Создание рекомбинантных антител человека против ортопоксвирусов с использованием методов фагового дисплея тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.03, кандидат биологических наук Юн, Татьяна Эверестовна

• Юн, Татьяна Эверестовна
• кандидат биологических наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Юн, Татьяна Эверестовна

ОГЛАВЛЕНИЕ.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 СТРУКТУРА И СВОЙСТВА МОЛЕКУЛ

ИММУНОГЛОБУЛИНОВ.

1.1.1 Общий план строения иммуноглобулинов.

1.1.2 Гены иммуноглобулинов.

1.1.3 Организация генов, кодирующих легкие цепи иммуноглобулинов.

1.1.4 Организация генов, кодирующих тяжелые цепи иммуноглобулинов.

1.1.5 Механизмы ДНК рекомбинации меяеду V- и Л-генами.

1.2 ИНЖЕНЕРИЯ АНТИТЕЛ.

1.2.1 Химерные антитела.

1.2.2 Гуманизированные антитела.

1.2.3 Полноразмерные антитела человека.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Создание рекомбинантных антител человека против ортопоксвирусов с использованием методов фагового дисплея»

Роль антител в различных областях медицины трудно переоценить. С развитием генетической инженерии стало возможным создание рекомбинантных производных моноклональных антител (МКА). К ним относятся химерные и гуманизированные АТ, которые в настоящее время применяют в терапии различных заболеваний. Однако, несомненным является тот факт, что предпочтительнее использовать в терапии полностью человеческие молекулы иммуноглобулинов.

В настоящее время источником для получения полноразмерных антител человека могут являться сыворотка крови человека, гибридомы на основе В-клеток человека и трансгенные мыши. Однако, существует ряд ограничений в использовании этих источников для получения препаратов терапевтических антител. В то же время получение антител человека возможно с использованием методологии фагового дисплея. Несомненным преимуществом применения комбинаторной технологии является отсутствие необходимости использования лабораторных животных, относительная простота в исполнении, а также возможность скрининга большого количества кандидатных молекул за более короткий промежуток времени. Из комбинаторных библиотек возможен отбор мини-антител человека против широкого круга антигенов, включая особо опасные вирусы. Объединение в дальнейшем вариабельных доменов отобранных мини-антител с константными доменами иммуноглобулинов человека в экспрессионных векторах позволяет получать полноразмерные антитела человека.

Целью данной работы являлось получение на основе методов фагового дисплея одноцепочечных антител человека против инфекционного вируса натуральной оспы, штамм 1пс1-3а, конструирование и характеризация полноразмерных антител человека против ортопоксвирусов.

Для выполнения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи: отобрать из синтетической комбинаторной библиотеки одноцепочечные антитела человека против инфекционного вируса натуральной оспы, штамм 1пс1-3а;

- исследовать иммунохимические и вируснейтрализующие свойства отобранных антител;

- сконструировать полноразмерные антитела человека на основе одноцепочечных антител против ортопоксвирусов;

- исследовать иммунохимические и вируснейтрализующие свойства полученных полноразмерных антител.

Научная новизна и практическая ценность работы. В настоящей работе впервые получены одноцепочечные антитела человека против вируса натуральной оспы, штамм Ind-За. Определены аминокислотные последовательности полученных антител. Исследовано связывание антител с различными ортопоксвирусами, включая различные штаммы вируса натуральной оспы.

Получены штаммы Esherichia coli, продуцирующие растворимые одноцепочечные антитела slF4, slI6 и s2I19 специфично взаимодействующие с ортопоксвирусами. Исследованы особенности продукции этих антител в клетках E.coli.

Получены рекомбинантные плазмидные ДНК, pCHlF4 и pCLlF4, рСНИб и pCLIIö, рСН2119 и pCL2I19, рСНЬ9 и pCLb9, обеспечивающие продукцию в клетках млекопитающих полноразмерных человеческих антител класса IgGl, специфично взаимодействующих с ортопоксвирусами. Антитела fhb9 и fhlF4 способны нейтрализовать инфекционность вируса осповакцины на культуре клеток VeroEö. В случае антитела fhlF4 вируснейтрализующие свойства проявлялись только при совместной инкубации с сывороткой невакцинированного донора.

Антитело fhb9 после проверки противовирусных свойств в модельных экспериментах на животных, могло бы представлять интерес для создания на его основе иммунопрофилактического средства, а также терапевтического препарата предупреждающего развитие поствакцинальных осложнений, и, возможно, лечения ортопоксвирусных инфекций.

