Способы культивирования, штаммовое разнообразие, антибиотическое и противоопухолевое действие базидиального гриба Lentinus edodes (Berk.) Sing. тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.12, кандидат биологических наук Соболева, Наталья Юрьевна

• Соболева, Наталья Юрьевна
• кандидат биологических наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Соболева, Наталья Юрьевна

Введение.

Глава I. Обзор литературы.

1. Таксономическое положение и систематика.

2. История применения L. edodes.

3. Морфологические признаки мицелия и базидиом L. edodes.

4. Ареал и биология.

5. Методы и условия культивирования.

5.1 Выделение и хранение культуры.

5.2 Выращивание на плотных средах.

5.3 Погруженное культивирование.

5.4 Получение плодовых тел.

6. Питательная ценность, химический состав L. edodes и химическая природа его биологически активных компонентов.

7. Биологическая активность L. edodes.

7.1 Антибактериальное и антифунгальное действие.

7.2 Противоопухолевое и иммуномодулирующее действие.

7.3 Противовирусное действие.

7.4 Гиполипидемическое действие.

7.5 Гипогликемическое действие.

7.6 Действие на сердечно-сосудистую систему.

7.7 Гепатопротекторное действие.

7.8 Противовоспалительное действие.

7.9 Другие биологические свойства L. edodes.

8. Токсичность.

9. Формы препаратов и дозировки.

Глава II. Материалы и методы.

1. Объекты исследования.

2. Хранение культур L. edodes.

3. Культивирование на плотных средах.

4. Изучение морфолого-физиологических признаков штаммов L. edodes.

5. Погруженное культивирование L. edodes.

6. Оптимизация состава среды для погруженного культивирования L. edodes.

7. Получение плодовых тел.

8. Морфометрия плодовых тел L. edodes.

9. Изучение антибиотического действия штаммов L. edodes.

10. Разделение экстрактов и идентификация антибиотических соединений.

11. Определение гиполипидемической активности.

12. Получение водных экстрактов и их фракций из мицелия L. edodes.

13. Определение содержания полисахаридов в водных экстрактах мицелия и плодовых тел штаммов L. edodes.

14. Определение моносахаридного состава полисахаридных фракций.

15. Изучение противоопухолевого действия L. edodes.

Глава III. Результаты и обсуждение.

1. Морфолого-физиологическое изучение штаммов L. edodes.

1.1 Макроморфология штаммов L. edodes на плотных средах.

1.2 Микроморфология мицелия штаммов L. edodes.

1.3 Получение плодовых тел штаммов L. edodes и их макроморфология.

2. Отбор штаммов L. edodes с высоким выходом погруженной биомассы, антибиотической и противоопухолевой активностью.

2.1 Схема отбора штаммов L. edodes с высоким выходом погруженной биомассы и антибиотической активностью.

2.2 Изучение антибиотической активности штаммов L. edodes.

2.3 Выделение и идентификация биологически активных веществ штаммов L. edodes.

2.4 Накопление погруженной биомассы и содержание водорастворимых полисахаридов в мицелии и плодовых телах штаммов L. edodes, противоопухолевые свойства водных экстрактов мицелия.

2.4.1 Изучение характера накопления и выхода погруженной биомассы L. edodes.

2.4.2 Содержание водорастворимых полисахаридов в мицелии и плодовых телах штаммов L. edodes.

2.4.3 Противоопухолевые свойства погруженного мицелия штамма 15 L. edodes.

2.5 Разаработка метода погруженного культивирования Ь. е(1ос1е$.

2.5.1 Зависимость накопления биомассы Ь. ес1ос1е$ от интенсивности аэрации.

2.5.2 Зависимость накопления биомассы Ь. еЛснЗея от качества и количества посевного материала.

2.5.3 Разработка состава жидкой питательной среды для культивирования штамма 15 Ь. edod.es и изучение зависимости накопления биомассы от состава ферментационных сред.

2.5.3.1 Качественный отбор источников питания.

2.5.3.2 Оптимизация количественного состава жидкой питательной среды методами математического планирования эксперимента.

2.5.4 Изучение длительности процесса погруженного культивирования.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Способы культивирования, штаммовое разнообразие, антибиотическое и противоопухолевое действие базидиального гриба Lentinus edodes (Berk.) Sing.»

Актуальность темы. В настоящее время ведутся активные поиски биологически активных соединений базидиомицетов. Lentinus edodes (Berk.) Sing. [син. Lentinula edodes (Berk.) Pegler] - пилолистник съедобный, сиитаке или шиитаке, один из наиболее известных съедобных базидиальных грибов, используемый в лечебных целях с давнего времени. Интенсивные исследования последних десятилетий привели к выявлению биологически активных метаболитов L. edodes, обладающих иммуномодулирующими, противоопухолевыми, гиполипидемическими, гипогликемическими, противовирусными и др. свойствами (Chihara et al, 1969; Chibata et al, 1969; Kamiya et al, 1969; Chihara, 1970; Kaneko et al., 1989; Breene, 1990; Jong, Birmingham, 1993; Komemushi et al., 1995; Wasser et al, 1997; Hatvani, 2001; Ishikawa et al, 2001; Rowan et al., 2003; Hassegawa et al., 2005; Lo etal, 2007; Wu, Hansen, 2008). Изучению антибиотической активности L. edodes посвящено значительно меньше работ. В то же время известно, что по сравнению с другими видами базидиомицетов L. edodes проявляет более выраженные антибиотические свойства (Краснопольская и др., 1997).

Погруженное культивирование, по сравнению с другими методами выращивания базидиомицетов, представляет собой наиболее целесообразный способ получения их биологически активных метаболитов. Современные способы культивирования базидиомицетов, разработанные для конкретных штаммов, предусматривают проведение процессов выращивания в строго контролируемых стерильных условиях, обеспечивающих стабильность химического состава получаемой продукции и воспроизводимость биологических эффектов. На сегодня существует значительный разрыв между исследованием биологической активности и изучением штаммового разнообразия L. edodes. Наличие у L. edodes широкого спектра биологической активности позволяет предположить существование штаммов, являющихся активными продуцентами не одного, а двух или более хозяйственно ценных метаболитов, различающихся направленностью и механизмом своего действия и накапливающих целевые соединения, как в биомассе, так и в культуральной жидкости. Выявление таких штаммов и использование их в биотехнологии приведет к повышению эффективности и конкурентоспособности способов получения биологически активных метаболитов. Скрининг штаммов L. edodes с широким спектром биологической активности и высокой продуктивностью является составной частью исследования штаммового разнообразия этого вида, в которое также должно входить изучение морфологических, физиологических и морфометрических особенностей штаммов L. edodes.

Цель и задачи исследования. Цель исследования состояла в комплексном изучении штаммового разнообразия L. edodes на вегетативной и генеративной стадиях, в проведении отбора штаммов L. edodes, сочетающих высокую антибиотическую активность с противоопухолевыми свойствами, и разработку способа погруженного культивирования наиболее перспективного штамма.

В работе были поставлены следующие задачи:

1. Изучение морфолого-физиологических характеристик штаммов L. edodes при росте на плотных питательных средах.

2. Изучение микроморфологических признаков штаммов L. edodes при росте на плотных питательных средах и при погруженном культивировании.

3. Получение и морфометрическое изучение плодовых тел штаммов L. edodes.

4. Изучение антибиотического действия штаммов L. edodes, выделение и идентификация действующих веществ.

5. Изучение процессов погруженного культивирования штаммов L. edodes, накопления биомассы и содержания эндополисахаридов.

6. Отбор штаммов, сочетающих высокую антибиотическую активность с интенсивным накоплением биомассы и эндополисахаридов в условиях погруженной культуры.

7. Выявление противоопухолевого действия отобранного штамма L. edodes в опытах in vivo.

8. Разработка способа погруженного культивирования отобранного штамма L. edodes, включая оптимизацию состава ферментационной среды методами математического планирования.

Научная новизна. В результате проведенного исследования описаны морфолого-физиологические характеристики 15 штаммов L. edodes. Составлены морфологические описания колоний изученных штаммов при росте на четырех плотных питательных средах различного состава. Предложен новый метод определения интенсивности развития мицелия L. edodes, основанный на определении отношения массы сухого мицелия к единице площади колонии. Разработан новый экспресс-метод для сравнительной оценки длительности процессов погруженного культивирования штаммов L. edodes.

