Получение и характеризация рекомбинантных антител человека против ортопоксвирусов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.03, кандидат биологических наук Морозова, Вера Витальевна

• Морозова, Вера Витальевна
• кандидат биологических наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Морозова, Вера Витальевна

Список сокращений.

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1.Краткая классификация семейства поксвирусов.

1.2.Структура и морфогенез ортопоксвирусов.

1.3.Краткая характеристика генома ортопоксвирусов.

1.4.Механизмы распространения вируса.

1.5.0сновные методы исследования ортопоксвирусных белков.

1.6. Белки вириона.

1.6.1 .Основные белки сердцевины вириона.

1.6.2.Мембранные белки зрелой вирусной частицы.

1.6.3.Белки дополнительных мембран вириона.

1.7.Использование иммуноглобулинов, направленных против ортопоксвирусов.

1.8. Фаговый дисплей.

Глава 2. Материалы и методы.

2.1.Реактивы и материалы.

2.2.Метод ы.

Глава 3. Результаты.

3.1.Получение препаратов ортопоксвирусов.

3.2.Аффинная селекция антител против вируса осповакцины из иммунной

§г библиотеки.

3.3. Аффинная селекция антител против вируса осповакцины из синтетической библиотеки.

3.4. Аффинная селекция фаговых антител против вируса натуральной оспы из синтетической библиотеки.

3.5.Отбор фаговых антител против вируса эктромелии.

З.б.Определение аминокислотных последовательностей отобранных одноцепочечных антител.

3.7.Исследование связывания отобранных фаговых антител с различными ортопоксвирусами.

3.8.Исследование связывания фаговых антител, отобранных из синтетической библиотеки с различными штаммами вируса натуральной оспы.

• 3.9.Исследование антигенной специфичности отобранных антител.

3.10.Исследование вируснейтрализующих свойств антител.

Глава 4. Обсуждение.

Выводы.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Получение и характеризация рекомбинантных антител человека против ортопоксвирусов»

Род Orthopoxvirus является наиболее известным в семействе Poxviridae, включающем в себя сложные ДНК-содержащие вирусы, реплицирующиеся в цитоплазме клеток позвоночных и беспозвоночных. Для человека на протяжении всей его истории наиболее важным из ортопоксвирусов был вирус натуральной оспы, который более двух тысяч лет являлся причиной эпидемий опасного генерализованного заболевания. Естественная трансмиссия натуральной оспы была прервана в 1977 году, менее чем через два столетия после начала применения профилактических прививок вирусом оспы коров и вирусом осповакцины. Возобновление интереса к ортопоксвирусам у исследователей можно объяснить распространением оспы обезьян в Африке и других странах, а также сохраняющейся возможностью использования вируса натуральной оспы для биотерроризма. Причем стихийному или преднамеренному распространению оспы обезьян или натуральной оспы может способствовать то, что в настоящее время большая часть населения иммунитета к оспе не имеет.

В настоящее время в мире имеется только две официальные коллекции вируса натуральной оспы, одна из которых находится в Векторе. Поэтому по рекомендациям ВОЗ в нашей стране была разработана Программа комплексных исследований вируса натуральной оспы, включавшая фундаментальные исследования ортопоксвирусов и получение иммунобиологических препаратов. Данная работа была выполнена в рамках этой программы.

Следует отметить, что большая часть информации о гуморальном иммунитете к ортопоксвирусам получена при изучении моноклональных антител грызунов против вируса осповакцины и вируса оспы обезьян, а имеющиеся данные о молекулярных механизмах патогенеза вируса натуральной оспы получены на модельных инфекциях лабораторных животных. Поэтому панели человеческих антител против ортопоксвирусов, включая вирус натуральной оспы, кроме их несомненной ценности в качестве источника для разработки иммунопрофилактических и иммунотерапевтических средств, могут быть полезны как инструмент для изучения особенностей иммунологического профиля ортопоксвирусов и молекулярных основ их вирулентности, а также для исследований особенностей иммунного ответа организма.

Одним из современных способов получения антител человека является их селекция из комбинаторных библиотек мини-антител (Fab, scFv), экспонированных на поверхности нитчатых бактериофагов. Такие комбинаторные фаговые библиотеки содержат 106-109 фаговых частиц, на поверхности каждой из которых экспонировано уникальное мини-антитело. Процедура биопэннинга (biopanning) - специфического обогащения библиотеки путем повторяющихся раундов связывания антител с антигеном - позволяет отбирать молекулы с предопределенными свойствами.

Ранее в США из комбинаторной фаговой библиотеки, сконструированной на основе мРНК лимфоцитов периферической крови иммунного донора, была получена коллекция Fab-фрагментов человека, специфических к вирусу осповакцины. Несколько Fab-фрагментов из этой библиотеки продемонстрировали вируснейтрализующие свойства в отношении вируса осповакцины.

Целью данной работы являлось получение методами фагового дисплея одноцепочечных антител человека против ортопоксвирусов, включая вирус натуральной оспы, поиск группоспецифических или, в случае антител против вируса натуральной оспы, штаммо-специфических антител и отбор антител, обладающих вируснейтрализующими свойствами. Для выполнения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- отобрать из иммунной и синтетической комбинаторных библиотек одноцепочечные антитела человека против ортопоксвирусов, включая вирус натуральной оспы, штамм Butler;

- определить аминокислотные последовательности полученных одноцепочечных антител;

- исследовать отобранные антитела в реакции кроссреактивного связывания с различными ортопоксвирусами;

- исследовать связывание отобранных антител с различными штаммами вируса натуральной оспы;

- провести поиск вируснейтрализующих антител в полученной коллекции.

