Протеолитический белок CPAF Chlamydia Trachomatis: характеристика биологических свойств и поиск ингибиторов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.03, кандидат наук Давыдова, Дарья Юрьевна

• Давыдова, Дарья Юрьевна
• кандидат наук
• 2014

Оглавление диссертации кандидат наук Давыдова, Дарья Юрьевна

Оглавление

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 .Биологическая характеристика хламидий

1.2. Таксономическое положение хламидий

1.3. Генетические особенности С. trachomatis

1.4. Жизненный цикл хламидий

1.4.1. Образование хламидийных включений

1.4.2. Секретируемые факторы хламидий

1.5. Протеасомный белок С.trachomatis

1.5.1 Субстратная специфичность белка CPAF

1.5.2. Структурная характеристика белка CPAF

1.5.3. Секреция белка CPAF через See-зависимый путь

1.6. Ингибирование белка CPAF

1.7. Разработка антихламидийных препаратов на основе подавления

протеасомного белка

Заключение

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Материалы

2.1.1. Штаммы, клеточные линии и плазмидные вектора

2.1.2. Реактивы для синтеза и модификации ДНК

2.1.3. Общелабораторные реагенты

2.1.4. Питательные среды

2.1.5.Буферные растворы

2.1.6. Лабораторное оборудование

2.1.7. Предоставляемые материалы

2.2. Методы

2.2.1. Культивирование микроорганизмов

2.2.2. Выделение плазмидной ДНК

2.2.3.Постановка полимеразной цепной реакции

2.2.3.1. Метод горизонтального электрофореза в агарозном геле

2.2.4. Молекулярное клонирование гена cpaf в Escherichia coli

2.2.5. Делетирование сигнальной последовательности в гене cpaf

2.2.6. Мутагенез гена Cpaf

2.2.7. Трансформация клеток Escherichia coli

2.2.7.1. Выделение и очистка белка из культуры E.coli

2.2.8. Трансформация клеток S. cerevisiae

2.2.8. 1. Выделение белка CPAF из культуры S. cerevisiae

2.2.9. Определение токсического фенотипа у дрожжей «drop test» методом

2.2.10. Получение моноспецифичной сыворотки к рекомбинантному белку CPAF

2.2.11. Электрофорез в SDS - полиакриламидном геле

2.2.11.1. Окрашивание SDS - полиакриламидного геля серебром

2.2.12. Определение ферментативной активности белка CPAF

2.2. 13. Поиск ингибиторов белка CPAF методами компьютерного моделирования

2.2.14. Определение цитотоксического эффекта химических соединений методом окрашивания клеток метиленовым синим

2.2.15. Определение цитотоксического эффекта химических соединений в МТТ-тесте

2.2.16. Метод суспензионного заражения эукариотических клеток

2.2.17. Определение влияния химических соединений на внутриклеточное размножение хламидий

2.2.18. Определение ингибирующей активности низкомолекулярных соединений методом иммуноблоттинга

2.2.19. Статистическая обработка результатов

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Клонирование гена cpaf в штаммы Е. coli и выделение активного белка CPAF

3.2. Получение моноспецифичной сыворотки к рекомбинантному белку

CPAF

3.3. Получение рекомбинантного белка CPAF в биологически активной

форме

3.4. Оценка ферментативной активности белка CPAF

3.5. Клонирование гена cpaf в Saccharomyces cerevisiae

3.5.1. Изучение токсического эффекта CPAF с использованием

S.cerevisiae

3.5.2. Получение вариантов дрожжей с повышенной устойчивостью к действию CPAF

3.6. Выбор химических соединений - ингибиторов CPAF на основе виртуального скрининга

3.6.1. Изучение токсичности химических соединений на основе стандартных токсикологических тестов

3.6.2. Изучение влияния химических соединений на развитие хламидийной инфекции в культуре клеток

3.6.3. Изучение влияния химических соединений на протеолитическую активность белка CPAF

3.7. Экспериментальное тестирование структурных аналогов выбранных ингибиторов белка CPAF

3.7.1. Оценка токсичности новых синтезированных соединений с использованием метиленового синего

3.7.2.Изучение влияния новых синтезированных соединений на внутриклеточное развитие хламидий

3.7.3. Оценка влияния отобранных низкомолекулярных соединений на

протеолитическую активность белка CPAF

Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

выводы

Список использованной литературы

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ишш инфекции, передающиеся половым путем

УГХ урогенитальный хламидиоз

воз Всемирная организации здоровья

CPAF chlamydial protease/proteasome-like activity factor

ЭТ элементарные тельца

РТ ретикулярные тельца

Ж липидная капля

эв экзоцитозная везикула

МВТ мультивезикулярные тельца

цом центр организации микротрубочек

лпс липополисахарид

МНС главный комплекс гистосовместимости

ССТТ система секреции III типа

ОРС открытая рамка считывания

иптг изопропил-Р-Б-тиогалактопиранозид

КД килодальтон

LB среда Луриа - Бертани

SD синтетическая минимальная среда

ЭДТА этилендиаминтетраацетат

GST глутатион-Б-трансфераза

dNTP дезоксинуклеозидтрифосфат

SDS додецилсульфат натрия

ТАЕ трис - ацетатный буфер

TBS трис - солевой буфер

ПААГ полиакриламидный гель

ФИТЦ ф луоресцеин-5 -изотиоцианат

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Протеолитический белок CPAF Chlamydia Trachomatis: характеристика биологических свойств и поиск ингибиторов»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность работы. Одним из самых распространенных возбудителей инфекций, передающихся половым путем, является Chlamydia trachomatis (Malhotra М., Sood S., et al., 2013). Хламидии вызывают широкий спектр заболеваний, связанных с тяжелыми осложнениями, трахому, урогенитальный хламидиоз, бесплодие, патологию беременности, артриты. В настоящее время для лечения хламидиоза применяют этиотропную терапию, основанную на чувствительности хламидий к некоторым антибиотикам. Однако лечение хламидийных инфекций, особенно при хроническом течении, по-прежнему остается нерешенной проблемой, что во многом обусловлено низкой чувствительностью внутриклеточно персистирующих хламидий к используемым антибиотикам (Шипицына Е.В., Савичева A.M., и др., 2004). Отсутствие эффективных и безопасных препаратов для лечения разных форм хламидийных инфекций определяет необходимость разработки нового подхода для поиска лекарственных средств, основанного на выявлении принципиально новых мишеней у бактериальных патогенов.

Основная стратегия внутриклеточного выживания патогена направлена на инактивацию защитных механизмов хозяина и модуляцию клеточных сигнальных путей, ответственных за контроль развития инфекции. При разработке новых антибактериальных препаратов, эффективных в отношении внутриклеточных патогенов, в том числе и хламидий, перспективными мишенями могут служить ключевые бактериальные молекулы, подавление активности которых позволит «разоружить» патоген, и в дальнейшем он может быть элиминирован иммунной системой организма (Зигангирова H.A., Федина Е.Д., и др., 2009). Поэтому действие новых препаратов должно быть направлено на ингибирование специфических механизмов, которые способствуют развитию инфекции и принципиально важны для подавления защитных механизмов хозяина.

Реализация такого подхода возможна на основе технологии «мишень-направленного поиска», предусматривающая полный цикл разработки новых

кандидатных препаратов для антимикробной терапии. Этот цикл включает в себя: выбор биомишени, виртуальный скрининг библиотек химических соединений для поиска потенциальных ингибиторов выбранной мишени, синтез и химическую оптимизацию низкомолекулярных соединений, создание бесклеточных и клеточных систем скрининга, экспериментальный скрининг, использование экспериментальных моделей инфекции in vitro и in vivo. Применение такой технологии позволяет существенно сократить время разработки нового препарата с предсказанным механизмом действия.

Ведущую роль в патогенезе хламидийной инфекции играет белок CPAF (chlamydial protease/proteasome-like activity factor), подавляющий множественные сигнальные пути клетки-хозяина, и благодаря этому обеспечивающий возможность установления инфекции и длительного выживания патогена в организме хозяина. Белок CPAF расщепляет транскрипционные факторы (Zhong G., Liu L.,et al., 2000), проапоптозные белки (Dong F., Pirbhai M. et al., 2005) и компоненты системы промежуточных филаментов клетки-хозяина (Kumar Y., Valdivia R.H., et al., 2008), препятствуя презентации антигенов хламидий на поверхности зараженной клетки, блокируя индукцию апоптоза хозяйской клетки и способствуя росту хламидийных включений. Кроме того, протеасомный белок CPAF имеет не только эукариотические мишени, но также способен расщеплять и некоторые белки самого патогена, выполняя функцию регуляторного белка и координируя активность хламидийных белков (Jorgensen I., Bednar М.М., et al., 2011). Однако до сих пор не проводились исследования, направленные на изучение биологической активности белка и ее взаимосвязи с протеолитической активностью.

Таким образом, белок CPAF является ключевым фактором патогенности, что делает его перспективной бактериальной мишенью для создания нового антихламидийного препарата.

Цель диссертационной работы. Целью работы являлась характеристика функциональной активности фактора патогенности хламидий белка CPAF и поиск специфических ингибиторов протеолитической активности белка.

Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:

• Клонировать ген cpaf в Е. coli, оптимизировать условия его экспрессии и разработать схему получения белка в биологически активной форме.

• Осуществить генетический анализ цитотоксического действия CPAF с использованием дрожжей S. cerevisiae.

