Создание коллекции инсерционных мутантов и идентификация генов, контролирующих морфогенез у Arabidopsis thaliana тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.15, кандидат биологических наук Томилова, Наталья Борисовна

• Томилова, Наталья Борисовна
• кандидат биологических наук
• 2000

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Томилова, Наталья Борисовна

1 Введение

2 Обзор литературы.

2.1 Методология исследования структурно - функциональной организации генома у высших растений

2.1.1 Состояние проблемы

2.1.2 Установление связи между структурой и функцией генов

2.1.3 Прямая и обратная генетика

2.2 Инсерционный мутагенез

2.2.1 Использование транспозонов для инсерционного мутагенеза растений

2.2.2 Использование Т-ДНК для инсерционного мутагенеза растений

2.3 АгаЫйор$1$ ИгаИапа как модельный объект молекулярно генетических исследований

2.3.1 Организация генома и общие физиологические характеристики развития

2.3.2 Оценка количества независимых инсерций, необходимых для «насыщения» генома А. ЛаИапа

2.3.3 Коллекции трансгенных растений

2.3.4 Морфологические мутанты

2.3.4.1 Фитогормоны

2.3.4.1.1 Общая характеристика и классификация

2.3.4.1.2 Характеристика «гормональных» мутантов

2.3.4.2 Регуляторные системы А. ЙшНапа

2.3.4.2.1 Общие характеристики регуляторных элементов

2.3.4.2.2 Семейство MYB - подобных элементов

2.3.4.2.3 Белки, содержащие F - box

2.4 Использование методов компьютерного анализа для идентификации генов и оценки функции их продуктов

2.4.1 Национальный центр биотехнологической информации (NCBI

2.4.2 Компьютерные программы и базы данных для структурно -функционального анализа генома A. thaliana

2.5 Итоги

3 Материалы и методы.

3.1 Генетический материал

3.2 Штаммы бактерий и плазмиды, использованные в работе

3.3 Среды, использованные в работе

3 .3.1 Среды для культивирования бактерий

3.3.2 Среды для культивирования растений Л thaliana

3.3.3 Антибиотики, использованные в работе

3.4 Поверхностная стерилизация семян A thaliana

3.5 Культивирование растений A. thaliana в стерильных условиях

3.6 Агробактериальная трансформация A. thaliana

3.7 Отбор трансформантов в Т2 поколении

3.8 Трансформация штаммов Е. coli

3.9 Трансформация A. tumefaciens

3.10 Ведение асептических культур тканей растений Л. thaliana и спасение летальных мутантных форм

3.11 Гистохимическое определение экспрессии ß - глюкуронидазы тканях растений А. thaliana

3.12 Выделение геномной ДНК из тканей А. thaliana для ПЦР

3.13 Выделение ДНК из тканей A. thaliana для клонирования и блот -гибридизации

3.14 Выделение плазмидной ДНК из клеток бактерий

3.15 Препаративное выделение плазмидной ДНК из штаммов Е. coli тепловым методом

3.16 Очистка ДНК от примесей белков

3.17 Освобождение от РНК

3.18 Хроматографическая очистка ДНК

3.19 Очистка ДНК при помощи электрофореза

3.20 Лигирование по тупым концам ДНК ПЦР - фрагмента в векторную плазмиду pGEM7Zf

3.21 Блот - гибридизация по Саузерну

3.22 Тестирование ДНК растений при помощи ПЦР

3.23 Скрининг бактериальных колоний

3.24 ПЦР - амплификация области геномной ДНК Л. thaliana, примыкающей к Т - ДНК инсерции

3.24.1 Метод «TAIL» - ПЦР

3.25 Секвенирование ДНК

3.26 Сегрегационный анализ растений

4 Результаты и обсуждение

4.1 Создание коллекции морфологических инсерционных мутантов

4.1.1 Создание коллекции трансгенных растений

4.1.1.1 Характеристика векторов

4.1.1.2 Отбор трансгенных растений, полученных с использованием вектора pLD

4.1.1.2.1 Отбор по генетическим маркерам Т - области

4.1.1.2.2 Определение числа Т - ДНК инсерций в геноме отобранных растений методом блот - гибридизации по Саузерну

4.1.1.3 Отбор трансгенных растений, полученных с использованием вектора рРСУЮМ

4.1.1.4 Коллекция трансгенных растений

4.1.2 Отбор фенотипически регистрируемых мутантов

4.1.2.1 Морфологически измененные мутантные линии растений, отобранные в Т2 поколении

4.1.2.1.1 Фертильные растения

4.1.2.1.2 Растения со сниженной фертильностью

4.1.2.1.3 Стерильные растения

4.1.2.1.4 Итоги анализа растений, отобранных в Т2 поколении

4.1.2.2 Линии растений, отобранные в ТЗ поколении

4.1.2.3 Использование гормонов для спасения летальных мутантов

4.1.2.3.1 Подбор гормональных сред для спасения летальных проростков

4.1.2.3.1.1 Индукция и формирование каллуса

4.1.2.3.1.2 Индукция корней

4.1.2.3.2 Спасение летальных проростков, выщепляющихся в ТЗ поколении растений

4.1.2.4 Классификация полученных мутантных линий по фенотипу

4.1.2.5 Итоги анализа отобранных морфологических мутантов

4.2. Идентификация гена, мутация в котором обуславливает возникновение некрозов семядолей при развитии проростков А. ИгаЫапа

4.2.1 Мутант с некрозами семядолей А. (ИаНапа

4.2.1.1 Кинетика развития визуально регистрируемых мутантов

4.2.1.2 Сниженная жизнеспособность визуально регистрируемых мутантов

4.2.2 Анализ расщепления по фенотипу в четвертом после трансформации

Т4) поколении растений линии

4.2.3 Косегрегационный анализ

4.2.4 Амплификация участка геномной ДНК мутанта 137, прилегающего к Т-ДНК инсерции

4.2.5 Клонирование амплифицированного фрагмента ДНК

4.2.6 Определение нуклеотидной последовательности ДНК амплифицированного фрагмента

4.2.7 Компьютерный анализ полученных данных

4.2.7.1 Локализация мутантного гена

4.2.7.2 Анализ структурно-функциональной организации последовательности ДНК A. thaliana вблизи сайта интеграции

Т - ДНК

4.2.7.3 Анализ возможного механизма действия пептида, кодируемого ОРС

5 Выводы

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Создание коллекции инсерционных мутантов и идентификация генов, контролирующих морфогенез у Arabidopsis thaliana»

1.1. Актуальность темы.

Наиболее крупной и приоритетной проблемой, стоящей перед генетикой а последние годы, являлась проблема расшифровки полной нуклеотидной последовательности геномов высших организмов и, в первую очередь, человека. Решение этой проблемы потребовало создания принципиально новых методов анализа нуклеотидной последовательности и создания физических карт отдельных хромосом и генома в целом. Значение этих работ трудно переоценить, поскольку на их основе созданы компьютерные базы данных нуклеотидных последовательностей генов и их продуктов, разработаны обслуживающие и аналитические компьютерные программы.

Эти достижения принципиально меняют технологию процесса исследования структурно - функциональной организации генома. В частности, в последние годы все большее развитие получают методы недавно возникшего нового направления в науке - геномики.

Однако, быстрый прогресс в исследовании структурной организации генома привел к тому, что биологический смысл, функция уже расшифрованных нуклеотидных последовательностей в большинстве случаев остается непонятной. В результате, в настоящее время на первый план выходит проблема исследования функциональной значимости известных последовательностей нуклеотидов.

Это в полной мере относится и к исследованию такого бурно развивающегося направления в генетике, какой является генетика высших растений. Интерес к этому направлению понятен, поскольку наряду с фундаментальным он имеет и существенное прикладное значение. Уже сейчас введены в практику десятки видов трансгенных растений, имеющих хозяйственно - полезное значение, таких как трансгенная соя, кукуруза, рис, 8 картофель, подсолнечник и др. В перечень приоритетных, интенсивно исследуемых видов растений включен и А. ЖаИапа, поскольку особенности физиологии развития и структуры генома делают его чрезвычайно перспективным объектом при исследовании фундаментальных закономерностей организации генома высших растений.

Основным методом исследования функции отдельных генов и их сочетаний у А. гкаНапа является метод инсерционного мутагенеза. При этом в качестве инсерций используются экзогенные мобильные элементы и Т -ДНК агробактериальных плазмид.

Наличие расшифрованной полной нуклеотидной последовательности генома А. ?НаНапа, представленной в специальных базах данных, позволяет в полной мере использовать при исследовании генома А. МаИапа принципы как прямой, так и обратной генетики. Однако, необходимым условием при реализации этих двух подходов является создание представительной коллекции трансгенных растений, геном которых содержит инсерцию. Наличие такой коллекции позволяет осуществлять отбор интересующих нас мутантов как по фенотипу, так и по генотипу.

В связи с вышесказанным сформулированы цели и задачи данной работы.

1.2. Цель и задачи исследования.

Цель настоящей работы заключается в получении коллекции инсерционных морфологических мутантов А. гНаНапа и идентификации мутантных генов.

В процессе работы решались следующие задачи:

1. Получение коллекции трансгенных растений А. ЖаИапа, содержащих в своем геноме инсерции Т - области векторов рЫ)3 и рРСУЫЖ;

2. Получение коллекции морфологических инсерционных мутантов А. ЖаИапа и их генетический и молекулярно - генетический анализ; 9

3. Идентификация гена A. thaliana, инсерция в котором приводит к возникновению некрозов на семядолях, и компьютерный анализ его возможного продукта.

