Микробиологические аспекты устойчивости Chlamydia Trachomatis к антибиотикам тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.07, кандидат биологических наук Шипицына, Елена Васильевна

• Шипицына, Елена Васильевна
• кандидат биологических наук
• 2003

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Шипицына, Елена Васильевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Таксономия хламидий.

1.2. Серотипы Chlamydia trachomatis.

1.3. Геном Chlamydia trachomatis.

1.4. Жизненный цикл Chlamydia trachomatis.

1.5. Роль хламидийной инфекции в нарушении репродуктивной функции человека.

1.6. Устойчивость Chlamydia trachomatis к антибиотикам.

1.6.1.Механизмы действия тетрациклинов, макролидов и фторхинолонов

1.6.2. Формирование устойчивости микроорганизмов к антибиотикам.

1.6.3. Антибиотикорезистентность Chlamydia trachomatis: актуальность проблемы и возможные механизмы.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Чувствительность клинических изолятов хламидий к антибактериальным препаратам.

3.2. Мониторинг элиминации хламидий в ходе терапии джозамицином.

3.3. Определение нуклеотидной последовательности пептидилтрансферазной петли 23 S рРНК клинических изолятов

С. trachomatis, устойчивых к макролидам.

3.4. Применение метода ОТ-ПЦР (ПЦР с обратной транскрипцией) для оценки эффективности действия антибиотиков на рост хламидий в культуре клеток.

Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Микробиологические аспекты устойчивости Chlamydia Trachomatis к антибиотикам»

Облигатные внутриклеточные бактерии Chlamydia trachomatis относятся к числу самых распространенных инфекционных агентов, передающихся половым путем. Особенно опасны хламидии тем, что примерно у 75% женщин и 50% мужчин заболевание протекает бессимптомно, что обеспечивает быстрое распространение С.trachomatis в популяции, так как инфицированные хламидиями мужчины и женщины не обращаются за медицинской помощью. Кроме того, отсутствие своевременной диагностики и лечения может способствовать переходу возбудителя в верхние отделы урогенитального тракта и инициации патологических процессов, влекущих за собой тяжелые последствия -воспалительные заболевания органов малого таза [Cohen 1999], внематочную беременность [Sziller 1998], невынашивание беременности и трубное бесплодие [Paavonen 1999]. Существуют также данные, хотя и весьма ограниченные, свидетельствующие о возможной связи хламидийной инфекции и мужского бесплодия [Munoz 1995, Paavonen 1999].

Для лечения хламидийной инфекции традиционно используются тетрациклины, макролиды и некоторые препараты фторхинолонового ряда [Ridgway 1997]. Сообщения последних лет свидетельствуют о возникновении проблемы устойчивости хламидий к антибиотикам, проявляющейся как в неудачах антихламидийной терапии, так и в выделении клинических изолятов С. trachomatis, устойчивых к антибиотикам [Jones 1990, Somani 2000]. Оценка масштаба и клинической значимости явления антибиотикорезистентности хламидий представляет собой нелегкую задачу в силу нескольких причин. Во-первых, микробиологический контроль излеченности далеко не везде является общепринятой практикой. Во-вторых, реинфекция занимает значительное место среди случаев выявления хламидий после лечения [Kjar 2000]. Наконец, определение чувствительности хламидий к антибиотикам лабораторными методами сопряжено с серьезными трудностями стандартизации процедуры тестирования и интерпретации его результатов [Peeling 1994].

Одним из самых актуальных вопросов для клиницистов и микробиологов является вопрос о рецидивирующей хламидийной инфекции. Причинами возникновения рецидивов хламидийной инфекции считают: а) назначение неадекватного лечения или нарушение пациентом предписанной схемы лечения; б) устойчивость хламидий к антибиотикам; в) способность хламидий к персистенции - длительному выживанию внутри клетки-хозяина, что, в свою очередь, может быть самым сложным и тесным образом связано с антибиотикорезистентностью хламидий.

Изучение механизмов резистентности различных патогенных бактерий к антибиотикам ведется уже много лет, однако, до сих пор практически ничего не известно о формировании антибиотикорезистентности хламидий. Поскольку размножение и развитие хламидий происходит внутри клетки-хозяина, приобретение генов резистентности от других микроорганизмов представляется маловероятным [Stephens 1998]. Возможно, антибиотикорезистентность хламидий возникает в результате селективного давления при воздействии субингибирующих концентраций антибиотиков. Так, в литературе описано получение лабораторных мутантов, устойчивых к фторхинолонам, которые имели нуклеотидные замены в гене, кодирующем мишень хинолонов - ДНК-гиразу [Dessus-Babus 1998]. Этот механизм - изменение мишени действия антибиотика - может быть задействован в формировании антибиотикорезистентности хламидий в ходе антибактериальной терапии; на сегодняшний день, однако, никаких данных относительно клинических изолятов С. trachomatis не получено.