• Разработать системы тестирования биологической активности белка CPAF in vitro, необходимые для скрининга низкомолекулярных химических соединений.

• Провести экспериментальное тестирование выбранных на основе компьютерного моделирования потенциальных ингибиторов белка CPAF с целью получения эффективного низкомолекулярного ингибитора хламидийной протеазы.

Научная новизна работы. Впервые созданы генетические конструкции, позволяющие целенаправленно получать препаративные количества очищенного белка CPAF как в денатурированной высокоиммуногенной, так и в растворимой ферментативно активной форме. Впервые создана биологическая модель с использованием дрожжей S. cerevisiae, пригодная для изучения генетических особенностей и механизма цитотоксического действия белка CPAF. Показана высокая токсичность протеиназы хламидий на дрожжевые клетки.

Впервые обнаружены ингибиторы протеолитической активности белка CPAF среди низкомолекулярных соединений класса индол-3-ил-глиоксиламидов и б-оксо-1,6-дигидро-пиримидинов.

Практическое значение работы. Разработаны технологии получения высокоочищенного белка CPAF в препаративных количествах. Очищенный белок может быть использован для приготовления моноспецифических сывороток и разработки на их основе диагностических тест-систем. Разработана модель для

исследования токсических факторов бактериального происхождения с использованием дрожжей S. cerevisiae.

Отобраны низкомолекулярные соединения, подавляющие хламидийную инфекцию в культуре клеток и блокирующие протеолитическую активность белка CPAF in vitro. Данные ингибиторы могут послужить прототипом лекарственного препарата против инфекций, вызываемых С. trachomatis.

По результатам работы подготовлены методические рекомендации «Определение токсичности факторов патогенности бактерий с использованием дрожжей Saccharomyces cerevisiae», утвержденные советом по внедрению научных достижений в практику ФГБУ «НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России 25 января 2013 г, протокол № 23.

Основные положения, выносимые на защиту.

Методами генной инженерии получен высокоиммуногенный и ферментативно активный рекомбинантный белок CPAF, фактор патогенности С. trachomatis.

Впервые создана экспрессирующая рекомбинантный белок CPAF модель на основе его клонирования в S. cerevisiae, позволяющая оценивать биологическую активность хламидийной протеазы в отношении эукариотических клеток S. cerevisiae.

С целью поиска специфического ингибитора белка CPAF проведено экспериментальное тестирование отобранных методами компьютерного скрининга низкомолекулярных химических соединений, а также структурных аналогов экспериментально выбранных ингибиторов хламидийной протеазы.

Получены два ранее неизвестных ингибитора протеазы С.trachomatis, подавляющие внутриклеточное размножение патогена in vitro.

Выбранные ингибиторы - низкомолекулярные соединения, нетоксичные для эукариотических клеток, блокирующие протеолитическую активность белка CPAF в отношении эукариотических мишеней и подавляющие хламидийную

пролиферацию, могут рассматриваться как перспективные соединения для разработки лекарственного средства против инфекций, вызываемых С. trachomatis.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены на 22-ом съезде Европейского Общества клинической микробиологии и инфекционных заболеваний (Лондон, 2012), на Седьмом заседании Европейского общества исследования хламидиоза (Амстердам, 2012), международной конференции «Биология - наука XXI века» (Москва, 2012), на Ежегодном конгрессе британского общества иммунологов (Ливерпуль, 2013).

Апробация работы состоялась 19 декабря 2013 года на научной конференции отдела медицинской микробиологии и отдела бактериальных инфекций ФГБУ «НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 научных работ, в том числе 3 статьи в журналах, рекомендованных ВАК.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 141 страницах машинописного текста и включает в себя следующие разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты собственных исследований и их обсуждение, выводы и список использованной литературы, содержащий ссылки на 155 источников. Работа иллюстрирована 11 таблицами и 32 рисунками.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1. Биологическая характеристика хламидий

Хламидии - грамотрицательные бактерии с облигатным типом паразитирования; вызывают различные заболевания человека, животных и птиц. Свое название хламидии получили от греческого слова «%tax¡_iú5a », что означает «мантия», так как в инфицированных клетках они образуют включения, окруженные оболочкой, напоминающей мантию (Schachter J., 1990).

Хламидии представляют собой мелкие бактерии шаровидной или овоидной формы. Клеточная стенка хламидий представляет собой двухслойную мембрану, ограничивающую периплазматическое пространство, однако практически не содержит N-ацетил-мурамовую кислоту - основной компонент пептидогликана (Fox A., Rogers J.C., 1990). Но при этом в геноме содержатся гены, кодирующие белки, необходимые для полного синтеза пептидогликана. Синтезируемые компоненты пептидогликана имеют иные функции, отличные от других бактерий, и важны для клеточного деления хламидий (McCoy A.J., Sandlin R.C., 2003).

Ригидность клеточной стенке придают цистеинбогатые белки, которые выполняют функцию пептидогликана. В состав цистеинбогатых белков входят основной белок наружной мембраны (МОМР), который составляет 60% от общего количества белка наружной мембраны, а также белки ОшсА и ОтсВ, перекрестно сшитые дисульфидными связями с порином МОМР (Findlay Н.Е., McClafferty Н., 2005). Хламидии имеют гликолипиды, аналогичные ЛПС наружной мембраны клеточной стенки грамотрицательных бактерий; обладают небольшим набором ферментов; могут синтезировать пировиноградную кислоту, некоторые липиды и т.д. (Garrett AJ., 1975).

Хламидии почти не способны к самостоятельному синтезу высокоэнергетических соединений и синтезируют АТФ лишь в незначительных количествах, путем гликолиза и расщепления гликогена, и вне клеток хозяина

метаболитические функции хламидий осуществляются в основном за счет жизнедеятельности клеток хозяина (Moulder J.W., 1991).

1.2. Таксономическое положение хламидий

Ранее систематика хламидий основывалась на фенотипических и серологических критериях. Но в 1999 году Кэрин Эверетт предложила новую классификацию, основанную на филогенетическом анализе генов 16S и 23 S рРНК, а также на генетических и фенотипических характеристиках хламидий (Everett K.D.,Bush R.M.,1999). На 4-м Европейском конгрессе «Хламидия-2000» была принята новая международная классификация хламидий. Согласно предложенной классификации, порядок Chlamydiales включает 4 отдельные семейства: Chlamydiaceae, а также представленные единичными видами семейства Simkaniaceae, Parachlamydiaceae и Waddliaceae (рис.1).

Согласно этой классификации, семейство Chlamydiaceae предложено разделять на два рода: род Chlamydia и род Chlamydophila. Род Chlamydia представленный видами С.trachomatis, C.muridarum и C.suis. Важнейшей фенотипической особенностью представителей этого рода является способность накапливать гликоген во включениях. При этом разные штаммы рода Chlamydia могут образовывать различные по морфологии включения и отличаются по уровню резистентности к сульфадиазину (Garett A.J.,1975). Изоляты С.trachomatis дифференцируются в серовары по серологическому ответу на основной белок внешней мембраны МОМР, который кодируетя геном отрА. Серовары попадают в биологические группы, ассоциированные с трахомой (А, В, Ва, С), с урогенитальной хламидийной инфекцией (D, Da, Е, F, G, Ga, Н, I, la, J, К) и с венерической лимфогранулемой (L1-L3) (Schachter J., 1999; Stock I., Henrichfreise В., 2012). Исследования сероваров хламидий позволили ученым выявить частичную корреляцию между определенным сероваром и различным клиническим течением хламидийной инфекции (Brunelle G.W., Sensabough G.F., 2006). Род Chlamydophila включает в себя виды C.pneumoniae, C.psittaci,

C.pecorum, С.abortus, С.felis, C.caviae. Вид C.pneumoniae включает биовары TWAR, вызывающий пневмонию, ОРЗ, атеросклероз, саркоидоз, бронхиальную астму, а также биовары Koala и Equine (Kutlin A., Roblin P.M., et al., 2007).

Рис. 1. Современная классификация хламидий. Жирным шрифтом выделены виды, патогенные для человека.

1.3. Генетические особенности C.trachomatis

Геном C.trachomatis был расшифрован группой ученых под руководством Stephens в 1998 году (Stephens R.S., Kalman S., 1998). Так было установлено, что геном хламидий является относительно небольшим по сравнению с другими бактериями и составляет не более 22% генома кишечной палочки (Плахова К.И., Кожушная О.С., 2012). Последовательность генома C.trachomatis состоит из 1 042 519 пар оснований хромосомы (58,7% А+Т) и 7493 пар оснований плазмиды (Stephens R.S., Kalman S., 1998). При этом геном хламидий кодирует 318 С/г/шмус/ш-специфичных открытых рамок считывания (ОРС), а также ОРС, гомологичные другим бактериям, но для которых функции до сих пор не установлены. Внехромосомные факторы наследственности впервые были расшифрованы в 1988 году Comanducci и соавторами (Comanducci М., Ricci S.,

1988). Плазмида кодирует 8 открытых рамок считывания (Thomas N. S., Clarke I. N., 1994). Предполагается, что некоторые гены, расположенные на плазмиде, обладают транскрипционной активностью и регулируют экспрессию хламидийных генов, а также могут кодировать факторы вирулентности хламидий (Carlson J.H., Whitmire W.M., 2008).