Изученные штаммы были разделены на две группы по форме шляпки: одни -образовывали базидиомы с конусообразной формой шляпки, другие - с распростертой.

Показано, что антибиотические свойства L. edodes более ярко выражены на вегетативной стадии развития, чем на генеративной. Штаммы различаются по спектру антибиотического действия и степени активности. В качестве основного компонента антибиотического комплекса L. edodes идентифицирован лентинамицин В. Впервые показана антибиотическая активность в отношении грибов-дерматофитов. Выявлены штаммы, способные к образованию эритаденина.

Выявлены штаммы, обеспечивающие высокий выход эндополисахаридов в условиях погруженной культуры. Показано противоопухолевое действие порошка воздушно-сухой биомассы, водного экстракта мицелия и суммарной фракции водорастворимых полисахаридов мицелия штамма 15 L. edodes при пероральном введении. Сочетание экстракта мицелия L. edodes и циклофосфамида в низкой терапевтической дозе 50 мг/кг, угнетающей супрессоры, резко усиливало противоопухолевый эффект.

Отобран штамм L. edodes, сочетающий высокую антибиотическую активность с противоопухолевыми свойствами. При этом антибиотически активные метаболиты накапливаются преимущественно в культуральной жидкости, а противоопухолевые полисахариды входят в состав клеточной стенки погруженного мицелия.

Показано штаммовое разнообразие L. edodes и предложена система скрининга штаммов L. edodes, обладающих высоким выходом биомассы и выраженными антибиотическими и противоопухолевыми свойствами.

Обнаружен штамм L. edodes, способный накапливать до 42 % липидов в погруженном мицелии.

Практическая значимость. На основании результатов изучения штаммового разнообразия L. edodes разработана «Методика проведения испытаний на отличимость, однородность и стабильность (ООС) Шиитаке (пилолистник съедобный) (Lentinus edodes (Berk.) Sing.)» RTG/1078/1 № 12-06/21, утвержденная ФГУ «Государственной комиссией Российской Федерации по испытанию и охране селекционных достижений» 21.09.2009 г. Для проведения исследований штаммового разнообразия на вегетативной стадии развития L. edodes рекомендована среда Чапека-Докса с добавлением дрожжевого экстракта (Serva), обеспечивающая проявление специфических морфологических черт отдельных штаммов L. edodes.

Выявлены штаммы L. edodes с высокой антибиотической активностью в отношении грамположительных и грамотрицательных бактерий, дрожжей, мицелиальных грибов, в том числе грибов-дерматофитов. Антибиотик лентинамицин В получен в хроматографически чистом виде.

Отобраны штаммы, сочетающие выраженное антибиотическое действие и высокий выход эндополисахаридов, из числа которых штамм 15 оказался одним из наиболее перспективных.

Разработан биотехнологический метод погруженного культивирования отобранного штамма 15, обеспечивающий двукратное увеличение выхода биомассы (до 18-20 г/л) по сравнению с исходным уровнем на 6 сутки. Метод апробирован в условиях биореактора геометрическим объемом 0,5 м3.

В результате опытов получены экспериментальные образцы суммарной фракции водорастворимых полисахаридов погруженного мицелия штамма 15 L. edodes, проявившие противоопухолевую активность в экспериментах in vivo в отношении Т-лимфомы EL-4 и лимфомы Р388.

Получен патент РФ № 5091 на штамм Lentinus edodes (Berk.) Sing. Шиитаке 15 и подана заявка на патент РФ на способ получения средства, обладающего противоопухолевой активностью, регистрационный № 2009148354.

Апробация работы. Результаты исследования были доложены на конференции молодых ученых ГУ НИИНА им. Г.Ф. Гаузе РАМН (Москва, 2004), на 7-й школе-конференции молодых ученых «Биология - наука XXI века» (Пущино, 2003), на втором Всероссийском конгрессе по медицинской микологии (Москва, 2004). Материалы работы были представлены на первом, втором, третьем, четвертом и пятом Всероссийских конгрессах по медицинской микологии (Москва, 2003, 2004, 2005, 2006, 2007), на первой и второй Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Окружающая среда и здоровье» (Суздаль, 2005; Рязань, 2007).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 13 работ, в том числе 2 статьи в журналах, рекомендованных ВАК.

Объем и структура работы. Диссертационная работа изложена на 137 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, главы, посвященной материалам и методам исследования, главы «Результаты и обсуждение», заключения, выводов, списка литературы, включающего 232 источника, из них 188 - зарубежных, двух приложений. Работа содержит 32 рисунка и 27 таблиц.

Заключение диссертации по теме «Микология», Соболева, Наталья Юрьевна

выводы

1. При выращивании 15 штаммов L. edodes на 4 плотных средах установлены 4 типа текстур колоний, наибольшая частота встречаемости отмечена у ворсистой и войлочной. Штаммы различались по наличию концентрических зон, радиальной исчерченности, интенсивности развития воздушного мицелия, скорости линейного роста. Проявлению наибольшего разнообразия морфологических признаков колоний способствовало выращивание на картофельно-глюкозном агаре. Предложен количественный метод определения интенсивности развития мицелия на плотных средах.

2. На гифах воздушного и погруженного мицелия 15 штаммов L. edodes выявлены интеркалярные хламидоспоры, формирующиеся по мере старения культуры.

3. По форме шляпки - конусообразной или распростертой базидиомы штаммов L. edodes разделены на две группы. Базидиомы разных групп различаются также по отношению массы шляпок к массе ножек, которое выше у базидиом с распростертой формой шляпки.

4. Экстракты культуральной жидкости и погруженного мицелия штаммов L. edodes проявили антибиотическое действие в отношении грамположительных и грамотрицательных бактерий, дрожжей, мицелиальных грибов. Антибиотическая активность носила штаммоспецифичный характер. Погруженная культура штаммов L. edodes обладала более высокой антибиотической активностью по сравнению с их плодовыми телами. Впервые показана способность антибиотического комплекса L. edodes подавлять рост грибов-дерматофитов М. canis, Т. mentagrophytes v. gypseum, Scopulariopsis sp. В качестве основного метаболита L. edodes, отвечающего за антибиотические свойства, был идентифицирован лентинамицин В.

5. Выход воздушно-сухой биомассы изученных штаммов L. edodes на 7-ые сутки погруженного культивирования варьировал от 4,2 до 14,2 г/л. С использованием предложенного экспресс-метода оценки длительности периодического процесса погруженного культивирования штаммы L. edodes разделены на быстрорастущие, медленнорастущие и штаммы с промежуточными значениями скорости роста.

6. На основании сопоставления совокупности полученных результатов отобраны шесть штаммов L. edodes, сочетающие высокую антибиотическую активность с интенсивным накоплением биомассы. Из них наиболее высокий выход водорастворимых эндополисахаридов и их наибольшее содержание в мицелии были выявлены у штамма 15.

7. Установлены самостоятельная достоверная противоопухолевая активность водного экстракта погруженного мицелия и суммарной фракции водорастворимых полисахаридов мицелия штамма 15 L. edodes при пероральном введении в системе invivo. Наибольшее торможение роста опухоли (81 %) было отмечено при использовании суммарной фракцией водорастворимых полисахаридов. Показано усиление противоопухолевого эффекта при совместном применении полисахаридного экстракта мицелия штамма 15 L. edodes с одноразовым введением низкой дозы циклофосфамида, торможение роста опухоли при сочетанном лечении достигало 98,8 %.

8. Разработан способ погруженного культивирования штамма 15 L. edodes. С применением методов математического планирования эксперимента разработана композиция состава жидкой питательной среды для погруженного культивирования, обеспечивающая двукратное увеличение выхода биологически активной биомассы отобранного штамма до 18-20 г/л на 6-е сутки процесса.