Научная новизна и практическая ценность работы. В настоящей работе впервые получены одноцепочечные антитела человека против вируса натуральной оспы, штамм Butler, против вируса осповакцины и вируса эктромелии. Определены аминокислотные последовательности полученных антител. Исследовано связывание антител с различными ортопоксвирусами, выявлены группоспецифические антитела. Проведенные исследования способности отобранных антител к кросс-реактивному связыванию позволили высказать предположение о вкладе в иммунологические профили ортопоксвирусов эпитопов, конформации которых могут несколько различаться у различных видов (штаммов одного вида) ортопоксвирусов.

Впервые исследовано связывание антител с различными штаммами вируса натуральной оспы. Впервые обнаружены антитела, обеспечивающие различное связывание штаммов вируса натуральной оспы, обладающих разной вирулентностью (variola major и variola alastrim).

В ходе данной работы впервые были отобраны одноцепочечные антитела человека, способные подавлять инфекционность вирусов осповакцины, оспы коров и эктромелии. На основе данных антител в дальнейшем могут быть сконструированы полноразмерные антитела человека. Такие полноразмерные антитела человека, после проверки их противовирусных свойств в модельных экспериментах на животных, могли бы представлять интерес для создания на их основе иммунопрофилактических средств, а также терапевтических препаратов предупреждения поствакцинальных осложнений и, возможно, лечения ортопоксвирусных инфекций.

Апробация работы и публикации. По материалам диссертации опубликовано 4 статьи, получено положительное решение о выдаче авторского свидетельства. Материалы диссертации были представлены на 11 Международных конференциях: 5th John Humphrey Advanced Summer Programme in Immunology (Пущино, Россия, 2000), "Human antibodies and hybridomas" (Прага, Чехия, 2001; Берн, Швейцария, 2002); 15-ой Международной конференции «Antiviral research» (Прага, Чехия, 2002); на XIII Международном вирусологическом конгрессе (Париж, 2002); Научной конференции «Проблемы инфекционной патологии в регионах Сибири, Дальнего Востока и Крайнего Севера» (Новосибирск, 2002); Международной научно-практической школе-конференции «Цитокины. Воспаление. Иммунитет. (Санкт-Петербург, Россия, 2002); 6th John Humphrey Advanced Summer Programme in Immunology, (Пущино, Россия, 2002), 16-ой Международной конференции «Antiviral research» (Саванна, США, 2003), 17-ой Международной конференции «Antiviral research» (Туксон, США, 2004), 18-ой Международной конференции "Antiviral research" (Барселона, Испания, 2005).

Вклад автора. В исследованиях, проводимых с использованием жизнеспособного вируса натуральной оспы в условиях специальной лаборатории с уровнем защиты BSL 3-4, вместе с автором участвовали А.А.Гуськов, Е.Б.Сокунова, Т.Э.Юн, Е.В.Жираковская, Е.И.Бовшик, к.б.н, Н.В.Тикунова. Тестирование антител на наличие вируснейтрализующей активности проводилось в лаборатории общих вирусов, руководитель к.м.н. Е.Ф.Беланов, в тестировании антител принимали участие вместе с автором Н.И.Бормотов и З.Ф.Киселева. Все остальные эксперименты и анализ полученных данных сделаны лично автором.

Заключение диссертации по теме «Молекулярная биология», Морозова, Вера Витальевна

Выводы

Впервые получены фаговые одноцепочечные антитела человека против вируса натуральной оспы, вируса осповакцины и вируса эктромелии. Определены аминокислотные последовательности полученных антител и показано, что V-сегменты тяжелых цепей полученных антител относятся к семействам Vhl и Vh3 иммуноглобулинов человека, а V-сегменты легких цепей - к к1- и13-подтипам.

Исследовано связывание полученных антител с ортопоксвирусами, выявлены антитела, обеспечивающие различное связывание вирусов осповакцины, оспы коров и эктромелии, отобрано группоспецифическое антитело, узнающее эпитоп, который отсутствует на поверхности вируса эктромелии.

Впервые обнаружены антитела, обеспечивающие различное связывание штаммов вируса натуральной оспы variola major (штаммы Ind-3a, Con-9, Kuw-5) и variola alastrim (штаммы Butler, Brazil 131).

Впервые выявлены одноцепочечные антитела человека, способные подавлять инфекционность. вирусов осповакцины, оспы коров и эктромелии и показано, что эти антитела связывают белок ортопоксвирусов с молекулярным весом около 34 кДа.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Морозова, Вера Витальевна, 2005 год

1. Берзовски Д., Берковер Д. Взаимодействие антиген-антитело. Иммунология (подред. У .Пол). Мир, Москва.- 1989. ТомЗ. С. 5-89.

2. Воробьев А.А., Подкуйко В.Н., Максимов В.А. Пероральная вакцинация против оспы (к вопросу о возврате оспопрививания).// Вестн. РАМН. 2003. - Вып. 1. -С. 5-9.

3. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование. Москва. 1984. - С. 477.

4. Маренникова С.С., Мацевич Г.Р. и др. Повышение специфичности иммуноферментного анализа за счет использования коньюгата на основе моноклональных антител.//Вопр. Вирусологии. 1986 - Вып.6 - С. 689 - 690.

5. Маренникова С.С., Мальцева Н.Н. Использование реакции микропреципитации на стекле для лабораторной диагностики натуральной оспы.//Вопросы вирусологии. 1961а- Вып.2. - С.204-206.

