subtype associated with systemic mastocytosis // Leukemia. Nature Publishing Group, 2019. Vol. 33, № 5. P. 1124-1134.

Tarlock K. et al. Functional Properties of KIT Mutations Are Associated with Differential Clinical Outcomes and Response to Targeted Therapeutics in CBF Acute Myeloid Leukemia // Clin. Cancer Res. American Association for Cancer Research, 2019. Vol. 25, № 16. P. 5038-5048.

Kohl T.M. et al. KIT exon 8 mutations associated with core-binding factor (CBF)-acute myeloid leukemia (AML) cause hyperactivation of the receptor in response to stem cell factor. // Blood. Blood, 2005. Vol. 105, № 8. P. 3319-3321.

Qin Y.-Z. et al. Heterogeneous prognosis among KIT mutation types in adult acute myeloid leukemia patients with t(8;21) // Blood Cancer J. Nature Publishing Group, 2018. Vol. 8, № 8. P. 76.

Ball B.J. et al. RAS Mutations Are Independently Associated with Decreased Overall Survival and Event-Free Survival in Patients with AML Receiving Induction Chemotherapy // Blood. American Society of Hematology, 2019. Vol. 134, № Supplement_1. P. 18-18.

Wang S. et al. Mutational spectrum and prognosis in NRAS-mutated acute myeloid leukemia // Sci. Rep. Nature Publishing Group, 2020. Vol. 10, № 1. P. 12152.

Bacher U. et al. Implications of NRAS mutations in AML: a study of 2502 patients // Blood. American Society of Hematology, 2006. Vol. 107, № 10. P. 3847-3853.

Andersson A.K. et al. IDH1 and IDH2 mutations in pediatric acute leukemia. // Leukemia.

44

45

46

47

48

49

50

51

52

53

54

55

56

57

Leukemia, 2011. Vol. 25, № 10. P. 1570-1577.

Chou W.-C. et al. TET2 mutation is an unfavorable prognostic factor in acute myeloid leukemia patients with intermediate-risk cytogenetics. // Blood. Blood, 2011. Vol. 118, № 14. P. 38033810.

Metzeler K.H. et al. ASXL1 mutations identify a high-risk subgroup of older patients with primary cytogenetically normal AML within the ELN Favorable genetic category. // Blood. Blood, 2011. Vol. 118, № 26. P. 6920-6929.

Fisher C.L. et al. Loss-of-function Additional sex combs like 1 mutations disrupt hematopoiesis but do not cause severe myelodysplasia or leukemia. // Blood. Blood, 2010. Vol. 115, № 1. P. 38-46.

Quivoron C. et al. TET2 inactivation results in pleiotropic hematopoietic abnormalities in mouse and is a recurrent event during human lymphomagenesis. // Cancer Cell. Cancer Cell, 2011. Vol. 20, № 1. P. 25-38.

Abdel-Wahab O., Levine R.L. Mutations in epigenetic modifiers in the pathogenesis and therapy of acute myeloid leukemia. // Blood. Blood, 2013. Vol. 121, № 18. P. 3563-3572.

Yan X.-J. et al. Exome sequencing identifies somatic mutations of DNA methyltransferase gene DNMT3A in acute monocytic leukemia. // Nat. Genet. Nat Genet, 2011. Vol. 43, № 4. P. 309315.

Ley T.J. et al. DNMT3A Mutations in Acute Myeloid Leukemia // N. Engl. J. Med. Massachusetts Medical Society , 2010. Vol. 363, № 25. P. 2424-2433.

Challen G.A. et al. Dnmt3a is essential for hematopoietic stem cell differentiation. // Nat. Genet. Nat Genet, 2011. Vol. 44, № 1. P. 23-31.

Mayle A. et al. Dnmt3a loss predisposes murine hematopoietic stem cells to malignant transformation // Blood. American Society of Hematology, 2015. Vol. 125, № 4. P. 629-638.

Shlush L.I. et al. Identification of pre-leukaemic haematopoietic stem cells in acute leukaemia // Nature. Nature Publishing Group, 2014. Vol. 506, № 7488. P. 328-333.

Dohner H. et al. Diagnosis and management of AML in adults: 2017 ELN recommendations from an international expert panel // Blood. American Society of Hematology, 2017. Vol. 129, № 4. P. 424-447.

Perl A.E. MLL-menin and FLT3 inhibitors team up for AML // Blood. American Society of Hematology, 2020. Vol. 136, № 21. P. 2369-2370.

Mendler J.H. et al. RUNX1 mutations are associated with poor outcome in younger and older patients with cytogenetically normal acute myeloid leukemia and with distinct gene and MicroRNA expression signatures. // J. Clin. Oncol. J Clin Oncol, 2012. Vol. 30, № 25. P. 31093118.

Swiers G., de Bruijn M., Speck N.A. Hematopoietic stem cell emergence in the conceptus and the role of Runx1. // Int. J. Dev. Biol. Int J Dev Biol, 2010. Vol. 54, № 6-7. P. 1151-1163.

58

59

60

61

62

63

64

65

66

67

68

69

70

71

Osato M. Point mutations in the RUNX1/AML1 gene: another actor in RUNX leukemia. // Oncogene. Oncogene, 2004. Vol. 23, № 24. P. 4284-4296.

Gaidzik V.I. et al. RUNX1 mutations in acute myeloid leukemia: results from a comprehensive genetic and clinical analysis from the AML study group. // J. Clin. Oncol. J Clin Oncol, 2011. Vol. 29, № 10. P. 1364-1372.

Tang J.-L. et al. AML1/RUNX1 mutations in 470 adult patients with de novo acute myeloid leukemia: prognostic implication and interaction with other gene alterations. // Blood. Blood, 2009. Vol. 114, № 26. P. 5352-5361.

Schnittger S. et al. RUNX1 mutations are frequent in de novo AML with noncomplex karyotype and confer an unfavorable prognosis. // Blood. Blood, 2011. Vol. 117, № 8. P. 2348-2357.

