Эффективность генетической трансформации соматических и эмбриональных клеток животных с использованием различных типов клеток-"упаковщиц" тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат биологических наук Волкова, Людмила Александровна

• Волкова, Людмила Александровна
• кандидат биологических наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Волкова, Людмила Александровна

ВВЕДЕНИЕ.

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Ретровирусные векторы как эффективная система переноса чужеродных генов в клетки эукариот.

1.1.1. Биологические особенности ретровирусов.

1.1.2. Создание ретровирусных векторов.

1.1.3. Пакующие линии клеток.

1.1.4. Свойства ретровирусных векторных систем и их использование для переноса чужеродной ДНК.

1.2. Трансгенные животные биореакторы.

1.2.1. Преимущества использование трансгенных животных для производства рекомбинантных белков.

1.2.2 Продукция рекомбинантных белков в молоко трансгенных животных.

Ф 1.2.3. Использование ретровирусных векторов для получения трансгенных животных биореакторов.

1.3. Получение трансгенной сельскохозяйственной птицы.

1.3.1. Использование вирусных векторов для переноса экзогенной ДНК в эмбриональные клетки птицы.

1.3.2. Микроинъекция ДНК в цитоплазму зиготы.

1.3.3. Использование эмбриональных стволовых клеток.

1.3.4. Использование примордиальных зародышевых клеток. щ 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Реактивы и оборудование.

2.2. Используемые генные конструкции и пакующие линии клеток.

2.3. Культивирование клеток.

2.4. Получение первичной культуры клеток-мишеней.

2.4.1. Получение первичной культуры клеток молочной железы. 45 2.4.2 Получение первичной культуры клеток эмбриона курицы.

2.5 Трансформация клеток-мишеней in vitro.

2.5.1. Совместное культивирование с клетками-«упаковщицами».

2.5.2. Инфицирование культуральной жидкостью, содержащей рекомбинантный ретровирус.

2.6. Введение генных конструкций в клетки-мишени in vivo.

2.6.1. Введение генных конструкций в молочную железу сельскохозяйственных животных.

2.6.2. Введение генных конструкций в эмбрионы кур.

2.7. Анализ на наличие генной конструкции (ПЦР).

2.8 Анализ экспрессии рекомбинантных белков.

2.8.1. Иммуноферментный анализ (ИФА).

2.8.2. Иммуногистохимия.

2.9. Получение и приготовление препаратов митотических хромосом кур.

Ф 3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1 Трансформация клеток молочной железы сельскохозяйственных животных.

3.1.1. Трансфекция клеток молочной железы сельскохозяйственных животных in vitro.

3.1.2. Введение экзогенной ДНК в клетки молочной железы сельскохозяйственных животных in vivo.

3.1.3. Иммуногистохимический анализ экспрессии рекомбинантного ЭПО в молочной железе опытных животных.

3.1.4. Факторы, влияющие на эффективность трансформации клеток молочной железы in vivo.

3.2. Трансформация клеток эмбрионов кур.

3.2.1. Трансфекция эмбриональных клеток кур in vitro.

3.2.2. Введение генных конструкций в эмбрионы кур in vivo.

3.2.2.1 Трансформация клеток эмбрионов кур культуральной жидкостью.

3.2.2.2 Трансформация клеток эмбрионов кур суспензией клеток-«упаковщиц».

3.2.3. Влияние различных факторов на эффективность трансформации клеток эмбрионов кур.

3.3. Сравнительный анализ эффективности использования пакующих линий клеток AMI2 и pgl3 для трансформации *■ клеток-мишеней in vitro и in vivo.

4 ОБСУЖДЕНИЕ.

5 ВЫВОДЫ.

6 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Эффективность генетической трансформации соматических и эмбриональных клеток животных с использованием различных типов клеток-"упаковщиц"»

Актуальность темы.

Для создания трансгенных животных используют целый ряд методов: микроинъекция ДНК в пронуклеус зигот, вирусная трансфекция, использование спермиев как переносчиков ДНК, пересадка ядер трансформированных эмбриональных стволовых клеток, липосомальный транспорт генов [Зиновьева, Эрнст, 2004]. Исторически более ранним методом является метод микроинъекции ДНК, с использованием которого были получены первые трансгенные сельскохозяйственные животные [Hammer et al, 1985; Brem et al., 1985]. Однако данный метод характеризуется низкой эффективностью трансгенеза: интеграция рекомбинантной ДНК в зависимости от вида животного наблюдается только в 0,5-1% случаев [Ерем и др., 1995]. Причем около 40% полученных трансгенных животных в последующем не экспрессируют чужеродный белок [Wilmut I. et al., 1991; Hemmighausen L. étal., 1992].

