Противодиабетическая активность сухого экстракта Гимнемы лесной тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.25, кандидат биологических наук Сорокина, Елена Валерьевна

• Сорокина, Елена Валерьевна
• кандидат биологических наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Сорокина, Елена Валерьевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ЛЕКАРСТВЕННЫЕ РАСТЕНИЯ КАК ИСТОЧНИК ДЛЯ СОЗДАНИЯ ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ САХАРНОГО ДИАБЕТА.

1.1. Основные принципы терапии сахарного диабета растительными препаратами.

1.2. гимнемалесная;.

1.2.1. Ботаническое описание Гимнемы лесной.

1.2.2. Химическое строение биологически активных компонентов Гимнемы лесной.

1.3. Фармакологические свойства сухого экстракта Гимнемы лесной.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Противодиабетическая активность сухого экстракта Гимнемы лесной»

Актуальность проблемы. Сахарный диабет является» одной из актуальных проблем здравоохранения. [9,29] Такие поздние осложнения диабета, как ретинопатия, нефропатия, синдром диабетической стопы, ишемическая болезнь сердца, полинейропатия являются главной причиной инвалидизации и смертности больных диабетом. В настоящее время научно обоснованы эффективные методы ранней диагностики, лечения и профилактики осложнений диабета. Ключевым фактором в профилактике поздних осложнений является оптимальная компенсация метаболических нарушении и, прежде всего, нормализация гликемии. [2]

Научные исследования во многих странах мира-направлены на уточнение механизмов патогенеза заболевания, его осложнений и на разработку патогенетических лекарственных средств, применение которых способствовало бы профилактике и улучшению течения уже возникших осложнений. [9] Одним из новых направлений в разработке новых подходов к лечению сахарного диабета типа 2 является создание препаратов на основе инкретиномимети-ческого действия. [2,23] По результатам исследования синтетического аналога ОЬР-1 установлено, что применение его не эффективно из-за нестойкости соединения. [90] В последнее время разрабатываются соединения, обладающие ингибирующим влиянием на активность фермента, инактивирующего вЬР-1 - БРР-1У, однако, желаемый фармакологический эффект достигается парентеральным введением по специальной схеме. [3,62,90]

В данном аспекте привлекает внимание тот факт, что лекарственное растение Гимнема лесная оказывает инкретиномиметическое действие. [50, 89,91] Таким образом, данное растение проявляет свойства, направленные на восстановление естественных физиологических механизмов регуляции уровня глюкозы. Учитывая опыт применения Гимнемы лесной в индийской народной медицине для коррекции нарушений при сахарном диабете, а также литературные данные о гипогликемических свойствах этого растения [103,

110] представляется целесообразным всестороннее изучение фармакологических свойств экстракта Гимнемы лесной.

Цель исследования. Изучение фармакологических свойств экстракта Гимнемы лесной.

Задачи исследования.

1. Оценить гипогликемическую активность сухого экстракта Гимнемы при пероральном, введении в зависимости от дозы и степени очистки экстракта.

2. Исследовать антидиабетогенные свойства экстракта Гимнемы лесной на патологических моделях стрептозотоцин-индуцированного и иммунезависимого сахарного диабета.

3. Изучить механизм антидиабетического действия экстракта Гимнемы лесной (утилизация, глюкозы изолированной диафрагмой, ингибирование всасывания глюкозы и жирных кислот в кишечнике, морфо-функциональные показатели поджелудочной железы).

4. Провести исследования гемореологических свойств экстракта Гимнемы лесной;

5. Определить величину антиоксидантной. активности экстракта Гимнемы лесной.

6. Изучить влияние эктракта Гимнемы лесной на липиды плазмы крови.

7. Определить острую токсичность экстракта Гимнемы лесной.

Научная новизна. Проведено сравнительное изучение фармакологической активности экстракта Гимнемы лесной в зависимости от степени очистки; Установлено, что гипогликемические и антидиабетогенные свойства уменьшаются в ряду Гимнема-25 > Гимнема-50 > Гимнема-75. При этом показано воздействие экстракта Гимнемы лесной на всасывание углеводов и жирных кислот в кишечнике, утилизацию глюкозы периферическими тканями.

Изучено влияние экстракта Гимнемы лесной на морфологическую структуру островков Лангерганса. В результате исследования зарегистрировано увеличение объемной доли островков и площади ядер р-клеток поджелудочной железы.

Впервые установлено влияние экстракта Гимнемы лесной на геморео-логические свойства крови при экспериментальном сахарном диабете. При курсовом введении Гимнемы-25 отмечалось снижение показателей повышенной вязкости крови животных, выявленной при сахарном диабете у крыс. Кроме того, при применении экстракта Гимнемы лесной наблюдается снижение гиперагрегации тромбоцитов.

Впервые исследована антиоксидантная активность в условиях in vivo. Установлено снижение уровней конъюгированных диенов, малонового ди-альдегида и супероксиддисмутазы.

Научно-практическая значимость работы.

В результате проведенного исследования установлено, что по выраженности гипогликемического эффекта Гимнема-25 является наиболее активной фракцией. Данное вещество может быть использовано для углубленного исследования в качестве основы создания лечебных комплексов для профилактики метаболического синдрома и преддиабета. Кроме того, выявлены дополнительные свойства исследуемого экстракта. Определено, что Гимнема-25 оказывает влияние на гемореологический статус организма, уменьшая вязкость крови во всех скоростях сдвига. Кроме того, Гимнема-25 снижает агрегацию тромбоцитов, а также экстракт проявляет антиоксидант-ную активность на модели стептозотоцин-индуцированного сахарного диабета. Выявленные фармакологические свойства экстракта Гимнемы лесной определяют перспективность планирования проведения дальнейших исследований Гимнемы-25 в качестве средства для профилактики отдаленных осложнений сахарного диабета.

Реализация результатов исследования.

Данные о наиболее выраженной гипогликемической активности фракции Гимнемы-25 были использованы при создании антидиабетогенной композиции «Диабета».

Результаты работы включены в лекционный материал на кафедре фармакологии ВолГМУ для студентов лечебного, педиатрического, фармацевтического факультетов, на кафедре фармакогнозии и ботаники ВолГМУ для студентов фармацевтического факультета, на кафедре фармакологии и биофармации ФУВ ВолГМУ для слушателей факультета усовершенствования врачей и провизоров, а также на кафедрах фармакологии Саратовского и Кубанского государственных медицинских университетов.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. В зависимости от степени очистки экстракта Гимнемы лесной максимальную гипогликемическую и антидиабетическую активности оказала фракция Гимнема-25.

2. Гимнема-25 оказывает ингибирующее действие на процессы поглощения глюкозы и жирных кислот в кишечнике. При пероральном применении Гимнемы-25 происходит увеличение скорости утилизации углеводов мышечной тканью крыс.

3. При курсовом введении Гимнемы-25 на фоне интоксикации стреп-тозотоцином отмечается увеличение площади островков и ядер (З-клеток поджелудочной железы.

4. Гимнема-25 воздействует на реологические свойства крови при экспериментальном сахарном диабете, о чем свидетельствуют снижение вязкости крови во всех диапазонах сдвига. Экстракт снижает агрегацию тромбоцитов.

