Фенотипический эффект экспрессии рекомбинантных генов в организме трансгенных животных тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, доктор биологических наук Волкова, Наталья Александровна

• Волкова, Наталья Александровна
• доктор биологических наук
• 2008

Оглавление диссертации доктор биологических наук Волкова, Наталья Александровна

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Методы трансгенеза в животноводстве.

1.1.1. Микроинъекция ДНК в пронуклеус зигот.

1.1.2. Использование ретровирусных векторов.

1.1.3. Липосомы как переносчики ДНК.

1.1.4. Трансфекция эмбриональных стволовых клеток и получение трансгенных химер.

1.1.5. Пересадка ядер из трансфецированных соматических клеток.

1.1.6. Использование сперматозоидов в качестве переносчиков чужеродной ДНК.

1.2. Применение трансгенных животных.

1.2.1. Трансгенные животные с измененными хозяйственно- 36 ценными признаками.

1.2.2. Трансгенные животные - биореакторы.

1.2.2.1. Преимущества использование трансгенных животных для производства рекомбинантных белков.;.

1.2.2.2. Продукция рекомбинантных белков в молоко трансгенных животных.

1.2.2.3. Использование вирусных векторов для получения трансгенных животных.

1.2.3. Трансгенные животные, генетически устойчивые к инфекционным заболеваниям.

1.2.4. Трансгенные животные как доноры внутренних органов.

1.2.4.1. Проблемы при ксенотрансплантации.

1.2.4.2. Экспериментальные наработки в ксенотрансплантации.

1.2.4.3. Создание генетически модифицированных доноров.

1.2.4.4. Исследования в области ксенотрансплантации.

1.3. Особенности трансгенеза сельскохозяйственной птицы.

1.3.1. Микроинъекция ДНК в цитоплазму зиготы.

1.3.2. Использование вирусных векторов для переноса экзогенной 72 ДНК в эмбриональные клетки и органы птицы.

1.3.3. Использование эмбриональных стволовых клеток.

1.3.4. Использование примордиальных зародышевых клеток (ПЗК) для получения трансгенной птицы.

1.3.5. Осеменение самок трансформированными спермиями.

1.4. Влияние интегрированных рекомбинантных генов на генотип и фенотип трансгенных животных.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Фенотипический эффект экспрессии рекомбинантных генов в организме трансгенных животных»

Актуальность темы. Успехи в технологии получения рекомбинантных ДНК открыли возможность создания новых генотипов путем введения, удаления или изменения генома животного уже в первом поколении. Значительный прогресс, достигнутый в этой области, связан прежде всего с разработкой новых более эффективных способов получения трансгенных организмов и созданием качественно новых генных конструкций, обеспечивающих более высокие уровни экспрессии трансгенов в организме животных. Однако, несмотря на достигнутые успехи, при получении трансгенных животных все еще остается проблема, связанная с не прогнозируемостью физиологических последствий реализации внесённой генетической информации.

Данные последствия являются с одной стороны результатом изменений на уровне генотипа, обусловленных дестабилизацией генома трансгенных животных [Кленовицкий и др., 1998, Медведев, 1992, Brem., 1993, Constantini et ah, 1989, Gasaryan et ah, 1987]. С другой стороны нарушения в функционирование отдельных систем организма могут быть связаны с дополнительной экспрессией экзогенного белка, изменяющего характер и уровень^ синтеза эндогенных белков. Последнее является наиболее актуальным при получении трансгенных животных с измененными хозяйственно-полезными признаками и продуцентов рекомбинантных белков фармакологического назначения. Причем в первом случае степень влияния интеграции чужеродных генов на функциональное состояние отдельных систем и организма в целом бывает высокой. Так, при введении генов, кодирующих белки каскада гормона роста (гормон роста, рилизинг фактор гормона роста, инсулиноподобный фактор гормон роста) у трансгенных животных наряду с положительным эффектом, выражающимся в улучшении мясных и товарных качеств получаемых мясопродуктов, наблюдается и негативное влияние экспрессии экзогенных белков на характер и уровень синтеза эндогенных белков организма. Результатом данного влияния являются различные отклонения в развитии животного

Pursel et ah, 1988; Murray et ah, 1989, Nancarrow et ah, 1991; Rexroad et ah, 1990].

При получении трансгенных животных - продуцентов рекомбинантных белков следует ожидать меньшего влияния интеграции чужеродного гена на физиологические показатели организма, так как направленная экспрессия ре-комбинантного продукта носит, как правило, локальный характер, в связи с чем не оказывает существенного влияния на организм животного. Однако данный факт является исключением в случае высокого уровня синтеза экзогенного белка или неспецифической его экспрессии в других органах и тканях.

