Создание и биотерапевтическое изучение липосомальных лекарственных форм противоопухолевых препаратов производных нитрозомочевины тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 15.00.01, кандидат фармацевтических наук Ланцова, Анна Владимировна

• Ланцова, Анна Владимировна
• кандидат фармацевтических наук
• 2006

Оглавление диссертации кандидат фармацевтических наук Ланцова, Анна Владимировна

Список используемых сокращений.

Введение.

Глава I. Обзор литературы.

1.1.Липосомы как системы доставки противоопухолевых препаратов.

1.1.1.Состав липосомальных везикул.

1.1.2.Технологические приемы получения липосом.

1.1.3 Основные характеристики липосомальных препаратов.

1.1.4. Распределение липосомальных препаратов в организме.

1.2. Препараты из класса 1Ч-алкил-1Ч-нитрозомочевин.

1.2.1.Противоопухолевые препараты созданные на основе нитрозоалкимоче-вины (зарубежные).

1.2.2. Отечественные представители из класса АНМ.

1.2.2.1. Метилнитрозомочевина.

1.2.2.2. 1,3-бис(2-хлорэтил)-1-нитрозомочевина.

1.2.2.3. Араноза.

1.2.2.4.Лизомусти н.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Создание и биотерапевтическое изучение липосомальных лекарственных форм противоопухолевых препаратов производных нитрозомочевины»

Проблема создания новых противоопухолевых препаратов является одной из самых актуальных в современной онкологии. В настоящее время цитостатики из класса 1М-алкил-1Ч-нитрозомочевин (AHM) широко используются в клинической практике. Они обладают высокой активностью, широким спектром противоопухолевого действия и в ряде случаев превосходят по эффективности соединения иных классов. Для AHM характерно отсутствие перекрестной резистентности с типичными алкилирующими агентами и отмечены существенные различия в механизмах действия различных представителей этой группы препаратов [6,7,9,14,41].

В течение последних десятилетий вошли в клиническую практику и заняли прочное место в химиотерапии различных форм злокачественных опухолей как сама нитрозометилмочевина, так и ее производные, из них зарубежные препараты: Ломустин, Кармустин, Семустин и Нимустин. В Институте органического синтеза Уральского отделения РАН (ИОС УрО РАН) разработана оригинальная технология синтеза AHM - 1,3-бис(2-хлорэтил)-1-нитрозомочевины (БХНМ), которая является воспроизведенной субстанцией Кармустина. Отечественный препарат Нитрозометилмочевина, который более 40 лет назад создан в Институте химической физики РАН, до сих пор в фармацевтическое производство не внедрен. Новым более эффективным оказался оригинальный препарат Араноза, созданный в ГУ РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН. В настоящее время "Араноза лиофилизат для приготовления раствора для инъекций 0,5 г" выпускается на ООО фирма "ГЛЕС".

С учетом того, что аминокислоты и пептиды проникают через мембраны опухолевых клеток быстрее, чем через мембраны нормальных клеток, с середины 70-х годов различными исследователями проводились работы по синтезу соединений, где в качестве носителя цитотоксической Ы-алкил-М-нитрозомочевинной группировки использовали остатки аминокислот и олигопептидов. Несмотря на значительные усилия в этом направлении, до стадии клинического применения доведен только биоизостерический аналог аланина, фотемустин (Мюстофоран, Лаборатории Сервье, Франция).

Сотрудниками ИОС УрО РАН синтезирован новый вариант структуры AHM, в котором цитотоксическая группа присоединена к боковой цепи аминокислоты L-лизина, а а-амино- и карбоксильная группы, определяющие основные биохимический свойства аминокислот, в том числе их транспорт через клеточные мембраны, сохранены. В системе in vivo было отобрано как наиболее перспективное соединение 2-хлорэтилнитрозо-Ь-гомоцитруллин -лизомустин (синоним - нитруллин), на основе которого в ГУ РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН разработали лекарственную форму "Лизомустин лиофилизат для приготовления раствора для инъекций ОД", выпуск которой планируется на ООО фирма "ГЛЕС".

Отсутствие достаточной избирательности действия известных противоопухолевых препаратов обуславливают не только дальнейший поиск новых активных соединений, но и совершенствование их лекарственных форм. Как показали доклинические и клинические испытания, основным недостатком известных AHM является невысокая избирательность цитостатического действия на опухолевые клетки и, отсюда, значительная общая токсичность. Поэтому остается актуальной проблема создания рациональных лекарственных форм (ЛФ), увеличивающих избирательность их противоопухолевого действия. С этой целью в последние годы все чаще предпринимаются попытки разработки систем направленной доставки AHM, в виде липосом. Большой интерес представляют «стерически стабилизированные» липосомы, позволяющие программировать время нахождения препарата в кровотоке и его накопление в опухоли.

Исследования по получению липосом AHM проводятся как за рубежом, так и в нашей стране. Сравнительные исследования американских ученых показали преимущества липосомальных форм препаратов AHM -(RFCNU, CNCC, хлорозотоцин, BCNU). В нашей стране в лаборатории разработки лекарственных форм НИИ ЭДиТО ГУ РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН создана модель "обычных" липосом БХНМ и показан высокий противоопухолевый эффект этих липосом на меланоме В-16. Однако, липосомы БХНМ обладали максимальной противоопухолевой активностью в узком диапазоне терапевтических доз и достаточно быстро выводились из кровотока, захватываясь клетками ретикулоэндотелиальной системы.

В связи с этим, продолжение исследований по разработке рациональных "стерически стабилизированных" липосомальных форм с пролонгированным временем циркуляции в кровеносном русле и с более широким диапазоном терапевтических доз для оригинальной отечественной субстанции лизомустин и воспроизведенной БХНМ являются актуальными и своевременными:

Цель исследования - создание стерически стабилизированных липосомальных лекарственных форм лизомустина и БХНМ, увеличивающих избирательность их противоопухолевого действия.

Задачи исследования.