В этой связи актуальным является разработка альтернативных методов переноса генов, позволяющих повысить эффективность трансгенеза. Одним из таких подходов является использование ретровирусных векторных систем. Благодаря эволюционно сложившемуся механизму интеграции вирусной РНК в геном клетки-хозяина, ретровирусные векторы позволяют эффективно осуществлять трансформацию клеток-мишеней, как in vivo, так и in vitro. Они самостоятельно проникают в клетки-мишени и эффективно интегрируются в ДНК, не разрушая при этом клетку. Огромным преимуществом данных векторов является возможность их использования для получения так называемых соматических трансгенных животных методом локального (органного) трансгенеза, что позволяет значительно сократить сроки получения трансгенных индивидуумов [Титова В.А., 2001; Волкова H.A., 2002; Гвоздь ИМ., 2002]. Ретровирусные вектора рассматриваются в качестве перспективного метода и в случае получения трансгенных кур [Mizuarai S. et al., 2001; Harvey A.J. et al., 2002; Mozdziak P.E. et al„ 2003], особенности воспроизводства которых делают использование метода микроинъекции для этих целей малоэффективным.

Однако эффективность трансформации клеток-мишеней ретровирусными векторами во многом определяется используемой линией клеток, упаковывающих рекомбинантный ретровирус. В этой связи, возникает необходимость в оценке различных линий клеток-«упаковщиц» для использования в трансгенезе соматических и эмбриональных клеток животных in vitro и in vivo.

Цель и задачи исследования.

Исходя из вышеизложенного, целью диссертационной работы явилось исследование эффективности генетической трансформации соматических и эмбриональных клеток животных с использованием различных типов клеток-«упаковщиц».

Для достижения указанной цели были поставлены и решены следующие задачи:

1. Провести трансфекцию первичной культуры клеток молочной железы сельскохозяйственных животных и эмбрионов кур in vitro с использованием двух типов клеток-«упаковщиц» AMI2 и pgl3.

2. Изучить динамику экспрессии рекомбинантных белков с молоком соматических трансгенных коров, коз и свиноматок после введения в молочную железу генных конструкций, интегрированных в пакующую линию pgl3.

3. Усовершенствовать метод получения трансгенных кур методом опосредованного ретровирусами переноса генов.

4.Определить эффективность трансформации клеток эмбрионов кур in vivo на уровне ДНК.

5. Выявить факторы, определяющие эффективность трансформации клеток эмбриона кур in vivo.

6. Дать сравнительную оценку использования двух типов клеток-«упаковщиц» для трансгенеза клеток молочной железы сельскохозяйственных животных и эмбрионов кур.

Научная новизна.

В ходе выполнения диссертационной работы впервые проведена оценка двух типов клеток-«упаковщиц» AM 12 и pg!3 для переноса экзогенной ДНК в первичные клетки молочной железы млекопитающих и эмбрионы кур in vitro. Впервые осуществлена трансформация клеток молочной железы коров, коз и свиноматок in vivo пакующей линией pgl3 и изучена динамика экспрессии рекомбинантных белков с молоком опытных животных в ходе лактации.

Впервые оценена эффективность использования ретровирусных векторов для трансгенеза эмбрионов кур in vivo, и на основе сравнительного анализа различных способов введения генных конструкций в эмбрионы кур отработан метод получения трансгенных кур. Получены трансгенный петух, несущий структурный ген эритропоэтина человека в клетках крови, кишечнике, печени, сердце и курица с интеграцией рекомбинантной ДНК (ген гормона роста человека) в сердце, печени, мышцах, яичнике, кишечнике, желудке. Установлено влияние генной конструкции, пакующей линии клеток и типа вирусного препарата на эффективность трансформации эмбрионов кур.

Практическая значимость работы.

Результаты, полученные в ходе выполнения диссертационной работы, имеют практическую значимость. Оценена эффективность использования двух типов клеток-«упаковщиц» AM 12 и pg!3 для трансгенеза клеток молочной железы сельскохозяйственных животных и эмбрионов кур in vitro и in vivo. Усовершенствован метод получения трансгенных кур посредством использования ретровирусных векторов. Выявлены факторы, определяющие эффективность трансформации эмбрионов кур in vivo.

