Получение препарата грибной β-галактозидазы для коррекции лактазной недостаточности тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат биологических наук Сухих, Ольга Анатольевна

• Сухих, Ольга Анатольевна
• кандидат биологических наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Сухих, Ольга Анатольевна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 (3-галактозидаза и источники ее получения.

1.2 Механизм действия р-галактозидазы.

1.3 Свойства (3-галактозидаз из различных источников.

1.4 Выделение и очистка Р-галактозидаз.

1.5 Применение препаратов Р-галактозидазы.

1.6 Анализ обзора литератры и задачи исследований.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1 Методы выделения и очистки фермента.

2.2 Методы определения ферментативной активности.

2.3 Методы химических анализов.

2.4 Методы определения степени чистоты препарата.

2.5 Определение молекулярной массы.

2.6 Определение изоэлектрической точки.

2.7 Определение оптимальных условий действия и стабильности фермента.

2.8 Определение влияния различных реагентов на активность Р-галактозидазы.

2.9 Определение кинетических констант гидролиза субстратов.

2.10 Определение специфической активности р-галактозидазы.

2.11 Определение микробиологической чистоты препарата.

ГЛАВА 3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1 Исследование ферментативного комплекса исходного препарата

Лактоканесцин.

3.2 Выделение и очистка Р-галактозидазы из исходного комплексного препарата.

3.2.1 Изучение стабильности р-галактозидазы в водном растворе.

3.2.2 Разработка способа очистки Р-галактозидазы методом ультрафильтрации

3.2.3 Очистка концентрата от микрофлоры методом микрофильтрации

3.2.4 Разработка способа очистки (3-галактоидазы от протеиназы.

3.3 Технологическая схема получения лекарственной субстанции (препарата Галактозим) и ее апробация

3.4 Разработка способа получения высокоочищенной Р-галактозидазы (фермент-стандарта).

3.4.1 Выбор условий предварительной очистки фермента.

3.4.2 Выбор оптимальных условий хроматографического процесса

3.4.3 Обессоливание и концентрирование элюата.

3.4.4 Исследование способов разделения а- и Р-галактозидаз.

3.5 Определение степени чистоты препаратов Р-галактозидазы.

3.6 Изучение физико-химических и каталитических свойств Р-галактозидазы.

3.6.1 Влияние рН среды на активность фермента.

3.6.2 Влияние температуры на активность р-галактозидазы.ЮЗ

3.6.3 Влияние ионов металлов и специфичесих реагентов на активность Р-галактозидазы.

3.6.4 Оределение молекулярной массы.

3.6.5 Определение изоэлектрической точки.

3.6.6 Определение кинетических характеристик Р-галактозидазы.

3.6.6.1 Определение константы Михаэлиса.

3.6.6.2 Определение характера ингибирования и константы ингибиро-вания (3-галактозидазы продуктами гидролиза.

3.7 Изучение специфического действия Р-галактозидазы.

3.7.1 Изучение динамики гидролиза лактозы в молочных продуктах препаратом Галактозим.

3.7.2 Разработка готовой лекарственной формы препарата Галактозим и изучение его эффективности в условиях, имитирующих среду организма.

3.7.2.1 Изучение некоторых фармакологических свойств готовой лекарственной формы препарата Галактозим.

3.7.2.2 Сравнение эффективности действия препаратов Галактозим и Лактраза на лактозу молочных продуктов.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Получение препарата грибной β-галактозидазы для коррекции лактазной недостаточности»

Актуальность темы. Согласно статистическим данным в последние годы в мире значительно сократились темпы роста производства ферментных препаратов для традиционных отраслей применения (пищевая промышленность, бытовая химия, переработка отходов, сельское хозяйство и пр.) ввиду насыщения рынка, в то время как объем производства ферментов для медицинских целей непрерывно растет. По оценкам американской консалтинговой фирмы «Business Communications», среднегодовой прирост объема продаж ферментов медицинского назначения составляет 25,4%. На сегодняшний день в мировой практике до 50% ферментов, используемых в медицине, получают из микробного сырья.

Препараты на основе ферментов используются для профилактики и лечения нарушений пищеварительных процессов, заболеваний сердечно-сосудистой системы, при системной терапии воспалительных процессов, для лечения онкологических заболеваний, ожоговых ран, заболеваний полости рта и др.

Наиболее емким является рынок пищеварительных ферментов. Это связано с тем, что с ухудшением экологической обстановки и повышением психоэмоциональных нагрузок число людей, страдающих нарушениями пищеварения, связанными с недостаточным образованием ферментов, растет из года в год.

Одной из серьезных ферментных патологий является дефицит в организме человека лактазы (гиполактазия). Лактаза ф-галактозидаза) - фермент, вырабатываемый в верхнем отделе тонкого кишечника и катализирющий расщепление лактозы (молочного сахара) на глюкозу и галактозу, которые затем легко всасываются в кровь. Отсутствие или недостаток лактазы приводят к тому, что больные не могут использовать в своем рационе молоко и молочные продукты [Валенкевич, 1989; Turck, 2004]. Это заболевание особенно опасно для детей грудничкового возраста, т. к. молоко является для них основным продуктом питания, и найти молоку полноценную замену для грудных детей чрезвычайно сложно [Корниенко и др., 2006]. По данным ряда авторов, из-за отсутствия или недостатка в слизистой оболочке тонкой кишки лактазы непереносимость молока встречается у 15-30% и более населения нашей страны [Валенкевич, Яхонтова; 1991, Жвавый и др., 1991; Козлов, 1992].

Лицам, страдающим гиполактазией, ранее рекомендовалось исключать из пищи молоко и молочные продукты. Однако необходимо помнить, что молоко занимает особое место среди продуктов питания человека, являясь источником белка, кальция, рибофлавина [Лоранская и др., 1997]. Исключение из рациона молока и молочных продуктов при гиполактазии, особенно у детей, приводит к неоптимальности регулирующих систем организма [Котлукова, 1994].

Лактозная непереносимость может быть преодолена двумя путями: использованием молочных продуктов с частично гидролизованной лактозой, либо приемом биологически активных добавок или лекарственных препаратов, содержащих лактазу.

В настоящее время за рубежом рядом фирм внедрена в производство технология получения низколактозного молока путем предварительного расщепления в нем лактозы с помощью ферментных препаратов микробного происхождения. Низколактозные продукты выпускаются в большинстве стран Западной Европы, Аргентине, Канаде, Японии, Новой Зеландии, США и др.

Новым шагом в лечении гиполактазии стало появление лекарственных препаратов на основе р-галактозидаз микробного происхождения. Первый из подобных ферментных препаратов в таблетированной и жидкой формах был получен фирмой «Sugar Lo Со» (США) из дрожжей Kluyveromyces lactis («Lact-Aid») и применялся для обработки молока перед употреблением в домашних условиях. Затем фирма «Fermentation Industries Kingstree» (США) выпустила в продажу порошок для приема внутрь («Lactrase-N»), содержащий лактазу из микроскопического гриба Aspergillus niger. Известен японский препарат «Га-лантаза» из Aspergillus sp. (фирма «Amano Pharmaceutical»), который применяется для лечения диареи у новорожденных. В настоящее время в США лактаза как средство, помогающее пищеварению, занимает 40% от всего количества производимых пищеварительных ферментов.

В нашей стране производство низколактозного молока и молочных продуктов отсутствует. Не производятся и лекарственные средства для коррекции дефицита лактазы. Импортные препараты, присутствующие на российском фармацевтическом рынке, не удовлетворяют спрос в полном объеме и, кроме того, имеют высокую стоимость. В связи с этим проблема создания конкурентоспособного отечественного высокоэффективного ферментного препарата Р-галактозидазы, который может быть использован как для предварительного гидролиза лактозы в молоке и молочных продуктах, так и для приема внутрь, отличающегося от зарубежных аналогов существенно более низкой ценой, является весьма актуальной, как с позиции социального эффекта, так и с позиции развития биотехнологии - одной из стратегически важных отраслей экономики.

