Разработка клеточной технологии получения антигенов цестод: На примере Coenurus cerebralis и Echinococcus multilocularis тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.19, кандидат ветеринарных наук Кленова, Инна Федоровна

• Кленова, Инна Федоровна
• кандидат ветеринарных наук
• 1999

Оглавление диссертации кандидат ветеринарных наук Кленова, Инна Федоровна

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Антигены цестод. Иммунодиагностика, иммунопрофилактика цестодозов

1.2. Биотехнологические методы получения антигенов цестод

а) генно-инженерная технология;

б) клеточная технология

II. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы

2.1.1. Культивирование клеток протосколексов

С. cerebralis и вторичных ларводист Е. multilocularis в искусственных питательных средах

а) приобретение гельминтного материала, подготовка лабораторной посуды, различных материалов, инструментов, растворов для проведения культураль-

ной работы;

б) техника получения первичной клеточной культуры, культивирование клеток в искусственных питательных средах и отбор клеточных метаболитов

2.1.2. Экспериментальное заражение собак про-тосколексами С. cerebralis, приготовление онко-сферального секреторного антигена (ОСА);

2.1.3. Контроль клеточных метаболитов на стерильность и безвредность, определение содержания

белка в клеточных метаболитах

2.1.4. Определение специфических антигенов в клеточных метаболитах протосколексов

С. cerebralis:

а) иммуноферментной реакцией (ИФР);

б) реакцией иммунодиффузии в геле (РИД);

в) исследование сывороток экспериментально зараженных С. cerebralis овец ИФР в динамике инвазии

2.1.5. Иммунизация овец клеточными метаболитами («клеточным» антигеном) С. cerebralis и ОСА, получение сывороток в динамике иммунизации

2.1.6. Определение активности «клеточного» антигена протосколексов С. cerebralis и ОСА с иммунными сыворотками от овец:

а) ИФР;

б) РИД

2.1.7. Определение диагностически активных компонентов в «клеточном» антигене протосколексов С. cerebralis

2.1.8. Получение клеточных метаболитов вторичных ларвоцист Е. multilocularis и определение специфических антигенов в клеточных метаболитах вторичных ларвоцист Е. multilocularis:

а) ИФР

б) РИД

2.1.9. Определение диагностически активных компонентов в «клеточном» антигене Е. multilocularis

2.1.10. Изучение иммунопрофилактических свойств «клеточного» антигена Е. multilocularis при экспериментальном альвеолярном эхинококкозе

2.1.11. Статистическая обработка полученных результатов

III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Анализ данных по культивированию клеток протосколексов С. cerebralis и вторичных ларвоцист Е. multilocularis

3.2. Результаты экспериментального заражения собак и получение онкосферального секреторного антигена (ОСА)

3.3. Характеристика и контроль клеточных метаболитов С. cerebralis и Е. multilocularis

3.4. Иммунохимическая и иммуноферментная характеристика антигенов клеточных метаболитов С. cerebralis

3.5. Анализ сывороток овец, иммунизированных «клеточным» антигеном С. cerebralis и ОСА РИД

3.6. Иммуноферментный анализ сывороток овец, иммунизированных «клеточным» антигеном

С. cerebralis и ОСА

3.7. Диагностическая эффективность «клеточного» антигена С. cerebralis

3.8. Характеристика антигенов клеточных метаболитов Е. multilocularis ИФР и РИД

3.9. Диагностическая эффективность «клеточного» антигена Е. multilocularis

3.10. Оценка иммунопрофилактических свойств «клеточного» антигена Е. multilocularis

IV. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

Выводы

Список использованной литературы

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка клеточной технологии получения антигенов цестод: На примере Coenurus cerebralis и Echinococcus multilocularis»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Современная иммунология при гель-минтозах располагает достаточно большим научным материалом о формировании иммунитета у зараженных гельминтами животных и перспективности использования средств специфической иммунопрофилактики, имеющей важное значение при разработке комплексной программы борьбы с этими заболеваниями (Lightowlers M. W., 1990, 1993 и др.).

Экспериментально доказано, что характер развивающихся иммунологических реакций, как и напряженность иммунитета при тканевых гельминтозах, к числу которых относятся и ларвальные цестодозы, выражены сильнее (Clegg J. А., Smith M. А., 1978; Rickard M. D., Williams J. F., 1982; Косминков H. E., 1986; Бережко В. К., 1994 и др.). Под действием антигенов гельминтов активизируются эффекторные механизмы иммунной системы (Т-клетки, макрофаги, нейтро-филы, тучные клетки, эозинофилы, B-клетки, системы комплемента) , способствующие разрушению патогенных объектов и удалению их из организма хозяина. Аналогичный механизм заложен и в действии противоцестодозных вакцин, основу которых составляют антигены паразитов, полученные различными способами (Wickerhauser, 1976; Smith, 1978; Ayuya, 1979; Lloyd 1979; Osborn, 1982; Косминков, 1986 и др.). Достигнутые успехи в иммунопрофилактике ценуроза (Косминков, Скрынникова, 1993), тенуикольного цистицеркоза (Шу-мова, 1987; Косминков, 1990), эхинококкоза (Richard et al., 1995) и других ларвальных цестодозов свидетельствуют

о необходимости продолжения исследований в этом направлении и, особенно в плане разработки эффективных, недорогостоящих и длительно функционирующих источников получения антигенов цестод. Решение последней проблемы приобретает особое значение, поскольку получение достаточных количеств антигенного материала сопряжено с большими трудностями, а иногда просто невозможно из-за отсутствия необходимых условий для содержания зараженных животных источников паразитов.