1.3. Научная новизна.

Создана и с помощью генетического и молекулярно - генетического анализа охарактеризована коллекция инсерционных морфологических мутантов A. thaliana, содержащая 70 рецессивных и 5 доминантных мутантов.

Впервые идентифицирован и функционально охарактеризован ген А. thaliana, инсерционная мутация в котором приводит к развитию некротических пятен на семядолях проростков. При помощи компьютерного анализа установлено, что кодируемый этим геном продукт представляет собой ранее не охарактеризованный полипептид, содержащий в своем составе «F - box».

1.4. Практическая значимость работы.

Создана коллекция трансгенных растений A. thaliana, геном которых содержит инсерции Т - ДНК плазмиды pLD3 или pPCVRN4. Доля мутантных генов, несущих инсерции Т - ДНК, в созданной коллекции составляет величину порядка 12 - 18 % от полного их числа в геноме А. thaliana.

Разработан метод «спасения» деталей при помощи сред, содержащих экзогенные гормоны, который позволяет проводить идентификацию фенотипа и генетический анализ летальных мутантов.

Из коллекции трансгенных растений отобрана и охарактеризована группа морфологических мутантов, дальнейший анализ которых представляет интерес для исследования генетического контроля морфогенеза A. thaliana.

10

2. Обзор литературы.

Заключение диссертации по теме «Генетика», Томилова, Наталья Борисовна

5. Выводы.

1. Создана коллекция трансгенных растений A. thaliana, геном которых содержит инсерцию Т-ДНК плазмиды pLD3 или pPCVRN4. Показано, что доля мутантных генов, несущих инсерцию Т-ДНК, в созданной коллекции составляет величину порядка 12-18 % от общего их числа в геноме А. thaliana.

2. Из этой коллекции отобрано и с помощью генетического и молекулярно -генетического анализа охарактеризовано 75 линий растений, 5 из которых являются доминантными, а 70 - рецессивными инсерционными мутантами, имеющими различные морфологические нарушения.

3. Использование метода «спасения» леталей на средах, содержащих экзогенные гормоны, позволило идентифицировать фенотип и генетически охарактеризовать шесть рецессивных летальных мутантов и один доминантный стерильный мутант.

4. С помощью блот - гибридизации показано, что геном клеток мутантной линии 137 имеет одну инсерцию Т - ДНК плазмиды pLD3.

5. С помощью сегрегационного и косегрегационного анализа установлено, что эта инсерция лежит в основе морфологической мутации, проявляющейся как моногенный признак с неполным доминированием.

6. Установлено, что потеря функции гена в результате инсерции Т-ДНК у растений линии 137 заметным образом влияет лишь на определенный этап развития растений.

7. С помощью метода «TAIL» - ПЦР амплифицирован фрагмент растительной ДНК генома мутантной линии 137, примыкающий к левому бордеру инсерции, и, после клонирования амплифицированного фрагмента в бактериальную плазмиду, определена его нуклеотидная последовательность.

212

Выражаю глубокую благодарность:

Своим научным руководителям д.б.н. проф. Тарасову В.А. и к.б.н. Огарковой О.А за постоянную помощь в решении экспериментальных и организационных проблем, обсуждении результатов работы, и неоценимую помощь в работе в целом; к.б.н. Ежовой Т.А. и к.б.н. Солдатовой О.П. (каф. генетики и селекции Биологического факультета МГУ им. М.В. Ломоносова) за помощь в выращивании трансформантов Т1 поколения, сборе семян, сегрегационном анализе некоторых морфологических мутантов, проведении эмбрионального теста; к.б.н. Кочиевой А.З. (лаб. генетики растений ИОГен им. Н.И.Вавилова РАН) за консультации по методам извлечения окружений Т-ДНК инсерций и транспозонов, помощь в подборе условий проведения "ТА1Ь"-ПЦР и подборе праймеров к Т-области векторов системы рВ1 для метода "ТА1Ь"-ПЦР; к.б.н. Сидоруку К.В. (лаб. белковой инженерии ГосНИИ "Генетика") за консультации и конструктивные беседы по проведению секвенирования фрагментов ПЦР и работы в целом; к.б.н. Шайхаеву Г.О. (ИОГен им. Н.И.Вавилова РАН) за консультации по вопросу подбора режимов ПЦР, подбор и проверку реактивов для ПЦР; д.б.н., проф. Асланяну М.М. и к.б.н. Хадеевой Н.В. за рецензию данной работы и высказанные ценные замечания; всем сотрудникам Института общей генетики им. Н.И.Вавилова РАН за доброжелательное отношение и помощь в работе.

213

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Томилова, Наталья Борисовна, 2000 год

1. Байдербек Б. Опухоли растений. М.: Колос, 1981. 308 с.

2. Гапеева Т.А., Огаркова O.A., Тарасов В.А., Волотовский И.Д. Новые вектора для трансформации двудольных растений // Генетика. 1995. Т. 31. №8. С. 1085-1091.

3. Гапеева Т.А Инсерционный мутагенез в клетках Arabidopsis thaliana (L.) Heynh: дис. канд. биол. наук. М.: Институт общей генетики им. Н.И.Вавилова РАН, 1996. 166 с.

4. Гловер Д. Клонирование ДНК // М.: Мир, 1988. 538 с.

5. Досон Р., Эллиот Д., Эллиот У., Джонс К. Справочник биохимика // М.: Мир, 1991. 544 с.

6. Дрейпер Дж., Скотт Р., Армитидж Ф., Уолден Р. Генная инженерия растений // М.: Мир, 1991. 408 с.

7. Ежова Т.А., Солдатова О.П., Коф Э.М. Участие гена abruptus, контролирующего морфогенез Arabidopsis thaliana (L.) Heynh в регуляции роста и морфогенеза в культуре in vitro II Физиология растений. 1999. Т. 46. № 6. С. 865-870.

8. Зенгбуш П.С. Молекулярная и клеточная биология // М.: Мир, 1982. Т. 13.1149 с.

9. Квитко К.В. Асептическая культура Arabidopsis thaliana (L.) Heynh и перспективы ее использования в ботанических исследованиях // Вестник Ленинградского Университета. Сер. биол. 1960. Т. 15. №3. С. 47-56.

10. Ли А., Тинланд Б. Интеграция Т-ДНК в геном растений: прототип и реальность // Физиология растений. 2000. Т. 47. № 3. С. 354-359.

11. Лукин А.Л. Векторы для инсерционного мутагенеза и создание тестерных линий трансгенных двудольных растений: дис. канд. биол. наук. М.: Институт общей генетики им. Н.И. Вавилова РАН, 1993. 138 с.214

12. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Молекулярное клонирование // М.: Мир, 1984. 480 с.

13. Падегимас Л., Шульга O.A., Скрябин К.Г. Тестирование трансгенных растений при помощи полимеразно-депной реакции. // Молекулярная биология. 1993. Т. 27. С. 947-951.

14. Патрушев Л.И. Экспрессия генов // М.: Наука, 2000. 526 с.

15. Сартбаев М.М., Тарасов В.А. Регенерация фертильных растений из трансформированных клеток незрелых зародышей Arabidopsis thaliana (L.) Heynh II Генетика. 1992. T. 28. № 3. С. 202-207.

16. Сингер M., Берг П. Гены и геномы // М.: Мир, 1998. Т. 1-2. 765 с.

17. Томилов А А, Томилова Н.Б., Огаркова O.A., Тарасов В.А. Инсерционный мутагенез Arabidopsis thaliana: Увеличение эффективности трансформации прорастающих семян в результате предобработки их ультразвуком // Генетика. 1999. Т. 35. № 9. С. 12141222.

18. Уоринг Ф., Филлипс И. Рост растений и дифференцировка // М.: Мир, 1984.512 с.

19. Филипенко Е.А., Филипенко М.Л., Мурашева C.B., Денеко Е.В., Загорская A.A., Сидорчук Ю.В. Анализ сайтов встраивания Т-ДНК у трансгенных растений табака с мутантным фенотипом // Доклады Академии Наук. Т.370. № 2. С. 273-276.

20. Aeschbacher A.R., Hauser М.Т., Feldmann К.А., Benfey P.N. The SUBRE gene is required for normal cell expansion in Arabidopsis // Genes & Development. 1995. V. 9. P. 330-340.215

21. Allen M.J., Collick A., Jeffreus A.J. Use of vectorette and subvectorette PCR to isolate transgene flanking DNA // PCR Methods Appl. 1994. V. 4. P. 71-75.

22. Altschul S.F., Gish W., Miller W., Myers E.W., Lipman D.J. Basic local alignment search tool // J. Mol. Biol. 1990. V. 215. P. 403-410.

23. Altschul S.F., Madden T.L, Schaffer A.A., Zhang J., Zhang Z.5 Miller W., Lipman D.J. Gapped BLAST and PSIBLAST: A new generation of protein database search programs // Nucleic Acids Res. 1997. V. 25. P. 3389-3402.

24. Alwen A., Moreno R.M.B., Vicente 0., Heberle-Bors E. Plant endogenous (3-glucuronidase as a reporter gene in transgenic plants // Transgenic Research. 1992. V.l.P. 63-70.

25. Ambrose B.A., Lemer D.R., Ciceri P., Padilla C.M, Yanofsky M.F., Schmidt R.J. Molecular and genetic analyses of the Silky 1 gene reveal conservation in floral organ specification between eudicots and monocots // Mol. Cell. 2000. V. 5. P. 569-579.