В НТЦ «Лекбиотех» на основе глубинного культивирования микроскопического гриба Penicillium canescens F-l 78 - продуцента Р-галактозидазы - разработана технология получения ферментного препарата Лактоканесцин, предназначенного для гидролиза лактозы в молочной сыворотке. Наличие препарата, содержащего Р-галактозидазу и разрешенного к применению в пищевой промышленности, а также значительная потребность отечественного здравоохранения в пищеварительных средствах с лактазной активностью, явились основой для исследований по получению из препарата Лактоканесцин препарата Р-галактозидазы медицинского назначения.

Цель настоящего исследования состояла в разработке эффективной технологии получения высокоочищенного ферментного препарата грибной р-галактозидазы для коррекции лактазной недостаточности, а также в изучении физико-химических и каталитических свойств фермента.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

• исследовать ферментный состав препарата Лактоканесцин Г20Х;

• разработать рациональную схему выделения и очистки из комплексного ферментного препарата субстанции Р-галактозидазы с активностью не менее 10000 ед/г для коррекции энзимодефицита;

• разработать способ и получить высокоочищенную Р-галактозидазу для использования ее в качестве стандартного образца при определении активности (подлинности) лекарственного средства;

• изучить основные физико-химические и каталитические свойства выделенного фермента в лекарственной субстанции и в фермент-стандарте;

• исследовать процесс гидролиза лактозы в молоке и молочных продуктах, катализируемый препаратом р-галактозидазы, и разработать оптимальные режимы их ферментативной обработки;

• разработать готовую лекарственную форму препарата р-галактозидазы и сравнить его эффективность с действием зарубежного препарата «Лактраза» (США) на лактозу молочных продуктов, в условиях, имитирующих среду организма.

Научная новизна работы заключается в следующем:

• впервые по оригинальной технологии получена лекарственная субстанция (препарат Галактозим) и готовое лекарственное средство (капсулы Галакто-зим) для коррекции лактазной недостаточности на основе Р-галактозидазы из Penicillium canescens;

• на основе хроматографического разделения ферментного комплекса получена высокоочищенная Р-галактозидаза для использования в качестве стандарта при определении лактазной активности (подлинности) лекарственного средства;

• проведено комплексное изучение физико-химических и каталитических свойств выделенного фермента;

• исследовано специфическое действие препарата Галактозим на лактозу молочных продуктов и определены оптимальные условия их ферментативной обработки с целью достижения требуемой степени гидролиза молочного сахара.

Научная новизна подтверждена получением положительного решения на Заявку № 2006110265 от 31.03.2006 г. о выдаче патента на изобретение «Средство для коррекции дефицита лактазы».

Практическая ценность работы состоит в разработке технологии получения из комплексного ферментного препарата Лактоканесцин лекарственной субстанции, содержащей грибную Р-галактозидазу, с применением современных методов выделения и очистки. Разработанная технология апробирована в опытных условиях и обеспечивает выход фермента не менее 75%. Анализ свойств очищенного препарата (3-галактозидазы показал целесообразность его использования для коррекции лактазной недостаточности. Препарат универсален для применения: он может быть использован как для получения низколак-тозных молочных продуктов, так и в качестве лекарственного средства для заместительной терапии. Разработана готовая лекарственная форма препарата в виде капсул. По эффективности действия полученный препарат не уступает зарубежному аналогу «Лактразе» (США), предназначенному для перорального применения при непереносимости молочного сахара.

На основе проведенных испытаний разработана нормативно-техническая документация, включающая технологические регламенты и Фармакопейные статьи предприятия (ФСП) на субстанцию Галактозим, готовое лекарственное средство в виде капсул и фермент-стандарт. Наработаны опытные образцы препарата и проведены их доклинические испытания. Фармакопейный комитет Министерства здравоохранения и социального развития Российской и

Федерации после рассмотрения комплекта представленной документации рекомендовал препарат для клинических испытаний.

Работа выполнена в рамках Государственного контракта № 15.802.1.1.0002 от 15 марта 2002 г. «Организация производства ферментных субстанций и импортозамещающих лекарственных средств для заместительной терапии, лечения дерматомикозов и коррекции энзимодефицита» и является вкладом в реализацию приоритетного национального проекта «Здоровье», поскольку создание отечественного препарата лактазы расширит ассортимент лекарственных средств, предназначенных для лечения желудочно-кишечных заболеваний, позволит избежать закупок аналогичных препаратов за рубежом, а его использование качественно улучшит питание значительной части населения.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Сухих, Ольга Анатольевна

выводы

1. Исследован ферментативный комплекс исходного препарата Лактоканесцин и разработана технология выделения и очистки из него р-галактозидазы с использованием методов ультрафильтрации, микрофильтрации и спиртоосажде-ния, позволяющая повысить удельную активность фермента в 5,3 раза. Выход по активности составляет 75%.

2. Впервые по разработанной технологии получена лекарственная субстанция (препарат Галактозим) на основе р-галактозидазы Penicillium canescens со стандартной активностью 10000 ед/г для коррекции лактазной недостаточности. Разработана научно-техническая документация на препарат Галактозим.

3. Для определения активности (подлинности) лекарственного средства получен высокоочищенный препарат р-галактозидазы (фермент-стандарт) с содержанием белка 85% и активностью 44200 ед/г по схеме, включающей ионообменную хроматографию на КМ-целлюлозе, диа- и ультрафильтрацию с последующим лиофильным высушиванием, с выходом по активности 71%.

4. Изучены физико-химические и каталитические свойства р-галактозидазы из Penicillium canescens: молекулярная масса фермента около 130 kD; ИЭТ- 6,7; оптимумы действия - температура 50-55 °С, рН 3,8-4,5; зона стабильности в пределах рН 3,5-6,5; константа Михаэлиса и максимальная скорость гидролиза природного и синтетического субстратов (16,0 мМ и 40 мкмоль/мин мг; 0,5 Мм и 48 ммоль/мин мг). Установлен смешанный характер ингибирования галактозой с К; = 20 мМ. Показано, что р-галактозидаза не относится к металлозависимым ферментам и не содержит функционально значимых SH- групп.

5. Изучена динамика гидролиза лактозы в молоке и кисломолочных продуктах препаратом Галактозим. Разработаны оптимальные режимы предварительной обработки молочных продуктов для получения необходимой степени гидролиза лактозы.

6. Разработана готовая лекарственная форма препарата в виде капсул (капсулы Галактозим) и установлено, что препарат по эффективности действия не уступает импортному препарату Лактраза и может быть использован в качестве корректора энзимодефицита как для приема внутрь одновременно с приемом молочных продуктов, так и для их предварительной обработки перед употреблением.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Сухих, Ольга Анатольевна, 2007 год

1. Антошина Л.П., Тельцов Л.П. Динамика активности лактазы тонкой кишки у телят этапа новорожденное™. //Вестник Ветеринарии. -1998, т.8, №2, с.36-40.

2. Безбородов A.M., Астапович Н.И. Секреция ферментов у микроорганизмов. -М.: Наука, 1984.-72 с.

3. Бидлингмейер Б., Фрайд Б., Хегнауер Г., Хемпер Б. и др. Препаративная жидкостная хроматография: Пер. с англ. М.: Мир, 1990. - 360 с.

4. Билай В.И., Школьный А.Т., Элланская И.А. и др. Штамм Penicillium canescens 20171 продуцент Р-галактозидазы/ А.с. №1065476 (СССР). Опубл. 07.01.84. Бюл. №1.

5. Борисенко Ю.В., Цветкова М.В. Очистка Р-галактозидазы для иммунофер-ментного метода. // Препараты для экспресс-диагностики. Л.: Наука, 1981, с.127-130.

6. Боровик Т.Э., Семенова Н.Н., Сирота А.В. Клинико-лабораторные параллели пищевой неперносимости у детей. // Педиатрия. -1996, №4, с.77-81.

7. Вавилова Е.А., Винецкий Ю.П. Индукция синтеза эндо-1,4-Р-ксиланазы и Р-га-лакгозидазы в исходных и рекомбинантных штаммах триба. Penicillium canescens. //Прикладная биохимия и микробиология. 2003, т. 39, № 2, с. 167-172.

8. Валенкевич Л.Н. Синдром дефицита лактазы.// Клиническая медицина -1989, т.68, №4, с. 143-150.