1.Ha основе фармацевтических исследований выбрать оптимальный состав стерически стабилизированных липосомальных форм лизомустина и БХНМ.

2.Разработать способ получения устойчивых при хранении липосомальных форм лизомустина и БХНМ для инъекций.

3.Обосновать критерии и параметры качества готового препарата и разработать методики для установления стандартности липосомальных форм лизомустина и БХНМ.

4.Оценить противоопухолевую активность липосомальных форм лизомустина и БХНМ in vivo.

5. Изучить стабильность липосомальных форм лизомустина и БХНМ при хранении.

Научная новизна. Созданы и экспериментально обоснованы составы "стерически стабилизированных" липосом лизомустина и БХНМ с ПЭГ-5000, обладающие большей, чем существующие лекарственные формы избирательностью противоопухолевого действия. Разработаны эмульсионно-экструзионные технологии получения липосом лизомустина и БХНМ. Установлены критерии и методы оценки качества липосомальных лекарственных форм лизомустина и БХНМ, определены параметры их стандартности. Показана возможность стабилизации липосомальной дисперсии лизомустина методом сублимационной сушки. Выбран оптимальный состав липосом лизомустина с криопротектором - лактоза, подлежащий высушиванию. Установлен режим замораживания и сушки позволяющий получать лекарственную форму - "Лизомустин липосомальный лиофилизат 20 мг", соответствующий проекту ФСП. Оценено влияние всего технологического процесса на конечный продукт. Показано, что на лейкозе L-1210 и карциноме легкого Льюис липосомальная лекарственная форма лизомустина с ПЭГ-5000 повышает биодоступность, расширяет диапазон терапевтических доз с эффектом 100 % излечения, без проявления токсичности препарата. Новизна полученных результатов подтверждается заявкой на патент РФ.

Практическая значимость исследований. Впервые созданы стерически стабилизированные липосомальные лекарственные формы лизомустина и БХНМ, которые обладают большей противоопухолевой активностью по сравнению с имеющимися в клинике лиофилизированными лекарственными формами. Для углубленного доклинического изучения разработана лиофильно-высушенная липосомальная форма -"Лизомустин липосомальный лиофилизат 20 мг" для лечения злокачественных новообразований различного генеза.

Положения, выносимые на защиту. Эмульсионно-экструзионные технологии обработки липидных смесей, состоящих из лецитина, холестерина, кардиолипина, дистеароилфосфатидилэтаноламинполиэтилен-гликоля - 5000, а-токоферола в молярном соотношении "суммарный липид : лизомустин" - 8:6 и "суммарный липид : БХНМ" - 8:2 воспроизводимы и обеспечивают получение стерильных липосомальных дисперсий.

Разработанные методики качественного хроматографического и количественного спектрофотометрического определения лизомустина и БХНМ в липосомальных лекарственных формах и в субстанциях, ошибка определения не более 2 %.

Результаты экспериментального изучения противоопухолевой активности липосомальной лекарственной формы лизомустина с ПЭГ-5000 на моделях опухолевого роста лейкозе L-1210 и карциноме легкого Льюис.

Результаты экспериментального изучения противоопухолевой активности липосомальной лекарственной формы БХНМ с ПЭГ-5000 на модели опухолевого роста лейкозе L-1210.

Состав с криопротектором - лактозой, способ заморозки и последующей сублимационной сушки липосомальной дисперсии лизомустина позволяет выпускать "Лизомустин липосомальный лиофилизат для инъекций 20 мг", стабильный и стандартный препарат. Совокупность разработанных химико-фармацевтических и биологических методов (проект ФСП) гарантируют стандартность препарата - "Лизомустин липосомальный лиофилизат для приготовления раствора для инъекций 20 мг".

Апробация работы состоялась 17 марта 2006 года на межлабораторной конференции в НИИ экспериментальной диагностики и терапии опухолей ГУ РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН.

Материалы приведенных в диссертационной работе исследований представлены на следующих научных сообществах: Научно-практической конференции «Современное состояние и перспективы развития экспериментальной и клинической онкологии» (г.Томск, 24-25 июня 2004 г.); Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы онкологии» (г. Алматы, 15-16 октября 2003 г.); Всероссийской научно-практической конференции «Отечественные противоопухолевые препараты» (г. Москва, 17-19 марта 2004 г. и 16-18 марта 2005 г); 4 th International Symposium on Pharmaceutical Chemistry (Turkey, Istanbul, 17-19 September 2003); 16th International Congress on Anti-Cancer Treatment (Paris, France, 1 -4 February 2005).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 15 печатных работ.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа состоит из Введения, Обзора литературы, 4 глав Собственных исследований, Общих выводов, Списка литературы и Приложений. Работа изложена на 173 страницах машинописного текста, содержит 33 рисунка и 22 таблицы. Библиография включает 177 наименований, в том числе 83 — на иностранном языке.

Заключение диссертации по теме «Технология лекарств и организация фармацевтического дела», Ланцова, Анна Владимировна

Общие выводы

1. Разработана эмульсионно-экструзионная технология получения стандартных стерически стабилизированных липосомальных дисперсий ли-зомустина со средним диаметром везикул 155±23 нм и БХНМ - 123±13 нм. Введение дистеароилфосфотидилэтаноламинполиэтиленгликоля-5000 в липидный бислой мембраны обеспечивает наибольшее включение препарата в липосомы. Уменьшение индекса окисления липидов достигается введением в состав липосомальных дисперсий лизомустина и БХНМ ан-тиоксиданта - а-токоферола в концентрации 0,6 мг/мл.

2. Разработаны методики количественного определения БХНМ и лизомустина в липосомальных лекарственных формах методом прямой спектро-фотометрии, которые обладают высокой точностью и воспроизводимостью. Относительная ошибка определения не превышает 1,55 % для БХНМ и 0,16 % - для лизомустина.

3. Подобраны и модифицированы методики для оценки качества липосомальных лекарственных формах БХНМ и лизомустина методом тонкослойной хроматографии.