Greif P.A. et al. RUNX1 mutations in cytogenetically normal acute myeloid leukemia are associated with a poor prognosis and up-regulation of lymphoid genes // Haematologica. 2012. Vol. 97, № 12. P. 1909-1915.

Frohling S. et al. CEBPA mutations in younger adults with acute myeloid leukemia and normal cytogenetics: prognostic relevance and analysis of cooperating mutations. // J. Clin. Oncol. American Society of Clinical Oncology, 2004. Vol. 22, № 4. P. 624-633.

Nerlov C. C/EBPa mutations in acute myeloid leukaemias // Nat. Rev. Cancer. Nature Publishing Group, 2004. Vol. 4, № 5. P. 394-400.

Reinhardt K. et al. High Frequency of GATA1 Mutations in Childhood Non-Down Syndrome Acute Megakaryoblastic Leukemia // Blood. American Society of Hematology, 2012. Vol. 120, № 21. P. 888-888.

Vardiman J.W. et al. The 2008 revision of the World Health Organization (WHO) classification of myeloid neoplasms and acute leukemia: rationale and important changes // Blood. American Society of Hematology, 2009. Vol. 114, № 5. P. 937-951.

Gaidzik V.I. et al. RUNX1 mutations in acute myeloid leukemia are associated with distinct clinico-pathologic and genetic features. // Leukemia. Leukemia, 2016. Vol. 30, № 11. P. 21602168.

Metzeler K.H. et al. Spectrum and prognostic relevance of driver gene mutations in acute myeloid leukemia. // Blood. Blood, 2016. Vol. 128, № 5. P. 686-698.

Pratcorona M. et al. Acquired mutations in ASXL1 in acute myeloid leukemia: prevalence and prognostic value // Haematologica. 2012. Vol. 97, № 3. P. 388-392.

Devillier R. et al. Role of ASXL1 and TP53 mutations in the molecular classification and prognosis of acute myeloid leukemias with myelodysplasia-related changes. // Oncotarget. Oncotarget, 2015. Vol. 6, № 10. P. 8388-8396.

Rucker F.G. et al. TP53 alterations in acute myeloid leukemia with complex karyotype correlate with specific copy number alterations, monosomal karyotype, and dismal outcome. // Blood. Blood, 2012. Vol. 119, № 9. P. 2114-2121.

72. Schlenk R.F. et al. Mutations and treatment outcome in cytogenetically normal acute myeloid leukemia. // N. Engl. J. Med. N Engl J Med, 2008. Vol. 358, № 18. P. 1909-1918.

73. Haferlach C. et al. Mutations of the TP53 gene in acute myeloid leukemia are strongly associated with a complex aberrant karyotype. // Leukemia. Leukemia, 2008. Vol. 22, № 8. P. 1539-1541.

74. Bowen D. et al. TP53 gene mutation is frequent in patients with acute myeloid leukemia and complex karyotype, and is associated with very poor prognosis. // Leukemia. Leukemia, 2009. Vol. 23, № 1. P. 203-206.

75. Gale R.E. et al. The impact of FLT3 internal tandem duplication mutant level, number, size, and interaction with NPM1 mutations in a large cohort of young adult patients with acute myeloid leukemia. // Blood. Blood, 2008. Vol. 111, № 5. P. 2776-2784.

76. Pratcorona M. et al. Favorable outcome of patients with acute myeloid leukemia harboring a low-allelic burden FLT3-ITD mutation and concomitant NPM1 mutation: relevance to post-remission therapy. // Blood. Blood, 2013. Vol. 121, № 14. P. 2734-2738.

77. Schlenk R.F. et al. Differential impact of allelic ratio and insertion site in FLT3-ITD-positive AML with respect to allogeneic transplantation. // Blood. Blood, 2014. Vol. 124, № 23. P. 34413449.

78. Ho A.D. et al. Allogeneic Stem Cell Transplantation Improves Survival in Patients with Acute Myeloid Leukemia Characterized by a High Allelic Ratio of Mutant FLT3-ITD. // Biol. Blood Marrow Transplant. Biol Blood Marrow Transplant, 2016. Vol. 22, № 3. P. 462-469.

79. Heidrich K. et al. Allogeneic hematopoietic cell transplantation in intermediate risk acute myeloid leukemia negative for FLT3-ITD, NPM1- or biallelic CEBPA mutations. // Ann. Oncol. Off. J. Eur. Soc. Med. Oncol. Ann Oncol, 2017. Vol. 28, № 11. P. 2793-2798.

80. Allen C. et al. The importance of relative mutant level for evaluating impact on outcome of KIT, FLT3 and CBL mutations in core-binding factor acute myeloid leukemia. // Leukemia. Leukemia, 2013. Vol. 27, № 9. P. 1891-1901.

81. Jourdan E. et al. Prospective evaluation of gene mutations and minimal residual disease in patients with core binding factor acute myeloid leukemia. // Blood. Blood, 2013. Vol. 121, № 12. P. 22132223.

82. Duployez N. et al. Comprehensive mutational profiling of core binding factor acute myeloid leukemia. // Blood. Blood, 2016. Vol. 127, № 20. P. 2451-2459.

83. Micol J.-B. et al. Frequent ASXL2 mutations in acute myeloid leukemia patients with t(8;21)/RUNX1-RUNX1T1 chromosomal translocations. // Blood. Blood, 2014. Vol. 124, № 9. P. 1445-1449.

84. Krug U. et al. Complete remission and early death after intensive chemotherapy in patients aged 60 years or older with acute myeloid leukaemia: a web-based application for prediction of outcomes. // Lancet (London, England). Lancet, 2010. Vol. 376, № 9757. P. 2000-2008.

85. Kantarjian H. et al. Results of intensive chemotherapy in 998 patients age 65 years or older with acute myeloid leukemia or high-risk myelodysplastic syndrome: predictive prognostic models for

outcome. // Cancer. Cancer, 2006. Vol. 106, № 5. P. 1090-1098.