Автор выражает сердечную благодарность и признательность научному руководителю д.б.н. Ларисе Михайловне Краснопольской за внимательное руководство. Глубокую благодарность автор выражает сотрудникам лаборатории биосинтеза биологически активных соединений ГУ НИИНА им. Г.Ф. Гаузе РАМН, в особенности И.В. Бслицкому и A.B. Автономовой, оказавшим поддержку и помощь в проведении работы, к.б.н. Г.Б. Федоровой, д.х.н. Г.С. Катруха, и Г.И. Орловой за совместную работу, к.б.н. A.C. Тренину, д.м.н. В.М. Бухману, Е.Б. Исаковой, профессору, д.х.н. А.И. Усову, д.м.н. Е.М. Трещалиной за возможность проведения комплексных исследований.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Базидиомицет L. edodes известен как культивируемый съедобный гриб и как продуцент разнообразных биологически активных соединений, различающихся спектром своего действия. В подавляющем большинстве работ по изучению биологической активности этого вида рассматривается какой-либо один вид активности. Как следствие изучаемые штаммы описываются как продуценты биологически активных соединений, вызывающий один определенный эффект. В то же время выявление штаммов с широким спектром биологического действия и выраженной активностью имеет значение, как для изучения этого вида, так и для биотехнологических работ. Получение таких культур приведет к сокращению числа производственных штаммов и, как следствие уменьшению объемов работ по сохранению их биосинтетической активности, к возможности получения в одном биотехнологическом процессе нескольких биологически активных соединений, что сократит затраты на их производство. Проведение настоящей работы, основанной на изучении штаммового разнообразия L. edodes, позволило выявить штамм 15, образующий метаболиты с высокой антибиотической активностью и метаболиты с выраженным самостоятельным противоопухолевым действием. При погруженном культивировании этого штамма антибиотический комплекс накапливался в культуральной жидкости, противоопухолевые полисахариды - в мицелии.

Изучение антибиотической активности штаммов L. edodes показало, что этот вид в целом обладает достаточно высокой антибактериальной и антифунгальной активностью. Были выявлены штаммы L. edodes, экстракты культуральных фильтратов и погруженных биомасс которых показали выраженное антибиотическое действие в отношении грамположительных бактерий {В. subtilis, В. cereus subsp. myeoides, М. luteus, S. aureus, S. pneumonía), грамотрицательных бактерий (Р. aeruginosa, Е. coli, С. terrigend), одного вида дрожжей (С. albicans), мицелиальных грибов (А. niger, F. bulbigenum, V. albo-atrum, Т. harzianum), а также грибов-дерматофитов (М canis, Т. mentagrophytes v. gypseum, Scopulariopsis sp.). Основным компонентом антибиотического комплекса изученных штаммов L. edodes был лентинамицин В. Выделение этого соединения в хроматографически чистом виде позволило впервые детально изучить его действие в отношении бактериальных и грибных тест-культур.

Вегетативный мицелий L. edodes штамм 15, выращенный в условиях погруженной культуры, обладал выраженной антибиотической активностью, в то время как плодовые тела этого штамма такую активность практически не показали. В природе вегетативный мицелий, находящийся в субстрате, в значительно большей степени контактирует с представителями его микробиоты, по сравнению с базидиомами. Можно предположить, что выявленное различие в наличии антибиотических свойств связано с необходимостью вегетативного мицелия подавлять рост и развитие возможных конкурентов за субстрат. Вегетативный мицелий гриба в природной среде обитания, по-видимому, также синтезирует антибиотические вещества в гораздо большем количестве, чем плодовое тело, т. к. ему необходимо выдержать борьбу с конкурирующими видами мицелиальных грибов и бактерий. Из числа мицелиальных грибов наибольшую опасность представляют Trichoderma, Gliocladium, Mucor, Pénicillium, Doratomyces.

Изученные штаммы L. edodes показали разную скорость роста в условиях погруженной культуры, разные уровни накапливаемого погруженного мицелия и разное содержание в нем водорастворимых полисахаридов. Отобранный в результате проведения работы штамм 15 обеспечивал наиболее высокий выход водорастворимых полисахаридов. Моносахаридный состав суммарной фракции водорастворимых полисахаридов включал шесть нейтральных моносахаридов, основным являлась глюкоза. По содержанию глюкозы в водорастворимых полисахаридах штамм 15 L. edodes намного превосходит штаммы других видов ксилотрофных базидиальных грибов, выращенных также в условиях погруженной культуры (Автономова и др., 2006, Krasnopolskaya et al., 2008). Следует отметить, что наиболее известным биологически активным полисахаридом L. edodes является лентинан, представляющий собой p-D-глюкан.

Достоверное противоопухолевое действие in vivo на модели перевиваемой солидной опухоли в проведенной работе продемонстрировали водный экстракт и суммарная фракция водорастворимых полисахаридов L. edodes штамм 15. Совместное применение водного экстракта мицелия с однократным введением циклофосфамида в низкой иммуномоделирующей дозе резко усиливало противоопухолевый эффект. Торможение роста опухоли при сочеганном применении водного экстракта и цитостатика составило 98,8 % на 18-е сутки опыта. Этот факт свидетельствует о возможных перспективах в разработке курсов лечения, предусматривающих сочетания химиотерапии с препаратами на основе грибных метаболитов, усиливающих противоопухолевый иммунитет.

При получении водного экстракта мицелия штамма 15 была опущена традиционная стадия сушки, измельчения мицелия и первичной обработки порошка этанолом. Расчет соотношения сырого мицелия и экстрагента вели с учетом содержания влаги в мицелии. При этом противоопухолевая активность полученного экстракта была достоверной и высокой. Это свидетельствует о возможности использования данной сокращенной методики, как при проведении научных исследований, так и при организации производства субстанций с противоопухолевыми свойствами на основе метаболитов базидиальных грибов.

Проведенная работа показала перспективность использования методов математического планирования эксперимента при разработке составов питательных сред. Оптимизация количественного состава питательной среды для погруженного культивирования штамма 15 L. edodes была проведена с применением метода полного факторного эксперимента и метода крутого восхождения. В результате были достигнуты: 1) двухкратное увеличение выхода биомассы, 2) увеличение содержания в погруженном мицелии водорастворимых полисахаридов, 3) сокращение длительности процесса культивирования, 4) стабильность периодического процесса культивирования, выражающася в воспроизводимости выходов биомассы, значения конечного рН культуральной жидкости, 5) морфологическая однородность погруженного мицелия, отсутствовавшая при использовании исходных неоптимизированных сред, 6) сохранение антибиотической и противоопухолевой активности.

Отобранный в результате проведенной работе штамм L. edodes, по-видимому, представляет собой удачный объект для продолжения физиолого-биохимических и медико-биологических исследований. Дальнейшее изучение L. edodes штамм 15 в НИИНА РАМН показало, что эта культура проявляет гиполипидемические свойства, в том числе связанные с подавлением ранних этапов биосинтеза стсролов (Тренин и др., 2009). Таким образом, можно предположить, что кроме идентифицированного в настоящей работе эритаденина, штамм 15 способен синтезировать другое или другие соединения с гиполипидемической активностью. Изучение трофических потребностей этого штамма выявило условия, при которых в его мицелии накапливается значительное количество липидов. Изучение жирнокислотного состава липидной фракции показало наличие в ней эссенциальных жирных кислот.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Соболева, Наталья Юрьевна, 2010 год

1. Александрова Е.А., Завьялова Л.А., Терешина В.М., Гарибова Л.В., Феофилова Е.П. Получение плодовых тел и глубинного мицелия Lentinus edodes (Berk.) Sing. Lentinula edodes (Berk.) Pegler. Микробиология. 1998. Том 67. № 5. С. 649-654.

2. Бисько H.A., Бухало A.C., Вассер С.П. и др. Высшие съедобные базидиомицеты в поверхностной и глубинной культуре. Под общ. ред. Дудки И.А. Киев. Наук, думка, 1983. 312 с.

3. Булах Е.М., Говорова O.K. Редкие и новые для России виды базидиальных грибов из Приморского края. // Микол. и фитопатол. 2000. Т.34. № 2. С. 21-25.

4. Бухало A.C. Чистая культура высших базидиальных грибов. // Методы экспериментальной микологии. Справочник. Киев. Наук, думка. 1982. С. 448-461.

5. Бухало A.C. Высшие съедобные базидиомицеты в чистой культуре. Киев: Наукова думка. 1988. 144 с.

6. Гарибова Л.В., Завьялова Л.А., Александрова Е.А., Никитина В.Е. Биология Lentinus edodes. I. Морфолого-культуральные и физиолого-биохимические особенности. Микология и фитопатология. 1999. Том 33. Вып. 2. С. 107-110.

7. Герольд М. Антибиотики. М.: 1966. 407 с.