Основные положения, выносимые на защиту:

• Опосредованный ретровирусами перенос генов как эффективный метод доставки экзогенной ДНК в клетки молочной железы сельскохозяйственных животных и эмбрионов кур in vitro и in vivo.

• Периодичность синтеза рекомбинантных белков в молоко соматических трансгенных животных.

• Влияние генной конструкции, пакующей линии клеток и типа вирусного препарата на эффективность трансформации эмбрионов кур in vivo.

Апробация работы.

Материалы диссертации были доложены и обсуждены: на международной конференции «ДНК-технологии в клеточной инженерии и маркировании признаков сельскохозяйственных животных», Дубровицы, ВИЖ, 2003; на III международной научной конференции «Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии», Москва, ВНИИСБ, 2004; на международной научно-практической конференции «Прошлое, настоящее и будущее зоотехнической науки», Дубровицы, ВИЖ, 2004; на III международном конгрессе «Биотехнология: состояние и перспективы развития», Москва, Экспоцентр, 2005; на конференциях отдела биотехнологии ВИЖ, 2002-2005 гг.

Публикации.

По материалам диссертации опубликовано 9 работ.

Структура и объём работы.

Диссертация изложена на 107 страницах, содержит 11 таблиц, 26 рисунков, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов исследований, обсуждения, выводов, практических предложений. Список литературы включает 110 источников.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Волкова, Людмила Александровна

5. ВЫВОДЫ

1. Посредством использования ретровирусных векторов осуществлена трансформация клеток молочной железы сельскохозяйственных животных и эмбрионов кур in vitro с частотой интеграции рекомбинантной ДНК от 8*10"4 до 5*10"3. Установлено влияние генной конструкции, пакующей линии клеток и типа вирусного препарата на эффективность трансформации клеток-мишеней.

2. С использованием линии pg!3, упаковывающей ретровирусные векторы, получены соматические трансгенные коровы, козы и свиноматки с максимальной экспрессией в молочной железе рекомбинантного ЭПО 3501000 нг/мл и Г-КСФ - 65-150 нг/мл. Выявлены периодичность синтеза рекомбинантного продукта в молоко в течение лактации и зависимость уровня его экспрессии от периода лактации, используемой генной конструкции и вида животного. Экспрессия рекомбинантных белков в молочной железе коз и свиноматок установлена в течение всей лактации, у коров - только первые три месяца лактации.

3. Отработан метод получения трансгенных кур посредством введения генных конструкций в зародышевый диск до начала инкубации и в дорсальную аорту эмбрионов на третий день развития. С использованием данного метода получены трансгенные петух №3976 и курица №4208.

4. При введении ретровирусных векторов в эмбрионы кур in vivo рекомбинантная ДНК интегрировалась в клетки-мишени с частотой от 2,8 до 40%.

5. Выявлено влияние пакующей линией клеток, типа вирусного препарата, метода и стадии введения генных конструкций на эффективность трансформации эмбрионов кур in vivo. Наиболее высокая эффективность трансгенеза установлена при введении ретровирусных векторов, упакованных в пакующую линию АМ12, в виде суспензии клеток-«упаковщиц» на третий день инкубации в кровь - 14,3%.

6. При сравнительном анализе двух типов клеток-«упаковщиц» AM 12 и pgl3 в переносе экзогенной ДНК в клетки молочной железы сельскохозяйственных животных и эмбрионов кур in vitro и in vivo более высокая эффективность трансформации клеток-мишеней установлена в случае использования линии AMI2.

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для получения соматических трансгенных животных и трансгенных кур методом опосредованного ретровирусами переноса генов рекомендуем в качестве пакующей линии клеток использовать линию АМ12.

Для получения трансгенных кур с использованием ретровирусных векторов рекомендуем осуществлять введение генных конструкций в дорсальную аорту эмбрионов на третий день инкубации.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Волкова, Людмила Александровна, 2005 год

1. Абдурахманов И.К. Характеристика линий клеток, упаковывающих рекомбинантные ретровирусные векторы, в переносе экзогенной ДНК в клетки млекопитающих: автореф. дисс. канд. биол. наук. / И.К.Абдурахманов - Дубровицы, 2001. - 22 с.

2. Брем Г. Генные фермы новый путь производства биологически активных протеинов трансгенными животными /Г. Брем, H.A. Зиновьева, JI.K. Эрнст // Сельскохозяйственная биология.- 1993.- № 6.- С. 3-27.

3. Брем Г. Экспериментальная генетика в животноводстве / Г. Брем, X. Кройслих, Г. Штранцингер -М: РАСХН, 1995. 326 с.