4. На экспериментальных моделях опухолевого роста - лейкозе Ь-1210 и карциноме легкого Льюис показана зависимость терапевтического и токсического действия БХНМ и лизомустина от состава и вида лекарственной формы:

- липосомальная стерически стабилизированная форма БХНМ с дистеа-роилфосфотидил-этаноламинполиэтиленгликолем-5000 наиболее эффективна по критерию излечение животных (100 % излечение в дозах 40 и 45 мг/кг).

- липосомальная стерически стабилизированная лекарственная форма лизомустина с дистеароилфосфотидилэтаноламинполиэтиленгликолем-5000 повышает биодоступность препарата, расширяет диапазон терапевтических доз с эффектом 100 % излечения (125-225 мг/кг) и снижает токсичность;

5. Для стабилизации липосомальной дисперсии лизомустина использовали сублимационную сушку. При выборе криопротектора установлено, что введение в состав дисперсионной среды лактозы позволяет проводить лиофилизацию липосомального лизомустина без нарушения целостности однородности и среднего диаметра везикул.

6. Разработана технология получения лиофилизированной лекарственной формы - "Лизомустин липосомальный лиофилизат для приготовления раствора для инъекций 20 мг", основанная на медленной заморозки липосомальной дисперсии лизомустина (3 ч при -40°С) и сублимации в течение 24 ч с постепенным подогревом до 20°С со скоростью 5 0 С в час.

7. Совокупность разработанных химико-фармацевтических (проект ФСП) и биологических методов гарантирует стандартность лекарственной формы "Лизомустин липосомальный лиофилизат для приготовления раствора для инъекций 20 мг".

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Для увеличения срока хранения липосомальной формы лизомустина разработали режим сублимационной сушки и подобрали состав липосом подлежащий высушиванию. Использование в качестве криопротекторов -маннита, лактозы и сахарозы в водной фазе липосомальной дисперсии лизомустина (внутри и снаружи) с последующим замораживанием и сублимацией, позволило предупредить фазовое разделение липидной композиции и предохранить лизомустин от вытекания и сохранить способность липосом к регидратации. Проведенный эксперимент показал, что по внешнему виду дисперсии липосом с разными криопротекторами не различались друг от друга. Количественное содержание лизомустина в одном флаконе лиофиль-но-высушенных липосом составило 19,48 ±0,36 мг, относительная ошибка среднего результата не превышала 1,85 %. После лиофильной сушки липо-сомальных дисперсий с лактозой и сахарозой структуры и средний размер липосом с лизомустином практически не отличались от параметров определенных до лиофилизации. Однако, эффективность включения лизомустина внутрь липосом с лактозой оказалось выше и составила 90,28 % ± 0,20, относительная ошибка 0,22 %. В результате проведенных исследований отобран состав лиофильно-высушенных липосом с криопротектором - лактозой для дальнейшего изучения.

Флаконы с сублимированной липосомальной формой лизомустина наработали в достаточном количестве для проведения предклинических испытаний и заложили на хранение при ^-20° С ± 3 0 С.

Подобраны оптимальные условия хроматографического анализа лио-фильно-высушенной липосомальной лекарственной формы лизомустина для контроля чистоты препарата в процессе разработки и на всех стадиях получения для обнаружение возможных посторонних примесей. Определено содержание продукта перекисного окисления липидов липосомальной оболочки - малонового диальдегида (МДА). Проведенные исследования показали, что в лиофильно-высушенных липосомах лизомустина с лактозой количество МДА составляло- 3,90 ± 0,23 нмоль/мл.

Совокупность разработанных химико-фармацевтических методов легли в основу проекта ФСП на "Лизомустин липосомальный лиофилизат для приготовления раствора для инъекций 20 мг". В течение 3 месяцев хранения все серии липосомальной лиофилизированной формы лизомустина для инъекций сохраняли химико-фармацевтические характеристики и биологическую активность. Срок годности изучается.

Список литературы диссертационного исследования кандидат фармацевтических наук Ланцова, Анна Владимировна, 2006 год

1. Александров В.А., Бесполов В.Г. Липосомы перспективы использования // Вопросы онкологии. - 1991 . - Т.37 - С.387 - 393.

2. Беляев A.A., Радина Л.Б., Перетолчина Н.М. и др. Нитрозоалкилмочевины на основе алкилендиаммониевых солей и их противоопухолевая активность. // Хим.- фарм. журнал. 1988. - Т. 22. - №2. - С. 180-185.

3. Березовская Л.Н. и др. Получение липосом, содержащих сульфаниламидные препараты, их токсичность // Антибиотики и химиотерапия. 1990. - №10. - С. 31-35.

4. Бернштейн И.Я., Каминский Ю.Л. Спектрофотометрический анализ в органической химии. Л.: Химия, 1975. - 230 с.

5. Бесова Н.С., Горбунова Л.Б., Герасимова Г.К., и др. Нитруллин новый оригинальный отечественный препарат из группы нитрозомочевины. В сб.: Клиническая фармакология и терапия - 1995, 4 (4), с. 18 - 20.

6. Беттичер Д. Новые мишени противоопухолевой терапии // Мат. Конф. "Современные тенденции развития лекарственной терапии опухолей". -М., 1997.-С. 10-14.

7. Булат Ю.В. "Химиотерапия диссеминированной меланомы (новые комбинации и режимы)". Автореферат канд. диссертации, Москва, 1990.

8. Бухарова И.К., Ревазова Е.С., Мороз Л.В. Эффективность некоторых новых противоопухолевых препаратов на моделях опухолей человека. // Вестник ВОНЦ АМН СССР.-М., 1990.-№ 1.-С. 8-10.

9. Варпаховская И. Новые системы доставки лекарственных средств // Ремедиум. 1999. - № 2. - С. 62-70

10. Варпаховская И. Липосомальные формы лекарственных средств // Ремедиум. 1999. -№ 5. - С. 68-70.

