Противоишемическое и эндотелиопротективное действие потенцированных антител к эндотелиальному фактору роста сосудов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.03.06, кандидат биологических наук Арустамова, Анна Александровна

• Арустамова, Анна Александровна
• кандидат биологических наук
• 2011

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Арустамова, Анна Александровна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Эндотелиальная дисфункция как предшественник ряда патологий сердечно-сосудистой системы.

1.2. Механизмы ишемического повреждения.

1.3. Неоангиогенез как основной механизм восстановления после ишемического повреждения.

1.4. Основные принципы фармакологической коррекции эндотелиальной дисфункции и ишемии.

1.5. Перспективные направления в лечении эндотелиальной дисфункции и ишемической болезни сердца.

1.6. Эндотелиопротективные и противоишемические свойства потенцированных антител к фактору роста эндотелия УЕОГ.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Моделирование Ь-ЫАМЕ-индуцированного дефицита оксида азота и оценка эндотелийзависимых и эндотелийнезависимых сосудистых реакций.

2.2. Исследование функционального состояния миокарда на наркотизированных крысах.

2.3. Биохимические маркеры эндотелиальной дисфункции.

2.4. Моделирование хронической ишемии задней конечности.

2.5. Оценка уровня микроциркуляции в мышцах голени крыс методом лазерной доплеровской флоуметрии.

2.6. Методы морфологического исследования.

2.7. Исследуемые препараты и дизайн эксперимента.

2.8. Статистическая обработка результатов исследования.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Разработка комплекса методических подходов для количественной оценки развития эндотелиальной дисфункции при Ь-1ЧАМЕ индуцированной модели дефицита N0 в эксперименте с использованием результатов функциональных проб, биохимических маркеров и результатов морфологических исследований.

3.2. Исследование эндотелиопротективной активности смеси растворов гомеопатических разведений моноклональных антител к УЕвР и смеси растворов гомеопатических разведений поликлональных кроличьих антител к е>Ю8 при Ь-МАМЕ-индуцированной модели дефицита N0 с использованием результатов функциональных проб, биохимических маркеров и морфологических исследований.

3.3. Исследование влияния смеси растворов гомеопатических разведений моноклональных антител к УЕОР и смеси гомеопатических разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной М>синтазе на уровень микроциркуляции и ангиогенез при коррекции ишемии конечности в эксперименте.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Противоишемическое и эндотелиопротективное действие потенцированных антител к эндотелиальному фактору роста сосудов»

В современном мире, особенно в развитых странах, артериальная гипертензия (АГ) является одним из основных факторов, повышающих инвалидизацию и смертность за счет таких осложнений, как инфаркт миокарда, сердечная недостаточность и инсульт [5, 22, 62, 74, 81]. В России распространенность АГ среди взрослого населения превышает 30 %. Наша страна занимает одно из первых мест в Европе по смертности от инсультов и ИБС [7, 8, 72]. По современным представлениям ЭД является одним из ведущих патогенетических звеньев сердечно-сосудистых заболеваний. Так, роль дисфункции эндотелия доказана в патогенезе ряда наиболее распространенных заболеваний и патологических состояний: атеросклерозе, АГ, легочной гипертензии, сердечной недостаточности, дилатационной кардиомиопатии, ожирении, гиперлипидемии, сахарном диабете, гипергомоцистеинемии (Laufs U., 1998; Белоусов Ю.Б., Намсараев Ж.Н., 2006).

Хронической артериальной недостаточностью нижних конечностей страдает 2—3% населения, среди которых на долю облитерирующего атеросклероза артерий приходится 80-90%. Из всех пациентов, страдающих этим заболеванием, каждый второй умирает в течение 10 лет от появления первых симптомов, если пациент не начнет лечиться у врача; ежегодно это заболевание становится причиной ампутации конечностей у 35 тыс. пациентов. Социальная значимость проблемы лечения этих больных определяется не только распространенностью данной патологии, но и значительным числом среди этих пациентов людей трудоспособного возраста и их инвалидизацией. Наиболее точным определением следует считать ХОЗАНК (хронические облитерирующие заболевания артерий нижних конечностей) [3,9].

Следует также отметить, что наличие ХОЗАНК указывает и на высокую вероятность атеросклеротического поражения других артерий, в частности, коронарных и сонных. Риск развития инфаркта миокарда и ишемического инсульта у таких пациентов в разы выше; среди больных с критической ишемией летальность в течение года составляет 20 — 22%, в течение 5 лет - до 70%, причем смертность от сердечно-сосудистой потологии в 5 раз выше, чем при других заболеваниях [16].

Эндотелий - монослой клеток, выстилающих внутреннюю поверхность сосудов и полостей сердца; играет важную роль в поддержании тонуса и структуры сосудов, локального гомеостаза и пролиферации клеток сосудистой стенки [132, 138, 142]. Эндотелий выполняет множество функций: секреторную, барьерную, участвует в фагоцитозе, регулирует транспорт многих биологически активных веществ (факторов роста, вазоактивных веществ, гормонов, анти- и прокоагулянтов), контролирует диффузию воды, электролитов, продуктов метаболизма [10, 29, 31, 47, 90].

Основным механизмом, лежащим в основе ЭД является снижение образования и биодоступности оксида азота II (NO), при одновременном повышении уровня супероксид аниона и продукции мощных вазоконстрикторов [44].

Дисфункция эндотелия проявляется дисбалансом между медиаторами, обеспечивающими в норме оптимальное течение всех эндотелийзависимых процессов [44, 65, 68, 130].

Патогенетическая роль эндотелиальной дисфункции доказана при ряде наиболее распространенных заболеваний ССС. Этому способствуют такие модифицируемые факторы риска, как курение, гипокинезия, солевая нагрузка, различные интоксикации, нарушения углеводного, липидного, белкового обменов, инфекция и др. [22, 41, 42, 90, 97, 145].

NO синтезируется из L-аргинина, являющегося единственным природным донором оксида азота, под влиянием эндотелиальной NO-синтазы (eNOS) путем присоединения молекулярного кислорода к конечному атому азота гуанидиновой группы L-аргинина [25, 32, 142].

К настоящему времени идентифицированы три формы NOS. Это -конститутивная нейрональная изоформа (nNOS или NOS I), обнаруженная в нервной ткани центральной и периферической нервной системы [85]. Другой конститутивный изофермент - eNOS или NOS III (также кальмодулин/Са2+-зависимый) обнаружен в сосудистых эндотелиальных клетках. И третий энзим (iNOS или NOS II)- индуцибельная форма, образующаяся в ответ на раздражение и экспрессия которой индуцируется, например, воспалением или бактериальной инфекцией - при этом ее концентрация возрастает на несколько порядков [90].

Ингибиторами NOS могут быть белковые структуры (аутоантитела) продуцируемые в ответ на токсическую гиперпродукцию NO при различных патологических состояниях, таких как ранние этапы воспаления, церебральная ишемия, хронические инфекции, наследственные болезни иммунной системы (болезнь Хантингтона), ревматоидный артрит, злокачественные опухоли, диабет, септический шок, что является одним из биологических механизмов снижения патологической генерации оксида азота в организме. Такое прямое ингибирование ферментов NOS обеспечивает снижение продукции NO в сосудах при продолжительной экспозиции его доноров. В этой связи объясняется механизм биологической защиты организма от избытка NO [119].

В свете представления об ЭД при использовании терапевтического ангиогенеза для лечения окклюзивных заболеваний сосудов необходимо учитывать функциональное состояние сосудистого эндотелия.