8. ГОСТ Р 51482-99 «Масла растительные и жиры животные. Определение методом газовой хроматографии массовой доли метиловых эфиров индивидуальных жирных кислот к их сумме».

9. Денисова Н.П. Лечебные свойства грибов. Этномикологический очерк. Санкт-Петербург: СПГМУ. 1998. 60 с.

10. Доспехов Б.А. Методика полевого опыта (с основами статистической обработки результатов исследований). Москва: Агропромиздат. 1985. 351 с.

11. Дудка И.А., Бисько H.A., Бухало A.C., Вассер С.П., Кулиш М.Д., Соломко Э.Ф., Шевченко C.B. Высшие съедобные базидиомицеты в поверхностной и глубинной культуре. Киев: Наукова думка. 1983. 311 с.

12. Дудка H.A., Вассер С.П. Грибы. Справочник миколога и грибника. Киев. Наукова думка. 1987.

13. Кейтс М. Техника липидологии. Выделение, анализ и идентификация липидов. М. «Мир». 1975. 322 с.

14. Коробан Л.П. Биологические особенности гриба L. edodes (Berk.) Sing. При интенсивном культивировании на лигноцеллюлозных отходах в Молдове. Дисс. на соиск. учен. степ, к.б.н. Моск. гос. ун-т им. М.В. Ломоносова. Биол. фак. М. РГБ. 2005.

15. Краснопольская Л.М. Базидиомицеты перспективные источники лекарственных соединений. // М. НИИНА им. Г.Ф.Гаузе РАМН. 1997. С. 71-74.

16. Краснопольская Л.М., Белицкий И.В. Культивируемый съедобный гриб шиитаке: лечебные свойства и биотехнологии выращивания. // Гавриш. 2002. №2.

17. Лили В., Барнетт Г. Физиология грибов.1953. ИЛ. М.

18. Максимов В.Н. Многофакторный эксперимент в биологии. М.: Из-во МГУ. 1980. 280 с.

19. Максимов В.Н., Федоров В.Д. Применение методов математического планирования эксперимента. М.: МГУ. 1969. 128 с.

20. Методика проведения испытаний на отличимость, однородность, стабильность. Вешенка (Pleurotus (Fr.) Kumm.). RTG/1036/1. Официальный бюллетень ФГУ «Государственная комиссия РФ по испытанию и охране селекционных достижений». Москва. 2003. № 6. С. 455-465.

21. Методы экспериментальной микологии: Справочник / Под ред. В.И. Билай. Киев: Наукова думка. 1982. 550 с.

22. Мир растений. В 7 томах. Под ред. ак. А.Л. Тахтаджяна. Том. 2. Грибы. Москва. 1991.479 с.

23. Мюллер Э., Лёффлер В. Микология: Пер. с нем. М.: Мир. 1995. 70 с.

24. Наумов H.A. Методы микологических и фитопатологических исследований. 1937. Сельхозгиз. J1.

25. Ольшанова K.M. Практикум по хроматографическому анализу. М. Высш. школа. 1970. 312 с.

26. Пумянская JI.B. Хранение микроорганизмов под минеральным маслом. Микробиол. 1964. 33, 6:1065-1070.

27. Пучкова Т.А., Смирнов Д.А., Щерба В.В. Биополимеры углеводной природы различных представителей грибов рода Lentinus. II В сб. Современная микология в России. Том 2. Материалы 2-го Съезда микологов России. 2008. С. 138-139.

28. Рипачек В. Биология дереворазрушающих грибов. М. Лесная промышленность. 1967. 276 с.

29. Сергеева Я.Э., Галанина Л.А., Феофилова Е.П. Липиды мицелиальных грибов как альтернативный вид топлива для дизельного двигателя. // В сб. Современная микология в России. Том 2. Материалы 2-го Съезда микологов России. 2008. С. 141-142.

30. Соломко Э.Ф., Дудка И. А. Перспективы использования высших базидиомицетов в микробиологической промышленности. // ГУМП при СМ СССР. М. 1985. 48 с.

31. Соломко Э.Ф., Митропольска Н.Ю. Получение посевного материала Lentinus edodes (Berk.) Sing, глубинным методом. Микология и фитопатология. 1994. Том 28. Вып.З. С. 34-39.

32. Тренин A.C., Цвигун Е.А., Терехова Л.П., Толстых И.В., Зенкова В.А., Катруха Г.С. Микробные модели в поиске ингибиторов биосинтеза холестерина. // Тез. докл. 1 Всероссийской конференции по проблемам атеросклероза. 8-9 июня, 1999. Москва. С. 167.

33. Трещалина Е.М. // Противоопухолевая активность веществ природного происхождения. Москва. Изд. Практическая медицина. 2005. С. 272.

34. Феофилова Е.П. Использование высших базидиальных грибов для создания лекарственных препаратов. Материалы III Международного конгресса «Наука и практика грибоводства». Россия. Кашира. 1996. С. 17-20.

35. Фомина В.И., Бисько H.A., Билай В.Т. Особенности роста мицелия штаммов Lentinus edodes (Berk.) Sing. На растительных субстратах. / Микология и фитопатология. Том 32. Вып.4. 1998. С. 18-23.

36. Шиврина А.Н., Низковская О.П., Фалина Н.Н., Маттисон Н.Л., Ефименко О.М. Биосинтетическая деятельность высших грибов. Л. 1969. 241 с.

37. Щерба В. В., Бабицкая В. Г. Полисахариды ксилотрофных базидиомицетов // Прикладная биохимия и микробиология. 2008. Т. 44. № 1. С. 90-95.

38. Agamas Н. Treatment of hepatitis В patient with Lentinus edodes mycelium. In: New Trends in Peptic Ulcer and Chronic hepatitis. Part II: Chronic Hepatitis. Princeton: Exerpta Medica. 1987. P. 316-321.

39. Aoki T. Lentinan. // Eds. R.L. Fenichal, M.A. Chirigos. Immune Modulation Agents and Their Mechanisms. Marcel Dekker Inc. Basel: N-Y, 1984. P.63-77.

40. Badalyan S.M. Antiprotozoal activity and mitogenic effect of mycelium of culinary-medicinal Shiitake mushroom Lentinus edodes (Berk.) Singer (Agaricomycetideae). International journal of medicinal mushrooms. 2004. Vol. 6 (2). P. 131-138.

41. Badalyan S.M. Edible and medicinal higher basidiomycete mushrooms as a source of natural antioxidants. International Journal of Medicinal Mushrooms. 2003. Vol. 5 (2). P.153-162.

42. Bender S., Lonergan G.T., Backhaus J., Cross R.F., Dumitrache-Angel C.N., Baker W. The antibiotic activity of the edible and medicinal mushroom Lentinus edodes (Berk.) Sing. Int. J. of Medicinal Mushrooms. 2001. Vol. 3. No. 2-3. P. 118.

43. Benjamin, Denis R. Mushrooms: poisons and panaceas: a Laudbook for naturalists, mycologists and physicians. W.H. Ekeeman and Company, New-York. 1995.

44. Bew R.E., Chapman J.R., Jones Sir Ewart R.H., Lowe B.E., Lowe G. Natural acetylenes. Part XVIII. Some Allenic Polyacetylenes from basidiomycetes. J. Chem. Soc. 1966: 129-135.

45. Borchers A.T., Stern J.S., Hackman R.M. et al. Mushrooms, tumors, and immunity. Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1999. 221: 281-293.

46. Breene W.M. Nutritional and medicinal value of speciality mushrooms. // J. Food Protection. 1990. 53(10): 883-889.

47. Kaneko Y., Chihara G., Taguchi T. Activity of lentinan against cancer and AIDS. // Int. J. Immunotherapy. 1989. 4: 203-213.

48. Cannon P.F. International commission on the taxonomy of fungi (ICTF): name changes in fungi of microbiological, industrial and medicinal importance. 1 // Microbiol. Sci. 1986. V. 3.№6. P. 168-171.

49. Chang R. Functional properties of edible mushrooms. Nutri. Rev. 1996. 54: 91-93.

50. Chang S.T. Mushrooms and food. // Bioscience. 1980. V. 30. P. 399-401.

51. Chang S.T., Buswell J.A. Mushroom nutriceuticals. World J. Microbiol, and Biotech. 1996. Vol. 12. No. 5. P. 473-476.

52. Chang S.T., Miles P.G. Historical record of the early cultivation of Lentinus in China. Mushroom Journal of the Tropics. 7: 47.

