Разработка методов ПЦР для выявления вируса гриппа птиц подтипов H3, H4, H5 и изучение биологических свойств изолятов вируса тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.02, кандидат биологических наук Бабин, Юрий Юрьевич

• Бабин, Юрий Юрьевич
• кандидат биологических наук
• 2012

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Бабин, Юрий Юрьевич

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Историческая справка

1.2. Классификация и номенклатура вируса гриппа

1.3. Строение вируса гриппа

1.4. Цикл репликации вируса гриппа

1.5. Молекулярные детерминанты патогенности, вирулентности и ограничения круга хозяев

1.5.1. Гемагглютинин

1.5.2. Белок РВ2

1.5.3. Белок NS1

1.5.4. Белок PB1-F2

1.6. Распространение вируса гриппа в популяциях диких птиц

1.7. Инфицирование млекопитающих вирусом гриппа птиц

1.8. Инфицирование рептилий и земноводных вирусом гриппа птиц

1.9. Молекулярно-генетические методы в диагностике вируса гриппа птиц

1.9.1. Применение ОТ-ПЦР в диагностике вируса гриппа птиц

1.9.2. Применение ОТ-ПЦР-РВ в диагностике вируса гриппа птиц

1.9.3. Применение мультиплекс-ПЦР в диагностике вируса гриппа птиц

1.9.4. Применение ДНК-биочипов в диагностике вируса гриппа птиц

1.10. Заключение по обзору литературы

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы

2.1.1. Вирусы

2.1.2. Куриные эмбрионы

2.1.3. Лабораторные животные

2.1.4. Праймеры

2.1.5. Растворы и буферные смеси

2.1.6. Ферменты

2.1.7. Плазмидные векторы

2.1.8. Коммерческие наборы

2.1.9. Оборудование

2.2. Методы

2.2.1. Выделение РНК

2.2.2. Обратная транскрипция

2.2.3. Полимеразная цепная реакция

2.2.4. Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени

2.2.5. Получение плазмид, несущих последовательности генов М1 и НА

2.2.6. Определение первичной нуклеотидной последовательности амплифицированных фрагментов кДНК

2.2.7. Компьютерный анализ и сравнение первичной нуклеотидной последовательности фрагмента гена НА

2.2.8. Выделение и культивирование вируса гриппа птиц в куриных эмбрионах

2.2.9. Выделение и культивирование вируса гриппа птиц в культуре клеток МВСК

2.2.10. Определение титра инфекционной активности вируса гриппа птиц

2.2.11. Определение индекса патогенности вируса гриппа птиц

2.2.12. Статистическая обработка результатов

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ

ОБСУЖДЕНИЕ

3.1 Разработка метода ОТ-дПЦР-РВ для выявления вируса гриппа птиц типа А и идентификации подтипа Н5

3.1.1. Выбор праймеров для ОТ-дПЦР-РВ

3.1.2. Аналитическая чувствительность ОТ-дПЦР-РВ

3.1.3. Оценка эффективности амплификации фрагментов генов М и НА в ОТ-дПЦР-РВ

3.1.4. Специфичность ОТ-дПЦР-РВ

3.1.5. Выявление вируса гриппа птиц подтипа Н5 в образцах биоматериала, отобранных от экспериментально зараженных птиц

3.1.6. Тестирование образцов биоматериала от различных видов диких птиц

3.2. Выделение и изучение изолятов вируса гриппа птиц подтипов НЗ и Н4

3.2.1. Выделение изолятов вируса гриппа птиц подтипов НЗ и Н4

3.2.2. Изучение биологических свойств изолятов вируса гриппа птиц подтипов НЗ и Н4 при их культивировании в КЭ и монослое культуры клеток МБСК

3.2.3. Определение индексов патогенности изолятов ВГП подтипа Н4Ы6

3.3. Разработка методов ОТ-ПЦР для выявления ВГП подтипов НЗ и Н4

3.3.1. Выбор праймеров для выявление вируса гриппа птиц подтипов НЗ и Н4

3.3.2. Аналитическая чувствительность методов ОТ-ПЦР для выявления вируса гриппа птиц подтипов НЗ и Н4

3.3.3. Специфичность методов ОТ-ПЦР для выявления вируса гриппа птиц подтипов НЗ и Н4

3.3.4. Выявление вируса гриппа птиц подтипов НЗ и Н4 у экспериментально зараженных птиц

3.4. Изучение молекулярно-биологических свойств изолятов вируса гриппа птиц подтипов НЗ и Н4

3.4.1. Анализ вариабельности последовательности гена НА вируса гриппа птиц подтипа НЗ

3.4.2. Анализ вариабельности фрагмента гена НА изолятов вируса гриппа птиц подтипа Н4

4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

5. ВЫВОДЫ

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

8. ПРИЛОЖЕНИЯ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка методов ПЦР для выявления вируса гриппа птиц подтипов H3, H4, H5 и изучение биологических свойств изолятов вируса»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Грипп птиц - вирусное заболевание диких и домашних птиц, характеризующееся, в первую очередь, поражением органов дыхания и пищеварения. На основании антигенных различий поверхностных белков вирус гриппа типа А подразделяют на 16 подтипов по гемагглютинину и 9 подтипов по нейраминидазе. Особую опасность для птицеводства представляют высокопатогенные штаммы ВГП подтипов Н5 и Н7, способные вызывать высококонтагиозное заболевание со смертностью до 100%.

Вспышки заболевания, вызванного ВГП подтипа Н5, регистрировались повсеместно как среди диких, так и домашних птиц в течение последних 60 лет. Так, ВГП подтипа Н5 был выявлен в 1959 и 1991 гг. в Англии, в 1961 и 2004 г. в Южной Африке, в 1983г. в Ирландии [Alexander D.J., 2008], в 1967г. в России [Сюрин В.Н., 1972].

Начиная с 1996г., широкое распространение получил ВГП подтипа Н5 генетической линии A/goose/Guangdong/1/96 и вспышки высокопатогенного гриппа птиц были зарегистрированы на территории стран Европы, Африки и Ближнего Востока [Lupiani В. and Reddy S.M., 2008]. За последние 7 лет ВГП подтипа H5N1, относящийся к генетическим кладам 2.2 и 2.3.2 вызвал многочисленные вспышки заболевания как среди диких, так и домашних птиц в различных странах Европы и Азии [Львов Д. К., 2008; Reid S.M., 2011].

Считается, что птицы отрядов Anseriformes (гусеобразные) и Charadriiformes (ржанкообразные), являющиеся естественным резервуаром ВГП в природе, способны переносить вирус на значительные расстояния во время сезонных миграций [Sharov К., 2009; Prosser J.D., 2011]. В результате мониторинговых исследований, проведенных на территории Европы в период с 1998 г. по 2006 г. [Munster J.V., 2007], было установлено, что наиболее распространенными подтипами ВГП в популяциях диких птиц, являются подтипы НЗ и Н4.

При инфицировании домашних птиц некоторые изоляты ВГП подтипов НЗ и Н4 способны вызывать заболеваемость до 50% и смертность до 5%. Кроме того, смертность может достигать более высоких значений при инфицировании молодняка или ассоциированном течении заболевания [Swayne E.D. and PantinJackwood M., 2008].

Через территорию РФ пролегают пять основных путей миграции птиц, перелетающих на значительные расстояния [Львов Д.К., 2004; Si Y., 2009], причем на территории европейской части РФ и Сибири расположены зоны гнездования не менее 16 видов птиц семейства Anseriformes [Gilbert М., 2008], являющихся естественными хозяевами ВГП. Большинство птиц, имеющих зоны гнездования на территории РФ, мигрируют на зимовку в Африку и Юго-Восточную Азию [Lvov D.K., 2004], неблагополучные по высокопатогенному гриппу птиц.

Учитывая широкую распространенность ВГП подтипов НЗ и Н4, а также возможность заноса дикими мигрирующими птицами вируса подтипа Н5, особую значимость приобретают мониторинговые мероприятия и изучение биологических свойств изолятов вируса.

Степень разработанности проблемы. Предложены системы ОТ-ПЦР в режиме реального времени для выявления ВГП подтипа Н5 евразийской [Моппе et al., 2008] и американской [Spackman et al., 2007] генетических линий, системы мультиплекс-ПЦР для выявления ВГП подтипа H5N1 [Payungporn et al., 2006; Wu et al., 2008]. Разработаны системы мультиплекс ПЦР для выявления ВГП подтипов Н5, Н7 и Н9 [Chaharaein et al., 2007], Н5 и Н9 [Saberfar et al., 2007]. Отечественными исследователями разработан методы ОТ-ПЦР для выявления ВГП типа А и подтипов ВГП Н5 и Н7 [Киреев и др., 2007].

Применение метода дуплекс ОТ-ПЦР в режиме реального времени для выявления ВГП типа А и подтипа Н5, а также методов ОТ-ПЦР для выявления ВГП подтипов НЗ и Н4 позволяет сократить затраты времени, труда и

реактивов, необходимых для определения подтипа вируса и оценки его вирулентности.

Цель и задачи исследования. Основная цель данных исследований заключалась в разработке методов выявления ВГП/А подтипов НЗ, Н4 и Н5 с помощью метода ПЦР, изучении биологических свойств и филогенетической взаимосвязи изолятов ВГП подтипов НЗ и Н4, выявленных на территории РФ в период 2008-2010 гг.

Для достижения поставленной цели было необходимо решить следующие задачи:

1. Разработать метод ОТ-дПЦР-РВ для выявления ВГП типа А и идентификации подтипа Н5.

2. Разработать методы выявления ВГП подтипов НЗ и Н4 на основе ОТ-ПЦР.

3. Изучить биологические свойства изолятов ВГП подтипов НЗ и Н4, выделенных в 2008-2010 гг.

4. Определить первичную нуклеотидную последовательность и провести филогенетический анализ фрагментов гена НА изолятов ВГП подтипов НЗ и Н4, выделенных в 2008-2010 гг.

Научная новизна исследований.

1. Разработан метод ОТ-дПЦР-РВ для выявления ВГП типа А и идентификации подтипа Н5.

2. Разработаны методы выявления ВГП подтипов НЗ и Н4 на основе ОТ-ПЦР.

3. Изучены биологические свойства изолятов ВГП подтипов НЗ и Н4, выделенных в 2008-2010 гг., при их культивировании в куриных эмбрионах и монослое культуры клеток МОСК.

4. Определены нуклеотидные последовательности фрагментов гена НА 7 изолятов ВГП подтипа НЗ и 7 изолятов ВГП подтипа Н4, выявленных на территории РФ в течение 2008-2010 гг.

Практическая значимость исследования. Разработаны, одобрены Ученым советом и утверждены директором ФГБУ «ВНИИЗЖ» следующие методические рекомендации:

«Методические рекомендации по выявлению вируса гриппа А птиц и идентификации подтипа вируса гриппа птиц Н5 с помощью ОТ-дПЦР-РВ» (2011 г.);

«Методические рекомендации по определению индекса патогенности штаммов вируса гриппа А птиц» (2010 г.);

«Методические рекомендации по идентификации вируса гриппа птиц в реакции торможения гемагглютинации» (2011 г.).

Апробация работы. Результаты исследований по теме диссертации доложены и обсуждены на заседаниях учёного совета ФГУ «ВНИИЗЖ» в 20082010 гг., опубликованы на Международной научно-практической конференции молодых ученых (Россия, 2010 г.) и международной конференции «Грипп птиц и здоровье человека» (Великобритания, 2009 г.).

Соответствие диссертации паспорту научной специальности. В соответствии с формулой специальность 03.02.02 Вирусология, охватывает проблемы инфекционности вирусов, разработки мер и средств диагностики вызываемых вирусами заболеваний, включая области исследования - генной инженерии, изучение генетических и негенетических взаимодействий между вирусами, эпидемиологии и путей распространения вирусных инфекций, изучение путей передачи вирусов, выявление естественных хозяев, разработку методов диагностики вирусных заболеваний, совершенствование лабораторных диагностических систем. В диссертационной работе проведены исследования по разработке методов ПЦР для выявления ВГП, а также исследования биологических и филогенетических свойств изолятов ВГП.

Результаты научного исследования соответствуют пунктам паспорта специальности - 4, 6, 8, 10.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 5 научных работ, в том числе 3 работы - в изданиях, включенных в перечень ВАК РФ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 138 страницах компьютерного текста и содержит следующие разделы: введение, обзор литературы, результаты собственных исследований и их обсуждение, заключение, выводы, практические предложения, приложения. Список использованной литературы включает 260 источников. Работа иллюстрирована 9 рисунками и 22 таблицами. В приложении представлены копии титульных листов документов, подтверждающих достоверность результатов работы, ее научную и практическую значимость.

Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту:

1. Метод выявления ВГП типа А и подтипа ВГП Н5 на основе ОТ-дПЦР-РВ.

2. Методы выявления ВГП/А подтипов НЗ и Н4 на основе ОТ-ПЦР.

3. Результаты изучения биологических свойств ВГП подтипов НЗ и Н4.

4. Результаты анализа нуклеотидных последовательностей фрагментов гена НА изолятов ВГП подтипов НЗ и Н4, выявленных в РФ в 2008-2010 гг.

Личный вклад автора в выполнении работы. Диссертационная работа выполнена автором самостоятельно. Автор выражает искреннюю благодарность сотрудникам ФГБУ «ВНИИЗЖ» к.в.н. Чвала H.A., к.б.н. Андриясову A.B., к.б.н. Колосову С.Н., к.б.н. Андрейчуку Д.Б., биологу Елаткину Н.П. за помощь в проведении отдельных этапов работы.