Ангиогенез представляет собой образование новых капилляров от посткапиллярных венул, которое осуществляется через активацию эндотелиальных клеток, экспрессию в них протеаз, деградацию внеклеточного матрикса, пролиферацию и миграцию этих клеток, образование ими первичных высокопроницаемых сосудистых структур, последующую стабилизацию и "взросление" этих структур за счет привлечения перицитов и гладкомышечных клеток (ГМК) и организации их в сложную трехмерную сосудистую сеть [56]. Основным стимулом к ангиогенезу при физиологических и патологических состояниях является недостаток кислорода (гипоксия или ишемия), который через активатор транскрипции факторов ангиогенеза — индуцируемый гипоксией фактор-1 (Н]Р-1), индуцирует экспрессию многих ангиогенных факторов и прежде всего основного регулятора ангиогенеза как в эмбриональном, так и в постнатальном периоде развития организма - фактор роста эндотелия сосудов (УЕОБ) и его рецепторов [16].

УЕОБ избирательно стимулирует пролиферацию и миграцию эндотелиальных клеток (ЭК), их предшественников и моноцитов, экспрессирующих рецепторы к нему, увеличивает сосудистую проницаемость, способствуя пропотеванию белков плазмы в околососудистое пространство, которое необходимо для миграции ЭК, индуцирует экспрессию эндотелиальной МЗ-синтазы и образование N0, что способствует вазодилатации и стимулирует экспрессию протеаз, разрушающих связи между ЭК и внеклеточным матриксом, что необходимо для направленной миграции клеток [113, 124, 149].

Как свидетельствуют литературные данные, несомненная перспективность в фармакологической коррекции ЭД отводится препарату «Импаза», представителю нового класса лекарственных средств универсальных регуляторов гомеостаза, в состав которого входят потенцированные антитела к е>Ю8. Способ лечения данным препаратом заключается в активизации по механизму обратной связи выработки контрантител для ликвидации дисбаланса при сниженном количестве еЖЖ Поэтому смесь растворов гомеопатических разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота - С12, СЗО, С200 (9 мл/кг/сут.) (ООО «НПФ Материа-Медика Холдинг», Россия) была выбрана в качестве сравнения.

Учитывая данные экспериментальных исследований феномена модифицирующего действия антител в СМД, можно предположить, что потенцированные антитела к фактору роста эндотелия УЕОР будут обладать противоишемическими и эндотелиопротективными свойствами вследствие активации ими по принципу «обратной связи» выработки УБвР. Данный фактор индуцирует экспрессию эндотелиальной ЫО-синтазы и образование N0, который в свою очередь является регулятором функции эндотелия и медиатором ангиогенеза.

В связи с вышеизложенным явилось актуальным изучение эндотелиотропного и противоишемического действия смеси растворов гомеопатических разведений моноклональных антител к УЕвР - С12, СЗО, С200 (ООО «НПФ Материа-Медика Холдинг», Россия).

Цель исследования: провести оценку эндотелио- и кардиотропного действия при Ь-ЫАМЕ-индуцированной эндотелиальной дисфункции потенцированных антител к УЕОР в сравнении с потенцированными антителами к е!Ч08 и их влияния на ангиогенез при коррекции ишемии конечности в эксперименте.

Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи исследования:

1. Разработать комплекс методических подходов для оценки эндотелиотропного действия фармакологических агентов с изменением I режима введения 1Ч-нитро-Ь-аргинин метилового эфира (Ь-ЫАМЕ) в дозе 12,5 мг/кг однократно внутрибрюшинно ежедневно в течение 28-ми суток.

2. Изучить эндотелиопротективную активность смеси растворов гомеопатических разведений моноклональных антител к УЕОР - С12, СЗО, С200 в дозе 9 мл/кг/сут. при моделировании Ь-ЫАМЕ-индуцированной ЭД.

3. В сравнительном аспекте изучить эндотелиопротективную активность смеси растворов гомеопатических разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота - С12, СЗО, С200 (9 мл/кг/сут.) при моделировании Ь-ЫАМЕ-индуцированной ЭД.

4. Исследовать влияние смеси растворов гомеопатичесикх разведений моноклональных антител к УЕОБ - С12, СЗО, С200 на уровень микроциркуляции и ангиогенез при коррекции ишемии конечности в эксперименте.

5. В сравнительном аспекте изучить влияние смеси растворов гомеопатических разведений поликлональных кроличьих антител к еТчЮ8 -С12, СЗО, С200 на уровень микроциркуляции и ангиогенез при коррекции ишемии конечности в эксперименте.

Научная новизна исследования. В работе впервые показано, что смесь растворов гомеопатических разведений моноклональных антител к УЕОБ - С12, СЗО, С200 в дозе 9 мл/кг/сут. и смесь растворов сверхмалых доз антител к эндотелиальной ЫО-синтазе (гомеопатические разведения С12, СЗО, С200) в дозе 9 мл/кг/сут. интрагастрально в качестве монотерапии на лабораторных крысах оказывают эндотелиопротективное действие на 28-дневной модели Ь-ЫАМЕ-индуцированной М>дефицитной ЭД, выражающееся в снижении КЭД.

Смесь растворов гомеопатических разведений моноклональных антител к УЕвЕ — С12, СЗО, С200 в дозе 9 мл/кг/сут. и смесь растворов сверхмалых доз антител к эндотелиальной ИО-синтазе (гомеопатические разведения С12, СЗО, С200) в дозе 9 мл/кг/сут. интрагастрально в качестве монотерапии оказывают кардиопротективное действие на 28-дневной модели Ь-МАМЕ-индуцированной МО-дефицитной ЭД, выражающееся в предотвращении развития скрытой сердечной недостаточности на фоне повышения реакции на реоксигенацию и снижения миокардиального резерва. Морфологические исследования обнаружили предотвращение под влиянием данных гомеопатических разведений увеличения поперечного диаметра миокардиоцитов у животных с Ь-МАМЕ - индуцированной патологией.

В работе впервые показано, что смесь растворов гомеопатических разведений моноклональных антител к УЕСБ - С12, СЗО, С200 в дозе 9 мл/кг/сут. и смесь растворов сверхмалых доз антител к эндотелиальной N0-синтазе (гомеопатические разведения С12, СЗО, С200) в дозе 9 мл/кг/сут. интрагастрально в качестве монотерапии позволяют компенсировать признаки хронической ишемии конечности. Результаты, полученные при проведении ЛДФ подтверждаются данными морфологического исследования: в мышцах ишемизированной голени некротические изменения не обнаруживались. У всех животных этих групп отмечалось усиленное новообразование капилляров.

Подано 3 заявки на изобретения по результатам проведенных экспериментальных исследований:

Способ коррекции Ь-ИАМЕ — индуцированной эндотелиальной дисфункции смесью растворов гомеопатических разведений моноклональных антител к УЕвЕ - С12, СЗО, С200;

Способ фармакологической коррекции ишемии конечности смесью растворов гомеопатических разведений;

- Способ фармакологической коррекции ишемии конечности.