9. Валенкевич Л.Н., Яхонтова О.И. Распространение дефицита лактазы среди народов СССР.// Вопросы питания. -1991, №4, с. 10-13.

10. Валенкевич JI.H., Яхонтова О.И., Шубина М.Э. Применение ферментных заместительных препаратов при гиполактазии. //Клиническая медицина -1996, т.74, №8, с.46-48.

11. Валенкевич Л.Н., Яхонтова О.И., Шубина М.Э. Молоко и синдром гиполактазии. Петрозаводск, 1998,120 с.

12. Валенкевич Л.Н. Опыт использования ферментного заместительного препарата Лактразы при гиполактазии. // Клиническая фармакология и терапия. -1999, т.8, №1, с.23-24.

13. Варначева Л.Н., Сазонова Н.Е., Дорофейчук В.Г. Лечебное питание при лак-тазной недостаточности у детей раннего возраста. // Педиатрия. 1993, №2, с. 18-20.

14. Виха И.В., Воробьев А.А., Желудева С.И., Касьянова Т.А., Кудрявцев С.И. Получение высокоактвного препарата P-D-галактозидазы. // Прикладная биохимия и микробиология. 1987, т.ХХШ, вып.З, с. 291-298.

15. Водилова О.В., Гаппаров М.М., Никольская Г.В. Лактазная недостаточность у детей первого года жизни. // Вопросы питания. 2003, т.72, №1, с. 14-17.

16. Ганина В.И, Калынина JI.B., Большакова Е.В. Р-Галактозидазная активность молочнокислых бактерий и бифидобактерий. // Молочная промышленность. 2002, №8, с. 36-37.

17. Гомартели М.М., Куликова А.К., Церетели А.К., Безбородов A.M., Квеси-тадзе Г.И. Р-Галактозидаза Penicillium canescens штамм 20171. // Прикладная биохимия и микробиология. 1988, т. XXIV, вып.1, с.20-27.

18. Гомартели М., Квеситадзе Э., Безбородов А.М., Школьный А.Т. и др. Мутанты Penicillium canescens с повышенной ксиланазной активностью. // Прикладная биохимия и микробиология. 1998, т.34, № 6, с. 650-654.

19. Гомзикова Н.Д., Бурыкина И.М. Влияние р-галактозидазы на консистенцию молока цельного сгущенного с сахаром.//В сб. Эффективные технологии в производстве и переработке сельскохозяйственной продукции. Вологда, 2004, с.37-40.

20. Грачева И.М., Кривова А.Ю. Технология ферментных препаратов. 3-е изд., перераб. и доп. - М.: Элевар, 2000.

21. Данилов М.Б. Характеристика микроорганизмов, используемых в производстве молочных продуктов по бета-галактозидазной активности. // Изв. вузов. Пищевая технология. 2002, № 1, с.31.

22. Денисова Е.В. Оптимизация биотехнологии получения минорных моносахаридов и разработка лечебно-профилактических препаратов на их основе. Ставрополь, 2002.

23. Диксон М., Уэбб Э. Ферменты.- М.: Изд. иностранной литературы, 1961.

24. Добриян Е.И., Калугин В.В. Использование Р-галактозидазы в производстве молочных консервов.// Материалы междунар. научн.-техн.конф. Пищевой белок и экология. М., 2000.

25. Добриян Е.И., Остроумова Т.Л., Зоров И.Н. Особенности использования препарата Р-галактозидазы при различных значениях рН.// В сб. Научноеобеспечение молочной промышленности (ВНИМИ 75 лет). - М., 2004, ГНУВНИМИ, с.84-87.

26. Екисенина И.Н. Диагностика и лечение лактазной недостаточности при заболеваниях кишечника. // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатоло-гии. 1997,т.7, №6, с.27-31.

27. Жвавый Н.Ф., Козлов А.И., Кондик В.М. Лактазная недостаточность у представителей некоторых народностей Сибири.// Вопросы питания. 1991, №5, с. 32-35.

28. Жукова Р.А., Лапина И. К., Шабунов Б.Е. и др. Curvularia inaequalis штамм 75 продуцент Р-галактозидазы./ А.с. № 727685 (СССР). Опубл. 15.04.80. Бюл. №5.

29. Загустина Н.А., Тихомирова А.С., Рафаловская Т.Я., Янголь Л.М., Грачева А.Ю., Фениксова Г.В. Получение и свойства препарата Р-галактозидазы из Alternaria tenuis. Н Прикладная биохимия и микробиология 1975, т. XI, в. 5, с. 725-729.

30. Загустина Н.А., Тихомирова А.С. Очистка и свойства р-галактозидазы из гриба Curvularia inaequalis. II Биохимия. -1976, т. 41, № 6, с.1061-1066.

31. Захарова И.Я., Буглова Т.Т., Тихомирова А.С. Ферменты, трансформирующие галактозу. Киев, Наукова думка, 1988.

32. Заявка № 49-22709 (Япония). Способ получения р-галактозидазы. Опубл. 11.04.1974.

33. Заявка № 49-21078 (Япония). Ферментативный способ получения лактазы. Опубл. 29.05.1974.

34. Заявка № 52-27035 (Япония). Способ получения Р-галактозидазы. Опубл.2911.1977.

35. Заявка №53-20486 (Япония). Получение Р-галактозидазы. Опубл.2402.1978.

36. Заявка № 95211 (Япония). Способ получения Р-галактозидазы. Опубл. 15.08.1982.

37. Клесов А.А., Березин И.В. Ферментативный катализ. М.: Изд-во Московского университета, 1980, 264 с.

38. Козлов А.И. Исследование лактазного полиморфизма у представителей различных этнотерриториальных групп. // Биологические науки. 1992, №1, с.64-68.

39. Козлов С.П., Просеков А.Ю., Муругова И.И. Технологические свойства фермента Ha-Lactase из дрожжей Klyuveromyces fragilis в сыворотке.// Хранение и переработка сельхозсырья. 2004, №5, с.39-40.

40. Козлов С.Г., Просеков А.Ю., Муругова И.И. Состав углеводов сыворотки, гидролизованной бета-галактозидазой из дрожжей Klyuveromyces fragilis.// Хранение и переработка сельхозсырья. 2004, № 11, с. 21-22.

41. Козлов С.Г., Просеков А.Ю., Баканова О.А. Современное состояние биотехнологии гидролиза лактозы в производстве молочных продуктов.// Хранение и переработка сельхозсырья, 2004, №9, с.38-44.

42. Козловский А.А. Лактазная недостаточность. // Медицинские новости -2001 г., №1, с.20-24.

43. Корнеева О.С., Жеребцов Н.А., Черемушкина И.В. Идентификация каталитически активных групп Р-галактозидазы Penicillium canescens F-436.// Биохимия 2001, том 66, вып. 3, с.412-418.

44. Корниенко Е.А., Митрофанова Н.И., Ларченкова Л.В. Лактазная недостаточность у детей раннео возраста.// Вопросы современной педиатрии. 2006, №5 (4), с. 82-86.

45. Корниш-Боуден Э. Основы ферментативной кинетики. М.: Мир, 1979.

46. Коршунов М.Ф., Даркина Е.Е. Постдиарейная лактазная недостаточность у новорожденных. // Педиатрия -1997, № 3, с.25-28.

47. Костер А.И., Паппель К.Е., Фениксова Р.В., Тихомирова А.С., Загустина Н.А., Летунова Е.В. Получение и свойства иммобилизованной Р-галактозидазы.// Прикладная биохимия и микробиология. -1974, №10, с. 851-855.

48. Котлукова Н.П. Гормонально-метаболические изменения при целиакии и лактазной недостаточности у детей. // Педиатрия. 1994, № 1, с.36-40.

49. Краснов М.П., Коневец В.И., Охрименко О.В. Влияние степени предварительного гидролиза лактозы на молочнокислый процесс.// Там же. с. 101-103.

50. Кретович В.Л. Токарева P.P. Проблема пищевой полноценности хлеба. М.: Наука, 1986.-288 с.

51. Куликова А.К., Тихомирова А.С., Фениксова Р.В. Очистка и свойства Р-галактозидазы SaccharomycesJragilis. II Биохимия. -1972, т. 37, №2, с. 405-408.

