Совершенствование способов повышения выживаемости микробных клеток в сухих живых вакцинах и пробиотиках тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат биологических наук Светлакова, Елена Валентиновна

• Светлакова, Елена Валентиновна
• кандидат биологических наук
• 2003

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Светлакова, Елена Валентиновна

СОДЕРЖАНИЕ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Общие положения о культивировании микроорганизмов и подбор для этих целей питательных сред

1.1.1. Методы культивирования различных микроорганизмов.

1.1.2. Рецепты и изготовление сред для культивирования микроорганизмов.

1.1.3. Оптимизация питательных сред.

1.2. Значение защитных сред для сохранения жизнеспособности бактерий, стабилизации и сроков хранения

1.2.1. Значение воды для жизнедеятельности бактерий и её роль при сублимационной сушке.

1.2.2. Анабиоз бактерий и его роль при сублимационной сушке живых бактерий.

1.2.3. Роль защитных сред при сублимационной сушке живых бактерий.

1.2.3.1. Характеристика и значение защитных сред.

1.2.3.2. Основные условия хранения живых сухих биопрепаратов.

1.3. Регидратация микробных клеток и её значение.

1.3.1. Разбавители сухих живых вакцин и их состав.

1.3.2. Условия и механизм реактивации микроорганизмов.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1. Материалы исследований.

2.2. Методы исследований.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1.Изыскание стимуляторов роста в процессе лабораторного и промышленного культивирования микроорганизмов

3.1.1. Общая характеристика «рисового» гриба и продуктов его метаболизма.

3.1.2. Общая характеристика «чайного» гриба и современные технологии использования продуктов его метаболизма как стимуляторов роста микроорганизмов

3.2. Модификация защитных сред для микроорганизмов при сублимации и внедрении в технологический процесс

3.2.1. Модификация защитной среды для приготовления сухих вакцин против сальмонеллезов сельскохозяйственных животных.

3.2.2 Модификация защитной среды для изготовления сухой вакцины против листериоза сельскохозяйственных животных.

3 . 2 . 3.Совершенствование защитной среды для изготовления пробиотика «Биобактон».

3.3. Совершенствование разбавителей для сухих биопрепаратов из живых микроорганизмов.

3.3.1. Совершенствование разбавителей для грамотрицательных бактерий в сухих живых вакцинах.

3.3.2. Совершенствование разбавителей для грамположительных бактерий в сухих живых вакцинах

3.3.3. Совершенствование разбавителей для пробиотика «Биобактон».

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ.

ВЫВОДЫ.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Совершенствование способов повышения выживаемости микробных клеток в сухих живых вакцинах и пробиотиках»

Актуальность темы. в системе специфических мероприятий в борьбе с инфекционными болезнями важным является применение профилактических и лечебных препаратов (вакцин, пробиотиков и других). Из бактериальных препаратов для профилактики и лечения инфекционных заболеваний обычно используют вакцины и пробиотики.

По мнению ряда ученых наиболее предпочтительными является использование живых вакцин из аттенуированных штаммов микроорганизмов, так как они обеспечивают более прочный, напряженный и продолжительный гуморальный и клеточный иммунитет (И.К. Тутов, В. И. Ситьков, 1997; В.И. Заерко, В.И. Ситьков, И.К. Тутов, 1999; И.К. Тутов, В.И. Заерко, 2002) . Как правило, живые вакцины применяют однократно.

Пробиотики также представляют собой биопрепараты из живых, полезных для человека и животных, бактерий. Они обладают лечебными свойствами, вытесняют из желудочно-кишечного тракта нежелательную микрофлору и обеспечивают коррекцию иммунного ответа организма (В.В. Субботин, 1999; Д.А. Дервишов, 2000; Е.С. Воронин, A.M. Петров, М.М. Серых, Д.А. Дервишов, 2002).

Живые вакцины и пробиотики чаще всего выпускают в сухом виде. Они имеют больший срок хранения по сравнению с жидкими препаратами. В виду малых объемов таро-мест, транспортировка их более экономична .

При всех указанных достоинствах живых сухих бактериальных биопрепаратов остается ряд не решенных проблемных вопросов. Это, прежде всего, увеличение биомассы жизнеспособных микробных клеток в процессе культивирования производственных штаммов микроорганизмов, сохранение наибольшего количества живых бактерий в процессе подготовки и проведения сублимационной сушки препаратов. Не меньшей проблемой является сохранение наибольшего количества жизнеспособных микробных клеток при регидратации и реактивации вакцин и пробиотиков перед их применением.

Решение указанных вопросов связано с подбором наиболее оптимальных питательных сред при культивировании производственных штаммов микроорганизмов, с использованием различных стимуляторов роста, изысканием наиболее подходящих защитных сред для сублимационной сушки препаратов и применением физиологически оптимальных разбавителей сухих биопрепаратов.

Цель и задачи исследований. Целью исследований было изыскание способов наилучшего сохранения жизнеспособности вакцинных и про-биотических штаммов микроорганизмов на всех технологических этапах приготовления биопрепаратов.

Для реализации указанной цели перед нами были поставлены следующие задачи:

1. Изыскать наиболее оптимальные варианты приготовления стимуляторов роста микроорганизмов, обеспечивающих в процессе их культивирования наибольшее накопление их биомассы и количества живых микробных клеток.