Таким образом, экспрессия экзогенных белков в организме трансгенных животных может в различной степени влиять на функциональное состояние отдельных систем организма и проявляться на различных уровнях организации индивидуумов (генетическом, цитологическом, тканевом, организмен-ном). И если влияние чужеродных генов на организм трансгенных животных достаточно полно изучено на макроуровне (организм в целом), то исследований на цитологическом и тканевом уровнях (микроуровне) проводится мало. Хотя именно последнее в некоторых случаях может дать полный ответ на ряд вопросов, касающихся взаимодействия вырабатываемых в организме трансгенных животных рекомбинантных белков с собственными (эндогенными) белками организма и объяснить вызванные данным взаимодействием нарушения в нормальном развитии животного.

В связи с этим, с точки зрения оценки влияния интеграции чужеродного гена на состояние здоровья трансгенных животных необходимо наряду с анализом генотипа проводить комплексные исследования данных животных по фенотипическим признакам, затрагивая оценку экспрессии вырабатываемого рекомбинантного продукта на уровне ткани и клетки.

Цель и задачи

Исходя из вышеизложенного, целью диссертационной работы являлось изучение фенотипического эффекта экспрессии рекомбинантных генов в организме трансгенных животных разных форм на различных уровнях организации индивидуумов: организменном, тканевом и клеточном.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Разработать технологию получения соматических трансгенных сельскохозяйственных животных (коров, коз, свиней) посредством использования ретровирусных векторов.

2. Изучить молекулярные аспекты трансформации клеток молочной железы сельскохозяйственных животных при локальном трансгенезе и исследовать динамику синтеза рекомбинантных белков с молоком полученных соматических трансгенных животных.

3. Изучить наследование трансгенов в ряде поколений свиней, интегрировавших ген соматолиберина человека, и кроликов со встроенными генами кластера RCA и оценить влияние интеграции чужеродной ДНК на сохранение стабильности генома трансгенных животных.

4. Исследовать изменения биохимического статуса, морфофункцио-нальных характеристик внутренних органов и тканей, динамики роста, показателей откормочной и мясной продуктивности у трансгенных свиней по сравнению с аналогами. Выполнить анализ корреляционных зависимостей в организме трансгенных и интактных свиней.

5. Исследовать экспрессию генов кластера RCA в организме трансгенных кроликов и изучить характер изменения фенотипа кроликов под влиянием трансгенеза.

6. Выполнить теоретическое и экспериментальное обоснование отдельных элементов технологии трансгенеза кур, направленное на повышение результативности создания трансгенной птицы.

7. Изучить характер интеграции и экспрессии рекомбинантных генов в органах и тканях трансгенных кур.

8. Выполнить сравнительную оценку влияния интеграции и экспрессии рекомбинантных генов на фенотип и генотип трансгенных животных различных форм.

Научная новизна

В ходе выполнения диссертационной работы впервые исследованы механизмы создания соматических трансгенных животных (коров, коз, свиней) методом локального трансгенеза и изучены факторы, обуславливающие результативность генетической трансформации клеток молочной железы in vivo. Выполнено исследование уровня синтеза рекомбинантных белков - гра-нулоцитарного колониестимулирующего фактора (ГКСФ) и эритропоэтина человека (ЭПО) в молоко полученных трансгенных животных в динамике и оценены изменения морфофункциональных характеристик ткани молочной железы опытных животных под воздействием экспрессии трансгенов.

Впервые выполнена комплексная оценка влияния интеграции и экспрессии трансгена на генотип и фенотип свиней, трансгенных по гену соматоли-берина человека в ряде генераций в сравнительном аспекте. Изучен характер изменения корреляционных связей в организме опытных животных.

Изучена возможность использования генных конструкций на основе искусственных хромосом дрожжей (YAC) для получения трансгенных кроликов, интегрировавших гены-ингибиторы комплемента кластера RCA, как моделей для ксенотрансплантации. Проведена оценка влияния интеграции больших фрагментов ДНК (700 тысяч пар оснований) на сохранение стабильности генома трансгенных животных. Исследована экспрессия генов кластера RCA в организме трансгенных кроликов и изучены особенности их фенотипа.

Оценена результативность генетической модификации эмбрионов кур in vivo с использованием ретровирусных векторов. Изучены факторы, влияющие на эффективность получения трансгенных кур. Исследован характер экспрессии репортерных генов lacZ и GFP (зеленый флюоресцирующий белок) в различных органах и тканях полученной трансгенной птицы.

На основании проведенных исследований дана оценка фенотипического эффекта экспрессии рекомбинантных белков в организме трансгенных животных разных форм.

Практическая значимость

Разработана технология локального трансгенеза молочной железы сельскохозяйственных животных - коров, коз и свиней с целью создания соматических трансгенных животных - биореакторов. Установлены факторы, обуславливающие результативность генетической трансформации клеток вымени сельскохозяйственных животных in vivo. Получены соматические трансгенные коровы, козы и свиноматки, продуцирующие с молоком грану-лоцитарный колониестимулирующий фактор (Г-КСФ) и эритропоэтин (ЭПО) человека.