52. Куликова А.К. //Автореф.дис.на соиск.уч.степ.канд.биол.наук. М., 1978.

53. Куликова А.К., Гомартели М.М., Церетели А.К., Безбородов A.M., Квеси-тадзе Г.И., Билай Т.И. Р-Галактозидазы низших эукариот (грибов и дрожжей). Обзор. // Прикладная биохимия и микробиология. 1989, т. XXY, вып. 6, стр. 734-746.

54. Курьянинова В.А. Оценка эффективности диетотерапии при непереносимости лактозы у детей грудного возраста адаптационными соевыми смесями. // Педиатрия. 2001, №2, с.57-60.

55. Ладодо К.С., Боровик Т.Э., Рославцева Е.А., Семенова Н.Н., Степанова Н.Н., Сирота А.В. Диетотерапия при лактазной недостаточности. // Педиатрия.-1998, №3, с.30-35.

56. Лезебная В.В., Мартынова К.Г., Четвертак А.А., Куликова А.К., Тихомирова А.С. Гидролиз лактозы в молоке под действием фермента.// Молочная промышленность -1981, №1, с. 28-30.

57. Ленинджер А. Биохимия. М.: Мир, 1974.

58. Летунова Е.В., Тихомирова А.С., Шиян С.Д., Маркин В.А., Хорлин А.Я., Безбородов A.M. Очистка и свойства |3-галактозидазы Altemaria tenuis. II Биохимия. 1981, т. 46, № 5, с.911-919.

59. Летунова Е.В. Выделение и свойства Р-галактозидазы Altemaria tenuis. II Автореф. дис. на соиск. учен. степ. канд. биол. наук. М., 1981,19 с.

60. Логинов А.С., Парфенов А.И. Болезни кишечника М.: Медицина, 2000,383 с.

61. Лоранская Т.Н., Полушина Н.Д., Рапопорт С.И., Фролков К.К. Молоко в нашем питании, плюсы, минусы, альтернативные средства профилактики. Обзор. // Клиническая медицина 1997, т.75, №2, с.13-16.

62. Матвеева И.В. Применение ферментного препарата р-галактозидазы при производстве пшеничного хлеба с молочной сывороткой. //Автореф. дис. на соиск. учен. степ. канд. техн. наук. М., 1983,27 с.

63. Маурер Г. Диск-электрофорез. М.: Мир, 1971,247 с.

64. Михайлова Н.И. Гидролиз лакгозы.// Переработка молока. 2003, №5, с. 11-13.

65. Нахапетян Л.А., Мотина ЛИ. Получение глюкозо-галактозных сиропов из молочной сыворотки. //Биотехнология.-1998, т.4, №1, с. 4-9.

66. Нестеренко П.Г., Василисина В.В., Чеботарев Е.А. Использование молочной сыворотки в хлебопекарном и кондитерском производстве. // Молочная промышленность. 1982, № 5, с.25-27.

67. Николаев И.В., Ходова О.М., Тимохина Е.А., Алексеенко А.Ю., Винецкий Ю.П. Молекулярные характеристики секретируемой Р-галактозидазы Penicillium canescens. //Биохимия. 1989, т.54, вып. 8, с.1294-1299.

68. Николаев И.В. Структура и особенности регуляции экспрессии генов Р-галактозидаз у мицелиального гриба Penicillium canescens.!I Автореф. дис. на соиск. уч. степ. канд. биол. наук. М., 1992.

69. Остерман JLA. Хроматография белков и нуклеиновых кислот. М.: Наука, 1983.

70. Парфенов А.И., Полева Н.И., Екисенина Н.И., Петраков А.В. Диагностика и лечение лактазной недостаточности при заболеваниях кишечника. // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 1997, т. 7, №6, с.27-31.

71. Патент Японии. №52-30591 от 09.08.1977 г.

72. Патент Японии. №61-260882 от 19.11.1986 г.

73. Патент США 5876981 от 02.03.1999.

74. Патент Болгарии № 62547 от 29.02.2000 г.

75. Патент США. №6,410,018 В1 от 25 июня 2002 г.

76. Патент России. № 2259748 от 10.09 2005.

77. Пахарукова Е.М. Исследование р-галактозидазной активности различных видов молочнокислых микроорганизмов.// В сб. Технологические и экономические аспекты обеспечения качества продукции и услуг в торговле и общественном питании Кемерово, 2003, с.37-38.

78. Погорелова Н.А. Кинетика процесса ферментации лактозы препаратом Максилакт.//Пища. Экология. Качество. Новосибирск, 2002, с.61-63.

79. Поландова Р.Д., Матвеева И.В., Югова JI.B., Черемнова Т.А. Вличние молочной сыворотки с гидролизованной лактозой на свойства теста и качество хлеба из пшеничной муки. // Хлебопекарная и кондитерская промышленность 1983, № 4, с.24-25.

80. Полторак О.М., Атякшева Л.Ф., Чухрай Е.С. Термостабильности иммобилизованной и растворимой Р-галактозидазы. // Журнал физической химии. -2004, 78, №3, с. 550-554.

81. Полыгалина Г.В., Чередниченко B.C., Римарева Л.В. Определение активности ферментов. Справочник. М.: ДеЛи принт, 2003, с. 134-141

82. Просеков А.Ю., Козлов С.Г., Муругова И.И. Гелеобразные напитки на основе гидролизованной сыворотки // Пиво и напитки. 2004, №4, с.76

83. Пулатова Д.Б. Состяние кишечного микробиоценоза у детей с кишечными энзимопатиями. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2001, №3, с.97-99.

84. Рахимов К.Р. Задержка естественной репрессии лактазной активности у преждевремнно отнятых крыс связана с изменением их тиреоидного статуса. //Доклады Российской Академии Наук. -1992, Т.325, №5, с. 1077-1080.

85. Рипелиус К., Двинский Б.М. Максилакт ферментная обработка молока решает проблему непереносимости лактозы.// Молочная промышленность. -1995. №5, с. 33-24.

86. Самошина Н.М., Лотменцева Е.Ю., Борисова В.Н., Нахапетян Л.А. Сравнительное изучение некоторых кинетических параметров грибных р-галактозидаз.// Прикладная биохимия и микробиология. 1985, т. XXI. в.6, с.745-751.

87. Свириденко Ю.А., Смурыгин В.Ю. Гидролиз лактозы: мировой опыт. // Молочная промышленность. -1996, №7.

88. Синицын А.П., Зоров И.Н., Калугин В.В., Добриян Е.И., Рыжова С.А. Технологические свойства Р-галактозидазы.// Молочная промышленность. -2001, №6, с. 55-56.

89. Строкач Д.А., Арсеньева Т.П. Исследование процесса гидролиза лактозы в молоке.// Хранение и переработка сельхозсырья. 2003, №8. с. 94-95.

90. Строкач Д.А. Исследование и разработка технологии молочных продуктов с регулируемым углеводным составом.// Автореф. дис. на соиск. уч. степ, канд. техн.наук, СтПб, 2004 г.

91. Тихомирова А.С., За1устина Н.А. Получение и свойства ферментных препаратов Р-галактозидазы из Curvularia inaequalis.ll Прикладная биохимия и микробиология. 1976, т.12, №2.

92. Тихомирова А.С. р-Галактозидазы микромицетов и перспективы их применения./ Автореф. дис. на соиск. уч.ст. д-ра хим. наук. М.: 1981, ИНБИ АН СССР.

93. Тихомирова А.С., Церетели А.К., Куликова А.К., Летунова Е.В., Безбородое А.М. Трансгликозилирующее действие ферментных препаратов Р-галактозидаз. // Прикладная биохимия и микробиология. -1980, т. XYI, вып. 1, с. 65-71.

94. Тихомирова А.С. Сравнительный анализ биохимических свойств Р-галактозидазы прокариотов и эукариотов // Тез. докл. 5 Всесоюз. биохим. съезда, Киев, 27-31 янв. 1986 г. -М.: Наука, 1986,3, с.182-183.

95. Ткаченко Е.И., Першко A.M. Лактазная недостаточность. // Санкт-Петербургские врачебные ведомости. -1994, №8, с. 30-32.