26. An G. High efficiency transformation of culture tobacco cells // Plant Physiol. 1985. V. 79. P. 568-570.

27. Arumuganathan K., Earle E.D. Nuclear DNA content in some important plant species//Plant Mol. Biol. Rep. 1991. V. 9. P. 208-218.

28. Azpiroz R., Wu Y., LoCascio C., Feldmann K.A. An Arabidopsis brassinosteroid-dependent mutant is blocked in cell elongation // Plant Cell. 1998. V. 10. P. 1677-1690.

29. Azpiroz-Leehan R., Feldmann K.A. T-DNA insertion mutagenesis in Arabidopsis: going back and forth // TIG. 1997. V. 13. № 4. C. 152-156.

30. Bai C., Sen P., Hofinann K., Ma L., Goebl M., Harper J.W., Elledge S.J. SKP1 connects cell cycle regulators to the ubiquitin proteolysis machinery through a novel motif, the F-box // Cell. 1996. V. 86. № 2. P. 263-274.

31. Ballinger D.G., Benzer S. Targeted gene mutations in Drosophila II Proc. Natl. Acad. Sci. 1989. V. 86. P. 9402-9406.216

32. Bancroft I., Jones J.D., Dean C. Heterologous transposon tagging of the DRL1 locus in Arabidopsis // Plant Cell. 1993. V. 5. P. 631-638.

33. Baulcombe D.C. RNA as a target and an initiator of post-transcriptional gene silencing in transgenic plants // Plant Mol. Biol. 1996. V. 32. P. 79-88.

34. Bechtold N., Ellis J., Pelletier G. In planta Agrobacterium mediated gene transfer by infiltration of adult Arabidopsis thaliana plants // Paris: C. R. Acad. Sci. Sciences de la vie / Life sciences, 1993. V. 316. P. 1194-1199.

35. Bechtold N., Pelletier, G. In planta Agrobacterium mediated transformation of adult Arabidopsis thaliana plants by vacuum infiltration // Methods Mol. Biol. 1998. V. 82. P. 259-266.

36. Bender J., Fink G.R. A Myb homologue, ATR1, activates tryptophan gene expression in Arabidopsis II Proc. Natl. Acad. Sci. 1998. V. 95. № 10. P. 5655-5660.

37. Benson D.A., Boguski M.S., Lipman D.J., Ostell J., Ouellette F.F. GenBank // Nuc. Acid. Res. 1998. V. 26. № 1. P. 1-7.

38. Bevan M., Bancroft I., Bent E., Love K., Goodman H., Dean C., Bergkamp R., Dirkse W., Vanstaveren M., Stiekema W. Analysis of a 1.9 Mb of contigous sequence from chromosome 4 of Arabidopsis thaliana II Nature. 1998. V. 391. P. 485-488.

39. Bianchi F., Cornelissien P.T.J., Gerats A.M.G., Hogervorst J.M.W. Regulation of gene action in Petunia hybrida: unstable alleles of a gene for flower coloration//Theor. Appl. Genet. 1978. V. 53. № 4. P. 157-167.1.l

40. Bilang R., Potrykus I. Transformation in Arabidopsis thaliana II In: Bajaj Y.P.S., Ed. Biotechnology in Agriculture and Forestry (Plant protoplast and Genetic Ingenering). III. V. 22. Berlin Heidelberg: Springer - Verlag, 1993. P. 123-134.

41. Booth A., Linnean J. 1959. В: Уоринг Ф., Филлипс И. Рост растений и дифференцировка. М.: Мир, 1984. 512 с.

42. Bouchez D., Camilleri С., Caboshe М. A binary vector based on Basta resistance for in planta transformation of Arabidopsis thaliana II Paris: C. R. Acad. Sei. Sciences de la vie / Life sciences, 1993. V. 316. P. 1188-1193.

43. Bouchez D., Höfte H. Functional genomics in plants // Plant Physiol. 1998. V. 118. P. 725-732.

44. Bowman J.L., Smyth D.R., Meyerowitz E.M. Genes directing flower development in Arabidopsis 11 Plant Cell. 1989. V. LP. 37-52.

45. Brendel V., Kleffe J., Carle-Urioste J. C., Walbot V. Prediction of splice sites in plant pre-mRNA from sequence properties // J. Mol. Biol. 1998. V. 276. P. 85-104.

46. Buffum J.M. Sequencing support service. Cleveland, Ohio: United States Biochemical, 1990. 460 p.

47. Burg S.P. Regulateurs naturels de la crossance vegetable // Edition de la Rech. Sei. 1964. P. 718 -724.

48. Bürge С., Karlin S. Prediction of complete gene structures in human genomic DNA// J. Mol. Biol. 1997. V. 268. P. 78-94.

49. Byzova M.V., Franken J., Aarts M.G.M., Almeida-Engler J.D., Engler G., Mariani C., Lookeren-Campagne M.M.V., Angenent G.C. Arabidopsis218

50. STERILE APETALA, a multifunctional gene regulating inflorescence, flower, and ovule development // Genes Dev. 1999. V. 13. P. 1002-1014.

51. Castle L.A., Errampalli D., Atherton T.A., Franzmann L.A., Yoon E.S., Meinke D.W. Genetic and molecular characterization of embryonic mutants identified following seed transformation in Arabidopsis II Mol. Gen. Genet. 1993. V. 241. P. 504-514.

52. Castle L.A., Meinke D.W. Fusca gene of Arabidopsis encodes a novel protein essential for plant development// Plant Cell. 1994. V. 6. № 1. P. 15-41.

53. Chang C., Meyerowitz E.M. Molecular cloning and DNA sequence of the Arabidopsis thaliana alcochol dehydrogenase gene // Proc. Natl. Acad. Sci. 1986. V.83. №5. P. 1408-1412.

54. Chang S.S., Park S.K., Kim B.C., Kang B.J., Kim D.U., Nam H.G. Stable genetic transformation of Arabidopsis thaliana by Agrobacterium inoculation in planta I I Plant J. 1994. V.5. P. 551-558.

55. Charrasse S., Carena I., Brondani V., Klempnauer K.H., Ferrari S. Degradation of B-Myb by ubiquitin-mediated proteolysis: involvement of the Cdc34-SCF(p45Skp2) pathway // Oncogene. 2000. V. 19. № 26. P. 29862995.

56. Chaudhury A., Letham S., Craig S., Dennis E.S. ampI-A mutant with high cytokinin levels and altered embryonic pattern, faster vegetative growth, constitutive photomorphogenesis, and precocious flowering // Plant J. 1993. V. 4. P. 907-916.

57. Chaudhury A., Okada K., Raikhel N.V., Shinozaki K., Sundaresan V. A weed reaches new heights down under//Plant Cell. 1999. V. 11. P. 1817-1825.

58. Cheng S., Chang S.-Y., Gravitt P., Respess R. Long PCR // Nature. 1994. V. 369. P. 684-685.

59. Cheysen G., Villarrowl R., Van Montagu M. Illegitimate recombination in plants: a model for T-DNA integration // Genes Dev. 1991. V. 5. P. 287-297.219

60. Choe S., Dilkes B.P., Fujioka S., Takatsuto S., Sakurai A., Feldmann K.A. The DWF4 gene of Arabidopsis encodes a cytochrome P450 that mediates multiple 22a-hydroxylation steps in brassinosteroid biosynthesis // Plant Cell. 1998. V. 10. P. 231-243.

61. Chory J., Peto C., Feinbaum L., Pratt L., Ausubel F. Arabidopsis thaliana mutant that develops as a light-growth plant in the absence of light // Cell. 1989. V. 58. P. 991-999.

62. Chory J. Out of darkness: mutants reveal pathways controlling light-regulated development in plants // Trends Genet. 1993. V. 9. P. 167-172.

63. Christensen S.K., Dagenats N., Chory J., Weigel D. Regulation of auxin response by the protein kinase PINOIDII Cell. 2000. V. 100. P. 469-478.

64. Clouse S.D. Plant development: a role for sterols in embryogenesis // Current Biology. 2000. V. 10. P. 601-604.

65. Clouse S.D., Langford M., McMorris T.C. A brassinosteroid-insensitive mutant in Arabidopsis thaliana exibits multiple defects in growth and development//Plant Physiol. 1996. V. 111. P. 671-678.

66. Coen E.S., Robbins T.P., Almeida J. Consequences and mechanism of transposition in Antirrhinum majus II In: Mobile DNA. Washington DC: Am. Soc. Microbiol., 1989. P. 413-436.

67. Cornu A. Systems instables induits chez in petunia // Mutation Res. 1977. V. 42. № 2. P. 235-248.

68. Craig K.L., Tyers M. The F-box: a new motif for ubiquitin dependent proteolysis in cell cycle regulation and signal transduction // Prog. Biophys. Mol. Biol. 1999. V. 72. № 3. P. 299-328.220

69. Cranford N.M., Campbell W.H., Davis R.W. Nitrate reductase from squash: cDNA cloning and nitrate regulation // Proc. Natl. Acad. Sci. 1986. V. 83, № 21. P.8073-8076.

70. Darvin C. The power of movement in plants // London: J. Murray, 1880. B: Уоринг Ф., Филлипс И. Рост растений и дифференцировка. М.: Мир, 1984. 512 с.