Апробация работы. Основные материалы диссертации докладывались и обсуждались на 63-й, 64-й и 65-й итоговых научных конференциях студентов и молодых учёных ВолГМУ, Волгоград, 2004-2006 гг.; IX, X, XI Региональных конференциях молодых исследователей Волгоградской области, Волгоград, 2004-2006 гг.; I Международном конгрессе «Современные проблемы эстетической медицины, дерматокосметологии и иммунореабитоло-гии», Паттайя 2005 г.; XI Международной конгрессе по реабилитации в медицине и иммунореабилитации, 2006 г.; XIII и XIV Национальный конгресс «Человек и лекарство», Москва, 2007 г.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 12 работ.

Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 163 страницах текста компьютерного набора, иллюстрирована 21 рисунком, содержит 14 таблиц. Состоит из "Введения", "Обзора литературы" (глава I), и 4-х глав собственных исследований (главы II-VII), обсуждения результатов (глава VIII), выводов и списка литературы, включающего 35 отечественных и 79 зарубежных источников.

Заключение диссертации по теме «Фармакология, клиническая фармакология», Сорокина, Елена Валерьевна

выводы

1. Гипогликемическая активность сухих экстрактов Гимнемы лесной в зависимости от степени очистки экстракта уменьшается в ряду: Гимнема-25>Гимнема-5 0>Гимнема-75.

2. Гимнема-25 проявляет антидиабетогенные свойства в экспериментах на животных со стрептозотоцин-индуцированным и иммунозависимым сахарным диабетом, что подтверждается снижением гипергликемии и полидипсии, а также уменьшением количества гликозилированного гемоглобина в крови крыс.

3. Гимнема-25 оказывает ингибирующее действие на всасывание глюкозы и жирных кислот в кишечнике крыс как при пероральном введении животным, так и при непосредственном добавлении в перфузат при постоянной перфузии тонкого кишечника крыс.

4. При курсовом введении Гимнема-25 способствует увеличению скорости утилизации глюкозы мышечной тканью (диафрагмой) интактных животных и крыс с сахарным диабетом.

5. Гимнема-25 при пероральном применении снижает цитотоксическое действие стрептозотоцина на р-клетки поджелудочной железы, способствуя увеличению площади островков и ядер (3-клеток поджелудочной железы.

6. При пероральном применении Гимнема-25 способствует нормализации реологических свойств крови при экспериментальном стрептозотоцин-индуцированном сахарном диабете, что подтверждается снижением вязкости крови во всем диапазоне скоростей сдвига. Гимнема-25 снижает гиперагрегацию тромбоцитов.

7. Гимнема-25 оказывает воздействие на липидный спектр крови крыс с иммунозависимым сахарным диабетом. Установлено снижение уровней ХС, ЛПНП и ЛПОНП. При этом показатель индекса атерогенности был ниже на 25,9% по сравнению с животными с сахарным диабетом.

8. При применении Гимнемы-25 снижается образование конечных ТБК-активных продуктов липопероксидации. Гимнема-25 в больших концентрациях проявляет антиоксидантную активность в условиях in vivo, что выражается в снижении уровней конъюгированных диенов, малонового диальдегида и супероксиддисмутазы.

9. По уровню острой токсичности при пероральном введении Гимнема-25 относится к классу малотоксичных веществ (LD5q > 5г/кг).

7.3. Заключение.

При изучении показателей дислипидемии на модели иммунозависимо-го экспериментального сахарного диабета после применения Гимнемы-25 отмечено снижение уровней общего холестерина, липидов низкой и очень низкой плотности. Кроме того, наблюдалось повышение количества липо-протеидов высокой плотности, содержание которых в плазме крови снижается при развитии сахарного диабета.

Также, следует отметить, что индекс атерогенности был достоверно ниже на 25,9% по отношению к животным с диабетом, что может свидетельствовать о нормализации липидного спектра крови животных.

ГЛАВА 8. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

Сахарный диабет представляет собой гетерогенное заболевание, для успешной терапии которого обязательным условием является воздействие на все звенья его патогенеза. [2,33] Основным звеном патогенеза является глю-козотоксичность, наблюдаемая при сахарном диабете. Под глюкозотоксично-стью понимают биомолекулярные процессы, обуславливающие повреждающее действие длительно существующего избыточного содержания глюкозы в крови на секрецию инсулина и чувствительность тканей к инсулину, что замыкает порочный круг в патогенезе сахарного диабета типа 2. Из этого следует, что гипергликемия является не только основным симптомом сахарного диабета, но и ведущим фактором его прогрессирования вследствие существования феномена глюкозотоксичности. Следовательно, при подборе терапии необходимо учитывать все известные на сегодняшний день звенья патогенеза данного заболевания с целью достижения компенсации сахарного диабета типа 2 и, таким образом, профилактики его поздних осложнений. [29]

В последние годы, с целью выявления альтернативных стратегий снижения риска развития диабета, было изучено несколько растительных экстрактов на предмет их противодиабетической активности. Несмотря на данные о том, что противодиабетическими свойствами в той или иной степени обладают многие растения, ряд исследований, а также традиционная практика подтверждают, что одним из самых эффективных и безопасных из них является Гимнема лесная. [33,53]

Адекватность терапии сахарного диабета остается самым актуальным вопросом, так как установлено, что гипергликемия является пусковым моментом многих патогенетических механизмов, способствующих развитию сосудистых и других осложнений. [3] Поэтому одной из главных задач терапии сахарного диабета является нормализация гликемии.

Согласно результатам проведенных исследований, экстракт Гимнемы лесной оказывает сахароснижающий эффект в организме интактных животных. При этом различные фракции данного экстракта проявляют неодинаковую выраженность гипогликемического действия. Величина сахароснижаю-щего эффекта снижается в ряду Гимнема-25>Гимнема-50>Гимнема-75. Так, через два часа после перорального применения Гимнемы-25, Гимнемы-50 и Гимнемы-75 уровень глюкозы в крови животных снизился на 24,4%; 8,7%) и 6,2% по отношению к аналогичным показателям в группе интактных животных (р<0,05). Наиболее перспективным, среди исследованных экстрактов, оказалась Гимнема-25. В результате исследования была установлена ее средняя эффективная доза, при применении которой наблюдается снижение глюкозы в крови на одну треть от исходных показателей.

Анализ фармакодинамических исследований, изложенных в научной литературе, позволяет предположить, что гипогликемическая активность Гимнемы лесной обусловлена стимуляцией секреции и высвобождения инсулина из Р-клеток островков Лангерганса. [42] Некоторые исследователи механизм сахароснижающей активности связывают со стимуляцией ферментов, ответственных за утилизацию глюкозы и ингибированием поглощения глюкозы в кишечнике. [114]

В ходе глюкозотолерантных тестов выявлено, что Гимнема-25 способствует увеличению скорости утилизации глюкозы у интактных животных, что подтверждается снижением показателей уровня сахара в крови на 25,8%) при пероральной сахарной нагрузке.