Практическая значимость. В работе обоснована эффективность применения смеси растворов гомеопатических разведений моноклональных антител к УЕОБ - С12, СЗО, С200 (9 мл/кг/сут.) и смеси растворов гомеопатических разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота - С12, СЗО, С200 (9 мл/кг/сут.) в качестве монотерапии для коррекции Ь-КАМЕ-индуцированной N0-дефицитной ЭД в эксперименте. Показано, что их использование позволяет нормализовать изменение соотношения сосудистых реакций на ацетилхолин (эндотелийзависимая вазодилатация) и нитропруссид натрия (эндотелийнезависимая вазодилатация) с увеличением коэффициента эндотелиальной дисфункции (КЭД) в 3 раза, предотвратить снижение показателей биохимических маркеров (Total NO), а также добиться положительной динамики морфофункциональных показателей сердечнососудистой системы (диаметр миокардиоцитов, прирост давления при пробе на нагрузку сопротивлением и т.д.).

Полученные данные позволяют рекомендовать целенаправленные клинические испытания исследуемых гомеопатических разведений при состояниях, сопровождающихся эндотелиальной дисфункцией.

Внедрение результатов научных исследований. Материалы диссертационного исследования, касающиеся изучения эндотелиотропной и противоишемической активности стимулятора VEGF и стимулятора eNOS, используются в ООО НПФ «Материа Медика Холдинг» с целью формирования представления об фармакологической активности данных гомеопатических разведений.

Апробация работы. Материалы работы доложены на итоговых научных сессиях и конференциях молодых ученых КГМУ в 2010 г., XVII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство». Апробация диссертации проведена на межкафедральной научной конференции кафедр фармакологии и фармацевтических дисциплин, анатомии и гистологии человека, биохимии и фармакологии, фарм. химии и фармакогнозии, фарм. технологии, управления и экономики здравоохранения, акушерства и гинекологии, медико-биологических дисциплин БелГУ. По материалам диссертации опубликовано 8 печатных работ.

Положения, выносимые на защиту

1. Смесь растворов гомеопатических разведений моноклональных антител к VEGF — С12, СЗО, С200 в дозе 9 мл/кг/сут. и смесь растворов гомеопатических разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота - С12, СЗО, С200 в дозе 9 мл/кг/сут. при ежедневном интрагастральном введении оказывают в качестве монотерапии эндотелиопротективное действие на 28-дневной модели Ь-ЫАМЕ-индуцированной ТМО-дефицитной ЭД, что выражается в преобладании эндотелийзависимого расслабления сосудов и снижении коэффициента эндотелиальной дисфункции до уровня интактных животных, а также в полном предотвращении снижения содержания нитрит-ионов ЫОх. Результаты нагрузочных проб выявляют предотвращение развития скрытой сердечной недостаточности на фоне повышения реакции на реоксигенацию. Морфологические исследования обнаружили предотвращение под влиянием данных гомеопатических разведений увеличения поперечного диаметра миокардиоцитов у животных с Ь-ИАМЕ - индуцированной патологией.

2. Смесь растворов гомеопатических разведений моноклональных антител к УЕвР - С12, СЗО, С200 в дозе 9 мл/кг/сут. и смесь растворов гомеопатических разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота — С12, СЗО, С200 в дозе 9 мл/кг/сут. при ежедневном интрагастральном введении в качестве монотерапии увеличивают показатели микроцикуляции в ишемизированной конечности на 28-е сутки за счет уменьшения очага некроза и стимуляции неоангиогенеза. На фоне фармакологической коррекции ишемии мышцы голени уровень микроциркуляции достоверно возрастает (р<0,05) по сравнению со значениями в контрольной группе животных.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, результатов исследования, обсуждения полученных результатов, выводов и списка используемой литературы, включающего 152 источника, из них 79 отечественных и 73 зарубежных авторов. Диссертация изложена на 139 страницах машинописи, содержит таблиц -10, рисунков - 39, схем - 1.

Заключение диссертации по теме «Фармакология, клиническая фармакология», Арустамова, Анна Александровна

ВЫВОДЫ

1. Ежедневное введение М-нитро-Ь-аргинин метилового эфира (Ь-КАМЕ) в дозе 12,5 мг/кг в течение 28-ми суток однократно внутрибрюшинно вызывает у крыс-самцов развитие эндотелиальной дисфункции, выражающейся в увеличении коэффициента эндотелиальной дисфункции (КЭД) в 3 раза по сравнению со значениями в интактной группе животных; развитие артериальной гипертензии (204,8 / 164,2 мм.рт.ст.); вызывает снижение содержания нитрит-ионов, снижение показателей сократимости при проведении пробы «нагрузка сопротивлением» и гипертрофию кардиомиоцитов.

2. Смесь растворов гомеопатических разведений моноклональных антител к УЕОБ - С12, СЗО, С200 в дозе 9 мл/кг/сут. проявляет эндотелиопротективное действие на модели Ь-ИАМЕ-индуцированного дефицита N0 в течение 28-ми суток, что выражается в преобладании эндотелийзависимого расслабления сосудов и снижении КЭД до уровня интактных животных, а также в предотвращении снижения содержания нитрит-ионов. Результаты нагрузочных проб выявили улучшение показателей сократимости в пробе «нагрузка сопротивлением». Морфологические исследования обнаружили предотвращение под влиянием данных гомеопатических разведений увеличения поперечного диаметра миокардиоцитов у животных с Ь-1МАМЕ - индуцированной патологией. Монотерапия данными гомеопатическими раз-ведениями в изученных дозах не позволяла достичь целевых значений АД.

3. Смесь растворов гомеопатических разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота - С12, СЗО, С200 в дозе 9 мл/кг/сут. проявляет эндотелиопротективное действие на 28-дневной модели Ь-ЫАМЕ-индуцированного дефицита N0, достоверно не отличающееся от действия потенцированных антител к УЕОР по совокупности функциональных, биохимических и морфологических показателей. Значения КЭД, АД; поперечного диаметра миокардиоцитов, содержания нитрит-ионов ЫОх не показали достоверных отличий по сравнению с соответствующими значениями в группе животных, получавших смесь растворов гомеопатических разведений моноклональных антител к УЕвР - С12, С30, С200 в дозе 9 мл/кг/сут. В1 пробе на адренореактивность коррекция потенцированными антителами к УЕОР в меньшей степени предотвращала развитие гиперадренореактивности, чем коррекция потенцированными антителами к еЖ)8.

4. Смесь растворов гомеопатических разведений моноклональных антител к УЕОР - С12, СЗО, С200 в дозе 9 мл/кг/сут. увеличивает показатели микроцикуляции в ишемизированной конечности на 28-е сутки за счет уменьшения очага некроза и стимуляции неоангиогенеза. На фоне фармакологической коррекции ишемии мышцы голени уровень микроциркуляции достоверно возрастает до 486,1 п.е. (р<0,05) по сравнению со значениями в контрольной группе животных (361,3 п.е.).

5. При коррекции ишемии конечности смесью растворов гомеопатических разведений поликлональных кроличьих антител к еЖ)8 — С12, СЗО, С200 в дозе 9 мл/кг/сут. уровень микроциркуляции достоверно возрастает до 490,3 п.е. (р<0,05) по сравнению с данными контрольной группы (361,3 п.е.) и достоверно не отличается от уровня микроциркуляции в группе с коррекцией потенцированными антителами к УЕОР (486,1 п.е.). Результаты подтверждаются данными морфологического исследования: в мышцах ишемизированной голени некротические изменения1 не обнаруживались, отмечалось усиленное новообразование капилляров, что подтверждает положительное влияние исследуемых гомеопатических разведений на ангиогенез в ишемизированной мышце. Достоверных различий в эффективности противоишемического действия исследуемых гомеопатических разведений не обнаружено.