4. Волкова JI.A. Методические вопросы цитогенетики птицы / J1.A. Волкова, П.В. Ларионова, П.М. Кленовицкий, H.A. Волкова, H.A. Зиновьева -Дубровицы: ВИЖ, 2004. 22с.

5. Волкова H.A. Интеграция и экспрессия экзогенов в молочной железе соматических трансгенных животных, полученных с использованием ретровирусных векторов: автореф. дисс. канд. биол. наук. / H.A. Волкова -Дубровицы, 2002. 22 с.

6. Горбунова В.Н. Введение в молекулярную диагностику и генотерапию наследственных заболеваний / В.Н. Горбунова, B.C. Баранов -СПб.: Специальная литература, 1997. 287 с.

7. Гвоздь И.М. Экспрессия рекомбинантных белков в молоке трансгенных животных: автореф. дисс. канд. биол. наук. / И.М. Гвоздь -Дубровицы, 2003. 22 с.

8. Зиновьева Н. А. Методические рекомендации по использованию метода полимеразной цепной реакции в животноводстве / H.A. Зиновьева, А.Н. Попов, Л.К. Эрнст, Н.С. Марзанов, В.В. Бочкарев, Н.И. Стрекозов, Г.Брем Дубровицы: ВИЖ, 1998.- 47 с.

9. Зиновьева H.A. Трансгенные кролики как продуценты химозина крупного рогатого скота с молоком / H.A. Зиновьева, У. Безенфельдер, М. Мюллер, J1.K. Мюллер, JI.K. Эрнст, Г. Брем // Биотехнология. 1998.- С.17-31.

10. Зиновьева H.A. Трансгенные животные и возможности их использования: молекулярно-генетические аспекты трансгенеза в животноводстве / H.A. Зиновьева, J1.K. Эрнст, Г. Брем Дубровицы: ВИЖ, 2001.-128 с.

11. Зиновьева H.A. Проблемы биотехнологии и селекции сельскохозяйственных животных / H.A. Зиновьева, JI.K. Эрнст. Дубровицы: ВИЖ, 2004.-316с.

12. Новое в клонировании ДНК. Методы. / Под ред. Д. Гловера. М.: Мир, 1989. - 368 с.

13. Прасолов B.C. Ретровирусные векторы эффективная система переноса и экспрессии чужеродных генов в клетках млекопитающих / В.С.Прасолов // Молекулярная биология. - 1989. - Т.23, вып.2. - С.8-12.

14. Сингер М. Гены и геномы / М. Сингер, П. Берг М.: Мир, 1998. -Т.2.- 362 с.

15. Спиер P.E. Биотехнология клеток животных / P.E. Спиер, Г.Д.Адаме, Дж.Б. Гриффите М.: Агромпромиздат, 1989. - 520 с.

16. Сюрин В.Н. Вирусные болезни животных / В.Н. Сюрин -М.:ВНИТИБП, 1998.-С.363-460.

17. Титова В.А. Молекулярно-генетические аспекты использования ретровирусных векторов для трасгенеза в животноводстве: автореф. дисс. канд. биол. наук. / В.А. Титова. Дубровицы, 2001. - 22 с.

18. Щелкунов С.Н. Генетическая инженерия. 4.2. / С.Н. Щелкунов -Новосибирск: Изд-во Новосиб. ун-та, 1997. 400с.

19. Эрнст J1.K. Некоторые аспекты использования ретровирусных векторов для переноса чужеродной ДНК in vivo и in vitro / JI.K. Эрнст, H.A. Зиновьева, H.A. Волкова, B.A. Титова M.: РАСХН, 2003.-84 с.

20. Эрнст J1.K. Современное состояние и перспективы использования трансгенных технологий в животноводстве / J1.K. Эрнст, Н.А. Зиновьева, Г.Брем М.: РАСХН, 2002.-341с.

21. Эрнст J1.K. Биотехнология сельскохозяйственных животных / Л.К.Эрнст, М.И. Прокофьев-М.: Колос, 1995.-192с.

22. Aaronson S.A. Endogenous type-C RNA viruses of mammalian cells / S.A. Aaronson, J.R. Stephenson // Biochim. Biophys. Acta. 1976. - 458, 323354.

23. Blake J. Beta geo, a combined selection and reporter gene for retroviral and transgenic studies / J. Blake, P.S. Salinas, S.M. Hughes // Biotechnigues. 1997. - 23(4), 690-695.