6. Маренникова С.С., Еремян А.В., Огородникова З.И. Применение противооспенного гамма-глобулина для серопрофилактики и серотерапии оспы. // Натуральная оспа (под ред. Маренниковой). М. 1961b - С.141-148.

7. Маренникова С.С., Мацевич Г.Р., Свет-Молдавская И.А. Об эффективности гамма-глобулина с повышенным содержанием противооспенных антител при лечении поствакцинальных энцефалитов//Вопр.вирусол„ 1968 - Вып.1.- С. .9 -13.

8. Маренникова С.С., Щелкунов С.Н. Патогенные для человека ортопоксвирусы. КМК Scient.Press. Москва 1998 - С. 386.

9. Ройт. А. Основы иммунологии. М.:Мир 1991 — С. 327.

10. Смородинцев А. Реакция нейтрализации. В кн. «Иммунологическая диагностикавирусных инфекций». М.Медицина- 1985 С.21-46.

11. Baek S. et al. Lipase activities of p37, the major envelope protein of vaccinia virus.//J. Biol.Chem. 1997 - V.272. - P.32042 - 32049.

12. Barbas C.F., Bain J.D., Hoekstra DM. and Lerner R.A. Semisynthetic combinatorial Ab libraries: a chemical solution to the diversity problem. Proc.Natl.Acad. Sci. USA. -1992.-V. 89.-P. 4445-4457.

13. Barbas CF. Ill, Kang A.S., Lerner R.A., Bencovich SJ. Assembly of combinatorial antibody libraries on phage surface: The gene III site. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -88.- 1991.- P. 7978-7982.

14. Barbas III C.F., Lerner R.A. Combinatorial immunoglobulin library on the surface of phage (Phabs):rapid selection of an antigen specific Fabs. A companion to Meth. In Enzimology. 2. -1991. - P. 119-124.

15. Bayliss, C. D., and G. L. Smith. Vaccinia virion protein VP8, the 25 kDa product of the L4R gene, binds single-stranded DNA and RNA with similar affinity.// Nucleic Acids Res. 1997. - V.25. - P. 3984-3990.

16. Bednarek S., Orci., Schekman R. Traffic COPS and the formation of vesicle coats.//Trends in Cell Bioligy. 1996 - V.6. - P.468-473.

17. Betakova T, Wolffe EJ, Moss B. Regulation of vaccinia virus morphogenesis: phosphorylation of the A14L and A17L membrane proteins and C-terminal truncation of the A17L protein are dependent on the F10L kinase.// J Virol. 1999a - V.73. - P. 3534-3543.

18. Betakova Т., Wollfe E., Moss В. Membrane topology of the vaccinia virus A17L envelope protein.//Virology. 1999b - V.261. - P.347-356.

19. Beyersdorf N, Hanke T, Kerkau T, Hunig T.Superagonistic anti-CD28 antibodies: potent activators of regulatory T cells for the therapy of autoimmune diseases. // Ann Rheum Dis. 2005 - V.64.Suppl. 4 - 91-95.

20. Birnboim H. and Doly J. A rapid alkaline extraction procedure for screening recombinant plasmid DNA.//Nucl.Acids Res. 1979 - V.7 - 1513.

21. Blasco R., Moss B. Extracellular vaccinia virus formation and cell-to-cell transmission are prevented by deletion of the gene encoding the 37 000 -Dalton outer envelope protein.//! Virol. 1991 - V.65. - P.5910 - 5920.

22. Bond Ch., Marsters J.C., Sidhu S. Contributions of CDR3 to VHH Domain Stability and Design of Monobody Scaffolds for Naive Antibody Libraries.// J. Mol. Biol.- 2003- V.332, P.643-655.

23. Boulter E., Appleyard G. Differences between extracellular and intracellular forms of poxviruses and their implications.//Prog.Med.Virol. 1973. - V.16. - P.86-108.

24. Bray M. Pathogenesis and potential antiviral therapy of complications of smallpox vaccination. Antiviral Research. 2003 - V.58. - P.101-114.

25. Byrnes A., Griffin D. Binding of Sindbis virus to cell surface heparan sulfate.//J.Virol.- 1998 V.72. - P.7349 - 7356.

26. Сагг С., Kim P. A spring-loaded mechanism for the conformational change of influenza hemagglutinin.//Cell. 1993,- V.73. - P.823-832.

27. Chan D.,Fass J., Berger J., Kim P.Core structure of gp41 from the HIV envelope glycoprotein// Cell. 1997 - V.89. - P.263-273.

28. Chang W., Hsiao J., Chung C., Bair C. Isolation of a monoclonal antibody which blocks Vaccinia virus infection.// J. Virol. 1995 - V.69. P.517-522.

29. Clackson Т. et al. Making antibody fragments using phage display libraries.// Nature. -1991. V. 352. - P. 624-628.

30. Cudmore S., Blasco R., Vincentelli R., Esteban M., Sodeik В., Griffiths G., Krijnse Locker. A vaccinia core protein, p39, is membrane associated.// J.Virol., 1996. V. 70. -P.6909-6921.

31. Czerny P., Mahnel H. Structural an functional analysis of orthopoxvirus epitops with neutralizing monoclonal antibodies.// J.Gen.Virology.,-1990.-V.71.- P.2341-2352

32. Czerny P., Wagner K., Gessler K., Mayr A., Kaaden O. Amonoclonal blocking-ELISA for detection of orthopoxvirus antibodies in feline sera. Veterinary Microbiology. -1996 V.52. - P.185-200.