96. ТУ 11249895-13-10-92 Препарат ферментный Лактоканесцин Г20Х.

97. Уголев A.M. Теория адекватного питания и трофология Санкт-Петербург, Наука, 1991-271 с.

98. Улезло И.В., Церетели А.К., Портная И.Б., Безбородов A.M. Р-Галактозидаза из супертермофильной анаэробной бактерии Thermoanaerobin sp. 2905 и ее иммобилизация.// Прикладная биохимия и микробиология. -2001,37, №1, с.48-52.

99. Устинникова Б.А., Ермолин Г.А. Метод дискового электрофореза в ПААГе для фракционирования и изучения белков. Обзор. ЦНИИТЭИ пищепром, Москва, 1972.

100. Федоренко Б.Н. Разработка технологии ультрафильтрации некоторых гидролитических ферментов. // Дис. канд. техн. наук. М., 1987.

101. Федоренко Б.Н. Ферменты и мембраны: научные основы взаимодействия: Монография, М.: МГУПП, 2002. -195 с.

102. Фершт Э. Структура и механизм действия ферментов. М., Мир, 1980.

103. Хамагаева И.С. Теоретическое обоснование и разработка технологии кисломолочных продуктов на основе использования Р-галактозидазы и бифи-добактерий. // Автореф. дис. на соиск. учен. степ, доктора биол. наук. М., 1989,28 с.

104. ПЗ.Хорлин А.Я. Активные центры карбогидраз. //В сб. Структура и функции активных центров ферментов. М.: Наука, 1974.

105. Храмцов А.Г., Жидков В.Е., Холодов Г.И. Биотехнология напитков из молочной сыворотки. Ставрополь, 1996.

106. Церетели А.К., Куликова А.К., Тихомирова А.С. и др. Очистка внутриклеточной Р-галактозидазы Klyuveromyces fragilis. II Прикладная биохимия и микробиология -1980,15, № 6, с. 902-908.

107. Церетели А.К. Получение и свойства дрожжевой Р-галактозидазы.// Авто-реф. дис. на соиск. учен. степ. канд. биол. наук. -М., 1981,23 с.

108. Шершевский М.Г., Нищий В.А., Тихомирова А.С. и др. Недостаточность Р-галактозидазы тонкого кишечника и ее энзимотерапия.// Вопросы питания.-1976, № 6, с. 54-56.

109. Шейбак М.П. Клинические синдромы и лечебная тактика при непереносимости коровьего молока у детей раннего возраста. // Педиатрия. 1991, №9, с. 77-80.

110. Шейбак М.П. Недостаточность кишечной лактазы у детей (непереносимость лактозы). // Российский вестник перинатологии и педиатрии. 1995, т.40, №4, с.45-48.

111. Шиндер Д.А., Усманова О.Д., Рахимов К.Р. Изменение сахарахной и лактазной активностей тонкой кишки крыс-сосунков, преждевременно отнятых от кормящих матерей. // Физиологический жернал им. И.М. Сеченова. -1992, т.78, №1, с.53-58.

112. Шишкова Э.А., Орещенко Л.И., Фокина С.С. Использование мембранной технологии в производстве ферментов. // Межд. симпозиум по мембранам и процессам мебмранного разделения. ПНР, г. Торун, 1989, с. 1-2.

113. Шишкова Э.А., Орещенко Л.И., Фокина С.С. Технологические особенности концентрирования ферментных растворов. // В сб. Концентрирование, выделение и очистка продуктов микробиологического синтеза. М., 1985, с. 3-5.

114. Agrawal S., Sonawat Н.М., Dutta S.M. Thermostable P-galactosidase from fungi.// J Dairy Sci. 1982, v. 65, N 5, p. 866-870.

115. Anema P.J. Purification and some properties of P-galactosidase of Bacillus subtilis. II Biochim. Biophys. Acta, 1964, v. 89, p. 495-502.

116. Bacalova N.G., Petrova S.D., Ilieva S.Z., Atev A.P., Bhat M.K., Kolev D.N. Purification and properties of P-galactosidase from Chaetomium thermophilum -ATCC-28076. // Biotechnology Biotechnological Equipment. 2002, vol.16, N 2, p. 132-136.

117. Bailey M.J., Biely P., Poutanen K. Interlaboratory testing of methods for assay of xylanase activity.// Jornal of Biotechnology. 1992, N 23, p.257-270.

118. Bardosa M.S., Silva D.O., Pinheiro A.R. et al. Production of p-galactosidase from Klyuveromyces fragilis groun in cheese whey. // J. Dairy Sci. 1985, 68, N 7, p.1618-1623.

119. Becerra M., Cerdan E., Gonzales S.I. Micro-scale purification of P-galactosidase from Klyuveromyces lactis reveals that dimeric and tetrameric forms are active.// Biotechnology Techniques -1998, v. 12, N 3, p. 253-256.

120. Bernal V., Pavel J. Lactose hydrolysis by Klyuveromyces lactis P-D-galactosidase in skim milk, whey, permeate and model system.//Can. Inst. Sci. Technol. J. 1985, 18, p.17-19.

121. Beutler И.О. Methoden der enzymatischen Analyse, (Bergmeyer H.U., ed.) 3rd ed., Vol.VI, pp. 104-112, Verlag Chemie, Weinheim, Deerfield Beach/Florida, Basel.

122. Bhosale J.H., Shevale J.G., Aryl P-galactosidase from Sclerotium rolfsii: physiological and biochemical studies. // Hindustan Antibiot. Bull. 1995, 37, p. 25-36.

123. Biller Y.A., King S., Rosenthal A.,Grand R.//J. Pediatrics- 1987- Vol.111, №1 -p.91-94.

124. Borglum G.B., Sternberg M.Z. Properties of a fungal lactase.// J. Food Sci. -1972, v. 37, p. 619-623.

125. Borzini P., Tedesco S., Greppi N., Rebulla P., Parrvicini A., Sirghia G. An immunoenzymatic assay for the detection and quantitation of platelet antobodies: the platelet P-galactosidase test (PGT). //J. Immunol. Metods. -1981, v.44, p. 323-332.

126. Brandao R.L., Nicoli J.R., Souza Figueiredo A.f. Purification and characterization of a P-galactosidase from Fusarium oxysporum var. lini.// J. Dairy Sci. -1987, 70, p.1331-1337.

127. Budriene S., Gorochovceva N., Dienys G., Zubriene A. P-Galactosidase from Penicillium canescens. Properties and immobilization. //Central European J. of Chemistry. 2005, 3 (1), p. 95-105.

128. Carpio C., Gonzalez P., Ruales J., Batista-Viera F. Bone-bound enzymes for food industry application.//Food Chem. 2000,68, p.403-409.

129. Castillo F.Y., Moreno B. Properties of lactase produced by Candida pseudotropicalis. //J. Daury Sci. -1983, 66, N 8, p. 1616-1621.

130. Castillo F.Y., Blanch H.W., Wilke C.R. Lactase production in continuous culture by Trichoderma reesei RUT-C30. // Biotechnol.Lett. -1984.6, N.9, p.593-596.

131. Cavaille D., Combes D. Characterization of beta-galactisidase from of Klyuveromyces lactis. II Biotechnol. Appl. Biochem. 1995, v. 22, p.55-64.

132. Chen K.S., Houng J.Y. Product inhibition of the enzymatic hydrolysis of lactose.//Enzyme and Microbiol. Technol. -1985,7, N 10, p. 510-514.

133. Collins M.S., De Palma Y.A., Pierson W.P. et al.// Gastroenterology 1986, vol.90, p.1377-1378.

134. Comp P., Lester G. Properties of an extracellular p-galactosidase secreted by Neurosporacrassal111. Bacteriol. 1971, v. 34, p. 300-306.

135. Craven G.R., Steers EJr., Anfinsen C.B. Purification, composition and molecular weight of the p-galactosidase E. coli K-12. // J. Biol. Chem. 1965, v. 240, N 6, p.2468-2477.

136. Darnall D.W., Klotz J.M. Subunit constitution of proteins. // Handbook of Biochem. and Molecular Biol. 2. Proteins. New York; London : Pergamon. Press, 1977.-25 p.