71. Davies В., Motte P., Keck Е., Saedler Н., Sommer Н., Schwarz-Sommer Z. PLENA and FARINELLI: redundancy and regulatory interactions between two Antirrhinum MADS-box factors controlling flower development // EMBO J. 1999. V. 18. P. 4023-4034.

72. Davies P.J., Ed. The plant hormones: Their nature, occurrence, and function. In: Plant hormones and their role in plant growth and development // Dordrecht, The Netherlands: Martinus Nijhoff, 1987. P. 1-11.

73. Deng X.W., Caspar Т., Quail P.H. cop.: A regulatory locus involved in light-controlled development and gene expression in Arabidopsis II Genes Dev. 1991. V. 5. P. 1172-1182.

74. DeRisi J.L., Iyer V.R., Brown P.O. Exploring the metabolic and genetic control of gene expression on a genomic scale // Science. 1997. V. 278. P. 680-686.

75. Deshayes A. Cell frequencis of green somatic variations in the il chlorophyll mutant of Nicotiana tabacum var. Samsun // Theoret. Appl. Genet. 1979. V. 55. №4. P. 145-152.

76. Ecker J.R., Theologis A. Ethylene: a unique plant signaling molecule // In Arabidopsis. New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1994. P. 485521.

77. Egea-Cortines M., Saedler H., Sommer H. Ternary complex formation between the MADS-box proteins SQUAMOSA, DEFICIENS and GLOBOSA is involved in the control of floral architecture in Antirrhinum majus II EMBO J. 1999. V. 18. P. 5370-5379.221

78. Erlich H.A. PCR technology. Principles and application for DNA amplification // New York, London, Tokyo, Melbourne, Hong Kong: M Stockton Press, 1989. 140 p.

79. Errampalli D., Patton D., Castle L., Mickelson L., Hansen K., Schnall J., Feidmann K., Meinke D. Embryonic lethals and T-DNA insertional mutagenesis in Arabidopsis II Plant Cell. 1991. V. 3. P. 149-157.

80. Estelle M., Klee H.J. Auxin and cytokinin in Arabidopsis II In Arabidopsis. New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1994. P. 555-578.

81. Estelle M.A., Somerville C.R. The mutants of Arabidopsis II Trends in Genet. 1986. V. 2. № 3. P. 89-93.

82. Estelle M.A., Somerville C.R. Auxin-resistant mutants of Arabidopsis thaliana with an altered morphology // Mol. Gen. Genet. 1987. V. 206. P. 200206.

83. Evans M.L. Functions of hormones at the cellular level of organization // In: Scott T.K., Ed. Encyclopedia of plant rhysiology: Hormonal regulation of development. II. 1984. V. 10. P. 23-79.

84. Feidmann K. A., Marks D. M. Rapid and efficient regeneration of plants from explants of Arabidopsis thaliana 11 Plant Sci. 1986. V. 47. P. 63-69.

85. Feidmann K.A., Marks M.D. Agrobacterium-mQdiated transformation of germinating seeds of Arabidopsis thaliana: A non-tissue culture approach // Mol. Gen. Genet. 1987. V. 208. P. 1-9.

86. Feidmann K. A., Marks M. D., Christianson M. L., Quatrano R. S. A Dwarf mutant of Arabidopsis generated by T-DNA insertion mutagenesis // Science. 1989. V. 243. P. 1351-1354.

87. Feidmann K.A. T-DNA insertion mutagenesis in Arabidopsis: Mutational spectrum//Plant J. 1991. V. l.P. 71-82.

88. Feidmann K.A. Seed transformation in Arabidopsis thaliana. II Gene transfer to Plants. Berlin e.a.: Springer Lab Manual, 1995. P. 11-18.222

89. Finkelstein R., Somerville C.R. Introduction of transposable elements into Arabidopsis II J. Cell Biochem. UCLA Symp. Molec. Cell Biol.: Abstr. New York: A.R. Liss, 1987. Suppl lib. P. 16.

90. Finkelstein R.R., Somerville C.R. Tree classes of abscisic acid (ABA)-insensitive mutations of Arabidopsis define genes that control overlapping subsets of ABA responses//Plant Physiol. 1990. V. 94. P. 1172-1179.

91. Finkelstein R.R., Zeevaart J.A.D. Gibberellin and abscisic acid biosynthesis and response // In Arabidopsis. New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1994. P. 523-553.

92. Finkelstein R.R., Lynch T.J. The Arabidopsis abscisic acid response gene AB15 encodes a basic leucine zipper transcription factor // Plant Cell. 2000. V. 12. P. 599-609.

93. Flanders D., Weng S., Petel F.X., Cherry J.M. AtDB, the Arabidopsis thafiana database and graphical-web-display of progress by the Arabidopsis Genome Initiative //Nucleic Acids Res. 1998. V. 26. P. 80-84.

94. Forsthoefel N.R., Wu Y., Schulz B., Bennett M.J., Feldmann K.A. T-DNA insertion mutagenesis in Arabidopsis: prospects and perspectives // Aust. J. Plant Physiol. 1992. V. 19. P. 353-366.

95. Fransz P. About Arabidopsis II 1998. http/www.arabidopsis.org.

96. Franzmann L.H., Yoon E.S., Meinke D.W. Saturating the genetic map of Arabidopsis thaliana with embryonic mutations // Plant J. 1995. V. 7. P. 341350.

97. Frey M., Stettner C., Gierl A. A general method for gene isolation in tagging approaches: amplification of insertion mutagenised sites (AIMS) // Plant J. 1998. V. 13. P. 717-721.

98. Fridborg I., Kuusk S., Moritz T., Sundberg E. The Arabidpsis dwarf mutant shi exibits reduced gibberellin responses conferred by overexpression of a new putative zinc finger protein//Plant Cell. 1999. V. 11. P. 1019-1031.223

99. Frugier F., Poirier S., Satiat-Jeunemaitre B., Kondorosi A., Crespi M. A Kriippel-like zinc finger protein is involved in nitrogen-fixing root nodule organogenesis // Genes Dev. 2000. V. 14. P. 475-482.

100. Gamborg O.L., Phillips G.S. Plant Cell, tissue and organ culture. Fundamental methods // Berlin Heidelberg: Springer - Verlag, 1995. 358 p.

101. Gish W., States D. J. Identification of protein coding regions by database similarity search // Nature Genet. 1993. V. 3. P. 266-272.

102. Goldberg R.B., Hoshek G., Kamalay J.C. Sequence complexity of nuclear and polysomal RNA m leaves and tobacco plant // Cell. 1978. V. 14. № 1. P. 123131.

103. Goldsbrough A., Bevan M. New patterns of gene activity in plants detected using an Agrobacterium vector//Plant. Mol. Biol. 1991. V. 16. P. 263-269.

104. Goodman H.M., Ecker J.R., Dean C. The genome of Arabidopsis thaliana II Proc. Natl. Acad. Sci. 1995. V. 92. P. 10831-10835.

105. Gray W.M., Estelle M. Biochemical genetics of plant growth // Current Opinion in Biotechnology. 1998. V. 9. P. 196-201.

106. Green R.M., Tobm E.M. Loss of the circadian clock-associated protein I m Arabidopsis results in altered clock-regulated gene expression // Proc. Natl. Acad. Sci. 1999. V. 96. № 7. P. 4176-4179.

107. Greenwald I. lin-12, a nematode homeotic gene, is homologous to a set of mammalian proteins that includes epidermal growth factor // Cell. 1985. V. 43. P. 583-590.

108. Gridley T., Soriano P., Jaenisch R. Insertional mutagenesis in mice // Trends Gen. 1987. V. 3.P. 162-166.

109. Guzman P., Ecker J.R. Exploiting the triple response of Arabidopsis to identify ethylene-related mutants // Plant Cell. 1990. V. 2. P. 513-523.

110. Hansch R.,Koprek T., Mendel R.R., Schulze J. An improved protocol for eliminating endogenous ^-glucuronidase background in barley // Plant Science. 1995. V.105. P. 63-69.

111. Haekema A., Hirsh P.R., Hooykaas P.J.J., Schilperoort R.A. A binary plant vector strategy based on separation of Vir and T-region of the A. tumefaciens Ti-plasmid// Nature. 1983. V. 303. P. 179-180.

112. Hamphery-Smith I., Blackstock. Proteome analysis: genomics via the output rathe than the input code // J. Protein Chem. 1997. V. 16. P. 537-544.

113. Hanahan D. 1983. In: PromegaLife Science Catalog. 1999. P. 23.15-23.16.

114. Hartmann U., Hohmann S., Netteshein K., Wisman E., Saedler H., Huiser P. Molecular cloning of SVP: a negative regulator of the floral transition in Arabidopsis II Plant J. 2000. V. 21. P. 351-360.

115. Hehl R., Baker B. Induced transposition of Ds by a stable Ac in crosses of transgenic tobacco plants // Mol. Gen. Genet. 1989. V. 217. № 1. P. 53-59.

116. Herman P.L., Marks M. D. Trichome development in Arabidopsis thaliana. II. Isolation and complementation of the GLABROUS I gene // Plant Cell. 1989. V.l.P. 1051-1055.

117. Herman P.L., Jacobs A., Van Montagu M., Depicker A. Plant chromosome marker gene fusion assay for study of normal and truncated T-DNA integration events //Mol. Gen. Genet. 1990. V. 224. № 2. P. 148-156.