В последние годы наметился определенный прогресс в отношении получения иммунодиагностических, иммунопрофилак-тических и лечебных средств в области паразитологии с использованием биотехнологических методов.

Так, на основе генной инженерии стало возможным целенаправленное получение биологически активных веществ путем введения в геном реципиентной клетки участка ДНК, являющегося функциональной единицей, кодирующего синтез необходимого белка.

Одним из перспективных направлений биотехнологии является клеточная инженерия, которая позволяет использовать культивируемые клетки для решения многих научных и прикладных задач биологии, медицины и сельского хозяйства. Клеточные культуры являются важным объектом в изучении механизмов канцерогенеза, дифференцировки клеток и в производстве противовирусных вакцин. Культуры клеток активно используются как продуценты биологически активных веществ, обладающих различными свойствами. Успехи культивирования иммунокомпетентных клеток создали возможность применения культур клеток в паразитологии. Представляется

перспективным получение антигенов-метаболитов, продуцируемых пролиферирующими клетками гельминтов в искусственных питательных средах.

Необходимость применения биотехнологических подходов в получении антигенных препаратов особенно остро ощущается при ларвальных цестодозах. Последнее связано с трудностью, а иногда и невозможностью приобретения достаточного количества гельминтного материала для проведения иммунологических исследований при этих гельминтозах. В то же время использование клеточной технологии позволяет не только значительно сократить расход источника антигена, но и по возможности значительно увеличить срок функциональной активности культуры клеток, продуцирующих антигены паразита.

Исходя из вышеизложенного и, в связи с существующим дефицитом специфических иммунопрофилактических средств при ларвальных цестодозах, считаем целесообразной и актуальной работу по разработке клеточной технологии получения перевиваемой культуры клеток источника антигенов для проведения иммунодиагностических и иммунопрофилактических исследований.

Цели и задачи исследования. Целью наших исследований было разработка клеточной технологии получения антигенов цес-тод, оценка их антигенной активности, иммунодиагностиче-ской и иммунопрофилактической эффективности.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

разработать технологию получения первичной суспензии

жизнеспособных клеток цестод (Coenurus cerebralis, Echinococcus multilocularis);

подобрать оптимальные условия культивирования клеток в искусственных питательных средах для получения перевиваемой культуры клеток, продуцирующих метаболиты — «клеточные» антигены;

провести иммунизацию овец «клеточными» антигенами протосколексов С. cerebralis, получить сыворотки в динамике иммунизации;

исследовать иммунохимические и антигенные свойства «клеточных» антигенов;

— оценить иммунодиагностические и иммунопрофилактиче-ские свойства «клеточных» антигенов.

Научная новизна. Впервые на примере С. cerebralis и Е. multilocularis разработана клеточная технология получения перевиваемой культуры клеток-продуцентов антигено-активных метаболитов, представляющих научно-практический интерес в иммунодиагностике и иммунопрофилактике цестодо-зов. Методами иммунохимического и иммуноферментного анализа в «клеточных» антигенах исследуемых видов цестод выявлены компоненты, идентичные антигенам паразитов.

Впервые проведена сравнительная оценка активности «клеточного» антигена протосколексов ценурусов и онкосфе-рального секреторного антигена М. multiceps в иммунофер-ментной реакции с сыворотками овец, иммунизированных этими препаратами.

Впервые проведена оценка диагностической эффективности «клеточных» антигенов С. cerebralis и Е. multilocu-

laris в ИФР. На основе «клеточных» антигенов вторичных ларвоцист альвеолярного эхинококка изготовлены иммунопре-параты, показавшие в условиях эксперимента на мышах высокий профилактический эффект.

Практическая ценность работы. На основе материалов проведенной работы разработана «Методика получения перевиваемой клеточной культуры цестод», утвержденная на заседании секции «Инвазионные болезни животных» Отделения ветеринарной медицины РАСХН.

Получено свидетельство о рационализаторском предложении на «Способ получения антигенов цестод на основе клеточной технологии».

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены:

1. На заседании секции «Инвазионные болезни животных (Москва, февраль, 1999 г.)

2. На заседаниях Ученого совета ВИГИС (Москва, 19961998 гг.).

3. На конференции ВОГ (Москва, 1997 г.).

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Технология получения перевиваемой культуры клеток цестод С. cerebralis и Е. multilocularis, продуцирующих метаболиты — «клеточные» антигены.

2. Иммунохимические свойства и антигенная активность клеточных метаболитов С. cerebralis и Е. multilocularis.

3. Выявление диагностически активных компонентов С.

cerebralis и E. multilocularis в «клеточных» антигенах.

4. Иммунопрофилактические свойства «клеточных» антигенов Е. multilocularis.

Публикации. По теме диссертации опубликованы 4 статьи.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 125 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, раздела собственных исследований, включающего: материалы и методы, результаты исследований, обсуждение результатов, выводы, список использованной литературы, приложения.

Заключение диссертации по теме «Паразитология», Кленова, Инна Федоровна

выводы

1. Разработана технология получения перевиваемой культуры клеток протосколексов Coenurus cerebralis и вторичных ларвоцист Echinococcus multilocularis, синтезирующих в процессе культивирования в искусственных питательных средах биологически активные вещества, обладающие свойствами антигенов.