137. Deguchi E., Ueno M., Fusyuku S., Okamoto M., Akuzawa M. Lactose Intolerance in Suckling Piglets with Diarrhea. // J. Japan Veter. Med. Assn. -1997. vol. 50, N12, p. 701-704.

138. Deguchi E., Ueno M. Effect of Oral Administration of p-galactosidase on Diarrhea in Suckling Piglets. // J. Japan Veter. Med. Assn. 1997. vol. 50, N12, p. 713-716.

139. De Palma Y.A., Collins M.S. Enzyme replacement for lactose malabsorption using a beta-D-galactosidase.// J. Clin. Gastroenterol. -1989, vol.ll, №3, p.290-293.

140. Desnick R.J. Enzyme replacement and beyond. // J. Interit. Metab. Disease. -2001,24, N2. p.251-265.

141. Dickson R.C., Dickson L.R., Markin J.S. Purification and properties of an inducible P-galactosidase isolated from the yeast. // Bacteriol. 1979, v. 137, N1, p. 51-61.

142. Dovogelar J., Mainquet P., Faille I Osteoporosis and lactose intolerance. //Rev. Rhum.- 1996, v.63, N 6, p.460-461.

143. Endo Y., Ohtaki S., Kan H., Yoshitake S., Ishikawa E. A simultaneous enzyme-linked immunoassay for human thyroglobulin. // An. Letts, 1983, v. 16 (B3), p.181-195.

144. Fernandes S., Geueke В., Delgado O., Coleman J., Hatti-Kaul R. P-Galactosidase from a cold-adapter bacterium: purification, characterization and application for lactose hydrolysis.// Appl. Microbiol. Biotechnol. 2002, 58, p.313-321.

145. Field R.A., Haines A.H., Chrystal E.J.T., Luszniak M.C. Histidines, histamines and imidazoles as glycosidase inhibitors.//Biochem. J 1991,274, p.885-889.

146. Finocchiaro Т., Olson N.F., Richardson T. Use of immobilized lactase in milk systems. //Adv. Biochem. Eng. 1980, v.15, p. 71-88.

147. Gargova S., Pishtijski I., Stoilova I. Purification and properties of P-galactosidase from Aspergillus oryzae. II Biotechnol. Biotechnol. Equip. 1995, 9, p.47-51.

148. Gekas V., Lopez-Leiva M. Hydrolysis of lactose: a literature review.// Process Biochem. 1985,20, N1, p.2-12.

149. GoncalvesJ.A., Castillo FJ. Partial purification and characterization of P-galactosidase from Klyuveromyces marxsianus. I I J. Dairy Sci. 1982, v. 65, N11, p. 2088-2094.

150. Gonzalez R.R., Monsan P. Purification and some characteristics of P-galactosidase from Aspergillus fonsecaeus. I I Enzyme Microb. Technol. 1991, 13, p. 349-352.

151. Goodman R.E., Pederson D.M. P-Galactosidase from Bacillus stearothermophilus. II Can J. Microbiol., v. 22, p. 817-825.

152. Goroom R.F., Krose J.A., Pouwel P.H. et al. Systems for analyse promotors E. coli in Aspergillus nidulans. //Eur. Congr. Biotechnol., Munchen, 10-14 Sept., 1984 Weinheim. - 1984, v. 3, p. 305-310.

153. Gregory K. New dairy processes using lactase.//Food Processing Industry. -1980, p.44-46.

154. Green M.L.// Milk Industry, 1980, v.82, N 3, p.25-31

155. Greenberg N.A., Mahoney RR Rapid purification of p-galactosidase (Aspergillus niger) from commerzial preparation. // J. Food Sci. -1981,46, p. 684-687.

156. Greenberg N.A., Mahoney R.R. Immobilization of lactase (P-galactosidase) for use in dairy processing: a review. // Process Biochem. 1981, v.16, N 2, p. 2-8.

157. Greenberg N.A., Mahoney R.R Formation of oligosaccharides by p-galactosidase from Streptococcus thermophilus. // Food Chem. 1983, v. 10, N 3, p. 195-204.

158. Guy E., Edmondson L. //Dairy Sci. 1978, v.61, p.542.

159. Higgins J.J., Lewis D.L., Daly W.H., Lilly M.D. Investigation of the unit operations involed in the continuous flow isolation of p-galactosidase from Escherichia coll //Biotechnol. and Bioeng- 1978, v.20, N 2, p.159-182.

160. Hirata H., Negoro S., Okada H. High production of thermostabil P-galactosidase of Вас. stearothermophilus in Вас. subtilis. //Appl. and Environ. Mikrobiol. -1985, v. 49, N6, p. 1547-1549.

161. Hussein L., Elsayed S., Foda S. Reduction of lactose in milk by purifed lactase produced by Klyuveromyces lactis.Hh of Food Protect., 1988, 52, N 1, p.30-34.

162. Hu A.S., Wolfe R.G., Reithel F.J. The preparation and purification af P-galactosidase from Escherichia coli ML-308. // Arch. Biochem. Biophys-1959, v. 81, p.500.

163. In M.J., Jin J. Characterization of P-galactosidase from a Bacillus sp. with high catalytic efficiency for transgalactosylation. // J. Microbiol. Biotechnol. 1998, 8 (4), p. 318-324.

164. Itoh Т., Suzuki M., Adachi S. Production and characterization of p-galactosidase from lactose yeasts. // Agr. and Biol.Chem. -1982,46, N 4, p. 899-904.

165. Jagota S.K., Ramana M.V., Dutta S.M. P-Galactosidase of Streptococcus cremoris.ll J. Food Sci. 1981, v.46, p. 161-165.

166. Jimenez-Guzman I., Cruz-Guerrero A.E., Rodriguez-Serano G., Lopez-Munquira A. Enhancement of Lactase Activity in Milk by Reactive Sulfhydryl Groups indused by Heat Treatment.// J. Dairy Sci. 2002. 85, p.2497-2502.

167. Johnson H.N., DeBusk A.G. The P-galactosidase system of Neurospora crassa. I. purification and properties of the pH 4,2 enzyme. // Arch. Biochem. Biophys. -1970,138, p. 408-411.

168. Jurado E., Camacho F., Luron G., Vicaria J.M. A new kinetic model proposed for enzymatic hydrolysis of lactose by a P-galactosidase from Klyuveromyces fragilis.H Enzyme Microbiol. Technol. 2002, 31, p.3 00-309.

169. Ipsita Roy, Munishwar N. Gupta. Lactose hydrolysis by Lactozym™ immobilized on cellulose beads in batch and fluidized bed modes. // Proccess Biochemisry -2003, 39, p. 325-332.

170. Kitagawa Y., Kanayama Y., Yamaki S. Isolation of P-galactosidase fractions from pear: activiti against native cell wall polysaccharides. // Physiol.Pantarum. -1995, v. 93, N 3. p.545-550.

171. Kowalewska-Piontas I., Bednaski W. The attemps to intensify of galactooligicaccharides in the process of enzymatic lactose hydrolysis. // Pol. J. Food Nutrit. Sc. 2001, v. 10, N 3, p. 43-46.

172. Kowalewska-Piontas I., Bednaski W., Bieleska M. Comparison of the hydrolytic and transgalactolisation properties exhibited by p-galactosidase of different origin.// Pol. J. of natural sciences Olsztyn, 2002, N 11, p.7-16.

173. Kuby S.A., Lardy H.A, Purification and kinetics of p-galactosidase from E. coli strain K-12. // J/ Amer. Chem. Soc. 1953, v. 75, N 1, p. 890-896.

174. Kulp K. Carbohydrases. In: Enzymes in food processing. Academic Press, New York, 1975, p. 92-97.

175. Ladero M., Santos A., Garsia-Ochoa F. Kinetic modeling of lactose hydrolysis with an immobilized p-galactosidase from Klyuveromyces fragilis.// Enzyme and Microbiol. Technol.- 2000. -27. N8, p.583-592.

176. Ladero M., Perez M.T., Santos A., Garsia-Ochoa F. Hydrolysis of lactose by free and immobilized P-galactosidase from Thermus sp. strein T2. // Biotechnol. Bioeng. 2003, 81, p.241-252.