53. Chibata I., Okumura K., Takeyama S., Kotera K. Lentinacin: a new hypocholesterolemic substance in Lentinus edodes. Specialia Experientia. 1969. 25: 1237-1238.

54. Chihara G. Antitumor polysaccharides, lentinan and pachymaran. Saishin Igaku. 1970. 25(5). P. 1043-1048.

55. Chihara G. Antitumor and immunological properties of polysaccharides from fungal origin. National Cancer Institute, Tokio. Proceedings of the Tenth International Congress on the Science and Cultivation of Edible Fungi, France. 1978.

56. Chihara G. Antitumor and metastasis-inhibitory activities of lentinan as an immunomodulator: an overview. Cancer Detect Prev Suppl. 1987. 1. P. 423-443.

57. Chihara G. Medical aspects of lentinan isolated from Lentinus edodes (Berk.) Sing. In Mushroom Biology and Mushroom Products. Eds. Chand S.T., Buswell J.A., Chiu S.W. 1993. P. 261-266. Hong Kong: Chinese University Press.

58. Chihara G., Maeda Y., Hamuro J., Sasaki T., Fukuoka F. Ingibition of Mouse sarcoma 180 by polysaccharides from Lentinula edades (Berk:) Sing. Nature. 1969. 222: 687-688.

59. Chihara G. The antitumor polysaccharide Lentinan: an overview. In: Aoki T et al. (eds.). Manipulation of host defence mechanisms. Excerpta Med, Int Congr Ser. 576, Elsevier, Amsterdam. 1981.

60. Choi Y., Hibin Y., Maed H., Sugan N., Yasumur S. Anticarcinogenic action of an alcohol-insoluble fraction (LAP1) from culture medium of Lentinus edodes mycelia. // Cancer Letters. 1985. V. 27(1). P.l-6.

61. Claydon N. Secondary metabolic products of selected Agarics. In: "Developmental biology of higher fungi", Symp. Brit. Mycol. Soc., Univ. Manchester (Apr., 1984), ed. D. Moore et al., Cambridge Univ. Press, 1985. P. 561-579.

62. Cochran K.W. Medicinal effects in the biology and cultivation of edible mushrooms. Ed. By S.T. Hayes & W.A. Hayes. Academic Press. London. 1978. P. 169-187.

63. Cochrane V. Physiology of fungi. 1958. N.Y.

64. Crisan E.V., Sands A. Nutritional value. // The biology and cultivation of edible mushrooms. / Eds. S.T. Chang, W.A. Hayes. New York etc.: Acad. Press. 1978. P. 137-165.

65. Delpech P., Olivier J.M. Cultivation of shiitake on straw based pasteurized subsrates. Mush. Sci. 1991. 12: 523-528.

66. Donoghue J.W., Denison C. Shiitake cultivation: Gas phase during incubation influence productivity. Micologia. 1995. Apr.

67. Donoghue J.D., Simonson A.K., Denison W.C. Spawning techniques for sawdustbased shiitake production: past, present and future. Mush. News. 1996. 44 (7): 6-17.

68. Dubois M., Gilles K.A., Hamilton J.K., Rebers P.A., Smith F. Colorimetric method for determination of sugars and related substances. Anal. Chem. 1956. Vol. 28. N. 3. Pp. 350-356.

69. Endo A., Monacolin K. A new hypocholesterolemic agent that specifically inhibits 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase. // J. Antibiot. (Tokio). 1980. V. 33. N. 3. P. 334336.

70. Enman J., Hodge D., Berglund K.A., Rova U. Production of the bioactive compound eritadenine by submerged cultivation of shiitake {Lentinus edodes) mycelia. // J. Agric. Food Chem. 2008. 23; 56(8): 2609-12.

71. Feofilova E.P., Nemtsev D.V., Tereshina Y.M, Kozlov V.P. Polyaminosaccharides of mycelial fungi: new biotechnological use and practical implications. Applied Biochemical and Microbiology. 1996. Vol. 32. No. 5. P. 437-445.

72. Fisher F., Cook N.B. Fundamentals of diagnostic mycology. 1998.

73. Fitch M.E., Mangels A.R., Altmann W.A., El Hawary M., Qureshi A.A., Elson C.E. Microbiological screening of mevalonate-suppressive minor plant constituents. // J. Agric. Food Chem. 1989. V. 37. P. 687-691.

74. Folch J., Lees M., Sloane-Stanley G.H. A simple method for the isolation and purification of total lipids from animal tissues. // J. Biol. Chem. 1957. V. 226. P. 478-509.

75. Freunhauf J.P., Bonnard G.D., Heberman R.B. The effect of lentinan on production of interleukin-1 by human monocytes. Immunopharmacology. 1982. 5: 65-74.

76. Fries N. Growth factor requirements of some higher fungi. // Ibid. 1950. V. 44. № 3. P. 379-386.

77. Fujii T., Maeda H., Suzuki F., Ishida N. Isolation and Characterization of a new antitumor polysaccharide, KS-2, extracted from cultured mycelia of Lentinus edodes. Journal of Antibiotics. 1978. 31 (1): 1079-1090.

78. Furlan S.A., Virmond L.J., Miers D.A., Bonatti M., Gern R.M.M., Jonas R. Mushroom strains able to grow at high temperatures and low pH values. // World J. Microbiol, and Biotech. 1997. Vol. 13. No. 6. P. 689-692.

79. Furue H., Kitoh I. Phase III study on Lentinan. // Jpn. J. Cancer Chemother. 1981. V. 8. P. 944-960.

80. Gaitán-Hernández R., Esqueda M., Gutiérrez A., Sánchez A., Beltrán-García M., Mata G. Bioconversion of agrowastes by Lentinula edodes-. the high potential of viticulture residues. // Appl Microbiol Biotechnol. 2006. Jul; 71(4): 432-9.

81. Gergely P., Valient K., Bodo I., Feher J., Kaneko Y. Effects of lentinan on cytotoxic functions of human lymphocytes. Immunopharmacol. Immunotoxicol. 1988. 10: 157-163.

82. Ghoneum M. Anti-HIV activity in vitro of MGN-3, an activated arabinoxylane from rice bran. // BBRC. 1998. 243: 25-29.

83. Haese A., Keller U. Genetics of actinomycin C production in Streptomyces chrysomallus. J. Bacteriol. 1988. V. 170. P. 1360-1368.

84. Hakama Y., Hakamma J.L.R.Y. Res. Commun. Chem. Pathol. Pharmacol. 1981. 31: 177-180.

85. Hamuro J., Rollinghoff M., Wagner LI. Induction of cytotoxic peritoneal exudate cells by T cell immune adjuvants of (3-(l—j-3) glucan type lentinan and its analogues. // Immunol. 1980. 39: 551-559.

86. Hanada K., Hashimoto I. Flagellate mushroom (Shiitake) dermatitis and photosensitivity. // Dermatology. 1998. 197 (3): 255-257.

87. Harvey L., McNeil B. Production of lentinan by submerged cultivation of Lentinus edodes (Berk.) Sing. // Intern. J. Med. Mushrooms. 2001. V. 3. № 5. P. 61-63.

88. Hashimoto M., Saito Y., Seiki H., Kamiya T. Hyphocholesterolemic alkaloids of Lentinus edodes. IV. Synthesis of three stereoisomers of eritadenin. // Chem. Pharmacol. Bull. 1972. V. 20. P. 1374-1379.

89. Hassegawa R., Kasuya M.C.M., Vanetti M.C.D. Growth and antibacterial activity of Lentinula edodes in liquid media supplemented with agricultural wastes. Microbial Biotechnology. 2005. Vol. 8. No. 2 Issue in Aug. 15. P. 212-217.

90. Hatvani N. Antibacterial effect of the culture fluid of Lentinus edodes mycelium grown in submerged liquid culture. // International J. of Antimicrob. Agents. 17 (1). 2001. P. 7174.

91. Hirasawa M., Shouji N., Neta Т., Fukushima K., Takada K. Three kinds of antibacterial substances from Lentinus edodes (Berk.) Sing. (Shiitake, an edible mushroom). International J. of Antimicrob. Agents. 1999. 11: 151-157.