Анализ генома позволил выделить 894 генов, которые кодируют различные белки. Сходство с ранее исследованными белками других бактерий помогло определить функциональное назначение 604 (68%) кодируемых белков. Так, 35 (4%) белков были схожи с белками, имеющимися у других бактерий. Остальные 255 белков (28%) не давали сходства с сиквенсами, хранящимися в GeneBank. Кластеризация по сходным последовательностям показал, что 256 (29%) хламидийных белков в пределах одного генома группируются в 58 семейств (Stephens R.S., Kaiman S., 1998).

Исследования генетического материала хламидий показали, что они имеют все потенциальные возможности систем репарации ДНК и рекомбинации. Однако ген, кодирующий MutH, необходимый для Dam-направленной репарации неспаренных оснований, так и не был найден. Множество генов, кодирующих ферменты биосинтеза жирных кислот и фосфолипидов, подтверждают тот факт, что Chlamydiae синтезируют жирные кислоты, фосфатидилэтаноламин и фосфатидилглицерол de novo (Wylie J.L., Hatch G.M., 1997). Также, изучив хламидийный геном, были найдены гены, отвечающие за биосинтез аминокислот, которые синтезируются не de novo, поскольку путь биосинтеза оказался большей частью неполный. Следовательно, существуют другие пути получения аминокислот. Например, известно, что две аминотрансферазы (AspC, ТугВ) и сериновая гидроксиметилтрансфераза (GlyA) могут обеспечивать перенос групп для аспартата, фенилаланина, тирозина и глицина, но они не способны образовывать непосредственного предшественника субстратов. У хламидий также имеется оперон биосинтеза триптофана (trpA, trpB, trpR), однако гены trpD и trpE отсутствуют. Возможно, хламидии продуцируют функциональные эквиваленты TrpD и ТгрЕ, которые не обнаружили в результаете первичного исследования

(Stephens R.S., Kaiman S., 1998). Анализ генома показал, что гликолитический цикл редуцирован, поскольку не обнаружены некоторые ферменты пентофосфатного и гексозофосфатного путей. Некоторые особенности генома хламидий так и не нашли своего объяснения в связи с тем, что патоген в ходе приспособления к внутриклеточному паразитированию выработал уникальные механизмы биосинтеза. Так, например, у хламидий присутствуют все гены, кодирующии аминоацил-тРНК-синтетазы, за исключением для аспарагина и глутамина. У хламидий есть оперон, кодирующий три субъединицы глутамил-тРНК амидотрансферазы, который консервативен среди всех бактерий, за исключением E.coli и Н. infuenzae. У патогена были обнаружены гены двух одинаковых рибосамальных РНК оперона, полный набор рибосомальных белков, типичные гены факторов трансляции, ферменты для модификации РНК. Кроме того, следует отметить, что у хламидий не был обнаружен высоконсервативный ген, кодирующий белок FtsZ, который играет ключевую роль в делении клеток бактерий (Stephens R.S., Kaiman S., 1998).

Таким образом, исследования генетических особенностей хламидии позволили получить новые данные о свойствах микроорганизма, которые меняются по мере смены этапов жизненного цикла и в процессе развитии инфекции.

1.4. Жизненный цикл хламидий

Хламидии полиморфны, что связано с особенностями их репродукции. Уникальный цикл развития хламидий характеризуется чередованием двух различных форм существования - элементарных и ретикулярных телец (Belland R., Ojcius D.M.,et al., 2004).

Элементарные тельца (ЭТ) представляют собой мелкие (0,2-0,3 мкм) метаболически неактивные инфекционные частицы, которые располагаются вне клетки (Борисов Л.Б., 2005). Они имеют толстую оболочку, состоящую из внутренней и наружной мембран, что определяет их относительно высокую

устойчивость к неблагоприятным условиям окружающей среды. Внутри ЭТ имеется цитоплазма, содержащая плотно упакованные рибосомы, мелкие гранулы полисахаридной природы. Нуклеоид содержит плотно упакованную ДНК и часто имеет эксцентричное расположение, что характерно для вирулентных штаммов хламидий (Попов В.Л., 1979). Попадая внутрь клеток, элементарные тельца трансформируются в ретикулярные тельца. При этом происходит деконденсация плотно упакованной бактериальной хромосомы, которая из состояния «сверхспирализации» переходит в «релаксированную» кольцевидную форму. Это необходимо для экспрессии множества генов, кодирующих необходимые для жизнедеятельности ферменты и структурные макромолекулы (Попов В.Л., 1979).

Ретикулярные тельца (РТ) (инициальные) являются вегетативной неинфекционной формой хламидий, обычно имеют овоидную форму и крупнее элементарных телец в несколько раз (0,5-1,2 мкм). Они располагаются внутриклеточно около ядра (Schachter J., 1999). Внутри РТ имеется цитоплазма с рибосомами и нуклеоид, представленный фибриллами ДНК (Попов В.Л., 1979).

Размножение хламидий происходит в клетках, преимущественно эпителиальных (Zhong G.,2009). Элементарные тельца индуцируют фагоцитоз и захватываются клеткой-мишенью, попадая в нее эндоцитозным путем (рис.2). После проникновения в клетку элементарные тельца оказываются внутри фагосомы и блокируют ее слияние с лизосомами (Moulder J.W., 1991; Shaw E.I., Dooley С.А., et al, 2000). Благодаря этой особенности элементарные тельца не контактируют с лизосомальными ферментами и беспрепятственно размножаются внутри фагосомы.

Стадии развития

плазматическая мембрана

Ранняя Средняя стадия стадия

Поздняя стадия

Лизис клетки экструзия

Рис. 2. Жизненный цикл С.trachomatis (Valdivia R.H., 2008).

Внутри клеток элементарные тельца трансформируются в метаболически активные ретикулярные тельца. РТ-содержащие вакуоли формируют новые паразитарные структуры, которые называются включением (Bastidas R.J., Elwell С.А., et al., 2013).

В то время как включения увеличиваются в размерах (Kumar Y., Valdivia R.H., 2008), хламидийная репликация становится несинхронной, производя обе формы жизненного цикла патогена (РТ и ЭТ), используя энергию и жизненно необходимые вещества зараженной клетки хозяина. В частности, хламидии способны получать производные липиды хозяйской клетки, включающие в себя стеролы, сфинголипиды, глицерофосфолипиды и нейтральные липиды везикуло-зависимым и везикуло-независим механизмами. Было показано, что хламидийные включения перехватывают везикулы, движущие от аппарата Гольджи, чтобы получить сфинголипиды и холестерол (Scidmore М.А, Fischer E.R., et al., 1996).

В итоге, большая часть цитоплазматического пространства клетки хозяина занята включением, и спустя 48 часов элементарные тельца выходят из клетки наружу, заражая соседние интактные клетки, и цикл повторяется (Zhong G., 2009). Механизм выхода хламидий из инфицированной клетки это сложный процесс, состоящий по крайне мере из двух описанных путей: клеточного лизиса за счет активации цистеиновых протеаз и высвобождения включения во внеклеточное пространство за счет актин-зависимого и миозин-зависимого механизмов (Hybiske К., Stephens R.S., et al., 2007).

1.4.1. Образование хламидийных включений

Внутриклеточная фагосома, содержащая ЭТ, претерпевает быстрое созревание от стадии ранней эндосомы до поздней эндосомы. В процессе классического эндосомального созревания эндосома проходит несколько последовательных стадий (Huotari J., Helenius А., 2011). Для каждой фазы созревания эндосом существуют специфичные Rab-белки, маркеры данного

процесса (Stenmark Н., Olkkonen V.M., 2001). Различают три типа эидосом: ранние (первичные), поздние (мультивезикулярные тельца) и рециркулирующие эндосомы. Они различаются по времени, которое требуется для достижения эндоцитированного материала этих эндосом, по морфологии и по функциональным маркёрам (Huotari J., Helenius А., 2011).

Вероятно, некоторые процессы в образующихся включениях регулируются синтезированными эффекторными белками (Li Z.,Chen С., et al., 2008), которые транслоцируются на ранних стадиях после инвазии. Кроме того, ЭТ обладает уникальным свойством, предотвращающим слияние лизосом с ЭТ-содержащими эндосомами. Эндосомы, содержащие хламидии, первоначально имеют маркеры плазматической мембраны, однако, возникающие включения избавляются от этих маркеров уже через полчаса после проникновения ЭТ (Valdivia R.H., 2008). Включение тесно связывается с рециркулирующими эндосомами клетки хозяина, а также с моторным белком динеином, АТФ-зависимо перемещающимся по микротрубочке по направлению к ее минус концу, расположенному в центре организации микротрубочек (Scidmore М.А, Fischer E.R., et al., 2003). В течение этого процесса, подмножество белков Rho-GTPase, центральных регуляторов мембранного транспорта и идентификации органелл, собираются на мембране включения. Вероятно, Rab-белки и ассоциированные с ними белки ответственны за уникальные способности включений селективно связоваться с органеллами клетки хозяина. Кроме того, соединение Rab-белков с мембраной включения происходит видоспецифическим образом: белки Rabí, Rab4, Rabil с включениями всех хламидийных видов, a Rab6 и RablO с включениями C.trachomatis и C.pneumoniae соответственно (Rzomp К.A., Scholtes L.D., et al., 2003).