Изучены биологические и некоторые продуктивные особенности свиней, трансгенных по гену соматолиберина человека, в сравнительном аспекте в ряде поколений. Выявлены изменения показателей биохимического статуса и морфофункциональных характеристик внутренних органов.' Установлено изменение характера корреляционных связей в организме трансгенных свиней.

Изучены биологические особенности кроликов, трансгенных по генам-ингибиторам комплемента кластера RCA. Установлено, что интеграция больших фрагментов ДНК (длиной 700 тысяч п.о.) на основе YAC не оказывает существенного влияния на жизнеспособность трансгенных кроликов, что позволяет рассматривать этих животных в качестве функциональной модели для изучения проблем ксенотрансплантации. Показана повышенная устойчивость клеток трансгенных кроликов к лизису сывороткой крови человека, что указывает на потенциальную значимость генов-ингибиторов комплемента кластера RCA в разработке технологий клеточной терапии.

Усовершенствована технология получения трансгенных кур, основанная на использовании ретровирусных векторов. Разработан способ введения рет-ровирусных векторов в эмбрионы кур in vivo. Установлены факторы, влияющие на результативность генетической модификации эмбрионов кур. Получена трансгенная птица с интеграцией и экспрессией репортерных генов lacZ и GFP (зеленый флюоресцирующий белок) в ряде внутренних органов: сердце, печени, кишечнике, желудке, мышцах, репродуктивных органах.

Основные положения, выносимые на защиту

• Опосредованный ретровирусами перенос генов как результативный способ доставки экзогенной ДНК в клетки молочной железы животных и создания соматических трансгенных сельскохозяйственных животных - коров, коз и свиней.

• Тип генной конструкции и вектора, способ подготовки инъекционного препарата и стадия введения в организм животных как факторы, обуславливающие результативность локального трансгенеза молочной железы и создания соматических трансгенных животных-продуцентов.

• Изменения биохимического статуса, морфофункциональных характеристик внутренних органов и некоторых продуктивных показателей у свиней, трансгенных по гену соматолиберина, разных генераций.

• Повышенная устойчивость различных типов клеток кроликов, трансгенных по генам-ингибиторам комплемента кластера RCA, к лизису сывороткой крови человека.

• Динамика уровня хромосомных нарушений у трансгенных животных - свиней и кроликов в ряде генераций.

• Усовершенствованная технология создания трансгенных кур и факторы, обуславливающие ее результативность.

• Сравнительный анализ проявления интеграции и экспрессии реком-бинантных генов в фенотипе трансгенных сельскохозяйственных животных различных форм.

Апробация работы.

Материалы диссертации были представлены на международных конференциях: «ДНК-технологии в клеточной инженерии и маркировании признаков сельскохозяйственных животных», Дубровицы, 2001; «Повышение конкурентоспособности животноводства и задачи кадрового обеспечения», Быково, 2002; «Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных», Дубровицы, 2002, 2003, 2006; «Прошлое, настоящее и будущее зоотехнической науки», Дубровицы, 2004, 2005; «Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии», Москва, 2004; «Биологические и медицинские технологии: от научных результатов - к инновационным разработкам», Москва, 2005; «Биотехнология: состояние и перспективы развития», Москва, 2005, 2006; «Новые методы генодиагностики и генотерапии: современное состояние и перспективы использования в сохранении генофонда сельскохозяйственных животных», Дубровицы, 2005; «Актуальные проблемы биологии в животноводстве», Боровск, 2006; «Биотехнология в мире животных и растений», Бишкек, 2005; «Высокие технологии, фундаментальные и прикладные исследования, образование», Санкт-Петербург, 2007.

Публикация результатов исследований.

По материалам диссертации опубликовано 45 научных работ, в том числе в центральных научных журналах, рекомендованных ВАК - 12, книг - 1, методических рекомендаций - 2, патентов - 1.

Структура и объем работы

Диссертация изложена на 324 страницах, содержит 69 таблиц, 35 рисунков, 17 графиков, 10 схем. Библиографический список содержит 407 источников, в том числе 366 на иностранных языках.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Волкова, Наталья Александровна

4. ВЫВОДЫ

1. Разработана технология локального трансгенеза клеток молочной железы сельскохозяйственных животных на основе использования рекомби-нантных ретровирусных векторов. Установлено, что результативность генетической трансформации клеток-мишеней зависит от (1) метода введения рекомбинантных векторов, (2) способа подготовки конструкций для инъекций (клетки-упаковщицы, культуральная жидкость) и их концентрации, (3) стадии введения векторов в вымя животных и (4) типа пакующей линии клеток. Показано, что оптимальным с точки зрения результативности трансгенеза является введение векторов в молочную железу коров на 4-6 месяцах стельности, коз - на 4-5 месяцах сукозности, свиноматок - на 3-ем месяце супоростности.