2. Иммуноферментным тестом и реакцией иммунодиффузии в агаровом геле с использованием сывороток ценурозных овец в продуктах метаболизма культивируемых клеток протосколексов С. cerebralis выявлены специфические «клеточные» антигены паразита; теми же тестами с сывороткой человека с подтвержденным диагнозом альвеолярного эхинококкоза в клеточных метаболитах вторичных ларвоцист Е. multilocularis зарегистрированы антигены альвеолярного эхинококка.

3. Установлено, что продукты метаболизма клеток протосколексов С. cerebralis являются активными антигенами, вызывающими синтез антител у иммунизированных овец, сохраняющихся в их кровотоке длительное время на высоком уровне . Антитела-преципитины в сыворотке иммунизированных овец выявляли с 15-го по 107-й день, максимальное число комплексов антиген-антитело регистрировали с 16-го по 85-й день после второй иммунизации. Сывороточные антитела иммуноферментной реакцией у этих овец определяли с 10-го дня иммунизации. Их уровень после 2-й иммунизирующей дозы, судя по показателям оптической плотности, значительно увеличивался и сохранялся таковым более года (срок наблюдений) .

4. При сравнительной оценке антигенной активности метаболитов клеток протосколексов С. cerebralis с онкосфе-ральным секреторным антигеном (Скрынникова Т. И., 1993) статистически достоверных различий не установлено. По результатам реакции иммунодиффузии в агаровом геле и имму-ноферментного анализа оба препарата являются активными иммуногенами.

5. Иммунохимическим анализом с использованием сывороток овец экспериментально зараженных С. cerebralis в «клеточном» антигене протосколексов ценурусов выявлено не менее 2 антигенных компонентов идентичных функциональным антигенам С. cerebralis.

6. «Клеточный» антиген протосколексов С. cerebralis содержал диагностически активные компоненты, эффективность которых в иммуноферментной реакции при экспериментальном ценурозе овец составила по чувствительности 83,5%, по специфичности - 7 8,5%.

7. В «клеточном» антигене вторичных ларвоцист Е. multilocularis иммунохимическим методом с сывороткой человека с подтвержденным диагнозом альвеолярного эхинококкоза определено 2-3 антигенных компонента, идентичных функциональным антигенам этого паразита.

8. Установлено, что «клеточный» антиген вторичных ларвоцист Е. multilocularis обладает иммунопрофилактическим действием. Иммунизация мышей этим препаратом в сочетании с полным адъювантом Фрейнда, адъювантом ВНИИЗЖ и иммуно-модулятором риботаном предохраняла их от последующего заражения Е. multilocularis.

Список литературы диссертационного исследования кандидат ветеринарных наук Кленова, Инна Федоровна, 1999 год

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Баллад Н. Е. Изучение антигенных компонентов цистицер

ков Cysticercus bovis //Тр. Всес. ин-та гель-минтол.- 1971.- Т. 17.- С. 269-270.

2. Баллад Н. Е. Иммунохимическая характеристика антиге

нов, выделенных из личиночных стадий Тае-niarhynhus saginatus //Мед. паразитол. и пара-зитарн. болезни.- 1973.- № 2.- С. 131-136.

3. Бережко В. К. Анализ антигенной структуры экстрактов

из половозрелых Dictyocaulus filaria и Dictio-caulus viviparus //Тр. Всес. ин-та гельминтол.-1970.- Т. 16.- С. 17-24.

4. Бережко В. К. Иммуноэлектроферетический анализ анти-

генной структуры половозрелых Dictyocaulus filaria и Dictiocaulus viviparus //Тр. Всес. инта гельминтол.- 1972.- Т. 19.- С. 14-23.

5. Бережко В. К. Изучение антигенности свободноживущей

нематоды Rhabditis axei //Бюл. Всес. ин-та гельминтол.- 1973. - Вып. 10.- С. 16-18.

6. Бережко В. К., Нисенбаум И. А. Вакцинация при гельмин-

тозах гетерологичными антигенами.

//Антропозоогельминтозы и перспективы их ликвидации. Тезисы докл. научн. конф.-Самарканд-Тайляк, - 1975.-С.7-8.

7. Бережко В. КРоманенко Л. Н. Антигенное родство цес-

тод рода Taenia //Паразитология.— 1989.— Т. 23.- № 2.- С. 153-158.

8. Бережко В. К. Сравнительная иммунохимическая характе-

ристика и серологическая активность антигенов Cysticercus tenuicollis и Taenia hydatigena //Паразитология.- 1989.- Т.23.- № 5.- С. 399406.

9. Бережко В. К. Дисс. докт. биол. наук.- М.- 1994.

10. Бережко В. К., Бессонов А. С. //Тр. Всес. ин-та

гельминтол.- 1996.- Т. 32.- С. 18-22.

11. Бережко В. К., Клименко В. В. //Тез. докл. научн.

конф. «Современное состояние и перспективы оздоровления хозяйств от эхинококкоза и цистицер-коза.- М.-1990, С.30-31

12. Берлинских М. С., Султанова 3. Д., Куликова К. С. О

видоспецифических антигенах клеток перевиваемых культур //Вопр. вирусологии.- 1969.- N 1.-С.23-27.