и

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1. Историческая справка

Первое упоминание о гриппе птиц относится к 1878 году, когда итальянский исследователь Э. Перончито (1847-1936) описал заболевание кур, характеризующееся высокой смертностью и быстрым распространением. Первоначально заболевание связывали с острой септицемической формой холеры птиц. Однако, в 1880 году, вскоре после первого описания, Риволта и Дельпрато показали отличие данной инфекции от холеры птиц на основе клинических и патологоанатомических признаков и назвали болезнь Typhus exudatious gallinarum. С начала 20 века грипп птиц стал эндемичным заболеванием в Италии и Центральной Европе. Нужно отметить, что отсутствие диагностических методов и циркуляция ВНБ совместно с ВГП делали невозможным точное определение возбудителя вспышек заболеваний домашней птицы, произошедших в начале 20 века. Первые вспышки гриппа птиц в Северной Америке зарегистрированы в 1924-1925 годах. Возможно, что вирус вызвавший эпизоотию, был занесен на американский континент из Франции (155).

В 1931 г. в качестве экспериментальной модели для выделения ВГП стали использоваться эмбрионы кур, а в 1934 г. была показана возможность титрования ВГП на КЭ. После исследования гемагглютинирующей активности вирусов гриппа было установлено, что вирус ВГП способен агглютинировать эритроциты, и, что более важно, было продемонстрировано отсутствие серологического родства между ВГП и ВНБ.

Новая эра в изучении ВГП началась с середины 20 века, когда были выделены менее вирулентные формы вируса. Так называемый "N" вирус был выделен в 1949 г. от павшего цыпленка в Германии (подтип H10N7), но не был определен как ВГП до 1960. Также, от домашних уток, имевших признаки респираторного заболевания, были выделены изоляты ВГП в следующих

странах: Канаде (A/duck/Canada/52 H10N7), Чехословакии (A/duck/ Czechoslovakia/56 (H4N6)), Англии (A/duck/England/56 (H11N6)), Украине (A/duck/Ukraine/6О (H11N8))

В 1959 и 1961 годах, два изолята ВГТГП подтипа Н5 были выделены в Шотландии (A/chicken/Scotland/59 (H5N1) и Южной Африке (A/tern/South Africa/61 (H5N3)). Это привело к появлению неверной концепции утвержающей, что все ВГП подтипов Н5 и Н7 являются высокопатогенными. Это утверждение было опровергнуто, когда низкопатогенные вирусы данных подтипов были выделены от индеек в Канаде в 1966 г. (155).

С 1973 г. до настоящего времени ВГП был выделен по крайней мере от 105 видов диких птиц 26 семейств (108). Выявление потенциальной роли ВГ животных в возникновении пандемий и выявление резервуара ВГП среди птиц семейств Anseriformes (Гусеобразные) и Charadriiformes (Ржанкообразные), стимулировало проведение исследований по экологии ВГ среди диких животных начиная с 1958г.

В дальнейшем идентификация большого количества штаммов ВГП и выявление серологического родства между вирусами, выделенными от диких птиц и ВГ, выделенными от свиней, лошадей и других животных, а также человека, привело к появлению универсальной системы классификации ВГ (155).

1.2. Классификация и номенклатура вируса гриппа

ВГП принадлежит к семейству Orthomixoviridae, включающее вирусы с сегментированным РНК геномом отрицательной полярности. Семейство подразделяется на пять различных родов, включающих вирусы гриппа типа А, В, С, Исавирусы и Тогавирусы. Наиболее распространенный и значимый представитель этой группы вирусов - ВГ типа А, способны инфицировать птиц различных видов и млекопитающих.

Субтипирование вируса гриппа типа А основывается на антигенных различиях двух поверхностных гликопротеинов - гемагглютинина и нейраминидазы. К настоящему времени среди вирусов гриппа типа А идентифицировано 16 подтипов по НА и 9 подтипов по NA.

Согласно международным критериям номенклатуры (37), название штамма ВГ включает следующие пункты: -антигенный тип (А, В или С),

-название животного, от которого вирус был выделен (для вирусов, выделенных от человека, этот пункт может быть опущен),

-географическое местоположение, которое может быть обозначено как город, штат, провинция или регион страны,

-идентификационный номер, присваиваемый изоляту в лаборатории, -год выделения,

-подтип по НА и NA (часто заключается в круглые скобки в конце названия).

Например, для вируса, выделенного от индейки в Миссури название изолята будет следующим: А/turkey/ Missouri/24093/1999 (H1N2) (220).

Согласно руководству МЭБ «Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals» (172) вирусы подразделяются на высокопатогенные и низкопатогенные согласно следующим критериям:

-высокопатогенным считается ВГП, имеющий значение внутривенного индекса патогенности более чем 1,2 для цыплят 6-недельного возраста, или вызывающий гибель 75% цыплят 4-8-недельного возраста, зараженных внутривенно;

-ВГП подтипа Н5 и Н7, имеющие значения внутривенного индекса патогенности не выше 1,2 или вызывающие гибель менее 75% цыплят при внутривенном введении, но имеющий последовательность аминокислот в сайте расщепления НА сходную с последовательностью высокопатогенных вирусов. Так, высокопатогенные изоляты подтипа H5N1, выделенные на территории

Евразии и Африки в 2006г. имеют последовательность сайта расщепления: PQGERRRKKRGLFG.

Случаи выделения ВГП подтипов Н5 и Н7 не соответствующих двум вышеперечисленным критериям также подлежат уведомлению МЭБ.

1.3. Строение вируса гриппа

Морфологически ВГ различны и могут иметь форму сферических частиц диаметром 80-120 нм, либо нитевидную форму до нескольких микрон длиной. Как правило, вирусы нитевидной формы преобладают в клинических образцах, но после пассирования в КЭ или культурах клеток часто принимают форму сферических частиц, что показано, по крайней мере, для ВГ человека. Установлено, что основную роль в образовании нитевидных капсидов играет белок М1 (48). Кроме того, структура вируса включает липидную мембрану, гомологичную мембране клетки-хозяина.

Все ВГ имеют восемь генных сегментов, которые кодируют 10 различных белков. Структурные белки зрелого вириона могут быть разделены на поверхностные белки (НА, NA и М2) и внутренние белки (NP, М1 и белки полимеразного комплекса - РВ1, РВ2 и РА) (26). Три трансмембранных белка НА, NA и М2 встроены во внешнюю липидную оболочку. Белок НА представляет собой тример, формирующий выступы на поверхности липидной мембраны (134). Белок NA является тетрамером и формирует глобулярные структуры. Белок М2 функционирует в качестве ионного канала и играет роль в процессах декапсидизации вируса.

К неструктурным белкам относятся NS1 и NS2, также известные под названием белков ядерного экспорта (169). Белок NS1 не входит в состав вирусной частицы, но продуцируется в большом количестве в зараженной вирусом клетке (99, 245). Белок PB1-F, имеющий длину 87 аминокислотных остатков и экспрессирующийся с различных рамок считывания белка РВ1,

образуется не у всех ВГ. Считается, что РВ1-Р участвует в процессе апоптоза клеток, но к настоящему времени его роль выяснена не до конца (29).

1.4. Цикл репликации вируса гриппа

Проникновение вируса в клетку. Первым этапом проникновения вируса в клетку является прикрепление гемагглютинина, формирующего шипы на поверхности вирусной липидной оболочки, с сиаловой кислотой рецепторов, находящихся на поверхности клеточной мембраны (213). После связывания с поверхностью клеточной мембраны вирус проникает в клетку с помощью рецепторно-опосредованного эндоцитоза. Низкие значения рН эндосомы (в пределах 5,0-6,0) запускают механизм слияния вирусной и эндосомальной мембран. Под воздействием низких значений рН происходят конформационные изменения в НАО, вследствие которых образуется и встраивается в эндосомальную мембрану белок слияния НА2, что ведет, в свою очередь, к контакту вирусной и эндосомальной мембран. Кроме того, низкие значения рН эндосомы открывают ионный канал М2. Полипептид М2 относится к третьему типу трансмембранных белков и формирует тетрамеры, трансмембранные домены которых функционируют как протон-селективный ионный канал (121, 183). Работа ионного канала М2 приводит к ацилированию вирусного нуклеопротеина, что ведет к освобождению вирусной РНК из оболочки сформированной белком М1 (184).

Проникновение вирусной РНК в ядро клетки-хозяина. Транскрипция и репликация вируса происходят в ядре. РНК вируса связана с белками РА, РВ1 и РВ2. Все эти белки имеют сигналы ядерной локализации, способные включаться в механизмы импорта клеточных нуклеиновых кислот и, таким образом, транспортировать РНК вируса в ядро клетки. На данный момент остается неясным, какой из сигналов ядерной локализации является наиболее важным для проникновения вирусной РНК в ядро. Импорт осуществляется за

счет связывания с транспортными белками кариоферинами, вовлеченными в импорт нуклеиновых кислот, например такими как импортин- а и импортин-(3.

Транскрипция и репликация вирусного генома. Геном вируса гриппа представлен РНК негативной полярности. Для участия в процессе транскрипции, РНК вируса первоначально должна быть переведена в РНК положительной полярности. Репликация генома не требует праймера. Это возможно благодаря тому, что 5' и 3' концы генома имеют частичную комплементарность и, следовательно, способны связываться друг с другом, формируя различные спиралевидные структуры. Хотя, к настоящему времени, механизм вирусной репликации до конца не выяснен (46, 72, 164, 187).

В результате изучения процессов транскрипции вируса были открыты уникальные механизмы, с помощью которых вирус использует транскрипционный механизм клетки для своих целей. Так, белок вирусной РНК полимеразы РВ2 обладает эндонуклеазной активностью и, связываясь с 5'-кэп-структурой клеточной мРНЕС, отрезает фрагмент длиной от 10 до 15 п.о., который после используется вирусной РНК полимеразой в качестве праймера для вирусной транскрипции (152).

Фосфорилированный серин на С-концевом домене клеточной РНК полимеразы II активирует комплекс синтеза кэп-структуры. Показано, что РНК полимераза вируса связывается примущественно с клеточной РНК полимеразой II, что может быть начальной точкой запуска данного механизма (87). Шесть сегментов вирусного генома, за исключением двух, кодируют по одному белку. Сегмент 7 кодирует белки М1 и М2, тогда как сегмент 8 кодирует белки NS1 и NEP. Белки М2 и NEP являются продуктами сплайсинга и находятся в клетке в гораздо меньшем количестве, чем М1 и NS1 (20). Для экспрессии этих белков вирус использует механизм сплайсинга клетки (88). Белок NS1 связывается с U6 малой малой ядерной мРНЕС (154, 255) и другими факторами сплайсинга, вызывая их перемещение в ядро зараженной клетки (106). С помощью данного

механизма вирус препятствует сплайсингу клеточных мРНК. Участие в процессе также принимает фактор, названный NS1 связывающий белок (NS1-ВР), хотя точная функция данного белка в настоящее время неясна (260). Также известно, что белок NP взаимодействует с фактором сплайсинга UAP56, участвующем в формировании сплайсосомы и транспорте мРНК из ядра (52).

Механизм полиаденилирования вирусной мРНК необычен. На 5'-конце каждого сегмента вирусной РНК находится последовательность остатков урацила длиной от 5 до 7 п.о., и т.о., продвижение вирусной РНК-полимеразы по данному отрезку ведет к формированию поли-А хвоста (82, 186).

Экспорт вирусного рибонуклеопротеина из ядра. Известно, что только РНП, содержащие РНК негативной полярности, экспортируются из ядра (208). Выход РНК осуществляется через ядерные поры за счет CRM1 зависимого метаболического пути. Показано, что NP напрямую взаимодействует с фактором CRM1 при гидролизе ГТФ, что в норме происходит при работе данного пути экспорта мРНК. Белок М1 взаимодействует с РНП через участок на С-конце полипептида. Участок на N-конце белка М1 несет сигнал ядерной локализации, вероятно, участвующий в импорте РНП. Показано, что N-терминальный участок белка М1 может связываться с NEP, формируя таким образом сигнал ядерной локализации. Также показано, что связывание белка NEP с CRM1 происходит при расщеплении ГТФ. Существует предположение, согласно которому М1 связывается с РНК негативной полярности в составе РЕП и с белком NEP, который, в свою очередь прикрепляется к фактору CRM1, и, сформированный таким образом комплекс, экспортируется из ядра (68, 136, 171).

Сборка вирионов на клеточной мембране. Вирус гриппа является оболочечным вирусом и использует мембрану клетки для формирования вирусных частиц. С помощью метода сайт-направленного мутагенеза было показано, что хвост белка М2 крайне важен для формирования вирусных

частиц. Вирусы, не имеющие хвоста белка М2, или имеющие хвост с внесенными в него мутациями, продуцировали дефектные вирусные частицы вытянутой формы (229).

Белок М1 играет главную роль на конечных этапах формирования зрелых вирусных частиц и их выхода из клетки (128, 156). В процесс выхода вирусных частиц от клеточной мембраны также вовлечены несколько факторов клетки-хозяина (132).