Предположительно, гипогликемическое действие Гимнемы-25 опосредовано через стимуляцию секреции инсулина (3-клетками островков Лангерганса, что соответствует литературным данным, полученным для фракции Гимнемы лесной в84, а также для водно-спиртового экстракта данного растения. [89,114,103,110] Не последняя роль в этом отводится инкретиномиме-тическому действию экстракта Гимнемы лесной, при введении которого происходит повышение секреции СЬР-1. Известно, что (3-клетки имеют 2 типа потенциал-зависимых кальциевых каналов и так называемый Ь-тип кальциевых каналов наиболее значим в контроле секреции инсулина. При этом открытие кальциевых каналов происходит без предварительной деполяризации мембраны (3-клетки. S. Britsch (1996) установил, что GLP-1 модулирует кальциевый поток в (3-клетку. [38] S. Suga и др. (1997) выявили, что GLP-1 посредством цАМФ-зависимого механизма стимулирует активацию L-типа, способствуя как увеличению внутриклеточного, так и к собственному образованию цАМФ, что имеет критическое значение в процессах контроля секреции инсулина. [109]

Отмечено, что секреция GLP-1 начинается через 5-10 мин после приема пищи (Herrmann С., 1995) [65], а по данным С. Orskov (1986) — через 15-30 мин от начала приема пищи, т. е. тогда, когда пища еще не достигла дисталь-ных отделов тонкого кишечника, где локализуются L-клетки, которые секре-тируют GLP-1. [90] Показано также, что удаление подвздошной части тонкого или толстого кишечника не приводит к нарушению ответа секреции GLP-1 в ответ на прием глюкозы перорально. Считается, что около 60% секрети-руемого поджелудочной железой инсулина в ответ на прием глюкозы перорально опосредовано влиянием GLP-1, что объясняет тенденцию снижения уровня сахара в крови после перорального нагрузочного теста. [3]

В ходе нагрузочного теста при внутривенном ведении глюкозы наблюдалось снижение количества сахара в крови на 36,4%, по сравнению с контрольной группой животных. Полученные данные указывают на возможное инсулиномиметическое действие в организме интактных крыс.

В результате проведенных исследований установлено, что Гимнема-25 проявляет выраженное гипогликемическое действие в организме крыс с сахарным диабетом. Полученные результаты вполне согласуются с имеющимися литературными данными по фракции Гимнемы лесной GS4. В исследованиях Y. Okabayashi (1990) установлено, что при пероральном применении фракции GS4 крысам с сахарным диабетом, наблюдалось существенное снижение уровня глюкозы в крови.

В наших исследованиях при курсовом введении Гимнемы-25 животным с сахарным диабетом отмечается антидиабетический эффект вводимой фракции, что выражается в уменьшении выраженности гипергликемии натощак и после нагрузочных тестов с глюкозой, снижении показателей полидипсии и потери массы тела.

Кроме того, выявлено, что после курсового введения стрептозотоцина повышается уровень гликозилированного гемоглобина в крови крыс. [42,55,70] Так, на 22 день исследования этот показатель у животных с сахарным диабетом увеличился в 2,5 раза по отношению к интактным (р<0,05). В группе крыс, получавших Гимнему-25, отмечалось снижение количества гликозилированного гемоглобина в крови, при этом его уровень был практически в 2 раза ниже, чем в группе животных с диабетом.

Известно, что одним из признаков длительно протекающей гипергликемии является высокий уровень гликозилированного гемоглобина в крови. [3,6] Гликозилированный гемоглобин, обладая пониженным сродством к кислороду, способствует снижению парциального давления кислорода в крови, а тем самым и ишемии органов и тканей. Полагают, что этот механизм, в свою очередь, играет определенную роль в патогенезе микроангиопатии. [6, 15] Эритроциты, содержащие гликозилированный гемоглобин, обладают измененным поверхностным Б-потенциалом. Последнее приводит к стазу и агглютинации эритроцитов. Финалом данных процессов является микротромбоз, что создает местную циркуляторную и гемическую гипоксию, активацию перекисного окисления липидов с повреждением цитоплазматических мембран эндотелиальных клеток. [6,13] Следовательно, при применении Гимнемы-25, вероятно будет снижаться риск возникновения патогенетических механизмов, изложенных выше.

Значимые изменения были выявлены при измерении уровней инсулина в крови животных. Содержание инсулина в крови крыс с сахарным диабетом к окончанию исследования было достоверно ниже на 32,2%, чем у интактных животных. В группе крыс с сахарным диабетом, получавших Гимнему-25, уровень инсулина в крови был выше на 16,7%, чем в группе контроль-диабет, что согласуется с литературными данными об инсулиномиметических свойствах фракции в84 данного растения [50] и указывает на способность Гим-немы-25 стимулировать секрецию инсулина Р-клетками поджелудочной железы.

Ориентируясь на имеющиеся литературные источники [102] и полученные результаты настоящих исследований установлено, что экстракт Гим-немы лесной осуществляет протекторное действие в отношении Р-клеток поджелудочной железы при цитотоксическом воздействии стрептозотоцина, что подтверждается увеличением количество ядер эндокриноцитов и площади, занимаемой Р-клетками. Так как при гистологическом исследовании поджелудочной железы крыс, получавших Гимнему-25, отсутствовали признаки деструкции и воспаления, однако, отмечалось наличие единичных склерозированных островков. Объемная доля островков и их площадь практически достигали показателей интактных животных.

При морфологическом исследовании дуоденального отдела поджелудочной железы крыс с иммунозависимым сахарным диабетом, получавшим в течение месяца Гимнему-25, установлено, что объемная доля островков была в 1,5 раза выше аналогичного показателя в группе крыс с иммунозависимым сахарным диабетом. При этом количество Р-клеток на 36,7% было выше аналогичного показателя в группе животных с сахарным диабетом, и не отличалось от значений полученных для интактных животных (р<0,05). При изучении желудочного отдела поджелудочной железы после применения Гимне-мы-25 объемная доля островков увеличилась на 24,4% по сравнению с животными с сахарным диабетом. Площадь ядер Р-клеток, а также их количество не отличалось от показателей у интактных крыс, однако были выявлены отличия с группой животных с сахарным диабетом. Так, процент Р-клеток в 1,5 раза выше, чем в группе крыс с диабетом (р<0,05).

Также был исследован селезеночный отдел поджелудочной железы крыс. Объемная доля островков в этом отделе у животных, которым вводили Гимнему-25, на 20,1% выше аналогичного значения у крыс с диабетом. Площадь ядер Р-клеток не отличалась от значения полученного для интактных животных, однако эта величина превышала аналогичных показатель у крыс с иммунозависимой формой диабета на 12,5%. Количество |3-клеток было в 1,6 раз выше (р<0,05), чем у животных с диабетом.

Полученные данные указывают на способность экстракта Гимнемы лесной активировать регенерацию |3-клеток поджелудочной железы, что согласуется с данными о возможной регенерации эндокриноцитов поджелудочной железы у крыс со стрептозотоциновым сахарным диабетом, получавшим неочищенный экстракт листьев Гимнемы лесной. [102]

Гимнемовые кислоты при пероральном применении снижает уровень глюкозы в крови у животных с диабетом. [68,70,82,89] Этот терапевтический эффект был объяснен способностью экстракта Гимнемы лесной ингибиро-вать поглощение глюкозы в кишечнике. В исследованиях Yoshioka (1986), проводили измерение глюкозо-индуцированного трансмурального потенциала, и предположили, что ингибиторное влияние гимнемовых кислот на поглощение глюкозы может быть связан с супрессией Na+ зависимого транспорта глюкозы, хотя точный механизм все еще неясен. Stremmel (1988) установил, что поглощение олеиновой кислоты изолированным клетками слизистой тонкого кишечника крыс частично зависит от Na+-K+ АТФазы. Эти особенности поглощения жирных кислот подобны таковым для глюкозы. Это вызвало интерес о возможности гимнемовых кислот ингибировать поглощение жирных кислот, как это происходит с глюкозой. В этом случае Гимнема лесная может быть полезна не только для пациентов с сахарным диабетом, но также и для людей с ожирением. В исследованиях Thomson и др. (1997) установлено, что ингибирование поглощения жирных кислот может предотвращать ожирение. [53]

Одним из механизмов регуляции гликемии является снижение всасывания углеводов в кишечнике. Установлено, что при пероральном применении Гимнема-25 способствует ингибированию поглощения глюкозы и олеиновой кислоты в тонком кишечнике крыс, что находит подтверждение в литературных источниках. [77,114] Так, при проведении перфузии в группе животных получавших Гимиему-25 количество поглощенной жирной кислоты к 15 минуте понизилось в 2,4 раза (р<0,05). При перфузии кишечника животных, получавших Гимнему-25, к 30 минуте количество утилизированного углевода достоверно уменьшилось в 4,9 раза, по сравнению с группой интакт-ных животных.