2. Получены соматические трансгенные коровы (п=24), козы (п=14) и свиноматки (п=24), продуцирующие с молоком эритропоэтин в концентрации до 138+18, 192+16, 185+35 нг/мл, соответственно, и гранулоцитарный колониестимулирующий фактор в концентрации до 34+10, 46+7, 25+7 нг/мл, соответственно. Показано, что уровень экспрессии рекомбинантных белков с молоком варьирует в течение лактации и зависит от вида животного, периода лактации, используемой генной конструкции и способа ее подготовки для инъекции. Уровень синтеза рекомбинантных белков в молоко животных в первую треть лактации превышает аналогичные показатели во вторую и последнюю треть лактации в среднем в 2-3 раза.

3. Установлено, что интеграция рекомбинантных генов в геном трансгенных животных (кроликов и свиней) оказывает дестабилизующее влияние на кариотип и модифицирует активность ядрышковых организаторов (ЯОР). У трансгенных животных наблюдается повышение уровня хромосомных аберраций до 38,8% (против 3,1% в контроле) и происходит достоверное увеличение активности ЯОР (у трансгенных свиней) до 2,88+0,12 (Р<0,001). С увеличением числа генераций у трансгенных животных отмечается уменьшение частоты аберраций.

4. Показано, что характер наследования чужеродных генов у трансгенных животных (кроликов и свиней) зависит от типа спаривания и происхождения животных. При скрещивании по типу «трансген» х «нетрансген» доля трансгенных потомков составила 28,4-40,0% у свиней и 31,7-36,7% у кроликов, по типу «трансген» х «трансген» - 50,0-62,5%) и 50,0-72,7%), соответственно.

5. Установлено, что интеграция в геном свиней гена соматолиберина оказывает влияние на продуктивные признаки свиней разных генераций. У трансгенных свиней по сравнению с аналогами отмечается тенденция увеличения среднесуточных приростов до 35,7%), которая более заметно проявляется у трансгенных свиней ранних (II и III) генераций. У трансгенных свиней поздних генераций (IX и X), а также при откорме животных до более тяжелых кондиций (150 кг) установлена тенденция увеличения содержания мяса в тушах (+1,5%) и снижения доли сала (-1,9%). Отмечено снижение толщины шпика у трансгенных свиней с увеличением числа генераций.

6. Выявлено изменение гормонального и биохимического статуса трансгенных свиней. У трансгенных животных по сравнению с аналогами практически всех исследованных генераций усиливается синтез соматотро-пина в среднем в 1,5-2 раза, повышается содержание в крови общего белка (до +13,9%)), глюкозы (до +39,2%), триглицеридов (до +31,5%), магния (до + 11,6%) и снижается уровень хлоридов (до -4,3%).

7. Выявлен ряд морфометрических изменений в структуре органов пищеварительной, сердечнососудистой, выделительной систем организма, мышечной ткани и желез внутренней секреции. У трансгенных животных практически всех исследованных генераций по сравнению с контролем наблюдается увеличение толщины печеночных балок до 22,7%. У трансгенных животных поздних генераций (VIII, IX и X) обнаружено уменьшение диаметра ацинусов поджелудочной железы (до 8,8%, Р<0,01) и фолликулов щитовидной железы (до 21,8%, Р<0,001). Установлены изменения ряда морфологических корреляций в организме трансгенных свиней по сравнению с контрольными животными.

8. Показана перспективность использования генов-ингибиторов комплемента генного кластера RCA для генетической модификации животных, в частности кроликов, с целью использования их в клеточной терапии. На модели in vitro показана устойчивость клеток трансгенного происхождения к лизису сывороткой крови человека по сравнению с контрольными культурами. Доказано, что продукты экспрессии чужеродных генов не оказывают влияния на гистоструктуру внутренних органов трансгенных кроликов.

9. Усовершенствована технология получения трансгенных кур, позволяющая получать трансгенную птицу с эффективностью 8,0-8,7%. Установлено влияние на результативность трансформации эмбрионов кур in vivo метода и стадии введения рекомбинантных векторов, концентрации генных конструкций и способа их подготовки для инъекции. Максимальная результативность трансгенеза установлена при введении клеток-упаковщиц (в концентрации 1000 клеток/эмбрион) в дорсальную аорту 3-дпевных эмбрионов кур.

10. Установлен мозаичный характер интеграции генных конструкций в эмбрионах кур. Наличие ДНК генной конструкции выявлено, преимущественно, в клетках сердца, печени, желудка, кишечника, репродуктивных органах, а также мышечной ткани.

