Получение и исследование лактоферрина человека, синтезируемого с молоком трансгенных мышей тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.03, кандидат биологических наук Дейкин, Алексей Васильевич

• Дейкин, Алексей Васильевич
• кандидат биологических наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Дейкин, Алексей Васильевич

Введение.

1. Обзор литературы.

1.1. Трансгенные животные. Способы получения и использования.

1.2. Лактоферрин. Структура и функции.

1.3. Перспективы и актуальность темы диссертации.

2. Материалы и методы исследований.

2.1. Материалы.

2.2. Методы.

3. Результаты и обсуждение.

3.1. Получение первичных трансгенных мышей.

3.2. Тканеспецифичность экспрессии трансгена.

3.3. Передача трансгена в ряду поколений трансгенных мышей.

3.4. Продукция рекомбинантного лактоферрина человека с молоком первичных трансгенных самок и дочерей от первичных трансгенных самцов мыши.

3.5. Животные с необычно высоким уровнем продукции рекомбинантного лактоферрина человека с молоком.

3.6. Продукция рекомбинантного лактоферрина человека в поколениях трансгенных по гену лактоферрина человека мышей в зависимости от линии, конструкции, копийности встроившегося трансгена.

3.7. Продукция рекомбинантного лактоферрина человека с молоком трансгенных самок мыши в течение периода лактации.

3.8. Физико-химические и биологические свойства рекомбинантного лактоферрина человека из молока трансгенных мышей.

3.9. Патоморфологический и гистологический анализ трансгенных мышей.

Выводы.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Получение и исследование лактоферрина человека, синтезируемого с молоком трансгенных мышей»

В современной медицине большое внимание уделяется биологически активным белкам человека как лекарственным средствам. Такие белки высокоэффективны и биологически безопасны. К их числу относятся различные гормоны, ферменты, факторы свёртываемости крови, роста тканей и др. Существенным препятствием на пути развития новой области фармацевтики является практическая невозможность получения необходимых белков из жидкостей и тканей самого человека в промышленных масштабах. В связи с этим в последние десятилетия для получения лекарственных белков человека использовались биотехнологические методы, главным образом, микробный синтез. В качестве продуцентов лекарственных белков человека также используют водоросли, высшие растения, грибы. Таким путём были получены инсулин, интерфероны, некоторые факторы свёртываемости крови и ряд иммуномодуляторов. К сожалению, ни одна из этих биотехнологических систем не смогла в полной мере обеспечить идентичность рекомбинантных белков человека природным, в частности, необходимые посттрансляционные модификации структуры белка. Крайне сложным оказался процесс очистки таких рекомбинантных белков. Их применение нередко сопровождалось аллергическими реакциями у пациентов. Кроме того, такое производство лекарственных белков человека оказалось экологически проблемным. В ряде стран оно постепенно выводится из хозяйственного обращения. Проблему получения рекомбинантных белков человека пытаются решить с использованием культивируемых соматических клеток, однако этот путь длителен и дорогостоящ.

В связи с этим возникла идея использовать в качестве биореакторов лекарственных белков человека трансгенных сельскохозяйственных животных, в частности, продуцирующих эти белки с молоком. Исследования в этом направлении широким фронтом ведутся в ряде индустриально развитых стран. В разработке находятся более 50 лекарственных белков 3 человека, для одних из которых получены трансгенные животные, для других проводятся доклинические или клинические испытания.

Несмотря на отдельные практические достижения, проблема получения лекарственных белков человека с использованием трансгенных животных нуждается в глубокой научной проработке. В числе её актуальных вопросов находится генное конструирование, технология получения трансгенных животных, обеспечение экспрессии генов интереса и передача этого признака в ряду поколений, получение промышленных стад животных-продуцентов.

Цель работы:

Получение и исследование ключевого белка человека, обеспечивающего антибактериальную защиту детей раннего возраста - лактоферрина из молока трансгенных мышей, выбор оптимальных генных конструкций, обеспечивающих максимальную продукцию полноценного лактоферрина человека с молоком трансгенных животных и передачу рекомбинантного гена последующим поколениям при сохранении здоровья животных-продуцентов.

Задачи:

1. Получить первичных трансгенных по различным конструкциям с геном лактоферрина человека мышей.

2. Выбрать генную конструкцию, обеспечивающую наибольшую продукцию рекомбинантного лактоферрина человека с молоком трансгенных мышей.

3. Проследить передачу трансгена в ряду поколений животных.

4. Определить динамику продукции рекомбинантного лактоферрина человека на протяжении периода лактации.

5. Определить соответствие рекомбинантного лактоферрина к человека природному по физико-химическим и биологическим свойствам.

6. Определить влияние трансгена лактоферрина человека на состояние здоровья трансгенных мышей.

7. Определить перспективность получения первичных трансгенных сельскохозяйственных животных — продуцентов рекомбинантного лактоферрина человека — на основе исследованных генетических конструкций.

Новизна и достоверность предложенных методов и решений материалов диссертационной работы

Установлено, что выбранные генные конструкции обеспечивают высокий, экономически значимый уровень продукции рекомбинантного лактоферрина человека с молоком трансгенных мышей. Средний уровень продукции рекомбинантного лактоферрина человека для лучшей генной конструкции в ряду поколений трансгенных животных составил 16,7 г/л. У отдельных животных установлен высокий уровень продукции рекомбинантного лактоферрина человека с молоком до 40 г/л. В одной из линий трансгенных мышей обнаружены особи с необычно высоким уровнем продукции лактоферрина человека от 80 до 160 г/л. Определена динамика продукции рекомбинантного белка в течение периода лактации и исследована передача трансгена до 8-го поколения от первичных трансгенных животных. Для мышей, как вида многоплодных животных, установлено, что с использованием самцов и самок, трансгенных по наиболее удачным генным конструкциям, можно получить характеризующееся такими же свойствами потомство. Показано соответствие рекомбинантного лактоферрина природному по основным физико-химическим показателям и биологическим свойствам.

Практическая и научная значимость, положения, выносимые на защиту

Получены новые материалы, характеризующие экспрессию генов человека у трансгенных животных. Результаты работы реализованы при выполнении программ Союзного государства России и Беларуси

БелРосТрансген» и «БелРосТрансген-2». Усовершенствованные методы создания первичных трансгенных животных при личном участии соискателя 5 использованы при получении первичных трансгенных сельскохозяйственных животных, что привело к рождению трансгенных козлов Лак-1 и Лак-2, несущих в своём геноме ген лактоферрина человека. Популяционные исследования трансгенных мышей будут использованы при планировании создания стад трансгенных сельскохозяйственных животных -промышленных продуцентов рекомбинантных белков человека.

В процессе выполнения диссертационной работы:

• Обследовано 67 первичных трансгенных по конструкциям с геном лактоферрина человека мышей.