11. И.Василенко И.Ф., Краснопольский Ю.М., Степанов А.Е., Швец В.И. Проблемы и перспективы производства фосфолипидов // Хим. фарм. журнал. 1998. - № 5. - С. 9-13.

12. Гарин А.М., Хлебнов A.B., Табагари Д.З. Справочник по противоопухолевой лекарственной терапии. М., 1996. - 27 с.

13. З.Герасимова Г.К., Смирнова З.С., Халанский A.C. и др. Сравнительное изучение действия новых противоопухолевых препаратов на перевиваемую глиобластому крыс // Тез. докл. I съезда онкологов стран СНГ. М.,1996. -4.1. - С.152-153.

14. Герасимова Г.К., Софьина З.П., Бурова Т.Ю. и др. Некоторые подходы к модификации противоопухолевых эффектов цитостатиков // Модификация лекарственной терапии опухолей: Сб.научн.тр. М., 1991. -С. 57-68.

15. Голубчикова H.A., Сидоров В.Н., Крейнес В.М., Шраер Т.И. Взаимодействие липосом различного состава с компонентами сыворотки крови // Вестн. АМН СССР. 1990. - № 6. - С. 36-38.

16. Горбачева Л.Б. Молекулярные механизмы резистентности к 1Ч-алкил-1Ч-нитрозомочевинам // Биологические мембраны. 2003. - Т.20, №3. - С. 256-264.

17. Горбачева Л.Б., Веровский В.Н., Соколова И.С. Ингибирование и восстановление синтеза ДНК и РНК в нормальных и опухолевых клетках после воздействия нитрозомочевин in vivo // Экспериментальная онкология. 1982. - Т.4. -№ 4. - С. 15-18.

18. Горбунова В.А. Новые цитостатики в лечении злокачественных опухолей. -Москва, 1998. С.25 - 39.

19. Горбунова В.А., Орел Н.Ф., Семина О.В. и др. Нитруллин новый оригинальный отечественный препарат из группы нитрозомочевины.// Вопросы онкологии. - С.-П., 2001. - С. 680 - 683.

20. Грегориадис Г., Аллисон JI. Липосомы в биологических системах. М.: Медицина, 1983.-384с.

21. Губский Ю.И., Левицкий Е.Л., Чабанный В.Н. и др. Липосомы, как транспортеры лекарственных веществ // Украинский биохимический журнал. 1990. - Т.62. - №6. - С.22-31.

22. Гуськов В. Ф., Морозова О.В., Бедняк А.Е. Изучение стабильности нитрозоалкилмочевин в водных растворах. // Вопросы фармации на Дальнем Востоке. Хабаровск, 1980.-С. 121-127.

23. Дементьева Н.П. Нитрозометилмочевина в клинической химиотерапии злокачественных опухолей // Вопросы онкологии. — 1988. Т.34. - №1. -С.8-17.

24. Каплун А.П., Шон Л.Б., Краснопольский Ю.М., Швец В.И. Липосомы и другие наночастицы как средство доставки лекарственных веществ // Вопросы медицинской химии. 1999. - Т. 45. - № 1. - С. 3-12.

25. Клочкова Т.И., Игнатьева Е.В., Ярцева И.В. и др. Определение посторонних примесей в препарате лизомустин. // Хим.-фарм. журнал. -М, 2004 Т.38. - №5. - С.45-47.

26. Клочкова Т.И., Лопатин П.В. Методический подход к разработке лекарственных форм противоопухолевых препаратов для инъекций. // Тезисы доклада. III съезд фармацевтов Казахской СССР, г. Кустанай, -1987- С.281-282.

27. Клочкова Т.И., Лопатин П.В., Мкртчян Т.В. и др. Масштабирование производства лекарственной формы аранозы лиофилизированной для инъекций и его особенности. // Химиотерапия опухолей в СССР. -М.,1988.-№. 51.-С. 63-66.

28. Клочкова Т.И., Оборотова H.A., Мкртчян Т.В. и др. Исследование совместимости противоопухолевых препаратов с кровью. // Химиотерапия опухолей в СССР. М.,1986. - № 45. - С.98-102

29. Краснов В.П., Авдюкова Н.В., Клочкова Т.И. и др. Спектрофотометрическое определение содержания основного вещества в субстанции противоопухолевого препарата лизомустин. // Аналитика и контроль. 2001. - Т.5., №2. - С. 168 - 170.

30. Краснов В.П., Чупахин О.Н., Левит Г.Л и др. Химические аспекты создания оригинального противоопухолевого препарата лизомустин. В кн.: Экспериментальная онкология на рубеже веков. / Под ред. М.И. Давыдов, А.Ю. Барышников Москва, 2003. - с.551.

31. Левит Г.А., Гопко В.Ф., Власова О.В. и др. Получение отдельных изомеров нитруллина // Химиотерапия опухолей в СССР: Сб. науч. тр. -1986.-№44.-С. 96-106.

32. Лопатин П.В. Современная концепция лекарственной формы // Фармация. 1977.- №6,-С. 30-33.

33. Лопатин П.В. Определение возможности использования инъекционных растворителей для создания лекарств // Тез. докл. III Всесоюзный съезд фармацевтов. Кишинев. - 1980. - С. 64.

34. Лопатин П.В, Мкртчян Т.В., Краснова М.А, и др. Обоснование типа и состава лекарственной формы аранозы. // Химиотерапия опухолей в СССР.-М., 1987. -№ 46. С.153-157.

35. Лопатин П.В., Оборотова H.A., Полозкова А.П. Методология разработки сублимационно высушенных препаратов // Тез. докл. III национальный конгресс фармацевтов Молдовы. Кишинев. - 1993. - С. 316.

36. Манзюк Л.В., Бородкина А.Г., Артомонова Е.В. Опыт применения лекарственных комбинаций на основе аранозы в лечении диссеминированной меланомы кожи. // Вестник ОНЦ им. H.H. Блохина. -2000. №2. - С.27-30.