177. Lai E.C.K, Morris S.A., Street I.P., Withers S.G. Substituted glycols as probes of glycosidase mechanisms.// Bioorg. Medical Chem. 1996,4, p.1929-1037.

178. Lee Y.C. Inhibition of P-D-galactosidase by D-galactal.// Biochem. Biophys. Res. Comm.-1969,35, p.161-167

179. Lowiy O.N., Rosebrough N.J., Farr A.L., Randall RJ. Protein measurement with the Folin phenol reagent. // J. Biol. Chem. 1951, v. 193, N 1, p.265-275.

180. Macris В J., Marcacis P. Characterization of exstracellular P-D-galactosidase from Fusarium moniliforme grown in whey. // Appl. and Environ. Microbiol. -1981,41, N.4, p. 956-958.

181. Mahoney R.R., Whitaker J.R. Purification and physicochemical properties of p-galactosidase from Klyuveromyces fragilis. // J. Food Sci. 1978,43, p. 584-591.

182. Mahoney R.R. Galactisyl-oligosaccharide formation during lactose hydrolysis: a review. // Food Chem. 1998, v. 63, N 2, p. 147-154.

183. Mandelstam J. Induction and repression of P-galactosidase in non-growing Escherichia coli.// Biochem. J. 1961, v. 79,N 3, p.489-496.

184. Mangala P, Nair C.K.K., Pradhan D.S. Purification and characterization of inducible P-galactosidase from Corynebacterium murisepticum. // Arch. Microbiol. 1989, v.151, p. 49-53.

185. Manzanares P., de Graaff L.H., Visser J. Characterization of galactosidases from Aspergillus niger, purification of a novel a-galactosidase activity. // Enzyme Microb. Technol. 1998,22, p.383-390.

186. Methods of Biochemical Analysis and Food Analysis. Instruction for the Analysis of Foodstuffs in Research, Production and Official Control. Boehringer Mannheim GmbH, 1989, p. 86-88.

187. Moskovitz M., Curtis C., Gavaler Y.// Am.J. Gastroenterol. 1987- vol.82, №7 p.632-635/

188. Nagy Z., Kiss Т., Szentirmai A., Biro S. P-Galactosidase of Penicillium chrysogenum: production, purification and characterization of the enzyme. // Prot. Expr. Purif. 2001,21, p. 24-29.

189. Nakamura A., Maeda H., Mizuno M., Koshi Y., Nagamaisu Y. P-Galactosidase and its significance in ripening of "Saijyo" Japanese Persimmon Fruit. // Biosci. Biotechnol. Biochem. 2003, 67 (1), p. 68-76.

190. Ogushi S., Yoshimoto Т., Tsuru D. Purification and comparison of two types P-galactosidase from Aspergillus oryzae. II J. Ferrnrnt. Technol. 1980, 58, N 2, p. 115-122.

191. Paige D.M. Bauless Т., Huang S., Wexler R. Lactose hydrolyzed milk.// Am. J. Clin. Nutr., 28, p.818-822.

192. Park Y.K., De Santi M.S., Pastore G.M. Production and characterization of P-galactosidase from Aspergillus oryzae. II J. Food Sci. 1979,44, p. 100-103.

193. Pastore G.M., Park Y.K. Screening of high P-galactosidase producting fungii and characterising the hydrolysis properties of a selected strain. // J. Food.Sci. 1979, v. 44, N6, p. 1577-1579.

194. Pastore G.M., Park Y.K. Purification and characterization of P-galactosidase from Scopulariopsis sp. II J. Ferment. Technol. 1980, v. 58, N 1, p. 79-81.

195. Pedrique M., Castillo F.J. Regulation of p-D-galactosidase synthesis in Candida pseudotropicalis. //Appl. Environ. Microbiol. 1982,43, p. 303-310.

196. Petrova S.D., Bacalova N.G., Ilieva S.Z., Atev A.P., Bhat M.K., Kolev D.N. Production of P-galactosidases from Sporotrihum thermophile. И Biotechnology Biotechnological Equipment. 2002, vol.16, N 2, p.127-131.

197. Pical-Cleland K.A., Rodrigues H.N., Amidor G.L., Carpenter J.F. Protein denaturation during freering and thawing in phosphate buffer systems: monomeric and tetrameric P-galactosidase. // Biochem. and Biophys. 2000, 384, N2, p.3 98-406.

198. Pollard H., Steers E. Bacillus megaterium KM P-galactosidase: purification by affinity chromatography and characterization of the active species. // Arch. Biochem. Biophys. -1973, v. 158, N 2, p.650-661.

199. Ramirez F., Lee K., Graham D. A lactase prepsrstions are not the same: results of a prospective, placebo-controlled trial. // Am. J. Gastroenterol. 1994, v. 89, N 4, p. 566-570.

200. Rogello Lopes Brandao, Jaques Robert Nicoli. Purification and characterization of P-galactosidase from Fusarium oxysporum var. lini/ // J. of Dairy Science. -1987, v.70, N7, p.1331-1337.

201. Rosado J., Solomons N., Lisker R. Effective reduction of lactose malabsorption and milk intolerance by direct addition of P-galactosidase to milk at mealtime.// Gastroenterology 1984, v.87, p.1072-1082.

202. Ross G.S., Vergzyn Т., MacRae E.A., Bedgwell R.J. Apple beta-galactosidase. Activity against cell wall polysaccharides and characterization of related cDNA clone. // Plant. Physiol. 1994, v. 106, N 2, p.521-528.

203. Rubens C., D' Arcadia, Gisele B.I. Properties of new fungal p-galactosidase with potencial application in the daily industry // Rev. Microbiol. 1999, v. 30, N 3, p. 265-271.

204. Samoshina N.M., Yugova L.V., Gross P.H., Bravova G.B., Shishkova E.A., Samoshin V.V. Partial purification and characterization of glucosidases from

205. Aspergillus oryzae and Penicillium canescens. И In: Abstracts of 219 National Meeting of the American Chemical Society. San Francisco, CA: The American Chemical Society. 2000. p. 160.

206. Samoshina N.M., Samoshin V.V. Michaelis Constants Ratio for two substrates with mould and yeast (3-galactosidases. // In: Abstracts of 227th National Meeting of the American Chemical Society. 2004, p.CARB 47.

207. Sakaguchi K., Yamaguchi T. Properties of ezstracellular acid-side P-galactosidase from Sclerotium tuliparum. Я J. Ferment. Technol. 1973, v. 51, N 10, p. 750-752.

208. Shaikh S.A., Khire J.M., Khan M.J. Characterization of a thermostable extracellular P-galactosidase from thermophilic fungus Rhizomucor sp. И Biochim. Biophys. Acta (Gen. Subjects), 1999,1472, p. 314-322.

209. Shan N., Nickerson T.//J.Food Sci. 1978, v.43, p. 1081

210. Shi Yi-Min, Yan Ji-Qiong, Fei Xue-Nan, Xu Yu-Quan. Purification and properties of P-galactosidase from intercellularfluid of tomato leaves. // Acta phitophysiol. Sinica. 1994, v.20, N 2, p.l 13-120.

211. Shukla H., Chaplin M. Nocompetitive inhibition of P-galactosidase (A. oryzae) by galactose. // Enzyme Microb. Technol. 1993, v. 15, p.297-299.

212. Solomons N., Guerrero A., Torun В.// Am. J. Clin. Nutr. 1985 - vol.41, №1, p. 222-227.

213. Sonawat H.M., Agarwal A., Dutta S.M. Purification of P-galactosidase from Klyuveromyces fragilis grown on whey. // Folia microbiol. 1981, v. 26, N 5, p. 70-376.

214. Sorensen S.C., Crisan E.v. Termostable lactase from termophilic fungi. // J. Food Sci.-1974, v. 39, N6, p. 1184-1187.

215. Steers Jr.E., Cuatrecasas P., Pollard H.B. The purification of p-galactosidase from Escherichia coli by affiniti chromatography. // J. Biol. Chem. -1971,246, p. 196-200.