• Установлено, что использованные конструкции с геном лактоферрина человека обеспечивают тканеспецифичную экспрессию трансгена.

• Получено 3885 потомков первичных трансгенных мышей до 8-го поколения.

• Определён уровень продукции рекомбинантного белка в зависимости от использованной генетической конструкции, количества копий встроившегося трансгена, дня лактации и возраста лактирующей самки мышей.

• Проведено сравнение свойств рекомбинантного лактоферрина, выделенного из молока трансгенных мышей и природного белка человека.

• Определена перспектива получения на основе исследованных конструкций первичных трансгенных коз.

Апробация работы и личный вклад соискателя

Результаты работы представлены на международной конференции «Лактоферрин» (г. Ницца, Франция, 2007), «Лактоферрин» (г. Пекин, Китай, 2009) и на Российском симпозиуме «Белки и пептиды» (г. Казань, Россия, 2009).

Соискатель проанализировал литературу по теме исследования, осуществил планирование экспериментов, их научный анализ и статистическую обработку полученных результатов, которые представил в статьях и докладах на конференциях. В ходе выполнения диссертационной работы автор овладел современной технологией получения трансгенных животных, методом микроинъекции рекомбинантной ДНК в мужской пронуклеус зигот, методами культивирования эмбрионов, а также предложил ряд оригинальных, практически значимых усовершенствований в технологию вымывания и трансплантации эмбрионов животных. Соискателем созданы уникальные линии трансгенных мышей, позволившие изучить характер передачи трансгена и условия, обеспечивающие высокую продукцию рекомбинантного лактоферрина человека с молоком трансгенных животных, которые депонированы в «Трансгенбанке» ИБГ РАН.

Объём и структура диссертации

Диссертация изложена на 121 странице, состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты и их обсуждение, выводы, список литературы (228 источников). Работа содержит 8 таблиц и 31 рисунок.

Заключение диссертации по теме «Молекулярная биология», Дейкин, Алексей Васильевич

Выводы

1. Выбрана оптимальная из 9 исследованных генная конструкция, обеспечивающая наибольшую (в среднем 16,7 г/л и максимум 160,0 г/л) продукцию рекомбинантного лактоферрина человека с молоком трансгенных мышей — LTF5. Она состоит из геномной копии гена лактоферрина человека и находится под контролем (3-казеинового промотора, инсуляторов кластера Р-глобиновых генов кур.

2. Прослежена передача трансгена в ряду 8-ми поколений 3885 потомков 67 первичных трансгенных мышей. Количество трансгенных потомков в 1-ом поколении колебалось от 3,4% (линия LTF6 728) до 85,7% (линия LTF5 146), во 2-ом и последующих поколениях средний уровень передачи трансгена потомству приближался к 50% и его колебания уменьшились.

3. Установлено, что продукция рекомбинантного лактоферрина человека тканеспецифична и с 4 по 17 день лактации остаётся стабильной, находясь на уровне среднего для мыши в разные дни лактации.

4. Установлено, что рекомбинантный лактоферрин человека, выделенный из молока трансгенных мышей, аналогичен лактоферрину молочной железы женщин по физико-химическим и биологическим свойствам; некоторое отличие состоит в уровне гликозилирования рекомбинантного белка.

5. Определено, что трансген лактоферрина человека не влияет на состояние здоровья и репродуктивную способность трансгенных мышей.

6. Показана перспективность использования исследованных генетических конструкций для получения трансгенных сельскохозяйственных животных - продуцентов рекомбинантного лактоферрина человека с молоком.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Дейкин, Алексей Васильевич, 2009 год

1. Cohen SN, Chang AC, Boyer HW, Helling RB, (1973). Construction of biologically functional bacterial plasmids in vitro. Proc Natl Acad Sci USA 70: 3240-3244

2. Jaenisch R, Fan H, Croker B. (1975) Infection of preimplantation mouse embryos and of newborn mice with leukemia virus: tissue distribution of viral DNAandRNAand leukemogenesis in the adult animal Proc Natl Acad Sci USA 72: 4008-4012.

3. Waterston RH, Lindblad-Toh K, Bimey E, Rogers J, Abril JF, Agarwal P, et al. (2002). Initial sequencing and comparative analysis of the mouse genome. Nature 420: 520562

4. Hammer RE, Pursel VG, Rexroad CE, Jr., Wall RJ, Bolt DJ, Ebert KM, et al. (1985). Production of transgenic rabbits, sheep and pigs by microinjection. Nature 315: 680-683.

5. Willadsen SM, (1986). Nuclear transplantation in sheep embryos. Nature 320: 63-65.

6. Krimpenfort P, Rademakers A, Eyestone W, van der Schans A, van den Broek S, Kooiman P, et al. (1991). Generation of transgenic dairy cattle using 'in vitro' embryo production. Biotechnology (NY) 9: 844-847.

7. Wright G, Carver A, Cottom D, Reeves D, Scot A, Simons P, et al. (1991). High level expression of active human alpha-1-antitrypsin in the milk of transgenic sheep. Biotechnology (NY) 9: 830-834.

8. Muller M, Brenig B, Winnacker EL, Brem G, (1992). Transgenic pigs carrying cDNA copies encoding the murine Mxl protein which confers resistance to influenza virus infection. Gene 121: 263-270.

9. Wilmut I, Schnieke AE, McWhir J, Kind AJ, Campbell KH, (1997). Viable offspring derived from fetal and adult mammalian cells. Nature 385: 810-813.

10. Petters RM, Alexander CA, Wells KD, Collins EB, Sommer JR, Blanton MR, et al. (1997). Genetically engineered large animal model for studying cone photoreceptor survival and degeneration in retinitis pigmentosa. Nat Biotechnol 15: 965—970.

11. Cibelli JB, Stice SL, Golueke PJ, Kane JJ, Jerry J, Blackwell C, et al. (1998). Cloned transgenic calves produced from nonquiescent fetal fibroblasts. Science 280: 12561258.

12. McCreath KJ, Howcroft J, Campbell KH, Colman A, Schnieke AE, Kind AJ, (2000). Production of gene-targeted sheep by nuclear transfer from cultured somatic cells. Nature 405: 1066-1069.

13. Lazaris A, Arcidiacono S, Huang Y, Zhou JF, Duguay F, Chretien N, et al. (2002). Spider silk fibers spun from soluble recombinant silk produced in mammalian cells. Science 295: 472—476.

14. Kuroiwa Y, Kasinathan P, Matsushita H, Sathiyaselan J, Sullivan EJ, Kakitani M, et al. (2004). Sequential targeting of the genes encoding immunoglobulin- mu and prion protein in cattle. Nat Genet 36: 775-780.

15. Brophy B, Smolenski G, Wheeler T, Wells D, L'Huillier P, Laible G, (2003). Cloned transgenic cattle produce milk with higher levels of beta-casein and kappa-casein. Nat Biotechnol 21: 157-162.