86. Klepin H.D. Geriatric perspective: how to assess fitness for chemotherapy in acute myeloid leukemia. // Hematol. Am. Soc. Hematol. Educ. Progr. Hematology Am Soc Hematol Educ Program, 2014. Vol. 2014, № 1. P. 8-13.

87. Klepin H.D. et al. Geriatric assessment predicts survival for older adults receiving induction chemotherapy for acute myelogenous leukemia. // Blood. Blood, 2013. Vol. 121, № 21. P. 42874294.

88. Deschler B. et al. Parameters detected by geriatric and quality of life assessment in 195 older patients with myelodysplastic syndromes and acute myeloid leukemia are highly predictive for outcome. // Haematologica. Haematologica, 2013. Vol. 98, № 2. P. 208-216.

89. Giles F.J. et al. The haematopoietic cell transplantation comorbidity index score is predictive of early death and survival in patients over 60 years of age receiving induction therapy for acute myeloid leukaemia. // Br. J. Haematol. Br J Haematol, 2007. Vol. 136, № 4. P. 624-627.

90. Othus M. et al. Declining rates of treatment-related mortality in patients with newly diagnosed AML given "intense" induction regimens: a report from SWOG and MD Anderson. // Leukemia. Leukemia, 2014. Vol. 28, № 2. P. 289-292.

91. Dombret H., Gardin C. An update of current treatments for adult acute myeloid leukemia. // Blood. Blood, 2016. Vol. 127, № 1. P. 53-61.

92. Antar A.I. et al. FLT3 inhibitors in acute myeloid leukemia: ten frequently asked questions // Leukemia. Nature Publishing Group, 2020. Vol. 34, № 3. P. 682-696.

93. Daver N. et al. Targeting FLT3 mutations in AML: review of current knowledge and evidence // Leukemia. Nature Publishing Group, 2019. Vol. 33, № 2. P. 299-312.

94. Hitzler J., Estey E. Gemtuzumab ozogamicin in acute myeloid leukemia: act 2, with perhaps more to come // Haematologica. 2019. Vol. 104, № 1. P. 7-9.

95. Gupta V., Tallman M.S., Weisdorf D.J. Allogeneic hematopoietic cell transplantation for adults with acute myeloid leukemia: myths, controversies, and unknowns // Blood. American Society of Hematology, 2011. Vol. 117, № 8. P. 2307-2318.

96. Byrd J.C. et al. Pretreatment cytogenetic abnormalities are predictive of induction success, cumulative incidence of relapse, and overall survival in adult patients with de novo acute myeloid leukemia: results from Cancer and Leukemia Group B (CALGB 8461). // Blood. Blood, 2002. Vol. 100, № 13. P. 4325-4336.

97. Slovak M.L. et al. Karyotypic analysis predicts outcome of preremission and postremission therapy in adult acute myeloid leukemia: a Southwest Oncology Group/Eastern Cooperative Oncology Group study // Blood. Content Repository Only!, 2000. Vol. 96, № 13. P. 4075-4083.

98. Estey E., Levine R.L., Lowenberg B. Current challenges in clinical development of "targeted therapies": the case of acute myeloid leukemia. // Blood. Blood, 2015. Vol. 125, № 16. P. 2461-2466.

99. Stein E.M., Tallman M.S. Emerging therapeutic drugs for AML // Blood. 2015. Vol. 127, № 1. P. 71-78.

100. Branford S. et al. High frequency of point mutations clustered within the adenosine triphosphate-binding region of BCR/ABL in patients with chronic myeloid leukemia or Ph-positive acute lymphoblastic leukemia who develop imatinib (STI571) resistance. 2002.

101. Marcucci G. et al. Adding KIT Inhibitor Dasatinib (DAS) to Chemotherapy Overcomes the Negative Impact of KIT Mutation/over-Expression in Core Binding Factor (CBF) Acute Myeloid Leukemia (AML): Results from CALGB 10801 (Alliance) // Blood. American Society of Hematology, 2014. Vol. 124, № 21. P. 8-8.

102. Stone R.M. et al. Midostaurin plus Chemotherapy for Acute Myeloid Leukemia with a FLT3 Mutation // N. Engl. J. Med. Massachusetts Medical Society, 2017. Vol. 377, № 5. P. 454-464.

103. Levis M. et al. Results from a randomized trial of salvage chemotherapy followed by lestaurtinib for patients with FLT3 mutant AML in first relapse. // Blood. Blood, 2011. Vol. 117, № 12. P. 3294-3301.

104. Serve H. et al. Sorafenib in combination with intensive chemotherapy in elderly patients with acute myeloid leukemia: results from a randomized, placebo-controlled trial. // J. Clin. Oncol. J Clin Oncol, 2013. Vol. 31, № 25. P. 3110-3118.

105. Rollig C. et al. Addition of sorafenib versus placebo to standard therapy in patients aged 60 years or younger with newly diagnosed acute myeloid leukaemia (SORAML): a multicentre, phase 2, randomised controlled trial. // Lancet. Oncol. Lancet Oncol, 2015. Vol. 16, № 16. P. 1691-1699.

106. Gallipoli P., Giotopoulos G., Huntly B.J.P. Epigenetic regulators as promising therapeutic targets in acute myeloid leukemia. // Ther. Adv. Hematol. Ther Adv Hematol, 2015. Vol. 6, № 3. P. 103119.

107. Fenaux P. et al. Efficacy of azacitidine compared with that of conventional care regimens in the treatment of higher-risk myelodysplastic syndromes: a randomised, open-label, phase III study. // Lancet. Oncol. Lancet Oncol, 2009. Vol. 10, № 3. P. 223-232.

108. Kantarjian H. et al. Decitabine improves patient outcomes in myelodysplastic syndromes: results of a phase III randomized study. // Cancer. Cancer, 2006. Vol. 106, № 8. P. 1794-1803.

109. Lubbert M. et al. Low-dose decitabine versus best supportive care in elderly patients with intermediate- or high-risk myelodysplastic syndrome (MDS) ineligible for intensive chemotherapy: final results of the randomized phase III study of the European Organisation for Research and Treatment of Cancer Leukemia Group and the German MDS Study Group. // J. Clin. Oncol. J Clin Oncol, 2011. Vol. 29, № 15. P. 1987-1996.

