Пролиферативная активность эпителия кишечника при естественном и радиационном старении тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.30, кандидат биологических наук Гусельникова, Екатерина Александровна

• Гусельникова, Екатерина Александровна
• кандидат биологических наук
• 2011

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Гусельникова, Екатерина Александровна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

ГЛАВА 1. СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О КИШЕЧНИКЕ, КАК НЕЙРОИММУНОЭНДОКРИННОМ ОРГАНЕ.

1.1. Анатомия, особенности онтогенеза и гистофизиологии тонкого кишечника.

1.1.1. Анатомия тонкого кишечника.

1.1.2. Особенности онтогенетического развития кишечника.

1.1.3. Гистофизиология кишечника.

1.2. Функциональная роль нейроиммуноэндокринных взаимодействий в эпителии кишечника.

1.3. Возрастные изменения в кишечном эпителии.

1.4. Радиационное воздействие (как модель преждевременного старения) на кишечный эпителий.

1.5.0собенности экспрессии хромогранина А и протеина Ю-67 в эпителии кишечника.

1.5.1. Особенности экспрессии хромогранина А.

1.5.2. Особенности экспрессии протеина К1-67.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Характеристика исследуемого материала.

2.2. Иммуногистохимическое исследование.

2.3. Компьютерный анализ микроскопических изображений и статистическая обработка результатов.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Иммуногистохимическое исследование кишечного эпителия человека.

3.2. Иммуногистохимическое исследование кишечного эпителия облученных и необлученных крыс разных возрастных групп.

3.2.1 .Экспрессия Ш-67.

3.2.2. Экспрессия хромограиина А.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Пролиферативная активность эпителия кишечника при естественном и радиационном старении»

Актуальность темы

Желудочно-кишечный тракт (ЖКТ) является основным органом, посредством которого организм осуществляет контакт с окружающей средой. Способность к клеточному обновлению двух основных типов клеток кишечного эпителия — эпителиоцитов и нейроэндокринных клеток является важным механизмом в обеспечении и поддержании физиологической функции кишечника при старении организма и при действии экологически неблагоприятных факторов [Анисимов В.Н., Хавинсон В.Х., 1991; Анисимов В.Н., Соловьев М.В., 1999; King М.А. et al., 1980].

Многочисленные данные свидетельствуют о том, что после аварии на Чернобыльской АЭС нарушения деятельности желудочно-кишечного тракта у лиц, проживающих на зараженных территориях, занимают одно из ведущих мест в патогенезе различных заболеваний [Ярилин A.A., 1996, 1997]. Многие из этих нарушений подобны тем, которые развиваются в организме человека в процессе старения. Поэтому поиск средств защиты от длительного действия облучения в относительно малых дозах [Зайнуллин В.Т. и др. 1999; Москалёв A.A., Зайнуллин В.Т., 2004; Beetz А., et al., 1997] имеет значение и для решения проблем геронтологии.

В настоящее время общепризнано, что ЖКТ является мощным эндокринным органом. В нем локализуется более 20 типов эндокринных клеток, в которых синтезируется более 30 гормонов локального и общего значения. Кишечный эпителий является одним из ключевых компартментов как иммунной, так и нейроэндокринной системы, и относится к числу наиболее радиочувствительных тканей с высоким пролиферативным потенциалом. Изучение сходства результатов при облучении организма человека малыми дозами ионизирующего излучения с последствиями естественного старения - активно развивающееся в настоящее время направление теоретических и клинических исследований [Анисимов В.Н. и др., 1992; Зайнуллин В.Т., Москалев A.A., 2000, 2001].

В этой связи, изучение процессов клеточного обновления эпителиоцитов и нейроэндокринных клеток кишечника при естественном старении и при действии ионизирующего излучения представляет большой интерес, поскольку известно, что облучение в сублетальных дозах является моделью радиационного старения, что позволяет оценить лучевые воздействия как экологический фактор, способствующий ускорению старения организма [Москалёв A.A., Зайнуллин В.Т., 2001; Москалев A.A., 2008].

Принимая во внимание указанные обстоятельства, изучение пролиферативной активности клеток обоих популяций желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) как основного признака интенсивности процессов клеточного обновления при естественном и артифициальном (радиационном) старении, является актуальным и необходимым для разработки гормонотропных подходов профилактики возраст-ассоциированной патологии.

Цель и задачи исследования

Целью диссертационного исследования является изучение возрастных особенностей пролиферации эпителиоцитов и динамики популяции нейроэндокринных клеток кишечника при естественном и радиационном старении.

Для достижения указанной цели были поставлены и последовательно решены следующие задачи:

1. Провести иммуногистохимическую верификацию популяции нейроэндокринных клеток в кишечнике человека и экспериментальных животных (крыс).

2. Изучить динамику популяции нейроэндокринных клеток кишечника человека при естественном старении.

3. Изучить динамику популяции нейроэндокринных клеток кишечника крыс в модели радиационного старения.

4. Сравнить показатели возрастной динамики пролиферативной активности клеток кишечного эпителия у человека при старении и у крыс в модели радиационного старения.

5. Выявить корреляции между динамикой популяции нейроэндокринных клеток и пролиферативной активностью эпителиоцитов в кишечнике млекопитающих при естественном и радиационном старении.

Научная новизна

В работе впервые изучена возрастная динамика изменения популяций клеток кишечного эпителия человека при старении. Установлено, что экспрессия фактора пролиферации Кл-67 в стенках сосудов, в эпителиальных клетках и в соединительно-тканных клетках кишечника достоверно изменяется с возрастом. Полученные результаты указывают на то, что протеин Кл-67 вовлечен в поддержание функций желудочно-кишечного тракта при старении.