16. Phelps CJ, Koike C, Vaught TD, Boone J, Wells KD, Chen SH, et al. (2003). Production of alpha 1,3-galactosyltransferase-deficient pigs. Science 299: 411—414.

17. Wall RJ, Powell AM, Paape MJ, Kerr DE, Bannerman DD, Pursel VG, (2005). Genetically enhanced cows resist intramammary Staphylococcus aureus infection. Nat Biotechnol 23: 445^151.

18. Polejaeva IA, Campbell KH, (2000). New advances in somatic cell nuclear transfer: application in transgenesis. Theriogenology 53: 117-126.

19. Chan AW, Homan EJ, Ballou LU, Burns JC, Bremel RD, (1998). Transgenic cattle produced by reverse-transcribed gene transfer in oocytes. Proc Natl Acad Sci USA 95: 14028-14033.

20. Clark J, Whitelaw B, (2003). A future for transgenic livestock. Nat Rev Genet. C)ct;4(10):825-33.

21. Brackett BG, Baranska W, Sawicki W, Koprowski H, (1971) Uptake of heterologous genome by mammalian spermatozoa and its transfer to ova through fertilization. Proc Natl Acad Sci USA 68: 353-357.

22. Maione B, Lavitrano M, Spadafora C, Kiessling AA, (1998). Sperm-mediated gene transfer in mice. Mol Reprod Dev 50: 406—409.

23. Rieth A, Pothier F, Sirard MA, (2000). Electroporation of bovine spermatozoa to carry DNA containing highly repetitive sequences into oocytes and detection of homologous recombination events. Molecular Reproduction and Development 57: 338—345.

24. Celebi C, Guillaudeux T, Auvray P, Vallet- Erdtmann V, Jegou B,( 2003). The Making of "Transgenic Spermatozoa". Biol Reprod 68: 1477—1483.

25. Nagano M, Brinster С J, Orwig KE, Ryu BY, Avarbock MR, Brinster RL, (2001). Transgenic mice produced by retroviral transduction of male germ-line stem cells. Proc Natl Acad Sci USA 98: 13090-13095.

26. Honaramooz A, Megee SO, Dobrinski I, (2002). Germ cell transplantation in pigs. Biol Reprod 66: 21-28.

27. Honaramooz A, Behboodi E, Blash S, Megee SO, Dobrinski I, (2003). Germ cell transplantation in goats. Mol Reprod Dev 64: 422-428.

28. Robertson E, Bradley A, Kuehn M, Evans M, (1986). Germ-line transmission of genes introduced into cultured pluripotential cells by retroviral vector. Nature 323: 445—448.

29. Evans MJ, Kaufman MH, (1981). Establishment in culture of pluripotential cells from mouse embryos. Nature 292: 154-156.

30. Martin GR, (1981). Isolation of a pluripotent cell line from early mouse embryos cultured in medium condiyioned by teratocarcinoma stem cells. Proc Natl Acad Sci USA 78: 7634—7638.

31. Gorodetsky, S.I. , Bremel, R. The factors of tissue-specific expression of the bovine b-casein gene.(1998) In Mammary Gland Transgenesis. Therapeutic Protein Production.ed. F.O.Castro,and J. Janne, Springer, 19-40.

32. Gorodetsky,S.I.,and Bremel, R.D. (1996) Post-transcriptional regulation of bovine b-casein gene expression. Posttranscriptional RNA processing. Keystone Symposia,28,308.

33. Shim H, Gutierrez-Adan A, Chen LR, BonDurant RH, Behboodi E, Anderson GB, (1997). Isolation of pluripotent stem cells from cultured porcine primordial germ cells. Biol Reprod 57: 1089-1095.

34. Saito S, Sawai K, Ugai H, Moriyasu S, Minamihashi A, Yamamoto Y, et al. (2003). Generation of cloned calves and transgenic chimeric embryos from bovine embryonic stemlike cells. Biochem Biophys Res Commun 309: 104—113.

35. Gordon JW, Ruddle FH, (1981). Integration and stable germ line transmission of genes injected into mouse pronuclei. Science 214: 1244—1246.

36. Palmiter RD, Brinster RL, Hammer RE, Trumbauer ME, Rosenfeld MG, Birnberg NC, Evans RM, (1982). Dramatic growth of mice that develop from eggs micro injected with metallothionein-growth hormone fusion genes. Nature 300: 611—615.

37. Nottle MB, Haskard KA, Verma PJ, Du ZT, Grupen CG, Mcllfatrick SM, et al. (2001). Effect of DNA concentration on transgenesis rates in mice and pigs. Transgenic Res 10: 523-531.

38. Keefer CL,( 2004). Production of bioproducts through the use of transgenic animal models. Anim Reprod Sci 82-83: 5-12.

39. Seidel GE, Jr., (1993). Resource requirements for transgenic livestock research. J Anim Sci 71: 26-33.

40. Kasinathan P, Knott JG, Moreira PN, Burnside AS, Jerry DJ, RobI JM, (2001). Effect of fibroblast donor cell age and cell cycle on development of bovine nuclear transfer embryos in vitro. Biol Reprod 64: 1487-1493.

41. Iguma LT, Lisauskas SF, Melo EO, Franco MM, Pivato I, Vianna GR, et al. (2005). Development of bovine embryos reconstructed by nuclear transfer of transfected and non-transfected adult fibroblast cells. Genet Mol Res 4: 55-66.

42. Melo EO, Sousa RV, Iguma LT, Franco MM, Rech EL, Rumpf R, (2005). Isolation of transfected fibroblast clones for use in nuclear transfer and transgene detection in cattle embryos. Genet Mol Res 4: 812-821.

43. Sikes ML, O'Malley BW, Jr., Finegold MJ, Ledley FD, (1994). In vivo gene transfer into rabbit thyroid follicular cells by direct DNA injection. Hum Gene Ther 5: 837— 844.

44. Williams RS, Johnston SA, Riedy M, DeVit MJ, McElligott SG, Sanford JC, (1991). Introduction of foreign genes into tissues of living mice by DNA-coated microprojectiles. Proc Natl Acad Sci USA 88: 2726-2730.

45. Grosjean F, Bertschinger M, Hacker DL, Wurm FM. (2006) Multiple glycerol shocks increase the calcium phosphate transfection of non-synchronized CHO cells. Biotechnol Lett. Nov;28(22): 1827-33. Epub 2006 Sep 29.

46. Kovesdi I, Brough DE, Bruder JT, Wickham TJ, (1997). Adenoviral vectors for gene transfer. Curr Opin Biotechnol 8: 583-589.

47. Caplen NJ, Kinrade E, Sorgi F, Gao X, Gruenert D, Geddes D, et al. (1995) In vitro liposome-mediated DNA transfection of epithelial cell lines using the cationic liposome DC-Chol/DOPE. Gene Ther 2: 603-613.