118. Hirsch R.E., Lewis B.D., Spalding E.P., Sussman M.R. A role for AKT1 potassium channel in plant nutrition // Science. 1998. V. 280. P. 918-921.225

119. Hirsch С., Ploegh H.L. Intracellular targeting of the proteasome // Trends in Cell Biology. 2000. V. 10. P. 268-272.

120. Holm R.E., Abeles F.B. 1967. В: Уоринг Ф., Филлипс И. Рост растений и дифференцировка//М.: Мир, 1984. 512 с.

121. Holmberg N., Btillow L. Improving stress tolerance in plants by gene transfer //Reviews. 1998. V. 3. № 2. P. 61-66.

122. Hooley R. Gibberellins: Perception, transduction, and responses // Plant Mol. Biol. 1994. V. 26. P. 1529-1555.

123. Hou Y., von Arnim A.G., Deng X.W. A new class of Arabidopsis constitutive photomorphogenic genes involved in regulatinin cotyledon development // Plant Cell. 1993. V. 5. P. 329-339.

124. Ни C., Chee P.P., Chesney R.H., Zhou J.H., Miller P.D., O'Brien W.T. Intrinsic GUS-like activities in seed plants // Plant Cell Rep. 1990. V.9. P. 1-5.

125. Huang S., Raman A.S., Ream J.E., Fujiwara H, Cerny R.E., Brown S.M. Overexpression of 20-oxidase confers a gibberellin-overproduction phenotype in Arabidopsis II Plant Physiol. 1998. V. 118. P. 773-781.

126. Ingram G.C., Doyle S., Carpenter R., Schultz E.A., Simon R., Coen E.S. Dual role for fimbriata in regulating floral homeotic genes and cell division m Antirrhinum //EMBO J. 1997. V. 16. № 21. P. 6521-6534.226

127. Jacobsen S.E., Olszewski N.E. Mutations at the SPINDLY locus of Arabidopsis thaliana alter gibberellin signal transductions // Plant Cell. 1993. V. 5. P. 887-896.

128. James D.W., Lim E.J., Keller J., Plooy I., Ralston E., Dooner H.K. Directed tagging of the Arabidopsis FATTY ACID ELONGATION1 (FAE1J gene with the maize transposon Activator//Plant Cell. 1995. V. 7. P. 309-319.

129. Jefferson R.A., Kavanagh T.A., Bevan M.V. GUS fusions: p-glucuronidase as a sensitive and versatile gene fusion marker in higher plant // EMBO J. 1987. V. 6. P. 3901-3907.

130. Jin H., Martin C. Multifunctionality and diversity within the plant MYB-gene family//Plant Mol. Biol. 1999. V. 41. P. 577-585.

131. Jung J., Grossman K. 1985. Effectiveness of new terpenoid derivatives, abscisic asid and its methyl ester on transpiration and leaf senescence of barley//J. Plant Physiol. 1985. V. 121. P. 361-367.

132. Kado C.I., Liu S.-T. Rapid procedure for detection and isolation of large and small plasmids // J. Bacteriol. 1981. P. 1365-1373.

133. Kaiser K., Goodwin S.F. Site-selected transposon mutagenesis of Drosophila //Proc. Natt. Acad. Sci. 1990. V. 87. P. 1686-1690.

134. Katavic V., Haught G., Reed D., Martin M., Kunst L. In planta transformation of Arabidopsis thaliana // Mol. Gen. Genet. 1994. V. 245. P. 363-370.

135. Kauschmann A., Jessop A., Koncz C., Szekeres M., Willmitzer L., Altmann T. Genetic evidence for an essential role of brassinosteroids in plant development //Plant J. 1996. V. 9. P. 701-713.

136. Kende H. Ethylene biosynthesis // Annu. Rev. Plant. Physiol. Plant. Mol. Biol. 1993. V. 44. P. 283-307.227

137. Kende H., Zeevaart J.A.D. The five "classical" plant hormones // Plant Cell. 1997. V. 9. P. 1197-1210.

138. Kertbundit S., De Greve H., Deboeck F., Van Montagu M., Hernalsteens J. In vivo random P-glucoronidase gene fusions in Arabidopsis thaliana II Proc. Natl Acad. Sci. 1991. V. 88. P. 5212-5216.

139. Kieber J.J., Ecker J.R. Ethylene, it's not just for ripening anymore // Trends Genet. 1993. V. 9. P. 356-362.

140. Kirik V., Kolle K., Misera S., Baumlein H. Two novel MYB homologues with changed expression in late embryogenesis-defective Arabidopsis mutants // Plant Mol. Biol. 1998. V. 37. № 5. P. 819-827.

141. Klahre U., Noguchi T., Fujioka S., Takatsuto S., Yokota T., Nomura T., Yoshida S., Chua N.H. The Arabidopsis DIMINUTO/D WARFI gene encodes a protein involved in steroid synthesis // Plant Cell. 1998. V. 10. P. 1677-1690.

142. Kleckner N., Chan R.K., Tye B.-K., Botstein D. Mutagenesis by insertion of a drug-resistance element carrying an inverted repetition // J. Mol. Biol. 1975. V. 97. P. 261-275.

143. Kleckner N. Transposable elements in procariotes // Ann. Rev. Genet. 1981. V. 15. P. 341-403.

144. Kleffe J., Hermann K., Vahrson W., Wittig B., Brendel V. Logitlinear models for the prediction of splice sites in plant pre-mRNA sequences // Nucl. Acids Res. 1996. V. 24. P. 4718-4728. ■

145. Knapp S., Coupland G., Uhrig H., Starlinger P. Transposition of the maize transposable element Ac in Solanum tuberosum II Mol. Gen. Genet. 1988. V. 213. №2/3. P. 185-290.

146. Koes R., Souer E., Van Houwelingen A. Targeted gene inactivation in petunia by PCR-based selection of transposon insertion mutants // Proc. Natl. Acad. Sci. 1995. V. 92. P. 8149-8153.228

147. Koncz C., Martini N., Mayerholer R., Koncz-Kalman Z., Korber H., Redei G.P., Schell J. High-frequency T- DNA mediated gene tagging in plants // Proc. Natl. Acad. Sci. 1989. V. 86. P. 8467-8471.

148. Koncz C., Mayerhofer R., Koncz-Kalman Z., Nawrath C., Reiss B., Redei G. P., Schell J. Isolation of a gene encoding a novel chloroplast protein by T-DNA tagging in Arabidopsis thaliana // EMBO J. 1990. V. 9. P. 1337-1346.

149. Koncz C., Nemeth K., Redei G.P., Schell J. T-DNA insertional mutagenesis in Arabidopsis // Plant Mol. Biol. 1992. V. 20. P. 963-976.

150. Koncz C., Martini N, Szabados L., Hrouda M., Bachmair A., Schell J. Specialized vectors for gene tagging and expression studies // In Plant Molecular Biology Manual. V. B2. Dordrecht, The Netherlands: Kluwer Academic Press, 1994. P. 1-22.

151. Koornneef M., Van der Veen J.H. Induction and analysis of gibberellin sensetive mutants of Arabidopsis thaliana (L.) Heynh // Theor. Appl. Genet. 1980. V. 58. P. 257-263.

152. Koorneef M., Dellaert L.W.M., Van der Veen J.H. EMS and radiation-1 induced mutation frequences at individual loci in Arabidopsis thaliana (L.) Heynh//Mut. Res. 1982. V. 93. №> l. p. 109-123.

153. Koorneef M., Van Eden J., Hanhart C.J. Linkage map of Arabidopsis thaliana II J. Hered. 1983. V. 74. № 4. P. 165-172.

154. Kooter J.M., Mol J.N.M. Traz-w-inactivation of gene expression in plants // Current Opinion in Biotechnology. 1993. V. 4. P. 166-171.

155. Krek W. VHL takes HIFs breath away // Nat. Cell Biol. 2000. V. 2. № 7. P. 121-123.229

156. Krysan P.J., Young J.C., Tax F., Sussman M.R. Identification of transferred DNA insertions within Arabidopsis genes involved in signal transduction and ion transport //Proc. Natl. Acad. Sei. 1996. V. 93. P. 8145-8150.

157. Krysan P.J., Young J.C., Sussman M.R. T-DNA as an insertional mutagen in Arabidopsis II The Plant Cell. 1999. V. 11 P. 2283-2290.

158. Kubo H., Peeters A. J.M., Aarts M.G.M., Pereira A., Koornneef M. ANTHOCYANINLESS2, a homeobox gene affecting anthocyanin distribution and root development in Arabidopsis II Plant Cell. 1999. V. 11. P. 1217-1226.

159. Kumar D., Wareing P.F. 1972. В: Уоринг Ф., Филлипс И. Рост растений и дифференцировка//М.: Мир, 1984. 512 с.

160. Kushiro Т., Shibuya М., Ebizuka Y. Beta-amyrin synthase cloning of oxidosqualene cyclase that catalyzes the formation of the most popular triterpene among higher plants // Eur. J. Biochem. 1998. V. 256. № 1. P. 238244.

161. Laibach F. Zür frage nach der individualitai der Chromosomen im pflanzeinreich // Beich. Bot. Col. I Abt 1907. V. 22. P. 191-210.

162. Laibach F., 1943. In Meyerowitz E.M. History of Arabidopsis thaliana II http/www.arabidopsis.org. 1998.

163. Larkin J.C., Walker J.D., Bolognesi-Wmfield A.C., Gray J.C., Walker A.R. Allele-specific interactions between ttg and gll during trichome development in Arabidopsis thaliana II Genetics. 1999. V. 151. № 4. P. 1591-1604.