Впервые зарегистрированы корреляции между усилением экспрессии хромогранина А в нейроэндокринных клетках кишечника и усилением их пролиферативной активности. Установлено снижение числа апудоцитов, экспрессирующих хромогранин А, у пожилых людей, людей старческого возраста и долгожителей, что свидетельствует о том, что роль кишечника как нейроэндокринного органа с возрастом снижается. Уменьшение локальной секреции гормонов в свою очередь 7 играет важную роль в патогенезе заболеваний желудочно-кишечного тракта, ассоциированных с возрастом.

Получены достоверные данные и выявлены корреляции между пролиферативной и нейроэндокринной активностью в эпителии кишечника крыс при воздействии ионизирующей радиации (модель старения) в сублетальных дозах с последующей экстраполяцией полученных данных на эпителий кишечника человека. Выявлено, что уровень экспрессии маркера Кл-67 у молодых и старых крыс различен. Экспрессия Кь67 с возрастом снижается, особенно по показателю площади экспрессии, что отражает тотальное подавление процессов клеточного обновления в кишечном эпителии при радиационно смоделированном старении.

Практическая значимость

Впервые зарегистрирована возрастная динамика изменения популяций клеток кишечного эпителия при естественном и радиационном старении. Результаты исследования свидетельствуют о важной роли кишечника не только как пищеварительного, но и как эндокринного органа, обеспечивающего локальную секрецию гормонов, влияющих на процессы клеточного обновления в эпителии желудочно-кишечного тракта, что в свою очередь играет важную роль в патогенезе заболеваний желудочно-кишечного тракта, ассоциированных с возрастом. Полученные данные открывают перспективы для разработки гормонотропных подходов профилактики возраст-ассоциированной патологии желудочно-кишечного тракта.

Положения, выносимые на защиту

1. Экспрессия универсального маркера гормональной секреции хромогранина А в эпителии кишечника человека и крыс повышается при естественном старении.

2. В кишечном эпителии человека и экспериментальных животных выявлен ключевой фактор пролиферации протеин Кл-67, экспрессия которого повышается при естественном старении.

3. Повышение экспрессии хромогранина А и протеина Кл-67 при естественном старении отражает компенсаторно-приспособительные процессы, развивающиеся в кишечнике при его инволюции.

4. Радиационное старение способствует снижению экспрессии хромогранина А в кишечнике крыс, что отражает повреждающее действие на эпителий ионизирующего излучения и нарушает локальную независимую регуляцию пищеварительных функций.

5. При радиационном старении зарегистрировано усиление пролиферативных процессов в кишечнике крыс, при этом общая популяция клеток, прошедших митоз увеличивается в 2 раза.

6. Зарегистрировано отсутствие корреляций между пролиферативной активностью эпителиоцитов и нейроэндокринных клеток кишечника при естественном и радиационном старении, что свидетельствует об автономности функционирования этих клеточных популяций при развитии возрастных инволютивных изменений пищеварительного тракта.

Связь с научно-исследовательской работой Института

Диссертационная работа является темой, выполняемой по основному плану НИР Санкт-Петербургского института биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН.

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, 3 глав, выводов и указателя литературы. Текст диссертации изложен на 105 страницах, содержит 8 таблиц, иллюстрирован 30 рисунками. Список литературы содержит 175 источников, из которых отечественных — 46.

Заключение диссертации по теме «Геронтология и гериатрия», Гусельникова, Екатерина Александровна

выводы

1. В кишечнике человека и экспериментальных животных (крыс) верифицирована популяция нейроэндокринных клеток, способных экспрессировать универсальный маркер гормональной секреции — хромогранин А.

2. Экспрессия хромогранина А достоверно повышается при естественном старении у человека, что отражает усиление роли нейроэндокринных клеток кишечника в обеспечении компенсаторно-приспособительных процессов, развивающихся в кишечнике при его возрастной инволюции.

3. Снижение экспрессии хромогранина А в кишечнике крыс при радиационном старении отражает повреждающее действие на эпителий ионизирующего излучения и нарушает локальную независимую регуляцию пищеварительных функций.

4. Повышение экспрессии ключевого фактора пролиферации протеина Кл-67 в кишечнике людей при естественном старении, по-видимому, связано с компенсаторными процессами, направленными на сохранение популяции клеток кишечника при развивающихся возраст-обусловленных инволютивных процессах.

5. При радиационном старении зарегистрировано снижение пролиферативных процессов в кишечнике крыс, при этом общая популяция клеток, прошедших митоз увеличивается в 2 раза. Это свидетельствует о сохранении пролиферативного потенциала отдельных клеток, тогда как клеточное обновление популяции в целом снижается.

6. Увеличение популяции двух типов клеток слизистой оболочки кишечника (как эпителиоцитов, так и нейроэндокринных клеток), наблюдаемое при естественном и радиационном старении у млекопитающих свидетельствует об активном участии механизмов клеточного обновления, обеспечивающих относительную возрастную сохранность пищеварительных и общегомеостатических функций.

7. Отсутствие корреляций между пролиферативной активностью эпителиоцитов и нейроэндокринных клеток кишечника при естественном и радиационном старении свидетельствует об автономности функционирования этих клеточных популяций при развитии возрастных инволютивных изменений пищеварительного тракта.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. При патогистологическом исследовании гастро-, дуодено- и колонобиопсий у пациентов пожилого и старческого возраста рекомендуется проводить иммуногистохимические изучения с маркерами - хромогранином А и Кь67 для анализа репарационных способностей эпителия.