48. Oliveira RR, Carvalho DM, Lisauskas S, Mello E, Vianna GR, Dode MA, et al. (2005). Effectiveness of liposomes to transfect livestock fibroblasts. Genet Mol Res 4: 185196.

49. Schnieke AE, Kind AJ, Ritchie WA, Mycock K, Scott AR, Ritchie M, Wilmut I, et al. (1997). Human factor IX transgenic sheep produced by transfer of nuclei from transfected fetal fibroblasts. Science 278: 2130-2133.

50. Kues WA, Niemann H, (2004). The contribution of farm animals to human health. Trends Biotechnol 22: 286-294.

51. Kasinathan P, Knott JG, Wang Z, Jerry DJ, Robl JM, (2001b). Production of calves from G1 fibroblasts. Nat Biotechnol 19: 1176-1178.

52. Gibbons J, Arat S, Rzucidlo J, Miyoshi K, Waltenburg R, Respess D, et al. (2002). Enhanced survivability of cloned calves derived from roscovitine-treated adult somatic cells. Biol Reprod 66: 895-900.

53. Sullivan EJ, Kasinathan S, Kasinathan P, Robl JM, Collas P, (2004). Cloned calves from chromatin remodeled in vitro. Biol Reprod 70: 146-153.

54. Wall RJ, Kerr DE, Bondioli KR, (1997). Transgenic dairy cattle: genetic engineering on a large scale. J Dairy Sci 80: 2213-2224.

55. Miller HI, (2002). As biotech turns 20. Nat Rev Drug Discov 1: 1007-1008.

56. Dyck MK, Lacroix D, Pothier F, Sirard MA, (2003). Making recombinant proteins in animals different systems, different applications. Trends Biotechnol 21: 394-399.

57. Zbikowska HM, Soukhareva N, Behnam R, Chang R, Drews R, Lubon H, et al. (2002). The use of the uromodulin promoter to target production of recombinant proteins into urine of transgenic animals. Transgenic Res 11: 425-435.

58. Zbikowska HM, Soukhareva N, Behnam R, Lubon H, Hammond D, Soukharev S, (2002). Uromodulin promoter directs high-level expression of biologically active human alphal- antitrypsin into mouse urine. Biochem J 365: 7-11.

59. Velander WH, Johnson JL, Page RL, Russell CG, Subramanian A, Wilkins TD, et al. (1992). High-level expression of a heterologous protein in the milk of transgenic swine using the cDNA encoding human protein C. Proe Natl Acad Sci USA 89: 12003-12007.

60. Van Berkel PH, Welling MM, Geerts M, van Veen HA, Ravensbergen B, Salaheddine M, et al. (2002). Large scale production of recombinant human laetoferrin in the milk of transgenic cows. Nat Biotechnol 20: 484-487.

61. Rudolph NS, (1999). Biopharmaceutical production in transgenic livestock. Trends Biotechnol 17: 367-374.

62. Lipinski D, Jura J, Kalak R, Plawski A, Kala M, Szalata M, et al. (2003). Transgenic rabbit producing human growth hormone in milk. J Appl Genet 44: 165—174.

63. Michalak E, Lipinski D, Slomski R, (2006). Loop formation by the transgene WAP: 6 x ITishGH in transgenic rabbit fibroblast, revealed by fluorescence in situ hybridization to nuclear halos. J Appl Genet 47: 247-249.

64. Kling J. (2009)First US approval for a transgenic animal drug. Nat Biotechnol. Apr;27(4):302-4.

65. Massoud M, Attal J, Thepot D, Pointu H, Stinnakre MG, Theron MC, et al. (1996). The deleterious effects of human erythropoietin gene driven by the rabbit whey acidic protein gene promoter in transgenic rabbits. Reprod Nutr Dev 36: 555-563.

66. Ebert KM, DiTullio P, Barry CA, Schindler JE, Ayres SL, Smith ТЕ, et al. (1994). Induction of human tissue plasminogen activator in the mammary gland of transgenic goats. Biotechnology (NY) 12: 699-702.

67. Niemann H, Halter R, Carnwath JW, Herrmann D, Lemme E, Paul D, (1999). Expression of human blood clotting factor VIII in the mammary gland of transgenic sheep. Transgenic Res 8: 237-247.

68. Karatzas CN, (2003). Designer milk from transgenic clones. Nat Biotechnol 21: 138-139.

69. Karatzas CN, Turner JD, (1997). Toward altering milk composition by genetic manipulation: current status and challenges. J Dairy Sci 80: 2225-2232.

70. Kang Y, Jimenez-Flores R, Richardson T, (1986). Casein genes and genctic engineering of the caseins. Basic Life Sci 37: 95-111.

71. Stacey A, Schnieke A, Kerr M, Scott A, McKee C, Cottingham I, et al. (1995). Lactation is disrupted by alpha-lactalbumin deficiency and can be restored by human alpha-lactalbumin gene replacement in mice. Proc Natl Acad Sci USA 92: 2835-2839.

72. Jost B, Vilotte JL, Duluc I, Rodeau JL, Freund JN, (1999). Production of low-lactose milk by ectopic expression of intestinal lactase in the mouse mammary gland. Nat Biotechnol 17: 160-164.

73. Wheeler MB, (2003). Production of transgenic livestock: promise fulfilled. J Anim Sci 81: 32-37.

74. Soukka T, Tenovuo J, Lenander-Lumikari M, (1992). Fungicidal effect of human lactoferrin against Candida albicans. FEMS Microbiol Lett 69: 223-228.

75. Hasegawa K, Motsuchi W, Tanaka S, Dosako S, (1994). Inhibition with lactoferrin of in nitro infection with human herpes virus. Jpn J Med Sci Biol 47: 73-85.

76. Nuijens JH, van Berkel PH, Geerts ME, Hartevelt PP, de Boer HA, van Veen HA, Pieper FR, (1997). Characterization of recombinant human lactoferrin secreted in milk of transgenic mice. J Biol Chem 272: 8802-8807.

77. Platenburg G.J., Kootwijk E.P., Kooiman P.M., Woloshuk S.L., Nuijens J.H., Krimpenfort P.J., Pieper F.R., de Boer H.A., Strijker R., (1994) Expression of human lactoferrin in milk of transgenic mice, Transgenic research 3: 99-108.

78. Kim S.J., Lee К., Yu D., Han Y., Lee C., Nam M., Moon H., Lee K., Expression Analysis of a Bovine P-Casein/Human Lactoferrin Hybrid Gene in Transgenic Mice, The Journal of reproduction and development 43 (1997) 143-149

79. Liu Z., Zhao C., Fan В., Dai Y., Zhao Z., Wang L., Zheng M., Feng J., Chen Y., Duan Y., Li N., (2004) Variable expression of human lactoferrin gene in mice milk driven by its 90 KB upstream flanking sequences, Animal biotechnology 15: 21-31.