Существует две модели, объясняющие механизм упаковки геномных сегментов в вирион: случайная модель упаковки (27, 47) и специфическая модель упаковки (215). Согласно первой модели, вирусные сегменты упаковываются в вирион случайным образом, в то время как вторая модель утверждает наличие сигнальных последовательностей внутри генных сегментов, которые были выявлены на 5' и 3' концах некодирующих и кодирующих регионах некоторых сегментов генома вируса (101, 118, 124, 149, 201).

Один из наиболее важных этапов перед выходом вирусной частицы из клетки - отщепление остатков сиаловых кислот от гликопротеинов и гликолипидов. Остатки сиаловых кислот удаляются нейраминидазой вируса. Без этого этапа вирусная частица не может покинуть клеточную мембрану (56).

1.5. Молекулярные детерминанты патогенности, вирулентности и ограничения круга хозяев вируса гриппа птиц

Главными детерминантами вирулентности и патогенности являются белки ВГ РВ2, НА и NS1. За последнее десятилетие в ряде работ было показано, что белок PB1-F2 также является детерминантой патогенности ВГ. Однако, следует отметить, что другие вирусные белки также вносят свой вклад в патогенность вируса (166, 167). Так, показано, что в зараженной вирусом клетке накапливаются NP-NP-ассоциаты в виде не полностью сформированных

структур. Считается, что внутриклеточное накопление несформированного белка ИР может являться одним из механизмов патогенеза вируса (3).

1.5.1. Гемагглютинин.

Белок НА играет главную роль в прикреплении вируса к клетке и слиянии вирусной и эндосомальной мембран. Предшественником зрелого белка является одиночная полипептидная цепь (НАО), которая после трансляции расщепляется клеточными протеазами. Расщепление НА является наиболее важным этапом, определяющим вирулентность ВГ, так как разрезание НАО ведет к экспонированию гидрофобного М-конца белка НА2, который участвует в слиянии вирусной и эндосомальной мембран. Между расщеплением НА и вирулентностью ВГ существует прямая связь (107, 120, 146).

Сайт расщепления НА высокопатогенных подтипов Н5 и Н7 состоит из остатков основных аминокислот, которые распознаются обычными клеточными протеазами, такими как фурин и РС6, в результате чего развивается систематическая инфекция организма. В то время как гемагглютинин низкопатогенных вирусов содержит малое количество основных аминокислот в сайте расщепления, которые распознаются протеазами, находящимися в органах желудочно-кишечного и респираторного тракта.

Ограничение круга хозяев ВГ частично зависит от сродства рецепторов к НА (165). Так, ВГП и вирус гриппа лошадей связываются преимущественно с сиаловыми кислотами, которые соединены с галактозой с помощью а2,3 (8Аа2,30а1)- связи, тогда как рецепторы вирусов гриппа человека обладают высокой аффинностью к сиаловым кислотам, имеющим связь с галактозой 8Аа2,6Са1. Следует отметить, что рецепторная специфичность ВГ изменяется не только при переходе от птиц к млекопитающим, но и при переходе от уток к курам и чайкам. Эти изменения отражают различия в строении доминирующих

сиалосодержащих рецепторов на эпителиальных клетках птиц разных отрядов (11).

Заключение диссертации по теме «Вирусология», Бабин, Юрий Юрьевич

5. ВЫВОДЫ:

1. Разработан метод ОТ-дПЦР-РВ, позволяющий одновременно выявлять вирус гриппа птиц типа А и подтипа Н5. Аналитическая чувствительность разработанного метода составила 1,1-3,1 lg ЭИД50/см для системы праймеров на ген М и 3,0-3,4 lg ЭИД50/см для системы праймеров на ген НА.

2. В течение 2008-2010 гг. из образцов биологического материала с помощью метода вирусовыделения в куриных эмбрионах получено 7 изолятов вируса гриппа птиц подтипа НЗ и 9 изолятов вируса гриппа птиц подтипа Н4.

3. Изучены биологические свойства изолятов вируса гриппа птиц подтипов НЗ и Н4 при их культивировании в куриных эмбрионах и монослое культуры клеток MDCK. Полученные значения инфекционных титров вирусов подтипа НЗ составили 6,2-8,1 lg ЭИД50/см3, вирусов подтипа Н4 - 6,6-7,9 lg ЭИД50/см3. Титр вирусов при их культивировании в монослое клеток MDCK не превышал

3 3 значения 4,6 lg ЦПД50/см для изолятов подтипа НЗ и 5,0 lg ЦПД50/см для изолятов, относящихся к подтипу Н4.

4. Разработаны методы ОТ-ПЦР для выявления вируса гриппа птиц подтипов НЗ и Н4. Аналитическая чувствительность методов ОТ-ПЦР для выявления ВГП подтипов НЗ и Н4 составила 3,4-3,9 lg ЭИД50/см3.

5. Определена первичная нуклеотидная последовательность фрагмента гена НА 7 изолятов вируса гриппа птиц подтипа НЗ и 7 изолятов вируса гриппа птиц подтипа Н4. В результате проведенного молекулярно-генетического анализа показано, что данные изоляты входят в группы европейских и азиатских вирусов. Анализ аминокислотной последовательности сайта расщепления гена НА изолятов вируса гриппа птиц подтипа Н4 выявил наличие аминокислоты Ser в позиции 342 белка НА1, являющейся маркером вирусов евразийской генетической линии.

6. Изученные изоляты ВГП подтипа Н4 имели аминокислотную структуру сайта расщепления НА: RASRGLF, KESRGLF и KASRGLF, изоляты подтипа НЗ

КОПЮЬГ. Данная структура сайта расщепления изолятов ВГП характерна для низковирулентных вирусов. Значения индексов патогенности изолятов ВГП подтипа Н4К6, выделенных в 2008г. от синантропных птиц, составили 0,19 и 0,22, что также подтверждает низкую вирулентность данных вирусов.

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для практического использования предлагаются одобренные ученым советом и утвержденные директором ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» следующие методики:

1. Методические рекомендации по выявлению вируса гриппа А птиц и идентификации подтипа вируса гриппа птиц Н5 с помощью ОТ-дПЦР-РВ (2011 г.);

2. Методические рекомендации по определению индекса патогенности штаммов вируса гриппа А птиц (2010 г.);

3. Методические рекомендации по идентификации вируса гриппа птиц в реакции торможения гемагглютинации (2011 г.).

4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Использование современных методов диагностики инфекционных заболеваний, основанных на технологии выявления генетического материала возбудителя, имеет ряд преимуществ по сравнению с традиционными лабораторными методами. Так молекулярно-генетические методы позволяют получить результат исследования за более короткий период времени, что значительно ускоряет процедуру постановки диагноза. Изучение структуры генома позволяет дать индивидуальную характеристику выявленного изолята, которая при сравнительном анализе может служить основой для определения его филогенетической принадлежности, а также определения возможных источников и путей распространения.

В настоящем исследовании были разработаны методы ПЦР для выявления ВГП/А и дифференциации подтипов ВГП НЗ, Н4 и Н5. Методы включают ОТ-дПЦР-РВ, в которой генами-мишенями являются гены М и НА подтипа Н5, и два метода ОТ-ПЦР, позволяющие амплифицировать фрагмент гена НА подтипов НЗ и Н4.

С использованием изолятов ВТ, принадлежащих к различным подтипам, методы ОТ-дПЦР-РВ и ОТ-ПЦР были оптимизированы по температуре отжига праймеров.

Аналитическая чувствительноть разработанного метода ОТ-дПЦР-РВ была определена при тестировании десятикратных разведений аллантоисной жидкости, содержащей изоляты ВТ подтипов Н1-Н15. Аналитическая чувствительность ОТ-дПЦР-РВ составила 1,1-3,1 ^ ЭИД50/см для системы на ген М и 3,0-3,4 ЭИД50/см3 на ген НА.

Тестирование специфичности ОТ-дПЦР-РВ и ОТ-ПЦР проводили в присутствии различных вирусных агентов, вызывающих болезни птиц. Результаты показали, что неспецифической амплификации отмечено не было, а разработанные методы специфично выявляли РНК ВГП/А.

Совместное использование в одной пробирке нескольких систем праймеров и зондов часто ведет к снижению эффективности реакции, а в отдельных случаях даже к ее ингибированию. При разработке метода ОТ-дПЦР-РВ был определен такой важный параметр реакции, как эффективность амплификации, что позволило оценить эффективность работы тест-системы и дать более полную характеристику разработанному методу. Было установлено, что для системы праймеров на ген М, эффективность амплификации снизилась с 95% до 90%, тогда как для системы на ген НА наблюдали меньшее снижение эффективности амплификации - с 93% до 92%. Такое снижение эффективности может быть связано с конкуренцией амплифицирующихся матриц за нуклеотиды, ДНК-полимеразу и ионы . Подобное снижение значений эффективности амплификации не оказывает значительного влияния на чувствительность реакции.

Для оценки возможности применения разработанного метода ОТ-дПЦР-РВ были протестированы клоакальные и ротоглоточные смывы, отобранные от птиц, экспериментально зараженных изолятом ВГП А/сЫскеп/Рптогзку/85/08 Н51Ч1 в дозе 6,0 ЭИД50/см . При исследовании 24 клоакальных смывов от цыплят, зараженных А/сЫскеп/Рпгпогзку/85/08 ГОШ, вирус был выявлен в 19 пробах с помощью ОТ-дПЦР-РВ по гену М и в 17 пробах по гену НА. При исследовании ротоглоточных смывов было получено 23 положительных результата по обеим системам праймеров ОТ-дПЦР-РВ. Наблюдаемые отличия в количестве положительных образцов, вероятно, являются следствием различной аналитической чувствительности систем праймеров. При исследовании клоакальных и ротоглоточных смывов с помощью метода вирусовыделения в культуре клеток МОСК вирус был выделен из 19 и 20 проб, соответственно.

С помощью разработанного метода ОТ-дПЦР-РВ было исследовано 124 пробы биологического материала от различных видов диких птиц, преимущественно водного и околоводного комплексов, а также синантропных птиц. В результате проведенных исследований вирус гриппа птиц типа А был выявлен в 13 пробах, ВГП подтипа Н5 был выявлен в 3 пробах. Положительные результаты ОТ-дПЦР-РВ подтверждены вирусовыделением на эмбрионах СПФ-кур.

Из 10 проб, положительных в ОТ-дПЦР-РВ по гену М, с помощью вирусовыделения на КЭ было выделено 7 изолятов ВГП/А. С использованием классических методов, таких как РТГА и РИНА был идентифицирован подтип выделенных изолятов. Все выделенные вирусы принадлежали к подтипам НЗ и Н4 по гемагглютинину.

Таким образом, учитывая широкое распространение ВГП подтипов НЗ и Н4, а также их способность инфицировать млекопитающих, было решено разработать системы ОТ-ПЦР для выявления ВГП/А соответствующих подтипов и определения первичной нуклеотидной последовательности фрагмента гена НА. Применение данных систем позволит существенно облегчить лабораторную диагностику ВГП/А.

В результате анализа нуклеотидных последовательностей вирусов ГП подтипов НЗ и Н4 из банка данных были выбраны специфические праймеры для выявления соответствующих подтипов.

С использованием изолятов ВГП/А была определена аналитическая чувствительность разработанных методов ОТ-ПЦР. Для системы праймеров, выявляющей подтип НЗ, значения чувствительности реакции составили 3,45-3,9

3 3 ЭИД50/см , для системы на подтип Н4 - 3,7-3,9 ЭИД50/см .

Для оценки возможности применения разработанных методов ОТ-ПЦР, тест-системы были апробированы на образцах биологического материала от экспериментально зараженных птиц. Две группы птиц были заражены о интраназально в дозе 6,0 ^ ЭИД50/см изолятами ВГП/А - А/гоок/КозШу/ЗЗ/ОБ (Н4М6) и АЛеа1/Кгазпо1аг8к/515/10 (НЗШ). В ОТ-ПЦР были протестированы клоакальные и ротоглоточные смывы, отобранные от птиц на 1-7 дни после заражения. В качестве референтного метода использовали метод вирусовыделения в культуре клеток МОСК. Пробы биоматериала от цыплят групп 1 и 2 исследовали последовательно в ОТ-дПЦР-РВ для выявления ВГП А и исключения ВГП подтипа Н5, и ОТ-ПЦР для выявления подтипов НЗ и Н4.

При исследовании 70 клоакальных смывов от цыплят зараженных изолятом АЛеа1/Кга8по1аг8к/515/10 Н31Ч8, для 6 проб клоакальных смывов был получен положительный результат в ОТ-дПЦР-РВ, при этом в ОТ-ПЦР и вирусовыделении положительный результат был получен для 4 и 5 проб, соответственно. При исследовании 70 ротоглоточныхх смывов для 4 проб был получен положительный результат в ОТ-дПЦР-РВ, ОТ-ПЦР и вирусовыделении в культуре клеток МГ)СК.

При исследовании 70 клоакальных смывов от цыплят, зараженных изолятом А/гоок/ЯозШу/З 3/08 Н4Ш, для 8 проб был получен положительный результат в ОТ-дПЦР-РВ; при тестировании тех же образцов в ОТ-ПЦР и вирусовыделении положительный результат был получен для 7 проб. При тестировании ротоглоточных смывов 8 проб являлись положительными в ОТ-дПЦР-РВ и ОТ-ПЦР, тогда как в вирусовыделении были положительными 6 проб.

Результаты вирусовыделения в культуре клеток МОСК в целом подтверждают результаты ОТ-дПЦР-РВ и ОТ-ПЦР.