37. Манзюк Л.В., Бородкина А.Г., Надеждина Т.М. Араноза новый противоопухолевый препарат для лечения меланомы кожи. - Киев, 2000. -С.785.

38. Манзюк Л.В., Горбунова В.А., Харкевич Г.Ю., Барышников А.Ю. Лизомустин результаты клинических исследований. В кн.: Экспериментальная онкология на рубеже веков. / Под ред. М.И. Давыдов, А.Ю. Барышников - Москва, 2003. - С. 179-198.

39. Марголис Л.Д., Бергельсон Л.Д. Липосомы и их взаимодействие с клетками. М.: Наука, 1986. - 212 с.

40. Марголис Л.Б., Нейфах Ал. А. Успехи современной биологии. 1982. -Т.94.-С. 83-93.

41. Михайлова Л.М. Токсикология новых отечественных противоопухолевых препаратов (экспериментальное исследование). // Дисс. д.б.н М.,1995. -417 с.

42. Муханов В.И., Платонова Г.Н., Перетолчина Н.М. и др. Новый противоопухолевый препарат аранозы. // Химиотерапия опухолей в СССР: Сб. науч. тр./ Онкологический научный центр АМН СССР. М., 1980.- №32.-С. 133-139.

43. Павлицкий М., Брандыс А., Квасневская-Рокициньская Ц. и др. Ломустин — цитотоксический препарат. // Новости фармации и медицины. М., 1990. -№4.-С.101-106.

44. Переводчикова Н.И., Горбунова В.А., Петухова И.Н. Первичное клиническое изучение нитруллина.// Химиотерапия опухолей в СССР: Сб. науч. тр./ Онкологический научный центр АМН СССР. 1989. - №54. - С. 201-206.

45. Перетолчина Н.М. Противоопухолевая активность нового препарата нитруллина (в сравнении с другими нитрозоалкилмочевинами) // Химиотерапия опухолей в СССР: Сб. науч. тр./ Онкологический научный центр АМН СССР. -1982. -№ 36 С.228.

46. Перетолчина Н.М., Клочкова Т.И., Михайлова Л.М. и др. Араноза новый противоопухолевый препарат. // Практическое пособие для онкологов и врачей. / РОНЦ РАМН. - М., 2000. - 22 с.

47. Перетолчина Н.М., Платонова Г.Н. и др. Новый противоопухолевый препарат араноза. // Химиотерапия опухолей в СССР. М., 1980. - № 32. -С.133- 139.

48. Перетолчина Н.М., Семина О.В. Араноза новый отечественный противоопухолевый препарат из группы нитрозомочевины. В кн.: Экспериментальная онкология на рубеже веков / Под ред. М.И. Давыдов, А.Ю. Барышников. - М., 2003. С. 199 - 214.

49. Перетолчина Н.М., Софьина З.П. Противоопухолевая активность нитруллина в эксперименте. // Сборник «Предпринт» ДСП. -Противоопухолевый препарат нитруллин. Свердловск., 1990. - Ч. 2. -С.7 - 21.

50. Петухова И.Н. "Сравнительное клинико-фармакологическое изучение новых производных нитрозомочевины аранозы и нитрулина ". Автореферат канд. диссертации. - Москва, 1990.

51. Петухова И.Н. I фаза клинических испытаний нового противоопухолевого препарата из группы нитрозомочевин нитруллина // Противоопухолевый препарат нитруллин: Сб. научн. тр./ Свердловск., 1990.-Ч.З.-С. 36-44.

52. Плетенева О.П., Оксинойд О.Э., Афонин Н.И. Некоторые аспекты создания лекарственной формы липосомального препарата цитарабина. // Вестник АМН СССР. 1990. - №8. - С.33-34.

53. Противоопухолевый препарат нитруллин / Л.Б. Радина, В.Ф. Гопко, З.П. Софьина, Н.М. Перетолчина и др.// Авторское свидетельство, № 3527697. 1982.

54. Рышкова Н.Е. "Совершенствование методов стандартизации лиофильно высушенных лекарств на примере противоопухолевого препарата из класса нитрозомочевины". Автореферат канд.диссертации.-Москва,2000г.

55. Рышкова Н.Е., Багирова B.JL, Оборотова H.A. О новой лекарственной форме БХНМ. // Фарматека. М., 1999. - №2. - С.36-39.

56. Сергеев С.Г., Гилев А.Ф., Устьянцева И.М., Голубчикова H.A. Влияние подкожного введения липосом на функциональное состояние органов и систем экспериментальных животных // Вестник Академии медицинских наук СССР. 1990. - № 6. - С.19-32.

57. Соколова И. А. Методика количественного определения БХНМ в концентрате и лекарственной форме. // Химиотерапия опухолей в СССР. -М., 1989. №56. - С.46-47.

58. Софьина З.П. Методики отбора соединений с противоопухолевой активностью.//Вопросы онкологии. 1976. - №4.- С. 82-96.

59. Стрельников JI.C. Технологические и биофармацевтические аспекты создания липосомальных препаратов на основе биологически активных дисперсионных сред. Харьков, 1992. - 79 с.

60. Сыркин А.Б., Герасимова Г.К., Оборотова H.A. Перспективы создания отечественных противоопухолевых препаратов // Мат. Конф. «Современные тенденции развития лекарственной терапии опухолей». -1997. С. 45-47.

61. Сыропятова Е.Б., Иванова JT.A., Клочкова Т.И. Мембранные фильтры для стерилизующей фильтрации. // Фармация. 1990. - №6.- С.72-76

62. Торчилин В.П., Клибанов A.JT. Липосомы как средства направленного транспорта лекарств. Журн. Всесоюзн. Химич. о-ва им. Д.И. Менделеева. 1987. - Т.32. - №5. - С. 502-514.

63. Торчилин В.П., Смирнов В.Н., Чазов Е.И. Проблемы и перспективы использования липосом для направленного транспорта лекарств (обзор) // Вопросы медицинской химии. 1982. - Т.28. - №1. - С.3-12.