110. Gu X. et al. Decitabine- and 5-azacytidine resistance emerges from adaptive responses of the pyrimidine metabolism network // Leukemia. Nature Publishing Group, 2021. Vol. 35, № 4. P. 1023-1036.

111. 0rskov A.D. et al. Hypomethylation and up-regulation of PD-1 in T cells by azacytidine in MDS/AML patients: A rationale for combined targeting of PD-1 and DNA methylation //

112

113

114

115

116

117

118

119

120

121

122

123

124

125

126

Oncotarget. Impact Journals, 2015. Vol. 6, № 11. P. 9612-9626.

Stomper J. et al. Hypomethylating agents (HMA) for the treatment of acute myeloid leukemia and myelodysplastic syndromes: mechanisms of resistance and novel HMA-based therapies. // Leukemia. Leukemia, 2021.

Kantarjian H.M. et al. Multicenter, randomized, open-label, phase III trial of decitabine versus patient choice, with physician advice, of either supportive care or low-dose cytarabine for the treatment of older patients with newly diagnosed acute myeloid leukemia. // J. Clin. Oncol. J Clin Oncol, 2012. Vol. 30, № 21. P. 2670-2677.

Dombret H. et al. International phase 3 study of azacitidine vs conventional care regimens in older patients with newly diagnosed AML with >30% blasts. // Blood. Blood, 2015. Vol. 126, № 3. P. 291-299.

Garcia-Manero G. et al. Guadecitabine (SGI-110) in patients with intermediate or high-risk myelodysplastic syndromes: phase 2 results from a multicentre, open-label, randomised, phase 1/2 trial. // Lancet. Haematol. Elsevier, 2019. Vol. 6, № 6. P. e317-e327.

Issa J.-P.J. et al. Safety and tolerability of guadecitabine (SGI-110) in patients with myelodysplastic syndrome and acute myeloid leukaemia: a multicentre, randomised, dose-escalation phase 1 study. // Lancet. Oncol. Lancet Oncol, 2015. Vol. 16, № 9. P. 1099-1110.

Wang F. et al. Targeted inhibition of mutant IDH2 in leukemia cells induces cellular differentiation. // Science. Science, 2013. Vol. 340, № 6132. P. 622-626.

Berthon C. et al. Bromodomain inhibitor OTX015 in patients with acute leukaemia: a dose-escalation, phase 1 study. // Lancet. Haematol. Lancet Haematol, 2016. Vol. 3, № 4. P. e186-95.

Chen C.-W., Armstrong S.A. Targeting DOT1L and HOX gene expression in MLL-rearranged leukemia and beyond. // Exp. Hematol. Exp Hematol, 2015. Vol. 43, № 8. P. 673-684.

Placke T. et al. Requirement for CDK6 in MLL-rearranged acute myeloid leukemia. // Blood. Blood, 2014. Vol. 124, № 1. P. 13-23.

Dafflon C. et al. Complementary activities of DOT1L and Menin inhibitors in MLL-rearranged leukemia // Leukemia. Nature Publishing Group, 2017. Vol. 31, № 6. P. 1269-1277.

Krivtsov A. V et al. A Menin-MLL Inhibitor Induces Specific Chromatin Changes and Eradicates Disease in Models of MLL-Rearranged Leukemia // Cancer Cell. 2019. Vol. 36. P. 660-673.

Dzama M.M. et al. Synergistic targeting of FLT3 mutations in AML via combined menin-MLL and FLT3 inhibition // Blood. American Society of Hematology, 2020. Vol. 136, № 21. P. 24422456.

Irby R.B., Jiang Y. Tyrosine kinase update: Role and response in cancer therapy // Curr. Cancer Ther. Rev. 2011.

Robinson D.R., Wu Y.M., Lin S.F. The protein tyrosine kinase family of the human genome. // Oncogene. Oncogene, 2000. Vol. 19, № 49. P. 5548-5557.

Blume-Jensen P., Hunter T. Oncogenic kinase signalling. // Nature. Nature, 2001. Vol. 411, №

127

128

129

130

131

132

133

134

135

136

137

138

139

140

141

142

6835. P. 355-365.

Ullrich A., Schlessinger J. Signal transduction by receptors with tyrosine kinase activity. // Cell. Cell, 1990. Vol. 61, № 2. P. 203-212.

Lemmon M.A., Schlessinger J. Cell signaling by receptor tyrosine kinases. // Cell. Elsevier, 2010. Vol. 141, № 7. P. 1117-1134.

Lemmon M.A., Schlessinger J. Cell signaling by receptor tyrosine kinases. // Cell. Elsevier, 2010. Vol. 141, № 7. P. 1117-1134.

Heldin C.H. Dimerization of cell surface receptors in signal transduction. // Cell. Cell, 1995. Vol. 80, № 2. P. 213-223.

Carpenter G. Receptor tyrosine kinase substrates: src homology domains and signal transduction. // FASEB J. FASEB J, 1992. Vol. 6, № 14. P. 3283-3289.

Montor W.R., Salas A.R.O.S.E., Melo F.H.M. de. Receptor tyrosine kinases and downstream pathways as druggable targets for cancer treatment: the current arsenal of inhibitors // Mol. Cancer. BioMed Central, 2018. Vol. 17, № 1. P. 55.

Pires-daSilva A., Sommer R.J. The evolution of signalling pathways in animal development. // Nat. Rev. Genet. Nat Rev Genet, 2003. Vol. 4, № 1. P. 39-49.

Ledda F., Paratcha G. Negative Regulation of Receptor Tyrosine Kinase (RTK) Signaling: A Developing Field. // Biomark. Insights. SAGE Publications, 2007. Vol. 2. P. 45-58.

Haglund K. et al. Multiple monoubiquitination of RTKs is sufficient for their endocytosis and degradation. // Nat. Cell Biol. Nat Cell Biol, 2003. Vol. 5, № 5. P. 461-466.