Отличия в количестве положительных проб, выявленных с помощью ОТ-дПЦР-РВ и ОТ-ПЦР объясняются, вероятно, различной аналитической чувствительностью данных тест-систем.

Анализ последовательностей гена НА изолятов ВГП, относящихся к подтипам НЗ и Н4 выявил наличие двух основных генетических линий: евразийской и североамериканской. Отличия нуклеотидных последовательностей между представителями этих генетических линий достигают значений 18% для вирусов подтипа НЗ и 20-22% для изолятов ВГП подтипа Н4. Внутри этих глобальных генетических линий вирусов подтипа НЗ и Н4 выявляются су б линии вирусных генов, формирующих отдельные группы. Так, в евразийскую линию входят группы вирусов, выделенных на территории Азии, Европы и Африки, Новой Зеландии. Для американской генетической линии характерно наличие двух обособленных групп вирусов, выделенных от птиц с восточного и западного побережья материка, соответственно. Распределение вирусов, относящихся к подтипам НЗ и Н4, внутри генетических линий соответствует маршрутам сезонных перелетов диких птиц отрядов Атеп/огтеБ и СИатс1ги/Ьгтеь\ являющихся естественным резервуаром ВГП в природе.

На основе участка последовательности гена НА ВГП подтипа НЗ были построены дендрограммы, включающая вирусы подтипов НЗ и Н4, выделенные на территории РФ в период с 2008 по 2010 гг. По результатам филогенетического анализа фрагментов гена НА изоляты подтипа НЗ распределялись в две группы. В первую группу вирусов, выделенных на территории Юго-Восточной и Средней Азии входили изоляты А/та11агё/Кгазпо1аг8к/0453/10 (НЗШ), АДеа1/Кга8по1аг8к/0461/10 (НЗШ), АЛеа1/Кгазпо1аг8к/0464/10 (НЗШ), АЛеа1/Кгазпо1агзк/515/10 (НЗШ), во вторую группу вирусов, выделенных на территории Европы и Африки входил лишь один изолят АЛеа1/Кгазпо1аг8к/501/10 (НЗШ). Максимальную степень сходства для вирусов, входящих в азиатскую группу, наблюдали с изолятами, выделенными на территории РФ, Монголии и Японии. Для изолята АДеа1/Кга8по1аг8кУ501/10 (НЗШ) максимальная степень гомологии была выявлена с вирусами из Швеции и Швейцарии.

Вирусы подтипа НЗ, выделенные на территории РФ имели консервативную аминокислотную последовательность сайта расщепления НА: МЯ1ЧУРЕКС)Т1ШЬРОА1, характерную для низковирулентных изолятов ВГП.

Вирусы подтипа Н4 также формировали две группы. Изоляты A/teal/Krasnoiarsk/506/10(H4N6), A/pintail/Krasnoiarsk/ 508/10(H4N6), A/mallard/Krasnoiarsk/517/10 (H4N6), A/wild duck/Vladimir/534/10 (H4N6) и А/shoveller/Krasnoiarsk/1586/08/ (H4N6) группировались совместно с вирусами, выделенными на территории Азии, в то время как два изолята: A/rook/Rostov/30/08 (H4N6) и A/mallard/Vladimir/446/09 (H4N2) входили в группу европейских и африканских вирусов.

По изучаемому фрагменту гена НА для изолятов, вошедших в азиатскую группу, наблюдали наибольший процент гомологии с вирусами, выделенными в области Актау в восточном Казахстане. Изолят A/rook/Rostov/30/08 (H4N6) имел наибольший процент сходства с вирусами, выделенными на территории Швеции, Чехии и Нидерландов и Южной Африки. Тогда как изолят A/mallard/Vladimir/446/09 (H4N2) имел наибольший процент сходства с вирусами, выделенными в Чехии и Нидерландах.

Установлено, что изоляты ВГП подтипа Н4, выделенные от птиц с западной и восточной части РФ формируют две филогенетические группы. Маркером принадлежности к группе служит аминокислота, находящаяся на второй позиции с С-конца белка НА1. Для вирусов, выделенных от птиц с западной части РФ характерно наличие аминокислоты Ser в данной позиции, тогда как изоляты, выделенные от птиц из восточной части РФ несут в той же позиции Pro.

Изученные изоляты подтипа Н4 имели структуру сайта нарезания гемагглютинина KASRGLF, KESRGLF и RASRGLF. Для большинства известных сайтов изолятов ВГП А/Н4 характерна структура KAXRGLF, где X -одна из аминокислот: Т-для изолятов, выделенных в Северной Америке, Р- для вируса, выявляемого в Сибири, и S для изолятов, циркулирующих на территории Евразии. Данная структура сайта нарезания гемагглютинина характерна для низковирулентных изолятов.

Был проведен ряд экспериментов, направленых на изучение вирулентности изолятов ВГП подтипа Н4Ы6, выделенных в 2008 г. путем определения индексов патогенности в соответствии с методическими рекомендациями МЭБ.

Индексы патогенности были определены для изолятов, выделенных от грача и воробья: А/гоок/КхМоу/З0/08 Н4М6 и А/врапшу/Яс^оу/ЗЗ/Ов Н4Ы6. Значения индексов составили 0,19 и 0,22 соответственно, что характеризует данные изоляты как низковирулентные.

100

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Бабин, Юрий Юрьевич, 2012 год

7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Биологические свойства вируса гриппа A/H4N6, выделенного от синантропных птиц в Ростовской области / Л.Ю. Абрамова, И.А. Чвала, A.B. Андриясов [и др] // Ветеринария и кормление. - 2010. - № 6. -С. 6-7.

2. Вирусы гриппа А/Н13 и А/Н16 - различные линии одного предшественника / С.С. Ямникова, A.C. Гамбарян, В.А. Аристова [и др.] // Вопросы вирусологии. - 2009. - Т.54, № 4. - С. 10-18.

3. Два типа NP-NP-ассоциаций в клетках, зараженных вирусом гриппа /Н.П. Семенова, В.М. Чумаков, Т.А. Григорьев [и др.] // Вопросы вирусологии. - 2007. - Т.52, № 3. - С. 9-13.

4. Комплексный эко лого-вирусологический мониторинг на территории Приморского края в 2003-2006 гг. /М.Ю, Щелканов, В.Ю. Ананьев, Д.Н. Львов [и др.] // Вопросы вирусологии. - 2007. - Т.52, № 5. -С. 37-48.

5. Методические рекомендации по индикации генома вируса гриппа птиц (ген NP) методом полимеразной цепной реакции / А. В. Андриясов, И.П. Пчёлкина, С.Н. Колосов [и др.] ; ФГУ "ВНИИЗЖ". - Владимир, 2007. - Юс.

6. Методические рекомендации по индикации генома вируса гриппа птиц подтипа H5N1 подгруппы QINGHAI методом полимеразной цепной реакции / А. В. Андриясов, И.П. Пчёлкина, С.Н. Колосов [и др.] ; ФГУ "ВНИИЗЖ". - Владимир, 2007. - 11 с.

7. Методические указания по выявлению вируса гриппа птиц подтипов Н5, Н7 методом ОТ-ПЦР в режиме реального времени / A.B. Андриясов, И. П. Пчёлкина, И. А. Чвала [и др.] ; ФГУ "ВНИИЗЖ". -Владимир, 2010. - 11 с.

8. Молекулярно-генетическая характеристика штамма A/chicken/Moscow/ 2/2007 (H5N1) из очага эпизоотии высокопатогенного гриппа А среди сельскохозяйственных птиц в Подмосковье (февраль 2007) / Д.К. Львов, М.Ю. Щелканов, А.Г. Прилипов [и др.] // Вопросы вирусологии. - 2007. - Т. 52, № 6. - С. 40-47.

9. Об эпизоотологическом потенциале вируса гриппа птиц / В.Н. Сюрин, Н.Г. Осидзе, З.Я. Чистова, Ю.В. Родин // Ветеринария. - 1972. -№ 8.-С. 41-43.

10. Первый прорыв нового для России генотипа 2.3.2 высоковирулентного вируса гриппа A/H5N1 на Дальнем Востоке / Д. К. Львов, М. Ю. Щелканов, Н. А. Власов [и др.] // Вопросы вирусологии. -2008. - Т.53, № 5. - С. 37-48. - С. 4-9.

11. Различная рецепторная специфичность вирусов гриппа уток и ее отражение в составе сиалозидов на хозяйских клетках и муцинах /A.C. Гамбарян, В.П. Маринина, Т.А. Солодарь [и др.] // Вопросы вирусологии. - 2006. - Т.51, № 4. - С. 24-32.

12. Разработка тест-систем для выявления и типирования вируса гриппа А на основе полимеразной цепной реакции / Д.Е. Киреев, Д.С. Аканина, Т.В. Гребенникова [et al] // Вопросы вирусологии. - 2007. -Т.52, №4. - С. 17-22.

13. Экология и эволюция вирусов гриппа в России (1979-2002гг.) / Д.К. Львов, С.С. Ямникова, И.Т. Федякина [и др.] // Вопросы вирусологии. - 2004. - Т. 49, №3. - С. 17-24.

14. A broad spectrum, one-step reverse-transcription PCR amplification of the neuraminidase gene from multiple subtypes of influenza A virus / A.C. Alvarez, M.E. Brunck, V. Boyd [et al] // Virol. J. - 2008. - Vol. 5, № 77.

15. Activation of interferon regulatory factor 3 is inhibited by the influenza A virus NS1 protein / J. Talon, C.M. Horvath, R. Polley [et al] // J. Virol. -2000. - Vol. 74. - P. 7989-7996.

16. Adaptation of an H7N7 equine influenza A virus in mice / K. Shinya, S. Watanabe, T. Ito [et al] // J. Gen. Virol. - 2007. - Vol. 88. - P. 547-553.

17. Alexander D.J. An overview of the epidemiology of avian influenza // Vaccine. - 2006. - Vol. 25, N 30. - P.5637-5644.

18. Alexander D.J. Avian influenza - diagnosis // Zoonoses Public Health. -2008.-Vol. 55, № l.-P. 16-23.

19. Amaresh D., Suarez D. L. Development and bench validation of realtime reverse transcription polymerase chain reaction protocols for rapid detection of the subtypes H6, H9, and Hll of avian influenza viruses in experimental samples // J. Vet. Diagn. Invest. - 2007. - Vol. 19. - P. 625634.

20. Amorim M.J., Digard P. Influenza A virus and the cell nucleus // Vaccine. -2006. - Vol.24. N 44-46. - P. 6651-6655.

21. A multiplex real-time RT-PCR for detection and identification of influenza virus types A and B and subtypes H5 and N1 / C. Wu, X. Cheng, J. He [et al] //J. Virol. Methods. - 2008. - Vol. 148, № 1-2. -P.81-88.

22. A multiplex RT-PCR for detection of type A influenza virus and differentiation of avian H5, H7, and H9 hemagglutinin subtypes / Z. Xie, Y.S. Pang, J. Liu [et al] // Mol Cell Probes. - 2006. - Vol. 20, № 3-4. - P. 245-249.

23. Analytical validation of a real-time reverse transcription polymerase chain reaction test for Pan-American lineage H7 subtype Avian influenza viruses E. Spackman, H.S. Ip, D.L. Suarez [et al] // J. Vet. Diagn. Invest. -2008. - Vol. 20, № 5. - P. 612-616.

24. A naturally occurring deletion in its NS gene contributes to the attenuation of an H5N1 swine influenza virus in chickens / Q. Zhu, H. Yang, W. Chen [et al] // J. Virol. - 2008. - Vol. 82. - P. 220-228.

25. An avian influenza A virus killing a mammalian species - the mink / B. Klingeborn, L. Englund, R. Rott [et al] // Brief report. Arch. Virol. - 1985. -Vol. 86.-P. 347-351.

26. A new influenza virus virulence determinant: the NS1 protein four C-terminal residues modulate pathogenicity / D. Jackson, M.J. Hossain, D. Hickman [et al] // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2008. - Vol. 105. - P. 43814386.

27. An influenza virus containing nine different RNA segments / M. Enami, M. Sharma, C. Benham, P. Palese // Virology. - 1991. - Vol. 185, № l.-P. 291-298.

28. Alexander D.J., Capua I., Koch G. Highly pathogenic avian influenza outbreaks in Europe, Asia and Africa since 1959, excluding the asian H5N1 virus outbreaks // Avian Influenza / ed. D.E. Swayne. - Ames, Iowa, USA etc., 2008. - Chap. 5. - P. 217-237.

29. A novel influenza A virus mitochondrial protein that induces cell death / W. Chen, P.A. Calvo, D. Malide [et al] // Nat. Med. - 2001. - Vol. 7. - P. 1306-1312.

30. Antibodies to human-related H3 influenza A virus in Baikal seals (Phoca sibirica) and ringed seals (Phoca hispida) in Russia / K. Ohishi, N. Kichida, A. Ninomiya [et al] // Microbiol. Immunol. - 2004. - Vol. 48, № 11. - P. 905-909

31. Antigenic and genetic characterization of a novel hemagglutinin subtype of influenza A viruses from gulls / V.S. Hinshaw, G.M. Air, A.J. Gibbs [et al] // Journal of Virology. - 1982. - Vol. 42. - P. 865-872.

32. Application and evaluation of RT-PCR-ELISA for the nucleoprotein and RT-PCR for detection of low-pathogenic H5 and H7 subtypes of avian influenza virus / D. Karen, M. Mette, J. Kurt [et al] // J. Vet. Diagn. Invest. -2004.-Vol. 16.-P. 51-56.