Макролиды относятся к числу антибиотиков, обладающих высокой антихламидийной активностью. Несмотря на то, что первое сообщение о резистентности хламидий к эритромицину in vitro появилось в 1980 году

Mourad 1980], механизмы формирования резистентности хламидий к макролидам не изучены. Ингибирующее действие макролидов на рост микроорганизмов связано с их влиянием на синтез белка. В процесс образования пептидных связей вовлечена так называемая пептидилтрансферазная петля - фрагмент 23 S рРНК. Устойчивость микроорганизмов к макролидам часто связана с изменениями в 23 S субъединице РНК, в том числе с нуклеотидными заменами в гене 23 S рРНК, которые приводят к структурным изменениям пептидилтрансферазного домена [Weisblum 1995].

Данное исследование было предпринято с целью оценить актуальность проблемы резистентности С.trachomatis к антибактериальным препаратам, а также изучить молекулярные изменения в гене 23 S рРНК и выявить возможную связь между наличием точечных мутаций в этом гене и резистентностью хламидий к макролидам.

Для достижения поставленной цели планировалось решить следующие задачи:

1. Разработать методику определения чувствительности С.trachomatis к антибиотикам в культуре клеток

2. Охарактеризовать чувствительность клинических изолятов С. trachomatis к антибиотикам, наиболее широко применяемым для антихламидийной терапии

3. Сопоставить результаты антихламидийной терапии с результатами определения чувствительности хламидий к антибиотикам in vitro и исследовать ассоциацию между антибиотикорезистентностью хламидий in vitro и неудачами антихламидийной терапии

4. Провести мониторинг элиминации хламидий в ходе терапии джозамицином и выработать рекомендации по проведению контроля излеченности

5. Исследовать молекулярные изменения в гене 23 S рРНК клинических изолятов хламидий, устойчивых к макролидам

6. Разработать систему оценки эффективности действия антибиотиков на рост хламидий в культуре клеток на основе метода обратной транскрипции с последующей полимеразной цепной реакцией (ОТ-ПЦР)

Научная новизна работы

Проведено сопоставление результатов антихламидийной терапии с результатами определения чувствительности хламидий к антибиотикам in vitro и показано отсутствие связи между антибиотикорезистентностью хламидий in vitro и неудачами антихламидийной терапии. Обоснована неэффективность применения теста на определение чувствительности хламидий к антибиотикам при выборе препарата для лечения хламидийной инфекции.

Проведен мониторинг антихламидийной терапии джозамицином, который показал быструю элиминацию возбудителя в ходе лечения.

Впервые показано, что устойчивые к макролидам клинические изоляты хламидий, выделенные от пациентов с неудачами антихламидийной терапии, имеют мутации в гене 23 S рРНК, приводящие к изменению вторичной структуры пептидилтрансферазной петли V домена 23 S субъединицы РНК.

Впервые для оценки эффективности действия антибиотиков на рост С. trachomatis в культуре клеток применен метод ОТ-ПЦР 16S рРНК и мРНК гена отрЗВ, кодирующего белок наружной мембраны хламидий. Научно-практическая значимость работы

Отсутствие связи между антибиотикорезистентностью хламидий in vitro и неудачами антихламидийной терапии, установленное в данной работе, служит сигналом к пересмотру взгляда на назначение теста чувствительности хламидий к антибиотикам для выбора антихламидийного препарата.

На основании данных мониторинга эффективности антихламидийной терапии выработаны рекомендации по проведению контроля излеченности. Схема мониторинга, примененная в данной работе, может быть использована для изучения изменений морфологических и биохимических свойств хламидий во время антибактериальной терапии.

Обнаружение мутаций в гене 23 S рРНК хламидий, устойчивых in vitro к высоким концентрациям макролидов, свидетельствует о возможном вовлечении этого механизма в формирование устойчивости С.trachomatis к макролидам и дает основание для активного изучения распространенности мутаций в гене 23 S рРНК и их роли в неудачах антихламидийной терапии макролидами. Установление участия этого механизма в формировании резистентности хламидий к макролидам послужит теоретической основой для выявления в клиническом изоляте хламидий, элиминация которых потребует применения других препаратов.