164. Lee M.M., Schiefelbein J. WEREWOLF, a MYB-related protem m Arabidopsis, is a position-dependent regulator of epidermal cell patterning // Cell. 1999. V. 99. P. 473-483.

165. Leutwiler L.S., Hough-Evans B.R., Meyerowitz E.M. The DNA o f A. thaliana //Mol. Gen. Gen. 1984. V. 194. P. 15-23.

166. Leutwiler L.S., Meyerowitz E.M., Tobin E.M. Structure and expression of three light-harvesting chlorophyll a/b binding proteins in Arabidopsis thaliana II Nucl. Acids Res. 1986. V. 14. № 10. P. 4051-4064.230

167. Levin J.Z., Meyerowitz E.M. UFO: an Arabidopsis gene involved in both floral meristem and floral organ development // Plant Cell. 1995. V. 7. № 5. P. 529-548.

168. Li J., Biswas M.G., Chao A., Russel D.W., Chory J. Conservation of function between mammalian and plant steroid 5a-reductases // Proc. Natl. Acad. Sci. 1997. V. 94. P. 3554-3559.

169. Liebman S.W., Newnam G. A ubiquitin-conjugating enzyme, RAD6, affects the distribution of Tyl retrotransposon integration positions // Genetics. 1993. V. 133. P. 499-508.

170. Liu Y.G., Whittier R.F. Thermal asymmetric interlaced PCR: automatable amplification and sequencing of insert end fragments from PI and YAC clones for chromosome walking // Genomics. 1995. V. 25. P. 674-681.

171. Liu Y.G., Mitsukawa N., Vazquez-Tello A., Whittier R.F. Generation of a high quality PI library of Arabidopsis thaliana suitable for chromosome walking//Plant J. 1995. V. 7. P. 351-358.

172. Liu L., White M.J., MacRae T. Transcription factors and their genes in higher plants. Functional domains, evolution and regulation // Eur. J. Biochem. 1999. V. 262. P. 247-257.

173. Theologis A. Arabidopsis thaliana chromosome 1 ВАС F13K23 sequence // NCBI. 2000. Submitted (18-FEB-2000).

174. Lloyd A.M., Bamason A.R., Rogers S.G. Transformation of Arabidopsis thaliana with Agrobacterium tumefaciens II Science. 1986. V. 234. № 4775. p. 464-466.

175. Lovegrove A., Barratt D.H.P., Beale M.H., Hooley R. Gibberellm-photoaffinity labelling of two polypeptides in plant plasma membranes // Plant J. 1998. V. 15. №3. P. 311-320.

176. Loveys B.R., Kriedemann P.E. 1973. В: Уоринг Ф., Филлипс И. Рост растений и дифференцировка. М.: Мир, 1984. 512 с.

177. Maluszynska J., Heslop-Harrison J.S. Localization of tandemly repeated DNA sequences m Arabidopsis thaliana // Plant J. 1991. V. I. P. 159-167.

178. Marchant A., Kargul J., May S.T., Muller P., Delbarre A., Perrot-Rechenmann C., Bennett M.J. AUX1 regulates root gravitropism in Arabidopsis by facilitating auxin uptake within root apical tissues // EMBO J. 1999. V.18. № 8. P. 2066-2073.

179. Marshall E., Pennisi E. Hubris and the human genome // Science. 1998. V. 280. P. 994-995.

180. Martienssen R.A. Functional genomics: probing plant gene function and expression with transposons // Proc. Natl. Acad. Sci. 1998. V. 95. P. 20212026.

181. Martin C., Paz-Ares J. MYB transcription factors in plants // Trends. Genet. 1997. V. 13. №2. P. 67-73.232

182. Martinez-Zapater J.M., Estelle M.A., Somerville C.R. A highly repeated DNA sequence in Arabidopsis thaliana // Mol. Gen. Genet. 1986. V. 204. № 3. P. 417-423.

183. Mattsson J., Sung Z.R., Berieth T. Responses of plant vascular systems to auxin transport inhibition//Development. 1999. V. 126. P. 2979-2991.

184. Mayerhofer R., Koncz-Kalman Z., Nawrath C., Bakkeren G., Crameri A., Angelis K., Redei G.P., Schell J., Hohn B., Koncz C. T-DNA integration: a mode of illegitimate recombination in plants // EMBO J. 1991. V. 3. P. 697704.

185. McClintock B. Mutable locus in maize // Carnegie Inst. Wash. Yearbook. 1948. V. 47. P. 155-169.

186. McKinney E.C., Ali N., Traut A., Feldmann K.A., Belostotsky D.A., McDowell J.M., Meagher R.B. Sequence-based identification of T-DNA insertion mutations in Arabidopsis: actm mutants act2-1 and act4-l II Plant J. 1995. V. 8. P. 613-622.

187. Meinke D.W., Sussex I.M. Enbrio-lethal mutants of Arabidopsis thaliana II Developmental Biology. 1979. V. 72. P. 50-61.

188. Meinke D.W. Embryo-lethal mutants of Arabidopsis thaliana II Applied Genetics. 1985. V. 69. P. 543-552.

189. Meinke, D.W., KoornneefM. Community Standards for Arabidopsis Genetics // Plant J. 1997. V. 12. № 2. P. 247-253.

190. Messing., Viera J. A new pair of M13 vectors for selecting either DNA strand of double digest restriction fragments // Gene. 1982. V. 19. № 3. P. 159-188.

191. Meyerowitz E.M., Pruitt R.E. Arabidopsis thaliana and plant molecular genetics // Science. 1985. V. 229. P. 1214-1218.

192. Meyerowitz E.M. Structure and organization of the Arabidopsis thalina nuclear genome // In Arabidopsis. (Meyerowitz E.M., Somerville C.R., eds). Cold Spring Harbor. NY: Cold Spring Harbor Laboratory Press. 1991. P. 2136.

193. Miao Z.-H., Lam E. Targeted disruption of the TGA3 locus in Arabidopsis thaliana // Plant J. 1995. V. 7. № 2. P. 359-365.

194. Mullis K.B., Faloona F.A. Specific systhesis of DNA in vitro via a polymerase-catalyzed cham reaction. // Methods Enzymol. 1987. V. 155. P. 335-348.

195. Murai N., Li Z., Kawagoe Y., Hayashimoto A. Transposition of the maize activator element in transgenic rice plants // Nucl. Acids Res. 1991. V. 19. P. 617-622.

196. Murray M.G., Palmer J.D., Cuellar R.E., Thompson W.F. Deoxyribonucleic acid sequence organization in the mung bean genome // Biochemistry. 1979. V. 18. №23. P. 5259-5266.

197. Nelson D.C., Lasswell J., Rogg L.E., Cohen M.A., Bartel B. FKF1, a clock-controlled gene that regulates the transition to flowering in Arabidopsis // Cell. 2000. V. 101. №3. P. 331-340.234

198. Pang P.P., Meyerowitz E.M. Arabidopsis thaliana: a model system for plant molecular biology//Biotechnology. 1987. V. 5. № 11. P. 1177-1181.

199. Papi M., Sabatini S., Bouchez D., Camilleri C., Costantino P., Vittorioso P. Identification and disruption of an Arabidopsis zinc finger gene controlling seed germination // Genes Dev. 2000. V. 14. P. 28-33.

200. Parinov S., Sevugan M., Ye D., Yang W.C., Kumaran M., Sundaresan V. Analysis of flanking sequences from Dissociation insertion lines: a database for reverse genetics in Arabidopsis II The Plant Cell. 1999. V. 11. P. 22632270.

201. Patton E.E., Willems A.R., Tyers M. Combinatorial control in ubiquitin-dependent proteulysis: don't Skp the F-box hypothesis // Trends in Genetics. 1998. V. 14. P. 236-243.

202. Peng J., Harberd N.P. Derivative alleles of the Arabidopsis gibberellin insensitive (gai) mutation confer a wild-type phenotype // Plant Cell. 1993. V. 5. P. 351-360.

203. Phillips I.D.J. Apical dominance // Ann. Rev. Plant Physiol. 1975. V. 26. P. 341 -367.

204. Pickett F.B. Champagne M.M., Meeks-Wagner D.R. Temperature-sensitive mutations that arrest Arabidopsis shoot development // Development. 1996. V. 12. P. 3799-3807.

205. Pitts R.J., Cernac A., Estelle M. Auxin and ethylene promote root hair elongation in Arabidopsis II Plant J. 1998. V. 16. № 5. P. 553-560.

206. Potrykus I., Spangenberg G. Gene transfer to plants // Berlin Heidelberg: Springer - Verlag, 1995. 361 p.236

207. Pouteau S., Nicholls D., Tooke F., Coen E., Battey N. Transcription pattern of a FIM homologue in Impatiens during floral development and reversion // Plant J. 1998. V. 14. № 2. P. 235-246.

208. Pruitt R.E., Meyerowitz E.M. Characterization of the genome of Arabidopsis thaliana //J. Mol. Biol. 1986. V. 187. № 1. P. 169-183.

209. Puchta H., Hohn B. From centimorgans to base pairs: homologous recombination in plants // Trends Plant Sci. 1996. V. 1. P. 340-348.

210. Ramloch-Lorenz K., Knudsen S., Sturm A. Molecular characterization of the gene for carrot cell wall beta-fructosidase // Plant J. 1993. V. 4. № 3. P. 545554.