64. Трофимов В.И. Достижения в области стерилизации фармацевтических препаратов // Хим.-фарм. журн. 1988 . - №9. - С.1111-1121.

65. Трофимов В.И., Нисневич М.М. Вопросы получения и контроля свойств стерильных липосом с лекарственными препаратами // Вестн. АМН СССР. -1990.- №6.- С.28-32.

66. Шадрина A.B., Оборотова H.A., Полозкова А.П., Шпрах З.С., Орлова О.Л., Перетолчина Н.М, Барышников А.Ю. Биофармацевтические исследования липосомального лизомустина. // Российский Биотерапевтический журнал №1. М., 2004.- Т.З.- с. 49-53.

67. Шарф В.Г. Биотрансформация алкилнитрозомочевин.// Хим.- фарм. журнал.-М., 1989. Т.23. - №10. - С. 1157-1172.

68. Шаршидзе Л.К., Туркия Н.Г., Лагидзе Д.Р. Зависимость противоопухолевой активности некоторых производных нитрозомочевины от химической структуры.// Экспериментальная онкология. 1989. - Ч. 11. - №2. - С. 62-65.

69. Шашкина М.Я., Мкртчян Т.В., Перетолчина Н.М. и др. Обнаружение различий в стабильности и биологической активности изомеров нитруллина.// Химиотерапия опухолей в СССР. М., 1989. - №54. - С. 106-110.

70. Шашкина МЛ., Мкртчян Т.В., Соколова И.А. и др. Химико -фармацевтические исследования нитруллина.// Противоопухолевый препарат нитруллин. Предпринт. - Свердловск., 1990. - Ч.З. - С.4-7.

71. Швец В.И., Кпаснопольский Ю.М. Липиды в лекарственных препаратах // Вестник Академии медицинских наук СССР. 1990. - № 6. - С.19-32.

72. Шулепова Т.С., Белоусова А.К. О механизмах транспорта нитруллина в опухолевые клетки. // Химиотерапия опухолей в СССР. М.,1989. - №.54. - С.141 -145.

73. Шулепова Т.С., Перетолчина Н.М. Уменьшение сродства транспортной системы для лизина к нитруллину при развитии лекарственной устойчивости. // Химиотерапия опухолей в СССР. М., 1989. - № 54. -С.146- 149.

74. Экспериментальная оценка противоопухолевых препаратов в СССР и США. / Под ред. З.П.Софьиной, А.Б.Сыркина (СССР), А.Голдина, А.Кляйна (США). М.: Медицина, 1980. 296 с.

75. Эммануэль Н.М., Афанасьев В. Л. Экспериментальное изучение противоопухолевой активности нового углеводосодержащего производного НММ. // Химиотерапия опухолей в СССР. М., 1980. -№32. - С.35-42.

76. Эммануэль Н.М., Корман Д.Б., Горбачева Л.Б. и др. Нитрозоалкилмочевины новый класс противоопухолевых препаратов. -М.,1977. - С.3-18.

77. Эммануэль Н.М., Островская Л.А., Корман Д.Б. Нитрозоалкилмочевины -новый класс противоопухолевых препаратов. М.,1978. - С.7-23.

78. Allen T.M., Hansen C., Martin F. et al. Liposomes containing synthetic lipid derivates of poly(ethylene glycol) show prolonged circulation half-lives in vivo.// Biochim. Biophys. Acta. 1991. - Vol.1066. - P. 29 - 36.

79. Arbus M.N. Room temperature stability guidelines for carmustine. // Am. J. Hosp Pharm. 1998. - Vol.56. - №5. - P.560.

80. Bakker-Woudenberg I.A.J.M., ten Kate M.T., Storm G., van Etten E.W.M. Administration of liposomal agents and the phagocytic function of the mononuclear phagocyte system // Int.J.Pharm. 1998. - Vol. 162. - №. 1/2. -P. 5-8.

81. Bally M.B., Ansell S.M., Tardi P.G., Harasym T.O. Liposome targeting following intravenous administratin, Defining expectations and a need for improved methodology // J.Liposome Res. 1997. - Vol. 7. - № 4. - P. 331335.

82. Bangham A.D., Standish M.M., Watkins J.C. Diffussion of univalent ions across the lamellae of swollen phospholipids. // J. Mol. Biol. 1965. - Vol. 13,- P. 238-252.

83. Barratt G. Characterisation of colloidal drug carrier systems with zeta potential measurements // Pharm. Techn. Europe. 1999. - Vol. 11. - № 1. - P. 25-32.

84. Beduaddo F.K., Tang P., Xu Y., Huang L. Interaction of polyethyleneglycol-phospholipid conjugates with cholesterol-phosphatidylcholine mixtures: Sterically stabilized liposome formulations // Pharm. Res. 1996. - Vol.13. -№4.- P.718-724.

85. Bibby M.C., Double J.A., Morris C.M. Antitumor acyivity TCNU in panel of transplantable murine colon tumors. // Eur. J. Cane. Clin.Oncol. 1998.24. P.1361-1364.

86. Billek D.E./ Seifen-Olle-Fette-Washe. 1987. - Vol.113. - №14. - P.469-473.

87. Bogdanov A., Wright S.C., Marecos E.M. et al. A Long-Circulating Co-Polymer in "Passive Targeting" To Solid Tumors // J. Drug Targeting. 1997. -Vol. 4.-№5.-P. 321-330.

88. Brent T.P. Suppression of cross-link formation in chliroethylurea treated DNA by an activity in extracts of human leukemic lymphoblasts // Cancer Research. 1984. - Vol.44. - P. 1887 - 1892.

89. Cancer Chemotherapy Handbook. 1993. -Vol. 2. - P. 637-638.

90. Chonn A., Cullis P.R. Recent advances in liposome technologies and their applications for systemic gene delivery // Adv.Drug Del. Rev. 1998. - Vol. 30.—№ 1/3.-P. 73-76.