Предположительно, ингибирующий эффект Гимнемы заключается в том, что под влиянием гимнемовых кислот происходит блокирование №+-К+ АТФ-азы. Известно, что Иа+-К+ АТФ -аза в базолатеральной мембране энте-роцитов способствует перемещению из клетки, для поддержания более низкой концентрации внутриклеточного Ыа+, чем в кишечном люмене, который является движущей силой для поступления глюкозы в клетку. [76]

Всасывание жирных кислот в кишечнике связано со многими факторами, в том числе наличием желчных кислот, водного слоя и рН среды. Известно, что проникновение глюкозы и олеиновой кислоты в энтероциты осуществляется путем пассивной диффузии (образование гидрофильных мицелл), а также посредством промежуточных транспортных систем, различных для каждого из веществ. [76] Гимнемовая кислота ухудшает всасывание олеиновой кислоты. Полученные результаты могут объясняться наличием различных внутриклеточных механизмов утилизации глюкозы и жирных кислот. Считается, что эффект в отношении глюкозы и олеиновой кислоты связан с различными химическими структурами гимнемовых кислот. [76]

Установлено влияние Гимнемы-25 (при непосредственном добавлении в перфузат) на всасывание глюкозы и олеиновой кислоты в зависимости от дозы - 0,25 мг/мл и 0,5 мг/мл. Выявлен дозозависимый эффект. По ингиби-рующей активности Гимнема-25 в дозе 0,5 мг/мл превалировала над таковой в дозе 0,25 мг/мл. При этом зарегистрировано, что ингибирующий эффект является обратимым. Восстановление исходной способности клеток кишечника поглощать углеводы и жирные кислоты происходит через 6 часов после отмены Гимнемы-25, в данной временной точке регистрируются значения тождественные показателям у интактных животных, что свидетельствует об обратимости действия изучаемого экстракта Гимнемы лесной.

Из полученных экспериментальных данных следует, что при перораль-ном применении Гимнемы-25 в дозе 280 мг/кг происходит ингибирование всасывания олеиновой кислоты и глюкозы. Однако, процесс ингибирования поглощения жирной кислоты протекает существенно медленнее, чем ингибирование всасывания глюкозы.

Установлено, что снижение гликемии, как следствие ее утилизации периферическими тканями (печень и мышечная ткань), обусловлено инсулином, который активирует гликогенсинтазу, ответственную за образование гликогена в указанных тканях-мишенях. [3] Одним из путей утилизации глюкозы является захват ее периферическими тканями, в частности, мышечной. Экспериментально определено, что при применении в течение 30 дней Гим-немы-25 в дозе 280 мг/кг увеличивается количество поглощенной глюкозы изолированной диафрагмамой интактных крыс. Гимнема-25 при пероральном применении в 2,8 раза повышает способность изолированной диафрагмы к поглощению глюкозы достоверно выше (р<0,05 по отношению к интактным животным). При добавлении к пробам инсулина показатель поглощения глюкозы в 1,5 раза превышает аналогичный показатель интактных крыс (р<0,05).

Не менее значимые результаты получены при проведении подобных экспериментов у крыс с диабетической патологией. Так, Гимнема-25 в дозе 280 мг/кг (при пероральном применении в течение 7 дней) увеличивает поглощение глюкозы диафрагмой крыс с экспериментальным стрептозотоцин-индуцированным диабетом. Так, способность мышечной ткани к поглощению глюкозы в группе крыс получавших Гимнему-25 в 1,9 раза превышает аналогичный показатель у животных группы контроля и соответствует снижению ее количества в пробе на 16,2% (р<0,05). В присутствии инсулина остаточная глюкоза определяется в количестве 6,8 ммоль/л, что соответствует достоверному снижению ее уровня на 32,1% по отношению к контрольной пробе с буфером и инсулином. Полученные данные свидетельствуют о непосредственном влиянии изучаемого экстракта на процессы утилизации глюкозы, которые, как известно, осуществляются с помощью белков-переносчиков - ГЛЮТов. [3] В данном случае, возможный механизм элиминации глюкозы из кровяного русла осуществляется с помощью одного из транспортеров глюкозы 4 (GLUT 4), который представляет собой преобладающую форму в мышечной и жировой тканях. Он имеет большую аффинитивность к глюкозе. Поэтому она очень быстро при постпрандиальной гипергликемии может оказаться в клетках. Благодаря этому концентрация глюкозы в крови остаются относительно постоянны. [3]

Учитывая вышеперечисленное, повышение утилизации глюкозы периферическими тканями при курсовом введении Гимнемы-25 можно объяснить непосредственным влиянием последнего на указанный рецепторный аппарат.

Широко известно, что сахарный диабет часто сопряжен с различного вида нарушениями реологических свойств крови. [3,13] В патогенезе диабетических ангиопатий большое значение отводят изменениям системы гемостаза и реологическим патологиям (увеличение агрегационной способности тромбоцитов, угнетение фибринолиза, дисфункции сосудистого эндотелия), что нарушает внутрисосудистую гемодинамику и приводит к формированию тромбов. Важными составляющими микроангиопатии при сахарном диабете являются нарушение вязкости крови и дисфункция тромбоцитов. [65] Поэтому обоснованно использование средств, улучшающих реологические свойства крови. Современной тенденцией является включение в комплексную терапию сахарного диабета не только гипогликемизирующих средств, но и препаратов, оказывающих влияние на уменьшение окислительного стресса и инсулинорезистентности, улучшение реологических свойств крови. [65]

Установлено, что при применении Гимнемы-25 снижается вязкость крови крыс с сахарным диабетом во всех скоростях сдвига. Так, при применении Гимнемы-25 выявлено, что при высоких скоростях сдвига вязкость крови была на 20,4% ниже аналогичного показателя у крыс с сахарным диабетом, что свидетельствует о некотором воздействии Гимнемы-25 на пластические свойства мембраны эритроцитов. При низких скоростях сдвига наблюдается усиление эффекта после применения Гимнемы-25. При этом полученные значения близки к показателям интактных животных. Полученные данные указывают на возможное снижение уровня гликилирования белков мембраны эритроцитов из-за повреждающего действия глюкозы и увеличение эластичности клеточной оболочки, что также может сказываться на восстановление физико-химических свойств клеточной мембраны, и как следствие снижение ее «жесткости». [13]

Таким образом, изученный экстракт оказывает воздействие как на агре-гационный, так и на деформационный компоненты реологических свойств клеток крови, что способствует нормализации микроциркуляции крови, нарушенной при сахарном диабете.

При курсовом введении Гимнемы-25 наблюдалось снижение гиперагрегации тромбоцитов и гиперкоагуляционного статуса, выявленных при сахарном диабете. Так, увеличение тромбинового времени после применения Гимнемы-25 на 9,0% превышает аналогичный показатель у животных с сахарным диабетом. А значение активированного парциального тромбопласти-нового времени было ниже на 13,4%, чем у крыс с диабетом. Показатели тромбинового времени и количества фибриногена (г/л) практически не отличались от таковых у интактных животных.