Заключение

Сосудистый гомеостаз регулируется посредством высвобождения клетками эндотелия ряда вазоактивных веществ, которые поддерживают базальный тонус сосудов, обладают ангиопротективными свойствами, подавляя пролиферацию гладкой мускулатуры сосудов, предотвращают ремоделирование сосудистой стенки, ингибируют агрегацию и адгезию тромбоцитов, лейкоцитарные взаимодействия и миграцию моноцитов, оказывают антиоксидантное действие.

Эндотелиальная дисфункция может быть определена как дисбаланс противоположно действующих начал - релаксирующих и констрикторных, прокоагулянтных и антикоагулянтных, факторов роста и их ингибиторов.

Основным механизмом, лежащим в основе ЭД является снижение образования и биодоступности оксида азота (N0), при одновременном повышении уровня супероксид аниона и продукции мощных вазоконстрикторов [44], т.е. проявляется дисбалансом между медиаторами, обеспечивающими в норме оптимальное течение всех эндотелийзависимых процессов [44, 64, 67, 131].

Методы исследования функции эндотелия периферических и коронарных артерий основываются на оценке его способности продуцировать N0 в ответ на фармакологические (ацетилхолин, метахолин, брадикинин, гистамин) или физические (изменение кровотока) стимулы, а также на прямом определении уровня N0 и оценке уровня косвенных показателей эндотелиальной функции (эндотелии, фактор фон Виллебранда, тканевой активатор плазминогена, тромбомодулин).

Изучение ЭД, состояния сосудистой стенки артерий у больных с сердечно-сосудистыми заболеваниями, включая АГ, ИБС и поиск возможностей лечения ЭД являются важными клиническими задачами. Усилия исследователей направлены на поиск препаратов, которые наряду с гипотензивным эффектом могли бы уменьшать выраженность ЭД и способствовать обратному ее развитию.

Вышеизложенное предопределило необходимость разработки и 1 систематизации методологических подходов к оценке эндотелиальной дисфункции, с одной стороны, и последующей оптимизации коррекции ЭД.

Так, в ходе проведенных нами исследований в эксперименте на белых г крысах-самцах линии Wistar был разработан комплекс методических подходов для оценки функционального состояния эндотелия, включающий физиологические, биохимические и морфологические методы.

Физиологические методы исследования включали моделирование эндотелиальной дисфункции ежедневным в/б введением L-NAME в течение 28 суток. Механизм ингибирования выработки NO в данном случае, заключается в конкурентном ингибировании фермента eNOS аналогом L-аргинина — L-NNA. L-NAME фактически является пролекарством: в организме этот эфир гидролизуется с участием специальных ферментов — эстераз, давая активный ингибитор — L-NNA.

На 28-е сутки животных наркотизировали, брали в эксперимент и на первом этапе оценивали реакции АД на эндотелийзависимую (ацетилхолин) и эндотелийнезависимую (нитропруссид) вазодилатацию [21, 140].

Степень эндотелиальной дисфункции рассчитывали как коэффициент эндотелиальной дисфункции (КЭД) - отношение площадей треугольников над кривой восстановления АД на нитропруссид и ацетилхолин.

Мы рассчитывали КЭД у каждого животного интактной группы и крыс после моделирования блокады NO-синтазы и получили разницу КЭД в 3 раза - соответственно 1,2 у интактных и 3,5 у животных, получавших L-NAME. Данные результаты выявили адекватность выбранной модели патологии для исследования фармакологической активности смеси растворов гомеопатических разведений моноклональных антител к VEGF и смеси растворов гомеопатических разведений поликлональных кроличьих антител к еЖ>8.

Данные факты подтвердились при определении биохимических маркеров ЭД. ЫО-продуцирующая функция эндотелия исследована на основании содержания нитрит-ионов МЭх, и обнаружено, что моделирование Ь-МАМЕ-индуцированного дефицита N0 приводило к резкому снижению содержания нитрит-ионов (ЫОх) в 3 раза.

Результаты гистологических исследований обнаружили, что моделирование Ь-ГчГАМЕ-индуцированного дефицита N0 на 28-е сутки приводит к яркой гипертрофии миокардиоцитов, утолщению мышечного слоя сосудистой стенки и спазму артериол, наиболее выраженному в почечных артериях, а также «вздыбливанию» эндотелиоцитов.

Подводя итог вышеизложенному, следует отметить, что предложенный методический комплекс функциональных, биохимических и морфологических изменений, связанных с развитием дефицита N0, вследствие блокады Ж)-синтазы, позволяет в достаточной степени объективно оценивать эндотелиотропное действие фармакологических агентов.

Учитывая данные экспериментальных исследований феномена модифицирующего действия антител в СМД, мы предположили, что потенцированные антитела к фактору роста эндотелия УЕОР будут обладать противоишемическими и эндотелиопротективными свойствами вследствие активации ими по принципу «обратной связи» выработки УЕОР. Данный фактор индуцирует экспрессию эндотелиальной ИО-синтазы и образование N0, который в свою очередь является регулятором функции эндотелия и медиатором ангиогенеза.

С помощью вышеизложенных методологических подходов были проведены сравнительные исследования эндотелиотропного действия смеси растворов гомеопатических разведений моноклональных антител к УЕОР —

С12, СЗО, С200 (9 мл/кг/сут.) и смеси растворов гомеопатических разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота -С12, СЗО, С200 (9 мл/кг/сут.) (ООО «НПФ Материа-Медика Холдинг», Россия).

Как свидетельствуют литературные данные, несомненная перспективность в фармакологической коррекции ЭД отводится препарату «Импаза», представителю нового класса лекарственных средств универсальных регуляторов гомеостаза, в состав которого входят потенцированные антитела к е!чЮ8 (ООО «НПФ Материа-Медика Холдинг», Россия). Способ лечения данным препаратом заключается в активизации по механизму обратной связи выработки контрантител для ликвидации дисбаланса при сниженном, количестве еЖ)8. Поэтому смесь растворов гомеопатических разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота - С12, СЗО, С200 (9 мл/кг/сут.) (ООО «НПФ Материа-Медика Холдинг», Россия) была выбрана в качестве сравнения.

Исследования, проводимые в лаборатории кардиофармакологии Курского государственного медицинского1 университета под руководством профессора М.В. Покровского в области экспериментального обоснования-принципов фармакологической коррекции эндотелиальной дисфункции, выявили, что препарат «Импаза» в дозе 1 таб/кг проявлял выраженное эндотелиопротективное действие на 7-дневной модели Ь-МАМЕ-индуцированного дефицита N0, что выражалось ~ в преобладании эндотелийзависимого расслабления1 сосудов и снижении коэффициента эндотелиальной дисфункции до уровня интактных животных, а также в увеличении экспрессии е№Э8 и полном предотвращении снижения содержания нитрит-ионов Ж)х. Одновременно результаты нагрузочных проб выявили предотвращение повышения адренореактивности и развития скрытой сердечной недостаточности на фоне повышения реакции на реоксигенацию. Морфологические исследования миокардиоцитов обнаружили предотвращение под влиянием препарата «Импаза» 1 таб/кг увеличения поперечного диаметра миокардиоцитов у животных с L-NAME-индуцированной патологией (Белоус, A.C. Исследование эндотелиопротективных свойств препарата «Импаза»: дисс. к-та мед. наук).