91. Crommelin D.J.A. and Storm G. Pharmaceutical aspects of liposomes-Preparation, characterisation, and stability. In Controlled Drug Delivery, B.W.Muller(Ed.). Wissenschaftliche Verlagsgesellschaft mbH, Stuttgart. -1998. -P.80-91.

92. Crowe J.H. and Crowe L.M. Factors affecting the stability of dry liposomes // Biochem.Biophys.Acta. 1988. - Vol.939. - P.327-334.

93. Crowe L.M., Womersley C., Crowe J.H. et al. Prevention of fusion andleakage in freeze-dried liposomes by carbohydrates // Biochem.Biophys.Acta. 1986.- Vol. 861. - P.131-140.

94. Dass C.R., Walker T.L., Burton M.A., Decruz E.E. Enhanced anticancer therapy mediated by specialized liposomes // J.Pharm.Pharmcol. 1997. -Vol. 49. - № 10. - P. 4671-4674.

95. DeMario M.D., Vogelzang N.J., Janisch L. et al. A Phase I study of liposome formulated cisplatin (SPI-77 R) given every 3 weeks in patients with advanced cancer.// Proc. ASCO 1998. Vol.17. - P.230 a (Abstr.883).

96. Dinapoli R.P., Brown L.D.,Arussel R.M. et al. Phase II comparative evaluation of PCNU and carmustine with radiation therapy for high-grade glioma.//J. Clin. Oncol., 1993.-№11. -P.1316-1321.

97. Forssen E.A., Coulter D.M., Proffit R.T. Selective in vivo localisation of daunorubicin small unilamellar vesicles in solid tumours // Cancer Res. -1992.-Vol. 52.~P.3255.

98. Forssen E.A., Ross M.E. DaunoXome Treatment of Solid Tumors: Preclinical and Clinical Investigations // J. Liposome Res. 1994. - Vol. 4. - №1. - P. 481-484.

99. Forssen E., Willis M. Ligand-targeted liposomes // Adv.Drug Del.Rev. 1998. -Vol. 29 - № 3. - P. 249-252.

100. Franks F. Freeze-dryind of bioproducts. Putting principles into practice // Eur.J.Pharm.Biopharm. 1998. - Vol. 45. - №3. - P. 231-237.

101. Freise J. The preparation of sterile drud-containing liposomes, in: Liposome Technology, Vol.1, Ed.G.Gregoriadis, CRC Press, Boca Raton. 1984.1. P.132-137.

102. Gaber M.H. Effect of bovine serum on the phase transition temperature of cholesterol-contaning liposomes // J. Microencapsulation. 1998. - Vol. 15. -№2. - P. 207-210.

103. Gabison A., Goren D., Horowitz A.T. et al. Long-circulating liposomes for drug delivery in cancer therapy: a review of biodistribution studies in tumor-bearing animals // Adv. Drug Del. Rev. 1997. - Vol. 24. - P. 337-344.

104. Greenwald R.B. Drug delivery systems: anticancer prodrugs and their polymeric conjugates. Review // Exp. Opin.Ther. Patents. 1997. - Vol. 7. -№6.- P. 601-609.

105. Gregoriadis G. Engineering liposomes for drug delivery: Progress and problems // Trends in Biotechnology. 1995. - Vol. 13. - №12. - P.527-537.

106. Gregoriadis G. and Florence A.T. Liposomes in drug delivery // Clinical, Diagnostic and Ophthalmic potential Drugs. 1993. - Vol. 45. - P. 15-28.

107. Grit M. Stability of liposomes, Analytical, chemical and physical aspects. Thesis, University of Utrecht, The Nederlands. 1991. - P.34-54.

108. Hansen S.O., Wakonen J. Challenges to deliver therapies // Europ. J. Pharm. Sciences.- 1998.- Vol. 6.-P. 337-341.

109. Harashima H., Hiraiwa T., Ochi Y., Kiwada H. Size dependent liposome degradation in blood: in vivo/in vitro correlation by kinetic modeling // J. Drug Targeting. 1995. - Vol. 3. - №.4. - P. 253-261.

110. Harashima H., Kojima T. and Kiwada H. Hepatic uptake mechanism of liposomes in mice: species dependent uptake mechanisms // Abstr Liposomes: State of the Art. Fourth Liposome Research Days Conference. 1995. -Freiburg. - P. 11.

111. Harashima H., Sakata K., Funato K., and Kiwada H. Enhanced hepatic uptakeof liposomes through complement activation depending on the size of liposomes // Pharm. Res. 1994. - Vol. 11.- P. 402-406.

112. Johnston T.P., McCaleb G.S., Montgomery J.A.J.Med.Chem. 1963. - V.6. -P.669 - 681.

113. Juliano R.L., Daoud S.S. Liposomes as a delivery system for membrane-active antitumor drugs // J. Contr. Release. 1990. - Vol. 11. - P. 225-232.

114. Khayat D., Girouse B., Berille J. et al. Fotemustine in the treatment of brain primary tumors and metastases. // Cancer Invest. 1994. - №12. - P.414-420.

115. Kirpotin D.B., Park J.W., Hong K. et al. Targeting liposomes to solid tumors, The case of sterically stabilized anti-HER2 immunoliposomes // J. Liposome Res. 1997. - Vol. 7. - № 4. - P. 391-94.

116. Lasic D.D. Recent developments in medical applications of liposomes, Sterically stabilized liposomes in cancer therapy and gene delivery in vivo // J.Contrl.Rel. 1997. - Vol. 48. - №2/3. - P. 203-206.

117. Lasic D.D., Papahadjopoulos D. Liposomes revisited // Science. 1995. -Vol. 267:5202.- P.1275-1276.

118. Lyass O., Uzieiy B., Hecbing N.I. et al. Doxil in metastatic breast cancer (MBC) after prior chemotherapy : Therapeutic results in two consecutive studies.//Proc ASCO. 1998.- Vol.17. - P. 156 a.