Апробация работы и публикации. По материалам диссертации опубликовано 3 статьи, получено два положительных решения о выдаче авторского свидетельства. Материалы диссертации были представлены на 11

Международных конференциях: 16-ой Международной конференции «Antiviral research» (Саванна, США, 2003), 17-ой Международной конференции «Antiviral research» (Туксон, США, 2004), 18-ой Международной конференции "Antiviral research" (Барселона, Испания, 2005), 6th John Humphrey Advanced Summer Programme in Immunology, (Пущино, Россия, 2002), 7th John Humphrey Advanced Summer Programme in Immunology (Москва, Россия, 2005), на XIII Международном вирусологическом конгрессе (Париж, 2002), 31-st FEBS Congress, Molecules in health and Disease (Стамбул, Турция 2006) VII Межгосударственная научно-практическая конференция (Оболенск, Россия 2006), 6th, 7th и 8th Meetings of the WHO Advisory Committee on Variola Virus Research (Женева, Швейцария, 2004, 2005 и 2006), и 1 Российской конференции: Научная конференция «Проблемы инфекционной патологии в регионах Сибири, Дальнего Востока и Крайнего Севера» (Новосибирск, 2002).

Вклад автора. Все эксперименты и анализ полученных данных сделаны лично автором. В исследованиях, проводимых с использованием инфекционного вируса натуральной оспы в условиях специальной лаборатории с уровнем защиты BSL 3-4, вместе с автором принимали участие A.A. Гуськов, Е.Б. Сокунова, Е.В. Жираковская, В.В. Морозова, Е.И. Бовшик, Н.В. Тикунова. Тестирование антител на наличие вируснейтрализующей активности проводилось в лаборатории общей вирусологии, руководитель к.м.н. Е.Ф. Беланов, в тестировании антител принимали участие вместе с автором Н.И. Бормотов и З.Ф. Киселева. Конструирование полноразмерных антител и эксперименты по эукариотической экспрессии проводились совместно с сотрудниками лаборатории инженерии белка и группы экспрессии белковых факторов роста и дифференцировки института Биоорагнической химии им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН г. Москва: к.х.н. JI.H. Шингаровой и к.б.н. И.В.Мерсияновой.

Заключение диссертации по теме «Молекулярная биология», Юн, Татьяна Эверестовна

выводы

1. Впервые получены фаговые одноцепочечные антитела человека против вируса натуральной оспы, штамм Ind-За. Определение аминокислотных последовательностей позволило выявить, что V-сегменты тяжелых цепей относятся к Vhl и Vh3 семействам иммуноглобулинов человека, а V-сегменты легких цепей - к к1- и 13-подтипам.

2. Продемонстрировано, что отобранные антитела обладают способностью к перекрестному связыванию различных штаммов вируса натуральной оспы, а также вирусов осповакцины, оспы коров и эктромелии.

3. Впервые получены штаммы Escherichia coli, продуцирующие в растворимой форме одноцепочечные антитела slF4, si 16 и s2I19 против ортопоксвирусов. Константы аффинности антител slF4, si 16 и s2I19 в п реакции связывания с вирусом осповакцины составили (1,6 ± 0,3)-10 М' (1,5 ± 0,3)-107 М'1; (9,1 ± 3,8)-106 М'1, соответственно.

4. Получены пары рекомбинантных плазмидных ДНК, pCHlF4 и pCLlF4, рСНПб и рСЬПб, рСН2119 и pCL2I19, рСНЬ9 и рСЬЬ9, обеспечивающие при совместном введении в клетки НЕК293Т синтез полноразмерных антител человека, fhlF4, fh 116, fh2119 и fhb9, специфически взаимодействующих с ортопоксвирусами. Определены константы аффинности полноразмерных антител fhlF4, fh 116, fh2I19 и fhb9, которые составили (9,6 + 1,3)х108 М"1; (4,4 ± 1,9)х109 М"1; (1,5 + 0,2)х108 М'1; и (1,5± 0,2)хЮ9 М'1, соответственно.

5. Показано, что полноразмерные антитела человека fhb9 и fhlF4 обладают способностью нейтрализовать инфекционность вируса осповакцины на культуре клеток УегоЕб. В случае антитела fhlF4 вируснейтрализующие свойства проявлялись только при совместной инкубации с сывороткой невакцинированного донора.

БЛАГОДАРНОСТИ

Автор хотел бы выразить огромную благодарность и признательность коллегам:

- Ирине Гавриловой и Алле Качко за неустанное секвенирование приносимых фрагментов; Евгению Федоровичу Беланову, Николаю Ивановичу Бормотову и Зинаиде Федоровне Киселевой за предоставленные вирусы и помощь в организации экспериментов по нейтрализации; Александру Николаевичу Швалову за безотказную помощь в обсчете констант и «войне» с тяжелым нравом компьютера.

Хотелось бы поблагодарить рецензентов Галину Вадимовну Кочневу и Валерия Борисовича Локтева за критические высказывания и ценные замечания. Также хотелось бы выразить благодарность Александру Алексеевичу Ильичеву за общее руководство.