Результаты наших исследований выявили, что смесь растворов гомеопатических разведений моноклональных антител к VEGF - С12, СЗО, С200 9 мл/кг/сут. и смесь растворов сверхмалых доз антител к эндотелиальной NO-синтазе (гомеопатические разведения С12, СЗО, С200) 9 мл/кг/сут. проявляли выраженное эндотелиопротективное действие на 28-дневной модели L-NAME-индуцированного дефицита NO, что выражалось в преобладании эндотелийзависимого расслабления сосудов и снижении коэффициента эндотелиальной дисфункции до уровня интактных животных, а также в полном предотвращении снижения содержания нитрит-ионов NOx. Одновременно результаты нагрузочных проб выявили предотвращение развития скрытой сердечной недостаточности на фоне повышения реакции на реоксигенацию. Морфологические исследования обнаружили предотвращение под влиянием данных гомеопатических разведений увеличения поперечного диаметра миокардиоцитов у животных с L-NAME -индуцированной патологией. Исследуемые разведения в изученных дозах не достигали заданных значений артериального давления, и, следовательно, не могут рассматриваться для лечения в виде монотерапии на модели с L-NAME-индуцированной артериальной гипертензией.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Арустамова, Анна Александровна, 2011 год

1. Абидова, К. Р. Значение эндотелина 1 в регуляции функций сердечно-сосудистой системы Текст. / К. Р. Абидова // Врачебное дело. — 1999.-№7-8.-С. 22-27.

2. Актуальные вопросы фармакологии и фармации Текст. : сб. тр. межвуз. науч. конф., посвящ. памяти проф. В. В. Пичугина и 75-летию КГМУ / Курский гос. мед. ун-т [и др. ] ; [редкол.: В. А. Лазаренко и др.]. Курск : КГМУ, 2009. - 399 с.

3. Арабидзе, Г. Г. Гипотензивная терапия Текст. / Г. Г. Арабидзе // Кардиология. 1997. - Т. 37, № 3. - С. 88-95.

4. Артериальные гипертензии: актуал. вопросы патогенеза и терапии Текст. : сб. науч. тр. / С.-Петерб. гос. мед. ун-т ; под ред. В. А. Алмазова, Е. В. Шляхто. СПб. : СПбГМУ, 1995. - 344 с.

5. Бабак, О. Я. Артериальная гипертензия и ишемическая болезнь сердца эндотелиальная дисфункция: соврем, состояние вопроса Текст. / О. Я. Бабак, Ю. Н. Шапошникова, В. Д. Немцова // Украшський терапевтичний журнал. - 2004. - № 1. - С. 14-21.

6. Бажин, М. Н. Уральская кардиологическая концепция: новое в изучении гипертонической болезни Текст. : дайджест / М. Н. Бажин. — В. Пышма : [б. и.], 2000. 51 с.

7. Беленков, Ю. Н. Ингибиторы ангиотензин-превращающего фермента в лечении сердечно-сосудистых заболеваний: квинаприл и эндотелиальная дисфункция Текст. / Ю. Н. Беленков, В. Ю. Мареев, Ф. Т. Агеев. М. : Инсайт полиграфик, 2002. - 86 с.

8. Белоусов, Ю. Б. Эндотелиальная дисфункция как причина атеросклеротического поражения артерий при артериальной гипертензии: методы коррекции Текст. / Ю. Б. Белоусов, Ж. Н. Намсараев // Фарматека. -2004. № 6. - С. 62-72.

9. Блокатор AT 1 — ангиотензиновых рецепторов лозартан. Ч. I : Основы клинической фармакологии Текст. / Б. А. Сидоренко, Д. В. Преображенский, Т. М. Стеценко [и др.] // Кардиология. 2003. - Т. 43, № 1. - С. 90-98.

10. Бова, А. А. Роль вазоактивных эндотелиальных факторов в развитии артериальной гипертензии Текст. / А. А. Бова, Е. JT. Трисветова // Кардиология.-2001.-Т. 41, № 7.-С. 57-58.

11. Бойцов, С. А. Комбинированная терапия артериальной гипертензии с позиций профилактики сердечнососудистых осложнений и патогенеза Текст. / С. А. Бойцов // CONSILIUM MEDICUM. Системные гипертензии. -2004. Т. 6, № 2. - С. 23-26.

12. Бойцов, С. А. Новые Российские рекомендации по профилактике, диагностике и лечению артериальной гипертензии: что в них нового? Текст. / С. А. Бойцов // CONSILIUM MEDICUM. 2005. - Т. 7, №5. - С. 346-355.

13. Бокарев, И. Н. Артериальная гипертония болезнь или фактор риска? Текст. / И. Н. Бокарев // Клиническая медицина. - 2004. - Т. 82, № 9. -С. 69-71.

14. Бокерия, JI. А. Современное состояние и перспективы использования ангиогенеза в лечении ишемической болезни сердца Текст. / JI. А. Бокерия, М. В. Еремеева // Грудная и сердечнососудистая хирургия. -2000.-№2.-С. 57-60.

15. Брошусь, В. В. Оксид азота как регулятор защитных и гомеостатичесих реакций организма Текст. / В. В. Брошусь // Украинский ревматологический журнал. 2003. — № 4. - С. 3-11.

16. Бувальцев, В. И. Дисфункция эндотелия как новая концепция профилактики и лечения сердечно-сосудистых заболеваний Текст. / В. И. Бувальцев // Международный медицинский журнал. Клиника. Диагностика. Лечение. 2001.-№3.-С. 202-208.

17. Галаган, М. Е. Гипотензивное действие оксида азота, продуцируемого из экзо- и эндогенных источников Текст. / М. Е. Галаган, А. В. Широколова, А. Ф. Ванин // Вопросы медицинской химии. 1991. — Т. 37, № 1.-С. 67-70.

18. Гогин, Е. Е. Природа артериальной гипертензии. Роль и место ингибиторов АПФ среди прочих антигипертензивных средств Текст. / Е. Е. Гогин // Фарматека. 2002. - № 2/3. - С. 14-23.

19. Гомазков, О. А. Эндотелии в кардиологии: молекулярные, физиологические и патологические аспекты Текст. / О. А. Гомазков // Кардиология. 2001. - Т. 41, № 2. - С. 50-58.

20. Гомеостаз и инфекционный процесс Текст. : тез. докл. III общерос. конф. с междунар. участием, Сочи, 14-16 мая 2002 г. / Рос. акад.естествознания ; отв. за вып. Н. Ю. Стукалова. — М. : Акад. естествознания, 2002.- 141 с.

21. Граник, В. Г. Экзогенные доноры оксида азота и ингибиторы его образования: хим. аспект Текст. / В. Г. Граник, С. Ю. Рябова, Н. Б. Григорьев // Успехи химии. 1997. - Т. 66, № 8. - С. 792-807.

22. Гурбанов, К. К. Сравнительная оценка антиишемического действия верапамила на различных моделях ишемии миокарда Текст. / К. К. Гурбанов, Г. В. Ковалев, А. А. Паперно // Фармакология и токсикология. -1991.-Т. 54, №4.-С. 21-23.

23. Дисфункция эндотелия у больных гипертонической болезнью Текст. / А. И. Мартынов, Н. Г. Аветян, Е. В. Акатова [и др.] // Кардиология. -2005.-Т. 45, № 10.-С. 101-104.

24. Задионченко, В. С. Дисфункция эндотелия и артериальная гипертония: терапевтические возможности Текст. / В. С. Задионченко, Т. В. Адашева, А. П. Сандомирская // Русский медицинский журнал. 2002. -Т. 10, № 1.-С. 11-15.

25. Затейщикова, А. А. Эндотелиальная регуляция сосудистого тонуса: методы исслед. и клинич. значение Текст. / А. А. Затейщикова, Д. А. Затейщиков // Кардиология. 1998. - Т. 38, № 9. - С. 68-80.