2. При исследовании различной желудочно-кишечной патологии, связанной с возрастом, для оптимизации синтеза и секреции гормонов, продуцируемых желудочно-кишечным трактом, могут быть включены пептидные биорегуляторы в качестве гормонотропного подхода профилактики возраст-ассоциированной патологии желудочно-кишечного тракта.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Гусельникова, Екатерина Александровна, 2011 год

1. Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия. Руководство. М.: Медицина, 1990. 384 с.

2. Акоев И.Г. Проблемы постлучевого восстановления. М.: Атомиздат. -1970.- 156 с.

3. Анисимов В.Н., Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. Увеличение продолжительности жизни и снижение частоты опухолей у мышей СЗН/Sn под влиянием полипептидных факторов тимуса и эпифиза // Докл.АН СССР. 1982. - Т. 263, № 3. - С. 742-745.

4. Анисимов В.Н., Хавинсон В.Х. Влияние полипептидного препарата эпифиза на продолжительность жизни и частоту спонтанных опухолей у старых самок крыс // Докл.АН СССР. 1991. - Т. 319, № 1. - С. 250-253.

5. Анисимов В.Н., Мирецкий Г.И., Морозов В.Г. Павельева И.А., Хавинсон В.Х. Влияние синтетического иммуномодулятора тимогена на радиационный канцерогенез у крыс // Вопр.онкологии. 1992. - Т. 38, №4. - С. 451-458.

6. Анисимов В.Н., Прокопенко В.М., Хавинсон В.Х. Мелатонин и эпиталамин угнетают процесс свободнорадикального окисления у крыс // Докл.АН. 1995. - Т. 343, № 4. - С. 557-559.

7. Анисимов В.Н., Соловьев М.В. Эволюция концепций в геронтологии. СПб., 1999.- 130 с.

8. Ашмарин И.П., Обухова М.Ф. Регуляторные пептиды. Функционально-непрерывная совокупность // Биохимия. 1986. - Т. 51,№4.-С. 531-545.

9. Ашмарин И.П., Каменская М.А. Нейропептиды в синаптической передаче // Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Серия «Физиология человека и животных». М., 1988. Т. 34. - С. 184.

10. Бабаева А.Г. Кроветворные и лимфоидные органы. В кн.: Структурные основы адаптации нарушенных функций: Руководство / Под ред. Д.С.Саркисова. М.: Медицина, 1987. С. 328-342.

11. П.Берлин Л.Б., Лисочкин Б.Г., Сафонов Г.И., Успенский В.М. Атлас патологической гистологии слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки. М.: Медицина, 1975. 167 с.

12. Гилберт С. Биология развития, Том I. М: Мир, 1993. 228 с.

13. Гинкул Л.Б., Александрова С.А., Швембергер И.Н. Белки, принимающие участие в FAS-опосредованном апоптозе между опухолевыми клетками и лимфоцитами при их сокультивировании // Вопросы онкологии. 2007. - Т. 53, № 2. - С. 185-193

14. Гусейнова С.Т., Гусейнов Т.С. Анатомия структур слизистой оболочки тонкой кишки белых крыс // Современные наукоемкие технологии. Серия "Медико-биологические науки". 2010. - №8. -С.140.

15. Зайнуллин В.Г., Москалев A.A., Шапошников М.В. Радиационная биология //Радиоэкология. 1999. - Т. 39, № 1. - С. 49.

16. Зайнуллин В.Г., Москалев A.A. Изменчивость продолжительности жизни имаго дрозофилы в условиях хронического облучения в малых дозах радиации. Радиационная биология // Радиоэкология. 2000. - Т. 40, №5.-С. 281.

17. Зайнуллин В.Г., Москалев A.A. Изменчивость продолжительности жизни имаго дрозофилы в условиях хронического облучения в малых дозах радиации. Радиационная биология // Радиоэкология. 2000. - Т. 40, №5.-С. 281.

18. Зайнуллин В.Т., Москалев A.A. Радиационное изменение продолжительности жизни лабораторных линий Drosophila melanogaster // Генетика. 2001. - Т. 37, № 9. с. 1304.

19. ЗмушкоЕ.И., Белозеров Е.С., Митин Ю.А. Клиническаяиммунология.-СПб.: Питер, 2001.-574 с.

20. Зуссман М. Биология развития. М: Мир, 1977. 238 с.

21. Кветной И.М., Южаков В.В. Апудоциты и тучные клетки желудочно-кишечного тракта: иммуногистохимическая и ультраструктурная идентификация // Архив патологии. 1987. - Т. 49, № 7. - С. 77.

22. Кветной И.М., Комаров Ф.И., Осадчук A.M., Осадчук М.А. Неспецифический язвенный колит. Издательство: МИА, 2008. — 256 с.

23. Коноплянников А.Г. Медицинская радиология и радиационная безопасность. 1987. - Т. 12, № 1. - С. 53.

24. Коноплянников А.Г. Молекулярные и клеточные механизмы поздних лучевых поражений // Радиационная биология. Радиоэкология. 1997. -Т. 37, №4.-С. 621.

25. Кудряшов Ю.Б. О химической защите от ионизирующей радиации низкой интенсивности // Радиационная биология. Радиоэкология. -1997.-Т. 37, №4.-С. 673.

26. Кудряшов Ю.Б., Гончаренко E.H., Антонова C.B., Ахалая М.Я., Байжуманов A.A. Исследование действия сублетальных доз ионизирующих излучений на эндогенный фон радиорезистентности // Радиационная биология. Радиоэкология. 1997. - Т. 37, № 3. - С. 372376.