33. A real-time TaqMan RT-PCR method for neuraminidase type 1 (N1) gene detection of H5N1 Eurasian strains of avian influenza virus / M. Agüero, A. Sánchez, E. San Miguel [et al] // Avian Dis. - 2007. - Vol. 51, № 1. - P. 378-381.

34. A real-time TaqMan RT-PCR method for neuraminidase type 1 (N1) gene detection of H5N1 Eurasian strains of avian influenza virus / M. Agüero, A. Sanchez, E. San Miguel [et al] // Avian Dis. - 2007. - Vol. 51, № 1. - P. 378-381.

35. A reverse transcription-PCR for subtyping of the neuraminidase of avian influenza viruses / B.F. Qiu, W.J. Liu, D.X. Peng [et al] // J. Virol. Methods. - 2009. - Vol. 155, №.-P. 193-198.

36. A review of RT-PCR technologies used in veterinary virology and disease control: Sensitive and specific diagnosis of five livestock diseases notifiable to the World Organisation for Animal Health B. Hoffmann , M.Beer, S.M. Reid [et al] // Veterinary Microbiology. - 2009. - Vol. 139, N 1-2.-P. 1-23.

37. A revision of the system of nomenclature for influenza viruses: a WHO memorandum //Bull. WHO. - 1980. -Vol. 58.-P. 585-591.

38. A sensitive one-step real-time PCR for detection of avian influenza viruses using a MGB probe and an internal positive control / L. Di Trani, B. Bedini, I. Donatelli [et al] // BMC Infectious Diseases. - 2006.- Vol. 6, № 87.

39. A simple method for molecular detection of swine-origin and human-origin influenza A virus / L. Ninove, C. Gazin, E.A. Gould [et al] // Vector Borne Zoonotic Dis. - 2010. - Vol. 10, N 3. - P. 237-240.

40. A single-amino-acid substitution in the NS1 protein changes the pathogenicity of H5N1 avian influenza viruses in mice / P. Jiao, G. Tian, Y. Li [et al] // J. Virol.-2008.-Vol. 82.-P. 1146-1154.

41. Avian influenza A virus (H7N7) associated with human conjunctivitis and a fatal case of acute respiratory distress syndrome / R.A. Fouchier, P.M. Schneeberger, F.W. Rozendaal [et al] // Proc. Natl. Acad. Sei USA. - 2004. -Vol. 101.-P . 1356-1361.

42. Avian influenza in Hong Kong 1997-2002 / L.D. Sims, T.M. Ellis, K.K. Liu [et al] // Avian Diseases. - 2003. - Vol. 47. - P. 832-838.

43. Avian influenza viruses from migratory and resident ducks of coastal Louisiana / D.E. Stallknecht, S.M. Chane, P.J. [et al] // Avian Diseases. -1990.-Vol. 34.-P. 398-405.

44. Avian influenza (H5N1) outbreak among wild birds, Russia, 2009 / K. Sharov, N. Silko, I. Sousloparov [et al] // Emerg Infect. Dis. - 2010. - Vol. 16.-P. 349-51.

45. Avian influenza viruses in Minnesota ducks: extensive reassortment in nature / B.A. Hanson, D.E. Stallknecht, D.E. Swayne [et al] // J.gen. virol.-2003. - Vol. 85. - P. 2327-2337.

46. Azzeh M., Flick R.,Hobom G. Functional analysis of the influenza A virus cRNA promoter and construction of an ambisense transcription system // Virology. - 2001 Vol. 289. N2. - P. 400-410.

47. Bancroft C.T., Parslow T.G. Evidence for segment- nonspecific packaging of the influenza a virus genome // J Virol. - 2002. - Vol. 76, № 14. -P. 7133-7139.

48. Bourmakina S.V., Garcia-Sastre A. Reverse genetic studies on the filamentous morphology of influenza A virus // Journal of General Virology. -2003.-Vol. 85. - P. 517-527.

49. Brockwell-Staats C., Webster R.G., Webby R.J. Diversity of influenza viruses in swine and the emergence of a novel human pandemic influenza A (H1N1) // Influenza Other Respi Viruses. - 2009. - Vol. 3, N 5. - P. 207-213.

50. Brown I.H. The epilemiology and evolution If influenza vivuses in pigs // Vet. Microbiol. - 2000. - Vol. 74, № 1-2. - P. 29-46.

51. Breeding-season sympatry facilitates genetic exchange among allopatric wintering populations of northern pintails in japan and California / P.L. Flint, O. Kiyokaki, J.M. Pearce [et al] // The Condor. Vol. 000, N. 0. -P. 1-8.

52. Cellular splicing factor RAF-2p48/NPI-5/BATl/UAP56 interacts with the influenza virus nucleoprotein and enhances viral RNA synthesis / F. Momose, C.F. Basler, R.E. O'Neill [et al] // J. Virol. - 2001. - Vol. 75, № 4. -P. 1899-1908.

53. Characterization of a new avian-like influenza A virus from horses in China / Y. Guo, M. Wang, Y. Kawaoka [et al] // Virology. - 1992. - Vol. 188, N 1. - P.245-255.

54. Characterization of a novel influenza hemagglutinin, HI5: criteria for determination of influenza A subtypes / C. Rohm, N. Zhou, J. Suss [et al] // Virology. - 1996.-Vol. 217.-P. 508-516.

55. Characterization of avian H3N3 and H1N1 influenza A viruses isolated form pigs in Canada / A.I. Karasin, K. West, S. Carman, C.W. Olsen // J. Clin. Microbiol. - 2004. - Vol. 42, № 9. - P. 4349-4354.

56. Characterization of temperature sensitive influenza virus mutants defective in neuraminidase / P. Palese, K. Tobita, M. Ueda [et al] // Virology.

- 1974. - Vol. 61, № 2. - P. 397-410.

57. Characterization of two influenza A viruses from a pilot whale / V.S. Hinshaw, W.J. Bean, J. Geraci [et al] // J.Virol. - 1986. - Vol. 58, № 2. - P. 655-656.

58. Charlton B., Crossley B., Hietala S. Conventional and future diagnostics for avian influenza // Comp. Immunol. Microbiol. Infect. Dis. -2009. - Vol. 32, № 4. - P. 341-350.

59. Chen R., Holmes E.C. Avian Influenza virus exhibits rapid evolutionary dynamics // Mol. Biol. Evol. - 2006. - Vol. 23, N 12. - P. 23362341.

60. Chen R., Holmes E.C. Frequent inter-species transmission and geographic subdivision in avian influenza viruses from wild birds // Virology.

- 2009. Vol. 383, N 1. - P 156-161.

61. Chen B.J., Lamb R.A. Mechanisms for enveloped virus budding: can some viruses do without an ESCRT? // Virology. - 2008. - Vol. 372, № 2. -P. 221-232.

62. Chen H. H5N1 avian influenza in China // Sci China C Life Sci. - 2009. -Vol. 52.-P. 419-27.

63. Circulation of influenza viruses and paramyxoviruses in waterfowl originating from two different areas of North America /V.S. Hinshaw, J.M. Wood, R.G. Webster [et al] // Bulletin of the World Health Organization. -1985.-Vol. 63.-P. 711-718.

64. Close relationship between mink influenza (H10N4) and concomitantly circulating avian influenza viruses / M. Berg, L. Englund, I.A. Abusugra [et al] // Arch. Virol. - 1990. - Vol. 113, № 1-2. - P. 61-71.

65. Cocirculation of avian H9N2 and contemporary 'human' H3N2 influenza A viruses in pigs in southeastern China: potential for genetic reassortment? / J.S. Peiris, Y. Guan, D. Markwell [et al] // J.Virol. - 2001. -Vol. 75, № 20. - P. 9679-9686

66. Comparison of influenza viruses isolated from man and from whales / D.K. Lvov, V.M Zhdanov., A.A. Sazonov [et al] // Bull. WHO. - 1978. -Vol. 56.-P. 923-930.

67. Conjunctivinis in human beings caused by influenza A virus of seals / R.G.Webster, J.R. Geraci, G. Petursson, K. Skirnisson // N.Engl. J. Med. -1981.-Vol. 304. - P. 911.

68. Crystal structure of the Ml protein-binding domain of the influenzaAvirus nuclear export protein (NEP/NS2) / H. Akarsu, W.P. Burmeister, C. Petosa [et al] // EMBO J. - 2003. - Vol. 22, № 18. - P. 46464655.

69. Das A., Suarez D. L. Development and bench validation of real-time reverse transcription polymerase chain reaction protocols for rapid detection of the subtypesH6, H9, and Hll of avian influenza viruses in experimental samples // J. Vet. Diagn. Invest. - 2007. - Vol. 19. - P. 625-634.

70. Davis L.M., Spackman E. Do crocodilians get the flu? Looking for influenza A in captive crocodilians // J.experim. Zool., Pt A, Ecol. Genet. Physiol. - 2008. - Vol. 309, № 10. - P. 571-580.

71. De Boer G.F., Back W, Osterhaus A.D. (1990) An ELISA for detection of antibodies against influenza A nucleoprotein in humans and various animal species //Arch. Virol. - 1990. - Vol. 115, № 1-2. - P. 47-61.

72. Deng T., Vreede F.T., Brownlee G.G. Different de novo initiation strategies are used by influenza virus RNA polymerase on its cRNA and viral

RNA promoters during viral RNA replication // J. Virol. - 2006. - Vol.80. N 5.-P. 2337-2348.

73. Design of Multiplexed Detection Assays for Identification of Avian Influenza A Virus Subtypes Pathogenic to Humans by SmartCycler RealTime Reverse Transcription-PCR / W. Wang, P. Ren, S. Mardi [et al] // J. Clin. Micr. - 2009. - Vol. 47, N 1. - P. 86-92.

74. Detection of H5, H7 and H9 subtypes of avian influenza viruses by multiplex reverse transcription-polymerase chain reaction / B. Chaharaein, A.R. Omar, I. Aini [et al] // Microbiol Res. - 2007. Vol. 164. - P. 174-179.

75. Detection of influenza virus types A and B and type A subtypes (HI, H3 and H5) by multiplex polymerase chain reaction / P. Boonsuk, S. Payungporn, T. Chieochansin [et al] // Tohoku J. Exp. Med. - 2008. - Vol. 215.-P. 247-255.

76. Development and Application of a Multiplex Polymerase Chain Reaction for Avian Respiratory Agents / Y. Pang, H. Wang, T. Girshick [et al ] // Avian Dis.- 2002. - Vol. 46. - P. 691-699.

77. Development and Validation of a one-step RealTime PCR Assay for simultaneous detection of subtype H5, H7, and H9 avian influenza viruses / I. Monne, S. Ormelli, A. Salviato [et al] // J. Clin. Microbiol. - 2008. - Vol. 46. -P. 1769-1773.

78. Development of a multiplex real-time PCR assay using SYBR Green 1 chemistry for simultaneous detection and subtyping of H9N2 influenza virus type A / W.T. Ong, A.R. Omar, A. Ideris, S.S. Hassan // J. Virol. Methods. -2007. - Vol. 144, № 1-2. - P.57-64.

79. Development of a multiplex real-time polymerase chain reaction for the detection of influenza virus type A including H5 and H9 subtypes / P.Q. Li, J.

Zhang, C.P. Muller [et al] // Diagn. Microbiol. Infect. Dis. - 2008. - Vol. 61, № 2. - P.192-197.

80. Development of a realtime reverse transcriptase PCR assay for type A influenza virus and the avian H5 and H7 haemagglutinin subtypes / E. Spackman, D.A. Senne, T.J. Myers [et al] // J. Clin. Microbiol. - 2002. - Vol. 40.-P. 3256-3260.

81. Direct evidence that the poly(A) tail of influenzaAvirus mRNAis synthesized by reiterative copying of a U track in the virion RNA template / L.L. Poon, D.C. Pritlove, E. Fodor, G.G. Brownlee // J. Virol. - 1999. Vol. 73, №4.-P. 3473-3476.

82. Do hemagglutinin genes of highly pathogenic avian influenza viruses constitute unique phylogenetic lineages? / C. Rohm, T. Horimoto, Y. Kawaoka [et al] //Virology. - 1995. - Vol. 209. - P. 664-670.

83. Ecological aspects of influenza A virus circulation in wild birds of the Western Palearctic / M. Delogu, M.A. De Marco, I. Donatelli [et al] // Vet. Res. Commun. - 2003. - Vol. 27. - P. 101-106.

84. Emergence of avian H1N1 influenza viruses in pigs in China / Y. Guan, K. F. Shortridge, S. Krauss [et al] // J.Virol. - 1996. - Vol. 70, №. 11. - P. 8041-8046.

85. Englund L., Hard af Segerstad C. Two avian H10 influenza A virus strains with different pathogenecity for mink (Mustela vison) // Arch. Virol. -1998. - Vol. 143, № 4. - P. 653-666.

86. Engelhardt O.G., Smith M., Fodor E. Association of the influenzaAvirus RNA-dependent RNA polymerase with cellular RNA polymerase II // J Virol. - 2005. - Vol. 79. N 9. - P. 5812-5818.

87. Engelhardt O., Fodor E. Functional association between viral and cellular transcription during influenza virus infection // Rev. Med. Virol. -2006.-Vol. 16, №5.-P. 329-345.