Таким образом, белки семейства Rab GTFase, ассоциированные с классическим эндосомальным транспортом, не локализуются на хламидийных включениях. Кроме того, фосфоинозитиды, которые являются маркерами эндосомальной и плазматической мембран, отсутствуют на хламидийных включениях (Moorhead A.R., Rzomp К.А., et al., 2007). Так, включения имеют свой

уникальный путь, отличающийся от классического эндосомального пути. Но это не означает, что миграция включений полностью обособлена от мембранного транспорта и некоторые белки, необходимые для работы нормального транспорта, связанного с аппаратом Гольджи и рециркуляцией эндосом, могут также локазизоваться и на хламидийных включениях (Cocchiaro J.L., Valdivia R.H.,et al., 2009).

Мембрана хламидийного включения является важной структурой, осуществляющей связь между клеткой хозяина и бактерией. Мембрана включений содержит большое количество интегральных белков, участвующих в модификации клеточных процессов. Белки семейства Inc, упакованные в мембране ЭТ, экспрессируются в течение часа после инвазии бактериальной клетки. Это означает, что модификация мембраны образующихся включений, возникающая на первых этапах инфицирования клетки, связана непосредственно с Inc-белками (Mitai J., Miller N.J., et al., 2013).

Различные Inc-белки регулируют взаимосвязь патогена со специфическими субклеточными структурами клетки хозяина. Так, например, IncA/CT119, СТ223, СТ813 являются представителями SNARE комплекса. Белки SNARE являются интегральными мембранными белками и играют ведущую роль в транспорте везикул. Везикулярные SNARE белки (v-SNARE) образуют пару со специфическими целевыми SNARE (t-SNARE) белками на мембране акцептора, чтобы обеспечить специфичность везикулярной мишени и приток энергии, требующейся для слияния двух мембран (Chen Y.A., Scheller R.H., et al., 2001). Хламидийный белок IncA связывается с некоторыми SNARE белками клетки хозяина через SNARE-подобный домен. Белки SNARE, Vamp3, Vamp7, Vamp8, связаны с событиями эндоцитозного пути, обуславливающими слияние мембран. Другие SNARE белки не собираются на мембране включения, такие как Vamp4 , Sec22, и связаны с экзоцитозом и транспортом везикул от эндоплазматического ретикулума к аппарату Гольджи (Delevoye С., Nilges M., et al., 2008).

Однако белок IncA в большей степени ингибирует слияние чистого белка с лизосомами, нежели способствует слиянию мембран. В тестах in vitro было

показано, что белок нарушает слияние везикулярных и целевых SNARE белков в лизосомах также хорошо, как и t-SNARE и v-SNARE-опосредованный мембранный транспорт in vivo (Paumet F., Wesolowski J., et al., 2009). Возможно, именно поэтому некоторые белки из семейства Inc обнаружены в псевдо-SNARE участке, которые действуют как ингибирующие SNARE белки (iSNARE), чтобы лимитировать слияние с везикулами клетки хозяина (Paumet F., Wesolowski J., et al., 2009).

Но главной ролью белка IncA является его участие в гомотипичном слиянии хламидийных включений (Hackstadt Т., Scidmore-Carlson М.А., et al., 1999). Во время заражения высокой дозой ЭТ, в клетке могут выявляться не слившиеся включения, которые могут сохраняться в инфицированной клетке вплоть до 10 часов после заражения. Но уже позднее включения начинают сливаться и формировать одно гигантское включение (Fields К.А., Hackstadt Т., 2002) Если заблокировать функцию IncA белков с помощью специфических антител или понижением температуры до 32°С, снижающим синтез белка, то все это приведет к формировании множественных включений (Van Ooji С., Homola Е., et al., 1998; Fields К.A., Fischer, E. et al., 2002).

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Давыдова, Дарья Юрьевна, 2014 год

Список использованной литературы

1. Борисов, Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология / Л.Б. Борисов // М.: Медицинское информационное агентство. -2005. -736 с.

2. Гинцбург, А.Л. Система секреции III типа у бактерий-перспективная мишень для разработки нового поколения антибактериальных препаратов / А. Л. Гинцбург, Н. А. Зигангирова, В. В. Зорина // Вестник РАМН. - 2008. - №10. -С.34-39.

3. Зигангирова, H.A. Мишень-направленный поиск антивирулентных лекарственных средств / Н.А Зигангирова, Е.Д. Федина, В.В. Зорина, П.А. Борцов, Е.А. Токарская, A.C. Карягина, A.B. Алексеевский, A.B. Краюшкин, Е.С. Заякин,

B.Н. Яровенко, А.Л. Гинцбург //Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 2009. - №4. - С.71- 77.

4. Прохоренков, В.И., Шапран М.В. О классификации урогенитального хламидиоза / В. И. Прохоренков // ИППП. -2002. - № 2. С. 3-6.

5. Лабинская, A.C. Хламидии - возбудители хламидиозов человека. Руководство по медицинской микробиологии / A.C. Лабинская, H.H. Костюкова,

C.М. Иванова// М.: Бином. - 2010. -С.867-895.

6. Лакин, Г.Ф. Биометрия / Г.Ф. Лакин. - М.: Высшая школа, 1990. -

352 с.

7. Плахова, К.И. Генетические варианты С. trachomatis и поиск факторов вирулентности / К.И. Плахова, О.С. Кожушная, М.Р. Рахматулина, Н.В. Фриго// Вест, дерматол. и венерол. -2012- №3. С. 48-54.

8. Попов, В.Л. Ультраструктура гальпровий (хламидий) / В.Л. Попов// М.: Гальпровиозы (хламидиозы) человека и животных. -1979. - С. 12-17.

9. Хрянин, A.A. Лечение урогенитального хламидиоза / A.A. Хрянин,// Вест, дерматол. и венерол. -1998. -№4. С. 46-47.

10. Шипицына, Е.В. Устойчивость Chlamydia trachomatis к антибиотикам in vitro: методологические аспекты и клиническое значение / Е.В. Шипицына,

A.M. Савичева, Т.А. Хуснутдинова, K.B. Шалепо, О.Ю. Мисюрина, В.М. Говорун, М. Домейка// КМАХ. -2004. -№6. С. 54-64.

11. Alksne, L.E. Target-based antimicrobial drug discovery / L.E. Alksne , P.M. Dunman // Methods Mol. Biol. - 2008.- Vol. 43l.-P. 271-283.

12. Balsara, Z.K.Chlamydia trachomatis infection induces cleavage of the mitotic cyclin В1/ Z.R. Balsara, S. Misaghi, J.N. Lafave, M.N. Stambach // Infect. Immun. - 2006. - Vol. 74. - P. 5602-5608.

13. Baron, C. Targeting bacterial secretion systems: benefits of disarmament in the microcosm / C. Baron, B. Coombes // Infect Disord Drug Targets . -2007. - Vol.7-P. 19-27.

14. Bastidas, R.J. Chlamydial intracellular survival strategies / R.J. Bastidas,

C.A. Elwell, J.N. Engel, R.H. Valdivia // Cold Spring Harb Perspect Med. -2013. -Vol. 3,№5.-P. a010256.

15. Beatty, W.L. Trafficking from CD63-positive late endocytic multivesicular bodies is essential for intracellular development of Chlamydia trachomatis / W.L. Beatty// J. Cell. Sei. -2006. - Vol. 119. - P. 350- 359.

16. Bednar, M.M. Chlamydia Protease-Like Activity Factor (CPAF): Characterization of Proteolysis Activity In Vitro and Development of a Nanomolar Affinity CPAF Zymogen-Derived Inhibitor / M.M. Bednar, I.Jorgensen, R.H. Valdivia,

D.G. McCafferty // Biochemistry. -2011. - Vol. 50, №35. - P. 7441-7443.

17. Beiland, R.J. Genomic transcriptional profiling of the developmental cycle of Chlamydia trachomatis / R.J. Belland, G. Zhong, D.D. Crane, D. Hogan, D. Sturdevant, J. Sharma, W.L. Beatty, H.D. Caldwell // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. -2003. - Vol. 100. - P. 8478 - 8483.

18. Belland, R. Chlamydia / R. Belland, D.M. Ojcius , G.I.Byrne //Nat ReMicrobiol. -2004. - Vol.2, №7. - P. 530-531.

19. Betts, H.J. Effector protein modulation of host cells: examples in the Chlamydia spp. Arsenal / H. J.Betts, K. Wolf, K.A. Fields // Curr. Opin. Microbiol . -2009.-Vol.12.-P. 81-87.

20. Bollag D.M., Protein methods / D. M. Bollag, M. Daniel// New York-1996.-P. 415.

21. Brown, T.H. Comparison of immune responses and protective efficacy of intranasal prime-boost immunization regimens using adenovirus-based and CpG/ HH2 adjuvanted-subunit vaccines against genital Chlamydia muridarum infection T.H. Brown, J. David, E. Acosta-Ramirez , J.M. Moore ,S. Lee, G. Zhong, R.E. Hancock, Z. Xing, S.A. Halperin, J. Wang // Vaccine.-2012. - Vol. 30, №2. - P. 350-360.

22. Buchholz, K.R. The extracellular signal-regulated kinase/mitogen-activated protein kinase pathway induces theinflammatoryfactor interleukin-8 following Chlamydia trachomatis infection / K.R. Buchholz, R.S. Stephens // Infect. Immun. -2007. - Vol.75, №12. - P. 5924-5929.

23. Carabeo, R.A. Golgi-dependent transport of cholesterol to the Chlamydia trachomatis inclusion / R.A. Carabeo, D.J. Mead, T. Hackstadt // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. - 2000. - Vol. 100. - P. 6771- 6776.