11. Показано, что степень влияния рекомбинантных генов на фенотипи-ческие особенности трансгенных животных зависит от целей эксперимента. Наибольшие изменения наблюдаются у трансгенных животных с измененными хозяйственно-полезными признаками: отмечены изменения характера обмена веществ, ряда биохимических, физиологических и морфологических показателей. При локальном переносе чужеродной ДНК влияние трансгенов на организм животных является минимальным: экспрессия рекомбинантных белков с молоком соматических трансгенных животных не оказывает заметного влияния на гистоструктуру вымени опытных животных.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Лабораториям, занимающимся созданием и изучением трансгенных форм животных, рекомендуем:

1. Для результативного проведения локального трансгенеза вымени сельскохозяйственных животных использовать векторные конструкции на основе модифицированных ретровирусов и осуществлять их введение в паренхиму молочной железы на 4-6 месяцы стельности у коров, 4-5 месяцы су-козности - у коз и 3-й месяц супоросности - у свиней.

2. С целью повышения результативности получения трансгенных кур на основе использования ретровирусных векторов проводить введение генных конструкций в дорсальную аорту эмбрионов на 3-й день инкубации.

3. Использовать гены-ингибиторы комплемента генного кластера RCA для генетической модификации животных с целью их последующего применения в клеточной терапии.

4. Учитывать уровень хромосомных аберраций при отборе трансгенных животных для дальнейшего воспроизводства.

1.5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, в последние годы достигнуты значительные успехи в технологии получения трансгенных животных: разработано множество методов направленного переноса генов в клетки животных, изучены механизмы интеграции, экспрессии и наследования введенных генов. Вместе с тем, методы генетической трансформации клеток животных, успешно применяемые на лабораторных животных, не всегда бывают такими же эффективными при получении трансгенных сельскохозяйственных животных. Все это требует разработки методологических подходов к проблеме создания генных конструкций и усовершенствования методов их введения, что позволит наряду с повышением общей эффективности трансгенеза у сельскохозяйственных животных снизить негативное влияние интегрированных рекомбинантных генов на жизнеспособность и здоровье получаемых трансгенных животных.

В настоящее время выделяют несколько направлений в использовании трансгенных животных. Все более востребованным становится получение трансгенных животных, в том числе и птицы, продуцирующих рекомбинант-ные белки фармакологического назначения. Такие животные рассматриваются как альтернатива традиционным методам получения рекомбинантных белков человека, характеризующихся более высокими материальными затратами. К тому же не все белки человека могут быть синтезированы в микроорганизмах. С развитием методов генной инженерии, направленных на создание эффективных генных конструкций и методов их введения, станет возможным преобразовать животноводство в стабильный источник производства широкого спектра веществ, обладающих фармакологическими и иными полезными свойствами.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

Работа была выполнена в период с 2001 по 2008 гг. в Центре биотехнологии и молекулярной диагностики животных ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт животноводства Россельхозакадемии» (ГНУ ВНИИЖ), физиологическом дворе и экспериментальных хозяйствах ГНУ ВНИИЖ ОПХ «Дубровицы», ОНО э/х «Кленово-Чегодаево», а также агрофирме «Толмачево» Нижегородской области согласно схеме, представленной на рисунке 10.

2.1. Материалы

2.1.1. Реактивы и оборудование Реактивы

Агароза (Lift Tehnologies, США) Антибиотик-антимикотик (Sigma, США) Бромид димидия (Boehringer, Германия) Бычий сывороточный альбумин (Sigma, США) Генетицин (ПанЭко, Россия) Гидроксид натрия (Merk, Германия) Глюкоза (ПанЭко, Россия) L-глутамин (ПанЭко, Россия) Двузамещенный фосфат натрия (Диа-М, Россия) Изоамиловый спирт (Merk, Германия) Лимонная кислота (Диа-М, Россия) Митомицин С (Sigma, США) О-фенилендиамин (Sigma, США) Протеиназа К (Диа-М, Россия) Раствор гентамицина сульфат (ПанЭко, Россия) Соляная кислота (Merk, Германия) Среда DMEM (ПанЭко, Россия) Среда F-12 (ПанЭко, Россия) Сульфат аммония (Merk, Германия)

Рис. 10. Схема исследований.

Сыворотка плода крупного рогатого скота (ПанЭко, Россия)

Tag- полимераза (Диалат, Россия)

Твин-20 (Диа-М, Россия)

Трипсин (Sigma, США)

Фосфатно-солевой буфер (Sigma, США)

Уксусная кислота (Merk, Германия)

Хлорид натрия (Merk, Германия)

Хлорид магния (Merk, Германия)

Хлороформ (Merk, Германия)

Оборудование

Автоклав (Harvard/LTE, Великобритания) Амплификатор «Amply 4L-50» (Biokom, Россия) Амплификатор «Cyclotemp» (СМТ, Россия) Водяная баня (Bio-Rad, США) Деионизатор воды (Elgastat UHQ, Англия) Дистиллятор АЦД-4 (Россия)