24. Borwornpinyo S. Germ-line transmission of a lacZ gene in chickens using an avian Spleen Necrosis Virus-based vector / S. Borwornpinyo, D.W.McCoy, P.E. Mozdziak, J.N. Petitte // J. Anim. Sci. 1998. - 79 (1), 174.

25. Bosselman R.A. Germline transmission of exogenous genes in the chicken / R.A. Bosselman, R.Y. Hsu, T. Boggs, S. Hu, J. Bruszewski, S. Ou,

26. Kozar, F. Martin, C. Green, F. Jacobsen // Science.- 1989. 243 (4890), 533535.

27. Brazolot C.L. Efficient transfection of chicken cells by lipofection, and introduction of transfected blastodermal cells into the embryo / C.L. Brazolot, I.N.Petitte, R.I. Etches, A.M. Verrinder Gibbins // Mol. Reprod. Dev.- 1991.- 30, 304-312.

28. Brem G. Produktion of transgenic mice, rabbits and pigs by mikroinjektion into pronuclei / G. Brem, B. Brenig, H.M. Goodman, R.S. Selden, F.Graf, B. Kruff// Zuchthygiene.- 1985.-20, 251-252.

29. Brinster R.L. Factors affecting the efficiency of introducing foreign DNA into mice by microinjecting eggs / R.L. Brinster, H.Y. Chen, M.E. Trumbauer // Proc. Natl Acad. Sci. USA.- 1985. 82, 4438^442

30. Carsience R.S. Germline chimeric chickens from dispersed donor blastodermal cells and compromised recipient embryos / R.S. Carsience, M.E.Clark, R.I. Etches, A.M. Verrinder Gibbins // Development.- 1993.- 117, 669-675.

31. Carver A.S. Transgenic liverstock as bioreactors: stable expression of human alfa-l-antitripsin by a flock of sheep / A.S. Carver // Biotechnology. 1993. - 11, 1263-1270.

32. Chang I.K.Germ line chimera produced by transfer of cultured chick primordial germ cells / I.K. Chang, A. Yoshiki, M. Kusakabe, A. Tajima, T.Chikamune, M. Naito, T. Ohno // Cell Biol Int.- 1995.- 19 (7), 569-576.

33. Chong H. Replication-competent retrovirus produced by a 'split-function' third generation amphotropic packaging cell line / H. Chong, R.G. Vile // Gene Ther. 1996. - 3, 624-629.

34. Clark A.J. Expression of human antihemophilic factor IX in the milk of transgenic sheep / A.J. Clark, P. Simons, I. Wilmut // Biotechnology 1989. - 7, 487-492.

35. Coffin J.M. Structure and classification of retroviruses. In 'The

36. Retroviridae' (ed. L.A. Levy ) / J.M Coffin // Plenum Press, NY, 1992. 19-49.

37. Cone R.D. High-efficiency gene transfer into mammalian cells: generation of helper-free recombinant retrovirus with broad mammalian host range / R.D. Cone, R.C. Mulligan // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1984.- 81, 6349-6353.

38. Cosset F.L. A new avian leukosis virus-based packaging cell line that uses two separate transcomplementing helper genomes // F.L. Cosset // J. Virol.t 1990.- 64, 1070-1078.

39. Cosset F.L. Packaging cells for avian leukosis virus-based vectors with various host ranges./ F.L. Cosset // J. Virol.- 1992.- 66, 5671-5676.

40. Das R.C. Production of therapeutic proteins from transgenic animals / R.C. Das // Bio Business.- 2001, 60-62.

41. Donahue R.E. Helper virus induced T-cell lymphomas in non-human promates after retroviral mediated gene transfer / R.E. Donahue, S.W. Kessler,

42. D.Bodine, K.Mc Donagh, C. Dunbar, S. Goodman, B. Agricola, E. Byrne, M.Raffeld, R. Moen, J. Bacher, K.M. Zsebo, A.W. Nienhuis // J. Exp. Med.- 1992.176, 1125-1135.

43. Emery D. W. Development of a condensed locus control region cassette and testing in retrovirus vectors for a gamma-globin / D.W. Emery // Blood Cells Mol Dis. 1998. -24,322-339.

44. Eyal-Giladi H. Avian primordial germ cells are of epiblastic origin / H.Eyal-Giladi, M. Ginsburg, A. Farbarov // J Embryol Exp Morphol.- 1981.- 65, 139-147.