13. Бессонов А. С. Тениоз Taenia solium - цистицеркоз

//М. «Колос».- 1996.- 336 с.

14. Бессонов А. С. Комплексное применение иммунореакций

для диагностики трихинеллеза свиней

//Ветеринария.- 1967.- № 2.- С. 62-65.

15. Головина А. А., Константинов В. И. Опыт культивирова-

ния личинок альвеолярного эхинококка человека вне организма //Трю Новосибирск, гос. вет. инта, 1961.- Т. 36.- С. 53-57.

16. Голубев Д. Б. г Соминина А. А., Медведева М. Н. Руко-

водство по применению клеточных культур в вирусологии.- JT.: Медицина, 1972.- 222 С.

17. Гусев А. И., Цветков В. С. К технике постановки реак-

ции микропреципитации в агаре //Лабор. дело.-1961.- N 2.- С. 43.

18. Даугалиева Э. X., Курочкина К. Г. Конъюгированная по-

ливалентная вакцина Н-поливак при гельминтозах животных //Тез. докл. научн. конф. Актуальные проблемы биотехнологии в растениеводстве, животноводстве, ветеринарии.- М.- 1996,- С. 20.

19. Дьяконов Л. П., Поздняков А. А., Панкова Г. Е., Голо-

лобова М. Т. Методические рекомендации по получению, культивированию и использованию в производственных ветеринарных лабораториях первичных и диплоидных культур клеток животного происхождения.- М. , 1978.- 8 С.

20. Дьяконов Л. П. , Глухов Б. Ф., Поздняков А. А. , Дени-

сенко Г. Ф. , Гололобова М. Т. , Панкова Г. Е. , Камыкова Т. Т. Культура клеток и тканей животных: Учебно-методическое пособие //Ставрополь.-1980.- 112 С.

21. Кваленко Ф. П. //Тез. докл. 3-го Респ. съезда эпиде-

миологов и паразитологов.- Ереван, 1983.- С. 124-126.

22. Коколова Л. М., Эпизоотология ларвальных тениидозов

северных оленей Якутии и меры борьбы с ними: Дис. канд. вет. наук.- М., 1995.- 100с.

23. Коляков Я. Е. Ветеринарная иммунология - М. Агропром-

издат.- 1986.- 272 С.

24. Косминков Я. Е., Комаров Е. И., Морозова Е. Ф., Серя-

ков Н. И., Устяков А. В. Иммунизация овец против ценуроза //Ветеринария.— 1986.— № 12.— С.

41-42.

25. Косминков H. Е. Специфическая иммунопрофилактика це-

нуроза овец //Совершенствование ветеринарного обслуживания животных в условиях интенсификации. Тез. докл. Всесоюзн. научн-техн. конф. 1517 сент. 1987 . Махачкала.- М., 1987. - С. 112113.

26. Косминков Н. Е. Иммунопрофилактика как прогрессивный

технологический прием в борьбе с ценурозом овец //Пути развития производства и переработки животноводческого сырья в системе АПК: Тез. докл. Всесоюзн. научн-техн. конф. 17-21 окт. 1988 .— М.- С. 238-239.

27. Косминков Н. Е Дис. докт. вет. наук — М., 1991.- 397с

28. Красюкова Л. С. Культивирование клеток ларвоцист эхи-

нококка и использование его протосколексов для отбора антгельминтных препаратов: Дис. канд. биол. наук.- М., 1987.- 184с..

29. Курносов А. Н. Новая модификация способа трипсиниза-

ции почек животных //Тезисы XVII научн. конф. ин-та полиемиелита и вирусных энцефалитов АМН СССР.- М., 1972.- С. 519-520.

30. Лайпанов Б. К. Разработка специфических мероприятий

(рекомендаций) по борьбе с ценурозом овец на основе иммунизации в условиях Карачаево-Черкессии.- Дисс. на соиск. уч. степ. канд. вет. наук.- М. 1993. С. 89-90.

31. Лейкина Е. С. Антигены гельминтов и их общность с ан-

тигеном хозяина (обзор литературы) //Мед. пара-

зитол. и паразитарн. болезни.— 1970.— № 2.— С. 349-355.

32. Лейкина Е. СПолетаева О. Г. Проблемы общей и при-

кладной гельминтологии //М.: Наука, 1973.- С. 81-86.

33. Лейкина Е. С. Иммунология зхинококкоза и альвеококко-

за и использовании ее достижений в борьбе с этими гельминтозами //Биохимия и физиология гельминтов и иммунитет при гельминтозах — М.— 1984.- С. 68-78.

34. Лейкина Е. С., Яроцкий Л. С., Озерецковская Н. Н.

Итоги и перспективы исследований по иммунологии эхинококкозов //Мед. паразитол.— 1987.— № 2.— С. 3-7.

35. Лукашенко Н. П. Некоторые наблюдения о культивирова-

нии А. multilocularis (Leucart, 1963) in vitro //Мат-лы к научн. конф. ВОГ.- М.-1964а.- Ч. 1.-С. 238-242.

36. Лукашенко Н. П. К изучению развития А. multilocularis

(Leucart, 1963) in vitro //Мед. паразитол. и паразитарн. болезни.- 19646.- № 3.- С. 271-278.

37. Лукашенко Н. П. Дис. докт. биол. наук.- М., 1967. Т.

1, 2.