Jiang G., Hunter T. Receptor signaling: when dimerization is not enough. // Curr. Biol. Curr Biol, 1999. Vol. 9, № 15. P. R568-71.

Binns K.L. et al. Phosphorylation of tyrosine residues in the kinase domain and juxtamembrane region regulates the biological and catalytic activities of Eph receptors. // Mol. Cell. Biol. Mol Cell Biol, 2000. Vol. 20, № 13. P. 4791-4805.

Irusta P.M., DiMaio D. A single amino acid substitution in a WW-like domain of diverse members of the PDGF receptor subfamily of tyrosine kinases causes constitutive receptor activation. // EMBO J. EMBO J, 1998. Vol. 17, № 23. P. 6912-6923.

Hirota S. et al. Gain-of-function mutations of c-kit in human gastrointestinal stromal tumors. // Science. Science, 1998. Vol. 279, № 5350. P. 577-580.

Lennartsson J., Ronnstrand L. The Stem Cell Factor Receptor/c-Kit as a Drug Target in Cancer // Curr. Cancer Drug Targets. 2006. Vol. 6, № 1. P. 65-75.

Meshinchi S. et al. Prevalence and prognostic significance of Flt3 internal tandem duplication in pediatric acute myeloid leukemia. // Blood. Blood, 2001. Vol. 97, № 1. P. 89-94.

Blume-Jensen P., Hunter T. Oncogenic kinase signalling // Nature. Nature Publishing Group, 2001. Vol. 411, № 6835. P. 355-365.

143

144

145

146

147

148

149

150

151

152

153

154

155

156

157

158

159

Futreal P.A. et al. Cancer and genomics. // Nature. Nature, 2001. Vol. 409, № 6822. P. 850-852.

Regad T. Targeting RTK Signaling Pathways in Cancer. // Cancers (Basel). Multidisciplinary Digital Publishing Institute (MDPI), 2015. Vol. 7, № 3. P. 1758-1784.

Besmer P. et al. A new acute transforming feline retrovirus and relationship of its oncogene v-kit with the protein kinase gene family. // Nature. Nature, 1986. Vol. 320, № 6061. P. 415-421.

Parker R.C., Varmus H.E., Bishop J.M. Expression of v-src and chicken c-src in rat cells demonstrates qualitative differences between pp60v-src and pp60c-src. // Cell. Elsevier, 1984. Vol. 37, № 1. P. 131-139.

Stransky N. et al. The landscape of kinase fusions in cancer. // Nat. Commun. Nat Commun, 2014. Vol. 5. P. 4846.

Brennan C.W. et al. The somatic genomic landscape of glioblastoma. // Cell. Cell, 2013. Vol. 155, № 2. P. 462-477.

Wang Y. et al. Recurrent Fusion Genes in Leukemia: An Attractive Target for Diagnosis and Treatment. // Curr. Genomics. Bentham Science Publishers, 2017. Vol. 18, № 5. P. 378-384.

d'Auriol L. et al. Localization of the human c-kit protooncogene on the q11-q12 region of chromosome 4. // Hum. Genet. Hum Genet, 1988. Vol. 78, № 4. P. 374-376.

Yoshihara H. et al. Thrombopoietin/MPL Signaling Regulates Hematopoietic Stem Cell Quiescence and Interaction with the Osteoblastic Niche // Cell Stem Cell. Cell Press, 2007. Vol. 1, № 6. P. 685-697.

Lennartsson J., Rönnstrand L. Stem cell factor receptor/c-Kit: from basic science to clinical implications. // Physiol. Rev. Physiol Rev, 2012. Vol. 92, № 4. P. 1619-1649.

Voytyuk O. et al. Src family kinases are involved in the differential signaling from two splice forms of c-Kit // J. Biol. Chem. 2003.

Young S.M. et al. Early myeloid cells expressing c-KIT isoforms differ in signal transduction, survival and chemotactic responses to Stem Cell Factor // Cell. Signal. 2007.

Lebedev T.D. et al. Two receptors, two isoforms, two cancers: Comprehensive analysis of kit and trka expression in neuroblastoma and acute myeloid leukemia // Front. Oncol. 2019. Vol. 9, № OCT.

Chan E.C. et al. KIT GNNK splice variants: Expression in systemic mastocytosis and influence on the activating potential of the D816V mutation in mast cells // Exp. Hematol. 2013.

Crosier P.S. et al. Expression of isoforms of the human receptor tyrosine kinase c-kit in leukemic cell lines and acute myeloid leukemia. // Blood. 1993.

Zhu W.M., Dong W.F., Minden M. Alternate splicing creates two forms of the human kit protein. // Leuk. Lymphoma. Leuk Lymphoma, 1994. Vol. 12, № 5-6. P. 441-447.

Reith A.D. et al. Signal transduction by normal isoforms and W mutant variants of the Kit receptor tyrosine kinase. // EMBO J. John Wiley & Sons, Ltd, 1991. Vol. 10, № 9. P. 2451-2459.

160

161

162

163

164

165

166

167

168

169

170

171

172

173

Guerrini F. et al. Molecular detection of GNNK- and GNNK+ c-kit isoforms: a new tool for risk stratification in adult acute myeloid leukaemia. // Leukemia. Leukemia, 2007. Vol. 21, № 9. P. 2056-2058.

Piao X. et al. Expression of the Kit and KitA Receptor Isoforms in Human Acute Myelogenous Leukemia // Blood. Content Repository Only!, 1994. Vol. 83, № 2. P. 476-481.

Pedersen M., Ronnstrand L., Sun J. The c-Kit/D816V mutation eliminates the differences in signal transduction and biological responses between two isoforms of c-Kit. // Cell. Signal. Cell Signal, 2009. Vol. 21, № 3. P. 413-418.

Molderings G.J. et al. Multiple novel alterations in Kit tyrosine kinase in patients with gastrointestinally pronounced systemic mast cell activation disorder. // Scand. J. Gastroenterol. Scand J Gastroenterol, 2007. Vol. 42, № 9. P. 1045-1053.