88. Epidemiological studies of A/Hong Kong/ 68 virus infection in dogs / T. Nikitin, D. Cohen, J.D. Todd, F.S. Lief// Bull. WHO. - 1972. - Vol. 47. -P. 471-479.

89. Evaluation of MChip with historic subtype H1N1 influenza A viruses, including the 1918 'Spanish Flu' strain / C.L. Moore, J.A. Smagala, C.B. Smith [et al] //J. Clin. Microbiol. - 2007. - Vol. 45, № 11. - p. 3807-3810.

90. Evaluation of PCR testing of ethanol-fixed nasal swab specimens as an augmented surveillance strategy for influenza virus and adenovirus identification /A.E. Krafft, K.L. Russell, A.W. Hawksworth [et al] // J. Clin. Microbiol. -2005. - Vol. 43, № 4. -P.1768-1775.

91. Evidence for the natural thansmission of influenza A virus from wild ducks to swine and its potential importance for man / M. Pensaert, K. Ottis, J. Vandeputte [et al] // Bull. WHO. - 1981. - Vol. 59, № 1. - P. 75-78.

92. Evidence of intercontinental transfer of North American lineage avian influenza virus into Korea / L. Dong-Hun, L. Hyun-Jeong, L. Yu-Na // Infection, Genetics and Evolution. - 2011. - Vol. 11. - P. 232-236

93. Evolution of H4, H5 influenza A viruses in natural ecosystems in Northern Eurasia (2000-2002) / D.K. Lvov, S.Y. Yamnikova, I.T. Fedyakina [et al.] // International Congress Series. - 2004. - Vol. 1263. - P. 169-173.

94. Evolution of the nucleoprotein gene of influenza A virus / O.T. Gorman, W.J. Bean, Y. Kawaoka, R.G. Webster // Journal of Virology. -1990.-Vol. 64.-P. 1487-1497.

95. Evolution and ecology of influenza A viruses / R.G. Webster, W.J. Bean, O.T. Gorman [et al] // Microbiol. Rev. - 1992. - Vol. 56. - P. 152-179.

96. Evolution of pig influenza viruses / U. Schultz, W.M. Fitch, S. Ludwig [et al] Virology. - 1991. - Vol. 183, № 1. - P. 61 -73.

97. Examining the hemagglutinin subtype diversity among wild duckorigin influenza A viruses using ethanol-fixed cloacal swabs and a novel RT-PCR method / R. Wang, L. Soll, V. Dugan [et al] // Virology. - 2008. - Vol. 375, № 1. - P. 182-189.

98. Experimental evaluation of the FluChip diagnostic microarray for influenza virus surveillance / M.B. Townsend, E.D. Dawson, M. Mehlmann [et al] // J. Clin. Microbiol. - 2006. - Vol. 44, № 8. - P. 2863-2871.

99. Expression of the nonstructural protein NS1 of equine influenza A virus: detection of anti-NSl antibody in post infection equine sera /1. Birch-Machin, A. Rowan, J. Pick [et al] // Journal of virological methods. - 1997. -N. 65.-P. 255-263.

100. Exploitation of nucleic acid packaging signals to generate a novel influenza virus-based vector stably expressing two foreign genes / T. Watanabe, S. Watanabe, T. Nöda [et al] // J. Virol. - 2003. - Vol. 77, № 19. -P. 10575-10583.

101. Extreme endurance flights by landbirds crossing the Pacific Ocean: ecological corridor rather than barrier? / R. E. Gill Jr, T. L. Tibbitts, D. C. Douglas [et al] // Proc. R. Soc. B. - 2009. - Vol. 276. - P. 447-457

102. Fields Virology. Vol. 1 / ed. D.M. Knipe, P.M. Howley . - 4th ed. -Philadelphia, USA: Lippincott Williams & Wilkins; Woters Kluwer Business, 2001. 1533-1579 p.

103. Fields Virology. Vol. 1 / ed. D.M. Knipe, P.M. Howley . - 5th ed. Philadelphia, USA: Lippincott Williams & Wilkins; Woters Kluwer Business, 2007. 1647-1689 p.

104. Fields Virology. Vol. 1 / ed. D.M. Knipe, P.M. Howley . - 5th ed. -Philadelphia, USA: Lippincott Williams & Wilkins; Woters Kluwer Business, 2007. - 1691-1740 p.

105. First reported incursion of highly pathogenic notifiable avian influenza A H5N1 viruses from clade 2.3.2 into European poultry / S.M. Reid, W.M. Shell, G. [et al] // Transbound Emerg Dis. - 2011. - Vol. 58, N 1. - P. 76-78.

106. Fortes P., LamondA.I., Ortin J. Influenza virus NS1 protein alters the subnuclear localization of cellular splicing components // J Gen Virol. - 1995. -Vol. 76, №4. -P. 1001-1007.

107. Garten W., Klenk H.D. Understanding influenza virus pathogenicity // Trends Microbiol. - 1999. - Vol. 7. - P. 99- 100.

108. Genesis of a highly pathogenic and potentially pandemic H5N1 influenza virus in eastern Asia / K.S. Li, Y. Guan, J.Wang [et al] // Nature. -2004. - Vol. 430. - P. 209-213.

109. Genetic characterization of avian influenza viruses isolated from waterfowl in southern part of South Korea in 2006 / H.M. Kim, J.H. Oh, S.H.Seo // Virus Genes. - 2008. - Vol. 37. - P. 49-51.

110. Genetic characterization of H5N1 influenza A viruses isolated from zoo tigers in Thailand / A. Amonsin, S. Payungporn, A. Theamboonlers [et al] // Virology. - 2006. - Vol. 344. - P. 480-491.

111. Genetic evidence of intercontinental movement of avian influenza in amigratory bird: the northern pintail (Anas acuta) / A.V. Koehler, J.M.Pearce, P.L. Flint [et al] // Mol. Ecol. - 2008. - Vol. 17. - P. 4754-4762.

112. Genetic relatedness of hemagglutinin of the HI subtype of influenza A viruses isolated from swine and birds / C. Schlotissek, H. Burger, P.A. Bachman, C.Hannoun //Virology. - 1983. - Vol. 129, № 2. - P. 521-523.

113. Gilbert M., Slingenbergh J., Xiao X. Climate change and avian influenza // Rev. Sci Tech. - 2008. - Vol. 27, N 2. - P. 459-466.

114. Global patterns of influenza a virus in wild birds / B. Olsen, V.J. Munster, A. Wallensten [et al.] // Science - 2006. -N312. - P.384-388.

115. H5N1 avian influenza reemergence of Lake Qinghai: phylogenetic and antigenic analyses of the newly isolated viruses and roles of migratory birds in virus circulation / G. Wang, D. Zhan, L. Li [et al] // J. Gen. Virol. - 2008. -Vol. 89.-P. 697-702.

116. Hadzhiolova T., Pavlova S., Kotseva R. Laboratory investigation of the first suspected human cases of infection with avian influenza A(H5N1) virus in Bulgaria // Euro Surveill. - 2008. - Vol. 13, № 30. - P. 18938.

117. Hannant D., Mumford J.A. Equine influenza - Amsterdam: Elsevier Health Sciences, 1996. - P. 285-293.

118. Hierarchy among viral RNA(vRNA) segments in their role in vRNA incorporation into influenza A virions / Y. Muramoto, A. Takada, K. Fujii [et al] //J. Virol. -2006. - Vol. 80, № 5. - P. 2318-2325.

119. Hinshaw V.S., Webster R.G., Turner B. The perpetuation of orthomixoviruses and paramyxoviruses in Canadian waterfowl // Canadian Journal of Microbiology - 1980. - Vol. 26. - P. 622-629.

120. Horimoto T., Kawaoka Y. Pandemic threat posed by avian influenza A viruses // Clin. Microbiol. Rev. - 2001. - Vol. 14. - P. 129-149.

121. Holsinger L.J., Lamb R.A. Influenza virus M2 integral membrane protein is a homotetramer stabilized by formation of disulfide bonds // Virology. - 1991. -Vol. 183. N. 1. - P. 32-43.

122. Human and avian influenza viruses target different cell types in cultures of human airway epithelium / M.N. Matrosovich, T. Y. Matrosovich, T. Gray [et al] // Proc. Natl. Acad. Sci USA. - 2004. - Vol. 101. - P. 4620-4624.

123. Human influenza A H5N1 virus related to a highly pathogenic avian influenza virus / E.C. Claas, A.D. Osterhaus, R van Beek, [et al] // Lancet. -1998.-Vol. 351.-P. 472-477.

124. Importance of both the coding and the segment-specific noncoding regions of the influenza A virus NS segment for its efficient incorporation into virions / K. Fujii, Y. Fujii, T. Nöda [et al] // J. Virol. - 2005. - Vol. 79, № 6. -P. 3766-3774.

125. Influenza A viruses in migrating wild aquatic birds in North America / S. Krauss, D. Walker, S. Paul-Pry or [et al] // Vector-bone and Zoonotic Diseases. - 2004. - Vol. 4. - P. 177-189.

126. Influenza A viruses of migrating wild aquatic birds in North America / S. Krauss, D. Walker, S.P. Pryor [et al] // Vectorborne zoon. Dis. - 2004. -Vol. 4.-P. 177-189.

127. Influenza in migratory birds and evidence of limited interconinental virus exchange / S. Krauss, C.A. Obert, J. Franks [et al] // PLoS Pathog. -2007. - Vol. 3,N11. -P. 1684-1693.

128. Influenza a viruses with mutations in the ml helix six domain display a wide variety of morphological phenotypes / L.M. Burleigh, L.J. Calder, J.J. Skehel // J. Virol. - 2005. - Vol. 79, № 2. - P. 1262-1270.

129. Influenza A virus NS1 protein prevents activation of NF-kappaB and induction of alpha/beta interferon / X. Wang, M. Li, H. Zheng [et al] // J. Virol. - 2000. - Vol. 74. - P. 11566-11573

130. Influenza a virus surveillance in wild birds in northern Europe in 1999 and 2000 / R.A.M. Fouchier, B. Olsen, S. Bestebroer [et al] // Avian Diseases. - 2003. - Vol. 47. - P. 857-860.

131. Influenza in heterothermic animals / D. Mancini, R. Mendonca, A. Cianciarullo [et al] // Rev. Soc. Bras. Med. trop. - 2004. - Vol. 37, № 3. - P. 204-209.

132. Influenza virus morphogenesis and budding / D.P. Nayak, R.A. Balogun, H. Yamada, Z.H. Zhou, S. Barman // Virus Res. - 2009. - Vol. 143, №2.-P. 147-161.

133. Influenza virus PB1-F2 protein induces cell death through mitochondrial ANT3 and VDAC1 / D. Zamarin, A. Garcia-Sastre, X. Xiao [et al] // PLoS Pathog. - 2005. -Vol. 1, N 1. - P 0040-0054.

134. Influenza vurus protein. I. Analysis of polypeptides of the virion and identification of spike glycoproteins / R.W. Compans, H.d. Klenk, L.A. Caliguiri, P.W. Choppin // Virology. - 1970. -N. 42. - P. 880-889.

135. Inhibition of retinoic acid-inducible gene Imediated induction of beta interferon by the NS1 protein of influenza A virus / M. Mibayashi, L. Martinez-Sobrido, Y.M. Loo [et al] // J. Virol. - 2007. - Vol. 81. - P. 514524.

136. In vitro dissection of the membrane and RNP binding activities of influenza virusMl protein / F. Baudin, I. Petit, W. Weissenhorn, R.W. Ruigrok//Virology.-2001.-Vol. 281, № 1. - P. 102-108.

137. Isolation and characterization of H4N6 avian influenza virus from pigs with pneumonia in Canada /A.I. Karasin, I.H. Brown, S. Carman, C.W. Olsen // J.Virol. - 2000. - Vol. 74, № 19. - P. 9322-9327.

138. Isolation of avian influenza viruses from two different transhemispheric migratory shorebird species in Australia / A.C. Hurt, P.M. Hansbro, P. Selleck [et al] //Arch. Virol. - 2006. - Vol. 151, № 11.-P. 2301-2309.

139. Interregional transmission of the internal protein genes of H2 influenza virus in migratory ducks from North America to Eurasia / J.H. Liu, K. Okazaki, G.R. Bai [et al] // Virus Genes. - 2009. - Vol. 29. - P. 81-86.

140. Interspecies transmission and host restriction of avian H5N1 influenza virus / D. Liu, X. Liu, J. Yan [et al] // Sci China C Life Sci. - 2009. - Vol. 52. -P. 428-438.

141. Intestinal influenza; replication and characterization of influenza viruses in ducks / R.G. Webster, M. Yakhno, V.S. Hinshaw [et al] // Virology. - 1978. - Vol. 84. - P. 268-278.

142. Investigation of outbreaks of highly pathogenic H5N1 avian influenza in waterfowl and wild birds in Hong Kong in late 2002 / T.M. Ellis, R.B. Bousfield, L.A. Bisset [et al] // Avian Pathology. - Vol. 33. - P. 492-505.

143. Is the gene pool of influenza viruses in shorebirds and gulls different from that in wild ducks? / Y. Kawaoka, T.M. Chambers, W.L. Sladen, R.G.Webster // Virology. - 1988. - Vol. 163. - P. 247-250.

144. Is the occurrence of avian influenza virus in Charadriiformes species and location dependent? / B.A. Hanson, M.P. Luttrell, V.H. Goekjian [et al] // J.Wild. Dis. -2008. - Vol. 44, № 2. - P. 351-361.