80. Shi G, Chen H, Wu X, Zhou Y, Liu Z, Zheng T, Huang P. (2009) A mWAP-hLF hybrid gene locus gave extremely high level expression of human lactoferrin in the milk of transgenic mice.Transgenic Res. 2009 Aug;18(4):573-82.

81. Zhang J, Li L, Cai Y, Xu X, Chen J, Wu Y, Yu H, Yu G, Liu S, Zhang A, Chen J, Cheng G. (2008) Expression of active recombinant human lactoferrin in the milk of transgenic goats.Protein Expr Purif. Feb;57(2): 127-35. Epub 2007 Nov 20.

82. Li L., Shen W., Min L., Dong H., Sun Y., Pan Q., (2006)Human lactoferrin transgenic rabbits produced efficiently using dimethylsulfoxide-sperm-mediated gene transfer, Reproduction, fertility, and development 18 : 689-695.

83. Kerr DE, Wellnitz O, (2003). Mammary expression of new genes to combat mastitis. J Anim Sci 81: 38^47.

84. Kerr DE, Plaut K, Branley AJ, Williamson CM, Lax AJ, Moore K, et al. (2001). Lysostaphin expression in mammary glands confers protection against staphylococcal infection in transgenic mice. Nat Biotechnol 19: 66-70.

85. Detwiler LA, Rubenstein R, (2000). Bovine spongiform encephalopathy: an overview. Asaio J 46: S73—79.

86. Weissmann C, Enari M, Klohn PC, Rossi D, Flechsing E, (2002). Transmission of prions. Proc Natl Acad Sci USA 99: 16378-16383.

87. Bueler H, Fischer M, Lang Y, Bluethmann H, Lipp HP, DeArmond SJ, et al. (1992). Normal development and behaviour of mice lacking the neuronal cell-surface PrP protein. Nature 356: 577-582.

88. Bueler H, Aguzzi A, Sailer A, Greiner RA, Autenried P, Aguet M, Weissmann C, (1993). Mice devoid of PrP are resistant to scrapie. Cell 73: 1339-1347.

89. Oria R., Alvarez-Hernandez X., Liceaga J. and Brock J. H. (1988) Uptake and handling of iron from transferrin, lactoferrin and immune complexes by a macrophage cell line. Biochem. J. 252: 221-225

90. Denning C, Burl S, Ainslie A, Bracken J, Dinnyes A, Fletcher J, et al. (2001). Deletion of the alpha (1,3) galactosyl transferase (GGTA1) gene and the prion protein (PrP) gene in sheep. Nat Biotechnol 19: 559-562.

91. Barthel R, Feng J, Piedrahita JA, McMurray DN, Templeton JW, Adams LG,2001) Stable transfection of the bovine NRAMP1 gene into murine RAW264.7 cells: effect on Brucella abortus survival. Infect Immun 69: 3110—3119.

92. Pursel VG, Pinkert CA, Miller KF, Bolt DJ, Campbell RG, Palmiter RD, 1989. Genetic engineering of livestock. Science 244: 1281—1288.

93. Grobet L, Martin LJ, Poncelet D, Pirottin D, Brouwers B, Riquet J, et al. (1997). A deletion in the bovine myostatin gene causes the double-muscled phenotype in cattle. Nat Genet 17: 71-74.

94. McPherron AC, Lee SJ, (1997). Double muscling in cattle due to mutations in the myostatin gene. Proc Natl Acad Sci USA 94: 12457-12461.

95. McPherron AC, Lawler AM, Lee SJ, (1997). Regulation of skeletal muscle mass in mice by a new TGF-beta superfamily member. Nature 387: 83—90.

96. Souza T, MacDougall C, Campbell BK, McNeilly AS, Baird DT, (2001). The Booroola (FecB) phenotype is associated with a mutation in the bone morphogenetic receptor type 1 В (BMPR1B) gene. J Endocrinol 169: Rl-6.

97. Juengel JL, Hudson NL, Heath DA, Smith P, Reader KL, Lawrence SB, et al.2002). Growth differentiation factor 9 and bone morphogenetic protein 15 are essential for ovarian follicular development in sheep. Biol Reprod 67: 1777—1789

98. Powell ВС, Walker SK, Bawden CS, Sivaprasad AV, Rogers GE, (1994). Transgenic sheep and wool growth: possibilities and current status. Reprod Fertil Dev 6: 615-623.

99. Auchincloss H, Jr., Sachs DH, (1998) Xenogeneic transplantation. Annu Rev Immunol 16: 433^470.

100. Diamond LE, Quinn CM, Martin MJ, Lawson J, Piatt JL, Logan JS, (2001). A human CD46 transgenic pig model system for the study of discordant xenotransplantation. Transplantation 71: 132-142.

101. Zaidi A, Schmoeckel M, Bhatti F, Waterworth P, Tolan M, Cozzi E, et al. (1998). Life-supporting pig-to-primate renal xenotransplantation using genetically modified donors. Transplantation 65: 1584-1590.

102. Zawada WM, Cibelli JB, Choi PK, Clarkson ED, Golueke PJ, Witta SE, et al.1998). Somatic cell cloned transgenic bovine neurons for transplantation in parkinsonian rats. Nat Med 4: 569-574.

103. Imaizumi T, Lankford KL, Burton WV, Fodor WL, Kocsis JD, (2000). Xenotransplantation of transgenic pig olfactory ensheathing cells promotes axonal regeneration in rat spinal cord. Nat Biotechnol 18: 949—953.

104. Patience C, Takeuchi Y, Weiss RA, (1997). Infection of human cells by an endogenous retrovirus of pigs. Nat Med 3: 282-286.

105. Patience C, Patton GS, Takeuchi Y, Weiss RA, McClure MO, Rydberg L, Breimer ME, (1998). No evidence of pig DNA or retroviral infection in patients with short-term extracorporeal connection to pig kidneys. Lancet 352: 699-701.

106. Paradis K, Langford G, Long Z, Heneine W, Sandstrom P, Switzer WM, et al.1999). Search for cross-species transmission of porcine endogenous retrovirus in patients treated with living pig tissue. The XEN 111 Study Group. Science 285: 1236-1241.

107. Wobus AM, Boheler KR, ( 2005). Embryonic stem cells: prospects for developmental biology and cell therapy. Physiol Rev 85: 635-678.

108. International Human Genome Sequencing Consortium, (2004). Finishing the euchromatic sequence of the human genome. Nature 431: 931-945.

109. Marx J, (2003). Medicine. Building better mouse models for studying cancer. Science 299: 1972-1975.

110. Draghia-Akli R, Fiorotto ML, Hill LA, Malone PB, Deaver DR, Schwartz RJ, (1999). Myogenic expression of an injectable protease-resistant growth hormone- releasing hormone augments long-term growth in pigs. Nat Biotechnol 17: 1179-1183.