Caruana G., Cambareri A.C., Ashman L.K. Isoforms of c-KIT differ in activation of signalling pathways and transformation of NIH3T3 fibroblasts // Oncogene. 1999.

Sun J., Pedersen M., Ronnstrand L. Gab2 is involved in differential phosphoinositide 3-kinase signaling by two splice forms of c-Kit. // J. Biol. Chem. J Biol Chem, 2008. Vol. 283, № 41. P. 27444-27451.

Rossi P. et al. A novel c-kit transcript, potentially encoding a truncated receptor, originates within a kit gene intron in mouse spermatids. // Dev. Biol. Dev Biol, 1992. Vol. 152, № 1. P. 203-207.

Paronetto M.P. et al. Expression of a truncated form of the c-Kit tyrosine kinase receptor and activation of Src kinase in human prostatic cancer. // Am. J. Pathol. Am J Pathol, 2004. Vol. 164, № 4. P. 1243-1251.

Ashman L.K. The biology of stem cell factor and its receptor C-kit. // Int. J. Biochem. Cell Biol. Int J Biochem Cell Biol, 1999. Vol. 31, № 10. P. 1037-1051.

Besmer P. The kit ligand encoded at the murine Steel locus: a pleiotropic growth and differentiation factor. // Curr. Opin. Cell Biol. Curr Opin Cell Biol, 1991. Vol. 3, № 6. P. 939946.

Toffalini F., Demoulin J., Dc W. New insights into the mechanisms of hematopoietic cell transformation by activated receptor tyrosine kinases Review article New insights into the mechanisms of hematopoietic cell transformation by activated receptor tyrosine kinases. 2013. Vol. 116, № 14. P. 2429-2437.

Kozlowski M. et al. SHP-1 binds and negatively modulates the c-Kit receptor by interaction with tyrosine 569 in the c-Kit juxtamembrane domain. // Mol. Cell. Biol. Mol Cell Biol, 1998. Vol. 18, № 4. P. 2089-2099.

Lennartsson J. et al. Phosphorylation of Shc by Src family kinases is necessary for stem cell factor receptor/c-kit mediated activation of the Ras/MAP kinase pathway and c-fos induction. // Oncogene. Oncogene, 1999. Vol. 18, № 40. P. 5546-5553.

Hubbard S.R., Mohammadi M., Schlessinger J. Autoregulatory mechanisms in protein-tyrosine kinases. // J. Biol. Chem. J Biol Chem, 1998. Vol. 273, № 20. P. 11987-11990.

174. Kim H.-J. et al. KIT D816 mutation associates with adverse outcomes in core binding factor acute myeloid leukemia, especially in the subgroup with RUNX1/RUNX1T1 rearrangement // Ann. Hematol. Springer, 2013. Vol. 92, № 2. P. 163-171.

175. Paschka P. et al. Adverse prognostic significance of KIT mutations in adult acute myeloid leukemia with inv(16) and t(8;21): a Cancer and Leukemia Group B Study. // J. Clin. Oncol. American Society of Clinical Oncology, 2006. Vol. 24, № 24. P. 3904-3911.

176. Jang W. et al. Significance of KIT exon 17 mutation depends on mutant level rather than positivity in core-binding factor acute myeloid leukemia. // Blood Cancer J. Blood Cancer J, 2016. Vol. 6, № 1. P. e387.

177. Care R.S. et al. Incidence and prognosis of c-KIT and FLT3 mutations in core binding factor (CBF) acute myeloid leukaemias. // Br. J. Haematol. Br J Haematol, 2003. Vol. 121, № 5. P. 775777.

178. Boissel N. et al. Incidence and prognostic impact of c-Kit, FLT3, and Ras gene mutations in core binding factor acute myeloid leukemia (CBF-AML). // Leukemia. Leukemia, 2006. Vol. 20, № 6. P. 965-970.

179. Nanri T. et al. Mutations in the receptor tyrosine kinase pathway are associated with clinical outcome in patients with acute myeloblastic leukemia harboring t(8;21)(q22;q22). // Leukemia. Leukemia, 2005. Vol. 19, № 8. P. 1361-1366.

180. Cairoli R. et al. Prognostic impact of c-KIT mutations in core binding factor leukemias: an Italian retrospective study // Blood. American Society of Hematology, 2006. Vol. 107, № 9. P. 34633468.

181. Schnittger S. et al. KIT-D816 mutations in AML1-ETO-positive AML are associated with impaired event-free and overall survival. // Blood. Blood, 2006. Vol. 107, № 5. P. 1791-1799.

182. Riera L. et al. Core binding factor acute myeloid leukaemia and c-KIT mutations. // Oncol. Rep. Oncol Rep, 2013. Vol. 29, № 5. P. 1867-1872.

183. Link D.C. Molecular genetics of AML // Best Practice and Research: Clinical Haematology. 2012. Vol. 25, № 4. P. 409-414.

184. Spradling A., Drummond-Barbosa D., Kai T. Stem cells find their niche // Nature. 2001. Vol. 414, № 6859. P. 98-104.

185. Tabe Y., Konopleva M. Advances in understanding the leukaemia microenvironment // Br. J. Haematol. 2014. Vol. 164, № 6. P. 767-778.

186. Yamamoto K. et al. Characterization of the promoter region of the human c-kit proto-oncogene. // Jpn. J. Cancer Res. Jpn J Cancer Res, 1993. Vol. 84, № 11. P. 1136-1144.

187. Maeda K. et al. GATA2 and Sp1 positively regulate the c-kit promoter in mast cells. // J. Immunol. J Immunol, 2010. Vol. 185, № 7. P. 4252-4260.

188. Lee Y.-N. et al. KIT signaling regulates MITF expression through miRNAs in normal and malignant mast cell proliferation. // Blood. Blood, 2011. Vol. 117, № 13. P. 3629-3640.

189

190

191

192

193

194

195

196

197

198

199

200

201

202

203

Gao X. et al. MicroRNA-193b regulates c-Kit proto-oncogene and represses cell proliferation in acute myeloid leukemia. // Leuk. Res. Leuk Res, 2011. Vol. 35, № 9. P. 1226-1232.