27. Кудряшов Ю.Б. Основные принципы в радиобиологии //

28. Радиационная биология. Радиоэкология. — 2001. Т. 41, №5. - С. 531548.

29. Кудряшов Ю.Б. Радиационная биофизика (ионизирующие излучения) // Издательство : Физматлит, 2004. 446 с.

30. Лушников Е.Ф., Абросимов А.Ю. Гибель клетки (апоптоз).-М.: Медицина, 2001.-190 с.

31. Москалёв A.A., Зайнуллин В.Г. Изучение роли апоптической гибели клетки в радиоиндуцированном старении у Drosophila melanogaster // Радиационная биология. Радиоэкология. 2001. - Т. 41, № 6. - С. 650.

32. Москалёв A.A., Зайнуллин В.Г. Возрастная динамика активности имаго после хронического облучения личинок у линий дрозофилы с нарушениями регуляции апоптоза // Генетика. 2004. - Т. 40, № 2. - С. 277.

33. Москалев A.A. Генетические исследования влияния ионизирующей радиации в малых дозах на продолжительность жизни // Радиационная биология. Радиоэкология. 2008. - Т. 48, № 2. - С. 139145.

34. Ноздрачев А. Д., Баженов Ю. И., Баранникова И. А., Батуев А. С. и др. Начала физиологии. СПб, 2001. 1088 с.

35. Ноздрачев А.Д., Филиппова Л.В., Шерман Н.О., Панасюк Н.В. Интерлейкин-lß оказывает стимулирующее действие на интероцепторы тонкой кишки // Доклады Академии наук. 2001. - Т. 376, № 1.-С. 124.

36. Осадчук М.А., Козлова И.В. Болезни тонкой и толстой кишки. Саратов: СГМУ, 1998. 192 С.

37. Осадчук М.А., Горемыкин В.И., Козлова И.В. Гастроэнтерология. Саратов: СГМУ, 1998. 406 С.

38. Пестерова В.В., Моисеева В.П. Применение тималина у больного с иммунодефицитным состоянием после тимэктомии // Клинич. медицина. 1983. - Т. 61, № 6. - С.36-38.

39. Проскуряков С .Я., Коноплянников А.Г., Верховский Ю.Г., Ульянова Л.П. Модификаторы выживаемости гибели стволовых клеток эпителия кишечника и танатогенные механизмы // Радиационная биология. Радиоэкология. 2008. - Т. 48, № 6. - С. 721-729.

40. Чернышёва М.П. Гормоны животных: введение в физиологическую эндокринологию.-СПб.: Глаголъ, 1995. 293 с.

41. Эллидини В.Н., Аникеева Н.В., Максимова H.A. Практическая иммуноцитохимия. СПб. — 2002. - 35 с.

42. Южаков В.В., Райхлин Н.Т., Кветной И.М. Современные методы изучения функциональной морфологии эндокринных клеток // Архив патологии. 1996. - Т. 58, № 2. - С. 21.

43. Ярилин A.A. Апоптоз как адаптивная реакция на стресс-воздействие // Иммунология. 1996. - Т 2, № 6. - С. 10.

44. Ярилин A.A., Беляков И.М. Тимус как орган эндокринной системы // Иммунология. 1996. - Т. 3, № 1. - С. 4.

45. Ярилин A.A. Апоптоз и его место в иммунных процессах // Иммунология. 1996. - Т. 4, № 5. - С. 7.

46. Ярилин A.A. Цитокиновая сеть нейтрофилов при воспалении // Иммунология. 1997. - Т. 5, № 54. - С. 7.

47. Al-Rubeai M., Singh R.P. Apoptosis in cell culture // Curr. Opin. Biotech. 1998.-Vol. 9.-P. 152-156.

48. Baudin E., Bidart J.M., Bachelot A., Ducreux M., Elias D., Ruffié P., Schlumberger M. Impact of chromogranin A measurement in the work-up of neuroendocrine tumors // Ann. Oncol. 2001. - Vol. 12 Suppl 2. - P. 7982.

49. Baum B, Meneses F, Kleinschmidt S, Nolte I, Hewicker-Trautwein M.

50. Age-related histomorphologic changes in the canine gastrointestinal tract: a histologic and immunohistologic study // World J Gastroenterol. -2007. Vol. 13, N 1. -P. 152-157.

51. Beetz A., Messer G., Oppel T., van Beuningen D., Peter R.U., Kind P. Induction of interleukin 6 by ionizing radiation in a human epithelial cell line: control by corticosteroids // Int. J. Radiat. Biol. 1997. - Vol. 72, N 1. -P. 33-43.

52. Borisov A.V. Resent data on morphology of the lymph vessels of the mesentery of the small intestine in man // Arkh. Anat. Gistol. Embriol. -1958.-Vol. 35, N1.-P. 75-81.

53. Buatti J.M., Harari P.M., Leigh B.R., Cassady J.R. Radiation-induced angiosarcoma of the breast. Case report and review of the literature // Am. J. Clin. Oncol. 1994. - Vol. 17, N 5. - P. 444-447.

54. Cairnie A.B., Lamerton L.F., Steel G.G. Cell proliferation studies in the intestinal epithelium of the rat. II. Theoretical aspects // Exp. Cell Res. -1965. Vol. 39, N 2. - P. 539-553.

55. Cairnie A.B., Lamerton L.F., Steel G.G. Cell proliferation studies in the intestinal epithelium of the rat. I. Determination of the kinetic parameters // Exp. Cell Res. 1965. - Vol. 39, N 2. - P. 528-538.