В настоящее время в литературе активно обсуждается вопрос о роли оксидативного стресса в развитии диабетических сосудистых осложнений. [6,86] Установлено, что гипергликемия в результате активации ряда биохимических путей (аутооксидации глюкозы, накопления полиолов, усиления синтеза простаноидов, гликозилирования белков) может приводить к усиленному накоплению свободных радикалов, которые, в свою очередь, нарушают функцию эндотелия и ведут к ускоренному развитию атеросклероза. [15] В результате самоокисления глюкозы образуются свободные радикалы кислорода, которые запускают процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ) плазматических мембран, вследствие чего и образуются конечные продукты неферментного гликозилирования в сосудистой стенке. [6]

В связи с вышеизложенным, можно сделать вывод, что логичным и патогенетически обоснованным является применение в комплексной терапии сахарного диабета как 1, так и 2 типа препаратов, обладающих антиокси-дантными свойствами. Эти лекарственные средства не только замедляют процесс прогрессирования специфических сосудистых осложнений, но и сохраняют секреторные способности Р-клеток. Влияя на фосфолипидный слой клеточной мембраны, антиоксиданты повышают чувствительность к инсулину, благодаря чему достигается более полная компенсация сахарного диабета. [6]

В ходе проведенных исследований выявлено, что Гимнема-25 проявляет антиоксидантные свойства у крыс со стрептозотоциновым сахарным диабетом, уменьшая образование как начальных, так и конечных продуктов пере-кисного окисления. Так, в условиях целого организма (in vivo) на модели ас-корбат-зависимого ПОЛ показано, что при применении Гимнемы-25 эффективно снижается образование конечных ТБК-активных продуктов липопе-роксидации. При этом наблюдается дозозависимый эффект. Учитывая роль процессов пероксидации в развитии гемореологических и микроциркулятор-ных нарушений при сахарном диабете можно сделать предположение, что выявленные антиоксидантные свойства экстракта Гимнемы лесной могут уменьшать выраженность развития осложнений сахарного диабета.

Наряду с тем, что борьба с гипергликемией - ключевым метаболическим нарушением при сахарном диабете типа 2 — исторически занимает основное место в лечении этого заболевания, терапия других ассоциированных расстройств. [3,86] При сахарном диабете типа 2 нарушения углеводного обмена сочетаются с выраженными изменениями липидного обмена. [7] Декомпенсация сахарного диабета сопровождается нарушениями жирового обмена, т.к. эти два вида обмена веществ настолько взаимозависимы, что даже при кратковременных изменениях углеводного обмена выявляются нарушения различной степени выраженности и в обмене липидов. Задержка и избыточное накопление холестерина на периферии, являющиеся обязательным условием для инициации атеросклероза, зависят от количества ЛПВП и их функциональных свойств. При сахарном диабете типа 2, как правило, выявляется дислипидемия, проявляющаяся снижением концентрации апопротеина А-1 и ЛПВП. [34,96]

В норме инсулин угнетает высвобождение свободных жирных кислот из жировых депо после приема пищи, а наличие инсулинорезистентности нарушает эту супрессивную функцию инсулина, что приводит к увеличению содержания свободных жирных кислот в печени и повышению количества частиц, представляющих собой липопротеиды очень низкой плотности (ЛОНП). Изменяется спектр размера частиц и четко выявляется тенденция к увеличению количества крупных частиц ЛОНП. Хроническая гипергликемия является причиной гликозилирования многих белков и субстратов в организме, включая ЛПНП, которые становятся более чувствительными к воздействию на них свободных радикалов, образующихся в результате окислительного стресса, наблюдаемого при сахарном диабете. [34,96]

Согласно нашим исследованиям сахарный диабет сопровождается повышением содержания в сыворотке крови общего холестерина, липопротеи-нов низкой плотности (ЛПНП), триглицеридов (ТГ) и снижением липопро-теинов высокой плотности (ЛПВП), что согласуется с литературными данными. [34] Одновременно с гиперлипидемией происходят значительные изменения активности ферментов антиоксидантной системы и увеличение показателей перекисного окисления липидов. Установлено, что атеросклероз и связанные с ним заболевания протекают при значительном повышении содержания в плазме крови фракции ЛПНП, а во многих случаях и фракции ЛПОНП. [34]

При изучении показателей дислипидемии на модели иммунозависимо-го экспериментального сахарного диабета после применения Гимнемы-25 отмечено снижение уровней липидов низкой и очень низкой плотности на

8,7% и 16,4% соответсвенно, по отношению к группе животных с сахарным диабетом. Кроме того, наблюдалась повышение уровня липопротеидов высокой плотности, содержание которых в плазме крови снижается при развитии сахарного диабета, что возможно связано с препятствием всасывания в тонком кишечнике содержащих холестерин желчных кислот и прерыванием их энтеропеченочной рециркуляции. Так, уровень ЛПВП был ниже на 24,4% по отношению к показателям крыс с диабетом.

Кроме того, при применении Гимнемы-25, возможно, происходит уменьшение гликозилирования липидов, на фоне нормализации гликемии. Также, следует отметить, что в настоящем исследовании индекс атерогенно-сти был достоверно ниже на 25,9% по отношению к животным с диабетом, что может свидетельствовать о нормализации липидного спектра крови животных. Полученные данные согласуются с таковыми в литературе о влиянии водно-спиртового экстракта Гимнемы лесной на уровень липидов в крови. [87]

Таким образом, на основании проведенных исследований установлено, что по выраженности гипогликемической активности Гимнема-25 превосходит другие изучаемые фракции данного экстракта. Также выявлено, что Гимнема-25 проявляет антидиабетогенные свойства в экспериментах на животных со стрептозотоцин-индуцированным и иммунозависимым сахарным диабетом, что подтверждается снижением гипергликемии и полидипсии, а также уменьшением количества гликозилированного гемоглобина и инсулина в крови крыс. Изучаемая фракция Гимнемы лесной при пероральном введении и добавлении в перфузат оказывает ингибирующее действие на всасывание глюкозы и жирных кислот в кишечнике крыс. При курсовом введении Гимнема-25 способствует увеличению скорости утилизации глюкозы мышечной тканью интактных животных и крыс с сахарным диабетом. Установлено, что Гимнема-25 при пероральном применении снижает цитотоксическое действие стрептозотоцина на [3-клетки поджелудочной железы, способствуя увеличению площади островков и ядер |3-клеток поджелудочной железы. При пероральном применении Гимнема-25 способствует нормализации реологических свойств крови при экспериментальном стрептозотоцин-индуцированном сахарном диабете, что подтверждается снижением вязкости крови во всем диапазоне скоростей сдвига. Изучаемый экстракт снижает гиперагрегацию тромбоцитов. Гимнема-25 оказывает воздействие на липидный спектр крови крыс с иммунозависимым сахарным диабетом. Установлено снижение уровней ХС, ЛПНП и ЛПОНП, а также повышение уровня ЛПВП. При применении Гимнемы-25 снижается образование конечных ТБК-активных продуктов липопероксидации. Изучаемый экстракт Гимнемы-25 проявляет антиоксидантную активность в условиях in vivo, что выражается в снижении уровней КД, МДА и СОД. Выявлено, что по уровню острой токсичности при пероральном введении Гимнема-25 относится к классу малотоксичных препаратов (LD50 > 5г/кг).

Сопоставление полученных в ходе данного исследования результатов, теоретических предпосылок и литературных данных делает целесообразным дальнейшее изучение экстракта Гимнемы лесной для создания на ее основе лечебных комплексов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Сорокина, Елена Валерьевна, 2008 год

1. Автандилов Г.Г. Основы количественной патологической анатомии. — М.: Медицина, 2002. 240 с.