111. Djojosubroto MW, Choi YS, Lee HW, Rudolph KL, (2003). Telomeres and telomerase in aging, regeneration and cancer. Mol Cells 15: 164-175.

112. Mogford JE, Liu WR, Reid R, Chiu CP, Said H, Chen SJ, et al. (2006). Adenoviral human telomerase reverse transcriptase dramatically improves ischemic wound healing without detrimental immune response in an aged rabbit model. Hum Gene Ther 17: 651-660.

113. Rudolph KL, Millard M, Bosenberg MW, DePinho RA, (2001). Telomere dysfunction and evolution of intestinal carcinoma in mice and humans. Nat Genet 28: 155— 159.

114. Cawthon RM, Smith KR, O'Brien E, Sivatchenko A, Kerber RA, (2003). Association between telomere length in blood and mortality in people aged 60 years or older. Lancet 361: 393-395.

115. Shicls PG, Kind AJ, Campbell KH, Waddington D, Wilmut I, Colman A, Schnieke AE, (1999). Analysis of telomere lengths in cloned sheep. Nature 399: 316-317.

116. Lanza RP, Cibelli JB, Blackwell C, Cristofalo VJ, Francis MK, Baerlocher GM, et al. (2000). Extension of cell life-span and telomere length in animals cloned from senescent somatic cells. Science 288: 665-669.

117. Wakayama T, Shinkai Y, Tamashiro KL, Niida H, Blanchard DC, Blanchard RJ, et al. (2000). Cloning of mice to six generations. Nature 407: 318-319.

118. Betts D, Bordignon V, Hill J, Winger Q, Westhusin M, Smith L, King W, (2001) Reprogramming of telomerase activity and rebuilding of telomere length in cloned cattle. Proc Natl Acad Sci USA 98: 1077-1082.

119. Suda O, Smith LA, d'Uscio LV, Peterson ТЕ, Katusic ZS, (2005). In vivo expression of recombinant vascular endothelial growth factor in rabbit carotid artery increases production of superoxide anion. Arterioscler Thromb Vase Biol 25: 506-511.

120. Metz-Boutigue M. H., Jolles J., Mazurier J., Schoentgen F., Legrand D., Spik G. et al. (1984) Human lactotransferrin: amino acid sequence and structural comparisons with other transferrins. Eur. J. Biochem. 145: 659-676

121. Woodbury RG, Brown JP, Yeh MY, Hellstrom I, Hellstrom KE (1980) Identification of a cell surface protein, p97, in human melanomas and certain other neoplasms. Proc Natl Acad Sci USA 77:2183-2187

122. Anderson B. F., Baker H. M., Norris G. E., Rice D. W. and Baker E. N. (1989) Structure of human lactoferrin: crystallographic structure analysis and refi nement at 2.8 A resolution. J. Mol. Biol. 209: 711-734

123. Baker H. M., Anderson B. F. and Baker E. N. (2003) Dealing with iron: common structural principles in proteins that transport iron and heme. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 100: 3579-3583

124. Ward P. P., Mendoza-Meneses M., Mulac-Jericevic В., Cunningham G. A., Saucedo-Cardenas O., Teng С. T. et al. (1999) Restricted spatiotemporal expression of lactoferrin during murine embryonic development. Endocrinology 140: 1852—1860

125. Teng С. Т., Beard C. and Gladwell W. (2002) Differential expression and estrogen response of lactoferrin gene in the female reproductive tract of mouse, rat and hamster. Biol. Reprod. 67: 1439-1449

126. Masson P. L., Heremans J. F. and Schonne E. (1969) Lactoferrin, an iron-binding protein in neutrophilic leukocytes. J. Exp. Med. 130: 643-658

127. Montreuil J., Tonnelat J. and Mullet S. (1960) Preparation et proprietes de la lactosiderophiline (lactotransferrine) du lait de femme. Biochim. Biophys. Acta 45: 413-421

128. Bennett R. M., Eddie-Quartey A. C. and Holt P. (1973) Lactoferrin an iron binding protein in synovial fl uid. Arthritis Rheum. 16: 186-190

129. Maaks S., Yan II. Z. and Wood W. G. (1989) Development and evaluation of luminescence based sandwich assay for plasma lactoferrin as a marker for sepsis and bacterial infections in pediatric medicine. J. Biolumines. Chemilumines. 3: 221-226

130. Debanne M.T., Regoeczi E., Sweeney G.D. and Krestynski F. (1985) Interaction of human lactoferrin with the rat liver. Am. J. Physiol. 248: G463—469

131. Thomas L. L., Xu W. and Ardon Т. T. (2002) Immobilized lactoferrin is a stimulus for eosinophil activation. J. Immunol. 169: 993-999

132. Teng С. Т. (2002) Lactoferrin gene expression and regulation: an overview. Biochem. Cell Biol. 80: 7-16

133. Liu, D., Wang, X., Zhang, Z., & Teng, С. T. (2003). An intronic alternative promoter of the human lactoferrin gene is activated by Ets. Biochemical and Biophysical Research Communications, 301, 472—479.

134. Teng, С. T. (2006). Factors regulating lactoferrin gene expression. Biochemistry and Cell Biology, 84, 263-267.

135. Ward, P. P., Paz, E., & Conneely, О. M. (2005). Multifunctional roles of lactoferrin: A critical overview. Cellular and Molecular Life Sciences, 62, 2540-2548.

136. Rey, M. W., Woloshuk, S. L., deBoer, H. A., & Pieper, F. R. (1990). Complete nucleotide sequence of human mammary gland lactoferrin. Nucleic Acids Research, 18, 5288.

137. Baker, E. N.,&Baker, H. M. (2005). Molecular structure, binding properties and dynamics of lactoferrin. Cellular and Molecular Life Sciences, 62, 2531—2539.

138. Teng, С. Т., and Gladwell, W. (2006). Single nucleotide polymorphisms (SNPs) in human lactoferrin gene. Biochemistry and Cell Biology, 84, 381-384.

139. Spik, G., Coddeville, В., & Montreuil, J. (1988). Comparative study of the primary structures of sero-, lacto- and ovotransferrin glycans from different species. Biochimie, 70, 1459-1469.