Огромная благодарность москвичам Людмиле Николаевне Шингаровой и Ирине Владимировне Мерсияновой за помощь в конструировании и экспрессии полноразмерных антител. 4

Большая благодарность Виктории Дубровской и Ольге Вороновой за ценные советы, критические замечания и обсуждение работы; Льву Леванову за постоянную помощь при выполнении работы и неуёмное чувство юмора, позволявшее проще относится к случавшимся неудачам. Искренняя и теплая благодарность Ирине Викторовне Матяш и Татьяне Батановой за обучение, советы и неоценимую помощь в работе. Особая благодарность и признательность Александру Алексеевичу Гуськову и Елене Владимировне Сокуновой за доверие, бережное отношение и огромную помощь в работе, а также благодарность всей «шестерочной» команде нашей лаборатории Евгению Бовшику, Елене Жираковской, Вере Морозовой, Наталье Денисовой и Нине Викторовне Тикуновой, с кем так много и в то же время, как никогда, вдохновенно и с энтузиазмом мы работали. Особую благодарность хотелось бы выразить научному руководителю Нине Викторовне Тикуновой за руководство, организацию работы, тепреливое вычитывание диссертации и ценные замечания.

И наконец, самые теплые слова благодарности моим родителям и младшей сестренке, чья неизменная поддержка помогла мне довести до конца эту работу.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Очевидно, что в настоящее время существует огромное количество технологий по созданию рекомбинантных иммуноглобулинов наиболее близких по своим характеристикам и свойствам к природным молекулам. Существует мнение, что практически невозможно определить, какая из существующих на сегодняшний день технологий является предпочтительной, и выбор технологии определяется лишь финансовыми и техническими возможностями исследователя.

Преимущества технологии фагового дисплея по сравнению с дргугими технологиями получения МКА заключается в том, что выбор антигенов к которому будут получены специфические антитела не ограничивается только набором тех антигенов, которые могут использованы для иммунизации человека или животных. Кроме этого, разнообразие стратегий создания комбинаторных библиотек и отбора специфических клонов позволяет получать антитела с желаемыми иммунологическими и биологическими свойствами.

Получение коллекций рекомбинантных антител против различных вирусных патогенов, в том числе и ортопоксвирусов является важным элементом в разработке иммунопрофилактических и иммунотерапевгических противовирусных препаратов. Кроме этого противовирусные антитела могут найти применение для изучения механизмов патогенеза и формирования гуморального ответа в организме человека.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 2.1 РЕАКТИВЫ И МАТЕРИАЛЫ 2.1.1. Реактивы

Реактивы, использованные для электрофореза:

Акриламид, бромистый этидий, додецилсульфат натрия (ДСН), ксиленцианол, Кумасси R-250, Ы,Ы-метиленбисакриламид, персульфат аммония, N,N,N\N'-тетраметилэтилендиамид (TEMED), Трис(гидроксиметил)аминометан, этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТА), глицин, бромфеноловый синий, 2-меркаптоэтанол, агароза ("Sigma", США).

Реактивы, использованные для культивирования Escherichia coli и амплификации комбинаторных библиотек:

Агар-агар и бактотриптон ("Difco", США); дрожжевой экстракт ("Fluka", Швеция); полиэтиленгликоль (ПЭГ) 6000-8000 и глицерин ("Sigma", США). Реактивы для иммуноанализа:

Бычий сывороточный альбумин (БСА), пара-нитрофенилфосфат (pNPP); анти-С-тус антитела, анти-кроличий и анти-мышиный конъюгаты со щелочной фосфатазой ("ICN", США); пунцовый С, нитро-тетразолиевый голубой (NBT), нитроцеллюлоза, Tween-20 (Твин-20), конъюгат антител человека - IgG со щелочной фосфатазой ("Sigma", США); 5-бромо-4-хлор-3-индолил-фосфат (BSIP) ("Roche", Франция); поликлональные анти-М13 антитела сыворотки кролика были любезно предоставлены Белановым Е.Ф., к.м.н., зав. лабораторией общей вирусологии ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора, Кольцово.

Реактивы, использованные для культивирования эукариотических клеток и процедуры трансфекции:

Культуральная среда DMEM ("Gibcp", США), трипсин ("Sigma", США) фетальная бычья сыворотка ("Gibco" США) или фетальная бычья сыворотка с низким содержанием иммуноглобулинов ("HyClone" США), «Липофектамин 2000» и «Липофектамин» с «Плюс реагентом» ("Invitrogen", США). Реактивы, использованные для аффинной очистки антител:

Ni-NTA Qiagen Kit» ("Qiagen", США), Protein G Sepharose 4 Fast Flow ("Amersham", США)

Наборы, использованные для выделения плазмидной ДНК и элюции фрагментов ДНК:

QIAquick Gel Extraction Kit», «QIAquick PCR Purification Kit», «Plasmid Mini (Maxi) Kit» ("Qiagen", США); наборы для выделения плазмидной ДНК "EndoFree" ("Promega", США).

Прочие реактивы:

Азид натрия, диметилсульфоксид (DMSO), дезоксину кл еотид-5' -трифосфаты (dNTP), 3-[Ъ1-морфолино]пропансульфоновая кислота (MOPS), триэтиламин ("Sigma", США); кристаллический фиолетовый ("ICN", США); 100 bp и lkb ДНК маркеры («СибЭнзим», Россия).

Все остальные использованные реактивы были произведены в "Реахим", СССР, или «Союзхимпром», Россия, и имели квалификацию не ниже «ОСЧ» и «ХЧ».

2.1.2. Растворы

АР буфер: 100 мМ NaCl, 5 мМ MgCl2, 100 мМ Трис-HCl, pH 9.5.