2. Анциферов М.Б. Новые подходы к лечению сахарного диабета типа 2: глюкагоноподобный пептид-1 и эксенатид (Баета) / М.Б. Анциферов, Л.Г. Дорофеева // Фарматека, №11(145), 2007.

3. Балаболкин М.И. Диабетология. М.: Медицина, 2000. 672 с.

4. Балаболкин М. И. Применение витаминов с антиоксидантным действием в комплексной терапии сахарного диабета / М.И. Балаболкин, Е.М. Клебанова, В.М. Креминская // Медицинский научно-практический журнал «Лечащий врач», №10, 2007.

5. Балаболкин М.И. Роль гликирования белков, окислительного стресса в патогенезе сосудистых осложнений при сахарном диабете / М.И. Балаболкин // Сахарный диабет. №5, 2002. - С. 8-16.

6. Балаболкин М.И. Роль окислительного стресса в патогенезе сосудистых осложнений / М.И. Балаболкин, Е.М. Клебанова // Пробл. эндок-ринол. 2000. -Т.46, №7. - С.29-34.

7. Балаболкин М.И. Современная тактика лечения сахарного диабета типа 2 / М.И. Балаболкин, В.М. Креминская, Е.М. Клебанова // СопбШшп-тесНсшп 2001. - Т.3, №11.

8. Балаболкин М.И. Существуют ли возможности улучшения сахаросни-жающей терапии сахарного диабета II? / М.И. Балаболкин // Российский НИИ здоровья, Информационный бюллетень №1. М., 2006.

9. Балаболкин М.И. Эндокринология / М.И. Балаболкин. М., 2002. - 672 с.11 .Бобырева JI. Е. Влияние фенольных антиоксидантов на развитие аллок-санового диабета у крыс. / Л.Е. Бобырева // Эксп. клин. фарм. -1997. -Т.60, №3. -С.51-53.

10. Бондарь Т.П. Лабораторно-клиническая диагностика сахарного диабета и его осложнений / Т.П. Бондарь, Г.И. Козинец. -М.: МИА, 2003. -С.82.

11. Галенок В.А. Гемореология при нарушениях углеводного обмена.: Монография/ В.А. Галенок, Е.В. Гостинская- Новосибирск: Наука, 1987.-232с.

12. Добровольский H.A. Анализатор вязкости крови / H.A. Добровольский, Ю.М. Лопухин, A.C. Парфенов. // Реологические исследования в медицине: Сб. науч. трудов. М.: НЦХ РАМН, 1998. - С.45-51.

13. Ефимов A.C. Сахарный диабет и сердце / A.C. Ефимов, Л.К. Соколова, Ю.Б. Рыбченко // Институт эндокринологии и обмена веществ им. В. П. Комиссаренко АМН Украины, Киев. 2006.

14. Колосова М.В. Состав липидов мембран эритроцитов и их биофизические характеристики у детей с инсулинзависимым сахарным диабетом в процессе терапии / М.В. Колосова, В.В. Новицкий, Е.А. Степовая // Клин. лаб. диагн. -2001, № 1. -С. 10-12.

15. Корсун Е.В. Лечение метаболического синдрома в практике врача поликлиники: возможности фитотерапии. Институт фитотерапии, Москва, Том 05,N 1 - 2007.

16. Куприянов В.В. Ангиогенез / В.В. Куприянов, В.А. Миронов, A.A. Миронов, О.Ю. Турина-М., 1993.

17. Куркин В.А. Фармакогнозия: Учебник для студентов фармацевтических вузов. Самара: ООО «Офорт», ГОУВПО «СамГМУ», 2004 -С.47.

18. Ланкин В.З. Изучение аскорбатзависимого перекисного окисления ли-пидов тканей при помощи теста с 2-тиобарбитуровой кислотой / В.З. Ланкин, С.М. Гуревич, Е.Б. Бурлакова // Труды московского общества испытателей природы. -М., -1975. -Т.52. -С.73-78.

19. Люсов В.А. Метод графической регистрации агрегации тромбоцитов и изменения ее при ишемической болезни сердца / В.А. Люсов, Ю.Б. Белоусов // Кардиология. 1971. - №8. - С.459-461.

20. Материалы 43-го конгресса EASD / Н.Д. Тронько.- Киев, 2007, № 22/1,С. 8-9.

21. Муравьева Д.А. Тропические и субтропические лекарственные растения / Д.А. Муравьева, А.Ф. Гаммерман. М.: Медицина, 1974, С.7.

22. Новый высокочувствительный метод анализа агрегации тромбоцитов / З.А. Габбасов и др. // Лабораторное дело. 1989. - №10. - С.15-18.

23. Плотников М.Б. Метод отбора лекарственных веществ, влияющих на реологические свойства крови in vitro / М.Б. Плотников, A.A. Колтунов, О.И. Алиев // Эксперим. и клинич. фармакология. -1996.-Т.59, № 6. -С. 54-55.

24. Проблема диабета, методы профилактики и лечения / A.A. Спасов, М.П. Самохина // Российский НИИ здоровья, Информационный бюллетень №1.2006 г,- М.,2006,- С.4.

25. Саркисов Д.С., Перов Ю.Л. // Микроскопическая техника: руководство. М.: Медицина, 1996. 544с.: ил.

26. Сахарный диабет: патогенез, классификация, диагностика и лечение: Пособие для врачей/ И. И. Дедов, и др.. Москва, 2003.-171с.

27. Севергина Э.С. Инсулинзависимый сахарный диабет — взгляд морфолога. М.: Издательский дом Видар-М, 2002. - 152 е., ил.

28. Сорокина А.А. Фитотерапия сахарного диабета у детей / А.А. Сорокина, В.П. Кукса и др. // Медицинский научный и учебно-методический журнал №4, 2001.

29. Фармакологические свойства Гимнемы лесной / А.А. Спасов и др. // 1 Международный съезд фитотерапевтов «Современные проблемы фитотерапии» (2006; Москва): материалы.- Москва, 2006.- С.228-235.

30. Чугунова Л.А. Дислипопротеинемия и её лечение при сахарном диабете II типа // Ожирение. Метаболический синдром. Сахарный диабет II типа / Под ред. И.И. Дедова. М., 2000. С. 66-70.

31. Энциклопедия народной медицины Электронный ресурс.- Электрон, дан.- 2005.- Режим доступа: http: // www.n-med.info.html. Загл. с экрана.

32. Agarwal S.K. Lakshmi. Chemistry and medicinal uses of Gymnema sylvestre (Gur-Mar) leaves: A review. Indian Drug 2000;37:354-60

33. Born G.V.R. Aggregation of blood platelets by adenosine diphosphate and its reversal / G.V.R. Born // Nature. 1962. - V.194. - P.927-929.

34. Britsch S., et al. Effects of glucagon-like peptide-1 on membrane potential and ion channels of mouse pancreatic beta-cells. Acta Physiologia Scandi-navica 157(3): 353 only (1996)

35. Brown D. Encyclopedia of Herbs and Their Uses. Dorling Kindersley: New York, 1995

36. CampiIlo J.E. Hypoglycemic activity of an aqueous extract from Ficus carica in streptozotocin diabetic rats (Abstract) / Perez C., Ramiro J.M., Torres M.D.// Diabetologia 34 (Suppl.2):A-181, 1991

37. Chattopadhyay R.R. Hypoglycemic and antihyperglycemic effect of Gymnema sylvestre leaf extract. / Medda C., Das S., Poddar G. and Basu, T.K. // Fitoterapia (Italy) 64, pp. 450-454. -1993.