24. Carabeo, R.A. Requirement for the Rae GTPase in Chlamydia trachomatis invasion of non-phagocytic cells /R.A. Carabeo, S.S. Grieshaber, A. Hasenkrug, C. Dooley, T. Hackstadt //Traffic . - 2004. - Vol. 5. - P. 418^25.

25. Carlson, J.H. The Chlamydia trachomatis plasmid is a transcriptional regulator of chromosomal genes and a virulence factor / J.H. Carlson, W.M. Whitmire, D.D. Crane, L. Wicke, K. Virtaneva, D.E. Sturdevant, J.J. Kupko 3rd, S.F. Porcella, N. Martinez-Orengo et al.// Infect. Immun. -2008. - Vol.76 №6 - P. 2273-2283.

26. Chellas-Gery, B. Human GCIP interacts with CT847, a novel Chlamydia trachomatis type III secretion substrate, and is degraded in a tissue-culture infection model / B. Chellas-Gery, C.N. Linton, K.A. Fields // Cell. Microbiol. - 2007. - Vol. 9. -P. 2417-2430.

27. Chen, A.L. CPAF: a Chlamydial protease in search of an authentic substrate /A.L. Chen , K.A. Johnson , K.J. Lee, C. Sütterlin, M. Tan // PLoS Pathog. -2012. - Vol. 8, №8.- P. el002842.

28. Chen, D. Secretion of the chlamydial virulence factor CPAF requires the Sec-dependent pathway/ D. Chen , L. Lei , C. Lu , R. Flores , M.P. DeLisa , T.C.

Roberts , F.E. Romesberg , G. Zhong// Microbiology. - 2010. - Vol.156, №10. - P. 3031-3040.

29. Chen, Y.A. SNARE-mediated membrane fusion / Y.A. Chen, R.H.Scheller // Nat Rev. Mol. Cell Biol. -2001. - Vol. 2, №2. - P. 98 -106.

30. Christian , J. Cleavage of the NF-kB family protein p65/RelA by the chlamydial protease-like activity factor (CPAF) impairs proinflammatory signaling in cells infected with Chlamydiae / J. Christian, J. Vier, S.A. Paschen, G.Hacker // J. Biol. Chem. -2010. - Vol. 285, №53. - P. 41320-41327.

31. Christian, J.G. Targeting of a chlamydial protease impedes intracellular bacterial growth / J.G. Christian, J. Heymann , S.A. Paschen, J.Vier, L. Schauenburg, J. Rupp, T.F. Meyer, G.Hacker, D. Heuer // PLoS Pathog. - 2011. - Vol. 7.- P. el002283.

32. Clark E. Refolding of recombinant proteins / E. Clark // Curr. Opin. Biotechnol. -1998. - Vol. 9, №2. -P. 157-163.

33. Clausen, J.D. Chlamydia trachomatis utilizes the host cell microtubule network during early events of infection/ J.D. Clausen, G. Christiansen, H.U. Hoist, S. Birkelund II Mol. Microbiol. -1997. - Vol. 25, №3. - P. 441-449.

34. Cocchiaro J. L. New insights into Chlamydia intracellular survival mechanisms /J.L. Cocchiaro, R.H. Valdivia II Cell Microbiol. -2009. - Vol. 11, №11. -P. 1571-1578.

35. Collinson, I. The structure of the bacterial protein translocation complex SecYEG /1. Collinson // Biochem. Soc. Trans. - 2005. -Vol.33.- P. 1225-1230.

36. Comanducci, M. The structure of a plasmid of Chlamydia trachomatis believed to be required for growth within mammalian cells / M. Comanducci, S. Ricci, G. Ratti // Mol. Microbiol.- 1988. - Vol.2 № 4. - P. 531-538.

37. Cong, Y. Intranasal immunization with chlamydial protease-like activity factor and CpG deoxynucleotides enhances protective immunity against genital Chlamydia muridarum infection / Y. Cong, M. Jupelli, M.N. Guentzel, G. Zhong, A.K. Murthy, B. P. Arulanandam // Vaccine.-2007. - Vol. 25, №19. - P. 37773-37780.

38. de Barbeyrac , B. Current aspects of Chlamydia trachomatis infection / B. de Barbeyrac // Presse Med. - 2013. - Vol. 42. - P. 440- 445.

39. Delevoye, C. Conservation of the biochemical properties of IncA from Chlamydia trachomatis and Chlamydia caviae: oligomerization of IncA mediates interaction between facing membranes / C. Delevoye, M. Nilges, A. Dautry-Varsat, A. Subtil // J. Biol. Chem. -2004.- Vol. 279.- P. 46896 - 46906.

40. Delevoye, C. SNARE protein mimicry by an intracellular bacterium / C. Delevoye, M. Nilges, P. Dehoux, F. Paumet, S. Perrinet, A. Dautry-Varsat, A. Subtil // PLoS Pathog. -2008. - Vol. 4, №3. - P. el000022.

41. Dick, L.R. Mechanistic studies on the inactivation of the proteasome by lactacystin in cultured cells / L.R. Dick, A.A. Cruikshank, A.T. Destree, L. Grenier, T.A. McCormack, F.D. Melandri, S.L. Nunes, V.J. Palombella, L.A. Parent, L.Plamondon, R.L. Stein //J Biol Chem. -1997. - Vol. 372, № 1. - P. 182 -188.

42. Dong, F. Cleavage of host keratin 8 by a Chlamydia-SQcretzd protease / F. Dong, H. Su, Y. Huang, Y. Zhong, G. Zhong // Infect. Immun. - 2004. - Vol. 72, №7. -P. 3863-1868.

43. Dong, F. Intramolecular dimerization is required for the chlamydia-secreted protease CPAF To degrade host transcriptional factors / F. Dong, J. Sharma, Y. Xiao, Y. Zhong, G. Zhong // Infect. Immun. - 2004. - Vol. 72, № 7. - P. 3869-3875.

44. Dong, F.Cleavage-dependent activation of a Chlamydia-secreted protease / F. Dong, M.Pirbhai, Y.Zhong, G .Zhong // Mol. Microbiol. -2004. -Vol.52, №5. - P. 1487-1494.

45. Dong, F.Degradation of the proapoptotic proteins Bik, Puma, and Bim with Bcl-2 domain 3 homology in Chlamydia trachomatis-mfected cells / F. Don, M. Pirbhai, Y. Xiao, Y. Zhong, Y. Wu, G. Zhong //Infect. Immun. - 2005. - Vol.73, №3. -P. 1861-1864.

46. Engel, J. Tarp and Arp: How Chlamydia induces its own entry / J. Engel // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 2004. - Vol. 101. - P. 9947-9948.

47. Everett, K.D. Emended description of the order Chlamydiales, proposal of Parachlamydiaceae fam. nov. and Simkaniaceae fam. nov,, each containing one

monotypic genus, revised taxonomy of the family Chlamydiaceae, including a new genus and five new species, and standards for the identification of organisms / K.D. Everett, R.M. Bush , A.A. Andersen // Int. J. Syst. Bacteriol. - 1999. -Vol.49, №2. -P.415- 440.

48. Fadel, S. Chlamydia trachomatis OmcB protein is a surface-exposed glycosaminoglycan-dependent adhesion / S. Fadel, A. Eley // J. Med. Microbiol. -2007. -Vol. 56, №1.-P. 15-22.

49. Fan, P. Chlamydia pneumoniae secretion of a protease-like activity factor for degrading host cell transcription factors required for [correction of factors is required for] major histocompatibility complex antigen expression / P. Fan, F. Dong, Y. Huang , G. Zhong // Infect. Immun. -2002. - Vol.70, № 1. - P. 345-349.

50. Fields, K.A. Chlamydia trachomatis type III secretion: evidence for a functional apparatus during early-cycle development / K.A. Fields, D.J. Mead, C.A. Dooley, T. Hackstadt // Mol. Microbiol. - 2003. - Vol. 48. - P. 671- 683.

51. Fields, K.A. Inhibition of fusion of Chlamydia trachomatis inclusions at 32 degrees C correlates with restricted export of IncA / K.A. Fields, E. Fischer, T. Hackstadt // Infect. Immun. -2002. -Vol.70, № 7.- P. 3816-3823.

52. Fields, K.A. The chlamydial inclusion: escape from the endocytic pathway/ K.A. Fields, T. Hackstadt //Annu. Rev. Cell Dev. Biol. -2002. - Vol. 18.- P. 221-245.

53. Findlay, H.E. Surface expression, single-channel analysis and membrane topology of recombinant Chlamydia trachomatis Major Outer Membrane Protein / H.E. Findlay, H. McClafferty, R.H. Ashley // BMC Microbiol. -2005. - Vol.5, №5. - P. 115.

54. Foury, F. Human genetic diseases: a cross-talk between man and yeast / F. Foury // Gene. - 1997. - Vol. 195, №1. -P. 1-10.

55. Fox, A. Muramic acid is not detectable in Chlamydia psittaci or Chlamydia trachomatis by gas chromatography-mass spectrometry / A. Fox, J.C. Rogers, J. Gilbart, S. Morgan, C.H. Davis, S. Knight, P.B. Wyrick // Infect. Immun. -1990. -Vol.58, №3.-P. 835-837.

56. Garrett, A.J. Some properties of the polysaccharide from cell cultures infected with TRIG agent {Chlamydia trachomatis) / A.J. Garrett // J. Gen. Microbiol. -1975.-Vol.90.-P.133-139.