33. Dales S., Mosbach E. Vaccinia as a model for membrane biogenesis.//Virology. -1968. V.35. - P.564-583.

34. Demkovicz W., Maa J., Esteban M. Identification and characterization of Vaccinia virus genes encoding proteins that are highly antigenic in animals and are immunodominant in vaccinated humans.// J. Virol. 1992 - V.66. - P.386-398.

35. Derrien M. et al. Tyrosine phosphorilation of A17L during vaccinia virus infection: involvment of the HI phosphatase and the F10 kinase.// J.Virol. 1999. - V.73. - P. 7287 -7296.

36. Dotto G.P., Horiuchi K., Zinder N.P. The functional origin of bacteriophage fl DNA replication. Its signals and domains.//J. Mol Biol. 1984 - V. 172 - P. 507-521.

37. Dubochet J., Adrian M., Richter K., Garces J., Wittek R. Structure of intracellular mature vaccinia virus observed by cryoelectron microscopy.// J. Virol. 1994. - V.68. - P.1935-1941.

38. Durrani O.M., Reuser T.M., Murray P.I. .Infliximab: A Novel Treatment for Sight-Threatening Thyroid Associated Ophthalmopathy.//Orbit- 2005 V.24 - P.l 17-119.

39. Emery S., Harris W. Strategies for humanizing antibodies. In Antibody Engineering. Oxford University Press. New York. 1995 - P. 159-183.

40. Engelstad M., Smith G. The vaccinia virus 42 kDa envelope protein is required for the envelopment and egress of extracellular virus and virus virulence.// Virology. 1993 -V.194. -P.627-637.

41. Eroshkin A.M. et al. Design of four-helix bundle protein as a candidate for HIVvaccine.// Protein Eng. 1995 V. 8 P. 167-173.

42. Essani, K., Dales S. Biogenesis of vaccinia: evidence for more than 100 polypeptides in the virion.//Virology . 1979 - V.95. - P.385-394.

43. Ewert S., Huber Т., Honegger A., PlUckthun А/ Biophysical properties of human antibody variable domains.// J.Mol.Biol. 2003 - V.325. - P. 531-553.

44. Fenner F.,Wittek R., Dumbell K. The Orthopoxviruses. Acad.Press., USA.-1989.- P. 432.

45. Franke C., Reynolds P., Hruby D. Fatty acilation of vaccinia virus proteins.// J.Virol. -1989.-V.63.-P.4285-4291.

46. Frischknecht F. et al. Actin-base motility of vaccinia virus mimics receptor tyrosine kinase signaling.// Nature 1999 - V.401. - P.926 - 929.

47. Galmiche M., Goenaga J.,Wittek R., Rindisbacher L. Neutralizing and protective antibodies directed against Vaccinia virus envelope antigens.// Virology. 1999 -V.254. -P.71-80.

48. Gordon J., Mohandas A., Wilton S., Dales S. A prominent antigenic surface polypeptide involved in the biogenesis and function of the vaccinia virus envelope.//Virology. 1991- V.81 - P. 671-686.

49. Grillo-Lopez A.J. et al. Overview of the clinical development of rituximab: first monoclonal antibody approved for the treatment of limphoma.// Semin.Oncol. 1999. -V. 26. - P.66-73.

50. Griffiths G. et al. Structure and assembly of intracellular mature vaccinia virus:isolated-particle analysis.//J.Virol. -2001. V.75. -P.l 1056-11055.

51. Griffiths et al. Isolation of high affinity human antibodies directly from large synthetic repertoires.// EMBO J. 1994 -V. 13. P.3245-3260.

52. Grosenbach D., Ulaeto D., Hruby D. Palmitylation of the Vaccinia virus 37-kDa major envelope antigen. Identification of a conserved acceptor motif and biological relevance.//.!. Biol.Chem. 1997 - V.272. - P.l956-1964.

53. Herrera E., Lorenzo M., Blasco R., Isaacs S. Functional Analysis of Vaccinia virus B5R protein: essential role in virus envelopment is independent of a large portion of the extracellular domain.// J.Virol. 1998 - V.72. - P.294-302.

54. He X, Li G, Zhu J. Construction and selection of human anti-idiotypic antibody single chain variable fragments or CDR3 fragments of nasopharyngeal carcinoma.// J Exp Clin Cancer Res. 2004 - V. 23. - P. 607-615.

55. Hollinshead M., Vanderplasschen A., Smith G., Vaux D. Vaccinia virus intracellular mature virions contain only one lipid membrane.//J.Virol. 1999. - V.73. - P. 15031517.

56. Hollinshead M. et al. Vaccinia virus utilises microtubules for movement to the cell surface.// J.Cell.Biol. 2001. - V.154. - P.389-402.

57. Hoogenboom H., Winter G. By-passing immunization. Human Antibodies from Synthetic Repertoires of Germline Vh Gene Segments Rearranged in v//ro.//J.Mol.Biol. 1992 - V. 227. - P.381-388.

58. Hsiao J., Chung C., Vhang W. Cell surface proteoglycans are necessary for A27L protein-mediated cell fusion: identification of the N-terminal region of A27L protein as the glycosaminoglycan-binding protein.//J.Virol. 1998. - V.72. - P. 8374 - 8379.

59. Hsiao J-C, Chung C-S, Chang W. Vaccinia virus envelope D8L protein binds to cell surface chondroitin sulfate and mediates the adsorption of intracellular mature virionsto cells.// J Virol. 1999 - V.73 - P. 8750-8761.