2. Модифицировать производственную рецептуру защитных сред, обеспечивающих наименьшие потери микроорганизмов при сублимационной сушке биопрепаратов на примере вакцин против сальмо-неллеза, листериоза сельскохозяйственных животных и пробиоти-ка «Биобактон».

3. Разработать физиологически оптимальный состав разбавителей, обеспечивающих сохранение живых микробных клеток при регидра-тации сухих вакцин и пробиотиков:

- для грамотрицательных бактерий (сальмонелл и пастерелл);

- для грамположительных бактерий (листерий, эризипелотрик-сов, лактобактерий);

4. Дать научную и практическую оценку результатов исследований способов сохранения жизнеспособности производственных штаммов микроорганизмов на всех этапах производства и применения сухих живых вакцин и пробиотика «Биобактон».

Научная новизна работы. Нами установлено, что продукты метаболизма естественной ассоциации микроорганизмов (на примере «чайного» гриба) является мощным стимулятором роста микроорганизмов (СРМ ТС-1). Впервые доказано, что добавление 1% СРМ ТС-1, изготовленного методом стерилизующей фильтрации, обеспечивает увеличение накопления биомассы микроорганизмов и количество живых микробных клеток в питательных средах при глубинном культивировании на 28,5%, чем добавление стимулятора роста микроорганизмов, подвергнутого жесткой стерилизации.

Защитная среда, изготовленная на основе 0,9%-ов хлорида натрия, обеспечивает сохранение большего количества живых листерий уже на стадии гомогенизации на 15%, а затем, при их сублимационной сушке - на 39,9%. Введение в состав защитной среды для листерий 1% СРМ ТС-1 повышает их резистентность к процессам лиофилизации на 20,4%.

Нами предложены разбавители сухих живых вакцин против сальмонеллеза, пастереллеза, рожи, листериоза животных и пробиотика «Биобактон» на основе фосфатно-буферной смеси физиологически оптимальных для микроорганизмов растворов хлорида натрия с включением в них 8-10% мясопептонного бульона. В сравнении с традиционными разбавителями при применении опытных их вариантов наблюдается повышение в сравнении с контролем сохраняемости живых сальмонелл на - 17,7%, пастерелл на - 1,9%, листерий на - 17,3%, лактобактерий на - 77%.

Теоретическая и практическая значимость результатов исследований заключается в том, что при конструировании питательных сред для культивирования производственных штаммов микроорганизмов, а также при приготовлении защитных сред для сублимационной сушки биопрепаратов и приготовлении разбавителей сухих живых вакцин и пробиотиков мы принимали во внимание физиологические свойства микроорганизмов . Предложенные нами способы сохранения вакцинных и пробиотических штаммов микроорганизмов обеспечивают наибольший выход живых микробных клеток и общий объем биомассы по сравнению с контролями.

Применение при культивировании микроорганизмов стимулятора роста ТС-1, приготовленного методом стерилизующей фильтрации, позволило увеличить выход общей биомассы микроорганизмов (на примере листерий на - 32,7%).

Использование физиологически оптимальных разбавителей сухих живых вакцин повышает количество живых микробных клеток после разведения вакцин на 14-20%. Это обеспечивает значительное повышение иммуногенной активности препарата.

Включение в состав защитной среды для листерий 0,9% хлорида натрия обеспечивает сохранение при сублимационной сушке на 39,9% микробов больше, чем при применении производственных защитных сред. Это позволяет получить годовой экономический эффект на сумму 954228 рублей (на примере ФГУП «Ставропольская биофабрика»).

Результаты наших исследований используются при промышленном производстве биопрепаратов на ФГУП «Ставропольская биофабрика».

Кроме того, результаты наших исследований используются в учебном процессе при изучении курсов «Ветеринарная микробиология и иммунология», «Биотехнология ветеринарных препаратов» в Ставропольском государственном аграрном университете.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на: Международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы диагностики, профилактики и борьбы с болезнями сельскохозяйственных животных» (Ставрополь, 1999); Международной научной конференции «Достижения ветеринарной медицины - XXI веку» АГАУ (Барнаул, 2002) ; региональной конференции «Перспективы внедрения современных биотехнологических разработок для повышения эффективности сельскохозяйственного производства» (Краснодар,2000); Всероссийских конференциях, посвященных достижениям биотехнологии (Ставрополь, 1999, 2001); на ежегодных научно-практических конференциях Ставропольской ГСХА (1997-2002 гг.).

Публикации Основные материалы исследований по теме диссертационной работы освещены в девяти научных статьях.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 160 страницах машинописного текста и состоит из: введения, обзора литературы, методов и результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, списка литературы, включающий 191 источник, в том числе иностранных 30. Работа иллюстрирована 26 таблицами и 7 рисунками.

На Зашрггу выносятся следутптрте основные положения:

1. Совершенствование технологии изготовления и применения стимуляторов роста микроорганизмов, обеспечивающих повышение выхода общей биомассы и количества живых бактерий на стадии культивирования производственных штаммов микроорганизмов;

2. Включение в состав защитных сред для микроорганизмов хлорида натрия в физиологически оптимальных концентрациях, способствующих сохранению большого количества живых микроорганизмов в биомассе, как на стадии ее гомогенизации, так и на стадии сублимационной сушки;

3. Предложенные нами разбавители сухих живых вакцин и пробиотиков обеспечивают лучшую регидратацию и реактивацию микробных клеток, повышение сохраняемости живых микробных клеток на стадии разбавления биопрепаратов.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Светлакова, Елена Валентиновна

135 ВЫВОДЫ

1. Добавление 1% стимулятора роста микроорганизмов ТС-1, стерилизованного методом ультрафильтрации, к объёму питательной среды при глубинном культивировании листерий, увеличивает выход общей биомассы микроорганизмов на 32,7%.