57. Gauthier, A. Transcriptional inhibitor of virulence factors in enteropathogenic Escherichia coli / A.Gauthier, M. L Robertson, M. Lowden, J. A. Ibarra, J. L. Puente, B. B. Finlay // Antimicrob. Agents Chemother. - 2005. -Vol. 49. -P. 4101-4109.

58. Glynou, K. One-step purification and refolding of recombinant photoprotein aequorin by immobiliedmetal-ion affinity chromatography / K. Glynou, P.C. Ioannou , T.K. Christopoulos // Protein. Expr. Purif. -2003. -Vol. 27, №2. - P. 384-390.

59. Gottlieb, S.L. Introduction: The natural history and immunobiology of Chlamydia trachomatis genitalinfection and implications for chlamydia control / S.L. Gottlieb , R.C. Brunham , G.I. Byrne , D.H. Martin , F. Xu , S.M. Berman // J Infect Dis. -2010. - Vol.15. - P. 85- 87.

60. Grieshaber, S.S. Chlamydia trachomatis uses host cell dynein to traffic to themicrotubule-organizing center in a p50 dynamitin-independent process / S.S. Grieshaber, N.A.Grieshaber, T. Hackstadt // J. Cell. Sei. - 2003. - Vol. 116. - P. 3793 -3802.

61. Grieshaber, S.S. Chlamydia trachomatis causes centrosomal defects resulting in chromosomal segregation abnormalities / S.S. Grieshaber, N.A. Grieshaber, N. Miller, T. Hackstadt // Traffic. -2006. - Vol. 7, №8.- P. 940 - 949.

62. Groll, M. Inhibitor-binding mode of homobelactosin C to proteasomes: New insights into class I MHC ligand generation / M. Groll, O. V. Larionov, R. Huber, A. de Meijere 11 Proc .Natl. Acad. Sei. USA. -2006. - Vol.103, №12. - P. 4576^1579.

63. Hackstadt, T. The Chlamydia trachomatis IncA protein is required for homotypic vesicle fusion/ T. Hackstadt, M.A. Scidmore-Carlson , E.I. Shaw , E.R. Fischer // Cell. Microbiol. -1999. - Vol.1.- P. 119-130.

64. Heinzen, R.A. Differential interaction with endocytic and exocytic pathways distinguish parasitophorous vacuoles of Coxiella burnetii and Chlamydia

trachomatis / R.A. Heinzen, M.A Scidmore, D.D. Rockey, T. Hackstadt // Infect. Immun. -1996. - Vol.64. - P. 796-809.

65. Heuer, D. Chlamydia causes fragmentation of the Golgi compartment to ensure reproduction / D. Heuer, A. Rejman Lipinsk, N. Machuy, A.Karlas, A. Wehrens. // Nature. - 2009. - Vol. 4571. - P. 731-735.

66. Hou, S. Chlamydia trachomatis outer membrane complex protein B (OmcB) is processed by the protease CPAF / S. Hou, L. Lei, Z. Yang, M.Qi, Q. Liu, G. Zhong // J. Bacterid. -2013. - Vol. 195, № 5. - P. 951-957.

67. Huang, Z. Structural basis for activation and inhibition of the secreted Chlamydia protease CPAF / Z. Huang, Y. Feng, D. Chen, X.Wu, S. Huang // Cell Host Microbe. - 2008. - Vol. 4, №6. - P. 529-542.

68. Hudson, D. L. Inhibition of type III Secretion in Salmonella enterica serovar Typhimurium by small-molecule inhibitors / D. L. Hudson, A. N. Layton, T. R. Field, A. J.Bowen, H. Wolf-Watz, M. Elofsson, M. P. Stevens, E. Galyov // Antimicrob. Agents Chemother. 2007. -Vol.51. - P. 2631-2635.

69. Hueck, C.J.Type III protein secretion systems in bacterial pathogens of animals and plants / C.J. Hueck // Microbiol Mol Biol Rev. -1998. - Vol.62, №2. - P. 379-433.Huotari, J. Endosome maturation/ J. Huotari, A. Helenius// MBO J. - 2011. -Vol. 30, №17. -P. 3481-3500.

70. Hybiske, K. Mechanisms of host cell exit by the intracellular bacterium Chlamydia. K. Hybiske, R.S. Stephens / Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -2007. -Vol.104.-P.l 1430-11435.

71. Ito, K. The Sec protein-translocation pathway / K. Ito, H. Mori // Trends in Microbiology. -2011. - Vol. 9, №10. - P. 494-500.

72. Jewett, T.J. Chlamydial TARP is a bacterial nucleator of actin / T.J. Jewett, E.R. Fischer, D.J. Mead, T. Hackstadt // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2006. - Vol.103. -P. 15599-15604.

73. Jewett, T J .Chlamydia trachomatis tarp is phosphorylated by src family tyrosine kinases/ T.J. Jewett , C.A. Dooley , D.J. Mead , T. Hackstadt // Biochem Biophys Res Commun. - 2008. - Vol. 371, №2. - P. 339 - 344.

74. Jorgensen, I. The Chlamydia protease CPAF regulates host and bacterial proteins to maintain pathogen vacuole integrity and promote virulence /1. Jorgensen, M. M. Bednar, V. Amin, B. K. Davis, J. P.Y. Ting, De. G. McCafferty, R. H. Valdivia // Cell Host & Microbe. -2011. - Vol.10. - P. 21-32.

75. Kariagina, A.S.The choice of the targets and the search for their inhibitors by means of computer simulation for the development of innovative preparations to treat of chronic bacterial infections / Kariagina A.S., Zigangirova N.A., Grishin A.V., Davydova D.Iu., Krivozubov M.S., Kirsanov D.D. Zaiakin E.S. // Vestn. Ross. Akad. Med. Nauk.-2011. -Vol. 10. - P. 22-28.

76. Karunakaran , K.P. Molecular analysis of the multiple GroEL proteins of Chlamydiae / K.P. Karunakaran, Y. Noguchi, T. D. Read, A.Cherkasov, J. Kwee, C. Shen, C.C. Nelson, R. C. Brunham // J. Bacteriol. 2003. - Vol.185, №6. - P. 19581966.

77. Kauppi, A. M. Targeting bacterial virulence: Inhibitors of type III secretion in Yersinia! A. M.Kauppi, R. Nordfelth, H. Uvell, H.Wolf-Watz, M. Elofsson // Chem. Biol. -2003. -Vol. 10. - P. 241-249.

78. Kawana, K. CD Id degradation in Chlamydia trachomatis-infected epithelial cells is the result of both cellular and chlamydial proteasomal activity / K. Kawana , A.J. Quayle , M. Ficarra, J.A. Ibana , L. Shen , Y. Kawana , H. Yang, L. Marrero , S. Yavagal , S.J. Greene , Y.X. Zhang , R.B. Pyles , R.S. Blumberg, D.J. Schust / /J. Biol. Chem. - 2007. - Vol. 28, № 10. - P. 7368- 7375.

79. Kultin, A. Molecular characterization of Chlamydophila pneumonia isolates from Western barred bandicoots / A. Kutlin , P. M. Roblin , S. Kumar, S. Kohlhoff, T. Bodetti, P. Timms , M. R. Hammerschlag // J. Med. Microbiol. - 2007. -Vol.56, №3.-P. 407-417.

80. Kumar, Y. Actin and intermediate filaments stabilize the Chlamydia trachomatis vacuole by forming dynamic structural scaffolds / Y. Kumar, R.H. Valdivia// Cell Host Microbe. - 2008. - Vol. 4, № 2. - P. 159-169.

81. Kumar, Y. Reorganization of the host cytoskeleton by the intracellular pathogen Chlamydia trachomatis / Y. Kumar, R.H. Valdivia // Commun. Integr. Biol. -2008.-Vol. 1, № 2. - P. 175-177.

82. Kumar, Y. The obligate intracellular pathogen Chlamydia trachomatis targets host lipid droplets / Y. Kumar, J. Cocchiaro, R.H.Valdivia // Curr. Biol. - 2006. -Vol. 16.-P. 1646-1651.

83. Lad, S.P. Cleavage of p65/RelA of the NF-kappaB pathway by Chlamydial S.P. Lad , J. Li , J. da Silva Correia, Q. Pan , S. Gadwal , RJ. Ulevitch // Proc .Natl. Acad. Sci. USA. - 2007. - Vol .104, №8. - P. 2933 -2938.

84. Laemmli, U. K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 / U. K. Laemmli // Nature. - 1970. - Vol. 227. - P. 680 - 685.

85. Lee, V. T. Protein secretion and the pathogenesis of bacterial infections / V.T.Lee, O. Schneewind // Genes Dev. - 2001- Vol.15. - P. 1725-1752.

86. Lesser, C. F. Expression of microbial virulence proteins in Saccharomyces cerevisiae models mammalian infection / C. F.Lesser, S. I. Miller // EMBO J. - 2001 -Vol.20.-P. 1840-1849.

87. Li, Z. Characterization of fifty putative inclusion membrane proteins encoded in the Chlamydia trachomatis genome / Z. Li , C. Chen, D. Chen,Y. Wu, Y. Zhong Y, G. Zhong // Infect. Immun. -2008. - Vol.76. - P. 2746-2757.

88. Luirink, J. SRP-mediated protein targeting: structure and function revisited. J. Luirink, I. Sinning / Biochim Biophys Acta. -2004. - Vol.1694, №1-3. - P. 17-35.