56. Cardell S., Sander B., Möller G. Helper interleukins are produced by both CD4 and CD8 splenic T cells after mitogen stimulation // Eur. J. Immunol. 1991. - Vol. 21, N 10. - P. 2495-2500.

57. Cretich M., Longhi R., Corti A., Damin F., Di Carlo G., Sedini V., Chiari M. Epitope mapping of human chromogranin A by peptide microarrays // Methods Mol. Biol. 2009. - Vol. 570. - P. 221-232.

58. Darlington D., Rogers A.W. Epithelial lymphocytes in the small intestine of the mouse // J. Anat. 1966. - Vol. 100, N 4. - P. 813-830.

59. Deschenes C, Alvarez L, Lizotte ME, Vezina A, Rivard N. The nucleocytoplasmic shuttling of E2F4 is involved in the regulation of human intestinal epithelial cell proliferation and differentiation. // J Cell Physiol. 2004. Vol. 199, N 2. - P. 262-273.

60. Dondua A.K., Efremov V.l., Krichinskaya E.B., Nikolaeva LP. Mitotic index, duration of mitosis and proliferation activity in the early phases of the development of the chick embryo. Acta Biol. Acad. Sei. Hung. 1966. -Vol. 17, N2.-P. 127-143.

61. Dubois A., Walker R.I. Prospects for management of gastrointestinal injury associated with the acute radiation syndrome // Gastroenterology. -1988. Vol. 95, N 2. - P. 500-507.

62. Deftos L.J. Chromogranin A: its role in endocrine function and as an endocrine and neuroendocrine tumor marker // Endocr. Rev. 1991. - Vol. 12, N2. - P. 181-187.

63. El-Salhy M, Sandstrom O, Násstrom E, Mustajbasic M, Zachrisson S. Application of computer image analysis in endocrine cell quantification // Histochem J. 1997. Vol. 29, N 3. - P. 249-256.

64. Endl E., Gerdes J. The Ki-67 protein: fascinating forms and an unknown function // Exp. Cell Res. 2000. - Vol. 257, N 2. - P. 231-237.

65. Endl E., Kausch I., Baack M., Knippers R., Gerdes J., Scholzen T. The expression of Ki-67, MCM3, and p27 defines distinct subsets of proliferating, resting, and differentiated cells // J. Pathol. 2001. - Vol. 195, N4. - P. 457-462.

66. Feldman S.A., Eiden L.E. The chromogranins: their roles in secretion from neuroendocrine cells and as markers for neuroendocrine neoplasia // Endocr. Pathol. 2003. - Vol. 14, N 1. - P. 23.

67. Ferrari L., Seregni E., Martinetti A., Van Graafeiland B., Nerini-Molteni S., Botti C., Artale S., Cresta S., Bombardieri E. Chromogranin A measurement in neuroendocrine tumors // Int. J. Biol. Markers. 1998. -Vol. 13, N 1. - P. 3-9.

68. Ferrari L., Seregni E., Bajetta E., Martinetti A., Bombardieri E. The biological characteristics of chromogranin A and its role as a circulatingmarker in neuroendocrine tumours // Anticancer Res. 1999. - Vol. 19, N 4.-P. 3415-3427.

69. Fujiyama Y, Ishizuka I, Koyama S. Histochemical diagnosis of short segment Barrett's esophagus // Nippon Rinsho. 2005. Vol. 63, N 8. - P. 1420-1426.

70. Galli M.C., Smyth M.J., Young H.A., Reynolds C.W., Ortaldo J.R. Differential regulation of interleukin-1 gene expression in human CD3-large granular lymphocytes // Cell Immunol. 1990. - Vol. 131, N 1. - P. 184-190.

71. Gartner L.P, Hiatt J.M. Color Textbook of Histology, 3th ed., The McGraw-Hill Companies, 2006. 592 p.

72. Gerdes J. Ki-67 and other proliferation markers useful for immunohistological diagnostic and prognostic evaluations in human malignancies // Semin. Cancer Biol. 1990. - Vol. 1, N 3. - P. 199-206.

73. Glinicki P., Jeske W. Chromogranin A (CgA) characteristic of the currently available laboratory methods and conditions which can influence the results //Endokrynol. Pol. - 2009. - Vol. 60, N 5. - P. 415-419.

74. Gordon J.R., Burd P.R., Galli S.J. Mast cells as a source of multifunctional cytokines // Immunol. Today. 1990. - Vol. 11, N 12. - P. 458-464.

75. Gorard D.A., Farthing M.J. Intestinal motor function in irritable bowel syndrome // Dig. Dis. 1994. - Vol. 12, N 2. - P. 72-84.

76. Grad B., Stevens C.E., Leblond C.P. The localization of radio-phosphorus in soft tissues with resulting destruction // Acta Unio. Int. Contra. Cancrum. 1952. - Vol. 7, N 5. - P. 834-838.

77. Grad B., Stevens C.E. Histological changes produced by a single large injection of radioactive phosphorus (P32) in albino rats and in C3H mice // Cancer Res. 1950. - Vol. 10, N 5. - P. 289-296.

78. Guy-Grand D., Dy M., Luffau G., Vassalli P. Gut mucosal mast cells. Origin, traffic, and differentiation // J. Exp. Med. 1984. - Vol. 160, N 1. -P. 12-28.

79. Hausken T. The role of chromogranin A in irritable bowel syndrome // J. Gastrointestin. Liver Dis. 2009. - Vol. 18, N 2. - P. 259.

80. Hendy G.N., Bevan S., Mattei M.G., Mouland A.J. Chromogranin A // Clin. Invest. Med. 1995. - Vol. 18, N 1. - P. 47-65.