Предложенный в настоящей работе метод ОТ-ПЦР отрЗВ представляет собой альтернативу традиционному методу с применением ПИФ для определения чувствительности хламидий к антибиотикам in vitro. Основным преимуществом метода ОТ-ПЦР отрЗВ является однозначность в оценке значений МИК и МБК, и, как следствие, получение более воспроизводимых результатов.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту

1. Несмотря на высокую частоту встречаемости клинических изолятов С.trachomatis, резистентных к антибиотикам in vitro, в том числе проявляющих множественную резистентность, в подавляющем большинстве случаев антихламидийная терапия приводит к элиминации хламидий.

2. Трудоемкий дорогостоящий метод характеристики чувствительности хламидий к антибиотикам как рутинный лабораторный тест для выбора антихламидийного препарата не оправдывает материальных расходов и потери времени.

3. Структурные изменения в пептидилтрансферазном домене 23 S субъединицы РНК, обусловленные нуклеотидными заменами в гене 23 S рРНК, могут быть ответственны за устойчивость С. trachomatis к антибиотикам.

4. Разработка новых методик определения МИК и МБК антибиотиков, в частности, на основе ОТ-ПЦР, предусматривающих однозначную интерпретацию данных, будет способствовать получению более воспроизводимых результатов тестирования чувствительности С. trachomatis к антибиотикам.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 9 работ. Апробация работы

Материалы диссертации были представлены на Международном конгрессе по резистентности к антимикробным препаратам в Монте-Карло (1999), III Международной конференции MAKMAX-ASM "Антибиотики и антибиотикорезистентность на пороге XXI века" (Москва, 2000), итоговых конференциях НИИ Физико-химической медицины (Москва, 2000, 2001), VIII Всероссийском съезде дерматовенерологов (Москва, июнь 2001), IV Международной конференции МАКМАХ "Антимикробная терапия" в (Москва, 2001), XI Европейском конгрессе по клинической микробиологии и инфекционным заболеваниям (Стамбул, 2001), научно-практическом симпозиуме «Технологии генодиагностики в практическом здравоохранении» (Москва, 2002), XVIII конгрессе по заболеваниям, передающимся половым путем (Будапешт, сентябрь 2002), XXXVIII научно-практической конференции дерматовенерологов и врачей смежных специальностей (С.-Петербург, 2003).

Заключение диссертации по теме «Микробиология», Шипицына, Елена Васильевна

ВЫВОДЫ

Охарактеризована чувствительность 25 клинических изолятов хламидий к антибиотикам, наиболее широко применяемым для лечения хламидийной инфекции. Показана высокая частота встречаемости клинических изолятов хламидий, устойчивых к антибиотикам in vitro: из 25 штаммов 10 (40±19.6%) были определены как устойчивые к доксициклину, 10 (40±19.6%) - к азитромицину, 11 (44±19.9%) - к джозамицину, 11 (44±19.9°/о) - к спирамицину и 11 (44±19.9%) - к офлоксацину. Множественную резистентность проявили 12 (48±20%) изолятов, причем 6 из них оказались устойчивыми ко всем протестированным антибиотикам. Сопоставление результатов антихламидийной терапии с результатами определения чувствительности хламидий к антибиотикам in vitro свидетельствует об отсутствии связи между резистентностью in vitro и неудачами антихламидийной терапии.

Проведен мониторинг эффективности терапии джозамицином у 24 пациентов и показана быстрая элиминация хламидий. Выработаны рекомендации по проведению контроля излеченности: его рекомендуется проводить не ранее, чем через 2-3 недели после окончания лечения с применением двух методов - ПЦР и культуры клеток.

Разработана система оценки ингибирования культуры хламидий антибиотиками на основе метода ОТ-ПЦР, обладающая высокой чувствительностью и способная обеспечить объективную интерпретацию эффективности действия антибиотиков. Впервые показано, что клинические изоляты С.trachomatis, устойчивые к высоким концентрациям макролидов in vitro, имеют мутации в гене 23 S рРНК, приводящие к изменению вторичной структуры пептидилтрансферазного домена 23 S рРНК.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Разработанная нами методика определения чувствительности хламидий к антибиотикам в культуре клеток может быть использована в научно-исследовательской лаборатории при изучении факторов резистентности С. trachomatis к антибиотикам.

2. При оценке эффективности действия антибиотиков на рост хламидий в культуре клеток в качестве альтернативы традиционному методу ПИФ мы предлагаем использование метода ОТ-ПЦР отрЗВ, так как он обеспечивает получение более воспроизводимых, чем ПИФ, результатов.