92. Hobbs C. Medicinal mushrooms: an exploration of tradition, healing and cultures. Interweave Press, 1995. 251 p.

93. Hobbs C. Medidcinal mushrooms: modern clinical uses overview. // Intern. J. Med. Mushrooms. 2001. V. 3. P. 86.

94. Irinoda K., Masihi K.N., Chihara G., Kaneko Y., Katori I. Stimulation of microbicidal host defense mechanism against aerolol influenza virus infection by lentinan. Int. J. Immunopharmacol. 1992. 14: 971-977.

95. Ishikawa N.K., Kasuya M.C.M., Vanetti M.C.D. Antibacterial activity of Lentinula edodes grown in liquid medium. Brazilian Journal of Microbiology. 2001. Vol. 32. No. 3. Pp. 206210.

96. Ito T. Cultivation of Lentinus edodes. The biology and cultivation of edible mushroom. Ed. S.T. Chang, W.A. Hayes. New York etc.: Acad. Press. 1978. P. 169-182.

97. Jasumoto K., Iwani K., Mitsuda H. Enzymatic formation of aroma from non-volatile precursor(s) lenthionine from lentinic acid // IX-th Intern, sci. congr. Cultiv. Edible Fungi. Tokyo. Nov. 4-13, 1974. P.24.

98. Jones K. Shiitake. The Healing Mushroom. Healing Arts Press. Rochester, Vermont.1995.

99. Jones K. Shiitake medicine in a mushroom Электронный ресурс. Режим доступа: http://www.immunesupport.com/news/97sprOQ7txt.htm , свободный. Загл. с экрана. Яз. англ.

100. Jong S.C., Birmingham S.M. Medicinal and therapeutic value of the shiitake mushroom. In: Neidleman S., Laskin A.I. Adv. Appl. Microbiol. 1993. 39: 153-184.

101. Jong S.C., Donovick R. Antitumor and antiviral substances from fungi. // Adv. Appl. Microbiol. 1989. V. 34. P. 183-262.

102. Kabir Y.M., Yamaguchi M., Kimura S. Effect of shiitake (Lentinus edodes) amd maitake {Grifóla frondosa) mushrooms on blood pressure and plasma lipids of spontaneously hypertensive rats. J. Nutr. Sci. Vitaminol. 1978. 33: 341-346.

103. Kalberer P.P. Experiments on the cultivation of shiitake {Lentinus edodes) on sawdust. // Mushroom Sci. 1987. V. 12. P. 231-244.

104. Kalberer P. Influence of the substrate components on the crop yield of shiitake {Lentinus edodes (Berk.) Singer). Gartenbauwissenschaft. 1998. 63: 15-19.

105. Kamiya T., Saitoh Y., Hashimoto M., Seki H. Hypocholesterolemic alkaloids of Lentinus edodes (Berk.) Sing. -1. Structure and sinthesis of eritadenine. // Tetrahedron. 1972. Vol. 28. P. 899-906.

106. Kamiya T., Saito Y., Hashimoto M., Seki II. Structure and synthesis of lentisine, a new hypocholesterolemic substance. Lentinus edodes. II Tetrahydron Lett Nov. 1969. 53: 47294732.

107. Kaneda T., Tokuda S. Effect of various mushroom preparations on cholesterol levels in rats. // J. Nutr. Rep.Int. 1966. 26: 167-173.

108. Kerekgyarto C., Virag L., Tanko L., Chihara G. Strain differences in the cytotoxic and TNF production of murine macrophages stimulated by lentinan. // Int. J. Immunopharmacol. 1996. 18, 347-353.

109. Khan S.M., Mirza J.H., Khan M.A. Studies on shiitake mushroom {Lentinula edodes (Berk.) Pegler). In: Science and Cultivation of Edible Fungi. Balkema, Rotterdam. 1991. P. 232237.

110. Kirk T.K., Connors W.J., Zeikus J.G. Requirement for a growth substrate during lignin decomposition by two wood rotting fungi. // Appl. Environ. Microbiol. 1976. V. 32. P. 192.

111. Komemushi S., Yamamoto Y., Fujita T. Antimicrobial substance produced by Lentinus edodes. J. Antibact. Antifung. Agents. 1995. Vol. 23. No 2. P. 81-86.

112. Komemushi S., Yamamoto Y., Fujita T. Purification and Identification of Antimicrobial Substances Produced by Lentinus edodes. J. Antibact. Antifung. Agents. 1996. Vol. 24. No l.P. 21-25.

113. Kurasawa S., Sugahara T., Hayashi J. Food and nutrition problems of dietary fiber. 1982. Nutr. Rep. Int. 26(2): 167-173.

114. Kurihara H., Michi К. Effect of hypocholesterolemic substance in Shiitake on sterol metabolism in rat in Japanese. Eiyo to Shokuryo. 1972. 25: 458-461.

115. Ladanyi A., Timar J., Lapis K. Effect of lentinan on macrophage cytotoxity against metastatic tumor cells. Cancer Immunol. Immunother. 1993. 36: 123-126.

116. Leatham G.F., Griffin T.J. Adapting liquid spawn Lentinus edodes to oak wood. Appl. Microbiol. Biotechnol. 1984. 20: 360-363.

117. Lee J.W., Koo B.W., Choi J.W., Choi D.H. Choi I.G. Evaluation of waste mushroom logs as a potential biomass resource for the production of bioethanol. // Bioresour Technol. 2008. May; 99(8): 2736-41.

118. Levanon D., Rothschild N., Danai O., Masaphy S. Strain selection for cultivation of shiitake mushrooms (Lentinus edodes) on straw. 1993. Bioresource Technology. 45: 9-12.

119. Liu В., Bau Y.-S. Fungi pharmacopoeia (Sinica). Kinoko Company. Oakland. 1980.

120. Lobanok A.G., Babitskaia V.G., Plenina L.V., Puchkova T.A., Osadchaia O.V. Composition and biological activity of submerged mycelium of the xylotrophic basidiomycete Lentinus edodes. II Prikl. Biokhim. Mikrobiol. 2003. Jan-Feb; 39(1): 69-73.

121. Lorbach R.B., Murphy W.J., Lowenstein C.J., Snyder S.H., Russell S.W. Expression of the nitric oxide synthase gene in mouse macrophages activated for tumor cell killing. // J. Biol. Chem. 1993.268: 1908-1913.

122. Lowenstein C.J., Snyder S.H. Nitric oxide, a novel biologic messenger. Cell. 1992. 70: 705-707.

123. Man Y.H., Yeng W.T., Chen L.C., Chang S. Physiology and ecology of Lentinus edodes (Berk.) Sing. // Mushroom Sci. 1981. V. 11. P. 623-658.

124. Mata G., Savoje J.-M. Extracellular enzyme activities in six Lentinula edodes strains during cultivation in wheat straw. // World J. Microbiol. Biotechnol. 1998. 14: 513-519.

125. Maeda Y.Y., Chihara G. Lentinan and other antitumoral polysaccharides. Antitumor activity of lentinan. // Immunomodulatory Agents from Plants. 1999.

126. Matsuoka H., Seo Y., Wakasugi H., Saito T., Tomoda H. Lentinan potentiates immunity and prolongs the survival time of some patients. // Anticancer Research. 1997. 17: 2751-2756.

127. Mimura S. Notes on Shiitake culture. // Journal of the Forestry Socicty of Japan. Vol. 4. Tokyo. 1904.

128. Minamide T., Habu T., Ogata K. Effect of storage temperature on keeping fressness of mushroom after harvest. // J. Jpn. Soc. Food Sci. Technol. 1980. 27: 281-287.

129. Minato K., Mizuno M., Ashida H., Hashimoto T., Terai H., Tsuchida H. Influence of storage conditions on immunomodulating activities in Lentinus edodes (Berk.) Sing. (Agaricales s.l., Basidiomycetes). // Int. J. Med. Mushr. 1999. 1: 243-250.

130. Minato K., Mizuno M., Terai H., Tsuchida H. Autolysis of lentinan, an antitumor polysaccharide, during storage of Lentinus edodes, shiitake mushroom. // J. Agric. Food Chem.1999. Apr; 47(4): 1530-2.