Источник ультрафиолетового света (Pharmacia Biotech, Швеция) Ламинарный шкаф (БОВ-001-АМС, Россия) Магнитная мешалка «Magnetic stirrer» (Польша) Микроскоп (Opton, ICM, Германия; Diaphot, Nikon, Япония) Микротом ротационный (TermoShandon, Великобритания) Микроцентрифуга (Eppendorf, США) Перистальтический насос Walson-Marlow (США), Пластиковые криопробирки (Nunk, Дания)

Прибор для горизонтального электрофореза (Life Technologies, США) Рефрижератор «Ultra low» (Sanio, Япония) С02-инкубатор (Sanyo, Япония) Сосуд Дьюара (Франция)

Спектрофотометр «DYNATECH MR5000» (Life Technologies, США)

Сухожаровой шкаф «КВС G-65/250» (Польша) Термостат (Bio-Rad, США) Термостат ТС-80М-2 (Россия)

Фильтры GS Millipore с диаметром пор 0,22 мкм (Sigma, CUTA) Центрифуга «Janetzki» (ГДР), «Precyzyjna» (Польша) Центрифужные пробирки объемом 15 и 50 мл (Corning, Германия) Цифровой фотоаппарат «Olympus Camedia С-4000 700М» (Корея) Чашки Петри d=35 и 60 мм (Corning, США) Электронные весы R 200D (Sartorius, Германия)

2.1.2. Животные

Объектом исследований служили различные трансгенные формы сельскохозяйственных животных:

1. Свиньи, трансгенные по гену соматолиберина (генная конструкция MTl-hGRF). Исследования проводили на свиньях II, III, IV, VIII, IX и X генераций. Животные II генерации были восстановлены посредством внутриутробного осеменения нетрансгенных маток глубоко замороженным семенем трансгенных хряков, хранившимся в криобанке более 10 лет [Багиров В.А., 2004]. Возобновление поколений трансгенных свиней позволило провести сравнительные исследования свиней генераций II — VIII, III — IX и IV — X.

2. Кролики, интегрировавшие гены-ингибиторы DAF и MCP кластера регуляторов активации комплемента (генная конструкция RCA-YAC размером 700 тыс. п.о.). При различных типах спаривания от двух трансгенных самцов первого поколения было получено и изучено три генерации трансгенных кроликов (п=164).

3. Куры, трансгенные по генам LacZ и GFP, полученные методом опосредованного ретровирусами переноса генов. Для трансформации эмбрионов кур (п=780) использовали два ретровирусных вектора pBMN-lacZ и pLN-GFP, содержащих, соответственно, репортерные гены lacZ и GFP под контролем промотора цитомегаловируса человека (CMV). В качестве источника генных конструкций использовали клетки-упаковщицы и рекомбинантный вирусный препарат, представляющий собой среду культивирования клеток-упаковщиц [Новое в клонировании ДНК, 1989].

4. Соматические трансгенные коровы, козы и свиноматки, продуцирующие с молоком эритропоэтин (ЭПО) и гранулоцитарный колониестимули-рующий фактор (Г-КСФ) человека. Животные были получены методом локального трансгенеза молочной железы с использованием технологии, усовершенствованной в ходе выполнения диссертационной работы. Для трансгенеза были использованы векторные конструкции pLN-a, содержащая ген ЭПО человека (ген предоставлен д.б.н., профессором Рябых В.П., ВНИИФ-БиП, г. Боровск), и pLN-G-CSF, содержащая ген Г-КСФ человека. Конструкции были получены к.б.н. Фоминым И.К. (Институт цитологии и генетики HAH Беларуси) на основе вектора pLNS путем встраивания в прямой ориентации в сайт Xho I под контролем промотора а51-казеина крупного рогатого скота генов ЭПО (вектор pLN-a) и Г-КСФ (вектор pLN-G-CSF) человека (рис. 11).

Xhol

ЕР рА pLNS pLNa pLN-G-CSF

LTR Н4 NEO LTR

600 900 / '"BOG--. / 1400 . 420 as i -казеин/эритро поэтин asi-казеин/Г-КСФ

Рис. 11. Схема строения вектора pLNS: LTR - длинный концевой повтор, - сигнал упаковки, Н4 - промотор гистона человека, NEO - ген устойчивости к неомицину, ЕР - делеция в области промотора-энхансера, рА - сигнал полиадени-лирования.

Для упаковки ретровирусных векторов в вирусные частицы были использованы две пакующие линии клеток GP+envAml2 и pg!3. Обе пакующие линии были получены на основе эмбриональных фибробластов мыши N1H3T3, в которые последовательно были встроены вирус-кодирующие последовательности gag, pol и env. Линия GP+envAml2 содержала белок env амфотропного вируса лейкемии мышей Молони (MLV), который способен взаимодействовать с рецепторами, присутствующими на клетках многих видов - от птиц до человека. Линия pgJ3 экспрессировала белок env вируса лейкемии гиббона (GaLV), который также проявляет тропизм к широкому спектру клеток-хозяев за исключением мыши.