Буфер (хб) для нанесения проб ДНК на гель: 0.25% бромфеноловый синий, 0.25% ксиленцианол, 30% глицерин.

Буфер лизирующий для нанесения белковых проб на полиакриламидный гель: 100 мМ Трис-HCl, pH 6.8, 3% 2-меркаптоэтанол, 4% ДСН, 0.2% бромфеноловый синий, 20%-ный глицерин.

Буфер ТЕ - 10 мМ Трис-HCl, pH 7.4, 1 мМ ЭДТА.

Буфер трис-глициновый (хЮ): 25 мМ трис pH 8.3, 192 мМ глицин, 0.1%

ДСН.

Буфер трис-ацетатный (ТАЕ): 20 мМ ацетат натрия, 1 мМ ЭДТА, 40 мМ трис, pH 8.0 доводили ледяной уксусной кислотой.

Буфер STE -10 мМ Трис-HCl, pH 8.0, 1 мМ ЭДТА, 0.1 М NaCl.

ПЭГ/NaCl: 20% ПЭГ, 2.5 М NaCl.

Фосфатно-солевой буферный раствор (ФСБР): 100 мМ NaCl, 33 мМ Na2HP04,17 мМ NaH2P04x2H20, pH 7.2.

Буфер для переноса белка из акриламидного геля на нитроцеллюлозную мембрану: 39 мМ глицин, 48 мМ Трис-HCl, 0.037% ДСН, 20% метанол.

2.1.3. Ферменты

Эндонуклеазы рестрикции ApaLI, NotI, Sfil, Nhel, Apal, XmaJI, Xhol ("Fermentas", Литва), BamHI, BgUI, BstEII, EcoRI, HaelII, Hindlll, HincII, Kpnl, Mspl, PstI, PvuII, SacI ("Сибэнзим", Россия).

Полинуклеотидкиназа фага Т4, ДНК-лигаза фага Т4, Pfu ДНК полимераза Taq ДНК полимераза ("Fermentas", Литва), Taq ДНК полимераза ("Сибэнзим", Россия).

2.1.4. Олигонуклеотиды, использованные в данной работе представлены в таблице 4.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Юн, Татьяна Эверестовна, 2007 год

1. Галактионов В.Г. Иммунология. Издательство "РИЦ МКД" Москва, 2000 г., 488 с.

2. Глик Б., Пастернак Дж. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение. Издательство "Мир" Москва, 2002 г., 589 с.

3. Дубровская В.В. и Тикунова Н.В. Получение одноцепочечных антител человека к основному иммунодоминантному белку ортопоксвирусов. // Вестник НГУ. 2006. - V.4 - .100-105.

4. Льюин Б. Гены. Издательство "Мир" Москва, 1987 г., 544 с.

5. Маренникова С.С., Щелкунов СН Патогенные для человека ортопоксвирусы. Издательство "КМК Scientific Press Ltd" Москва, 1998 г., 386 с.

6. Морозова В.В. Получение и характеризация рекомбинантных антител человека против ортопоксвирусов. автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук. - 2005.

7. Пол У. Иммунология. Издательство "Мир" Москва, 1989 г.

8. Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д. Иммунология. Издательство "Мир" -Москва, 2000 г., 592 с.

9. П.Фрейдлин И.С., Тотолян A.A. Клетки иммунной системы. Издательство "Наука" Санкт-Петербург, 2001 г. - 456 с.

10. Adair J.R. Engineering antibodies for therapy. // Immunol. Rev. 1992. - V.130 - p.5-40.

11. Aliev Т.К., Panina A.A., Petrovskaya L.E., Shingarova L.N., Radko V.B., Nedospasov S.A., Korobko V.G., Zavyalova V.P. and Zavyalov V.P. // Clinical Immunology. 2002. - V. 103 - 90.

12. Altschul S.F., Madden T.L., Schaffer A.A., Zhang J., Zhang Z., Miller W. and Lipman D.J. Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs. // Nucleic Acids Res. 1997. - V.25 - p.3389-3402.

13. Baca M., Presta L.G., O'Connor S.J. and Wells J.A. Antibody humanization using monovalent phage display. // J; Biol. Chem. 1997. - V.272 - p. 1067810684.

14. Baert F., Noman M., Vermeire S., Van Assche G., D1 Haens G., Carbonez A. and Rutgeerts P. Influence of immunogenicity on the long-term efficacy of infliximab in Crohn's disease. // N. Engl. J. Med. 2003. - V.348 - p.601-608.

15. Barbas C.F., III, Kang A.S., Lerner R.A. and Benkovic S.J. Assembly of combinatorial antibody libraries on phage surfaces: the gene III site. // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. -1991. V.88 - p.7978-7982.

16. Batra S.K., Jain M., Wittel U.A., Chauhan S.C. and Colcher D. Pharmacokinetics and biodistribution of genetically engineered antibodies. // Curr. Opin. Biotechnol. 2002. - V.13 - p.603-608.