140. Wally J, Halbrooks PJ, Vonrhein С et al (2006) The crystal structure of iron-free human serum transferrin provides insight into inter-lobe communication and receptor binding. J Biol Chem 281:24934-24944

141. Okamoto I, Mizutani K, Hirose M (2004) Iron-binding process in the amino- and carboxyl-terminal lobes of ovotransferrin: quantitative studies utilizing single Fe3(-binding mutants. Biochemistry 43:11118-11125

142. Frazer D. M. and Anderson G. J. (2003) The orchestration of body iron intake: how and where do enterocytes receive their cues? Blood Cells Mol. Dis. 30: 288—297

143. Iyer S. and Lonnerdal B. (1993) Lactoferrin, lactoferrin receptors and iron metabolism. Eur. J. Clin. Nutr. 47: 232-241

144. Fleming M. D., Trenor С. C. 3rd, Su M.A., Foernzler D., Beier D. R., Dietrich W. F. et al. (1997) Microcytic anaemia mice have a mutation in Nramp2, a candidate iron transporter gene. Nat. Genet. 16: 383-386

145. Suzuki Y. A., Shin K. and Lonnerdal B. (2001) Molecular cloning and functional expression of a human intestinal lactoferrin receptor. Biochemistry 40: 15771-15779

146. Andrews N. C. (2000) Iron homeostasis: insights from genetics and animal models. Nat. Rev. Genet. 1: 208-217

147. Sanchez L., Calvo M. and Brock J. H. (1992) Biological role of lactoferrin. Arch. Dis. Child. 67: 657-661 38. Davidson L. A. and Lonnerdal B. (1987) Persistence of human milk proteins in the breast-fed infant. Acta Paediatr. Scand. 76: 733-740

148. Davidsson L., Kastenmayer P., Yuen M., Lonnerdal B. and Hurrell R. F. (1994) Infl uence of lactoferrin on iron absorption from human milk in infants. Pediatr. Res. 35: 117-124

149. Ward P. P., Mendoza-Meneses M., Cunningham G. A. and Conneely О. M. (2003) Iron status in mice carrying a targeted disruption of lactoferrin. Mol. Cell. Biol. 23: 178-185

150. Orsi N. (2004) The antimicrobial activity of lactoferrin: current status and perspectives. Biometals 17: 189-196

151. Levay P. F. and Viljoen M. (1995) Lactoferrin: a general review. Haematologica 80: 252-267

152. Arnold R. R., Cole M. F. and McGhee J. R. (1977) A bactericidal effect for human lactoferrin. Science 197: 263-265

153. Ellison R. T. 3rd, Giehl T. J. and LaForce F. M. (1988) Damage of the outer membrane of enteric gram-negative bacteria by lactoferrin and transferrin. Infect. Immun. 56: 2774-2781

154. Wakabayashi H., Takase M. and Tomita M. (2003) Lactoferricin derived from milk protein lactoferrin. Curr. Pharm. Des. 9: 1277-1287

155. Singh P. K., Parsek M. R., Greenberg E. P. and Welsh M. J. (2002) A component of innate immunity prevents bacterial biofi lm development. Nature 417: 552—555

156. Britigan В. E., Hayek M. В., Doebbeling B. N. and Fick R. B. Jr (1993) Transferrin and lactoferrin undergo proteolytic cleavage in the Pseudomonas aeruginosa-infected lungs of patients with cystic fl brosis. Infect. Immun. 61: 5049-5055

157. Gomez H. F., Ochoa T. J., Carlin L. G. and Cleary T. G. (2003) Human lactoferrin impairs virulence of Shigella fl exneri. J. Infect. Dis. 187: 87—95

158. Hendrixson D. R., Qiu J., Shewry S. C., Fink D. L., Petty S., Baker E. N. et al. (2003) Human milk lactoferrin is a serine protease that cleaves Haemophilus surface proteins at arginine-rich sites. Mol. Microbiol. 47: 607-617

159. Guillen C., Mclnnes I. В., Vaughan D. M., Kommajosyula S., Van Berkel P. H., Leung B. P. et al. (2002) Enhanced Thl response to Staphylococcus aureus infection in human lactoferrin- transgenic mice. J. Immunol. 168: 3950-3957

160. Shaper M., Hollingshead S. K., Benjamin W. H. Jr and Briles D. E. (2004) PspA protects Streptococcus pneumoniae from killing by apolactoferrin, and antibody to PspA enhances killing of pneumococci by apolactoferrin. Infect. Immun. 72: 5031-5040

161. Schryvers А. В., Bonnah R., Yu R. H., Wong H. and Retzer M. (1998) Bacterial lactoferrin receptors. Adv. Exp. Med. Biol. 443: 123—133

162. Dial E. J. and Lichtenberger L. M. (2002) Effect of lactoferrin on Helicobacter felis induced gastritis. Biochem. Cell Biol. 80: 113-117

163. Kruzel M. L., Harari Y., Chen C. Y. and Castro G. A. (2000) Lactoferrin protects gut mucosal integrity during endotoxemia induced by lipopolysaccharide in mice. Infl animation 24: 33-44

164. Lee W. J., Farmer J. L., Hilty M. and Kim Y. B. (1998) The protective effects of lactoferrin feeding against endotoxin lethal shock in germfree piglets. Infect. Immun. 66: 1421-1426

165. Haversen L., Ohlsson B. G., Hahn-Zoric M., Hanson L. A. and Mattsby-Baltzer I. (2002) Lactoferrin down-regulates the LPSinduced cytokine production in monocytic cells viaNF-kappa B. Cell. Immunol. 220: 83-95

166. Kaisho T. and Akira S. (2004) Pleiotropic function of Toll-like receptors. Microbes Infect. 6: 1388-1394

167. Britigan В. E., Lewis T. S., Waldschmidt M., McCormick M. L. and Krieg A. M. (2001) Lactoferrin binds CpG-containing oligonucleotides and inhibits their immunostimulatory effects on human В cells. J. Immunol. 167: 2921-2928

168. Cumberbatch M., Bhushan M., Dearman R. J., Kimber I. and Griffi ths С. E. (2003) IL-lbeta-induced Langerhans' cell migration and TNF-alpha production in human skin: regulation by lactoferrin. Clin. Exp. Immunol. 132: 352-359

169. Haversen L. A., Baltzer L., Dolphin G., Hanson L. A. and Mattsby-Baltzer I.2003) Anti-infl ammatory activities of human lactoferrin in acute dextran sulphate-induced colitis in mice. Scand. J. Immunol. 57: 2-10

170. Dial E. J., Dohrman A. J., Romero J. J. and Lichtenberger L. M. (2005) Recombinant human lactoferrin prevents NSAIDinduced intestinal bleeding in rodents. J. Pharm. Pharmacol. 57: 93-99

171. Hayashida К., Kaneko Т., Takeuchi Т., Shimizu H., Ando K. and Harada E.2004) Oral administration of lactoferrin inhibits infl ammation and nociception in rat adjuvant-induced arthritis. J. Vet. Med. Sci. 66: 149-154

172. Birgens H. S., Karle H., Hansen N. E. and Ostergaard Kristensen L. (1984) Lactoferrin receptors in normal and leukaemic human blood cells. Scand. J. Haematol. 33: 275-280