60. Husain M., Moss B. Evidence against an essential role of COPII-mediated cargo transport to the endoplasmic reticulum-Golgi intermediate compartment in the formation of the primary membrane of Vaccinia virus.//J.Virol. 2003.- V.77. -P.l 1754-11766.

61. Huston J. Medical applications of single-chain antibodies. //Int. Rev.Immunol. 1993 - V.10. - P.195-217.

62. Ichihashi Y., Oie M. Adsorption and penetration of the trypsinized vaccinia virion.// Virology 1980-V.101. - P.50-60.

63. Ichihashi Y., Tsuruhara Т., Oie M. The effect of proteolytic enzymes on the infectivity of vaccinia virus.// Virology 1982 - V. 122 - P. 279-289.

64. Ichihashi Y., Oie M., Tsuruhara T. Location of DNA-binding proteins and disulfide-linked proteins in Vaccinia virus structural elements.//J. Virol. 1984 - V.50. - P.929-938.

65. Jensen O.N. et al. Identification of the major membrane and core proteins of vaccinia virus by two-dimensional electrophoresis.//!. Virol. 1996 - V.70 - P.7485-7497.

66. Johnston J., McFadden G. Poxvirus immunomodulatory strategies: current perspectives.// J.Virol. 2003 - V.77. - P.6093-6100.

67. Kajioka R., Siminovitch L., Dales S. The cycle of multiplication of vaccinia virus in Earle's strain L cells. II. Initiation of DNA synthesis and morphogenesis.//Virology.-1964.- V.24. -P.295-309.

68. Kao S., Bauer W. Biosynthesis and phosphorylation of vaccinia virus structural protein VP 11 .//Virology. 1987 - V. 159. - P.399-407.

69. Katz, E., and В. Moss. Vaccinia virus structural polypeptide derived from a high-molecular-weight precursor: formation and integration into virus particles.// J. Virol. -1970.- V.6.-P.717- 726.

70. Kay B.K., Winter G., McCafferty J. Phage display of peptides and proteins: a laboratory manual. Academic press. 1996. - P.306.

71. Keane J.T., James K„ Blankenship M.L., Pearson R.W. // Arch.Dermatol. 1983. -Vol. 119.- P. 404-408.

72. Kim S J., Myeong H.J., Stapleton J.T., Yoon S.O., Kim K., Jeon E., Hong L. Neutralizing human monoclonal antibodies to hepatitis A virus recovered by phage display.// Virology. 2004. - V. 318. - P. 598-607.

73. Kipriynov S.M., Le Gall F. Generation and production of engineered antibodies.// Mol Biotechnol. 2004- V. 26. - P. 39-60.

74. K6hler G., Milstein G. Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity.// Nature, 1975 V. 2.56. - P.52-53.

75. Koefoed K. et al. Molecular characterization of the circulating anti-HIV-1 gpl20-specific В cell repertoire using antibody phage display libraries generated from preselected HIV-1 gpl20 binding PBLs. //J. Immunol. Methods. 2005 -V. 297. P. 187201.

76. Koonin E.V. A duplicated catalytic motif un a new superfamily of phosphohydrolases and phospholipid synthases that include poxvirus envelope proteins.//Trends in Biochem. Sci. 1996 - V.21 - P.242-243.

77. Krebs B, Griffin H, Winter G, Rose-John S. Recombinant human single chain Fv antibodies recognizing human interleukin-6. Specific targeting of cytokine-secreting cells.// J Biol Chem. 1998 V.273. P. 2858-2865.

78. Krijnse-Locker J, Schleich S, Rodriguez D, Goud B, Snijder EJ, Griffiths G. The role of a 21-kDa viral membrane protein in the assembly of vaccinia virus from the intermediate compartment.//J. Biol. Chem. 1996 - V.271. - P. 14950-14958.

79. Krauss О., Hollinshead R., Hollinshead M., Smith G. An investigation of incorporation of cellular antigens into Vaccinia virus particles.//J.Gen. Virol. 2002 -V.83. - P.2347-2359.

80. Krusat Т., Streckert H.-J. Heparan-dependent attachment of respiratory syncytial virus (RSV) to host cells.//Arch.Virol. 1997 - V.142. - P.1247-1254.

81. Kyte J., Doolittle F. A simple method for displaying the hydropathic character of a protein.//J.Mol.Biol. 1982 - V.157. - P. 105-132.

82. Laemmli U.K. Nature. 1970. - v. 227. - P. 680-685.

83. Lai CF, Gong SC, Esteban M. The 32-kilodalton envelope protein of vaccinia virus synthesized in Escherichia coli binds with specificity to cell surfaces.// J. Virol. 1991 -V.65.-P. 499-504.

84. Lartigue A, Drouot L, Jouen F, Charlionet R, Tron F, Gilbert D. Association between anti-nucleophosmin and anti-cardiolipin antibodies in (NZW x BXSB)F1 mice and human systemic lupus erythematosus.// Arthritis Res Ther. 2005 V.7 - P. R1394-403.

85. Law M., Hollinshead R., Smith G. Antibody-sensitive and antibody-resistant cell-to-cell spread by vaccinia virus:role of the A33R protein in antibody-resistant spread.//J.Gen.Virol. 2002 - V.83. - P.209 - 222.

86. Law M, Smith GL. Studying the binding and entry of the intracellular and extracellular enveloped forms of vaccinia virus.// Methods Mol. Biol. 2004 - V. 269. P. 187-204.