2.2. Работа с культурой клеток

2.2.1. Культивирование клеток

Культивирование пакующих линий клеток, продуцирующих рекомби-нантный ретровирус, осуществляли в среде DMEM с добавлением 10% сыворотки плода коров (СПК), 2мМ L-глутамина, D-глюкозы (4-4,5 г/л) и антибиотика (гентамицина) в конечной концентрации 50 мкг/мл. L-глутамин обновляли каждые 14 дней. Пассирование клеток-«упаковщиц» проводили каждые 3-5 суток в соотношении 1:3, 1:5.

Для культивирования первичной культуры клеток молочной железы коровы, свиньи, козы и эмбрионов кур использовали ростовую среду следующего состава: 45% F-12, 45% DMEM, 10% СПК, 2мМ L-глутамин, гентами-цин (50 мкг/мл). В случае культивирования первичных клеток молочной железы в ростовую среду добавляли инсулин в конечной концентрации 3,5мкг/мл. Клетки пассировали каждые 3-5 суток в соотношении 1:3.

Снятие клеток с субстрата проводили с помощью 0,25% раствора трипсина, рН=7,6 (2,5г трипсина, 1г NaCl, 0,37г KCl, 0,15г Na2HP04) 0,24г КН2РО4, 1г D-глюкозы, Зг Tris, 1 мл фенолового красного растворяли в 1л деионизированной воды). Клетки после удаления ростовой среды промывали

94- 94

ФСБ без ионов Ca , Mg и инкубировали при 37°С 3-5 минут в растворе трипсина. Для инактивации трипсина использовали ростовую среду, содержащую сыворотку.

Криоконсервирование клеток осуществляли с использованием криопро-тектора диметилсульфоксида (ДМСО). Клетки в концентрации ЗЛО6 ресус-пензировали в криозащитной среде, включающей 10% ДМСО, 40% СПК, 50% БМЕМ, и замораживали в криопробирках при -70°С. Для длительного хранения клетки через сутки переносили в сосуд Дьюара с жидким азотом (-196°С).

2.2.2. Получение первичной культуры клеток молочной железы

Ткань молочной железы сразу после взятия помещали в физиологический раствор, содержащий гентамицин (100 мкг/мл.). В асептических условиях ткань переносили в чашку Петри и максимально измельчали с помощью ножниц, периодически промывая в физиологическом растворе. После удаления 0,9% раствора ЫаС1 путем низкоскоростного центрифугирования (1

2 Н тыс.об/мин) измельченную ткань помещали в раствор ФСБ без ионов Са , М£2+, хорошо пипетировали и центрифугировали при 1 тыс.об/мин в течение 5 мин. Эту процедуру повторяли 3 раза.

Для наиболее полной дезагрегации ткани использовали растворы 0,25% трипсина и коллагеназы. Максимально измельченную ткань инкубировали в растворе трипсина в течение 25-30 минут при 37°С, периодически помешивая, после чего для нейтрализации трипсина добавляли свежую ростовую среду, содержащую сыворотку, и центрифугировали при 1 тыс.об/мин. в течение 5 мин. К осадку добавляли свежую ростовую среду, хорошо пипетировали и высевали на чашки Петри (1=6см.

К оставшимся крупным кусочкам ткани приливали раствор коллагеназы (конечная концентрация 1мк1ткл) и выдерживали в течение 30 минут в термостате (+37°С), периодически помешивая. Среду, содержащую коллагеназу, удаляли путем низкоскоростного центрифугирования (1000 об/мин) в течение 5 минут. Осадок ресуспензировали в свежей ростовой среде и высевали на чашки Петри d=6cM.

2.2.3. Получение первичной культуры клеток эмбриона курицы

Извлечение эмбрионов кур из яиц осуществляли на 5-8 дни инкубации в асептических условиях. Эмбрион помещали в физиологический раствор, измельчали и центрифугировали при 1 тыс.об/мин в течение 5 минут. Осадок дополнительно промывали в растворе ФСБ без ионов Са2+, Mg2+, после чего измельченную ткань инкубировали в 0,25% растворе трипсина в течение 5-7 минут при 37 С, периодически помешивая. По истечению периода инкубации с целью инактивации трипсина добавляли свежую ростовую среду с сывороткой, хорошо пипетировали и центрифугировали при 1000 об/мин в течение 5 минут. Осадок ресуспензировали в свежей ростовой среде и высевали на чашки Петри d=6cM.

2.2.4. Трансформация клеток-мишеней in vitro ретровирусными векторами

Трансформацию клеток молочной железы и эмбрионов кур осуществляли путем совместного культивирования с клетками-«упаковщицами» и инфицирования культуральной жидкостью, содержащей рекомбинантный рет-ровирус [Новое в клонировании ДНК, 1989]. Частоту генетической трансформации определяли как отношение числа полученных генетически трансформированных клонов к общему числу инфицированных клеток.