38. Chattopadhyay R.R. Possible mechanism of antihyperglycemic effect of Gymnema sylvestre Leaf extract: part 1. / Gen Pharmac., 31, 495-6. -1998.

39. Chijiiwa K., Linscheer W.G. Mechanism of pH effect on oleic acid and cholesterol absorption in the rat. / Am. J. Physiol. 252: G506-G510. -1987.

40. Chong-Martinez B. Decreased red blood cell aggregation subsequent to improved glycaemic control in Type 2 diabetes mellitus / B. Chong-Martinez, T.A. Buchanan, R.B. Wenby, H.J. Meiselman // Diabet. Med. -2003. -№ 186. P. 301-306.

41. Desfaits A.C. Normalization of plasma lipid peroxides, monocyte adhesion and tumor necrosis factor-a production in NIDDM patients after gliclazide treatment / A.C. Desfaits, O. Serri, G. Renier // Diabetes care. -1998. — Vol.21, №4. -P.21-28.

42. Dintenfass L. Modifications of blood rheology during aging and agerelated pathological conditions. / L. Dintenfass // Aging (Milano). 1989. - № 1. -P.99-125.

43. Ercan M. The effects of cholesterol levels on hemorheological parameters in diabetic patients / M. Ercan, D. Konukoglu, T. Erdem, S. Onen // Clin. Hemorheol. Microcirc. -2002. -№ 26. P. 257-263.

44. Ernst E. Therapeutische Koncequenzen hamorheologischer Forschung / E. Ernst // Wiener Medizinische Wochenschrift. -1989. Bd. 139.-№ 34. S. 569-577.

45. Fuller J.H., Shipley M.J., Rose G. et al. Mortality from coronary heart disease and stroke in relation to degree of glycaemia: the Whitehall Study//B.M.J.-1983- V. 287.- 867-870.

46. Fushiki T. An extract of Gymnema sylvestre leaves and purified gymnemic acid inhibits glucose-stimulated gastric inhibitory peptide secretion in rats. /

47. Fushiki T., Kojima A., Imoto T., Inoue K., Sugimoto E. // J. Nutr. 1992;122:2367-2373

48. Gent J.F. Taste confusions following gymnemic acid rinse. / Gent J.F., Hettinger TP, Frank ME, Marks LE.// Chem Senses 1999;24:393-^103.

49. Gholap S., Kar A. Gymnemic Acids from Gymnema sylvestre Potentially Regulates Dexamethasone-Induced Hyperglycemia in Mice. / Pharmaceutical Biology (Formerly International Journal of Pharmacognosy), Volume 43, Number 2, March 2005 , pp. 192-195(4)/

50. Gloria Y. Systematic Review of Herbs and Dietary Supplements for Glyce-mic Control in Diabetes / Gloria Y. Yeh, David M. Eisenberg, Ted J. Kaptchuk, and Russell S. Phillips //- Diabetes Care 26:1277-1294, 2003 by the American Diabetes Association, Inc.

51. Grover J.K. Medicinal plants of India with anti-diabetic potential./ Grover J.K., Yadav S., Vats V. // J Ethnopharmacol. 81(1):81 -100. -2002.

52. Grundy S.M. Diabetes and cardiovascular disease. / Grundy S.M., Benjamin I.J., Burke G.L. et al. // A statement for healthcare professionals from the American Heart Associ-ation//Circulation 1999 - V. 100 - p. 1134-1146.

53. Gupta S.S., Variyar M.C. Experimental studies on pituitary diabetes. IV. Effect of Gymnema sylvestre and Coccinia indica against the hyperglycaemic response of somatotropin and corticotropin hormones. / Indian J Med Res . 1964;52:200-207.

54. Gupta R., Kumar G.B., Johri S. An overview of indian novel traditional medicinal plants with anti-diabetic potentials. / African Journal of Traditional, Complimentary and Alternative Medicines, Vol.5, No. 1, 2008, pg. 1-17

55. Gymnema sylvestre. / Altern Med Rev . 2004;4:46-47. Available at: May 12, 2004.

56. Hamilton P. A Review of Gymnema Sylvestre Hyperglycemia Clinical Trials. / EzineArticles.com., 2008.

57. Harada S., Kasahara Y. Inhibitory effect of gurmarin on palatal taste responses to amino acids in the rat. / Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 2000;278:R1513-R1517.

58. Heldin C.H. Cell. Regulat. / Vol. 8, p. 556-566, 1990

59. Herrmann-Rinke C. Regulation of glucagon-like peptide-1 secretion from rat ileum by neurotransmitters and peptides. / Herrmann-Rinke C., Voge A., Hess M., and Goke B. // Journal of Endocrinology,Vol 147, Issuel, 25-31, 1995.

60. Hiji Y. Physiological function of gymnemic acid. / Shokuhin to Kaihatsu 1993 ;28:10-13 (in Japanese)

61. Hirata S. Effect of crude gymnemic acid on oral glucose tolerance test in human being. / Hirata S. Abe T. and Imoto T. // J. Yonago Med Assoc., 43, 392-6. -1992.

62. Jenssen T., FeldtRasmusen B. Features of endothelial dysfuntion in early diabetic nephropathy. Lancet 1999; I: 461463.

63. Joffe D.J., Freed S.H. Effect of extended release Gymnema sylvestre leaf extract alone or in combination with oral hypoglycemics or insulin regimens for Type 1 and Type 2 diabetes. / Diabetes Control Newsl. 2001;76(l):l-4.

64. Kamei K, et al. Amino Acid Sequence of Sweet-taste-suppressing Peptide (Gurmarin) from the Leaves of Gymnema sylvestre. / J Biochem. (Tokyo). Janl992;l 11(1):109-12.

65. Kato T. Improved effects on plasma glucose and serum insulin levels by oral administration of crude gymnema extracts to the experimental diabetic mice. / J. Yonago Med. Ass. 1994;45:80-93

66. Khan B. Hypogylcemic activity of aqueous extract of some indigenous plants. / Khan B., Arayne M.S., Naz S., Mukhtar N. // Pakistani Journal of Pharmaceutical Science. 2005;18(l):62-64.

67. Khare A.K. Hypo-glycemic activity of an indigenous drug (Gymnema syl-veslre, 'Gurmar') in normal and diabetic persons. / Khare A.K., Tondon R.N. and Tewari J.P. // Indian J. Physiol, Pharmacol. 27: 257-258. -1983.

68. Kim B.M. Clustern expression during regeneration of pancreatic islet (3-cell in streptozotocin-induced diabetic rats. / Kim B.M., Ham Y.M., Shin Y.J., Min B.H., Park I.S. // Diabetologia. 2001. p. 2192-2202.

69. Koo ML: Aloe vera: antiulcer and antidiabetic effects. / Phytother Res 8:461-464, 1994

70. Kurata Y. Effects of gymnemic acid and pullulan on the oral sucrose tolerance test in normal and diabetic rats./ J. Yonago Med. Ass. 1987;38:61-70

71. Kurihara Y. Antisweet activity of gymnemic acid A1 and its derivatives. / Life Sci 1969;8:537-543

72. Li L. Effect on regeneration of pancreatic 3-cell in neonatal streptozotocin-treated rats. / Li L., Zhaohong Y., Masaharu S., Kojima I. // Diabetes. 2004. p. 608-615.