3. Назначение теста антибиотикочувствительности при выборе препарата для антихламидийной терапии представляется нам нецелесообразным, так как мы не выявили связи между резистентностью хламидий in vitro и неудачами антихламидийной терапии. Кроме того, крайне низкая воспроизводимость результатов тестирования, получаемых в разных лабораториях, которая обусловлена нестандартизованностью процедуры анализа и отсутствием единых критериев интерпретации результатов, ставит под сомнение диагностическую ценность этого теста.

4. Контроль излеченности рекомендуется проводить не ранее, чем через 2-3 недели после окончания антихламидийной терапии с использованием двух методов - ПЦР и КК.

96

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Шипицына, Елена Васильевна, 2003 год

1. Савичева A.M., Башмакова М.А. Урогенитальный хламидиоз у женщин и его последствия.-Н. Новгород: НГМА, 1998.-182 стр.

2. Сидоренко С.В. Антибактериальная терапия инфекций, вызываемых Chlamydia trachomatis!I Антибиотики и химиотерапия.-2001.-Т.46.-С.3-9.

3. Спирин А.С. Молекулярная биология. Структура рибосомы и биосинтез белка.-М.: Высшая школа, 1986.- 303 стр.

4. Adams D.E., Shekhtmann Е.М., Zechiedrich EI., Schmid M.B., Cozzarelli N.R. The role of topoisomerase IV in partioning bacterial replicons and structure of catenated intermediates in DNA replication// Cell-Vol.71.-P.277-288.

5. Allaire A.D., Huddleston J.F., Graves W.L. Initial and repeat screening for Chlamydia trachomatis during pregnancy// Infect. Dis. Obstet. Gynecol.-1998.-Vol.6.-P.l 16-122.

6. Ault K.A., Statland B.D., King M.M., Dosier D.I., Joachims M.L., Gunter J. Antibodies to the chlamydial 50 kilodaltone heat shock protein in women with tubal factor infertility// Infect. Dis. Obstet. Gynecol.-1998.-V0I.6.-P.163-167.

7. Batteiger B.I., Newhall V., Jones R.B. Differences in outer membrane proteins of the lymphogranuloma venereum and trachoma biovars of Chlamydia trachomatis// Infect. Immun.-1995.-Vol.50.-P.488-494.

8. Bavoil P., Ohlin A., Schachter J. Role of disulfide bonding in outer membrane structure and permeability of Chlamydia trachomatis //Infect. Immun.-1984.-Vol.44.-P. 479-485.

9. Beatty W.L., Belanger Т.A., Desai A.A., Morrison R.P., Byrne G.L. Tryptophan depletion as a mechanism of gamma interferon mediated chlamydial persistence// Infect. Immun.-1994.-Vol.62.-P.3705-3711.

10. Beatty W.L., Byrne G.L., Morrison R.P. Morphological and antigenic characterization of interferon-y mediated persistent Chlamydia trachomatis infection in vitro// Proc. Natl. Acad. Sci. USA-1993.-Vol.90.-P.3998-4002.

11. Beatty W.L., Morrison R.P., Byrne G.L. Persistent chlamydiae: from cell culture to a paradigm for chlamydial pathogenesis// Microbiol. Rev.-1994.-Vol.58.-P.689-699.

12. Beatty W.L., Morrison R.P., Byrne G.L. Reactivation of persistent Chlamydia trachomatis in cell culture// Infect. Immun.-1995.-Vol.63.-P.199-205.

13. Belland R.J., Morrison S.G., Ison C., Huang W.B. Neisseria gonorrhoeae acquires mutations in analogous regions of gyrA and parC in fluoroquinolone-resistant isolates// Mol. Microbiol.-1994.-Vol.14.-P.371-380.

14. Blythe M.J., Katz B.P., Batteiger B.E., Ganser J.A., Jones A.B. Recurrent genitourinary chlamydial infections in sexually active female adolescents// J. Pediatr.-1992.-Vol. 121 .-P.487-493.

15. Bolhuis H., Van Veen H.W., Poolman В., Driessen A.J., Konings W.N. Mechanisms of multidrug transporters// FEMS Microbiol. Rev.-1997.-Vol.21.-P.55-84.

16. Boom R., Sol C.J.L., Salimans M.M.M. Simple and rapid method for purification of nucleic acids// J. Clin. Microbiol.-1990.-Vol.28.-P.495-503.

17. Bragina E.Y., Gomberg M.A., Dmitriev G.A. Electron microscopic evidence of persistent chlamydial infection following treatment// J. Eur. Acad. Dermatol. Venerol.-2001.-Vol.l5.-P405-409.

18. Brunham R.C., Maclean I.W., Binns В., Peeling R.W. Chlamydia trachomatis: its role in tubal infertility// J. Infect. Dis -1985.-Vol. 152.-P.1275-1282.