119. Madden T.D., Bally M.B., Hope M.J. et al. Protection of large unilmellar vesicles by trehalose during dehydration, Retention of vesicale contents // Biochem.Biophys.Acta. 1985. - Vol. 817. - P. 67-74.

120. Mitchell E.P., Schein P.S. Contributions of Nitrosoureas to Cancer Treatment.

121. Cancer Treat. Rep. 1986. - Vol.70 - №1. - P.31-43.

122. Mobley W.C. The effect of jet-milling on lyophilized liposomes // Pharm.Res. 1998.- Vol. 15. - №. l.-P. 149-152.

123. Moghimi S.M. Opsono-recognition of liposomes by tissue macrophages // Int.J.Pharm. 1998.- Vol. 162.- № 1/2.-P. 11-14.

124. Moghimi S.M., Patel H.M. Serum-mediated recognition of liposomes by phagocytic cells of the reticulo-endjthelial sestem, The concept of tissue specificity // Adv.Drug Del.Rev. 1998. - Vol. 32. - № 1/2. - P. 45-48.

125. MolineuxG., Schofield R., Testa N.G. Haematopoietic effects ofTCNUin mice.// Cane. Treat. Rep. 1987. - №71. - P. 837-841.

126. Mori A., Chonn A., Choi L.S. et al. Stabilization and regulated fusion of liposomes contaning a cationic lipid using amphipathic polyethyleneglycol derivatives // J. Liposome Res. 1998. - Vol. 8. - № 2. - P. 195-198.

127. Pavanetto F., Perugini P., Genta I., Roveda L. Liposomal system for BPA t ransport to tumour tissue // J.Contrl.Rel. 1997. - Vol. 48. - № 2/3. - P. 331-333.

128. Pennington K., Gordon M., Picus J. A Phase II trial of liposomal doxorubicin (Doxil) in the treatment of advanced renal cell cancer : a Hoosier Oncology Group (HOG) study.// Proc. ASCO. 1998 . - Vol.17. - P. 339 a (Abstr.1308).

129. Poste G.,Bucana C., Raz A., Bugelski P., Kirsh R. And Fidler I.J. Analysis of the fate of systemically administered liposomes and implications for their use in drug delivery//Cancer Res. 1982.-Vol. 42.-P.1412-1422.

130. Proffitt R.T., Williams L.E., Presant C.A., Tin G.M., Uliana J.A. et al.1.posomal blockage of reticuloendothelial system: improved tumour imaging with small unilamellar vesicles // Science. 1983. - Vol. 220. - P. 50.

131. Rodrigueza W.V., Phillips M.C., Williams K.J. Structural and metabolic consequences of liposome/lipoprotein interactins // Adv.Drug Del.Rev. -1998.- Vol 32.-№ 1/2.-P. 31-34.

132. Rowe R.C., Roberts R.J. Artificial intelligence in pharmaceutical product formulation: neural computing and emerging technologies // PSTT. 1998. -Vol. 1. -№ 5. - P. 200-205.

133. Rutman R.J., Ritter C.A., Avadhani G. et al. Can. Treat. Rep., - 1976. -Vol.60.-№5.-P. 617-618.

134. Simpson J.K., Miller R.F.,Spittle M.F. et al. Liposomal doxorubicin for the treatment of AIDS-related Kaposi,s sarcoma. // Clin.Oncol. 1993. - Vol. 5. P.372 - 374.

135. Stensrud G., Smistad G., Agren T.L. et al. Effect of gamma irradiation on the physical stability of liposomal phospholipids // J. Liposome Res. 1997. -Vol. 7.-№4.-P. 503-506.

136. Storm G., Roerdink F.H., Steerenberg P. A., et al. Influence of lipidcomposition on the antitumour activity exerted by doxorubicin-containing liposomes in a rat solid tumour model // Cancer Res. 1987. - Vol. 47. - P. 3366.

137. Szebeni J. The interaction of liposomes with the complement system //

138. Crit.Rev.Therap.Drug Carrier Systems. 1998. - Vol. 15. - № 1. - P. 57-61.

139. Torchilin V.P. Liposomes as delivery agents for medical imaging // Molecular Medicine Today. 1996. - Vol. 2. - № 6. - P. 242-249.

140. Torchilin V.P. Targeting of liposomes within cardiovascular system // J.liposome Res. 1997. - Vol. 7. - № 4. - P. 433-435. A^ )

141. Tseng W.- C. and Huang L. Liposome-based gene therapy // fSTT . 1998. -Vol.1.-№ 5.-P. 206-213.

142. Van Bommel E.M.G. and Crommelin D.J.A. Stability of doxorubicin liposomes on storage, As an aqueous dispertion, frozen or freeze-dried // Int.J.Pharm. 1984. - Vol.22. - P. 299-310.

143. Van Rooijen N., Sanders A. The macrophage as target or obstacle in liposome-based targeting strategies // Int.J.Pharm. 1998. - Vol. 162. -№1/2. - P. 4549.

144. Vemuri S., Yu C.D., de Groottt J.S. et al. Effect of sugars on freeze Thaw and lyophilization of liposomes // Drug Dev.Ind.Pharm. 1991. - Vol.17. - №3. -P. 327-348.

145. Willemer H. Troubleshooting Lyophilisation // Pharm. Techn. Europe. -1999.-Vol. 11. -№ 5. P. 15-22.

146. Yao T., Huang L., Zern M. A. The use of liposomes in the therapy of liver disease // Advanced Drug Delivery Reviews. 1995. - Vol. 17. - № 3. -239-246.

147. Yip D., Halford S., Karapetis C. et al. A Phase II trial of Caelyx (liposomal doxorubicin, Doxil) in the treatment of advanced pancreatic cancer. // Proc. ASCO. 1999. - Vol. 18. - P. 306 a (Abstr.l 177).

148. Yokoyama M., Satoh A., Sakurai Y. et al. Incorporation of water-insoluble anticancer drug into polymeric micelles and control of their particle size // J.Contr.Rel. 1998. - Vol. 55. - № 2/3. - P. 219-222.