131. Mizuno M. Anti-tumor polysaccharides from mushrooms during storage. BioFactors.2000. 12: 275-281.

132. Mizuno T. Development of antitumor polysaccharides from mushroom fungi. // Foods Food Ingred J Jpn 1996. 167:69-85.

133. Mizuno T. Shiitake, Lentinus edodes: Functional properties for medicinal and food purposes. //FoodRev. Intern. 1995. V. 11. № 1. P. 111-128.

134. Mizuno T. The extraction and development of antitumor-active polysaccharides from medicinal mushrooms in Japan. // Int. J. Med. Mushroom. 1999. V. l.P. 9-29.

135. Mizuno T., Sakai T., Chihara G. Health foods and medicinal usages of mushrooms // Food Reviews International. 1995. Vol.11. P.69-81.

136. Mori K. Mushrooms as health foods. Jap. Publications. Tokyo. 1974.

137. Mori K., Toyomasu T., Nanba H., Kuroda H. Antitumor activity of fruit bodies of edible mushrooms orally administered to mice. // Mushroom J. Tropics. 1987. 7: 121-126.

138. Morinaga H., Tazawa K., Tagoh H., Muraguchi A., Fujimaki M. An in vivo study of hepatic and splenic interleukin-1 beta mRNA expression following oral PSK or LEM administration. // Jpn J Cancer Res. 1994. Dec; 85(12): 1298-303.

139. Morita K., Kobayashi S. Isolation, structure, and synthesis of lentionin and its analogs. Chem. Pharm. Bull. 1967. 15: 988-993.155. Mycologia. 1941.33:451.

140. Nanba H., Kuroda H. Antitumor mechanisms of orally administered shiitake fruit bodies. // Chem. Pharmaceut Bull. 1987. 35: 2459-2464.

141. Ohwada S., Ikeya T., Yokomori T. et al. Adjuvant immunotherapy with oral tegafur/uracyl+PSK in patients with stage II or III colorectal cancer: a randomized controlled study. //Br. J. Cancer. 2004. V. 90. № 5. P. 1003-1010.

142. Pegler D. The classification of the genus Lentinus Fr. (Basidiomycota). Kavaka. 1975. 3: 11-20.

143. Pegler D. The genus Lentinula (Tricholomataceae tribe Collybiaeae). Sydowia. 1983. 36: 227-239.

144. Phillips D. Oxygen transfer into mycelial pellets. // Biotechn. a. Biocngin. 1966. 8. 3: 456-460.

145. Przybylowicz P., Donoqhue J. Shiitake growers handbook. The art and science of mushroom cultivation. Northwest mycological consultants, Inc. Kendall / Hunt Publishing Company. 1460 Kerper Boulevard P.O. Box 539 Dubuque, Iowa 52004-0539. 1991. 217 p.

146. Rokujo Т., Kikuchi Н., Tensho A., Tsukitani Y., Takenawa Т., Yoshida К., KamiyaT. Lentisine: a new hypolipidemic agent from a mushroom. // Life Sci. 1970. V. 9. № 7. P. 379-385.

147. Rowan N.J., Smith J. E., Sullivan R. Immunomodulatory activities of Mushroom glucans and polysaccharides-protein complexes in animals and humans (A review). // International Journal of Medicinal. Mushrooms. 2003 Vol. 5(2), P. 95-110.

148. Royse D.J., Schisler L.C. Mushrooms, their consumption, production and culture development. // Interdisc. Sci. Rev. 1980. V. 5. № 4. P. 324-332.

149. Sakamoto R., Niimi Т., Takahashi. Submerged culture of edible fungi in high-consistency starch media. Agricultural chemistry. Japan. 1987. Vol. 52. No. 2. P. 83-90.

150. Sarkar S., Koga J., Whitley R.J., Chatterjee S. Antiviral effect of the extract of culture medium of Lentinus edodes mycelia on the replication of herpes simplex virus type 1. Antiviral Res. 1993.20:293-303.

151. Sasaki Т., Takasuka N. Further study of the structure of lentinan, an anti-tumor polysaccharide from Lentinus edodes. Carbohydr. Res. 1976. V. 47. № 1. P. 99-104.

152. Satoh J., Shintani S., Tanaka S., Tamura K., Seino H., Ohta S., Nobunaga Т., Kumagai K., Toyota T. Igaku no Ayumi. 1988. 147: 63-64.

153. Shimada Y., Morita Т., Sugiyama K. Dietary eritadenine and ethanolamine depress fatty acid desaturase activities by increasing liver microsomal phosphatidylethanolamine in rats. American Society for Nutritional Sciences. December, 2002. P. 758-765.

154. Shimada Y., Yamakawa A., Morita Т., Sugiyama K. Effects of dietary eritadenine on the liver microsomal A6-desaturase activity and its mRNA in rats. // Biosci. Biotechnol. Biochem. 67 (6). 1258-1266. 2003.

155. Shouji N., Takada K., Fukushima K., Hirosawa M. Anticaries effect of a component from shiitake (an edible mushroom). Caries Research. 2000. 34:94-98.

156. Sia G.M., Candlish J.K. Effects of shiitake (Lentinus edodes) extract on human neutrophils and the U937 cell line. // Phytotherapy Research. 1999. 13: 133-137.L

157. Singer R. The Agaricales in Modern Taxonomy (4 ed.). Koeltz Scientific Books. Germany.

158. Smith J.E., Sullivan R., Rowan N. The role of polysaccharides derived from medicinal mushrooms in cancer treatment programs: current perspectives. // Int. J. Medicinal mushrooms. 2003; 5(3): 217-234.

159. Solomons G.L. Submerged culture production of mycelial biomass // The filamenyous fungi. Vol. I. Industrial mycology. Eds J.E.Smith, D.R.Berry. London: Edward, 1975. P. 249-264.

160. Song C.H., Cho K.Y., Nair N.G. A synthetic medium for the production of submerged cultivation oí Lentinus edodes. Micologia. 1987. Vol. 79. No. 6. P. 866-876.

161. Stalpers J.A. Identification of wood-inhabiting Aphyllophorales in pure culture. // Studies in Mycology. 1978. V. 16. P. 1-248.

162. Stamets P. Growing gourmet and medicinal mushrooms. Third edition. 2000. 574 p.

163. Sugano N., Choji Y., Hibino Y., Yasumura S., Maeda H. Anticarcinogenic action of an alcohol-insoluble fraction (LAP1) from culture médium of Lentinus edades mycelia. Cancer Lett. 1985.27:1-6.

164. Sugiyama K., Arashi T., Yamakawa A. Eritadenine-induced alteration of hepatic phospholipid metabolism in relation to its hypocholesterolemic action in rats. Nutritional Biochemistry. 1995 (a). Vol. 6. No. 7. P. 80-87.

165. Sugiyama K., Arashi T., Yamakawa A. Hypocholesterolemic action of eritadenine is mediated by a modification of heoatic phospholipid metabolism in rats. J. Nutr. 1995 (b). 125: 2134-2144.

166. Suhadolnik R.J. Induction of hypocholesterolemia. 1979. In: Nucleosides as Biological Probes. John Wiley and Sons, New York. Pp. 298-310.

167. Suzuki F. Protein nucleic acid enzyme (in Japanese). 1976. V. 21 (4). P. 260.

168. Suzuki F., Suzuki C., Shimomura E., Maeda H., Fujii T., Ishida N. Antiviral and interferon-inducing activities of a new peptidomannan, KS-2, extracted from culture mycelia of Lentinus edodes. //J. Antibiot. 1979. 32: 1336-1345.

169. Suzuki H., Iiyama K., Aho T., Ohkubo A., Yamazaki S., Toda S. Nippon Nogeikagaku Kaishi. 1989. V. 63. P. 361.

170. Suzuki S., Ohshita S. Influence of shiitake {Lentinus edodes) on human serum cholesterol. // Mushroom Sci. 1976. 9, 463-467.

171. Taguchi T. Clinical efficacy of lentinan on patients with stomach cancer: end point results of a four-year follow-up survey. Cancer Detect Prevent Supp. 1987. 1: 333-349.

172. Taguchi T., Furue H., Kimura T., Kondo T., Hattori T., Itoh T., Osawa N. End-point results of phase III study of lentinan. // Jpn. J. Cancer Chemother. 1985. V. 12. P. 366-380.