19. Bush R.M., Everett K.D. Molecular evolution of the Chlamydiaceae// Int. J. Syst. Evol. Microbiol.-2001.-Vol.51.- P.203-220.

20. Caldwell H.D., Kromhout J., Shachter J. Purification and partial characterization of the major outer membrane protein of Chlamydia trachomatis!/Infect. Immun.- 1981.-Vol.31.-P.1161-1176.

21. Campbell L.A., Patton D.L., Moore D.E., Cappuccino A.L., Mueller B.A., Wang S.-P. Detection of Chlamydia trachomatis deoxyribonucleic acid in women with tubal infertility// Fertil. Steril.-1993.-Vol.59.-P.45-50.

22. Chittum H.S., Champney W.S. Erythromycin inhibits the assembly of the large ribosomal subunit in growing Echerichia coli cells// Curr. Microbiol.-1995.-Vol.30.-P.273-279.

23. Chopra I., Hawkey P.M., Hinton M. Tetracyclines, molecular and clinical aspects//J. Antimicrob. Chemother.-1992.-Vol.29.-P.247-277.

24. Claman P., Honey L., Peeling R.W., Jessamine P., Toye B. The presence of serum antibody to the chlamydial heat shock protein (CHSP60) as a diagnostic test for tubal factor infertility// Fertil. Steril.-1997.-Vol.67.-P.501-504.

25. Cohen C.R., Brunham R.C. Pathogenesis of chlamydia induced pelvic inflammatory disease// Sex. Transm. Inf.-1999.-Vol.75.-P.21-24.

26. Dean D., Suchland R.J., Stamm W.E. Evidence for long-term cervical persistence of Chlamydia trachomatis by ompl genotyping// J. Infect. Dis.-2000.-Vol. 182.-P.909-916.

27. Dreses-Werringloer U., Padubrin I., Jurgens-Saathoff В., Hudson A.P., Zeidler H., Kohler R. Persistence of Chlamydia trachomatis induced by ciprofloxacin and ofloxacin in vitro// Antimicrob. Agents Chemother.-2000.-Vol.44.-P.3288-3297.

28. Dreses-Werringloer U., Padubrin I., Zeidler H., Kohler R. Effects of azithromycin and rifampin on Chlamydia trachomatis infection in vitro// Antimicrob. Agents Chemother.-2001.-Vol.45.-P.3001-3008.

29. Fan Т., Lu H., Ни H., Shi L., McClarty G.A., Nance D.M., Greenberg A.H., Zhong G. Inhibition of apoptosis in Chlamydia-infected cells: blocade of mitochondrial cytochrome с release and caspase activation// J. Exp. Med.-!998.-Vol. 187.-P.487-496.

30. Gnarpe J., Erikkson K., Gnarpe H. In vitro activities of azithromycin and doxycycline against 15 isolates of Chlamydia pneumoniae!7 Antimicrob. Agents Chemother.-1996.-Vol.40.-P. 1843-1845.

31. Grayston J.T., Wang S.P., Yeh L.J., Kuo C.C. Importance of reinfection in the pathogenesis of trachoma// Rev. Infect. Dis.-1985.-Vol.7.-P.717-725.

32. Gregory S.T., Cate J.H., Dahlberg A.E. Spontaneous erythromycin resistance mutations in a 23 S rRNA gene, rrlA, of the extreme thermophile Thermus thermophilus 1В-21П J. Bacteriol.- 2001.-Vol.l83.-P.4382-4385.

33. Hackstadt T. Redirection of host vesicle trafficking pathways by intracellular parasites// Traffic-2000.-Vol.l.-P.93-99.

34. Hackstadt Т., Baehr W., Yuan Y. Chlamydia trachomatis developmentally regulated protein is homologous to eukaryotic histone HI// Proc. Natl. Acad. Sci. USA-1991.-Vol.88. P.3937-3941.

35. Hackstadt Т., Scidmore-Carlson M., Shaw E., Fischer E. The Chlamydia trachomatis IncA protein is required for homotypic vesicle fusion// Cell. Microbiol.-1999.-Vol. 1 .-P. 119-130.

36. Hackstadt Т., Todd W.J., Caldwell H.D. Disulfide-mediated interactions of the chlamydial major outer membrane protein: role in the differentiation of chlamydiae?// J. Bacteriol.-1985 .-Vol. 161 .-P.25-31.