211. Ratcliffe O.J., Riechmann J.L. Zhang J.Z. INTERFASCICULAR FIBERLESSI is the same gene as REVOLUTA II Plant Cell. 2000. V. 12. P. 315-317.

212. Redei G.P. Arabidopsis thaliana (L.) Heynh. A review of the genetics and biology//Bibliographia Genetica. 1970. V. 20. № 2. P. 1-127.

213. Redei G.P., Redel M.M., Lower R.W., Shahbeg S. Identification of cancerogens by mutagenicity for Arabidopsis II Mut. Res. 1980. V. 74. № 6. P. 469-475.

214. Reed R.S., Brady S.R., Muday G.K. Inhibition of auxin movement from the shoot into the root inhibits lateral root development in Arabidopsis II Plant Physiol. 1998. V. 118. P. 1369-1378.

215. Reinholz E., 1947. In: Meyerowitz E.M. Flistory of Arabidopsis thaliana II http/www. arabidopsis. org. 1998.

216. Riechmann J.L., Meyerowitz E.M. MADS domain proteins in plant development // J. Biol. Chem. 1997. V. 378. P. 1079-1101.

217. Richmond T.A., Bleecker A.B. A defect in p-oxidation causes abnormal inflorescence development in Arabidopsis II Plant Cell. 1999. V. 11. P. 19111923.

218. Riechmann J.L. A genomic perspective on plant transcription factors // Current Opinion in Plant Biology. 2000. V. 3. P. 423-434.

219. Rock C.D., Zeevaart J.A.D. The aba mutant of Arabidopsis thaliana is impaired in epoxy-carotenoid biosynthesis // Proc. Natl. Acad. Sci. 1991. V. 88. P. 7496-7499.

220. Rock C.D., Bowlby N.R., Hoffman-Benning S., Zeevaart J.A.D. The aba mutant of Arabidopsis thaliana (L.) Heynh. has redused thylakoid stacking // Plant Physiol. 1992. V. 100. P. 1796-1801.

221. Roe J.L., Riving C.J., Sessions R.A., Feidmann K.A., Zambryski P.C. The Tousled gene in A. thaliana encodes a protein kinase homolog that is required for leaf and flower development // Cell. 1993. V. 75. P. 939-950.

222. Rogers, Bendich. Extraction of DNA from plant tissues // 1988. In: Protocols of ICGEB Course "Transformation methods and analysis of gene expression in transgenic plants." Embrapa. Brasilia. Brazil. 20-31 October, 1997. P. 1214.

223. Romano C.P., Cooper M.L., Klee H.J. Uncoupling auxin and ethylene effect in transgenic tobacco and Arabidopsis plants // Plant Cell. 1993. V. 5. P. 181189.

224. Romero I., Fuertes A., Benito M.J., Malpica J.M., Leyva A., Paz-Ares J. More than 80 R2R3-MYB regulatory genes in the genome of Arabidopsis thaliana 11 Plant J. 1998. V. 14. P. 273-284.

225. Ross J.J., Murfet I.C. Reid J.J. Gibberellin mutants // Physiol. Plant. 1997. V. 100. P. 550-560.

226. Rouillon A., Barbey R., Patton E.E., Tyers M., Thomas D. Feedback-regulated degradation of the transcriptional activator Met4 is triggered by the SCF (Met 30) complex // EMBO J. 2000. V. 19. № 2. P. 282-294.

227. Rushforth A.M., Saari B., Anderson P. Site-selected insertion of the transposon Tel into a Caenorhabditis elegans myosin light chain gene 11 Mol. Cell. Biol. 1993. V. 13. P. 902-910.238

228. Russell A., Hendley J., Germain D. Inhibitory effect of p21 in MCF-7 cells is overcome by its coordinated stabilization with D-type cyclins // Oncogene. 1999. V. 18. № 47. P. 6454-6459.

229. Saab I.N., Sharp R.E., Pritchard J., Voetberg G.S. Increased endogenous abscisic acid maintains primary root growth and inhibits shoot growth of maize seedlings at low water potential // Plant Physiol. 1990. V. 93. P. 13291336.

230. Sachs R. Stem elongation // Ann. Rev. Plant Physiol. 1965. V. 16. P. 73-85.

231. Sanger F., Nicklen S., Coulson A.R. DNA sequecing with chain-terminating ingibitors //Proc. Natl. Acad. Sci. 1977. V. 74. P. 5463-5467.

232. Santarem E.R., Trick H.N., Essing J.S., Finer J.J. Sonication-assisted Agrobacterium-mediated transformation of soybean immature cotyledons: optimization of transient expression // Plant Cell Reports. 1998. V. 17. P. 752759.

233. Schaffer R., Ramsay N, Samach A., Corden S., Putterill J., Carre I.A., Coupland G. The late elongated hypocotyl mutation of Arabidopsis disrupts circadian rhythms and the photoperiodic control of flowering // Cell. 1998. V. 93. № 7. P. 1219-1229.

234. Schauser L., Roussis A., Stiller J., Stougaard J. A plant regulator controlling development of symbiotic root nodules // Nature. 1999. V. 402. P. 191-195.

235. Schmidt R.J., Burr F.A., Burr B. Transposon tagging and molecular analysis of the maize regulatory locus opaque-2 II Science. 1987. V. 238. P. 960-963.

236. Schmidt R., Love K., West J., Lenehan Z., Dean C. Description of 31 YAC contigs spanning the majority of Arabidopsis thaliana chromosome 5 // Plant J. 1997. V. 11. P. 563-573.

237. Schmidt-Rogge T., Weber B., Burner T. Transposition and behavior of the maize transposible element Ac in transgenic Datura innoxia II Mill. Plant Sci. 1994. V. 99. P. 63-74.

238. Schrick K., Mayer U., Horrichs A., Kuhnt C., Bellini C., Dangl J., Schmidt J., Jurgens G., FACKEL is a sterol C-14 reductase requared for organized cell division and expansion in Arabidopsis embriogenesis // Genes Dev. 2000. V. 14. P. 1471-1484.

239. Shibuya M., Zhang H., Endo A., Shishikura K., Kushiro T., Ebizuka Y. Two branches of the lupeol synthase gene in the molecular evolution of plant oxidosqualene cyclases // European Journal Biochemistry. 1999. V. 266. № 1. P. 302-307.

240. Simoens C.R., Gielben I., Van Montagu M., Inze D. Characterization of highly repetitive sequences of Arabidopsis thaliana II Nucl. Acids Res. 1988. V. 16. № 148. P. 6753-6760.

241. Singh K. Transcriptional regulation in plants: the importance of combinatorial control//Plant Physiol. 1998. V. 118. P. 1111-1120.

242. Singh-Gasson S., Green R.D., Yue Y., Nelson C., Blattner F., Sussman M.R., Cerrina F. Maskless fabrication of light-directed oligonucleotide microarrays using a digital micromirror array // Nat. Biotechnol. 1999. V. 17. P. 974-978.

243. Skoog F., Miller W. Chemical regulation of growth and organ formation in plant tissues cultured in vitro // Symp. Soc. Exp. Biol. 1957. V. 11. P. 118123.

244. Skowyra D., Craig K.L., Tyers M., Elledge S.J., Harper J.W. F-box proteins are receptors that recruit phosphorylated substrates to the SCF ubiquitin-ligase complex // Cell. 1997. V. 91. № 2. P. 209-219.

245. Smith D.L., Fedoroff N.V. LRP1, a gene expressed in lateral and adventitious roots primordia of Arabidopsis // Plant Cell. 1995. V. 7. P. 735-745.240

246. Somers D.E., Schultz T.F., Milnamow M., Kay S.A. ZEITLUPE encodes a novel clock-associated PAS protein from Arabidopsis 11 Cell. 2000. V. 101. № 3.P. 319-329.

247. Sommer H., Beitran J.P., Huijser P. Deficiens, a homeotic gene involved in the control of flower morphogenesis in Antirrhinum majus: the protein shows homology to transcription factors // EMBO J. 1990. V. 9. P. 605-613.

248. Souer E., Quattrocchio F., de Vetten N., Mol J., Koes R. A general method to isolate genes tagged by a high copy number transposable element // Plant J. 1995. V. 7. P. 677-685.

249. Speulman E., Metz P. L. J., Van Arkel G., Hekkert B.L., Stiekema W.J., Pereira A. Two-component Enhancer-Inhibitor transposon mutagenesis system for functional aanalysis of the Arabidopsis genome // The Plant Cell. 1999. V. 11. P. 1853-1866.

250. Spradling A.C., Stem D.M., Kiss I., Roote J., Laverty T., Rubin G.M. Gene disraption using P transposable elements: An integral component of the Drosophila genome project // Proc. Natl. Acad. Sei. 1995. V. 92. P. 1082410830.

251. Springer P.S., McCombie W.R., Sunguresan V., Martienssen R.A. Gene trap tagging of PROLIFERA, an essential MCM22-3-5-like gene in Arabidopsis II Science. 1995. V. 268. P. 877-880.

252. Stachel S.E. Nester E.W. The genetic and transcriptional organization of the vir region of the AG Ti-plasmid of Agrobacterium tumefaciens II EMBO J. 1986. V. 5. №7. P. 1445-1454.

253. Stachel S.E., Messens E., Van Montagu M., Zambryski P. Identification of the signal molecules produced by wounded plant cells that activate T-DNA transfer in Agrobacterium tumefaciens II Nature. 1985. V. 318. № 6047. P. 624-630.