38. Людогорская Л. А. , Какпаков В. Т. Изучение антигенов

перевиваемых и штаммовых культур клеток человека в реакции преципитации в агаровом геле //Вопр. онкологии.- 1966.- № 10.- С. 64-68.

39. Озерецковская Н. Н. Иммунологические и иммунопатоло-

гические реакции в патогенезе гельминтозов

//Основы общей гельминтологии.— М.— 1976.— Т. 3.- С. 169-214.

40. Петров Р. В. Иммунология М.: Медицина.- 1986, 416 с.

41. Пинаев Г. П. Методы культивирования клеток. «Наука»

1988.- 319 с.

42. Подопригора Г. И., Збарский А. И. Мед. паразитол.—

1990. - № 5.- С. 26.

43. Разаков Ш. А. Выявление видоспецифических и перекре-

стно реагирующих антигенных компонентов эхинококка и альвеококка //Мед. паразитол. и парази-тарн. болезни.- 1975.- Т. 44.- № 4.- С. 448455.

44. Разаков Ш. А. Получение сывороток узкой специфичности

и их использовании для идентификации антигенных компонентов эхинококка и альвеококка //Мед. паразитол. и паразитарн. болезни.— 197 6.— Т. 45.— № 2.- С. 148-150.

45. Сергеев А. А. Размножение вирусов животных в культуре

ткани.- М.: Колос, 1966.- 311 С.

46. Сергеев А. А. Репродукция и выращивание вирусов жи-

вотных.- М.: Колос, 1976.- 303 С.

47. Сергеева П. А., Эвранова В. Г. К вопросу культивиро-

вания личиночной формы Echinococcus granulosus на питательных средах и культурах тканей: (Предварительное сообщение)// Ученые записки Казанского вет. ин-та.- Казань, 1962. Т. 8 9.-С. 145-150.

48. Сивков Г. С.г Зубков В. С. Протективные свойства антигена из личинки овечьего овода.- «Ветеринария».- 1995.-

№ 5.- С. 39.

49. Скрынникова Т. И. Онкосферальный секреторный антиген

Multiceps multiceps для профилактики ценуроза овец: Дис. канд. вет. наук.- М. , 1993.- 133 С.

50. Спиер Р.Е., Адаме Г. Д., Гриффите Дж. Б. Биотехноло-

гия клеток животных: в 2 т. Т. 2/пер. с англ. В. М. Тарасенко; под редакцией Г. А. Сафонова.-М.: Агропромиздат, 1989.- 520 С.

51. Сюрин В. Н., Белоусова Р. В., Фомина Я. В. Ветеринар-

ная вирусология.- М.: Колос, 1984.- 375 С.

52. Тараканов В. И. Культивирование протосколексов эхино-

кокка на двухфазных питательных средах // Материалы IV Закавказской конференции по паразитологии.- Тбилиси, 1986.

53. Трибулев Г. П., Подоплелов И. И., Шарый Н. И. , Крюко-

ва Т. В., Тимофеев В. Т., Алексанян Ю. Т., Зыков Ю. В., Сухов Ю. Я. Анализ антигенного состава клеток человека, культивируемых вне организма //Актуальные вопросы клеточной иммунологии и иммуногенетики: Сб. статей советско-болгарских исследований, посвященных памяти сов. иммунолога Г. П. Трибулева.- София: Медицина и физ. культура, 1973.- С. 41-4 6.

54. Шумова Я. С. Дис. канд. вет. наук.- М., 1994, 138 с.

55. Эвранова В. Г., Сергеева П. А. Культивирование личи-

ночной стадии Echinococcus granulosus внге организма //Тез. докл. научн. конф. ВОГ.

56. Яраев Р. Г. Функциональные антигены жидкости пузыря

Coenurus cerebralis //Тр. всес. ин-та гельмин-

тол.- 1971.- Т. 17.- С. 285-286.

57. Anderson I. //New Sci.- 1989.- Vol. 122, № 1673 P.34.

58. Ayuya J. M. , Williams J. F. The immunological re-

sponse of the rat to infection with Taenia tae-niaformis. VII. Immunisation by oral and parental alministration of antigents //Immunology.-1979.- 36. 825-34.

59. Bassi G. E.r Ishiki D. K. r Ferreira A. W.r Camargo M.

E. Rev. bras, patol. clin.- 1991.- 27:49.

60. Benex J. Evolution in vitro d' explants de membrane

prolifere Echinococcus granulosus //Ann. Para-sitol.— 1968.- V. 43.- N. 5.- P. 573-582.

61. Berezhko V., Bessonov A. //8th Int. Congr. of Parasi-

tol. 10-14 Ock.- 1994 Ismir. Turkey, Abstracts." 1994.- V. 2.- P. 428.

62. Blazek R., Brec K. A. r Buchwalder R. et al. Some se-

rological test in detecning spontaneous bovine cysticercosis //Folia parasitol.- 1982.- t. 29.- № 3.- S. 253-258.

63. Bomford //Internat. Tissue Reach.- 1982.- V. 4.- P.

201-209.

64. Bowman D. D. , Mika-Grieve M. , Grieve R. B. //Exp.

Parasitol.- 1987.- V. 64.- N. 3.- P. 458-465.

65. Brandt J., Geerts SDe Deken R.r Kumar V. Circulat-

ing antigen detection in bovine cysticercosus-ing monoclonal antibodies against the excretory-secretory prodacts of Taenia saginata metacestodes //6 th Eur. Multicollog. Parasitol. The Hague, Sept. 7-11, 1992.