145. Karasin A.I., Carman S., Olsen C.W. Identification of human H1N2 and human-swine reassortant H1N2 and H1N1 influenza A viruses among pigs in Ontario, Canada (2003 to 2005) // J.Clin. Microbiol. - 2006. - Vol. 44, № 3. - P. 1123-1126.

146. Klenk H.D., Rott R. The molecular biology of influenza virus pathogenicity // Adv. Virus. Res. - 1988. - Vol. 34. - P. 247-281.

147. Large-Scale Sequence Analysis of Avian Influenza Isolates / J.C. Obenauer, J. Denson, P.K. Mehta [et al] // Science. - 2006. - Vol. 311. - P. 1576-1580.

148. Lee C.W., Suarez, D.L. 2004. Application of real-time RT-PCR for the quantitation and competitive replication study of H5 and H7 subtype avian influenza virus//J. Virol. Methods. - 2004. - Vol. 119.-P. 151-158.

149. Liang Y., Hong Y., Parslow T.G. cis-Acting packaging signals in the influenza virus PB1, PB2, and PA genomic RNA segments // J Virol. - 2005. -Vol.79, № 16.-P. 10348-10355.

150. Light-generated oligonucleotide arrays for rapid DNA sequence analysis / A.C. Pease, D. Solas, E.J. Sullivan [et al] // Proc. Natl Acad. Sci. USA. - 1994. - Vol. 91, № 11. - P. 5022-5026.

151. Li J.P., Chen S., Evans D.H. Typing and subtyping influenza virus using DNA microarrays and multiplex reverse transcriptase PCR // J. Clin. Microbiol. - 2001. -Vol. 39, № 2. - P. 696-704.

152. Li M.L., Rao P., Krug R.M. The active sites of the influenza cap-dependent endonuclease are on different polymerase subunits // EMBO J. -2001. -Vol. 20. N 8. - P. 2078-2086.

153. Lopez J.W., Woods G.T. Influenza virus in ruminants: a review // Res. Commun. chem. Pathol. Phatmacol. - 1984. - Vol. 45, № 3. - P. 445-462

154. Lu Y., Qian X.Y., Krug R.M. The influenza virus NS1 protein: a novel inhibitor of pre-mRNA splicing // Genes Dev. - 1994. - Vol.8, № 15. - P. 1817-1828.

155. Lupiani B., Reddy S. M. The history of avian influenza // Comp. Immunol. Microbiol // Infect. Dis. - 2008. - Vol. 32. - P. 311-323.

156. Malik Y.S., Patnayak D.P., Goyal S.M. Detection of three avian respiratory viruses by single-tube multiplex reverse transcription-polymerase chain reaction assay // J Vet Diagn Invest. - 2004. - Vol. 16, № 3. - P. 244248.

157. Massin P., van der Werf S., Naffakh N. Residue 627 of PB2 is a determinant of cold sensitivity in RNA replication of avian influenza viruses // J. Virol.-2001.-Vol. 75.-P. 5398-5404.

158. Mass mortality of harbor seal: pneumonia associated with influenza A virus / J.R. Geraci, D.J. St Aubin, I.K. Barker [et al] // Science. - 1982. - Vol. 215, № 4536.-P. 1129-1131.

159. Moult migration of emperor geese Chen canagica between Alaska and Russia / J. W. Hupp, J. A. Schmutz, C. R. Ely [et al] // J. Avian Biol. - Vol. 38.-2007.

160. Movements of birds and avian influenza from Asia into Alaska / K. Winker, K.G. McCracken, D.D. Gibson [et al] // Emerg. Infect. Dis. - 2007. -Vol. 13.-P. 547-552.

161. Molecular Basis for High Virulence of Hong Kong H5N1 Influenza A Viruses / M. Hatta, P. Gao, P. Halfmann, Y. Kawaoka // Science. - 2001. -Vol. 293.-P. 1840-1842.

162. Molecular characterization of a new hemagglutinin, subtype HI4, of influenza A virus / Y. Kawaoka, S. Yamnikova, T.M. Chambers [et al] // Virology. - 1990. - Vol. 179. - P. 759-767.

163. Multiplex fluorescent RT-PCR to quantify leukemic fusion transcripts / M. Dupont, A. Goldsborough, T. Levayer [et al] // Biotechniques. - Vol. 33, № l.-P. 158-160.

164. Mutational analysis of the influenza virus cRNA promoter and identification of nucleotides critical for replication / M. Crow, T. Deng, M. Addley, G.G. Brownlee // J. Virol. - 2004. - Vol. 78. N 12. - P.6263-6270.

165. Nayak D.P., Hui E.K., Barman S. Assembly and budding of influenza virus // Virus Res. - 2004. - Vol. 106, № 2. - P. 147-165

166. Neumann G., Kawaoka Y. Host range restriction and pathogenicity in the context of influenza pandemic // Emerg. Infect. Dis. - 2006. -Vol. 12. - P. 881-886.

167. Neumann G., Shinya K., Kawaoka Y. Molecular pathogenesis of H5N1 influenza virus infections // Antivir. Ther. - 2007. - Vol. 12. - P. 617-626.

168. Nielsen O., Clavijo A., Boughen J.A. Serologic evidence of influenza A infection in marine mammals of arctic Canada // J.Wildl. Dis. - 2001. - Vol. 37, №4. -P. 820-825.

169. NS1 protein of influenza A virus inhibits the function of intracytoplasmic pathogen sensor, RIG-I / Z. Guo, L.M. Chen, H. Zeng [et al] // Am. J. Respir. Cell. Mol. Biol. - 2007. - Vol. 36. - P. 263-269.

170. Nuclear import of influenza virus RNA can be mediated by viral nucleoprotein and transport factors required for protein import / R.E. O'Neill, R. Jaskunas, G. Blobel [et al] // Journal of biological chemistry - 1995. - N. 270.-P. 22701-22704.

171. Nuclear traffic of influenza virus proteins and ribonucleoprotein complexes / S. Boulo, H. Akarsu, R.W. Ruigrok, F. Baudin // Virus Res. -2007.-Vol. 124, № 1-2. - P. 12-21.

172. OIE. Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals. V.l. 6-th ed. Paris, 2008. P.465-481.

173. OIE Quality standard and guidelines for veterinary laboratories: infectous diseases. 2-nd ed. Paris, 2008.

174. Okazaki K., Yanagawa R., Kida H. Contact infection of mink with 5 subtypes of avian influenza virus. Brief report. // Arch. Virol. - 1983. - Vol. 77, № 2-4. - P. 265-269.

175. Ottis K., Bachmann P.A. Isolation and charactetization of ortho- and paramyxoviruses from feral birds in Europe // Zentralblatt Fur Veretinarimedizin Rieche. - 1983. - Vol. 30. - P. 22-35.

176. Paniker C.K., Nair C.M.G. Experimental infection of animals with influenzavirus types A and B // Bull. WHO. - 1972. - Vol. 47, № 4. - P. 461463.

177. Paniker C.K., Nair C.M.G. Infection with A2 Hong Kong influenza virus in domestic cats // Bull. WHO. - 1970. - Vol. 43, № 6. - P. 859-862.

178. PB2 amino acid at position 627 affects replicative efficiency, but not cell tropism, of Hong Kong H5N1 influenza A viruses in mice / K. Shinya, S. Hamm, M. Hatta [et al] // Virology. - 2004. - Vol. 320. - P. 258-266.

179. Perpetuation of influenza A viruses in Alaskan waterfowl reservoirs. Archives of Virology / T. Ito, K. Okazaki, Y. Kawaola [et al] II - 1995. - Vol. 140.-P. 1163-1172.

180. Persistence of avian influenza virus in water / D.E. Stallknecht, S.M. Shane, M.T. Kearney, P.J. Zwank // Avian Diseases. - 1990. - Vol. 34. - P. 412-418.

181. Phylogenic analysis of the M genes of influenza viruses isolated from free-flying water birds from their Northern Territory to Hokkaido, Japan / R. Manzoor, Y. Sakoda, A. Mweene [et al] // Virus Genes. - 2008. - Vol. 37. -P. 144-152.

182. Phylogenetic analysis of type A influenza genes in natural reservoir species in North America reveals genetic vatiation / E. Spackman, D.E.Stallknecht, R.D. Slemons [et al] // Virus Research . - 2005. - Vol. 114. -P. 89-100.

183. Pinto L.H., Holsinger L.J., Lamb R.A. Influenza virus M2 protein has ion channel activity // Cell. - 1992. - Vol.69. N.3. - P. 517-28.

184. Pinto L.H., Lamb R.A. The M2 proton channels of influenza A and B viruses // J Biol Chem. - 2006. - Vol. 281. N 14. -P. 8997-9000.

185. Pollack J. R. A Perspective on DNA Microarrays in Pathology Research and Practice // The American Journal of Pathology. - 2007. - Vol. 171, N. 2.-P. 375-385.

186. Poon L.L., Fodor E., Brownlee G.G. Polyuridylated mRNA synthesized by a recombinant influenza virus is defective in nuclear export // J. Virol. -2000. -Vol. 74, № 1. - P. 418-427.

187. Promoter elements in the influenza vRNA terminal structure / R. Flick, G. Neumann, E. Hoffmann [et al] // RNA. - 1996. - Vol.2. N 10. - P. 10461057.

188. Properties and dissemination of H5N1 viruses isolated during an influenza outbreak in migratory waterfowl in western China / H. Chen, Y Li, Z. Li [et al] // J. Virol. - 2006. - Vol. 80. - P. 5976-5983.

189. Quantitative monitoring of gene expression patterns with a complementary DNA microarray / M. Schena, D. Shalon, R.W. Davis, P.O. Brown [et al] // Science. - 1995. - Vol. 270, № 5235. - P. 467-470.

190. Rapid and Highly Sensitive Pathotyping of Avian Influenza A H5N1 Virus by Using Real-Time Reverse Transcription-PCR / B. Hoffmann, T. Harder, E. Starick [et al] // J. Clin. Microbiol. - 2007. Vol. 45, N. 2. - P. 600603

191. Rapid detection of H5 avian influenza virus by TaqMan-MGB real-time RT-PCR / Y.Y. Lu, J.Y. Yan, Y. Feng [et al] // Lett. Appl. Microbiol. - 2008. -Vol. 46, № l.-P. 20-25.

192. Rapid discrimination of H5 and H9 subtypes of avian influenza viruses and Newcastle disease virus by multiplex RT-PCR / H.T. Chen, J. Zhang, D.H. Sun [et al] // Vet. Res. Commun. - 2008. - Vol. 32, № 6. - P. 491-498.

193. Rapid molecular subtyping by reverse transcription polymerase chain reaction of the neuraminidase gene of avian influenza A viruses / S.R. Fereidouni, E. Starick, C. [et al]. // Vet Microbiol. - 2009. - Vol. 30, № 135(3-4).-P. 253-260.

194. Real-time multiplex PCR assays / C.T. Wittwer, M.G. Herrmann, C.N. Gundry, K.S. Elenitoba-Johnson // Methods. - 2001. - Vol. 25. - P. 430-442.

195. Real-time PCR system for detection of orthopoxviruses and simultaneous identification of smallpox virus / V.A. Olson, T.Laue, M.T. Laker [et al] // J. Clin. Microbiol. - 2004. - Vol. 42, № 5. - P. 1940-1946.

196. Real-time RT-PCR for H5N1 avian influenza A virus detection / W. Chen, B. He, C. Li [et al] // J. Med. Microbiol. - 2007. - Vol. 56, № 5. - P. 603-607. [

197. Re-emergence of fatal human influenza A subtype H5N1 disease / J.S. Peiris, W.C. Yu, C.W. Leung [et al] // Lancet. - 2004. - Vol. 363. - P. 617619.

198. Replication of avian influenza A viruses in mammals / V.S. Hinshaw, R.G. Webster, B.C. Easterday, W.J.Jr // Bean Infect. Immunol. - 1981. - Vol. 34, №2.-P. 354-361.

199. RIG-I-mediated antiviral responses to single-stranded RNA bearing 5-phosphates / A. Pichlmair, O. Schulz, C.P. Tan [et al] // Science. - 2006. -Vol. 314.-P. 997-1001.

200. Saberfar E., Forghani-Fard M.M., Mosavi M. Multiplex reverse transcriptase-PCR assay for typing and subtyping of influenza A (H5 & H9) virus in Iran // Iran Biomed. J. - 2007. - Vol. 11, № 2. - P. 69-74.

201. Selective incorporation of influenza virus RNA segments into virions / Y. Fujii, H. Goto, T. Watanabe [et al] // Proc. Natl.Acad. Sci. USA. - 2003. -Vol. 100, № 4. _ p. 2002-2007.

202. Seo S.H., Hoffmann E., Webster R.G. Lethal H5N1 influenza viruses escape host anti-viral cytokine responses // Nat. Med. - 2002. - Vol. 8. - P. 950-954.

203. Seo S.H., Hoffmann E., Webster R.G. The NS1 gene of H5N1 influenza viruses circumvents the host anti-viral cytokine responses // Virus. Res. - 2004. - Vol. 103. - P. 107-113.

204. Seroepidemiological evidence of avian H4, H5 and H9 influenza A virus trancmission to pigs in southeastern China / A. Ninomiya, A. Takada, K. Okazaki [et al] // Vet. Microbiol. - 2002. - Vol. 88, № 2. - P. 107-114.