173. Birgens H. S., Hansen N. E., Karle H. and Kristensen L. O. (1983) Receptor binding of lactoferrin by human monocytes. Br. J. Haematol. 54: 383-391

174. Van Snick J. L. and Masson P. L. (1976) The binding of human lactoferrin to mouse peritoneal cells. J. Exp. Med. 144: 1568-1580

175. Ward P. P., Uribe-Luna S. and Conneely О. M. (2002) Lactoferrin and host defense. Biochem. Cell Biol. 80: 95-102

176. Guillen C., Mclnnes I. В., Vaughan D., Speekenbrink A. B. and Brock J. H. (2000) The effects of local administration of lactoferrin on infl ammation in murine autoimmune and infectious arthritis. Arthritis Rheum. 43: 2073-2080

177. Elrod К. C., Moore W. R., Abraham W. M. and Tanaka R. D. (1997) Lactoferrin, a potent tryptase inhibitor, abolishes latephase airway responses in allergic sheep. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 156: 375-381

178. Wolf J. S., Li D., Taylor R. J. and O'Malley B. W. Jr (2003) Lactoferrin inhibits growth of malignant tumors of the head and neck. ORL J. Otorhinolaryngol Relat. Spec. 65: 245-249

179. Shimamura M., Yamamoto Y., Ashino H., Oikawa Т., Hazato Т., Tsuda H. et al.2004) Bovine lactoferrin inhibits tumorinduced angiogenesis. Int. J. Cancer. Ill: 111-116

180. Tsuda H., Sekine K., Fujita K. and Ligo M. (2002) Cancer prevention by bovine lactoferrin and underlying mechanisms — a review of experimental and clinical studies. Biochem. Cell Biol. 80: 131-136

181. Tanaka Т., Kawabata K., Kohno H., Honjo S., Murakami M., Ota T. et al. (2000) Chemopreventive effect of bovine lactoferrin on 4-nitroquinoline 1-oxide-induced tongue carcinogenesisin male F344 rats. Jpn. J. Cancer Res. 91: 25—33

182. Masuda C., Wanibuchi H., Sekine K., Yano Y., Otani S., Kishimoto T. et al. (2000) Chemopreventive effects of bovine lactoferrin on N-butyl-N-(4-hydroxybutyl)nitrosamine-induced rat bladder carcinogenesis. Jpn. J. Cancer Res. 91: 582588

183. Varadhachary A., Wolf J. S., Petrak K., O'Malley B. W. Jr, Spadaro M., Curcio C. et al. (2004) Oral lactoferrin inhibits growth of established tumors and potentiates conventional chemotherapy. Int. J. Cancer 111: 398-403

184. Kuhara Т., Iigo M., Itoh Т., Ushida Y., Sekine K., Terada N. et al. (2000) Orally administered lactoferrin exerts an antimetastatic effect and enhances production of IL-18 in the intestinal epithelium. Nutr. Cancer 38: 192-199

185. Benaissa M, Peyrat JP, Hornez L, Mariller C, Mazurier J, Pierce A.2005)Expression and prognostic value of lactoferrin mRNA isoforms in human breast cancer. Int J Cancer. (2005) Mar 20; 114(2):299-306.

186. Xiao Y., Monitto C. L., Minhas К. M. and Sidransky D. (2004) Lactoferrin down-regulates G1 cyclin-dependent kinases during growth arrest of head and neck cancer cells. Clin. Cancer Res. 10: 8683-8686

187. Oh S. M., Pyo C. W., Kim Y. and Choi S. Y. (2004) Neutrophil lactoferrin upregulates the human p53 gene through induction of NF-kappaB activation cascade. Oncogene 23: 8282-8291

188. Fujita K., Matsuda E., Sekine K., Iigo M. and Tsuda H. (2004) Lactoferrin enhances Fas expression and apoptosis in the colon mucosa of azoxymethane-treated rats. Carcinogenesis 25: 1961-1966

189. Legrand D., Vigie K., Said E. A., Elass E., Masson M., Slomianny M. C. et al. (2004) Surface nucleolin participates in both the binding and endocytosis of lactoferrin in target cells. Eur. J. Biochem. 271: 303—317

190. Damiens E., Mazurier J., el Yazidi I., Masson M., Duthille I., Spik G. et al. (1998) Effects of human lactoferrin on NK cell cytotoxicity against haematopoietic and epithelial tumour cells. Biochim. Biophys. Acta 1402: 277-287

191. Bezault J., Bhimani R., Wiprovnick J. and Furmanski P. (1994) Human lactoferrin inhibits growth of solid tumors and development of experimental metastases in mice. Cancer Res. 54: 2310-2312

192. Wang B, Fujisawa H, Zhuang L, Freed I, Howell BG, Shahid S, Shivji GM, Мак TW, Sauder DN, (2000). CD4+ Thl and CD8+ type 1 cytotoxic T cells both play a crucial role in the full development of contact hypersensitivity. J Immunol. 15;165(12):6783-90.

193. Reddy P. (2004) Interleukin-18: recent advances. Curr. Opin. Hematol. 11: 405410

194. Lorget F, Clough J, Oliveira M, Daury MC, Sabokbar A, Offord E, (2002). Lactoferrin reduces in vitro osteoclast differentiation and resorbing activity. Biochem Biophys Res Commun. 16;296(2):261-6.

195. Cornish J., Callon К. E., Naot D., Palmano K. P., Banovic Т., Bava U. et al. (2004) Lactoferrin is a potent regulator of bone cell activity and increases bone formation in vivo. Endocrinology 145: 4366-4374

196. Grey A., Banovic Т., Zhu Q., Watson M., Callon K., Palmano K. et al. (2004) The low-density lipoprotein receptor-related protein 1 is a mitogenic receptor for lactoferrin in osteoblastic cells. Mol. Endocrinol. 18: 2268-2278

197. Hashizume S., Kuroda K. and Murakami H. (1983) Identifi cation of lactoferrin as an essential growth factor for human lymphocyticcell lines in serum-free medium. Biochim. Вiophys.Acta 763: 377-382

198. Zakharova ET, Shavlovski MM, Bass MG, Gridasova AA, Pulina MO, De Filippis V,Beltramini M, Di Muro P, Salvato B, Fontana A, Vasilyev VB, Gaitskhoki VS.(2000)Interaction of lactoferrin with ceruloplasmin. Arch Biochem Biophys. 15;374(2):222-8.

199. Perraudin JP, Prieels JP. (1982) Lactoferrin binding to lysozyme-treated Micrococcus luteus. Biochim Biophys Acta. 17;718(l):42-8.

200. Lehrer RI, Rosenman M, Harwig SS, Jackson R, Eisenhauer P.(1991) Ultrasensitive assays for endogenous antimicrobial polypeptides.J Immunol Methods. 1991 Mar 21;137(2):167-73.