2. Применение защитной среды на основе 0,9% раствора хлорида натрия при сублимации листерий повышает их жизнеспособность на 39,9%; включение дополнительно в состав защитной среды 3% стимулятора роста ТС-1 увеличивает выживаемость микроорганизмов ещё на 20,4%, что даёт возможность получить годовую прибыль в сумме 1057 52 4 руб.

3. Использование для разбавления сухой живой вакцины против листериоза сельскохозяйственных животных 0,9% раствора хлорида натрия с добавлением 10% МПБ повышает жизнеспособность листерий на 17,3% по сравнению с применением традиционных разбавителей.

4. Защитная среда с 0,5%-ным раствором хлорида натрия для производственных штаммов сальмонелл обеспечивает лучшее сохранение в процессе сублимационной сушки. Количество иммунизирующих повышается в среднем на 47,2%, по сравнению с использованием производственной среды высушивания.

5. Применение 0,5% раствора хлорида натрия с 10% МПБ (для разбавления сухих бактериальных вакцин против сальмонеллёза сельскохозяйственных животных и пастереллеза водоплавающей птицы) и 8% МПБ (для разбавления сухой живой вакцины против рожи свиней) существенно повышает жизнеспособность микробных клеток: на 18,3%, 1,9% и 40,9% соответственно.

6. Защитная среда на основе 0,5% раствора хлорида натрия при лиофилизации пробиотика «Биобактон» увеличивает количество живых лактобактерий в 2,9 раза, а применение этого раствора в качестве разбавителя «Биобактона» повышает сохранение составляющих его бактерий на 77%.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. При промышленном культивировании листерий и других микроорганизмов рекомендуем применять препарат СРМ ТС-1, профильтрованный через стерилизующие фильтр-элементы с величиной пор 0,2 мкм.

2. На предприятиях биологической промышленности следует готовить защитные среды для сублимационной сушки листерий на основе 0,9%-ного раствора хлорида натрия и на основе 0,5%-ного раствора этой соли -для сальмонелл и лактобактерий.

3. В производственных условиях при разведении сухих живых вакцин, рекомендуем применять 0,9%-ный раствор хлорида натрия с 10% МПБ для вакцины против листериоза и 0,5%-ный с 8-10% МПБ - для вакцин против сальмонеллеза, пастереллеза животных и рожи свиней.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Светлакова, Елена Валентиновна, 2003 год

1. Алексахина, Н.Н. Влияние процессов культивирования Klebsiella pneumoniae на антигенную активность вакцинных препаратов для пероралдьного применения //Н.Н. Алексахина, И.А.Басканьян,

2. B.И.Карабак, Н.В.Стукалова, JI.B. Мирясова //Микробиология, эпидемиология и иммунология.-1997.-№1.-С.43-47.

3. Анаппелян, P.M. Режим культивирования микроорганизмов с учетом массообменных и техникоэкономических показателей/P.M. Анаппелян, К.А. Калунянц//Ферментная и спиртовая промышленность 1981.- №7.-С.36-39.

4. Андреев, К.П. Сбалансированная среда Андреева для выращивания дрожжей/К.П. Андреев, Э.А. Боборенко, Н.И. Монахова, JI.A. Гусарова, Т. И. С^мушина/Актуальные вопросы разработкимедицинской биотехнологии//Тезисы конференции. Махачкала, 1988.- 41.

5. Анисимова, Т.Б. Чайный гриб, плесени и дрожжи/Т.Б. Анисимова. -Ростов н/Д: Феникс, 2000.-128 с.

6. Аркадьева, З.А. Факторы, влиякш^е на жизнеспособность и свойства микроорганизмов при различных методах хранения /З.А. Аркадьева //Научные доклада высшей школы.-М., 1983.-№4.-С. 16-21.

7. Артюшина, И.А. Гидролизаты из непищевого сырья как основа питательных сред для культивирования Bacteroides nodosus /И.А. Арткшина, Ю.Д. Караваев, С. П. Рогожин//Передовой научно-производственных опыт в биологической промышленности. Москва,1987.-С.8-9.

8. Барабанчик, Т.Ф. Чайный гриб и его лекарственные свойства /Т.Ф. Барабанчик. Олек, 1954.- С.6-8.

9. Басканьян, И. А. Патология и физиология микроорганизмов. Усовершенствование технологии культивирования /И.А. Басканьян //Микробиология, эпидемиология и иммунология, 1982.-№12.-С.28-33.

10. Баснакьян, И.А. Некоторые аспекты интенсификации производства бактерийных препаратов / И. А. Баснакьян, J1.H. Запорожцев //Микробиология.-1916.-№11.-С.30-34.

11. Басканьян, И.А. Культивирование микроорганизмов с заданными свойствами/И.А. Басканьян. М.: Медицина, 1992.-С.44-51.