37. Hawkey P.M. The origins and molecular basis of antibiotic resistance// BMJ- 1998.-Vol.317.-P.657-660.

38. Hooper D.C. Mechanisms of action and resistance to older and newer fluoroquinolones// Clin. Infect. Dis.-2000.-Vol.31.-Suppl.2.-P.S24-28.

39. Hooper D.C. Mechanisms of fluoroquinolone resistance// Drug Resistance Updates.-1999.-Vol.2.-P.38-55.

40. Hooton T.M., Rogers M.E., Medina T.G., Kuwamura L.E., Ewers C., Roberts P.L., Stamm W.E. Ciprofloxacin compared with doxycycline for nongonococcal urethritis// JAMA-1990.-Vol.264.-P. 1418-1421.

41. Hueck C.J. Type III protein secretion systems in bacterial pathogens of animals and plants//Microbiol. Mol. Biol. Rev.-1998.-Vol.62.-P.379-433.

42. Iliffe-Lee E.R., McClarty G. Glucose metabolism in Chlamydia trachomatis: 'energy parasite' hypothesis revisited// Mol. Microbiol.-1999.-Vol.33.-P. 177-187.

43. Jenkins G., Cundliffe E. Cloning and characterization of two genes from Streptomyces lividans that confer inducible resistance to lincomycin and macrolide antibiotics// Gene-1991.-Vol. 108.-P.55-62.

44. Jones R.B., Van der Pol В., Martin D.H., Shepard M.K. Partial characterization of Chlamydia trachomatis isolates resistant to multiple antibiotics//J. Infect. Dis.-1990.-Vol.l62.-P.1309-1315.

45. Kaatz G.W., Seo S.M., Ruble C.A. Efflux-mediated fluoroquinolone resistance in Staphylococcus aureus// Antimicrob. Agents Chemother.-1993.-Vol.37.-1086-1094.

46. Kanematsu E., Degushi Т., Yashida M. Alterations in the GyrA subunit of the DNA gyrase and ParC subunit of DNA topoisomerase IV associated with quinolone resistance in Enterococcus faecalisll Antimicrob. Agents Chemother.-1998.-Vol.42.-P.433-435.

47. Kjar H.O., Dimcevski G., Hoff G., Olesen F., Ostergaard L. Recurrence of urogenital Chlamydia trachomatis infection evaluated by mailed samples obtained at home: 24 weeks' prospective follow up study// Sex. Transm. Inf.-2000.-Vol.76.-P.169-172.

48. Kumagai Y., Kato J.I., Hoshino K., Akasaka Т., Sato K., Ikeda H. Quinolone-resistant mutants of Esherichia coli DNA topoisomerase IV parC gene// Antimicrob. Agents Chemother.-1996.-Vol.40.-P.710-714.

49. Kuo C.-C. Host response// Microbiology of Chlamydia.- Boca Raton: CRC Press, 1988.-P. 193-208.

50. Lefevre J.C., Lepargneur J.P., Guion D., Bei S. Tetracycline-resistant Chlamydia trachomatis in Toulouse, France// Pathol. Biol.- 1997.-Vol.45.-376-378.

51. Lucier T.S., Heitzman K., Liu S.K., Hu P.S. Transition mutations in the 23 S rRNA of erythromycin-resistant isolates of Mycoplasma pneumoniae!У Antimicrob. Agents Chemother.-1995.-Vol.39.-P.2770-2773.

52. McClarty G. Chlamydiae and the biochemistry of intracellular parasitism// Trends Microbiol.-1994.-VoL2.-P. 157-164.

53. Miller J.M. Recurrent chlamydial colonization during pregnancy// Am. J. Perinatol.-1998.-Vol.l5.-P.307-309.

54. Moore R.A., Beckhold В., Wong S., Kureishi A., Bryan L.E. Nucleotide sequence of the gyrA gene and characterization of ciprofloxacin-resistant mutants of Helicobacter pylori!У Antimicrob. Agents Chemother.-1995.-Vol.39.-P.107-lll.

55. Morrisey I., Salman H., Bakker S., Farrel D., Bebear C.M., Ridgway G. Serial passage of Chlamydia spp. in subinhibitory fluoroquinolone concentrations// J. Antimicrob. Chemocher.-2002.-Vol.49.-P.757-761.

56. Morrison R.P., Belland R.J., Lyng K., Caldwell H.D. Chlamydial disease pathogenesis. The 57 kd chlamydial hypersensitivity antigen is a stress response protein//J. Exp. Med.-1989.-Vol.l70.-P.1271-1283.

57. Mourad A., Sweet R.L., Sugg N., Schachter J. Relative resistance to erithromycin in Chlamydia trachomatis// Antimicrob. Agents Chemother.-1980.-Vol. 18.-P.696-698.