81. Helle K.B. The granin family of uniquely acidic proteins of the diffuse neuroendocrine system: comparative and functional aspects // Biol. Rev. Camb. Philos. Soc. 2004. - Vol. 79, N 4. - P. 769-794.

82. Helle K.B., Corti A., Metz-Boutigue M.H., Tota B. The endocrine role for chromogranin A: a prohormone for peptides with regulatory properties // Cell Mol. Life Sci. 2007. - Vol. 64, N 22. - P. 2863-2886.

83. Hofer D, Drenckhahn D. Cytoskeletal markers allowing discrimination between brush cells and other epithelial cells of the gut including enteroendocrine cells.// Histochem Cell Biol. 1996. Vol. 105, N 5. - P. 405-412.

84. Horsch D, Fink T, Goke B, Arnold R, Buchler M, Weihe E. Distribution and chemical phenotypes of neuroendocrine cells in the human anal canal // Regul Pept. 1994. Vol. 54, N 2-3. - P. 527-542.

85. Horn L.C., Hentschel B., Meinel A., Alexander H., Leo C. Cyclooxygenase-2 expression, Ki-67 labeling index, and perifocal neovascularization in endometriotic lesions // Ann. Diagn. Pathol. 2009. -Vol. 13, N6.-P. 373-377.

86. Ivanov E.V., Nemiro E.A., Kal'nitskii S.A., Gubatova D.I., Balode G.I. Patient radiation safety in performing electroroentgenography // Gig. Sanit. 1981.-Vol. 11.-P. 66-68.

87. Johannessen A.L., Torp S.H. The clinical value of Ki-67/MIB-l labeling index in human astrocytomas // Pathol. Oncol. Res. 2006. - Vol. 12, N 3. -P. 143-147.

88. Kasprzak A., Zabel M., Biczysko W. Selected markers (chromogranin A, neuron-specific enolase, synaptophysin, protein gene product 9.5) in diagnosis and prognosis of neuroendocrine pulmonary tumours // Pol. J. Pathol. 2007. - Vol. 58, N 1. - P. 23-33.

89. Kidd M., Modlin I.M., Mane S.M., Camp R.L., Shapiro M.D. Q RT-PCR detection of chromogranin A: a new standard in the identification of neuroendocrine tumor disease // Ann. Surg. 2006. - Vol. 243, N 2. - P. 273-280.

90. Kim SJ, Cheung S, Hellerstein MK. Isolation of nuclei from label-retaining cells and measurement of their turnover rates in rat colon. // Am J Physiol Cell Physiol. 2004. Vol. 286, N 6. - P. 1464-1473.

91. King M.A., Casarett G.W., Weber D.A., Burgener F.A., O'Mara R.E., Wilson G.A. A study of irradiated bone. III. Scintigraphic and radiographic detection of radiation-induced osteosarcomas // J. Nucl. Med. 1980. - Vol. 21, N5. - P. 426-431.

92. King M.A., Weber D.A., Casarett G.W., Burgener F.A., Corriveau O. A study of irradiated bone. Part II. changes in Tc-99m pyrophosphate bone imaging//J. Nucl. Med. 1980. - Vol. 21, N 1. - P. 22-30.

93. Khavinson V.K., Popuchiev V.V., Kvetnoii I.M., Yuzhakov V.V., Kotlova L.N. Regulating Effect of Epithalone on Gastric Endocrine Cells in Pinealectomized Rats // Bulletin of Experimental Biology and Medicine. 2000. - Vol. 130, N 12. - P. 1169-1171.

94. Kozina L.S., Arutiunian A.V., Stvolinskil S.L., Khavinson V.K. Biological activity of regulatory peptides in model experiments in vitro // Adv. Gerontol. 2008. - Vol. 21, N 1. - P. 68-73.

95. Kreitz S., Fackelmayer F.O., Gerdes J., Knippers R. The proliferation-specific human Ki-67 protein is a constituent of compact chromatin // Exp. Cell Res. 2000. - Vol. 261, N 1. - P. 284-292.

96. Kudryashov I.E., Ivanova E.M. Investigation of the influence of a vasopressin analog on the efficiency of glutamatergic transmission in the hippocampus // Neurosci. Behav. Physiol. 1996. - Vol. 26, N 5. - P. 441444.

97. Kvetnoy I.M., Yuzhakov V.V. Extrapineal melatonin: advances in microscopical identification of hormones in endocrine and nonendocrine cells // Journal of Micronutrient Analysis. 1993. - Vol. 5, N 21. - P. 19.

98. Kvetnoy I.M., Yuzhakov V.V., Raikhlin N.T. APUD-cells: modern strategy of morphofunctional analysis // Journal of Micronutrient Analysis. 1997.-Vol. 46, N 1. - P. 25.

99. Landberg G., Tan E.M., Roos G. Flow cytometric multiparameter analysis of proliferating cell nuclear antigen/cyclin and Ki-67 antigen: a new view of the cell cycle // Exp. Cell Res. 1990. - Vol. 187, N 1. - P. 111-118.

100. Leblond J., Mignet N., Leseurre L., Largeau C., Bessodes M., Scherman D., Herscovici J. Design, synthesis, and evaluation of enhanced

101. DNA binding new lipopolythioureas // Bioconjug. Chem. 2006. - Vol. 17, N5. - P. 1200-1208.

102. Lloyd K.O., Yin B.W., Kudryashov V. Isolation and characterization of ovarian cancer antigen CA 125 using a new monoclonal antibody (VK-8): identification as a mucin-type molecule // Int. J. Cancer. 1997. - Vol. 71, N5. - P. 842-850.