17. Berger M., Shankar V. and Vafai A. Therapeutic applications of monoclonal antibodies. // Am. J. Med. Sci. 2002. - V.324 - p. 14-30.

18. Bianchi A.A. and McGrew J.T. High-level expression of full-length antibodies using trans-complementing expression vectors. // Biotechnol. Bioeng. 2003. -V.84 - p.439-444.

19. Birnboim H.C. and Doly J. A rapid alkaline extraction procedure for screening recombinant plasmid DNA. // Nucleic Acids Res. 1979. - V.7 - p. 1513-1523.

20. Blazek D. and Celer V. The production and application of single-chain antibody fragments. // Folia Microbiol. (Praha). 2003. - V.48 - p.687-698.

21. Booy E.P., Johar D., Maddika S., Pirzada H., Sahib M.M., Gehrke I., Loewen S., Louis S.F., Kadkhoda K., Mowat M. and Los M. Monoclonal and bispecific antibodies as novel therapeutics. // Arch. Immunol. Ther. Exp. (Warsz.). 2006. - V.54-p.85-101.

22. Boss M.A., Kenten J.H., Wood C.R. and Emtage J.S. Assembly of functional antibodies from immunoglobulin heavy and light chains synthesised in E. coli. // Nucleic Acids Res. 1984. - V.12 - p.3791-3806.

23. Breedveld F.C. Therapeutic monoclonal antibodies. // Lancet. 2000. - V.355 -p.735-740.

24. Chothia C., Gelfand I. and Kister A. Structural determinants in the sequences of immunoglobulin variable domain. // J. Mol. Biol. 1998. - V.278 - p.457-479.

25. Chothia C., Lesk A.M., Tramontano A., Levitt M., Smith-Gill S.J., Air G., Sheriff S., Padlan E.A., Davies D., Tulip W.R. and . Conformations of immunoglobulin hypervariable regions. // Nature. 1989. - V.342 - p.877-883.

26. Cox J.P., Tomlinson I.M. and Winter G. A directory of human germ-line V kappa segments reveals a strong bias in their usage. // Eur. J. Immunol. 1994. -V.24 - p.827-836.

27. Davies A., Greene A., Lullau E. and Abbott W.M. Optimisation and evaluation of a high-throughput mammalian protein expression system. // Protein Expr. Purif. 2005.-V.42-p.l 11-121.

28. Dick J.E., Lapidot T. and Pflumio F. Transplantation of normal and leukemic human bone marrow into immune-deficient mice: development of animal models for human hematopoiesis. // Immunol. Rev. -1991. V. 124 - p.25-43.

29. Dotto G.P., Horiuchi K. and Zinder N.D. The functional origin of bacteriophage fl DNA replication. Its signals and domains. // J. Mol. Biol. 1984. - V.172 -p.507-521.

30. Durocher Y., Perret S. and Kamen A. High-level and high-throughput recombinant protein production by transient transfection of suspension-growing human 293-EBNA1 cells. // Nucleic Acids Res. 2002. - V.30 - E9.

31. Esposito J.J., Obijeski J.F. and Nakano J.H. The virion and soluble antigen proteins of variola, monkeypox, and vaccinia viruses. // J. Med. Virol. 1977. -V.l -p.95-110.

32. Ewert S., Huber T., Honegger A. and Pluckthun A. Biophysical properties of human antibody variable domains. // J. Mol. Biol. 2003. - V.325 - p.531-553.

33. Finn G.K., Kurz B.W., Cheng R.Z. and Shmookler Reis R.J. Homologous plasmid recombination is elevated in immortally transformed cells. // Mol. Cell Biol. 1989,-V.9-p.4009-4017.

34. Fishwild D.M., Hudson D.V., Deshpande U. and Kung A.H. Differential effects of administration of a human anti-CD4 monoclonal antibody, HM6G, in nonhuman primates. // Clin. Immunol. 1999. - V.92 - p. 138-152.

35. Foote J. and Winter G. Antibody framework residues affecting the conformation of the hypervariable loops. // J. Mol. Biol. 1992. - V.224 - p.487-499.

36. Forrer P., Jung S. and Pluckthun A. Beyond binding: using phage display to select for structure, folding and enzymatic activity in proteins. // Curr. Opin. Struct. Biol. 1999. - V.9 - p.514-520.

37. Franchini M. Rituximab in the treatment of adult acquired hemophilia A: A systematic review. // Crit Rev. Oncol. Hematol. 2007.

38. Frazer J.K. and J.D.Capra. Immunoglobulins: structure and function.- 1999.

39. Galili U., Rachmilewitz E.A., Peleg A. and Flechner I. A unique natural human IgG antibody with anti-alpha-galactosyl specificity. // J. Exp. Med. 1984. -V.160 - p.1519-1531.

40. Gavilondo J.V. and Larrick J.W. Antibody engineering at the millennium. // Biotechniques. 2000. - V.29 - p.128-6, 138.

41. Gelfand I.M. and Kister A.E. Analysis of the relation between the sequence and secondary and three-dimensional structures of immunoglobulin molecules. // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 1995. - V.92 - p.10884-10888.