205. Serological evidence of transmission of human influenza A and B viruses to Caspian seals (Phoca caspica) / K. Ohishi, A. Ninomiya, H. Kida [et al] // Microbiol. Immunol. - 2002. - Vol. 46, № 9. _ p. 639-644.

206. Serological investigation of virus infections in harp seals (Phoca groenlandica) and hooded seals (Cystophora cristata) / S. Stuen, P. Have, A.D. Osterhaus [et al] I I Vet. Rec. - 1994. - Vol. 134, № 19. - P. 502-503.

207. Serologic evidence of influenza virus infection in a ringed seal (Phoca hispida) / G.R. Danner, M.W. McGregor, R.L. Zarnke, C.W. Olsen // Mar. Mammal. Sci. - 1998. - Vol. 14, № 2. - P. 380-384.

208. Shapiro G.I., Gurney T. J., Krug R.M. Influenza virus gene expression: control mechanisms at early and late times of infection and nuclear-cytoplasmic transport of virus-specific RNAs // J. Virol. - 1987. - Vol. 61, № 3.-P. 764-773.

209. Simultaneous monitoring of sentinel ducks and turkeys in Minnesota / D.A. Halvorson, K. Karunakaran, D. Senne [et al] // Avian Diseases. - 1983. -Vol. 27.-P. 77-85.

210. Single mutation in the PB1-F2 of H5N1 (HK/97) and 1918 influenza A viruses contributes to increased virulence / G.M. Conenello, D. Zamarin, L.A. Perrone [et al] //PLoS Pathog. - 2007. - Vol. 3. - P. 1414-1421.

211. Single-reaction genomic amplification accelerates sequencing and vaccine production for classical and Swine origin human influenza A viruses / B. Zhou, M.E. Donnelly, D.T. Scholes [et al] // J. Virol. - 2009. - Vol. 83, № 19.-P. 10309-10313.

212. Single step multiplex real-time RT-PCR for H5N1 influenza A virus detection / S. Payungporn, S. Chutinimitkul, A. Chaisingh [et al] // J Virol Methods. - 2006. - Vol. 131, №2.-P. 143-147.

213. Skehel J.J, Wiley D.C. Receptor binding and membrane fusion in virus entry: the influenza hemagglutinin // Annu Rev Biochem. - 2000. - N. 69. -P.531-69.

214. Slemons R.D., Easterday B.C. Host response differences among five avian species to influenza virus A/turkey/Ontario/7732/66 (Hav5N?) // Bulletin World Health Organisation. - 1972. - Vol. 47. - P. 521-525.

215. Smith G.L., Hay A.J. Replication of the influenza virus genome // Virology. - 1982.-Vol. 118, № 1. - P. 196-108.

216. Spackman E., Suarez D.L. Type A influenza virus detection and quantitation by real-time RT-PCR // Methods Mol. Biol. - 2008. - Vol. 436. -P. 19-26.

217. Spatial, temporal, and species variation in prevalence of influenza A viruses in wild migratory birds / V.J. Munster, C. Baas, P. Lexmond [et al] // PLoS Pathog. - 2007. - Vol.3, № 5. - P. 630-638.

218. Spatio-temporal dynamics of global H5N1 outbreaks match bird migration patterns / Y. Si, A. K. Skidmore, T. Wang [et al] // Geospatial Health. - 2009. - Vol. 4, N 1. - P. 65-78.

219. Stallknecht D.E., Shane S.M. Host range of avian influenza virus in free-living birds // Veterinary Research Communications. - 1988. - Vol. 12. -P. 125-141.

220. Suarez D.L. Influenza A virus // Avian Influenza / ed. D.E. Swayne. -Ames, Iowa, USA etc., 2008. - Chap. 1. - P. 3-22.

221. Subbarao E.K., London W., Murphy B.R. A single amino acid in the PB2 gene of influenza A virus is a determinant of host range // J. Virol. -1993. - Vol. 67. - P. 1761-1764.

222. Sugimura T., Murakami Y., Ogawa T. The Susceptibility of Culture Cells to Avian Influenza Viruses // J. Vet. Med. Sei. - 2000. - Vol. 62, N 6. -P. 659-660,

223. Survelliance of pelagic birds for influenza A viruses / R. Sinneker, H. Sinneker, E. Zilske, D. Kohler // Acta virologica. - 1983. - Vol. 27. - P. 7579.

224. Susceptibility of north american ducks and gulls to H5N1 highly pathogenic avian influenza viruses / J.D. Brown, D.E. Stallknecht, J.R. Beck [et al] // Emerging Infectious Diseases. - 2006. - Vol. 12, № 11. - P. 16631670.

225. Subtyping of avian influenza viruses HI to HI5 on the basis of hemagglutinin genes by PCR assay and molecular determination of pathogenic potential / K. Tsukamoto, H. Ashizawa, K. Nakanishi [et al] // J.Clin.Microbiol. - 2008. - Vol. 46. - P. 3048-3055.

226. Surveillance and characterization of low pathogenic H5 avian influenza viruses isolated from wild migratory birds in Korea / Y.H. Baek, P.N. Pascua, M.S. Song [et al]//Virus Res.-2010.-Vol. 150.-P. 119-128.

227. Swayne D.E., Pantin-Jackwood M. Pathobiology of avian influenza virus infections in birds and mammals // Avian Influenza / ed. D.E. Swayne. -Ames, Iowa, USA etc., 2008. - Chap. 5. - P. 87-122.

228. The appearance of H3 influenza viruses on seals / R.J. Callan, G. Early, H. Kida, V.S. Hinshaw // J. gen. Virol. - 1995. - Vol. 76. - P. 199-203.

229. The cytoplasmic tail of the influenza A virus M2 protein plays a role in viral assembly / K. Iwatsuki-Horimoto, T. Horimoto, T. Noda [et al] // J. Virol. -2006. - Vol. 80, № 11. - P. 5233-5240.

230. The evolution of H5N1 influenza viruses in ducks in southern China / H. Chen, G. Deng, Z. Li [et al] // Proc. Natl. Acad. Sci USA. - 2004. - Vol. 101.-P. 10452-10457.

231. The evolutionary genetics and emergence of avian influenza viruses in wild birds / V.G. Dugan, R. Chen, D.J. Spiro [et al] // PLos Pathog. - 2008 4 el000076.

232. The influenza A virus NS1 protein binds small interfering RNAs and suppresses RNA silencing in plants / E. Bucher, H. Hemmes, P. de Haan [et al] // J. Gen. Virol. - 2004. - Vol. - P. 85:983-991.

233. The influenza A virus NS1 protein inhibits activation of Jun N-terminal kinase and AP-1 transcription factors / S. Ludwig, X. Wang, C. Ehrhardt [et al] // J. Virol. - 2002. - Vol. 76. - P. 11166-11171.

234. The NS1 gene contributes to the virulence of H5N1 avian influenza viruses / Z. Li, Y. Jiang, P. Jiao [et al] // J. Virol. - 2006. - Vol. 80. - P. 11115-11123.

235. The polymerase complex genes contribute to the high virulence of the human H5N1 influenza virus isolate A/Vietnam/1203/04 / R. Salomon, J. Franks, E.A. Govorkova [et al] // J. Exp. Med. - 2006. - Vol. 203. - P.689-697.

236. The proapoptotic influenza A virus protein PB1-F2 regulates viral polymerase activity by interaction with the PB1 protein /1. Mazur, D. Anhlan, D. Mitzner [et al] // Cell Microbiol. - 2008. - Vol. 10. - P. 1140-1152.

237. The rapid molecular subtyping and pathotyping of avian influenza viruses / A. Yacoub, I. Kiss, S. Zohari [et al] // J. Virol. Methods. - 2009. -Vol. 156, № 1-2. -P. 157-161.

238. The single-step multiplex reverse transcription-polymerase chain reaction assay for detecting H5 and H7 avian influenza A viruses / A. Thontiravong, S. Payungporn, J. Keawcharoen [et al] // Tohoku J. Exp. Med. -2007.-Vol. 211.-P.75-79.

239. The surface glycoproteins of H5 influenza viruses isolated from humans, chickens, and wild aquatic birds have distinguishable properties / M. Matrosovich, N. Zhou, Y. Kawaoka, R. Webster // J. Virol. - 1999. - Vol. 73. -P. 1146-1155.

240. The viral polymerase mediates adaptation of an avian influenza virus to a mammalian host /G. Gabriel, B. Dauber, T. Wolff [et al] // Proc. Natl. Acad. Sci USA. - 2005. - Vol. 102. - P. 18590-18595.

241. Todd J.D., Cohen D. Studies of influenza in dogs. I. Susceptibility of dogs to natural and experimental infection with human A2 and B strains of influenza virus // Am. J. Epidemiol. - 1968. - Vol. 87, № 2. - P. 426-439.

242. Transmission of equine influenza virus to dogs / P.C. Crawford, E.J. Dubovi, W.L. Castleman [et al] // Science. - 2005. - Vol. 310, № 5747. - P. 482-485.

243. Transmission of equine influenza virus to England foxhounds / J.M. Daly, A.S. Blunden, S. Macrae [et al] // Emerg. Infest. Dis. - 2008. - Vol.14, №3.-P. 461-464.

244. Transmission of Eurasian avian H2 influenza virus to shorebirds in North America / N.V. Makarova, N.V. Kaverin, S. Rrauss [et al] // J. Gen. Virol. - 1999.-Vol. 80, № 12.-P. 3167-3171.

245. Tumpey T.M., Kapczynski D.R., Swayne D.E. Comparative susceptibility of chickens and turkeys to avian influenza A H7N2 virus infection and protective efficacy of a commercial avian influenza H7N2 virus vaccine // Avian Deseases. -2004. - N.48. - P. 167-176.

246. Type A influenza viruses in waterfowl in Ohio and implications for domestic turkeys / R.D. Slemons, M.C. Shieldcastle, L.D. Heyman [et al] // Avian Diseases. - 1991. - Vol. 3 5. - P. 165-173.

247. Universal detection and identification of avian influenza virus by use of resequencing microarrays / B.C. Lin, A.P. Malanoski, Z. Wang [et al] // J. Clin. Microbiol. - 2009. - Vol. 47, № 4. - p. 988-993.

248. Universal primer set for amplification and sequencing of HA(0) cleavage sites of all influenza A viruses / A. Gall, B. Hoffmann, T. Harder [et al] // J. Clin. Microbiol. - 2008. - Vol.46, № 8. - P. 2561- 2567.

249. Universal primer set for the full-length amplification of all influenza A viruses / E. Hoffman, J. Stech, I. Leneva [et al] // Arch. Virol. - 2001. - Vol. 146.-P. 2275-2289.

250. Using RRT-PCR analysis and virus isolation to determine the prevalence of avian influenza virus infections in ducks at Minto Flats State Game Refuge, Alaska, during August 2005 / J. A. Runstadler, G. M. Happ, R. D. Slemons [et al] // Arch Virol. - 2007. - Vol. 152, № 10. - P. 1901-1910.

251. Vaccination against equine influenza: quid novi? / R. Pailot, D. Hannant, J.H. Kydd, J.M. Daly // Vaccine. - 2006. - Vol. 24, №. 19. - P. 461463.

252. Validated H5 Eurasian real-time reverse transcriptase- polymerase chain reaction and its application in H5N1 outbreaks in 2005-2006 / M.J. Slomka, T. Pavlidis, J. Banks [et al] // Avian Dis. - 2007. - Vol. 51. - P. 373377.

253. Virulence of H5N1 avian influenza virus enhanced by a 15-nucleotide deletion in the viral nonstructural gene / J.X. Long, D.X. Peng, Y.L. Liu [et al] // Virus Genes. - 2008. - Vol. 36. - P. 471-478.

254. Wang R., Jeffery K. T. Methods for molecular surveillance of influenza // Expert Rev Anti Infect Ther. - 2010. - Vol. 8, № 5. - P. 517-527.

255. Wang W., Krug R.M. U6atac snRNA, the highly divergent counterpart of U6 snRNA, is the specific target that mediates inhibition ofAT-AC splicing by the influenza virus NS1 protein // RNA. - 1998. - Vol. 4, № (1). - P. 55-64.

256. Webby R.J., Webster R.G. Emergence of influenza A viruses // Philos.Trans. R. Soc. Lond.-2001. - Vol. 356, N. 1416.-P. 1817-1828.

257. Wild Bird Migration across the Qinghai-Tibetan Plateau: A Transmission Route for Highly Pathogenic H5N1 / D.J. Prosser, P. Cui, J.Y. Takekawa [et al] // PLoS ONE. - 2011. - Vol. 6, N 3.

258. Wild ducks are the reservoir for only a limited number of influenza A subtypes / G.B. Sharp, Y. Kawaoka, S.M. Wright [et al ] // Epidemiology and Infection.- 1993.-Vol. 110. - P. 161-176.

259. Winker K., Spackman E., Swayne D.E. Rarity of influenza A virus in spring shorebirds, southern Alaska // Emerg. Infect. Dis. - 2008. - Vol. 14, № 8. - P. 1314-1316.

260. Wolff T., O'Neill R.E., Palese P. NSl-Binding protein (NS1-BP): a novel human protein that interacts with the influenza A virus nonstructural NS1 protein is relocalized in the nuclei of infected cells // J. Virol. - 1998. -

Vol. 72, №. 9. - P. 7170-7180.