Igoucheva O., Alexeev V. MicroRNA-dependent regulation of cKit in cutaneous melanoma. // Biochem. Biophys. Res. Commun. Biochem Biophys Res Commun, 2009. Vol. 379, № 3. P. 790794.

Felli N. et al. MicroRNAs 221 and 222 inhibit normal erythropoiesis and erythroleukemic cell growth via kit receptor down-modulation. // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. Proc Natl Acad Sci U S A, 2005. Vol. 102, № 50. P. 18081-18086.

Koelz M. et al. Down-regulation of miR-221 and miR-222 correlates with pronounced Kit expression in gastrointestinal stromal tumors. // Int. J. Oncol. Int J Oncol, 2011. Vol. 38, № 2. P. 503-511.

Huang S. et al. Loss of AP-2 results in downregulation of c-KIT and enhancement of melanoma tumorigenicity and metastasis. // EMBO J. EMBO J, 1998. Vol. 17, № 15. P. 4358-4369.

Birg F. et al. The expression of FMS, KIT and FLT3 in hematopoietic malignancies. // Leuk. Lymphoma. 1994. Vol. 13, № 3-4. P. 223-227.

Rosnet O. et al. Human FLT3/FLK2 receptor tyrosine kinase is expressed at the surface of normal and malignant hematopoietic cells. // Leukemia. 1996. Vol. 10, № 2. P. 238-248.

Kennedy V.E., Smith C.C. FLT3 Mutations in Acute Myeloid Leukemia: Key Concepts and Emerging Controversies // Front. Oncol. Frontiers, 2020. Vol. 10. P. 2927.

Naoe T., Kiyoi H. Normal and oncogenic FLT3. // Cell. Mol. Life Sci. Cell Mol Life Sci, 2004. Vol. 61, № 23. P. 2932-2938.

Gilliland D.G., Griffin J.D. The roles of FLT3 in hematopoiesis and leukemia. // Blood. Blood, 2002. Vol. 100, № 5. P. 1532-1542.

Schnittger S. et al. Diversity of the juxtamembrane and TKD1 mutations (exons 13-15) in the FLT3 gene with regards to mutant load, sequence, length, localization, and correlation with biological data. // Genes. Chromosomes Cancer. Genes Chromosomes Cancer, 2012. Vol. 51, № 10. P. 910-924.

Yanada M. et al. Prognostic significance of FLT3 internal tandem duplication and tyrosine kinase domain mutations for acute myeloid leukemia: a meta-analysis // Leukemia. Nature Publishing Group, 2005. Vol. 19, № 8. P. 1345-1349.

Mead A.J. et al. FLT3 tyrosine kinase domain mutations are biologically distinct from and have a significantly more favorable prognosis than FLT3 internal tandem duplications in patients with acute myeloid leukemia. // Blood. Blood, 2007. Vol. 110, № 4. P. 1262-1270.

Bacher U. et al. Prognostic relevance of FLT3-TKD mutations in AML: the combination matters--an analysis of 3082 patients. // Blood. Blood, 2008. Vol. 111, № 5. P. 2527-2537.

Matsuno N. et al. Dual mutations in the AML1 and FLT3 genes are associated with leukemogenesis in acute myeloblastic leukemia of the M0 subtype. // Leukemia. Leukemia, 2003.

204

205

206

207

208

209

210

211

212

213

214

215

216

217

218

Vol. 17, № 12. P. 2492-2499.

Schessl C. et al. The AML1-ETO fusion gene and the FLT3 length mutation collaborate in inducing acute leukemia in mice. // J. Clin. Invest. J Clin Invest, 2005. Vol. 115, № 8. P. 21592168.

Huang Y. et al. Identification and characterization of Hoxa9 binding sites in hematopoietic cells. // Blood. The American Society of Hematology, 2012. Vol. 119, № 2. P. 388-398.

Wang G.G., Pasillas M.P., Kamps M.P. Meis1 programs transcription of FLT3 and cancer stem cell character, using a mechanism that requires interaction with Pbx and a novel function of the Meis1 C-terminus. // Blood. Blood, 2005. Vol. 106, № 1. P. 254-264.

Volpe G. et al. C/EBPa and MYB regulate FLT3 expression in AML. // Leukemia. Leukemia, 2013. Vol. 27, № 7. P. 1487-1496.

Sportoletti P. et al. GATA1 epigenetic deregulation contributes to the development of AML with NPM1 and FLT3-ITD cooperating mutations // Leukemia. Nature Publishing Group, 2019. Vol. 33, № 7. P. 1827-1832.

Jun J.E., Rubio I., Roose J.P. Regulation of Ras exchange factors and cellular localization of Ras activation by lipid messengers in T cells // Front. Immunol. 2013. Vol. 4, № SEP. P. 13-15.

De S. et al. EGF receptor uses SOS1 to drive constitutive activation of NFkB in cancer cells.

Obata Y. et al. Oncogenic signaling by Kit tyrosine kinase occurs selectively on the Golgi apparatus in gastrointestinal stromal tumors. // Oncogene. Oncogene, 2017. Vol. 36, № 26. P. 3661-3672.

Guo Y. et al. ERK/MAPK signalling pathway and tumorigenesis (Review) // Exp. Ther. Med. Spandidos Publications, 2020. Vol. 19, № 3. P. 1997-2007.

Hoxhaj G., Manning B.D. The PI3K-AKT network at the interface of oncogenic signalling and cancer metabolism // Nat. Rev. Cancer. Nature Publishing Group, 2020. Vol. 20, № 2. P. 74-88.

Heiss E. et al. Identification of Y589 and Y599 in the juxtamembrane domain of Flt3 as ligand-induced autophosphorylation sites involved in binding of Src family kinases and the protein tyrosine phosphatase SHP2 // Blood. Content Repository Only!, 2006. Vol. 108, № 5. P. 15421550.