42. Gispen R. and Brand-Saathof B. Three specific antigens produced in vaccinia, variola, and monkeypox infections. // J. Infect. Dis. 1974. - V. 129 - p.289-295.

43. Goldman J.P., Blundell M.P., Lopes L., Kinnon C., Di Santo J.P. and Thrasher A.J. Enhanced human cell engraftment in mice deficient in RAG2 and the common cytokine receptor gamma chain. // Br. J. Haematol. 1998. - V.103 -p.335-342.

44. Goldsby R.A., Kuby J, Osborne BA Immunology. "W H Freeman & Co", 2003. 556 c.

45. Goncalves L.F., Ribeiro A.R., Berdichevski R., Joelsons G., Proenca M.C. and Manfro R.C. Basiliximab improves graft survival in renal transplant recipients with delayed graft function. // Transplant. Proc. 2007. - V.39 - p.437-438.

46. Graham F.L. and van der Eb A.J. A new technique for the assay of infectivity of human adenovirus 5 DNA. // Virology. 1973. - V.52 - p.456-467.

47. Hanes J. and Pluckthun A. In vitro selection and evolution of functional proteins by using ribosome display. // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 1997. - V.94 -p.4937-4942.

48. Hoogenboom H.R. Overview of antibody phage-display technology and its applications. // Methods Mol. Biol. 2002. - V.178 - p.1-37.

49. Ichihashi Y. and Oie M. Neutralizing epitope on penetration protein of vaccinia virus. // Virology. 1996. - V.220 - p.491-494.

50. Ilan E., Eren R., Lubin I., Nussbaum O., Zauberman A. and Dagan S. The Trimera mouse: a system for generating human monoclonal antibodies and modeling human diseases. // Curr. Opin. Mol. Ther. 2002. - V.4 - p. 102-109.

51. Jakobovits A. Production of fully human antibodies by transgenic mice. // Curr. Opin. Biotechnol. 1995. - V.6 - p.561-566.

52. Kamel-Reid S. and Dick J.E. Engraftment of immune-deficient mice with human hematopoietic stem cells. // Science. 1988. - V.242 - p. 1706-1709.

53. Karpas A., Dremucheva A. and Czepulkowski B.H. A human myeloma cell line suitable for the generation of human monoclonal antibodies. // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 2001. - V.98 - p.1799-1804.

54. Karpas A., Harder L., Czepulkowski B., Bloxham D., Saward R., Dremucheva A. and Siebert R. Studies of four new human myeloma cell lines. // Leuk. Lymphoma. 2005. - V.46 - p.101-112.

55. Kellermann S.A. and Green L.L. Antibody discovery: the use of transgenic mice to generate human monoclonal antibodies for therapeutics. // Curr. Opin. Biotechnol. 2002. - V.13 - p.593-597.

56. Kettleborough C.A., Saldanha J., Heath V.J., Morrison C.J. and Bendig M.M. Humanization of a mouse monoclonal antibody by CDR-grafting: the importance of framework residues on loop conformation. // Protein Eng. 1991. - V.4 - p.773-783.

57. Kretzschmar T. and von Ruden T. Antibody discovery: phage display. // Curr. Opin. Biotechnol. 2002. - V.13 - p.598-602.

58. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. //Nature. 1970. - V.227 - p.680-685.

59. Laffly E. and Sodoyer R. Monoclonal and recombinant antibodies, 30 years after. // Hum. Antibodies. 2005. - V.14 - p.33-55.

60. Lee B.M., Oh C.K., Jin S.H., Kim J.H., Kim S J., Kim H. and Shin G.T. Effect of basiliximab on renal allograft rejection within 1 year after transplantation. // Transplant. Proc. 2006. - V.38 - p.2025-2028.

61. Lee C.V., Liang W.C., Dennis M.S., Eigenbrot C., Sidhu S.S. and Fuh G. High-affinity human antibodies from phage-displayed synthetic Fab libraries with a single framework scaffold. // J. Mol. Biol. 2004. - V.340 - p. 1073-1093.

62. Le Hir H., Nott A. and Morre M.J. How introns influence and enhance eukaryotic gene expression. // Trends. Biochem. Sci. 2003. - V.28. - p.215-220

63. Lewis A.P., Barber K.A., Cooper H.J., Sims M.J., Worden J. and Crowe J.S. Cloning and sequence analysis of kappa and gamma cynomolgus monkey immunoglobulin cDNAs. // Dev. Comp Immunol. 1993. - V.17 - p.549-560.

64. Liu A.Y., Robinson R.R., Hellstrom K.E., Murray E.D., Jr., Chang C.P. and Hellstrom I. Chimeric mouse-human IgGl antibody that can mediate lysis of cancer cells. // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 1987. - V.84 - p.3439-3443.

65. Lo K.M., Sudo Y., Chen J., Li Y., Lan Y., Kong S.M., Chen L., An Q. and Gillies S.D. High level expression and secretion of Fc-X fusion proteins in mammalian cells. // Protein Eng. 1998. - V.l 1 - p.495-500.