216. Stephens R., DeBusk S.G. P-Galactosidase from Neurospora crassa. II Methods Enzymol. 1975,42, p. 497-503.

217. Sugira M., Susuki M., Sasaki M., Shimomura Т. Studies on p-galactosidase. I. Purification and properties of P-galactosidase I and II from Sclerotium tuliparum.il Chem. and Pharm. Bull. -1976, v. 24, N 4, p. 788-793.

218. Sykes D.E., Abbas S.A., Barlow J.J., Matta K.L. Substrate specificity and other properties of the P-D-galactosidase from Aspergillus niger. H Carbohydr. Res. -1983, 116, p. 127-138.

219. Szczodrak J. Hydrolysis of lactose in whey permeate by immobilized p-galactosidase from Penicillium notatum. //Acta Biotechnol. -1999, 19, p. 235-250.

220. Takenishi S., Vatanabe Y, Miwa Т., Kobayashi R. Purification and some properties of p-galactosidase from Penicillium multicilor. II Agric. Biol. Chem. -1983,47, p. 2533-2540.

221. Toba Т., Tomita Y., Itoh Т., Adachi S. p-Galactosidase of lactic acid bacteria: characterization by oligosaccharidis formed during hydrolysis of lactose. // J. Dairy Sci. -1981, v. 64, N 2, p.185-192.

222. Toba Т., Yokota A., Adachi S. Oligosaccharide structures formed during the hydrolysis of lactose by Aspergillus oryzae P-galactosidase. // Food Chem. -1985, v. 16, N 2, p.147-162.

223. Tsen H-Y., Lin c-C-K. Properties of two lactases from yeasts and the comparision of enzyme kinetics. // J. Chim. Agric. Chem. Soc. 1986, v.24, p. 330-342.

224. Turck D. Lactase and lactose malabsorption.// Nutrition infantile. 2004, N 4, p.38.

225. Uwajima Т., Yagi H., Terada О. Purification, crystallization and some properties of P-galactosidase from Saccharomyces fragilis. // Agric. Biol. Chem. 1972, 36, p. 570-577.

226. Vella M., Greenwell P. Purification and characterizatin of P-galactosidase from Trichomonas foetidus.ll Glycoconjugate J. 1997,14, p.883-887.

227. Vidmer F., Leuba J. P-Galactosidase from Aspergillus niger. Separation and characterization of three multiple forms. // Eur. J. Biochem. 1979, 100, N 2, p. 559-567.

228. Williams SJ, Notenboom V, Wicki J, Rose DR, Withers SG A new, simple high-affinity glycosidase inhibitor: analysis of binding through X-ray crystallography, mutagenesis and kinetic analysis.// J Am. Chem. Soc. 2000,122, p.4229-42230.

229. Xie Yi, Jiang Peu-hong, Guo Jie-Yan. Studies on the stability of Klyuveromyces lactisJIFudan xuebao. Ziran Kexue ban = J. Fudan Univ. Nat. Sci. 1999, 38, N 5, p. 523-528.

230. Watanabe Y., Kibesaki Y., Takenishi S., Sakai K., Tsujuisaka Y. Purification and properties of p-galactosidase from Penicillium citrinum. II Agr. Biol. Chem. -1979, v. 43, N5, p. 943-950.

231. Watanabe Y., Miva Т., Kobayashi R. Purification and some properties of p-galactosidase from Penicillium multicolor. II Agr. Biol. Chem. 1983, v. 47, N11, p. 2533-2540.

232. Wendorff W.L., Amundson C.H. Characterization of P-galactosidase from Saccharomyces fragilis. I I J. Milk Food Technol. -1971, v. 34, p.300-306.

233. Zhegkun Zhou Q., Dong Chen X., Xuemei Li. Kinetics of lactose hydrolysis by p-galactosidase of Klyuveromyces lactis immobilized on cotton fabric.// Biotechnol. Bioeng. 2003, v. 81, N 2, p.127-133.

234. НАУЧНО-ТЕХНИЧЕСКИЙ ЦЕНТР «ЛЕКБИОТЕХ» «НТЦ ЛЕКБИОТЕХ»1. УТВЕРЖДАЮ

235. Директор-НТЦ~~«Лекбиотех» П.Б. Бравова М 2002 г.1. JO /технический центрЬЛбиотехнология»/^

236. ЛАБОРАТОРНЫЙ ТЕХНОЛОГИЧЕСКИЙ РЕГЛАМЕНТполучения субстанции ГАЛАКТОЗИМА1. J1P-40062583-80-2002

237. Срок действия регламента до «25» июня «2005 г.4У157

238. РАЗДЕЛ 16 ИНФОРМАЦИОННЫЕ МАТЕРИАЛЫ

239. Разработчиком лабораторного технологического регламента на получение субстанции Галактозима является лаборатория биологически активных веществ НТЦ "Лею

240. Для производства субстанции Галактозима в качестве базового препарата используется коммерческий ферментный препарат Лактоканесцин Г20Х, производимый на ОАО «Восток» и используемый в настоящее время для нужд молочной промышленности.

241. Лабораторный технологический регламент разработан на основании ранее проводимых исследований по получению очищенного ферментного препарата Лактоканесцин Г20Х (ТУ 11249895-13-10-92).1. Литературные источники:

242. Положение о технологических регламентах производства продукции на биотехнологических предприятиях, действующее с 01.01.96 г.

243. Пожаровзрывоопасность веществ и материалов и средств их тушения, справ, изд. в 2-х книгах, под ред. А.Н.Баратова и А.Я.Корольченко, М., Химия, 1990.

244. Физико-химические величины для основных продуктов, обращающихся в медицинской и микробиологической промышленности (рекомендуемые справочные данные и методы расчёта), Купавна, 1989.

245. Рябова М.В. Справочник «Пожарная опасность веществ и материалов», М., 1970.

246. Вавилин О.А., Падалкин В.П., Панферов Н.Н. Справочник по охране труда в микробиологической промышленности, М., Лесная промышленность, 1981.

247. ГОСТ 12.1.004-91 Пожарная безопасность. Общие требования.

248. ГОСТ 12.1.007-76. Вредные вещества. Классификация и общие требования , безопасности.

249. Разработчики: Зав. лабораториейбиотех".биологически активных веществ1. Ст. научный сотрудник1. Э.А. Шишкова1. Научный сотрудник1. О.А. Сухих

250. Инженер по охране труда и технике безопасностбезопасност1. В.Н. Гордеев

251. Ведущий специалист отдела стандартизации1. В.М. Лаврухина

252. МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

253. УТВЕРЖДАЮ Руководитель Департамента Государственного контроля качества лекарственных средств и медицинской техники1. В.Е. Акнмочкин» 200 г.

254. ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ КАЧЕСТВА ЛЕКАРСТВЕННОГО1. СРЕДСТВА

255. ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ ПРЕДПРИЯТИЯ

256. НАУЧНО-ТЕХНИЧЕСКИЙ ЦЕНТР «ЛЕКБИОТЕХ»

257. ГАЛАКТОЗИМ вводится впервые (лактаза).

258. Срок введения установлен с « » 200 г.1. Срок действиядо « »200 г.

259. Настоящая фармакопейная статья предприятия распространяется на препарат Галактозим, содержащий микробную лактазу (Р-галактозидизу), и применяемый для приготовления лекарственного средства.1. ИЗДАНИЕ ОФИЦИАЛЬНОЕ1. ПЕРЕПЕЧАТКА ВОСПРЕЩЕНА1. ФСП 42с.16

260. Хранение. Препарат хранится в сухом, защищенном от света месте, при

261. Срок годности. 4 года. Определен при хранении препарата в условиях, предусмотренных проектом ФСП. Результаты исследования стабильности прены в табл.2.

262. В течение всего срока хранения (4 года и 6 месяцев) препарат сохраняет активность и все физико-химические свойства. Хранение продолжается.

263. Аналитические данные по 5 сериям препарата Галактозима представлены в таблице 3.1. Исполнители:температуре от 5 до 15°С.парата Галактозим при хранении по условиям ФСП 42приведе

264. Зав. лабораторией, к. т. н.1. Э.А. Шишкова

265. Ведущий научный сотрудник, к. х. н. ///А^^, Л.И. Мотина1. Научный сотрудник1. О.А. Сухих