58. Munday P.I., Thomas B.J., Gilroy C.B., Gilchrist C., Taylor-Robinson D. Infrequent detection of Chlamydia trachomatis in a longitudinal study of

59. Nakano M., Degushi Т., Kawamura Т., Yashida M. Mutation in the gyrA and parC genes in fluoroquinolone-resistant clinical isolates of Pseudomonas aeruginosa!'/ Antimicrob. Agents Chemother.-1998.-Vol.41 .-P.2289-2291.

60. Neuer A, Spandorfer SD, Giraldo P, Dieterle S, Rosenwaks Z, Witkin SS. The role of heat shock proteins in reproduction// Hum. Reprod. Update-2000.-VoL6.-P. 149-159.

61. NicaidoH. Prevention of drug access to bacterial targets: permeability barriers and active efflux// Science-Vol.264.-P.382-388.

62. Notomi Т., Ikeda Y., Nagayama A. Minimal inhibitory and minimal lethal concentration against Chlamydia trachomatis dependent on the time of addition and duration of the presence of antibiotics// Chemotherapy-1999.-Vol.45.-P.242-248.

63. Ohara K., Kanda Т., Ohmiya K., Ebisu Т., Kono M. Purification and characterization of macrolide 2'-phosphotransferase from a strain of Escherichia coli that is highly resistant to erythromycin// Antimicrob. Agents Chemother.- 1989.-Vol.33.-P.1354-1357.

64. Paavonen J., Eggert-Kruse W. Chlamydia trachomatis: impact on human reproduction//Hum. Reprod. Update-1999.-Vol.5.-P.433-447.

65. Page L.A. Interspecies transfer of psittacosis-LGV-trachoma agents: pathogenicity of two avian and two mammalian strains for eight species of birds and mammals// Am. J. Vet. Res.-1966.-Vol.27.-P.397-407.

66. Patton D.L., Sweeny Y.T., Kuo C.C. Demonstration of delayed hypersensitivity in Chlamydia trachomatis salpingitis in monkeys: a pathogenic mechanism of tubal damage// J. Infect. Dis.-1994.-Vol. 169.-P.680-683.

67. Parks K.S., Dixon P.B., Richey C.M., Hook E.W. Spontaneous clearance of Chlamydia trachomatis infection in untreated patients//Sex. Transm. Dis.-l 997.-Vol.24.-P.229-235.

68. Pernodet J.L., Boccard F., Alegre M.T., Blondelet-Rouault M.H., Guerineau M. Resistance to macrolides, lincosamides and streptogramin type В antibiotics due to a mutation in an rRNA operon of Streptomyces ambofaciensll EMBO J.-1988.-Vol.7.-P.277-282.

69. Rank R.G., Soderberg L.S, Barron A.L. Chronic chlamydial genital infection in congenitally athymic nude mice// Infect. Immun.-1985.-Vol.48.-P.847-849.

70. Rasmussen S.J., Timms P., Beatty P.R., Stephens R.S. Cytotoxic-T-lymphocyte-mediated cytolysis of L cells persistently infected with Chlamydia spp.// Infect. Immun.-1996.-Vol.64.-P.l944-1949.

71. Ross J.I., Eady E.A., Cove J.H., Cunliffe W.J., Baumberg S., Wootton J.C. Inducible erythromycin resistance in staphylococci is encoded by a member of the ATP-binding transport super-gene family// Mol.Microbiol.-1990.-Vol.4.-P.1207-1214.

72. Shaw E.I., Dooley C.A., Fisher E.R., Scidmore M.A., Fields K.A., Hackstadt T. Three temporal classes of gene expression during the

73. Chlamydia trachomatis developmental cycle// Mol. Microbiol.-2000.-Vol.37.-P.913-925.

74. Somani J., Bhullar V.B., Workowski K.A., Farshy C.E., Black C.M. Multiple drug-resistant Chlamydia trachomatis associated with clinical treatment failure// J. Infect. Dis.-2000.-Vol.l81.-P.1421-1427.

75. Suchland R.J., Geisler W.M., Stamm W.E. Methodologies and cell lines used for antimicrobial susceptibility testing of Chlamydia spp.// Antimicrob. Agents Chemother.-2003.-Vol.47.-P.636-642.

76. Su H., Raymond L., Rockey D.D., Fisher E., Hackstadt Т., Caldwell H.D. A recombinant Chlamydia trachomatis major outer membrane protein binds to heparan sulfate receptors on epithelial cells// Proc. Natl. Acad. Sci. USA-1996.-Vol.93.-P.l 1143-11148.