45. Fraser R.A. Efficient incorporation of transfected blastodermal cells into chimeric chicken embryos / R.A. Fraser, R.S. Carsiense, M.E. Clark, R.I.Etches // Int. J. Dev. Biol.- 1993.- 37, 381-385.

46. Gilbert A.B. Egg albumen and its formation / A.B.Gilbert // Physiology and Biochemistry of the Domestic Fowl, Academic Press, 1984.- 1291-1329.

47. Gray D.A. Insertional mutagenesis: neoplasia arising from retroviral integration / D.A. Gray // Cancer Invest.- 1991.- 9, 295-304.

48. Grosovsky AJ. Insertional inactivation of the tk-locus in a human B lymphoblastoid cell line by a retroviral shuttle vector / A.J. Grosovsky, A.Skandalis, L. Hasegawa, B.N Walter // Mutat. Res.- 1993.- 289, 297-308.

49. Hammer R.E. Brinster Produktion of transgenic rabbits, sheer and pigs by microinjection / RE. Hammer, V.G. Pursel, C.E. Rexroad, R.I. Wall, D.I. Bolt, I.M. Ebert, RD. Palmiter, R.L. Brinster // Nature.- 1985.- 315, 680-683.

50. Harvey A.J. Consistent production of transgenic chickens using replication-deficient retroviral vectors and high-throughput screening procedures / A.J. Harvey, G. Speksnijder, L.R. Baugh, J.A. Morris, R. Ivarie // Poult Sci.-2002.- 81 (2), 202-212.

51. Harvey A.J. Expression of exogenous protein in the egg white of transgenic chickens / A.J. Harvey // Nat. Biotechnol.- 2002.- 20, 396-399

52. Henighausen L. // J. Cell. Biochem. 1992. - 49, 325-332.

53. Hu S. Generation of competent virus in the REV helper cell line C3. / S.Hu, J. Bruszewski, M. Nicolson, J. Tseng, R.Y. Hsu, R. Bosselman // Virology.-1987.- 159,446-449.

54. Ko J.H. Production of biologically active human granocyte colony stimulating factor in the milk of transgenic goat / J.H. Ko // Transgenic Reseach. -2000.-9,215-222.

55. Korhonen V.P. Expression of bovine beta-lactoglobulin human erythropoietin fusion protein in the milk of transgenic mice and rabbits / V.P.Korhonen, M. Tolvanen, J.M. Hyttinen // Eur. J. Biochem. 1997. - 15, 482489.

56. Krimpenfort P. Ceneration of transgenic dairy cattle using in vitro embryo production / P. Krimpenfort, A. Rademakers, W. Eyestone // Gamete Res. -1983.-8, 29-47.

57. Lampe D.J. Factors affecting transposition of the Himarl mariner transposon in vitro / D.J. Lampe// Genetics.- 1998.- 149,179-187

58. Larsson E. Human endogenous proviruses / E. Larsson, N. Kato, M.Cohen // Curr. Top. Microbiol, Immunol. 1989. - 148, 115-132.

59. Levy J.A. Isolation of lymphocytopathic retroviruses from San Francisco patients with AIDS / J.A. Levy, A.D. Hoffmann, S.M. Kramer, J.A.Landis, J.M. Shimabukuro, L.S. Oshiro // Science.- 1984.- 225, 840-842.

60. Li Y. Ballistic transfection of avian primordial germ cell in ovo / Y. Li, J. Behnam, K. Simkiss // Transgenic Res.- 1995.- 4 (1), 26-29.

61. Linial M. Transfer of defective avian tumor virus genomes by a Rous sarcoma virus RNA packaging mutant / M. Linial // J. Virol.- 1981.- 38, 380-382.

62. Linial M. An avian oncovirus mutant (SE21Qlb) deficient in genomic RNA: biological and biochemical characterization. / M. Linial, E. Medeiros, W.S.Hayward // Cell.- 1978.- 15,1371-1381.

63. Love J. Transgenic birds by DNA microinjection / J. Love, C. Gribbin, C. Mather, H. Sang // Biotechnology. 1994. - 12, 60-63.

64. Lower R. Identification of human endogenous retroviruses with complex mRNA expression and particle formation / R. Lower, K. Boiler, B.Hasenmaier, C. Korbmacher, N. Muller-Lantsch, J. Lower, R. Kurth // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1993. - 90, 4480-4484.

65. Mann R. Construction of a retrovirus packaging mutant and its use to produce helper-free defective retrovirus / R. Mann, R.C. Mulligan, D. Baltimore // Cell. 1983.- 33, 153-159.