26. Зотова, И. В. Синтез оксида азота и развитие атеросклероза Текст. / И. В. Зотова, Д. А. Затейщиков, Б. А. Сидоренко // Кардиология. 2002. -Т. 42, № 4. - С. 58-67.

27. Карпов, Ю. А. Клиническая гипертензиология: анализ завершённых исслед. 2001-2002 гг. Текст. / Ю. А. Карпов // Кардиология. 2002. - Т. 42, № 10.-С. 62-66.

28. Кательницкая, Л. И. Влияние эналаприла на функцию эндотелия у больных артериальной гипертонией в разных возрастных группах Текст. / Л. И. Кательницкая, Л. А. Хаишева, С. А. Плескачёв // Российский кардиологический журнал. 2005. - № 6. - С. 71-76.

29. Кициева, А. А. Функция эндотелия у больных острым инфарктом миокарда пожилого и старческого возраста Текст. : автореф. дис. . канд. мед. наук : 14.00.06 / А. А. Кициева ; Рост. гос. мед. ун-т. — Ростов н/Д, 2004. -24 с.

30. Комплексная оценка вазомоторной функции сосудистого эндотелия у больных с артериальной гипертонией Текст. / Б. И. Гельцер, С. В. Савченко, В. Н. Котельников [и др.] // Кардиология. 2004. - Т. 44, № 4. -С. 24-28.

31. Комплексная оценка эффективности лозартана (Козаара) у больных мягкой и умеренной гипертонией Текст. / Я. И. Коц, П. Ю. Галин, Л. Г. Вдовенко [и др.] // Клиническая фармакология и терапия. 2001. - Т. 10, №4.-С. 73-75.

32. Лечение больных артериальной гипертонией антагонистом рецепторов ангиотензина II лозартаном Текст. / В. Т. Ивашкин, О. М.

33. Драпкина, А. В. Клименков и др. // Кардиоваскулярная терапия и профилактика. 2002. - № 4. - С. 30-31.

34. Мазур, Н. А. Артериальная гипертензия и ее значение Текст. / Н. А. Мазур // Клиническая медицина. 1997. - Т. 75, № 8. - С. 73-75.

35. Маколкин, В. И. Возможности комбинированной терапии артериальной гипертензии Текст. / В. И. Маколкин // ТОП-Медицина. -1998.-№4.-С. 6-7.

36. Маколкин, В. И. Новые возможности лечения сердечно-сосудистых заболеваний ингибиторами ангиотензинпревращающего фермента Текст. /

37. B. И. Маколкин // Кардиоваскулярная терапия и профилактика. — 2005. — Т. 4, №5.-С. 66-70.

38. Марков, X. М. Молекулярные механизмы дисфункции сосудистого эндотелия Текст. / X. М. Марков // Кардиология. 2005. - Т. 45, №12.1. C. 62-72.

39. Марков, X. М. Оксидантный стресс и дисфункция эндотелия Текст. / X. М. Марков // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 2005. - № 4. - С. 5-9.

40. Микроциркуляция в кардиологии Текст. / под ред. В. И. Маколкина. М.: Визарт, 2004. - 136 с.

41. Минушкина, Л. О. Генетические аспекты регуляции эндотелиальной функции при артериальной гипертонии Текст. / Л. О. Минушкина, Д. А. Затейщиков, Б. А. Сидоренко // Кардиология. 2000. - Т. 40, № 3. - С. 68-76.

42. Моисеев, С. В. Антагонисты рецепторов ангиотензина II Текст. : новый подход к лечению гипертонии / С. В. Моисеев // Клиническая фармакология и терапия. 1995. - Т. 4, № 4. - С. 62-64.

43. Небиеридзе, Д. В. Клиническое значение дисфункции эндотелия при артериальной гипертонии Текст. / Д. В. Небиеридзе // CONSILIUM MEDICUM. Системные гипертензии. 2005. - Т. 7, № 1. - С. 31 -38.

44. Небиеридзе, Д. В. Микроциркуляторные расстройства при артериальной гипертонии и перспективы их коррекции Текст. / Д. В. Небиеридзе, Е. В. Шилова, С. Н. Толпыгина // Кардиоваскулярная терапия и профилактика. 2004. - Т. 3, № 4. - С. 28-32.

45. Ольбинская, JI. И. Блокаторы рецепторов ангиотензина II при лечении артериальной гипертонии Текст. / JI. И. Ольбинская // CONSILIUM MEDICUM. Системные гипертензии. 2005. - № 2. - С. 27-28.

46. Подзолков, В. И. Эффективность лозартана у больных артериальной гипертензией с высоким риском сердечно-сосудистых осложнений: по материалам исслед. LIFE и RENAL Текст. / В. И. Подзолков, В.А. Булатов // Фарматека. 2004. - № 6. - С. 79-85.

47. Полетаев, А. Б. Иммунологический гомункулус (иммункулус) в норме и при патологии Текст. / А. Б. Полетаев // Биохимия. — 2002. — Т. 67, вып. 5.-С. 721-731.

48. Полиморфизм генов NO-синтетазы и рецептора ангиотензина II 1-го типа и эндотелиальный гемостаз у больных ишемической болезнью сердца Текст. / Д. А. Затейщиков, JI. О. Минушкина, О. Ю. Кудряшова [и др.] // Кардиология. 2000. - Т. 40, № 11. - С. 28-32.

49. Полонский, В. М. Исследование LIFE: новые перспективы применения лозартана Текст. / В. М. Полонский // Фарматека. 2002. -№ 7-8. - С. 3-9.

50. Роль оксида азота и кислородных свободных радикалов в патогенезе артериальной гипертензии Текст. / Е. Б. Манухина, Н. П. Лямина, П. В. Долотовская [и др.] // Кардиология. 2002. - Т. 42, № 11. - С. 73-84.

51. Соболева, Г. Н. Состояние эндотелия при артериальной гипертонии и других факторах риска атеросклероза Текст. : обзор литературы-2 / Г. Н. Соболева, О. В. Иванова, Ю. А. Карпов // Терапевтический архив. 1997. -Т. 69, №9.-С. 80-83.

52. Современная терапия артериальной гипертензии Текст. : рекомендации Европ. о-ва по гипертензии и Европ. о-ва кардиологов, 2003 г. [Текст] / Д. В. Преображенский, Б. А. Сидоренко, А. В. Маренич [и др.] // Кардиология. 2003. - Т. 43, № 12. - С. 91-103.

53. Фармакологическая регуляция тонуса сосудов Текст. / Рос. акад. мед. наук ; под ред. П. А. Галенко-Ярошевского. М. : РАМН, 1999. - 608 с.

54. Функциональное состояние эндотелия у больных артериальной гипертонией и ишемической болезнью сердца Текст. / Д. А. Затейщиков, JI. О. Минушкина, О. Н. Кудряшова [и др.] // Кардиология. 2000. - Т. 40, №6.-С. 14-17.

55. Чазова, И. Е. Метаболический синдром и артериальная гипертония Текст. / И. Е. Чазова, В. Б. Мычкина // Артериальная гипертензия. 2002. -Т. 8,№ 1.-С. 7-10.

56. Шляхто, Е. В. Клеточные аспекты ремоделирования сосудов при артериальной гипертензии Текст. / Е. В. Шляхто, О. М. Моисеева // Артериальная гипертензия. 2002. - Т. 8, № 2. - С. 45-49.