77. Su H., Watkins N.G., Zhang Y.X., Caldwell H.D. Chlamydia trachomatis -host cell interactions: role of the chlamydial major outer membrane protein as an adhesion.-Infect. Immun.-1990.-Vol.58.-P. 1017-1025.

78. Sziller I., Witkin S.S., Ziegert M., Csapo Z., Ujihazy A., Papp Z. Serological responses of patients with ectopic pregnancy of the Chlamydia trachomatis 60 kDa heat shock proteinII Hum. Reprod.-1998.-Vol.13.-P. 1088-1093.

79. Toye В., Laferriere C., Claman P., Jessamine P., Peeling R. Association between antibody to chlamydial heat shock protein and tubal infertility// J. Infect. Dis.-1993.-Vol. 168.-P. 1236-1240.

80. Van der Willigen A.H., Polak-Vogelzang A.A., Habbema L., Waagenvoort J.H.T. Clinical efficacy of ciprofloxacin versus doxycycline in the treatment of nongonococcal urethritis in males// Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis.-Vol.7.-P.658-661.

81. Van Ooij C., Homola E., Kincaid E., Engel J. Fusion of Chlamydia trachomatis-containing inclusions is inhibited at low temperatures and requires bacterial protein synthesis// Infect. Immun.-1998.-Vol.66.-P.5364-5371.

82. Vester В., Douthwaite S. Macrolide resistance conferred by base substitutions in 23 S rRNA// Antimicrob. Agents Chemother.-2001.-Vol.45.-P.l-12.

83. Vester В., Garret R.A. The importance of highly conserved nucleotides in the binding region of chloramphenicol at the peptidyl transfer center of Esherichia coli 23S ribosomal RNA// EMBO J.-1988.-Vol.7.-P.3577-3587.

84. Wagar E.A., Safarians S., Pang M. Analysis of genomic DNA from Chlamydia trachomatis for Dam and Dcm methylation// FEMS Microbiol. Lett.-1992.-Vol.77.-P.161-168.

85. Wang J.C. DNA topoisomerases// Annu.Rev.Biochem.-1996.-Vol.65.-635-692.

86. Wang S. P., Grayston J.T. Three new serovars of Chlamydia trachomatis: Da, la, and L2a// J. Infect. Dis.-1991.-Vol.l63.-P.403-405.

87. Wang, S. P., Kuo C.C., Barnes R.C., Stephens R.S., Grayston S.T. Imunotyping of Chlamydia trachomatis with monoclonal antibodies// J. Infect. Dis.-1985.-Vol. 152.-P.791 -800.

88. Weisblum B. Erythromycin resistance by ribosome modification// Antimicrob. Agents Chemother.-1995.-Vol.39.-P.577-585.

89. Williams D.M., Schachter J., Drutz D.J., Sumaya C.V. Pneumonia due to Chlamydia trachomatis in the immunocompromised (nude) mouse// J. Infect. Dis.-1981 .-Vol. 143.-P.238-241.

90. Witkin SS. Immunity to heat shock proteins and pregnancy outcome// Infect. Dis. Obstet. Gynecol.-1999.-Vol.7.-P.35-38.

91. Witkin S.S., Jeremias J., Neuer A., David S., Kligman I., Toth M., Willner E., Witkin K. Immune recognition of the 60kD heat shock protein: implication for subsequent fertility// Inf. Dis. Obstet. Gynecol.-1996.-Vol.4.-P.152-158.

92. Witkin S.S., Jeremias J., Toth M., Ledger W.J. Cell-mediated immune response to the recombinant 57-kDa heat shock protein of Chlamydia trachomatis in women with salpingitis// J. Infect. Dis.-1993.-Vol. 167.-P.1379-1383.

93. Witkin SS, Linhares IM. Chlamydia trachomatis in subfertile women undergoing uterine instrumentation// Hum. Reprod.-2002.-Vol.17.-P.1938-1941.

94. Witkin S.S., Sultan K.M., Neal G.S., Jeremias J., Grifo J.A., Rosenwaks Z. Unsuspected Chlamydia trachomatis infection and in vitro fertilization outcome// Am. J. Obstet. Gynecol.-1994.-Vol. 171.-P. 1208-1214.

95. Yang C.L., Maclean I., Brunham R.C. DNA sequence polymorphism of the Chlamydia trachomatis ompl gene// J. Infect. Dis.-1993.-Vol.168.-P.1225-1230.

96. Yong E.C., Chi E.Y., Chen W.J., Kuo C.C. Degradation of Chlamydia trachomatis in human polymorphonuclear leukocytes: an ultrastructural