12. Безбородое, P.M. Биотехнология продуктов микробного синтеза /P.M. Безбородов. М.: Агропромиздат, 1991.-С.211.

13. Беккер, М.Е. Введение в биотехнологию /М.Е. Беккер.-М.:Пищевая промышленность, 1978.-231 с.

14. Беккер, М.Е. Анабиоз микроорганизмов /М.Е. Беккер, Б.Э. Дамбэрг, А.И. Рапоппорт.-Рига, 1981.- 218 с.

15. Беккер, М.Е. Биотехнология /М.Е. Беккер, Г.К. Липиньш, Е.П. Райпулис. -М.: Агропромиздат, 1990.-С.108-111.

16. Белоус, A.M. Криоконсерванты /A.M. Белоус, М.И. Шпарго, Н.С. Пушкарь.-Киев: Наука думка, 1979.- 197 с.

17. Бланков, Б.И. Применение лиофилизации в микробиологии /Б.И. Бланков, Д.П. Клебамов.-М.:Медгиз.-1961.- С.161-173.

18. Бузолева, Л.С. Динамика размножения патогенных бактерий в зависимости от трофических и температурных условийкультивирования/JT. С. Бузолева//Микробиология, эпидемиология и иммунология. -2000. -№2. -С. 15-18.

19. Буткин, А.В. Стабилизация биологических свойств биообъектов в процессе высушивания /А.В. Буткин, Е.М. Хринов//Ветеринария, 1991.-№12.-С.17-19.

20. Бушуева, Н.В. Усовершенствование технологии инактивации S.dublin, штамм 373 / Н.В. Бушуева, М.Я. Ярцев, С.М. Пыжолв, Т.В. Бодунова, и др.//Ветеринария, 1996.-№4.-С.28-29.

21. Веревкина,. М.Н. Аминокислотный состав стимулятора роста микроорганизмов ТС-1/М.Н. Веревкина //Диагностика, лечение и профилактика заболеваний сельскохозяйственных животных: Сб. науч. тр./Ставроп.ГСХА. Ставрополь, 1998.-С.58-61.

22. Веревкина, М.Н. Микробный и биохимический состав стимулятора роста микроорганизмов ТС-1 /М.Н. Веревкина//Диагностика, лечение и профилактика заболеваний сельскохозяйственных животных: Сб. науч. тр./Ставроп. ГСХА. Ставрополь, 1997.- С.25-27.

23. Веревкина, М.Н. Технология приготовления, характеристика и применение стимулятора роста микроорганизмов ТС-1 в биологической промышленности: Дисс. . .канд. биол. наук /М.Н. Веревкина.- Ставрополь,2ООО.- 25 с.

24. Виестур, У.Э. Культивирование микроорганизмов/У.Э. Виестур, М.Ж. Кристапсонс, Е.С. Былинкина. М.: Пищевая промышленность, 1980.-232с.

25. Винник, А. Л. Аминокислотный состав питательной среды из плаценты человека для выделения и культивированияпневмококка/А. JI. Винник, З.И. Ершов /Актуальные вопросы разработки медицинской биотехнологии//Тезисы конференций. -Махачкала, 1988.-С.22.

26. Воробьёв, Л.И. Промышленная микробиология /Л.И. Воробьёв.-М.:Изд. Московского университета, 1989.- 294 с.

27. Воронин, Е.С. Иммунология /Е.С. Воронин, A.M. Петров, М.М. Серых, Д.А. Девришов.-М., 2002.- 408 с.

28. Воронкина, И.М. Экономичная питательная среда в производстве препарата бифидумбактерина/И.М. Воронкина, В.Г. Кандюрина, М.Б. Мартовская, Н.В. Модератова/Актуальные вопросы разработки медицинской биотехнологии//Тезисы конференции. Махачкала, 1988.-С.18.

29. Гаврилова, Н.Н. Основы биотехнологии получения микробных препаратов для животноводства/Н.Н. Гаврилова//Технология получения продуктов микробиологического синтеза.-Алма-Ата: Наука, 1988.-С.24-35.

30. Гашилова, П.Ш. Среда культивирования для дрожжеподобных грибков/П.Ш. Гашилова, А. В. Милихина/Актуальные вопросы разработки медицинской биотехнологии//Тезисы конференции. Махачкала, 1988.- С.7-9.

31. Герхардт, Ф. Метода общей бактериологии /Ф. Герхардт.-Мю: Мир, 1983.-Т.1, 3.- 536, 264 с.

32. Гинцбург, A.JI. Некультивируемые формы бактерий и их роль в сохранении возбудителей сопронозов во внешней среде / A.J1. Гинцбург, Б.Ю. Романова, // Микробиология, эпидемиология и иммунология.-1997.-№3.-С.116-121.

33. Девришов, Д. А. Разработка и изучение свойств иммуномодуляторов и биологических препаратов для профилактики и лечения болезней молодняка сельскохозяйственных животных. Дисс. докт. биол. наук.-М., 2000.-49 с.

34. Достоевский, П. П. Контроль за производством ветеринарных ветпрепаратов объективная необходимость /П.П. Достоевский, JI.K. Вольнец //Ветеринария, 1991.-N6.-C.-3-5.

35. Дрю, С. Метода общей бактериологии /Под ред. Ф. Герхардт и др.-Т.1.-М.:мир, 1983.-С.374,407-408.