57. Эпштейн, О. И. Фармакология сверхмалых доз антител к эндогенным регуляторам функций Текст. : дис. . д-ра мед. наук : 14.00.25 : 14.00.16/О. И. Эпштейн. Томск, 2003.-352 с.

58. Эффективность-и переносимость лозартана и гизаара при лечении гипертонической болезни у пациентов с высоким риском осложнений Текст. / А. Я. Ивлева, О. К. Максименко, Е. Б. Сивкова [и др.] // Кардиология. -2001.-Т. 41, № 1.-С. 34-38.

59. Эффекты центрального эндотелина-1 у нормотензивных и спонтанно гипертензивных крыс Текст. / Т. И. Пономарёва, О. Н. Хохлова, Е. А. Туховская [и др.] // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2003. - Т. 135, № 3. - С. 275-279.

60. A randomized trial of bevacizumab, an anti-vascular endothelial growth factor antibody, for metastatic renal cancer Text. / J. C. Yang, L. Hawort, R. M. Sherry [et al.] // N. Engl. J. Med. 2003. - Vol.- 349, № 5. - P. 427-434.

61. Acute and chronic angiotensin-1 receptor antagonism reverses endothelial dysfunction in atherosclerosis Text. / A. Prasad, T. Tupas-Habib, W. H. Schenke [et al.] // Circulation. 2000. - Vol. 101, № 20. - P. 2349-2354.

62. Angiotensin-(l-7)-Stimulated Nitric Oxide and Superoxide Release From Endothelial Cells Text. / H. Heitsch, S. Brovkovych, T. Malinski [et al.] // Hypertension. 2001. - Vol. 37, № 1. - P. 72-76.

63. Atherosclerosis and the two faces of endothelial nitric oxide synthase Text. / R. M. Wever, T. F. Lüscher, F. Cosentino [et al.] // Circulation. 1998. -Vol. 97, № l.-P. 108-112.

64. Bautista, L. E. Inflammation, endothelial dysfunction, and the risk of high blood pressure: epidemiologic and biological evidence Text. / L. E. Bautista // J. Hum. Hypertens. 2003. - Vol. 17, № 4. - P. 223-230.

65. Blantz, R. C. Role of nitric oxide in inflammatory conditions Text. / R. C. Blantz, K. Munger // Nephron. 2002. - Vol. 90, № 4. - P. 373-378.

66. Brachial artery flow-mediated vasodilation is correlated with coronary vasomotor and fibrinolytic responses induced by bradykinin Text. / Y. Tarutani, T. Matsumoto, H. Takashima [et al.] // Hypertens. Res. 2005. - Vol. 28, № 1. -P. 59-66.

67. Cai, H. Endothelial dysfunction in cardiovascular diseases: the role of oxidant stress Text. / H. Cai, D. G. Harrison // Circ. Res. 2000. - Vol. 87, № 10. - P. 840-844.

68. Carmeliet, P. Angiogenesis in cancer and other diseases Text. / P. Carmeliet, R. K. Jain // Nature. 2000. - Vol. 407, № 6801. - P. 249-257.

69. Chronic L-arginine supplementation improves endothelial cell vasoactive functions in hypercholesterolemic and atherosclerotic monkeys Text. / V. Dhawan, S. S. Handu, C. K. Nain [et al.] // Mol. Cell. Biochem. 2005. -Vol. 269, № 1-2.-P. 1-11.

70. Constans, J. Circulating markers of endothelial function in cardiovascular disease Text. / J. Constans, C. Conri // Clin. Chim. Acta. 2006. - Vol. 368, № 1-2.-P. 33-47.

71. Covers, R. Cellular regulation of endothelial nitric oxide synthase Text. / R. Covers, T. J. Rabelink // Am. J. Physiol. Renal Physiol. 2001. - Vol. 280, № 2. -P. F193-206.

72. Cullen, P. The pathogenesis of atherosclerosis Text. / P. Cullen, J. Rauterberg, S. Lorkowski // Handb. Exp. Pharmacol. 2005. - Vol. 170. - P. 3-70.

73. De la Sierra, A. Angiotensin receptor blockers in hypertension and cardiovascular diseases Text., / A. de la Sierra // Cardiovasc. Hematol. Agents. Med. Chem. 2006. - Vol. 4, № 1. - P. 67-73.

74. Different effects of antihypertensive drugs on endothelial dysfunction Text. / P. Puddu, G. M. Puddu, E. Cravero [et al'.] // Acta Cardiol. 2004. -Vol. 59, №5.-P. 555-564.

75. Discovery and development of bevacizumab, an anti-VEGF antibody for treating cancer Text. / N. Ferrara, K. J. Hillan, H. P. Gerber [et al.] // Nat. Rev. Drug Discov. 2004. - Vol. 3, № 5. - P. 391-400.

76. Does severity of ischemic coronary disease correlate with erectile -function? Text. / A. Greenstein, J: Chen, H. Miller [et al.] 7/ Int. J. Impôt. Res. -1997.-Vol. 9, № 3. P. 123-126.

77. Dzau, V. J. Theodore Cooper Lecture: Tissue angiotensin and pathobiology of vascular disease: a unifying hypothesis Text. / V. J. Dzau // Hypertension. -2001. Vol. 37, № 4. - P. 1047-1052.

78. Effect of D-nebivolol and L-nebivolol on left ventricular systolic and diastolic function: comparison with DL-nebivolol and atenolol Text. / L. Stoleru, W. Wijns, C. van Eyll [et al. ]// J. Cardiovasc. Pharmacol. 1993. - Vol. 22, № 2. -P. 183-190.

79. Effect of L-arginine on leukocyte adhesion in ischemia-reperfusion injury Text. / A. Gabriel, M. L. Porrino, L. L. Stephenson [et al.] // Plast. Reconstr. Surg. 2004. - Vol. 113, №6.-P. 1698-1702.

80. Effect of losartan in aging-related endothelial impairment Text. / S. Rajagopalan, R. Brook, R. H. Mehta [et al.] // Am. J. Cardiol. 2002. - Vol. 89, №5.-P. 562-566.

81. Effects of enalapril and amlodipine on small-artery structure and composition, and on endothelial dysfunction in spontaneously hypertensive rats Text. / A. M. Sharifi, J. S. Li, D. Endemann [et al.] // J. Hypertens. 1998. -Vol. 16, №4.-P. 457-466.

82. Endothelial cytochrome P450 contributes to the acetylcholine-induced cardiodepression in isolated rat hearts Text. / P. Pagliaro, C. Penna, R. Rastaldo [et al.] // Acta. Physiol. Scand. 2004. - Vol. 182, № 1. - P. 11-20.

83. Falk, E. Pathogenesis of atherosclerosis Text. / E. Falk // J. Am. Coll. Cardiol. 2006. - Vol. 47, suppl. 8. - P. C7-12.

84. Ferrara, N. Role of vascular endothelial growth factor in the regulation of angiogenesis Text. / N. Ferrara // Kidney Int. 1999. - Vol. 56, № 3. - P. 794814.

85. Fleming, I. Signal transduction of eNOS activation Text. / I. Fleming, R. Busse // Cardiovasc. Res. 1999. - Vol. 43, № 3. - P. 532-541.

86. Förstermann, U. Endothelial nitric oxide synthase in vascular disease: from marvel to menace Text. / U. Förstermann, T. Münzel // Circulation. 2006. -Vol. 113, № 13.-P. 1708-1714.

87. Gewaltig, M. T. Vasoprotection by nitric oxide: mechanisms and therapeutic potential Text. / M. T. Gewaltig, G. Kojda // Cardiovasc. Res. 2002. -Vol. 55, №2.-P. 250-260.