87. Loury L., Rosenbrou G.// J. Biol. Chem. 1951 - V.100. - P. 539-543.

88. Luzzago A., Felici F., Tramontano A., Pessi A., CorteseR. Mimicking of discontinuous epitopes by phage-displayed library of contrained peptides. Gene. 1993.-v. 128.-P. 51-57.

89. Maa J.-S., Esteban M. Structural and functional studies of a 39000-Mr immunodominant protein of vaccinia virus.//J.Virol. 1987 - V.61. - P.3910 - 3919.118

90. MacCafferty J., Griffiths A.D., Winter G. and Chiswell D.J. Phage antibodies: filamentous phage displaying antibody variable domains.// Nature. 348. - 1990. - P. 552-554.

91. Martin K., Grosenbach D., Franke C., Hruby D. Identification and Analysis of three Myristilated Vaccinia virus late proteins.//J.Virol. 1997 - V.71. - P. 5218-5226.

92. Martin K.H., Franke C.A., Hruby D.E. Novel acylation of poxvirus A-type inclusions proteins.// Virus Res. 1999 - V.60 - P. 147-157.

93. Martinez-Pomarez L., Stern R., Moyer R. The ps/hr gene (B5R open reading frame homolog) of rabbitpox virus control pock colour, is a component of extracellular enveloped virus, and is secreted into the medium.// J. Virol. 1993 - V. 67 - P. 54505462.

94. Maruyama T. et al. Ebola virus can be effectively neutralized by antibody produced in natural human infection.// J. Virol. 1999. - V.73 - P. 6024-6030.

95. McKelvey Т., Andrews C., Miller S., Ray C., Pickup D. Identification of the Orthopoxvirus p4c Gene, Which Encodes a Structural Protein That Directs Intracellular Mature Virus Particles into A-Type Inclusions.// J. Virol. 2002 - V. 76. -P. 11216-11225.

96. Medzon E.,Bauer H. Structural features of vaccinia virus revealed by negative staining, selectioning, and freeze-etching.//Virology. 1970. - V.40. - P.860-867.

97. Meiser A., Sancho C., Krijnse Locker J. Plasma membrane budding as an alternative release mechanism of the extracellular enveloped form of vaccinia virus from HeLa cells.// J.Virol.- 2003 V.77. - P.9931-9942.

98. Mercer J, Traktman P. Investigation of structural and functional motifs within the vaccinia virus A14 phosphoprotein, an essential component of the virion membrane.// J. Virol.- 2003 V.77.-P. 8857-8871.

99. Minnencova O.O., Ilyichev A.A., Kishchenko G.P. Design of specificimmunogenes using filamentous phage at the carrier. Gene. - 1993. - V. 128. -P. 85-88.

100. Moss В., Rosenblum E. Protein cleavage and poxvirus morpogenesis: tryptic peptide analysis of core precursors accumulated by blocking assemblywith rifampicin.//J.Mol.Biol. 1973. V.81. - P.267-269.

101. Nagler F. Application of Hirst's phenomenon to the titration of vaccinia virus and vaccinia immune serum.//Medical Journ. Austral. 1942 - V.l. - P.281-283.

102. Niles E G, Seto J. Vaccinia virus gene D8 encodes a virion transmembrane protein.// J. Virol. 1988 - V. 62 - P. 3772-3778.

103. Nissim A., Hoogenboom H., Tomlinson Ian M., Flynn G., Midgley C., Lane D., Winter G. Antibody fragments from a 'single pot' library as immunochemical reagents.// EMBO J. 1994.- V.13. - P. 692-698.

104. Ouchterlony O. Antigen-antibody reactions in gels.// Acta Path.Microbiol.Scand. -1949-V.26.-P.507-515.

105. Parkinson J., Smith G. Vaccinia virus gene A36R encodes a Mr- 43-50 kDa protein on the surface of extracellular enveloped virus.//Virology 1994 - V.204. - P. 376 -390.

106. Patel D., Pickup D., Joklik W. Isolation of cowpox virus A-type inclusions and characterisationof their major protein component.// Virology. 1986 - V.149. -P. 174-189.

107. Payne L.G. Polypeptide composition of extracellular enveloped vaccinia virus.//J.Virol. 1978 - V.27. - P. 28 - 37.

108. Payne L.G. Significance of extracellular enveloped virus in the in vitro and in vivo dissemination of vaccinia virus.//J.Gen. Virol. 1980. - V.50. - P.89-100.

109. Payne L. G. Characterization of Vaccinia virus glycoproteins by Monoclonal Antibody Precipitation. //Virology. 1992- V.197. - P.251-260.

110. Pedersen K., Snijder E., Schleich S., Roos N., Griffiths G., Krijnse Locker J. Characterization of Vaccinia virus intracellular cores: implications for viral uncoating and core structure. J. Virol. 2000 - V.74. - P.3525-3536.

111. Pulford D., Meyer H., Ulaeto D. Orthologs of the vaccinia A13L and A36R virion membrane protein genes display diversity in species of the genus Orthopoxvirus.// Arch. Virol. -2002 V.l 47-P. 995-1015.

112. Ramsey-Ewing A, Moss B. Apoptosis induced by a postbinding step of vaccinia virus entry into Chinese hamster ovary cells.// Virology. 1998 - V. 242. - P. 138149.

113. Ravanello M.P., Hruby D.E.Conditional lethal expression of the vaccinia virus L1R myristylated protein reveals a role in virion assembly.// J Virol. 1994a - V.68 -P.6401-6410.