36. Жуков, А.П. Полезный напиток/А.П. Жуков//Приусадебное хозяйство.-1990.-№1.- С.37.

37. Заболотняя, В.И. Особенности культивирования пастерелл /В.И. Заболотняя, А.И. Сосницкий /Состояние, проблемы и перспективы развития ветеринарной науки России //Материалы научно сессии Россельхозакадемии. М.: Россельхозакадемия, 1999.- Т.1.-С.241.

38. Заерко, В.И. Производство живых вакцин против сальмонеллеза животных на питательных средах непищевого сырья. Автореф.: дис. канд. вет. наук /В.И. Заерко.- Москва, 1996.- 24 с.

39. Иерусалимский, Н.Д. Теория и практика культивирования/Н.Д. Иерусалимский //Микробиология, 1961.-С.30.

40. Иерусалимский Н.Д. Ростовые вещества микробов, их природа и значение в жизни микроорганизмов //Микробиология.-1940.-Т.1Х. в. 7-8.-200с.

41. Каронелли, Т.В./ Т.В. Каронелли, С.Г. Дермичева, Е.В. Коротаева //Микробиология, 1988.-Т.57.-С.298.

42. Карпов, A.M. Ультрафильтрация в производстве туберкулина /A.M. Карпов, А.А. Конарев, В.М. Безгин, В.Е. Козлов, Л.Д.

43. Ничвеева//К 100-летию агробиологической промышленности России: Тезисы докладов.- Курск, 1996.-С.138.

44. Карпов, A.M. Сушка продуктов микробиологического синтеза/А.М. Карпов, А.А. Улумиев. М.: легкая и пищевая промышленность, 1982.-216 с.

45. Квасников, Е.И. Молочнокислые бактерии и пути их использования /Е.И. Квасников, О.А. Нестеренко.-М., 1975.-389 с.

46. Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии: Справочное издание /Сост.: И.П. Кондрахин, Н.В. Курилов, А.Г. Малахов и др.-М.:Агропромиздат,1985.-287с.

47. Коржинский, М., Методы общей бактериологии: Пер. с англ./Под ред. Ф. Герхардта и др. М.:Мир, 1983.- С.166-187.

48. Королева, Н.С. Технологическая микробиология цельномолочных продуктов / Н.С. Королёва М.: Пищевая промышленность, 1975.271 с.

49. Костилоу, Р. Методы общей биотехнологии /Под ред. Ф. Герхардта и др.-М.:Мир, 1983.-Т.1.-С. 163-165.

50. Красникова, Л.В. /Л.В. Красникова, И.В. Салахова, В.И. Шаробайко//Изв. вузов.Пищ. технология.-1992.-№1.-С.11-12.

51. Лининджер А. Биохимия / А. Лининджер .-М.:Мир, 1974.-С.54-68.

52. Куплетская, М.Б. О хранении лиофилизированных культур сапрофитных микроорганизмов /М.Б. Куплетская, З.А. Аркадьева //Микробислогмя.-М., 1980.-Т.49.-№4.-С.621-623.

53. Литвин, В.Ю., Гинцбург, А.Л., Пушкарева, В.И. Эпидемиологические аспекты экологии бактерий. М., 1988.- С. 4547.

54. Лотковская, Т. Р. Получение жидких и сублимированных препаратов БСКА /Т.Р. Лотковская /Роль биотехнологии в экологизации питательных сред, питании и здоровья человека //Всероссийская конференция, 2001.- С.155-156.

55. Максимов, В.И. Углеводные стимуляторы бифидобактерий /В.И. Максимов//Биотехнология.-1991.-№6.-С.3-7.

56. Малахов, Ю.А. Специфическая профилактика бактериальных болезней животных//Ю.А. Малахов, Р.В. Душук.//Ветеринария, №1.-2001.-С.35.

57. Маракуша, Б.И. Характеристика штаммов Listeria monocitogenes, выделенных в России и их типирование с помощью пульс-электорофареза / Б.И. Маракуша, К. Дарвиш, И.С. Тартаковский, //Микробиология, эпидемиология и иммунология.-1996.-№3.-С.60-64.

58. Маслак, А.А. Использование планов с расщепленными единицами в биотехнологических исследованиях/А.А. Маслак, А.Я. Самуйленко, Н.Д. Скичко//Передовой научно-производственный опыт в биологической промышленности. Москва, 1987.-№12.-С.15-18

59. Матвеев, В.Е. Научные основы микробиологической технологии (кинетика развития и инактивация микробных популяций, асептика, масштабирование)/В.Е. Матвеев. М.: Агропромиздат, 1985.-С.53.

60. Меджидов, М.М. Состояние и перспективы развития производства микробиологических питательных сред /М.М. Меджидов /Актуальные вопросы разработки медицинской биотехнологии //Тезисы конференции. Махачкала, 1988.- 39.

61. Нежута, А. А. Методические подходы к разработке типовых режимов сублимационной сушки //А.А. Нежута, Т.Ю. Маслов, В.Н. Егорова //Передовой научно-производственный опыт в биологической промышленности.-Москва.-1987.-№6.-С. 22-23.

62. Никитин, Е.Е. Замораживание и высушивание биологических препаратов /Е.Е. Никитин, И.В. Звягин.- М.: Колос, 1971.-341 с.