89. Malhotra, M. Genital Chlamydia trachomatis: An update / M. Malhotra, S. Sood , A. Mukherjee , S. Muralidhar , M. Bala // Indian J. Med. Res. - 2013. - Vol. 138, №3.-P. 303-316.

90. Mania-Pramanik, J. Current Chlamydia trachomatis infection, a major cause of infertility /J. Mania-Pramanik, S. Kerkar , S. Sonawane , P. Mehta , V. Salvi // J Reprod Infertil. - 2012. - Vol.13, №4.-P. 204-210.

91. Marra, A. Targeting virulence for antibacterial chemotherapy: identifying and characterising virulence factors for lead discovery /A. Marra // Drugs R. D. -2006-Vol. 7.-P. 1-16.

92. Matanis, T. Bicaudal-D regulates COPI-independent Golgi-ER transport by recruiting the dynein-dynactin motor complex / T. Matanis ,A. Akhmanova, P. Wulf , E. Del Nery , T. Weide , T. Stepanova , N. Galjart , F. Grosveld , B. Goud, C.I. De Zeeuw, A. Barnekow, C.C. Hoogenraad // Nat. Cell Biol. -2002. - Vol. 4, №12. - P. 986-992.

93. McCoy, A.J. In vitro and in vivo functional activity of Chlamydia MurA, a UDP-N-acetylglucosamine enolpyruvyl transferase involved in peptidoglycan synthesis and fosfomycin resistance / AJ. McCoy, R.C. Sandlin, A.T. Maurelli // J Bacteriol. -2003.-Vol.185, №4.-P. 1218-1228.

94. Mehlitz, A. Complex kinase requirements for Chlamydia trachomatis Tarp phosphorylation / A. Mehlitz, S. Banhart, S. Hess, M. Selbach, T.F. Meyer // FEMS Microbiol. Lett. -2008. - Vol.289. - P. 233-240.

95. Mital, J. Role for chlamydial inclusion membrane proteins in inclusion membrane structure and biogenesis / Mital J, Miller NJ, Dorward DW, Dooley CA, Hackstadt T. // PLoS One. -2013. - Vol. 8, №5. - P. e63426.

96. Mital, J. Specific chlamydial inclusion membrane proteins associate with active Src family kinases in microdomains that interact with the host microtubule network / J.Mital, N.J. Miller, E.R. Fischer, T. Hackstadt // Cell Microbiol. -2010. -Vol. 12, №9.-P. 1235-12 49.

97. Moorhead, A.R.The Rab6 effector Bicaudal D1 associates with Chlamydia trachomatis inclusions in a biovar-specific manner / A.R. Moorhead, K.A. Rzomp, M.A. Scidmore // Infect. Immun. - 2007. - Vol. 75. - P. 781 - 791.

98. Morrison, R.P. Immunity to murine chlamydial genital infection / R.P. Morrison, H.D. Caldwell // Infect Immun. -2000. - Vol. 70, №6. - P. 2741-2751.

99. Morrison, S.G. Immunity to murine Chlamydia trachomatis genital tract reinfection involves B cells and CD4(+) T cells but not CD8(+) T cells / S.G. Morrison, H. Su, H.D. Caldwell, R.P. Morrison // Infect. Immun. - 2000. - Vol. 68, №12.-P. 6979-6987.

100. Moulder, J.W. Interaction of chlamydiae and host cells in vitro / J.W. Moulder // Microbiol. Rev. - 1991. - Vol.55. - P. 143-190.

101. Murthy, A.K. Chlamydia trachomatis pulmonary infection induces greater inflammatory pathology in immunoglobulin A deficient mice / A.K. Murthy, J. Sharma, J. J. Coalson, G. Zhong, B. P. Arulanandam // Cell. Immunol. -2004. - Vol. 230 - P. 56-64.

102. Murthy, A.K. Chlamydial protease-like activity factor induces protective immunity against genital chlamydial infection in transgenic mice that express the human HLA-DR4 allele / A.K. Murthy, Y. Cong, C. Murphey, M.N. Guentzel, T.G. Forsthuber,G. Zhong, B.P. Arulanandam // Infect. Immun. -2006. - Vol. 74, №12. - P. 6722-6729.

103. Murthy, A.K. Chlamydial protease-like activity factor-insights into immunity and vaccine development / A.K. Murthy, M.N. Guentzel, G. Zhong, B.P. Arulanandam //J. Reprod. Immunol. -2009. - Vol. 83, №1-2. - P. 179-184.

104. Murthy, A.K. Intranasal vaccination with a secreted chlamydial protein enhances resolution of genital Chlamydia muridarum infection, protects against oviduct pathology, and is highly dependent upon endogenous gamma interferon production / A.K. Murthy, J.P. Chambers, P.A. Meier , G. Zhong, B.P. Arulanandam // Infect. Immun. -2007. - Vol. 75, №2. - P. 666-676.

105. Nesterenko, M.V. A simple modification of Blum's silver stain method allows for 30 minute detection of proteins in polyacrylamide gels / M.V. Nesterenko, M. Tilley, S.J. Upton // J. Biochem. Biophys. Methods. - 1994. - Vol. 28, №3. - P. 239-242.

106. Paetzel, M. Signal peptidases / M. Paetzel, A. Karla, N. C. Strynadka, R. E. Dalbey // Chem. Rev. - 2002. - Vol.102. - P. 4549^1580.

107. Paschen, S.A.Cytopathicity of Chlamydia is largely reproduced by expression of a single chlamydial protease / S.A. Paschen, J.G. Christian, J. Vier, F. Schmidt, A. Walch, D.M. Ojcius, G. Hacker // J. Cell Biol. - 2008. - Vol. 182, № 1. -P.117- 127.

108. Paumet, F. Intracellular bacteria encode inhibitory SNARE-like proteins / F. Paumet, J. Wesolowski , A. Garcia-Diaz , C. Delevoye , N. Aulner, A. H. Shuman, A. Subtil, J.E. Rothman // PLoS One. -2009- Vol.4, №10. - P. e7375.

109. Peng, S. Identifying multiple-target ligands via computational chemogenomics approaches / S. Peng , X. Lin, Z. Guo, N. Huang // Curr.Top. Med. Chem. -2012 .- Vol.12, №12.-P. 1363-1375.

110. Peters, J. Type III secretion à la Chlamydia / J.Peters, D.P. Wilson , Myers G, P. Timms , P.M. Bavoil // Trends. Microbiol. -2007. - Vol. 15, №6. - P. 241251.

111. Pirbhai, M. The secreted protease factor CPAF is responsible for degrading pro-apoptotic BH3-only proteins in Chlamydia trachomatis-infected cells / M. Pirbhai, F. Dong, Y. Zhong, K.Z. Pan, G. Zhong // J. Biol. Chem. - 2006.- Vol. 281.- P. 31495- 31501.

112. Rockey, D.D. Proteins in the chlamydial inclusion membrane / D.D. Rockey, M.A. Scidmore, J. P. Bannantine, W. J. Brown // Microbes and Infection. 2002. - Vol. 4, №3. - P. 333-340.

113. Rodriguez -Pachon, J. M. A novel connection between the yeast Cdc42 GTPase and the Slt2-mediated cell integrity pathway identified through the effect of secreted Salmonella GTPase modulators / J. M. Rodriguez-Pachon, H. Martin, G. North, R. Rotger, C. Nombela, M. Molina // J. Biol. Chem.-2002.-Vol. 277, №30.- P. 27094-27102.

114. Rupp, J. Chlamydia pneumoniae directly interferes with HIF-1 alpha stabilization in human host cells / J. Rupp, J. Gieffers, M. Klinger, G. van Zandbergen, R. Wrase, M. Maass, W. Solbach, J. Deiwick, T. Hellwig-Burgel // Cell. Microbiol. -2007.-Vol. 9.-P. 2181-2191.

115. Rzomp, K.A. Rab GTPases are recruited to chlamydial inclusions in both a species-dependent and species-independent manner / K.A. Rzomp, L.D. Scholtes, B.J. Briggs, G.R. Whittaker, M.A. Scidmore // Infect. Immun. - 2003. - Vol.71. - P. 58555870.

116. Rzomp, K.A. The GTPase Rab4 interacts with Chlamydia trachomatis inclusion membrane protein CT229 / K.A. Rzomp, A.R. Moorhead, M.A.Scidmore // Infect. Immun. - 2006. - Vol. 74. - P. 5362 - 5373.

117. Saier, M. H. Jr. Protein secretion and membrane insertion systems in gramnegative bacteria / M. H. Jr Saier // J. Membr. Biol. - 2006. - Vol. 214- P. 75-90.

118. Sams-Dodd, F. Target-based drug discovery: is something wrong/ F. Sams-Dodd//Drug Discov Today. -2005. -Vol.10, №2. -P. 139-147.

119. Schachter, J. Chlamydial infections / J. Schachter // West. J. Med. - 1990 -Vol. 153, №5.-P. 523-534.

120. Schachter, J. Infection and disease epidemiology / J. Schachter, R. S. Stephens // Chlamydia: intracellular biology, pathogenesis, and immunity. American Society for Microbiology - Washington, D.C. - 1999. -P. 139- 169.

121. Scidmore, M.A. Restricted fusion of Chlamydia trachomatis vesicles with endocytic compartments during the initial stages of infection / M.A. Scidmore, E.R. Fischer, T. Hackstadt // Infect. Immun. -2003. -Vol. 71.-P. 973-984.