114. Ravanello M.P., Hruby D.E.Characterization of the vaccinia virus L1R myristylprotein as a component of the intracellular virion envelope.// J Gen Virol. -1994b.-V. 75- P.1479-1483.

115. Reckmann I., Higley S., Way M. The Vaccinia virus F17R protein interacts with actin. FEBS Lett. 1997 - V.409.- P.141-146.

116. Risco C. et al. Endoplasmic reticulum-Golgi intermediate compartment membranes and vimentin filaments participate in vaccinia virus assembly.// J.Virol. 2002. -V.76. - P.1839 -1855.

117. Rodriguez J., Janesco R., Esteban M. Isolation and Characterization of Neutralizing Monoclonal Antibodies to Vaccinia Virus. J.of Virology. 1985 - V.56.- P.482-488

118. Rodriguez D, Rodriguez JR, Esteban M. The vaccinia virus 14-kilodalton fusion protein forms a stable complex with the processed protein encoded by the vaccinia virus A17L gene.// J. Virol. 1993 - V.67 - P.3435-3440.

119. Rodriguez D, Risco C, Rodriguez JR, Carrascosa JL, Esteban M. Inducible expression of the vaccinia virus A17L gene provides a synchronized system to monitor sorting of viral proteins during morphogenesis.// J Virol. 1996. - V.70 - P.7641-7653.

120. Rodriguez JR, Risco C, Carrascosa JL, Esteban M, Rodriguez D.Vaccinia virus 15-kilodalton (A14L) protein is essential for assembly and attachment of viral crescents to virosomes.// J Virol. 1998 - V.72. - P. 1287-1296.

121. Roos N. et al.A novel immunogold ciyoelectron microscopic approach to investigate the structure of the intracellular and extracellular forms of vaccinia virus.//EMBO Journal. 1996. - V.15. - P. 2343 - 2355.

122. Ryazankina O.I., Shchelkunov C.N. Mapping of Vaccinia virus genes. Mol.Biol. -1993 V.27.- P.153-166.

123. Salmons T. et al. Vaccinia virus membrane proteins p8 and pi6 are cotranslationally inserted into the rough endoplasmic reticulum anr retained in the intermediate compartment. J. Virol. 1997 - V.71'. - P.7404-7420.

124. Sanderson C., Frischknecht F., Way M., Hollimshead M., Smith G. The vaccinia virus A27L gene is needed for the microtubule-dependent transport of intracellular mature virus particles.//J.Gen.Virol. V.81. P.47-58.

125. Sarov, I., Joklik W. Studies on the nature and location of capsid polypeptides of vaccinia virions.// Virology 1972- V.50. - P.579-592.

126. Sidhu, S.S., Lowman, H.B., Wells, J.A. Phage display for selection of novel binding peptides.//Methods Enzymol. 2000. - V. 328. - P. 333-363.

127. Sieczkarski S., Whittaker G. Dissecting virus via endocytosis. J. Gen.Virol. 2002 -V.83. - P.1535-1545.

128. Schmaljohn C., Cul Y., Kerby S., Pennock D., Spik K. Production and characterization of human monoclonal antibody Fab fragments to Vaccinia Virus from phage-display library. Virology. 1999-V. 858. - P. 189-200.

129. Shearer JD, Siemann L, Gerkovich M, House RV. Biological activity of an intravenous preparation of human vaccinia immune globulin in mouse models of vaccinia virus infection.// Antimicrob Agents Chemother. 2005 V.49 - P. 26342641.

130. Smith G.P. Filamentous fusion phage: Novel expression vectors that display cloned antigens on the surface of the virion//Science 1985 - V. 228 - P. 1315-1317.

131. Smith G.P. and Scott J. Libraries of peptides and proteins displayed on filamentous phage//Meth.Enzymol. 1993 - V. 217 - P.228 - 257.

132. Shida H., Dales S.Biogenesis of vaccinia: molecukar basis for the hemagglutinin-negative phenotype of the IHD-W strain.//Virology. 1982 - V.l 17. - P.219-237.

133. Shida H. Nucleotide sequence of the vaccinia virus hemagglutinin gene.// Virology. 1986-V.150.-P.451-462.

134. Smith G., Vanderplasschen A., Law M. The formation and function of extracellular enveloped vaccinia virus.//J. Gen.Virol. 2002 - V.83. - P. 2915 - 2931.

135. Smith G. Law M. The exit of Vaccinia virus from infected cells.//Virus Research. -2004-V. 106.-P. 189-197.

136. Sodeik В., Krijnse Locker J. Assembly of Vaccinia virus revisited: de novo synthesis or acquisition from the host.// Trends in Microbiol. 2002. - V.10. - P. 15-24.

137. Soderlind E., Strandberg L., et al. Recombining germline-derived CDR sequences for creating diverse single-framework antibody libraries.//Nature Biotechnol. 2000 -V.18.-P. 852-856.

138. Stern, W., Dales S. Biogenesis of vaccinia: isolation and characterization of a surface component that elicits antibody suppressing infectivity and cell-cell fusion.// Virology 1976a-V. 75.-P. 232-241.

139. Stern, W., Dales S. Biogenesis of vaccinia: relationship of the envelope to virus assembly.// Virology 1976b - V. 75. - P. 242-255.

140. Sung T. et al. Mutagenesis of phospholipase D defines a superfamily including a trans-Golgi viral protein required for poxvirus pathogenicity.// EMBO Journ. 1997 -V.16.-P. 4519-4530.