63. Олиферова, Э.В. Влияние стимулятора роста микроорганизмов ТС-1 на основные свойства энетробактерий /Э.В. Олиферова //Диагностика, лечение и профилактика заболеваний сельскохозяйственных животных: Сб. науч. тр./Ставроп.ГСХА. -Ставрополь, 1998.-С.55-58.

64. Олиферова, Э.В. Научно-практическое обоснование применения стимулятора роста микроорганизмов ТС-1 в промышленной технологии культивирования энтеробактерий: Дис. канд. биол. наук/Э.В. Олиферова. Ставрополь, 2000.- 23 с.

65. Опарин, Ю.Г. Повреждение и зашита биоматериалов при замораживании и лиофилизации /Ю.Г. Опарин //Биотехнология. Теоретический и научно-профилактический журнал, 1996.-№7.-С.З-13.

66. Панников,Н.С. /Шеховцова, Н.В., Дорофеев, А. Г., Звягинцев, Д.Г.//Микробиология.-198 8.-Т.57, Вып.б.-С.983-991.

67. Патент 2007450 РФ, МКИ3 В 03 М 35/10.Способ получения биомассы бактерий/Копаков, А. И., Горская, Е.М., Куприянова Ф.Г. от 15.02.94.

68. Патент 2115720. Способ И.К. Тутова и В.И. Ситькова получения стимулятора роста микроорганизмов и его применение/И.К. Тутов, В.И. Ситьков от 20.07.98 приоритет изобретения от 19.03.1996, № заявки 96105245.

69. Патент 2103345. Способ получения гидролизатов и использование их при изготовлении питательных сред для культивирования микроорганизмов /В. И. Ситьков, В.И. Заерко, А.П. Сурмило, И.К.

70. Тутов, Р.Г. Колпакова от 27. 01.1998, приоритет изОобретения 25.06.1996, № заявки 96112604.

71. Перт, С.Дж. Основы культивирования микроорганизмов и клеток /С. Дк. Петрт.-М.: Мир, 1972.-С. 135, 139,145,164,203.

72. Першина, М.Ю. Новая питательная среда для выращивания микробной культуры стафилококков /М.Ю. Першина, К.Р. Толовская, А.К. Акатов, В.Я. Прохоров //Микробиология, эпидемиология и иммунология.-1995.-№6.-15-16.

73. Плохинский, Н.А. Руководство по биометрии для зоотехников /Н.А. Плохинский. Москва: Колос. - 1969.-256 с.

74. Полишук, П.К. Микробиология молока и молочных продуктов /П.К. Пслишук, Э. С. Дербинова, Н. Н. Казанцева. -М.: Пищевая промышленность, 1978.-240 с.

75. Потапова, О.А. Эффективность применения лактобрила и биобактона при сальмонеллёзах молодняка животных: Дисс. канд. вет.наук /О.А. Потапова.-Ставрополь, 1998.-164 с.

76. Промышленная микробиология: Учебное пособие/Сост.: Л.И. Воробьёва. М.: МГУ, 1989.- 294с.

77. Промышленная микробиология/Под ред. Н.С. Егорова.-М.: Высшая школа.-1989.-132 с.

78. Работнова, И.JI. Об изучении физиологического состояния исследуемых микроорганизмов / И.Л. Работнова //Микробиология.-1980.-Т.49, вып.4.-С.634-638.

79. Руководство по вакцинному и сывороточному делу/Под ред. П.Н. Бургасова.-М.:Медицина, 1978.-С.160.

80. Руководство к практическим занятиям по микробиологии /Под ред. Н.С. Егорова.-М.:Изд-во Моск. ун-та,1983.-215 с.

81. Светлакова, Е.В. Аминокислотный состав культуральной жидкости «рисового гриба»/Е.В. Светлакова //Диагностика, лечение и профилактика заболеваний сельскохозяйственных животных: Сб. науч. тр. /Ставроп. ГСХА.-Ставрополь,1998.-С.61-64.

82. Ситьков, В.И. Научные и практические основы промышленного производства и применения вакцин. Дисс.докт. вет. наук. /В.И Ситьков.-Москва, 1997.-С. 10.

83. Ситьков, В.И. Совершенствование технологии изготовления листериозного антигена /В.И. Ситьков, Н.И. Каменский //Диагностика, лечение и профилактика заболеваний сельскохозяйственных животных: Сб.науч.тр./Ставроп.ГСХА. Ставрополь, 1998.-С.26-29.

84. Сомов, Г.П. Сапрофитизм и паразитизм патогенных бактерий. Экологические аспекты./ Г.П. Сомов, JI.C. Бузолева, В.Ю. Литвин -Новосибирск, 198 8.-С.66.

85. Сомов, Г.П. Экологические аспекты в Приморском крае /Г.П. Сомов, И.А. Беленева, Л.С. Бузолева, М.Ф. Дзадзиева, А.Л.

86. Беседнов //Микробиология, эпидемиология и иммунология, 1997.-№5.- С.78-82.

87. Сомов, Г.П. Влияние низкой температуры на вирулентность некоторых патогенных бактерий /Г.П. Сомов, Т.Н. Варвашевич //Микробиология, эпидемиология и иммунология.-1992.-№4.-С 62-66.