103. Loh Y.P., Kim T., Rodriguez Y.M., Cawley N.X. Secretory granule biogenesis and neuropeptide sorting to the regulated secretory pathway in neuroendocrine cells // J. Mol. Neurosci. 2004. - Vol. 22, N 1-2. - P. 6371.

104. Loran M.R., Crocker T.T. Population dynamics of intestinal epithelia in the rat two months after partial resection of the ileum // J. Cell Biol. -1963. Vol. 19. - P. 285-291.

105. Malaguarnera M., Vacante M., Fichera R., Cappellani A., Cristaldi E., Motta M. Chromogranin A (CgA) serum level as a marker of progression in hepatocellular carcinoma (HCC) of elderly patients // Arch. Gerontol. Geriatr. 2009. - Vol. 45. - P. 18.

106. Modlin I.M., Kidd M., Pfragner R., Eick G.N., Champaneria M.C. The functional characterization of normal and neoplastic humanenterochromaffm cells // J. Clin. Endocrinol. Metab. 2006. - Vol. 91, N 6.- P. 2340-2348.

107. Monteleone G., Holloway J., Salvati V.M., Pender S.L., Fairclough P.D., Croft N., MacDonald T.T. Activated STAT4 and a functional role for IL-12 in human Peyer's patches // J. Immunol. 2003. - Vol. 170, N 1.- P. 300-307.

108. Montero-Hadjadje M., Vaingankar S., Elias S., Tostivint H., Mahata S.K., Anouar Y. Chromogranins A and B and secretogranin II: evolutionary and functional aspects // Acta. Physiol. 2008. - Vol. 192, N 2. - P. 309-324.

109. Nishimura R., Osako T., Okumura Y., Hayashi M., Arima N. Clinical significance of Ki-67 in neoadjuvant chemotherapy for primary breastcancer as a predictor for chemosensitivity and for prognosis // Breast Cancer. 2009. - Vol. 65, N 21. - P. 124-129.

110. Nobels F.R., Kwekkeboom D.J., Bouillon R., Lamberts S.W. Chromogranin A: its clinical value as marker of neuroendocrine tumours // Eur. J. Clin. Invest. // 1998. Vol. 28, N 6. - P. 431-440.

111. Ozawa H., Takata K. The granin family—its role in sorting and secretory granule formation // Cell Struct. Funct. 1995. - Vol. 20, N 6. -P. 415-420.

112. Parwaresch M.R., Horny H.P., Lennert K. Tissue mast cells in health and disease // Pathol. Res. Pract. 1985. - Vol. 179, N 4-5. - P. 439-461.

113. Perlstein R.S., Mehta N.R., Mougey E.H., Whitnall M.H., Neta R. Whole-body irradiation transiently diminishes the adrenocorticotropin response to recombinant human interleukin-1 alpha // Radiat. Res. 1995. -Vol. 141, N3. - P. 336-341.

114. Quinlan JM, Yu WY, Hornsey MA, Tosh D, Slack JM. In vitro culture of embryonic mouse intestinal epithelium: cell differentiation and introduction of reporter genes. // BMC Dev Biol. 2006. - Vol. 25, P. 6 -24.

115. Roa E.I., Elorza D.X., Lantadilla H.S., Ibacache S.G., de Aretxabala U.X. Immunohistochemical expression of Ki-67 as a marker of proliferation in gallbladder mucosa samples with or without cancer // Rev. Med. Chil. 2009. - Vol. 137, N 7. - P. 881-887.

116. Rorstad O. Prognostic indicators for carcinoid neuroendocrine tumors of the gastrointestinal tract // J. Surg. Oncol. 2005. - Vol. 89, N 3. - P. 151-160.

117. Sandstrôm O, El-Salhy M. Ageing and endocrine cells of human duodenum. // Mech Ageing Dev. 1999. Vol. 108, N 1. - P. 39-48.

118. Satoh S., Toda S., Narikawa K., Watanabe K., Tsuda K., Kuratomi Y., Sugihara H., Inokuchi A. Spindle epithelial tumor with thymus-like differentiation (SETTLE): youngest reported patient // Pathol. Int. 2006. -Vol. 56, N9.-P. 563-567.

119. Scholzen T., Gerdes J. The Ki-67 protein: from the known and the unknown // J. Cell Physiol. 2000. - Vol. 182, N 3. - P. 311-322.

120. Sedgwick D.M., Howard G.C., Ferguson A. Pathogenesis of acute radiation injury to the rectum. A prospective study in patients // Int. J. Colorectal. Dis. 1994. - Vol. 9, N 1. - P. 23-30.

121. Sedgwick D.M., Ferguson A. Dose-response studies of depletion and repopulation of rat intestinal mucosal mast cells after irradiation // Int. J. Radiat. Biol. 1994. - Vol. 65, N 4. - P. 483-495.

122. Seigneurin D., Guillaud P. Ki-67 antigen, a cell cycle and tumor growth marker//Pathol. Biol. 1991. - Vol. 39, N 10. - P. 1020-1028.

123. Seregni E., Ferrari L., Bajetta E., Martinetti A., Bombardieri E. Clinical significance of blood chromogranin A measurement in neuroendocrine tumours // Ann. Oncol. 2001. Vol. 12 Suppl 2. - P. 69-72.

124. Shiraishi J., Nomori H., Orikasa H., Mori T., Yamazaki K. Atypical thymoma (WHO B3) with neuroendocrine differentiation: report of a case // Virchows Arch. 2006. - Vol. 449, N 2. - P. 234-237.