66. Capron A., Biquet A. r Vernes A. , Afchain E. Struc-

tural antigenique des helmintes. Aspects immu-nologiques. Des relations hote-parasite //Patol. Biol.- 1968.- P. 121-138

67. Capron A., Brigoo E., Afchin D. Apport de 1 etude de

la structure antigenique a la philogenic des Helmintes //Bull. Mus. nat. hist, natur. Zool. - 1972. - V. 55. - P. 877 - 885.

68. Clegg Y. A. r Smith M. A. Prospect for the development

of dead vaccines against helmints // Adv. Para-sitol.- 1978. - V. 16.- P. 165 - 218.

69. Chamerkh M. , Grass-Masse H., Bossus M., Dissous C.,

Tartar A., Capron A. Use of synthetic peptides in immunodiagnosis of cystic echinococcosis //6 th Eur. Multicolog. Parasitol., The Hague, Sept., 7-11, 1992.- P. 81.

70. Choy W. FLim P. L. , Ny M. U. // Vet. Parasitol.-

1989.- V. 32.- N 4.- P. 301-310.

71. Coutelen F. Essai de culture in vitro de scolex et

d'hidatiles tchinococciques (Echinococcus granulosus) // Ann. de parasitol.- 1927.- V. 5.-N 1.- P.19.

72. Craig P. S. //Trans, roy. Soc. trop. Med. Hyg.-

1988.- Vol. 82, № 6.- P. 818.

73. Craig P. S., Richard M. D. Evaluation of «crude» an-

tigen prepared from Taenia saginata for the serological diagnosis of T. saginata cysticerco-sis in catle using the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).- Z. Parasitenk.- 1980.- V.

83.- № 2.- P. 303-317.

74. Craig P. S., Hocking R. E. , Mitchel G. F., Rickard M.

D. Murine hybridome-derived antibodies in the processing of antigens for the immunodiagnosis of hydatid ( Echinococcus granulosos) infection in sheep //Parasitology.- 1981.- V. 83.- № 2.-P. 303-317.

75. Craig P. S., Rickard M. D. Antibody responses of ex-

perimentally infected lambs to antigens collected during in vitro mainterance of the adult, metacestode or oncosphere stages of Taenia hidatigena and Taenia ovis with further observations on antioncospheral antibodies // Z. Parasitenk.- 1982.- V 67.- № 2.- P. 197-209.

76. Crue Silva S. A. Value and limits of immunodiagnostic

methods in Veterinary helminthiasis //Rev. iber. Parasitol.- 1971.- V. 31.- № 1-2.- P. 95113.

77. Deve F. Evolution vesiculaire du scolex echinococ-

coique obtinue in vitro. La culture artificielle du cyst hydatide //Compt. rend. Soc. biol.- 1926.- V. 94.- P. 440-441.

78. Deve F. Scoliciculture hydatique on sac de colodien

et in vitro //Compt. rend. Soc. biol.- 1926.-V. 98.-N 14.- P. 1176-1177.

79. Deplazes P., Eckert J., Pawlowsky Z., Machowska L. ,

Gottstein B //Trans. Roy. Soc. Trop. Med. Hyg.-1991.- 85:391.

80. Dukor P., Tarcsay L. and Baschang G.

//Immunostimulants. -197 9. - Annu. Rep. Med. Chem. 14, - P. 146-167.

81. Драгнева H., Терзийски А., Бойчева О. В, ерху антиге-

ната близостна някои животински и растителни хелминти и свободно живоещи нематоди. 2. Щпит-ване на антигената общности между Ascaris suum и Ditylenchus dipsaci чрез рекцията за свързване на комплемента и чрез метода на иммунодиффузия в агаров гел //Хелминтология.-1983.- т. 15.- Р. 19-24.

82. Eagle Н. Media for animal cell culture //Tissue Cult.

Assoc. Manual. 1977.- V. 3.- P. 517-520.

83. Ecker J. //Experimentia. - 1988 .- V. 44.- N 10.- P.

873-877.

84. Edelman R. Vaccine adyuvants. Rev. Infect. Dis. 2.-

1980. - P. 370-383.

85. Edelman R. , Hardegree M. C., Chedid L. Sammary of an

international symposium on potentiation of the immune response to vaccines. J. Infect. Dis. 141.- P. 103-112.

86. Edwards G. THasket Г., Herbert J. V. Taenia hyda-

tigena and Taenia multiceps infection in Snow-donia U. K. J. barmdogs as definitive hosts //Brit. Vet. J.- 1979.- V. 135.- № 5.- P. 426432.

87. Edwards G. T.f Herbert J. V. Preliminare investiga-

tions into the immunization of lambs against infection with Taenia Multiceps metacestodes //Veter. Parasitology.- 1982.- V. 9.- N 3, 4.-

P. 193-199.

88. Farell Y. P., Muller I., Louis Y. A. //Y. Immunol.-

1989.- Vol. 142, № 6.- P. 2052-2056.

89. Feng J.-S., Guo H.-F., Shtn B.-Y., Xue H.-E. Chin I.

Parasitol. and Parasit. Disrases.- 1992.- V. 10.- N 2.- P. 86-89.