73. Luo H. Abstract Decreased body weight without rebound and regulated lipoprotein metabolism by gymnemate in genetic multifactor syndrome animal. / Luo H., Kashiwagi A., Shibahara T., Yamada K. // Mol Cell Biochem. 2007 May;299(l -2):93-8.

74. Luo H. Inhibitory effect and mechanism of acarbose combined with gymnemic acid on maltose absorption in rat intestine. / Luo H., Wang L.F., Imoto T., Hiji Y. // World J Gastroenterol, 2001 ;7(1):9-15

75. Malik J.K. Evaluation of anti-inflammatory activity of Gymnema sylvestre leaves extract in rats. / Malik J.K., Manvi F.V., Alagawadi K.R., Noolvi M. // Int J Green Pharm 2008;2:114-5

76. Mhaskar K.S., Caius J.F. Indian Med Res Memoirs . 1930; №16.

77. Mohamed Bnouham et al. Medicinal plants with potential antidiabetic activity A review of ten years of herbal medicine research / Int J Diabetes & Metabolism (2006) 14: 1-25-1990-2000.

78. Mooradian A.D. The antioxidative potential of cerebral microvessels in experimental diabetes mellitus. // Brain Res. -1995. -Vol.671. -P. 164-169.

79. Murakami N. New hypoglycemic constituents in "gymnemic acid" from Gymnema sylvestre. / Murakami N., Murakami T., Kadoya M. et al. // Chem Pharm Bull (Tokyo) 1996;44:469-71.

80. Nakamura Y. Fecal steroid excretion is increased in rats by oral administration of gymnemic acids contained in Gymnema sylvestre leaves. / Nakamura Y., Tsumura Y., Tonogai Y., Shibata T. // J Nutr . 1999;129:1214-1222.

81. Nandhini T.A. Inhibition of lipid peroxidation, protein glycation and elevation of membrane ion pump activity by taurine in RBC exposed to high glucose / T.A. Nandhini, C.V. Anuradha // Clin. Chim. Acta. -2003. -№ 27. P. 129-135.

82. Nath N. Superoxide dismutase in diabetic polymorphonuclear leukocytes. / N. Nath, S.N. Chari, A.B. Rathi // Diabetes. -1984. -Vol.33. -P.586-588.

83. Nathan D.M. Согласованный международный алгоритм 2006 года по начальной и поддерживающей терапии СД 2 типа / Nathan D.M., Buse J.B., Davison М.В., et al. // «Трудный пациент», №12, 2006.

84. Persaud S.J. Gymnema sylvestre stimulates insulin release in vitro by increased membrane permeability. / Persaud S.J., Al-Majed H., Raman A., Jones P.M. //J Endocrinol. 1999;163:207-212.

85. Pfuetze K.D. Probucol / K.D. Pfuetze, C,A, Dujovne // Curr. Atheroscl. rep. -2000. -Vol.2. -P.47-57.

86. Philpott D.I. Regulation of intestinal glucose transport. / Philpott D.I., Butzner J.D., Meddings l.B. // Can. I. Physiol. Pharmacol. 70: 1201-1 207. -1992.

87. Porchezhian E., Dobriyal R.M. An overview on the advances of Gymnema sylvestre: chemistry, pharmacology and patents. / Pharmazie . 2003;58:5-12.

88. Rai P.K. Glycaemic evaluation of Psidium guajava in rats / Rai P.K., Singh S.K., Kesari A.N. & Geeta Watal // Indian J Med Res 126, September 2007, pp 224-227.

89. Reinehr T. Pathophysiologie und Spätfolgen des Diabetes mellitus Typ 2. / Monatsschrift Kinderheilkd 2005. 153:927-935

90. Robert F. Margolskee et al. T1R3 and gustducin in gut sense sugars to regulate expression of Na+-glucose cotransporter 1/ PNAS, vol. 104, no. 38, 2007.

91. Shanmugasundaram ERB, et al. Possible regeneration of the islets of langerhans in streptozotocin-diabetic rats given gymnema sylvestere leaf ex-trats. J Ethnopharmacol 1990;30:265-279

92. Shapiro K, Gong WC: Natural products used for diabetes. / J Am Pharm Assoc 42:217-226, 2002

93. Sheela C.G., Augusti K.T. Antidiabetic effects of S-allyl cysteine sulphoxide isolated from garlic Allium sativum Linn. / Indian J Exp Biol 30:523-526, 1992

94. Shigematsu N. Effect of administration with the extract of Gymnema sylvestre R.Br leaves on lipid metabolism in rats. / Shigematsu N., Asano R., ShimosakaM., Okazaki M. // Biol Pharm Bull. 2001;24:713-717.

95. Shimizu K. Suppression of glucose absorption by some fractions extracted from Gymnema sylvestre leaves. / Shimizu K., lino A., Nakajima J., et al. //J Vet Med Sci. 1997;59:245-251.

96. Srivastava Y. Antidiabetic and adaptogenic properties of Momordica charantia extract. / Srivastava Y., Venkatakrishna-Bhatt H., Verma Y., Venkaiah K. // Phytother Res 7:285-289, 1993

97. Suga S. GLP-l(7-36) amide augments Ba2+ current through L-type Ca2+ channel of rat pancreatic beta-cells in a cAMP-dependent manner. / S., Kanno T., Nakano K., Takeo T., Dobashi Y., Wakui M. // Diabetes46 :1755-1760,1997

98. Sugihara Y. Antihyperglycemic effects of gymnemic acid IV, a compound derived from Gymnema sylvestre leaves in streptozotocin-diabetic mice. / Sugihara Y., Nojima H., Matsuda H., et al. // J Asian Nat Prod Res 2000;2:321-7.

99. Suttisri R. Plant-derived triterpenoid sweetness inhibitors. / Suttisri R., Lee I.S., Kinghorn A.D. // J Ethnopharmacol. 47(l):9-26. -1995.

100. Wang L.F. Inhibitory effect of gymnemic acid on intestinal absorption of oleic acid in rats. / Wang L.F., Luo H., Miyoshi M., Imoto T., Hiji Y. and Sasaki T. //J Gastroenterol 2001; April 7(2):270-274

101. Warren R.M. Suppression of sweet sensitivity by potassium gymne-mate. / Warren R.M., Pfaffmann C. // J. Appl. Physiol. 1959;14:40-42

102. Welhinda J. Effect of Momordica charantia on the glucose tolerance in maturity onset diabetes. / Welhinda J., Karunanayake E.H., Sheriff M.H.R., Jayasinghe K.S.A. // J Ethnopharmacology 17:277-282, 1986

103. Xu-Min Zhu. Two New Triterpenoid Saponins from Gymnema sylvestre / Xu-Min Zhu, Ping Xie, Ying-Tong Di, Shu-Lin Peng, Li-Sheng Ding, Ming-Kui Wang. // Journal of Integrative Plant Biology 50 (5) , 589592 , 2008.

104. Yamada A. Induction of salivary kallikreins by the diet containing a sweet-suppressive peptide, gurmarin, in the rat. / Yamada A., Nakamura Y.,

105. Sugita D., et al. // Biochemistry and Biophysics Research Communications. 2006;346(2):386-392.

106. Ye W. Antisweet saponins from Gymnema sylvestre. / Ye W., Liu X., Zhang Q., Che C.T., Zhao S. // J Nat Prod. 64(2): 232-235. -2001.

107. Yeh G.Y. Systematic review of herbs and dietary supplements for glycemic control in diabetes. / Yeh G.Y., Eisenberg D.M., Kaptchuk T.J., Phillips R.S. // Diabetes Care . 2003;26:1277-1294.