88. Старостина, Н.Г. Характеристика гидрофобности клеточной поверхности метанотрофных бактерий по их способности к адгезии на углеводородах /Н.Г. Старостина, А.Г. Кощаев, Е.Н. Ратнер, А.Б Циоменко.- 1997.-Т.66.-№2.-С.185-191.

89. Субботин, В.В. Биотехнология пробиотика лактобифадола (бифидобактерина) и его лечебно-профилактическая эффективность.-Дисс. докт.вет.наук/В.В. Субботин.-М., 1999.-41 с.

90. Сурмило, А.П. Особенности технологии приготовления питательных сред для культивирования лептоспир / А.П. Сурмило //Диагностика, лечение и профилактика заболеваний сельскохозяйственных животных: Сб. науч. тр. /Ставроп.ГСХА. -Ставрополь,1997.-С.23-24.

91. Тутов, И.К. Использование стимулятора роста микроорганизмов для культивирования аттенуированных штаммов сальмонелл /И.К. Тутов, В.А. Кравцов, С.Я. Соловьёва, Н.А. Сжередова, М.Н.

92. Веревкина, В.И. Заерко, О.А. Потапова //Вестник ветеринарии. -Ставрополь, 1996.-№1.-С.69-71.

93. Тутов, И.К. Биотехнологические условия вырашивания «чайного гриба»/И.К. Тутов, М.Н. Веревкина //Вестник ветеринарии.-1996.-№2.-С.84-88.

94. Тутов, И.К. Культуральные и биохимические свойства ассоциации микроорганизмов «рисового гриба»/И.К. Тутов, Е.В. Светлакова //Вестник ветеринарии.- 1998.- №11.-С.73-77.

95. Тутов, И.К. Основы биотехнологии ветеринарных препаратов /И.К. Тутов, В.И. Ситьков Ставрополь, 1997.-253 с.

96. Тутов, И.К. Перспективы использования стимулятора роста микроорганизмов ТС-1 в биологической промышленности /И.К. Тутов,

97. B.А. Кравцов, М.Н. Веревкина, В.Ш. Геладзе, Н.И. Каменский //Вестник ветеринарии.-№2.-1996.-С.78-83.

98. Тутов, И.К. Роль Eschrichia coli в патогенезе отравления у сельскохозяйственных животных /И.К. Тутов, С.Я. Соловьёва, Н.А. Ожередова, Э.В. Олиферова //Вестник ветеринарии. №5/3.-1997.1. C.

99. Тутов, И.К. Сравнительная оценка кинетики роста и размножения листерий на питательных средах при глубинном культивировании

100. И.К. Тутов, В.А. Кравцов, Н.И. Каменский, Ю.М. Кубраков //Диагностика, лечение и профилактика заболеваний сельскохозяйственных животных: Сб. науч. тр./Ставроп.ГСХА. Ставрополь, 1996.-С.8-10.

101. Тутов, И.К. Профилактика сальмонеллеза проблема очень важная /И. К. Тутов, В. И. Заерко//Ветеринарная служба Ставрополья.- Ставрополь, 2002.-№2.-С.13-14.

102. Ураков, Н.Н. Функциональное состояние и механизмы повреждения микроорганизмов в процессе приготовления бактериальных препаратов /Н.Н. Ураков, В. Я. Волнов, Р. В. Боровик//Биотехнология, 1988.-Т.4.-№4.-С.420-432.

103. Устройство аппаратов сублимационной сушки и применение их в биологической промышленности: Учебное пособие /Сост.: В. И. Ситьков, И.К. Тутов, А.С. Бакумов, В.И. Заерко; Ставроп. ГСХА-Ставрополь, 2000.- 19 с.

104. Устройство и использование ферментеров (биореакторов) при производстве ветеринарных препаратов: Учебное пособие /Сост.: И.К. Тутов, В.И. Ситьков, В.А. Мартынов, В.И. Заерко; Ставроп. ГСХА.- Ставрополь, 1999. 16 с.

105. Фатеева, М.В. Коллекция микроорганизмов и методы длительного хранения коллекционных культур /М.В. Фатеева //Успехи микробиологии.-М., 1983.-Т.18.-С.193-215.

106. Чудинова, А.Д. Использование продукта микробиологического синтеза для получения гидролизатов /А.Д. Чудинова, Т.Е. Яковлев, Е.Г. Лавченко, Г.И. Зайцева, Г.П.Головкина, В.Н. Егорова

107. Передовой научно-производственный опыт в биологической промышленности. Москва. - 1985.-№5.-С.4-6.

108. Шишов, С.В. Питательная среда для культивирования бактерий рожи свиней /С.В. Шишов, Б.А. Никаноров, Н.И. Передереев и др.//Передовой научной-производственный опыт в биологической промышленности: Экспресс-информация.-М., 1981.-№3.-С. 10-14.

109. Шлегель, Г. Общая микробиология /Г. Шлегель.- М.: Мир, 1987.559 с.

110. Дудаева, А.А. Криобиология и биотехнология /А.А. Дудаева,

111. B.Г. Попов и др.-Киев.: Наук думка, 1987.-216 с.

112. Ярных, B.C. Стабилизирующая среда высушивания для производства сухой живой вакцины против пастереллёза птиц / B.C. Ярных, П.Н. Рубченков, Р. В. Душук, Т. В. Огородникова, И. С. Дубов, В.И. Ситьков, В.И. Заерко//Ветеринария, 1990.-№1.-С.63.