90. Gallie G. J., Sewell M. M. N. Experimental immunisa-

tion of six-month old calves against infection with the Cysticercus stage of Taenia saginata // Trop. anim. Healt. Product.- 1876.- V. 8.- N 4.- P. 233-242.

91. Gottstein B. Purification by chromatofocusing of an

antigen fraction with high species specificity for Echinococcus multilocularis in ELISA //Experientia.- 1983.- V. 39.- N 12.- P. 14351436.

92. Gottstein B., Eckert J., Fey H. Serological différen-

ciation between Echinococcus granulosus, E. multilocularis in man //Z. Parasitenk.- 1983.-V. 69.- N 3.- P. 347-356.

93. Gottstein B.f Hemphill A. In vitro cultivation and

proliferation of Echinococcus multilocularis metacestoide: (Vortr.) Jahrestag //Schweiz, med. Wachenschr.- 1995.- V. 125.- N 18.- P. 928 .

94. Harmanek J., Prokopic J. Effect of T-activin on the

course of experimental infection with T. cras-siceps (Zeder, 1800) in mice //Folia parasitol.- 1989.- V 36.- N 2,- P. 117-125.

95. House R. V. , Dean Y. H. //Exp. Parasitol.- 1988.-

Vol. 67, № 1.- P. 104-115.

96. Haernander Ana, Niero Alberto. Induction of protec-

tive secondary hydatidosis //Parasite Immunol.-1994.- V. 16.- N 10.- P. 537-544.

97. Heath D. D. Resistence to Taenia pisiformis larve in

rabbits. Examination of the antigenially protective phase of larva development //International Journal for Parasitology.-1973.- V. 3.- 485-9.

98. Heath D. D. Resistance of Taenia pisiformis larvae in

rabbits: Immunisation against infection using non-living antigens from in vitro culture //Intern. J. Parasitology.- 1976.- V. 6.- P. 19-24.

99. Harrison L. G. S., Parkhouse R. M. E. //Parasite Im-

munol.- 1986.- V. 8.- N 4.- P. 319-332.

100. Jolles P. and Paraf A. //« Chemical and Biological

Basis of Adyuvants».- 1973.- Chapman and Hall, London.

101. Jong W. K., Heath D. D. //«Ars 3» antibodies in mera

of sheep infected with E. granulosus, T. hyda-tigena and T. ovis.- 1979.- Parasite Immunology.- P. 27-38.

102. Jenkins D. J., Rickard M. D. Specific antibody re-

sponses to Taenia hidatigena, Taenia pisiformis fnd Echinococcus granulosus infection in dogs // Aust. Vet. J.- 1985.- V.62.- № 3.- P. 72-78.

103. Jonson K. S. Harrison L. G. SLightowlers R. P

Lawrense S. B., Vinton J. G. , Heath D. D., Rickard D. D. //Nature.- 1989.- V. 338.-N. 6216.- P. 585-587.

104. Kassai T., Rede P., Takats C. A szarvasmarha-

cysticercosis diagnosztikajarol. 1. Elterjedes, kartetel, vadohidi husvizsgalatiradalmi ossze-foglalas // Magy. allotorv. lapja.- 1983.- V. 38.- N 12.- P. 707-710.

105. Kudrna K. , Prokopik J. Chalone-like inhybition of

DNA syntesis in helminths. //Folia Parasitológica.- 1985.- V. 35.- № 2.- P. 145-149.

106. Kudrna K. , Prokopik J. //Microbios lett.- 1985.- V.

29.- N 114.- P. 61-63.

107. Kudrna K. , Prokopik J. //2-nd Int. Symp. Teniasis

/Cysticercosis and Hydatidosis/ Echinococcosis, Cesce Budejovice, 2-7 Dec.- 1985. Proc. Cesce Budejovice.- 1986.- P. 46-55.

108. Kwa B. H. , Liew F. Y. //Immuniti in taeniasis-

cysticercosis. I. Vaccination against T. tae-niaformis in rats using parified antigens.-1977.- Journal of Experimental Medicine № 146.-P. 118-31.

109. Lightowlers M. W. Cestode infections in animals; im-

munological diagnosisand vaccinations //Rev. sci et tech off. int epizoot.- 1990.- V. 9.- N 2.- P. 463-467.

110. Lightowlers M. W., Rickard M. D. //Immunol and cell

biol.- 1993.- V. 71.- N 5.- P. 443-451.

111. Liu D., Lightowlers M. W. , Rickard M. D.

//Parasitology.- 1992.- V. 104.- N 2.-P.357-361

112. Lloyd S. //Homologous and heterologous immunization

against the metaeestodes of T. saginata and T. taeniaformis in cattle and mice.- 1979.-Zeitschrift fur Parasitencunde 60, P. 87-96.

113. Mi the11 G. //Parasitol. Today.- 1987.- Vol. 3, № 4.-

P. 106 - 111.

114. Mithell G. //Parasitology.- 1989.- Vol. 98.- P. 19-

28 .

115. Muller IPedrazzini Th. , Louis Y. A. //Immunol.

Lett.- 1988.- Vol. 19, № 3.- P. 251-259.

116. Moore G. E., Gerner JR. E. , Franclin H. A. Culture of

normal human leukocytes // J. Amer. Med. Assoc. 1967.- V. 199.- P. 519-524.

117. Morton H. J.f Tolnai S. Preparation of medium 199

//Tissue Cult. Assoc. Manual.- 1978.- V. 4.- P. 729-736.