173. Takamura K., Hoshino H., Sugahara T., Amano H. Determination of vitamin D2 in shiitake mushroom (Lentinus edodes) by high-performance liquid chromatography. // J. Chromatogr. 1991. V. 545. № 1. P. 201-204.

174. Takashima K., Izami K., Iwai H., Takeyama S. The hypocholesterolemic action of eritadenine in the rat. // Atherosclerosis. 1973. V. 17. P. 491-502.

175. Takazawa H., Tajima F., Miyashita C. An antifungal compound from Shiitake (Lentinus edodes). Yakugaku Zasshi in Japanese. 1982. 102: 489-491.

176. Takeuchi A., Okano T., Sayamoto M., Sawamura S., Kobayashi T. Distribution and existence formsof vitamin D2 and crgosterol in Shiitake {Lentinus edodes). II Vitamins (J. Vitamin Soc. Jap.). 1984. V.58. № 12. P. 589-595.

177. Tochikura T.S., Nakashima H., Yamamoto N. Antiviral agents with activity against human retroviruses. // J. Acquir Immune Def. Syndr. 1989. 2: 441-447.

178. Togami M. Basidiomycetes. 1. Antitumor polysaccharide from bagasse medium on which mycelia of Lentinus edodes had been grown. // Chem. Pharm. Bull. 1982. V. 30. P. 1134-1140.

179. Tokimoto K., Fujita T., Takeda Y., Takaishi Y. Increased or induced formation of antifungal substances in culture of Lentinus edodes by attack of Trichoderma spp. Proc. Japan Acad. Series B. Phys and Biol. Scicnces. 1987. 63:277-280.

180. Tokimoto K., Komatsu M. Bioligical nature of Lentinus edodes. In The Biology and Cultivation of Edible Mushrooms. Eds Chang S.T., Hayes W.A. New York: Elsevier Applied Science. 1978. P. 445-459.

181. Tokita F., Shibukawa N., Yasumoto T., Kanada, T. Isolation and chemical structure of the plasma cholesterol reducing substance from shiitake mushroom. // Mushroom Sei. 1972. Vol. 8. P. 783-788.

182. Tokuda S., Kaneda T. Effect of Shiitake mushroom Lentinus edodes on plasma cholesterol levels in rats Cholesterol reducing mechanism. // Mushroom Sei. 1979.10, 793-796.

183. Tokuda S., Tagiri A., Kano E., Sugawara Y., Suzuki S., Sato H., Kaneda T. Reducing mechanism of plasma cholesterol by shii-ta-ke. // Mushroom Sei. 1976. 9(1): 445-462.

184. Tsunoda A., IshidaN. NY. Acad. Sei. 1973. V. 173. P. 719.

185. Unursaikhan S, Xu X, Zeng F, Zhang L. Antitumor activities of O-sulfonated derivatives of (1—>3)-a-D-glucan from different Lentinus edodes. II Biosci Biotechnol Biochem. 2006. Jan; 70(1): 38-46.

186. Vetter I. Mineral and amino acid contents of edible, cultivated shiitake mushrooms {Lentinus edodes). Zeitschrift fur Lebensmittel Untersuchung und Forschung. 1995. July. 201 (1): 17-19.

187. Yamada T., Oinuma T., Niihashi M., Mitsumata M., Fujioka T., Hasegawa K., Nagaoka H., Itakura H. Effects of Lentinus edodes mycelia on dietary-induced atherosclerotic involvement in rabbit aorta. // J. Atheroscler. Thromb. 2002. 9(3): 149-56.

188. Wan K. Effects of lentinan of peripheral blood mononuclear cell expression of interleukin-2 receptor in patients with chronic hepatitis B in vivo and in vitro. // Hunan IKo Ta Hsueh Hesueh Pao. 1998. 23: 90-92.

189. Wasser S.P. Medicinal mushrooms as a source of antitumor and immunomodulating polysaccharides. Appl. Microbiol. Biotechnol. 2002. 60: 258-274.

190. Wasser S.P., Weis A.L. Medicinal mushrooms. Lentinus edodes (Berk.) Sing. Shiitake mushroom. San Antonio, Haifa, Kyiv. 1997. 91 p.

191. Watanabe T., Ogawa K. Study on preoperative administration of lentinan in gastric cancer cases. I. Immunohistological evaluation. // J. Jpn. Soc. Cancer Ther. 1995a. 30(7): 938-947.

192. Watanabe T., Ogawa K. Study on preoperative intratumor administration of lentinan for gastric cancer cases. II Antitumor immune response of regional lymph nodes. // J. Jpn. Soc. Cancer Ther. 1995b. 30(7): 948-955.

193. Wu X.J., Hansen C. Antioxidant capacity, phenolic content, and polysaccharide content of Lentinus edodes grown in whey permeate-based submerged culture. // J. Food Sci. 2008. Jan; 73(1):1-8.

194. Xie Q.W., Cho H., Calaycay J., Mumford R.A., Swiderrek K.M., Lee T.D., Ding A., Troso T., Nathan C. Cloning and characterization of inducible nitric oxide synthase from mouse macrophages. Science. 1992. 256: 225-228.

195. Yamamura Y., Cochran K.W. Chronic hypocholesterolemic effect of Lentinus edodes in mice and absence of effect on scrapie. // Mushroom Sci. 1976. 9: 489-493.

196. Yang B.K., Kim D.H., Jeong S.C, Das S., Choi Y.S., Shin J.S., Lee S.C., Song C.H. Hypoglycemic effect of a Lentinus edodes exo-polymer produced from a submerged mycelial culture. //Biosci. Biotech. Biochem. 2002. Vol. 66. No. 5. P. 937-942.

197. Yang Q.Y., Jong S.C. A quick and efficient method of making mushroom spawn. // Mushroom Sci. 1989. Vol. 12. Part. I. P. 631-643.

198. Yap A.-T., Ng M.-L. Immunopotentiating properties of lentinan l-3-|3-D-glucan extracted from culinary-medicinal Shiitake mushroom Lentinus edodes (Berk.) Singer (Agaricomycetideae). // Int. J. Med. Mushroom. 2003. Vol. 5 (4). P. 339-358.

199. Zervakis G, Philippoussis A, Ioannidou S, Diamantopoulou P. Mycelium growth kinetics and optimal temperature conditions for the cultivation of edible mushroom species on lignocellulosic substrates. //Folia Microbiol (Praha). 2001; 46(3): 231-4.

200. Zhang P., Cheung P.C. Evaluation of sulfated Lentinus edodes a-(l—>3)-D-glucan as a potential antitumor agent. // Biosci Biotechnol Biochem. 2002. May; 66(5): 1052-6.

201. Zhang L., Li X., Xu X., Zeng F. Correlation between antitumor activity, molecular weight, and conformation of lentinan. // Carbohydr Res. 2005. Jun 13; 340(8): 1515-1521.

202. Zheng R., Jie S., Hanchuan D., Moucheng W. Characterization and immunomodulating activities of polysaccharide from Lentinus edodes. II Int. Immunopharm. 2005. May; 5(5):811-820.

203. Морфология колоний штаммов Ь. е(1о(1еч на плотных питательных средаха) Штамм б) Штамм 2г) Штамм 4е) Штамм 6з) Штамм 8в) Штамм 3д) Штамм 5ж) Штамм 7и) Штамм 9л) Штамм 11н) Штамм 13п) Штамм 15м) Штамм 12о) Штамм 14

204. Рисунок 1. Колонии штаммов L. edodes, выращенные на плотной питательной среде С А.а) Штамм 1г) Штамм 4з) Штамм 8е) Штамм 6в) Штамм 3д) Штамм 5ж) Штамм 7и) Штамм 9л) Штамм 11н) Штамм 13п) Штамм 15м) Штамм 12о) Штамм 14

205. Рисунок 2. Колонии штаммов L. edodes, выращенные на плотной питательной среде ПАК.1. Щв) Штамм 3г) Штамм 4д) Штамм 5е) Штамм 6ж) Штамм 7з) Штамм 8а) Штамм 1п) Штамм 15л) Штамм 11м) Штамм 12н) Штамм 13о) Штамм 14и) Штамм 9

206. Рисунок 3. Колонии штаммов Ь. edod.es, выращенные на плотной питательной среде КГА.в) Штамм 3д) Штамм 5ж) Штамм 7г) Штамм 4е) Штамм 6з) Штамм 8а) Штамм 1