122. Scidmore, M.A. Sphingolipids and glycoproteins are differentially trafficked to the Chlamydia trachomatis inclusion / M.A. Scidmore, E.R. Fischer, T. Hackstadt // J. Cell. Biol. -1996. -Vol. 134. - P. 363-374.

123. Scidmore-Carlson, M.A.Identification and characterization of a Chlamydia trachomatis early operon encoding four novel inclusion membrane proteins / M.A. Scidmore-Carlson, E.I. Shaw, C.A. Dooley , E.R. Fischer, T. Hackstadt // Mol. Microbiol. -1999. - Vol. 33, №4. - P. 753-765.

124. Sharma, J. Inhibition of proteolytic activity of a chlamydial proteasome/protease-like activity factor by antibodies from humans infected with Chlamydia trachomatis / J. Sharma , F. Dong , M. Pirbhai , G. Zhong // Infect. Immun. -2005. - Vol. 73, №7. - P. 4414^1419.

125. Shaw, A.C. Characterization of a secreted Chlamydia protease / A.C. Shaw, B.B. Vandahl, M.R. Larsen, P. Roepstorff, K. Gevaert, J. Vandekerckhove, G. Christiansen, S. Birkelund // Cell.Microbiol. -2002. - Vol. 4.- P. 411-424.

126. Shaw, E.I. Three temporal classes of gene expression during the Chlamydia trachomatis developmental cycle / E. I. Shaw , C.A. Dooley, E.R. Fischer , M.A. Scidmore , K.A. Fields , T. Hackstadt // Mol. Microbiol. -2000. - Vol. 37, №4. - P. 913- 295.

127. Sisko, J.L. Multifunctional analysis of Chlamydia-spQcific genes in a yeast expression system / J.L Sisko, K. Spaeth, Y. Kumar, R.H. Valdivia // Mol. Microbiol. -2006. - Vol. 60, №1. - P. 51-66.

128. Spaeth, K.E. The Chlamydia type III secretion system C-ring engages a chaperone-effector protein complex / K. E. Spaeth, Y. S Chen, R. H. Valdivia // PLoS Pathog . -2009. - Vol.5 - P. el000579.

129. Stamatopoulos, N .Chlamydia trachomatis in fallopian tubes of women undergoing laparoscopy for ectopic pregnancy / N. Stamatopoulos, I. Casikar, S. Reid, B. Roy , J. Branley , M. Mongelli , G. Condous // Aust. N. Z. J. Obstet. Gynaecol. -2012. -Vol. 52, № 4.-P. 377-379.

130. Stenmark, H. The Rab GTPase family / H. Stenmark, V. M. Olkkonen // Genome Biol. -2001. - Vol.2 №5. - P. reviews3007.1-reviews3007.7.

131. Stenner-Liewen, F. CADD, a Chlamydia protein that interacts with death receptors / F. Stenner-Liewen, H. Liewen, J.M. Zapata, K. Pawlowski, A. Godzik, J.C.Reed // J. Biol. Chem. -2002.- Vol. 277.- P. 9633 - 9636.

132. Stephens, R.S. Genome Sequence of an Obligate Intracellular Pathogen of Humans: Chlamydia trachomatis / R.S. Stephens, S. Kaiman, C. Lammel, J. Fan, R. Marathe, L. Aravind, W. Mitchell, L. Olinger, R.L. Tatusov, Q. Zhao, E.V. Koonin, R.W. Davis // Science. -1998. - Vol.282, №5389. - P. 754-759.

133. Stock, I. Infections with Chlamydia trachomatis /1. Stock, B. Henrichfreise // Med Monatsschr Pharm. -2012. - Vol.35, №6. -P. 209-222.

134. Sun, J. The host adherens junction molecule nectin-1 is downregulated in Chlamydia trachomatis-infected genital epithelial cells / J.Sun, J. Kintner, R.V. Schoborg//Microbiology.-2008. - Vol. 154, №5.- P. 1290-1299.

135. Thomas, N. S. Molecular characterization of the plasmid from the Chlamydia trachomatis mouse pneumonitis biovar / N. S. Thomas, I. N.Clarke // Chlamydial Infections. Proceedings of the 8th international symposium on human chlamydial infections. -1994. -P. 251-254.

136. Tomoda, H. Lactacystin, a proteasome inhibitor: discovery and its application in cell biology / H. Tomoda, S. Omura // Yakugaku Zasshi. -2000. -Vol.120, №10.-P. 935-949.

137. Truong , K.The use of FRET imaging microscopy to detect protein-protein interactions and protein conformational changes in vivo / K. Truong, M. Ikura // Current Opinion in Structural Biology. 2001. -Vol. 11. - P. 573-578.

138. Tse, S.M. Accumulation of diacylglycerol in the Chlamydia inclusion vacuole: possible role in the inhibition of host cell apoptosis / S.M. Tse, D. Mason, RJ. Botelho, B. Chiu, M. Reyland, K. Hanada, R.D. Inman, S.Grinstein // J. Biol. Chem. -2005.- Vol.280.- P.25210 - 25215.

139. Tuteja, R. Type I signal peptidase: an overview / R. Tuteja // Arch. Biochem. Biophys. - 2005. - Vol. 441. - P. 107-111.

140. Valdivia, R. H. Chlamydia effector proteins and new insights into chlamydial cellular microbiology / R. H. Valdivia // Current Opinion in Microbiology. -2008.-Vol. 11.-P. 1-7.

141. Valdivia, R.H. Modeling the Function of Bacterial Virulence Factors in Saccharomyces cerevisiae / R. H. Valdivia // Eukaryotic Cell. -2004. -Vol.3, № 4. — P. 827-834.

142. Van Ooij, C. Fusion of Chlamydia trachomatis-contsdning inclusions is inhibited at low temperatures and requires bacterial protein synthesis / C. Van Ooij, E. Homola, E. Kincaid, J. Engel // Infect. Immun. - 1998. - Vol. 66, №11. - P. 5364 -71.

143. Verbeke, P. Recruitment of BAD by the Chlamydia trachomatis vacuole correlates with host-cell survival/P. Verbeke, L. Welter-Stahl, S. Ying, J. Hansen, G. Hacker, T. Darville, D.M. Ojcius// PLoS Pathog. -2006. - Vol. 2. - P. 45.

144. Vertieva, E. Genetic constructions, hyperexpressing recombinant fragments of cytolethal distending toxin of Aggregatibacter actinomycetemcomitans / E.Vertieva, M. Kobozev, D.Tartakovskaya, V.Araslanova, Y.Belyi // World J. Microbiol. Biotechnol. -2011. - 27, №5. - P. 1189-1196.

145. Vikis, H.G. Glutathione-S-transferase-fusion based assays for studying protein-protein interactions / H.G.Vikis, K.L.Guan //Methods Mol. Biol.-2004. -Vol.261.-P. 175-186.

146. Von Pawel-Rammingen, U. GAP activity of theYersinia YopE cytotoxin specifically targets the Rho pathway: a mechanism for disruption of actin microfilament structure AJ. Von Pawel-Rammingen, M. V. Telepnev, G. Schmidt, K. Aktories, H. Wolf-Watz, R. Rosqvist. // Mol. Microbiol. - 2000.-Vol.36. - P. 737-748.

147. Ward, G.E. Using small molecules to study big questions in cellular microbiology / G.E. Ward, K.L. Carey, N.J. Westwood // Cell. Microbiol. - 2002. -Vol.4.-P. 471-482.

148. Weiner, S.J. A New Force Field for Molecular Mechanical Simulation of Nucleic Acids and Proteins / S.J Weiner, P.A. Kollman, D.A. Case, U.C. Singh, C. Ghio,G. Alagona,S. Jr.Profeta,P. Weiner // Am. Chem. Soc. - 1984. - Vol. 106. - P. 765-784.

149. Werbovetz, K.A.Target-based drug discovery for malaria, leishmaniasis, and trypanosomiasis / K.A. Werbovetz // Curr. Med. Chem. - 2000. - Vol. 7 №8- P. 835- 860.

150. Wylie, J.L. Host cell phospholipids are trafficked to and then modified by Chlamydia trachomatis / J.L. Wylie, G.M. Hatch, G. McClarty // J. Bacteriol-1997. -Vol.179, №23. - P. 7233-7242.

151. Zhong, G. Chlamydia inhibits interferon gamma-inducible major histocompatibility complex class II expression by degradation of upstream stimulatory factor 1 / G. Zhong, T. Fan, L. Liu // J. Exp. Med. - 1999. - Vol. 189, №12. - P. 19311938.

152. Zhong, G. Degradation of transcription factor RFX5 during the inhibition of both constitutive and interferon gamma-inducible major histocompatibility complex class I expression in chlamydia-infected cells / G. Zhong, L. Liu, T. Fan, P. Fan., H. Ji // J. Exp. Med.-2000.-Vol. 191, №9.-P. 1525-1534.

153. Zhong, G. Identification of a Chlamydial Protease-Like Activity Factor Responsible for the Degradation of Host Transcription Factors / G. Zhong P. Fan, H. Ji, F. Dong, Y. Huang // J. Exp. Med. - 2001. - Vol. 193, №8. - P. 935-942.

154. Zhong, G. Killing me softly: chlamydial use of proteolysis for evading host defenses/ G. Zhong// Trends Microbiol. -2009. - Vol. 17, №10. - P. 1467-1474.

155. Zhou, J. The structural view of bacterial translocation-specific chaperone SecB: implications for function / J. Zhou, Z. Xu // Mol. Microbiol. -2005. - Vol. 58. -P. 349-357.