118. Nascimento E., Tavares 5. A., Lopez J. D. //J. Clin.

Microbiol.- 1987.- V. 25.- S. 1181.

119. Osborn PHeath D. Res. Vet. Sci.- 1982.- V.33.- N

1.- P. 132-133.

120. Onawunmi O. A., Coles G. C. Attempt to immunise seep

with culture antigens of Taenia hydatigena //Res. in Veter. Sc.- 1980 .- v. 29.- N 1.- P. 102-103.

121. Pappas M. G. // Vet. Parasitol.- 1988.- V. 29.- N.

2-3.- P. 105-129.

122. Roller G., Milstein C. Continious cultures of fused

cell secreting antibody of predefined specific-

ity.- Nature, 1975, 256, 495.

123. Koller G. , Milstein C. Derivation of specific anti-

body-produsing tissue culture and tumor lines by cell fusion.- Eur. Immunol., 1976.- V. 6.-P. 511.

124. Rauch R. , Jentoft V. L. Stadies on the helmints

Fauna of Alaska. XXXIa Observation on the propagation of the larva Echinococcus multilocularis Deukart, 1963, in vitro //J. Parasitology.- 1957.- V. 43.- N 1.- P. 1-8.

125. Rickard M. D. and Bell K. J. Successful vaccina-

tionof lambs against infection with Taenia ovis using antigens produced during in vitro culture of the lava stages. //Res. Vet. Sei.- 1971.- V. 12.- P. 401-402.

126. Rickard M. D., Adolf A. J. Vaccination of calves

against Taenia saginata using a parasite-free vaccne //Veterinary Parasitology.- 1975.- 45. 255-62.

127. Rickard M. D. 4-th Intern. Congr. Parasitol. 19-26

Aug. 1978. Warszawa. Short Commun. Sect. C: 134 .

128. Rickard M. D. , Jenkins D. J. Studies on the sero-

logical diagnosis of infection with Taenia spp. and Echinococcus granulosus in dogs. //2 th Inter. Symp. Taeniasis /Cysticercosis and Hydati-dosis/ Echinococcosis., Ceske Budejovice.-1986.- P. 78-86.

129. Rickard M. D., Williams J.- Adv. Parasitol.- 1982.-

V. 21.- P. 229.

130. Rickard M. D. , Harrison G. B. L. , Heath D. D. ,

Lidthowters M. W. Taenia ovis recombinant vaccine - «quo vadit» //Parasitology.- 1992.- V. 110, Suppl.- V. 5-9.

131. Rose J. H. Preliminary results using metabolites and

in vitro grown larve of Ostertagia circumcincta to immune lambs against oral challenge. // Res. Vet. Sc.- 1976.- V.21.- P. 76-78.

132. Rose J. H. Further attempts to immune lambs using

metabolites and in vitro grown larve of Ostertagia circumcincta. //Res. Vet. Sc.- 1978.- V. 24.- P. 61-64.

133. Sakamoto T. , Yamashita J.r Ohbayashi. // Jap. J.

Vet. Res.-1967.- V. 15.- N 2.- P. 75-84.

134. Sakamoto T.f Kotani T. //Jap. J. Vet. Res.-1967.- V.

15.- N 4.- P. 165-170.

135. Sakamoto T. //Mem. Fac. Agric. Hagoshimo-Univ.-

1978.- V. 14.- P. 109-115.

136. Sugane K. , Sun Sh.-H. //J. Immunol. Meth.-1994.- V.

168.- N 1.- P. 55-60.

137. Smith M. A. Echinococcus granulosus and Echinococcus

multilocularis: in vitro Culture of the Strobi-lar stages from Protoscoleces //Angew. Parasit.- 1979.- V. 20.- P. 137-147.

138. Speiser C. J. Roy. Soc. Med.- 1982, 78: 844.

139. Varela-Diaz V. M., Coltorti E. A., Rickard M. D.,

Torrks J. M. Comparative antigenic characterization of Echinococcus granulosus and Taenia

hydatigena cyst fluids by Immunoelectrophoresis //Res. Vet. SC.- 1977.- V. 23.- N 2.- P. 213216.

140. Varma T. K. , Malviya H. C., Ahluwalia S. S. //Indian

J. Anim.- 1986.- Sci. 56:621.

141. Vogel M., Gottstein B., Muller N., Seebeck T.

//Molec. biochem. Parasitol.- 1988.- Vol. 31, № 2.- P. 117-126.

142. Williams J. F. , Sandeman M. Cysticercosis: preset

state of knowlelge and perspectives Flisser A. e.a. (eds) //Acad. Press. New York: 525.

143. Wickerhauser T., Zukovic M., Dracula N. //Exp. Para-

sitol.- 1976.- V.-30.- N 1.- P. 36-40.

144. Weller T. H. , Wheeldon S. K. The cultivation in vi-

tro of cell derived from adalt Schistosoma man-soni I. Methodology: Criteria for Evaluation of Cultures and development of media //Amer. J. Trop. Med. Hyg.- 1982.- V.31.- N 2.- P. 335348.

145. Yong W. K. , Heath D. D. , Parmeter S. N. Echinococcus

granulosus, Taenia hydatigena, Taenia ovis: evaluation of cyst fluids as antigen for sero-diagnosis of larva cestodes in sheep. //New. Zealand. Vet. Sournal.- 1978.- V. 26.- N 9.- P. 231-234.