113. Ярных, B.C. Влияние среды высушивания на устойчивость сухих живых вакцин /B.C. Ярных,П.Е. Рубченков, Д.Ф. Хафизов, Г.Ф. Денисенко, В.И. Ситьков, С. А. Бугаев, А. С. Жданова //Ветеринария, 1998.-№7.-С.29-31.

114. Ярцев, М.Я. Растворитель для сухих бактериальных вакцин /М.Я. Ярцев, Н.А. Иванова, J1.A. Ковальская, JI.A. Елисеева, Т.В. Львова //Ветеринария.- 1989.-№11.-С.42-43.

115. Ярцев, М.Я. Показатели роста микроорганизмов в управляемых процессах культивирования /М.Я. Ярцев//Ветеринария.-2000.-№4.1. C.25-28.

116. Ярцев, М.Я. Технология промышленного производства бактериальных вакцин/М.Я. Ярцев, Н.Б. Бушуева, А.А. Раевский, Л. В. Анисимова, Л. А. Коротеева, Л.М. Гвоздева, В. В. Доценко//Ветеринария.-1998.-№3.-С.22-24.

117. Ярцев, М.Я. Показатели роста микроорганизмов в управляемых процессах культивирования / М.Я. Ярцев//Ветеринарияю-2000.- №4.-С.25-28.

118. Яскович, Г.А. Изучение гидрофобности поверхности штаммов клеток бактерий /Г.А. Яскович, Е.П. Яковлева //Микробиология.-1996.-Т.65.-№4.-С.569-571.

119. Brock, Т.О., Thermophilic Microorganisms and life at high temperatures. Springer verlag, Berlin, Heidelberg. New Yoek, 1978.-P.311-317.

120. Brosh R., Chen J., Luchansku J.B. /Appl. Environ, Microbiol.-1994. Vol. 60.-№7. - P.2584-2592.

121. Catalogue of Cultures Czechoslovak Collection of microorganisms, Brno, 1975.-624 p.

122. Farber J.V., Peterkin P.I. //Microbiol, Rep.-1991.-Vol. 55, №3.- P. 476-511.

123. Galarka, A.M., Kantr, B.A., Hendereson, R.H., Keja, I.//Wld Hlth Forum.-1984.-Vol.5, NQ.-P. 269-279.

124. Goldman, V., Peibe, R.H., Niven, C.E. J. Bacterid., 1963.-V.65.-P.1017.

125. Grimes, D.J., Colwell R.R. //HEMS Microbiol. Lett.-1988.-Vol.34.-P.1225-1238.

126. Hemert, P Progress in indust.//Microdiol., 1974.- 213 p.

127. Hoff, K.A.//Ibid. 1989. - Vol.55. - P. 1775-1786.

128. Kushner, D.J. Microbial life in Extreme environments, Academic Press.-New Tork, London, 1978.-P. 28-34.

129. Macleod,R.A., Calcatt, P.H. Cold shock and freezing damage to microbes //The survivae of vegerative microbes, 26th Symp. Gen Microbiol.Cambridge: Univ. Cambridge, 1976.-P. 81-109.

130. McLanchlin J //Proceeding of the international Gonference on listeria anf food safety /A.Amgar.-Lavol, 1991.P. 38-47.

131. Mottl, J. Ростовые свойства сухих бульонов/J. Mottl, J. Volypka//Передовой научно-производственный опыт в биологической промышленности. Москва, 1978.-№12.-С.19-21.

132. Niven, C.F., Castellani, А.С., Allanson, V. J.Bacteriol.-1953.-V.58.-633 p.

133. Pirt, S.Y. Principles of Microbe and cell cultivation. -1975. 321 p.

134. Raccach, M, Juven, B.J. Studies of the recovery of greezen salvonella gallinarum: the roles of cooling rate initial cell concentration and plating medium // J.Food. Technol. 1973.-V.8.-№2.-P.211-216.

135. Roth, W.G., Leckie, M.P., Dietzler, D.N.//Ibid. -1988. -Vol.54. P.3142-3146.

136. Roberts N., Singleton F.L. et al //Microbiol. Ecol. 1982.-Vol.8.-P.313-323.

137. Second Europeahn congress on biotechnology.-J. Chen. Technol. and biotechnol.-1982,V.32, №1.-P.1-364.

138. Sonr,T. Concentration and desalination of milk by the use of reserse osmosis. In XVIII Int Dairy Congress, 1970.-V.1E.-P.79-86.

139. Thomas, P.C. et al., Veter. Med., 1986.-81, 974.

140. Varughese P.V., Cartre A.O. //Can.Dis.Weekly Rep.-1989. -Vol. 15.- P.213-217.

141. Vrana, D. et al //Exp Cell. Res., 1982.-138 p.

142. Wesly I.V., Ashton F. //App. Emiron. Microbiol. 1991.-Vol. 57.-P.969-975.

143. Wiedmann M., Czajka, Bsat N. et al //J.Clin. Microbiol.-1994.-Vol. 32.-No.4.-P.991-996.

144. Wittenbury, R. Hydroxide formation and catalase activity in the lactic acid.-Bacteria //J.Gen. Microbiolog., 1964.-№35.-P.77.

145. Xu, H.-S., Roberts, N., Singleton, F.L., et al //Microbiol. E. coli. 1982.- Vol.8.-P.313-323