125. Soffer E.E. Small bowel motility: ready for prime time? // Curr. Gastroenterol. Rep. 2000. - Vol. 2, N 5. - P. 364-369.

126. Talghini S., Halimi M., Baybordi H. Expression of P27, Ki67 and P53 in squamous cell carcinoma, actinic keratosis and Bowen disease // Pak. J. Biol. Sci. 2009. - Vol. 12, N 12. - P. 929-933.

127. Taupenot L., Harper K.L., O'Connor D.T. The chromogranin-secretogranin family // N. Engl. J. Med. 2003. - Vol. 348, N 12. - P. 1134-1149.

128. Terry N.H., Travis E.L. The influence of bone marrow depletion on intestinal radiation damage // Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. 1989. -Vol. 7, N 3. - P. 569-573.

129. Terry N.H., Tucker S.L., Travis E.L. Time course of loss of residual radiation damage in murine skin assessed by retreatment // Int. J. Radiat. Biol. 1989. - Vol. 55, N 2. - P. 271-283.

130. Thomson A.B., Wild G. Small bowel review: Part II // Can. J. Gastroenterol. 1997. - Vol. 11, N 7. - P. 607-618.

131. Thrasher J.D., Greulich R.C. The duodenal progenitor population. I. Age related increase in the duration of the cryptal progenitor cycle // J. Exp. Zool. 1965. - Vol. 59, N 1. - P. 39-46.

132. Thrasher J.D., Greulich R.C. The duodenal progenitor population. II. Age related changes in size and distribution // J. Exp. Zool. 1965. - Vol. 159, N3. - P. 385-396.

133. Thrasher J.D., Greulich R.C. The duodenal progenitor population. 3. The progenitor cell cycle of principal, goblet and paneth cells // J. Exp. Zool. 1966. - Vol. 161, N 1. - P. 9-19.

134. Trier J.S. Enterochromaffin cells of the small intestine // Gastroenterology. 1968. - Vol. 54, N 4. - P. 667.

135. Trier J.S. Cell migration in the intestine // Gastroenterology. 1968. -Vol. 54, N 5. - P. 989-990.

136. Troughton W.D., Trier J.S. Paneth and goblet cell renewal in mouse duodenal crypts // J. Cell Biol. 1969. - Vol. 41, N 1. - P. 251-268.

137. Tyazhelova V.G. Oscillations in blood cells as a consequence of suppressed bone marrow cell production // Cell Tissue Kinet. 1987. -Vol. 20, N 6. - P. 539-549.

138. Wang W., Klein W.H. A G/C-rich DNA-regulatory element controls positive expression of the sea urchin Lytechinus pictus aboral ectoderm-specific LpSl gene // DNA Cell Biol. 1996. - Vol. 15, N 2. - P. 133-145.

139. Vieten D, Corfield A, Ramani P, Spicer R. Proliferative response in necrotising enterocolitis is insufficient to prevent disease progression // Pediatr Surg Int. 2006. Vol. 22, N 1. - P. 50-56.

140. Vitarelli E., Sippelli G., Tuccari G., Barresi G. The use of microwave irradiation for immunohistochemistry: a new methodological proposal // Histol. Histopathol. 1995. - Vol. 10, N 1. - P. 35-38.

141. Wang L., Zheng L., Wang S.Y., Zhu T.F., Zhu H.G. Clonal analysis of gastric carcinoma and precancerous lesions and its relation to Ki-67 protein expression // Neoplasma. 2009. - Vol. 56, N 1. - P. 48-55.

142. Wang S, Liu J, Li L, Wice BM. Individual subtypes of enteroendocrine cells in the mouse small intestine exhibit unique patterns of inositol 1,4,5-trisphosphate receptor expression. // J Histochem Cytochem. 2004. Vol. 52, N l.-P. 53-63.

143. Werneck-Silva AL, Alvares EP, Gama P, Damiao AO, Osaki LH, Ogias D, Sipahi AM. Intestinal damage in strongyloidiasis: the imbalance between cell death and proliferation // Dig Dis Sci. 2006. Vol. 51, N 6. -P. 1063-1069.

144. Wong WM, Stamp GW, Elia G, Poulsom R, Wright NA. Proliferative populations in intestinal metaplasia: evidence of deregulation in Paneth and goblet cells, but not endocrine cells // J Pathol. 2000. Vol. 190, N 1. -P. 107-113.

145. Yamada S, Kojima H, Fujimiya M, Nakamura T, Kashiwagi A, Kikkawa R. Differentiation of immature enterocytes into enteroendocrine cells by Pdxl overexpression. // Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. -2001. Vol. 281, N 1. P. 229-236.

146. Yoshida C., Ishikawa T., Michiue T., Zhao D., Komatsu A., Quan L., Maeda IT. Immunohistochemical distribution of chromogranin A in medicolegal autopsy materials // Leg. Med. 2009. - Vol. 11 Suppl 1. - P. 231-233.

147. Zainullin V.G., Moskalev A.A. Role of Apoptosis in Age-Related Pathologies // Russian Journal of Developmental Biology. 2001. - Vol. 32, N4. - P. 199-204.

148. Zhao E., Zhang D., Basak A., Trudeau V.L. New insights into granin-derived peptides: evolution and endocrine roles // Gen. Comp. Endocrinol. 2009. - Vol. 164, N 2-3. - P. 161-174.

149. Zook B.C., Bradley E.W., Casarett G.W., Rogers C.C. Pathologic findings in canine brain irradiated with fractionated fast neutrons or photons // Radiat. Res. 1980. - Vol. 84, N 3. - P. 562-578.i