66. Massoud M. The deleterious effects of human erythropoietin gene driven by the rabbit whey acidic protein gene promoter in transgenic rabbits / M.Massoud, J. Attal, D. Thepot // Reprod. Nutr. Dev. 1996. - 36, 555-563.

67. Miller A.D Retroviral packaging cells / A.D. Miller // Hum. Gene Ther. 1990.- 1,5-14.

68. Miller A.D. Redesign of retroviral packaging cell lines to avoid recombination leading to helper virus production / A.D. Miller, C. Buttimore // Mol. and Cell. Biol. 1986. - 6, 2895-2902.

69. Miller A.D. Generation of helper-free amphotropic retroviruses that transduce a dominant-acting, methotrexate-resistant dihydrofolate reductase gene / A.D. Miller, M.F. Law, I.M. Verma// Mol. Cell. Biol. 1985.-5, 431-437.

70. Miller D. Gene transfer by retrovirus vectors occurs only en cells that are actively replicating an the time of investion / D. Miller, M. Adam, V. Miller // Mol. Cel. Biol. 1990. - 10, 4239-4242.

71. Mozdziak P.E. Development of transgenic chickens expressing bacterial beta-galactosidase / P.E. Mozdziak, S. Borwornpinyo, D.W. McCoy, J.N. Petitte // Dev Dyn. 2003. - 226 (3), 439-445.

72. Naito M. Production of germline chimeric chickens, with high transmission rate of donor-derived gametes, produced by transfer of primordial germ cells / M. Naito, A. Tajima, Y. Yasuda, T. Kuwana // Mol Reprod Dev. -1994.- 39 (2), 153-161.

73. Naldini L. Efficient transfer, integration, and sustained long-term expression of the transgene in adult rat brains injected with a lentiviral vector /

74. Naldini, U. Blomer, F.H. Gage, D. Trono, I.M. Verma // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. - 93, 11382-11388.

75. Naldini L. In vivo gene delivery and stable transduction of nondividing cells by a lentiviral vector / L. Naldini, U. Blomer, P. Gallay, D. Ory, R. Mulligan, F.H. Gaga, I.M. Verma, D. Trono // Science. 1996. - 272, 263-267.

76. Nilson B.H.K. Targeting of retroviral vectors through protease-substrate interactions / B.H.K. Nilson //Gene Ther. 1996. - 3, 280-286.

77. Ory D.S. A stable human-derived packaging cell line for production of high retrovirus / vesicular stomatitis virus G pseudotypes / D.S. Ory, B.A.Neugeboren, R.C. Mulligan // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. - 93, 11400 -11406.

78. Pain B. Long-term in vitro culture and characterisation of avian embryonic stem cells with multiple morphogenetic potentialities. / B. Pain, M.E.Clark, M. Shen, H. Narazawa, M. Sakurai, R.I. Etches // Development. 1996. - 122, 2339-2348

79. Petitte J.N. The origin of the avian germ line and transgenesis in birds / J.N. Petitte, L. Karagenc, M. Ginsburg // Poult. Sci. 1997. - 76 (8), 1084-1092.

80. Petitte J.N. Production of somatic and germline chimeras in the chicken by transfer of early blastodermal cells / J.N. Petitte, M.E. Clark, G. Liu,

81. A.M.Verrinder Gibbins, R.I. Etches // Development. 1990. - 108, 185-189.

82. Poiesz B.J. Detection and isolation of type-C retrovirus particles from fresh and cultured lymphocytes of a patient with cutaneous T-cell lymphoma /

83. B.J.Poiesz, A.F. Ruscetti, P.A. Gazdar, P.A. Bunn, J.D. Minna, R.C. Gallo // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1980. - 77, 7415-7419.

84. Rigg R.J. A novel human amphotropic packaging cell line: High titer, complement resistance, and improved safety / R.J. Rigg, J. Che n, J.S. Dando, S.P.Forestell, I. Plavec, E. Bohnlein // Virology. 1996. - 218, 290-295.

85. Roe T. Integration of murine leukemia virus DNA depengs on mitosis / T. Roe, T. Reynolds, P.O. Brovn // EMBO J. 1993. - 12, 2099-2108.

86. Russell S.J. Gene therapy: Science, medicine and the future / S J.Russell // Br. Med. J. 1997.-315, 803-815.

87. Salter D.W. Transgenic chickens: insertion of retroviral genes into the chicken germ line / D.W. Salter, E.J. Smith, S.H. Hughes, S.E. Wright, L.B.Crittenden // Virology. 1987.- 157(1), 236-240.