88. Guidelines for the management of patients with chronic stable angina: diagnosis and risk stratification Text. / S. V. Williams, S. D. Fihn, R. J. Gibbons [et al.] // Ann. Intern. Med. 2001. - Vol. 135, № 7. - P. 530-547.

89. Herman, A. G. Therapeutic potential of nitric oxide donors in the prevention and treatment of atherosclerosis Text. / A. G. Herman, S. Moncada // Eur. Heart. J. 2005. - Vol. 26, № 19. - P. 1945-1955.

90. HMG-CoA reductase inhibition protects the diabetic myocardium from ischemia reperfusion injury Text. / D. J. Lefer, R. Scalia, S. P. Jones [et al.] // FASEB J. 2001. - Vol. 15, № 8. - P. 1454-1456.

91. Hornig, B. Endothelial function and bradykinin in humans Text. /

92. B. Hornig, H. Drexler // Drugs. 1997. - Vol. 54, suppl. 5. - P. 42-47.

93. Jäger, U. Relaxant effect of trans-resveratrol on isolated porcine coronary arteries Text. / U. Jäger, H. Nguyen-Duong // Arzneimittelforschung. -1999. Vol. 49, № 3. - P. 207-211.

94. Jain, R. K. Tumor angiogenesis and accessibility: role of vascular endothelial growth factor Text. / R. K. Jain // Semin. Oncol. 2002. - Vol. 29, suppl. 16.-P. 3-9.

95. Jerne, N. K. The generative grammar of the immune system Text. : Nobel lecture, 8 December 1984 / N. K. Jerne // Biosci. Rep. 1985. - Vol. 5, №6.-P. 439-451.

96. John, S. Impaired endothelial function in arterial hypertension and hypercholesterolemia: potential mechanisms and differences Text. / S. John, R. E. Schmieder // J. Hypertens. 2000. - Vol. 18, № 4. - P. 363-374.

97. Kawashima, S. The two faces of endothelial nitric oxide synthase in the pathophysiology of atherosclerosis Text. / S. Kawashima // Endothelium. 2004. -Vol. 11,№2.-P. 99-107.

98. Kloner, R. A. Erectile dysfunction and atherosclerosis Text. / R. A. Kloner, M. Speakman // Curr. Atheroscler. Rep. 2002. - Vol. 4, № 5. - P. 397401.

99. L-arginine protects from ischemia-reperfusion-induced endothelial dysfunction in humans in vivo Text. / J. Pernow, F. Böhm, E. Beitran [et al.] // J. Appl. Physiol. -2003. Vol. 95, № 6. - P. 2218-2222.

100. Loscalzo, J. L-arginine and atherothrombosis Text. / J. Loscalzo // J. Nutr. 2004. - Vol. 134, suppl. 10. - P. 2798S-2800S.

101. Lüscher, T. E. Biology of the endothelium Text. / T. E. Lüscher, M. Barton // Clin. Cardiol. 1997. - Vol. 10, suppl. 2. - P. 3-10.

102. Lüscher, T. F. Vascular protection: current possibilities and future perspectives Text. / T. F. Lüscher // Int. J. Clin. Pract. Suppl. 2001. - Vol. 117. -P. 3-6.

103. Management of stable angina pectoris. Recommendations of the Task Force of the European Society of Cardiology Text. // Eur. Heart. J. 1997. -Vol. 18, №3.-P. 394-413.

104. Myocardial ischemia during sexual activity in patients with coronary artery disease Text. / Y. Drory, I. Shapira, E. Z. Fisman [et al.] // Am. J. Cardiol. 1995.-Vol. 75, № 12.-P. 835-837.

105. Napoli, C. Nitric oxide and atherosclerosis Text. / C. Napoli, L. J. Ignarro // Nitric. Oxide. 2001. - Vol. 5, № 2. - P. 88-97.

106. Pharmacological basis of different targets for the treatment of atherosclerosis Text. / H. K. Saini, Y. I. Xu, A. S. Ameja [et al.] // J. Cell. Mol. Med. 2005. - Vol. 9, № 4. - P. 818-839.

107. Pravastatin has cholesterol-lowering independent effects on the artery wall of atherosclerotic monkeys Text. / J. K. Williams, G. K. Sukhova, D. M. Herrmgton [et al.] // J. Am. Coll. Cardiol. 1998. - Vol. 31, № 3. - P. 684-691.

108. Reduced endothelial nitric oxide synthase expression and production in human atherosclerosis'Text. / B. S. Ocmar, M. R. Tschudi, N. Godoy [et al.] // Circulation. 1998. - Vol. 97, № 25. - P. 2494-2498.

109. Role of superoxide in angiotensin II-induced but not catecholamine-induced hypertension Text. / J. B. Laursen, S. Rajagopalan, Z. Galis [et al.] // Circulation. 1997. - Vol. 95, № 3. - P. 588-593.

110. Schmieder, R. E. Endothelial dysfunction: how can one intervene at the beginning of the cardiovascular continuum? Text. / R. E. Schmieder // J. Hypertens. Suppl. 2006. - Vol. 24, № 2. - P. S31-S35.

111. Shimokawa, H. Endothelial dysfunction in hypertension Text. / H. Shimokawa // J. Atheroscler. Thromb. 1998. - Vol. 4, № 3. - P. 118-227.

112. Shimokawa, H. Primary endothelial dysfunction: atherosclerosis Text. /H. Shimokawa//J. Mol. Cell. Cardiol. 1999. - Vol. 31, № 1. - P. 23-37.

113. Spieker, L. E. Current strategies and perspectives for correcting endothelial dysfunction in atherosclerosis Text. / L.E. Spieker, T. F. Lüscher, G. Noll // J. Cardiovasc. Pharmacol. 2001. - Vol. 38, suppl. 2. - P. S35-S41.

114. Stroke and coronary heart disease in mild hypertension Text. : risk factors and the value of treatment. Medical Research Council Working Party // Br. Med. J. (Clin. Res. Ed.). 1988. - Vol. 296, № 6636. - P. 1565-1570.

115. The HMG-CoA reductase inhibitor simvastatin activates the protein kinase Akt and promotes angiogenesis in normocholesterolemic animals Text. / Y. Kureishi, Z. Luo, I. Shiojima [et al.] // Nat. Med 2000. - Vol. 6, № 9. -P. 1004-1010.

116. Vascular permeability factor/vascular endothelial growth factor induces lymphangiogenesis as well as angiogenesis Text. / J. A. Nagy, E. Vasile, D. Feng [et al.]//J. Exp. Med. 2002. - Vol. 196, №11.-P. 1497-1506.

117. Vergely, C. Nitric oxide synthases and peripheral cardiovascular system Text. / C. Vergely, L. Rochette // Ann. Cardiol. Angeiol. (Paris). 2002. -Vol. 51, №2.-P. 109-116.

118. Vessel-specific stimulation of protein synthesis by nitric oxide synthase inhibition: role of extracellular signal-regulated kinases 1/2 Text. / F. M. Martens, B. Demeilliers, D. Girardot [et al.] // Hypertension. 2002. - Vol. 39, № 1. - P. 16-21.

119. Wyatt, A. W. Modulation of the L-arginine/nitric oxide signalling pathway in vascular endothelial cells Text. / A. W. Wyatt, J. R. Steinert, G. E. Mann // Biochem. Soc. Symp. 2004. - Vol. 71. - P. 143-156.