141. Takahashi Т., Oie M., Ichihashi Y. N-terminal amino acid sequences of vaccinia virus structural proteins.//Virology-1994. V.202. - P.844-852.

142. Thornton. The antigenicity and immunogenicity of the intracellular and extracellular forms of Vaccinia virus. I: The production of High-titre Vaccinia extracellular virus and its antigenicity after inactivation. Br.J.exp.Path.- 1980.-V.61.-P.444-450

143. Towbin H., Staehlin Т., Gorden J. Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1979. - V. 76. - P. 4350.

144. Ulaeto D., Grosenbach D., Hruby D. The vaccinia 4c and A-type inclusion proteins are specific markers for the intracellular mature virus particle.// J.Virol. 1995 - V.70.1. Р.3372-3377.

145. Van Eijl H., Hollinshead M., Smith G. The vaccinia virus A36R protein is a type lb membrane protein present on intracellular but not extracellular enveloped particles.// Virology. 2000 - V.271. - P.26-36.

146. Van Eijl H., Hollinshead M., Rodger O., Zhang W.-H., Smith G. The vaccinia virus F12L protein is associated with intracellular enveloped virus particles and is required for their egress to the cell surface. // J.Gen.Virol. 2002 - V.83 - P.l95-207.

147. Van Meir E., Wittek R. Fine structure of the vaccinia virus gene encoding the precursor of the major core protein 4a.//Arch.Virol. 1988 - V.102. - P.19-27.

148. Vanderplasshen A., Hollinshead M., Smith G. Antibodies against Vaccinia virus do not neutralize extracellular enveloped virus but prevent virus release from infected cells and comet formation. J. Gen.Virol.-1997.-V.78.- P.2041-2048.

149. Vanderplasshen A. et al. Extracellular enveloped vaccinia virus is resistant to complement because of incorporation of host complement control proteins into its envelope.// Proc.Natl.Acad.Sci. 1998. - V.95. - P. 7544 -7549.

150. Vazquez M., Esteban M. Identification of functional domains in the 14-kilodalton envelope protein (A27L) of Vaccinia virus. J.Virol.- 1999 V.73. - P.9098-9109.

151. Veiga E, De Lorenzo V, Fernandez LA. Neutralization of enteric coronaviruses with Escherichia coli cells expressing single-chain Fv-autotransporter fusions. // J Virol. 2003 V.77 - P.13396-13398.

152. Wallengren K., Risco C., Krijnse Locker J., Esteban M., Rodriguez D. The A17L gene product of Vaccinia virus is exposed on the surface of IMV.// Virol. 2001. - V. 290. - P.143-152.

153. Weissenhorn W. et al. Atomic structure of the ectodomain from HIV-1 gp41.// Nature. 1997 - V.387. - P. 426 - 430.

154. White J.M. Viral and cellular membrane fusion proteins.//Annu.Rev.Physiol. 1990. - V.52. - P.675-697.

155. White J.M. Membrane fusion.//Science. 1992 - V.258. - P. 917-924.

156. Whitehead S., Hruby D. Differential utilization of a conserved motif for the proteolytic maturation of vaccinia virus proteins.//Virology 1994. - V.200. - P. 154

157. Wilcock D., Smith GL.Vaccinia virus core protein VP8 is required for virus infectivity, but not for core protein processing or for INV and EEV formation.//Virology. 1994 - V. 202 - P. 294-304.

158. Wilcock D., Smith GL.Vaccinia virions lacking core protein VP8 are deficient in early transcription.// J. Virol. 1996 - V. 70 - P. 934- 943.

159. Williamson R.A., Burioni R., Sanna P.P., Partridge L.J., Barbas C.F., Burton D.R. 1993 . Human monoclonal antibodies against a plethora of viral pathogens from single combinatorial libraries. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. V.90. P. 4141-4145.

160. Wilton, S., A. R. Mohandas, and S. Dales. Organization of the vaccinia envelope and relationship to the structure of intracellular mature virions.// Virology 1995 - V. 214 - P.503-511.

161. Wolffe EJ, Vijaya S, Moss B. A myristylated membrane protein encoded by the vaccinia virus LIR open reading frame is the target of potent neutralizing monoclonal antibodies.// Virology. 1995 - V.211- P.53-63.

162. Wollfe E., Weisberg A., Moss B. The vaccinia virus A33R protein provides a chaperone function for viral membrane localization and tyrosine phosphorylation of the A36R protein.// J. Virol. 2001 - V.75. - P. 303-310.

163. WuDunn D., Spear D. Initial interaction of herpes simplex virus with cells is binding to heparan sulfate.//J.Virol. 1989 - V.63. - P.53-63.

164. Yang W., Bauer W. Purification and characterization of vaccinia virus structural protein VP8.//Virology. 1988. - V.167. - P.578-584.

165. Zinoviev V.V., Tchikaev N.A., Chertov O.Yu., Malygin E.G. Identification of the gene encoding vaccinia virus immunodominant protein p35.// Gene 1994 - V.147. -P. 209-214.

166. Zhang W.-H., Wilcock D., Smith G. The vaccinia virus F12L protein is required for actin tail formation, normal plaque size and virulence.//J. Virol. 2000 - V.74. - P. 11654- 11662.

167. Zhou Y., Takekoshi M., Maeda F., Ihara S., Esumi M. Recombinant antibody Fab against the hypervariable region 1 of hepatitis С virus blocks the virus adsorption to susceptible cells in vitro. Antiviral Research. 56. - 2002. P. 51-59.