Okamoto M. et al. Lyn is an important component of the signal transduction pathway specific to FLT3/ITD and can be a therapeutic target in the treatment of AML with FLT3/ITD // Leukemia. Nature Publishing Group, 2007. Vol. 21, № 3. P. 403-410.

Robinson L.J., Xue J., Corey S.J. Src family tyrosine kinases are activated by Flt3 and are involved in the proliferative effects of leukemia-associated Flt3 mutations // Exp. Hematol. Elsevier, 2005. Vol. 33, № 4. P. 469-479.

Elias D., Ditzel H.J. Fyn is an important molecule in cancer pathogenesis and drug resistance // Pharmacol. Res. Academic Press, 2015. Vol. 100. P. 250-254.

Kazi J.U., Ronnstrand L. The role of SRC family kinases in FLT3 signaling. // Int. J. Biochem.

219

220

221

222

223

224

225

226

227

228

229

230

231

232

233

Cell Biol. Int J Biochem Cell Biol, 2019. Vol. 107. P. 32-37.

Alarcón B., van Santen H.M. Two receptors, two kinases, and T cell lineage determination. // Sci. Signal. Science Signaling, 2010. Vol. 3, № 114. P. pe11.

Chougule R.A. et al. FYN expression potentiates FLT3-ITD induced STAT5 signaling in acute myeloid leukemia // Oncotarget. Impact Journals, 2016. Vol. 7, № 9. P. 9964-9974.

Weir M.C. et al. Selective Inhibition of the Myeloid Src-Family Kinase Fgr Potently Suppresses AML Cell Growth in Vitro and in Vivo. // ACS Chem. Biol. NIH Public Access, 2018. Vol. 13, № 6. P. 1551-1559.

Linnekin D., DeBerry C.S., Mou S. Lyn associates with the juxtamembrane region of c-Kit and is activated by stem cell factor in hematopoietic cell lines and normal progenitor cells. // J. Biol. Chem. J Biol Chem, 1997. Vol. 272, № 43. P. 27450-27455.

Chaix A. et al. Mechanisms of STAT protein activation by oncogenic KIT mutants in neoplastic mast cells. // J. Biol. Chem. J Biol Chem, 2011. Vol. 286, № 8. P. 5956-5966.

Omori I. et al. D816V mutation in the KIT gene activation loop has greater cell-proliferative and anti-apoptotic ability than N822K mutation in core-binding factor acute myeloid leukemia // Exp. Hematol. Elsevier, 2017. Vol. 52. P. 56-64.e4.

Schofield R. The relationship between the spleen colony-forming cell and the haemopoietic stem cell. // Blood Cells. 1978. Vol. 4, № 1-2. P. 7-25.

Ugarte F., Forsberg E.C. Haematopoietic stem cell niches: new insights inspire new questions // EMBO J. John Wiley & Sons, Ltd, 2013. Vol. 32, № 19. P. 2535-2547.

Zhou H.-S., Carter B.Z., Andreeff M. Bone marrow niche-mediated survival of leukemia stem cells in acute myeloid leukemia: Yin and Yang. // Cancer Biol. Med. Chinese Anti-Cancer Association, 2016. Vol. 13, № 2. P. 248-259.

Konopleva M. et al. Therapeutic targeting of microenvironmental interactions in leukemia: mechanisms and approaches. // Drug Resist. Updat. Drug Resist Updat, 2009. Vol. 12, № 4-5. P. 103-113.

Zeng Z. et al. Targeting the leukemia microenvironment by CXCR4 inhibition overcomes resistance to kinase inhibitors and chemotherapy in AML. // Blood. Blood, 2009. Vol. 113, № 24. P. 6215-6224.

Theocharides A.P.A. et al. Humanized hemato-lymphoid system mice. // Haematologica. Haematologica, 2016. Vol. 101, № 1. P. 5-19.

Krevvata M. et al. Cytokines increase engraftment of human acute myeloid leukemia cells in immunocompromised mice but not engraftment of human myelodysplastic syndrome cells. // Haematologica. Haematologica, 2018. Vol. 103, № 6. P. 959-971.

Nomdedeu M. et al. Treatment with G-CSF reduces acute myeloid leukemia blast viability in the presence of bone marrow stroma. // Cancer Cell Int. Cancer Cell Int, 2015. Vol. 15. P. 122.

Stiehl T., Ho A.D., Marciniak-Czochra A. Mathematical modeling of the impact of cytokine

response of acute myeloid leukemia cells on patient prognosis // Sci. Rep. Nature Publishing Group, 2018. Vol. 8, № 1. P. 2809.

234. Russell N.H. et al. Biological features of leukaemic cells associated with autonomous growth and reduced survival in acute myeloblastic leukaemia. // Leuk. Lymphoma. 1995. Vol. 16, № 3-4. P. 223-229.

235. Yan Y. et al. Autonomous growth potential of leukemia blast cells is associated with poor prognosis in human acute leukemias. // J. Hematol. Oncol. 2009. Vol. 2, № 1. P. 51.

236. Lowenberg B. et al. Autonomous proliferation of leukemic cells in vitro as a determinant of prognosis in adult acute myeloid leukemia. // N. Engl. J. Med. N Engl J Med, 1993. Vol. 328, № 9. P. 614-619.

237. Berer A. et al. Relation of in vitro growth characteristics to cytogenetics and treatment outcome in acute myeloid leukemia: prognostic significance in patients with a normal karyotype. // Int. J. Hematol. 2003. Vol. 78, № 3. P. 241-247.

238. Rowe J.M., Liesveld J.L. Hematopoietic growth factors in acute leukemia. // Leukemia. Leukemia, 1997. Vol. 11, № 3. P. 328-341.

239. Terpstra W., Lowenberg B. Application of myeloid growth factors in the treatment of acute myeloid leukemia. // Leukemia. Leukemia, 1997. Vol. 11, № 3. P. 315-327.

240. Becker P.S. Growth factor priming in therapy of acute myelogenous leukemia. // Curr. Hematol. Rep. 2004. Vol. 3, № 6. P. 413-418.