66. Markides, SC. Components of vectors for gene transfer and expression in mammalian cells. // Protein Expr. Purif. 1999. - V. 17. - p. 183-202.

67. Matsuda F., Ishii K., Bourvagnet P., Kuma K., Hayashida H., Miyata T. and Honjo T. The complete nucleotide sequence of the human immunoglobulin heavy chain variable region locus. //J. Exp. Med. 1998. - V.l 88 - p.2151-2162.

68. McCafferty J., Griffiths A.D., Winter G. and Chiswell D.J. Phage antibodies: filamentous phage displaying antibody variable domains. // Nature. 1990. -V.348 - p.552-554.

69. Mendez M.J., Green L.L., Corvalan J.R., Jia X.C., Maynard-Currie C.E., Yang X.D., Gallo M.L., Louie D.M., Lee D.V., Erickson K.L., Luna J., Roy C.M.,

70. Mian I.S., Bradwell A.R. and Olson A.J. Structure, function and properties of antibody binding sites. //J. Mol. Biol. -1991. V.217 - p.133-151.

71. Mosier D.E., Gulizia R.J., Baird S.M. and Wilson D.B. Transfer of a functional human immune system to mice with severe combined immunodeficiency. // Nature. 1988. - V.335 - p.256-259.

72. Nilsson K. Characteristics of established myeloma and lymphoblastoid cell lines derived from an E myeloma patient: a comparative study. // Int. J. Cancer. -1971. V.7 - p.380-396.

73. Nissim A., Hoogenboom H.R., Tomlinson I.M., Flynn G., Midgley C., Lane D. and Winter G. Antibody fragments from a 'single pot' phage display library as immunochemical reagents. // EMBO J. 1994. - V.13 - p.692-698.

74. Oettinger M.A., Schatz D.G., Gorka C. and Baltimore D. RAG-1 and RAG-2, adjacent genes that synergistically activate V(D)J recombination. // Science. -1990.-V.248-p.1517-1523.

75. Padlan E.A. A possible procedure for reducing the immunogenicity of antibody variable domains while preserving their ligand-binding properties. // Mol. Immunol. 1991. - V.28 - p.489-498. •

76. Page M.J. and Sydenham M.A. High level expression of the humanized monoclonal antibody Campath-IH in Chinese hamster ovary cells. // Biotechnology (N. Y.). -1991. V.9 - p.64-68.

77. Pallares N., Frippiat J.P., Giudicelli V. and Lefranc M.P. The human immunoglobulin lambda variable (IGLV) genes and joining (IGLJ) segments. // Exp. Clin. Immunogenet. 1998. - V.15 - p.8-18.

78. Pan-Hammarstrom Q., Zhao Y. and Hammarstrom L. Class switch recombination: a comparison between mouse and human. // Adv. Immunol. -2007,- V.93 p. 1-61.

79. Park S.S., Kim J., Brandts J.F. and Hong H.J. Stability of murine, chimeric and humanized antibodies against pre-S2 surface antigen of hepatitis B virus. // Biologicals. 2003. - V.31 - p.295-302.

80. Parmley S.F. and Smith G.P. Antibody-selectable filamentous fd phage vectors: affinity purification of target genes. // Gene. 1988. - V.73 - p.305-318.

81. Pavlou A.K. and Belsey M.J. The therapeutic antibodies market to 2008. // Eur. J. Pharm. Biopharm. 2005. - V.59 - p.389-396.

82. Persic L., Roberts A., Wilton J., Cattaneo A., Bradbury A. and Hoogenboom H.R. An integrated vector system for the eukaryotic expression of antibodies or their fragments after selection from phage display libraries. // Gene. 1997. -V.187 -p.9-18.

83. Pescovitz M.D. Rituximab, an anti-cd20 monoclonal antibody: history and mechanism of action. // Am. J. Transplant. 2006. - V.6 - p.859-866.

84. Presta L.G. Engineering of therapeutic antibodies to minimize immunogenicity and optimize function. //Adv. DrugDeliv. Rev. 2006. - V.58 - p.640-656.

85. Ramsden D.A., McBlane J.F., van Gent D.C. and Gellert M. Distinct DNA sequence and structure requirements for the two steps of V(D)J recombination signal cleavage.//EMBO J. 1996. - V.15 - p.3197-3206.

86. Rastetter W., Molina A. and White C.A. Rituximab: expanding role in therapy for lymphomas and autoimmune diseases. // Annu. Rev. Med. 2004. - V.55 -p.477-503.

87. Reff M.E. High-level production of recombinant immunoglobulins in mammalian cells. // Curr. Opin. Biotechnol. 1993. - V.4 - p.573-576.

88. Reichert J.M., Rosensweig C.J., Faden L.B. and Dewitz M.C. Monoclonal antibody successes in the clinic. //Nat. Biotechnol. 2005. - V.23 - p. 1073-1078.

89. Reichmann L., Clark M., Waldmann H. and Winter G. Reshaping human antibodies for therapy. //Nature. 1988. - p.323-327.