254. Steindler C., Matteucci A., Sessa G., Weimar T., Ohgishi M., Aoyama T., Morelli G., Ruberti I. Shade avoidance responses are mediated by the ATHB-2241

255. HD-Zip protein, a negative regulator of gene expression // Development. 1999. V. 126. P. 4235-4245.

256. Stiekama W.J:, Wimpee C.F., Silverthorne J., Tobin E.M. Phytochrome control of the expression of two nuclear genes encoding chloroplast protein in Lemna gibba L. G-3 //Plant Physiol. 1983. V. 72. № 3. P. 717-724.

257. Stowe-Evans E.L., Harper R.M., Motchoulski A.V., Liscum E. NPH4, a conditional modulator of auxin-dependent differential growth responses in Arabidopsis // Plant Physiol. 1998. V. 118. P. 1265-1275.

258. Su W., Howell S.H. A single genetic locus, Ckrl, defines Arabidopsis mutant in which root growth is resistant to low concentrations of cytokinin // Plant Phusiol. 1992. V. 99. P. 1569-1574.

259. Sugano S., Andronis C., Green R.M., Wang Z.Y., Tobin E.M. Protein kinase CK2 interacts with and phosphorylates the Arabidopsis circadian clock-associated I protein // Proc. Natl. Acad. Sci. 1998. V. 95. № 18. P. 1102011025.

260. Sugano S., Andronis C., Ong M.S., Green R.M., Tobin E.M. The protein kinase CK2 is involved in regulation of circadian rhythms in Arabidopsis II Proc. Nate. Acad. Sci. 1999. V. 96. № 22. P. 12362-12366.

261. Takeda K., Akira S. STAT family of transcription factors in cytokine-mediated biological responses//Reviews. 2000. V. 11. P. 199-207.

262. Talon M., Koornneef M., Zeevaart J.A.D. Endogenous gibberellins in Arabidopsis thaliana and possible steps blocked in the biosynthetic pathways of the semidwarf ga4 and ga5 mutants // Proc. Natl. Acad. Sci. 1990. V. 87. P. 7983-7987.242

263. Tanaka Y., Patestos N.P., Maekawa T., Ishii S. B-myb is required for inner cell mass formation at an early stage of development // J. Biol. Chem. 1999. V. 74. № 40. P. 28067-28070.

264. Terada R., Shimamoto K. Expression of CaMV35S-gus gene in transgenic rice plants //Mol. Gen. Genet. 1990. V. 220. P. 389-392.

265. Theissen G., Becker A., Di Rosa A., Kanno A., Kirn J.T., Munster T., Winter K-U., Saedler H. A short history of MADS-box genes in plants // Plant Mol. Biol. 2000. V. 42. P. 115-149.

266. Theologis A. One rotten apple spoils the whole bushel: the role of ethylene in fruit ripening// Cell. 1992. V. 92. P. 181-184.

267. Theologis,A. Direct Submission // NCBI. 2000. Submitted (24-JUN-2000) Plant Gene Expression Center, 800 Buchanan Street, Albany, CA 94710, USA.

268. Timpte C., Wilson A.K., Estelle M. The axr2-l mutation of Arabidopsis thahana is gain-of-function mutations that disrupts an early step in auxin response // Genetics. 1994. V. 138. P. 1239-1249.

269. Tinland B., Schoumacher F., Gloecker V., Brano-Angel A.M., Hohn B. The Agrobactermm tumefaciens virulence D2 protein is responsible for precise integration of T-DNA into the plant genome // EMBO J. 1995. V. 14. P. 35853595.

270. Tinland B. The integration of T-DNA into plant genomes // Trends in Plant Science. 1996. V. 1. № 6. 1360-1385.

271. Topping J.F., Wei W., Lindsey K. Functional tagging of regulatory elements in the plant genome // Development. 1991. V. 112. P. 1009-1019.243

272. Tsugeki R., Kochieva E.Z., Fedoroff N.V. A transposon insertion in the Arabidopsis SSR16 gene causes an embrio-defective lethal mutation // Plant J. 1996. V. 10. P. 479-489.

273. Urao T., Noji M., Yamaguchi-Shinozaki K., Shinozaki K. A transcriptional activation domain of ATMYB2, a drought-inducible Arabidopsis Myb-related protein//Plant J. 1996. V. 10. №6. P. 1145-1148.

274. Valvekens D., Van Montagu M., Van Lijsebettens M. Agrobacterium tumefaciens mediated transformation of Arabidopsis thaliana root explants by using kanamycin selection // Proc. Natl. Acad. Sci. 1988. V. 85. P. 55365540.

275. Van Lijsebettens M., Vanderhaughen R., Van Montagu M. Insertional mutagenesis in Arabidopsis thaliana: isolation of a T-DNA-linked mutation that alters leaf morphology // Theor. Appl. Genet. 1991. V. 81. № 1. P. 177284.

276. Van Sluys M.A., Tempo J., Fedoroff N. Studies on the introduction and mobility of the maize Activator element in Arabidopsis thaliana and Daucus carrota //EMBO J. 1987. V. 6. № 13. P. 3881-3889.

277. Velculescu V.E., Zhang L., Vogelstein B., Kinzier K.W. Serial analysis of gene expression // Science. 1995. V. 270. P. 484-487.

278. Velculescu V.E., Zhang L., Zhou W., Vogelstein J., Basrai M.A., Bassett D.E., Hieter P., Vogelstein B., Kinzier K.W. Characterization of the yeast transcriptome // Cell. 1997. V. 88. P. 243-251.

279. Voytas D., Ausubel F. A copia-like transposable element family in Arabidopsis thaliana // Nature. 1988. V. 336. P. 242-244.

280. Wada Т., Tachibana Т., Shimura Y., Okada K. Epidermal cell differentiation in Arabidopsis determined by a Myb homolog, CPC II Science. 1997. V. 277. № 5329. P. 1113-1116.

281. Walbot V. Strategies for mutagenesis and gene cloning using transposon tagging and T-DNA insertional mutagenesis // Annu. Rev. Plant. Physiol, t. Mol. Biol. 1992. V. 43. P. 49-82.

282. Walhout A.J.M., Sordella R., Lu X., Hartley J.L, Temple G.F. Brasch M.A., Thierry-Mieg N., Vidal M. Protein interaction mapping in C. elegans using proteins involved in vulval development // Science. 2000. V. 287. P. 116-122.

283. Wang Z.Y., Kenigsbuch D., Sun L., Harel E., Ong M.S., Tobin E.M. A Myb-related transcription factor is involved in the phytochrome regulation of an ArabidopsisLhcb gene //Plant Cell. 1997. V. 9. № 4. P. 491-507.

284. Wareing P.F., Hanney C., Digby J. The Formation of Wood in Forest Trees. // New York: Academic Press, 1964. P. 323 344.

285. Wenzler H., Mignery G., Fisher L., Park W. Sucrose-related expression of a chimeric potato tuber gene in leaves of transgenic tobacco plants // Plant Mol. Biol. 1989. V. 13. P. 347-354.

286. Wheeler A.W. 1960 // В Уоринг Ф., Филлипс И. Рост растений и дифференцировка//М.: Мир, 1984. 512 с.

287. Wijsman H.J.W. Evidence for transposition in petunia // Theoret. Appl. Genet. 1986. V. 71. №6. P. 791-796.

288. Willemsen V., Wolkenfelt H., Vneze G., Weisbeek P., Scheres B. The HOBBIT gene is required for formation of the root meristem in the Arabidopsis embrio // Development. 1998. V. 125. P. 521-531.

289. Winkler R.G., Frank M.R., Galbraith D.W., Feyereisen R., Feldmann K.A. Systematic reverse genetics of transfer DNA-tagged lines of Arabidopsis II Plant Physiol. 1998. V. 118. P. 743-750.245

290. Wisman E., Cardon G.H., Fransz P., Saedler H. The behaviour of the autonomous maize transposable element En/Spm in Arabidopsis thaliana allows efficient mutagenesis // Plant Mol. Biol. 1998a. V. 37. P. 989-999.

291. Yang W.C., Ye D. Xu J., Sundaresan V. The SPOROCYTELESS gene of Arabidopsis is required for initiation of sporogenesis and encodes a novel nuclear protem//Genes Dev. 1999. V. 13. P. 2108-2117.

292. Yanisch-Perron C., Viera J., Messing J. 1985. In: Promega Life Science Catalog. 1999. P. 23.15-23.16.

293. Yanofsky M.F., Ma H., Bowman J.L., Drews J.N., Feidmann K.A., Meyerowitz E.M. The protem encoded by the Arabidopsis homeotic gene agamous resembles transcription factors //Nature. 1990. V. 346. P. 35-39.

294. Yorder J., Palys J., Alpert K., Lassner M. Ac transposition in transgenic tomato plants // Mol. Gen. Genet. 1988. V. 213. № 2/3. P. 191-296.

295. Zeevaart J.A.D., Creelman R.A. Metabolism and physiology of abscisic acid // Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol. 1988. V. 39. P. 439-473.

296. Zhong R., Ye Z.-H. IFLI, a gene regulating interfascicular fiber differentiation in Arabidopsis, encodes a homeodomain-leucine zipper protein // Plant Cell. 1999. V. 11. P. 2139-2152.

297. Zwaal R.R., Brocks A., Van Meurs J., Groenen J.T.M., Plasterk R.H.A. Target-selected gene inactivation in Caenorhabditis elegans by using a frozen transposon insertion bank // Proc. Natl. Acad. Sci. 1993. V. 90. P. 7431-7435.