88. Salter D.W. Gene insertion into the chicken germ line by retroviruses / D.W. Salter, E.J. S mith, S.H. Hughe s, S.E. Wright, A.M. Fadly, R.L. Witter, L.B.Crittenden //Poult Sci. 1986. - 65(8), 1445-1458.

89. Salter D.W. Insertion of a disease resistance gene into the chicken germline / D.W. Salter, L.B. Crittenden // Biotechnology. 1991.- 16, 125-131.

90. Sang H. Transgenic chicken Metods and potential applications / H.Sang // Trends Biotechnol. - 1994. - 12, 451-420.

91. Seamon J.A. Inserting a nuclear targeting signal into a replication-competent Moloney murine leukemia virus affects viral export and is not sufficient for cell cycle-independent infection / J.A. Seamon // J. Virol. 2002. - 76(16), 8475-8484.

92. Shank P. Avian oncovirus mutant (SE21Qlb) deficient in genomic RNA: characterization of a deletion in the provirus / P. Shank, M. Linial // J. Virol.-1980.- 36, 450-456.

93. Sherman A. Transposition of the Drosophila element mariner into the chicken germ line / A. Sherman // Nat. Biotechnol. 1998. - 16, 1050-1053.

94. Temin H.M. Safety considerations in somatic gene therapy of human disease with retrovirus vectors / H.M. Temin // Hum. Gene Ther.- 1990. 1,111123.

95. Uckert W. Retrovirus-mediated gene transfer in cancer therapy / W.Uckert, W. Walther // Pharmac. Ther. 1996. - 63, 323-347.

96. Urven L.E. Distribution of extracellular matrix in the migratory pathway of avian primordial germ cells / L.E. Urven, U.K. Abbott, C.A. Erickson// Anat Rec. 1989. - 224(1), 14-21.

97. Velande W.H. Expression of human protein C in trancgenic swine / W.H. Velande // Harnessing biotechnology for the 21st century: Proc. 9th International Biotechnology Symposium and Exposition Virginia, August 16-21. -1997.-34-37.

98. Vick L. Transgenic birds from transformed primordial germ cells / L.Vick, Y. Li, K. Simkiss // Proc. R. Soc. Lond. 1993. - 251, 179-182.

99. Waddington D. Chronology of events in the first cell cycle of the polyspermic egg of the domestic fowl (Gallus domesticus ) / D. Waddington // Int. J. Dev. Biol. 1998.- 42, 625-628.

100. Watanabe S. Construction of a helper cell line for avian retikuloendotheliosis virus cloning vectors / S. Watanabe, H.M. Temin // Mol. Ceii. Biol. 1983. - 3, 2241-2249.

101. Way J.C. Transposition of plasmid-borne TnlO elements does not exhibit simple length-dependence / J.C. Way, N. Kleckner // Genetics. 1985.- Ill, 705-713.

102. Wall R.J. High level synthesis of a heterologous milk protein in the mammary glands of transgenic swine / R.J. Wall // Proc. Natl. Acad. Sci. 1991. -88, 1696-1700.

103. Weiss R. RNA tumor viruses / R. Weiss, N. Teich, H. Varmus, J.M.Coffin // Cold Spring Harbor, NY: Cold Spring Harbor Laboratory, 1985.

104. Wentworth B.C. Manipulation of avian primordial germ cells and gonadal differentiation / B.C. Wentworth, H. Tsai, J.H. Hallett, D.S. Gonzales // Poultry Sci. 1989. - 68, 999-1010.

105. Wentworth B.C. Primordial germ cell for genetic modification of poultry / B.C. Wentworth, H. Tsai, A. Wentworth, E. Wong, J. Proudman, M.Halawani // In: Beltsville Symposia in Agricultural Research: Biotechnology's

106. Role in Genetic Improvements of Farm Animals American Society of Animal Science, Savoy, Illinois, 1996. 202-227.

107. Wilmut I., Archibald A., McClenaghan M. // Experientia. 1991. -47, 905-912.

108. Wright G. High level expression of active human a-1-antitrypsin in the milk of transgenic sheep / G. Wright, A. Carver, D. Cottom // Biotechnology. -1991.-8, 830-834.

109. Yasuda Y. A method to obtain avian germ-line chimaeras using isolated primordial germ cells / Y. Yasuda, A. Tajima, T. Fujimoto, T. Kuwana // J. Reprod Fertil. 1992. - 96(2), 521-528.