90. Roder J.C., Cole S.P. and Kozbor D. The EBV-hybridoma technique. // Methods Enzymol. 1986. - V. 121 - p. 140-167.

91. Schmaljohn C., Cui Y., Kerby S., Pennock D. and Spik K. Production and characterization of human monoclonal antibody Fab fragments to vaccinia virus from a phage-display combinatorial library. // Virology. 1999. - V.258 - p.l 89200.

92. Silverton E.W., Navia M.A. and Davies D.R. Three-dimensional structure of an intact human immunoglobulin. // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 1977. -V.74-p.5140-5144.

93. Smith D.K. and Xue H. Sequence profiles of immunoglobulin and immunoglobulin-like domains. // J. Mol. Biol. 1997. - V.274 - p.530-545.

94. Smith G.P. Filamentous fusion phage: novel expression vectors that display cloned antigens on the virion surface. // Science. 1985. - V.228 - p. 1315-1317.

95. Smith G.P. and Scott J.K. Libraries of peptides and proteins displayed on filamentous phage. // Methods Enzymol. 1993. - V.217 - p.228-257.

96. Spada S., Krebber C. and Pluckthun A. Selectively infective phages (SIP). // Biol. Chem. 1997. - V.378 - p.445-456.

97. Tada H., Kurokawa T., Seita T., Watanabe T. and Iwasa S. Expression and characterization of a chimeric bispecific antibody against fibrin and against urokinase-type plasminogen activator. // J. Biotechnol. 1994. - V.33 - p. 157174.

98. Thomas P. and Smart T.G. HEK293 cell line: a vehicle for the expression of recombinant proteins. // J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 2005. - V.51 - p. 187200.

99. Tomlinson I.M., Cox J.P., Gherardi E., Lesk A.M. and Chothia C. The structural repertoire of the human V kappa domain. // EMBO J. 1995. - V.14 -p.4628-4638.

100. Tomlinson I.M., Walter G., Marks J.D., Llewelyn M.B. and Winter G. The repertoire of human germline VH sequences reveals about fifty groups of VH segments with different hypervariable loops. // J. Mol. Biol. 1992. - V.227 -p.776-798.

101. Trikha M., Zhou Z., Timar J., Raso E., Kennel M., Emmell E. and Nakada M.T. Multiple roles for platelet GPIIb/IIIa and alphavbeta3 integrins in tumor growth, angiogenesis, and metastasis. // Cancer Res. 2002. - V.62 - p.2824-2833.

102. Trill J.J., Shatzman A.R. and Ganguly S. Production of monoclonal antibodies in COS and CHO cells. // Curr. Opin. Biotechnol. 1995. - V.6 - p.553-560.

103. Udey J.A. and Blomberg B. Human lambda light chain locus: organization and DNA sequences of three genomic J regions. // Immunogenetics. 1987. - V.25 -p.63-70.

104. Umana P., Jean-Mairet J., Moudry R., Amstutz H. and Bailey J.E. Engineered glycoforms of an antineuroblastoma IgGl with optimized antibody-dependent cellular cytotoxic activity. // Nat. Biotechnol. 1999. - V. 17 - p. 176-180.

105. Vaisbourd M., Ignatovich 0., Dremucheva A., Karpas A. and Winter G. Molecular characterization of human monoclonal antibodies derived from fusions of tonsil lymphocytes with a human myeloma cell line. // Hybrid. Hybridomics. 2001. - V.20 - p.287-292.

106. Williams S.C., Frippiat J.P., Tomlinson I.M., Ignatovich O., Lefranc M.P. and Winter G. Sequence and evolution of the human germline V lambda repertoire. // J. Mol. Biol. 1996. - V.264 - p.220-232.

107. Winter G., Griffiths A.D., Hawkins R.E. and Hoogenboom H.R. Making antibodies by phage display technology. // Annu. Rev. Immunol. 1994. - V.12 -p.433-455.

108. Wolffe E.J., Vijaya S. and Moss B. A myristylated membrane protein encoded by the vaccinia virus L1R open reading frame is the target of potent neutralizing monoclonal antibodies. //Virology. 1995. - V.211 - p.53-63.

109. Wood C.R., Dorner A.J., Morris G.E., Alderman E.M., Wilson D., O'Hara R.M., Jr. and Kaufman R.J. High level synthesis of immunoglobulins in Chinese hamster ovary cells. //J. Immunol. 1990. - V.145 -p.3011-3016.

110. Wright A. and Morrison S.L. Effect of glycosylation on antibody function: implications for genetic engineering. // Trends Biotechnol. 1997. - V.l5 - p.26-32.

111. Wright A., Tao M.H., Kabat E.A. and Morrison S.L. Antibody variable region glycosylation: position effects on antigen binding and carbohydrate structure. // EMBO J. 1991. - V.10 - p.2717-2723.

112. Wurm F.M. Production of recombinant protein therapeutics in cultivated mammalian cells. //Nat. Biotechnol. 2004. - V.22 - p. 1393-1398.

113. Xiong H., Ran Y., Xing J., Yang X., Li Y. and Chen Z. Expression vectors for human-mouse chimeric antibodies. // J. Biochem. Mol. Biol. 2005. - V.38 -p.414-419.