Совместное культивирование с клетками-«упаковщицами». Клетки, продуцирующие ретровирус, высевали на чашки Петри диаметром 6 см в концентрации 4*105 клеток на чашку. Через сутки для подавления митоза клетки обрабатывали летальной дозой митомицина С (конечная концентрация 30мке4ш) в течении 4 часов, после чего промывали раствором ФСБ без ионов Са2+ и Mg2+ и заливали ростовой средой. На эту же чашку высевали клетки-мишени в концентрации 4*105 и одновременно добавляли полибрен конечная концентрация 8 мкг/кл). Клетки совместно культивировали в течение 2-3 дней до формирования полного монослоя, затем рассевали на чашки Петри (1=1 Осм для получения стабильных генетически трансформированных клонов. В качестве селективной среды использовали ростовую среду, содержащую 0418 (Оепсйст, С1Ьсо). Селекцию клеток проводили на протяжение 15-20 дней с 4-х суточной сменой среды.

Инфицирование культуральной жидкостью, содержащей рекомбинант-ный ретровирус. Клетки-мишени в концентрации 4*105 высевали на чашки Петри диаметром 6 см и культивировали 24 часа до формирования субкон-флуентного монослоя. После удаления ростовой среды клетки заливали 2 мл культуральной жидкости с добавлением полибрена (8 мкг/мл). С целью получения препарата с высоким титром сбор культуральной среды осуществляли на стадии, предшествующей формированию слитного монослоя, т.к. именно в этот период достигается максимальное содержание вируса в среде. При формировании монослоя на 80-90%, клетки помещали в новую ростовую среду и инкубировали 12-24 часа, после чего собирали вирус. Флотирующие клетки и клеточные обломки удаляли центрифугированием при 1000 об/мин. в течение 5 минут.

Инкубацию клеток-мишеней с культуральной жидкостью осуществляли в течение 16 часов при 37°С в присутствии С02. По прошествии времени инкубации среду, содержащую вирус, удаляли и приливали к клеткам свежую ростовую среду, после чего проводили предселективный период (24 часа) до следующего пассирования. Селекцию генетически трансформированных клонов осуществляли также как и при совместном культивировании с клетками-упаковщицами.

2.2.5. Введение ретровирусных векторов в клетки-мишени in vivo

2.2.5.1. Трансформация клеток молочной железы сельскохозяйственных животных

Трансформацию клеток молочной железы осуществляли путем множественной инъекции раствора генных конструкций непосредственно в паренхиму вымени взрослых животных (коров, коз и свиноматок). В качестве источника генных конструкций использовали как суспензию клеток-упаковщиц, так и культуральную жидкость, представляющую собой среду культивирования клеток-упаковщиц. Клетки-упаковщицы перед введением в молочную железу ресуспензировали в физиологическом растворе с высоким содержанием глюкозы (4-4,5 г/л). В полученную суспензию клеток добавляли полибрен в конечной концентрации 8 мкг/мл.

2.2.5.2. Введение генных конструкций в эмбрионы кур

Введение генных конструкций в эмбрионы кур осуществляли на разных стадиях развития эмбриона: до начала инкубации в зародышевый диск, на первый день инкубации непосредственно в эмбрион, на третий день - в дорсальную аорту. Для инъекций использовали как суспензию клеток-упаковщиц, так и культуральную жидкость, содержащую рекомбинантный ретровирус. Для получения инъекционного раствора клеток-упаковщиц, последние ресуспензировали в среде DMEM, содержащей полибрен (8мкг/мл). Культуральную жидкость также вводили с добавлением полибрена (8 мкг/мл), причем наряду с неконцентрированным вирусным препаратом использовали и концентрированный. Концентрирование культуральной среды проводили следующим образом. В суточный супернатант добавляли анион хондроитин сульфат С (CSC) в концентрации 80 мкскл и инкубировали в течение 10 минут при 37°С. Затем вносили катион полибрен (РВ) в той же концентрации и инкубировали еще 10 минут при 37°С. Среду, содержащую CSC и РВ удаляли путем центрифугирования при 10 тыс.об/мин в течение 5 минут. Осадок разводили в ростовой среде в нужной нам концентрации и использовали для работы.

2.3. Анализ на наличие генной конструкции

Выделение ДНК из крови, ткани и соматических клеток молока, осуществляли с использованием солевого и перхлоратного методов [,Зиновьева H.A. и др., 1998].

ПЦР проводили в объёме 20 мкл., применяя следующую инкубационную смесь: х10 буфер для ПЦР (166,7мМ (NH4)2S04; ЮОмМ Трис-HCl, рН=8,3; 1,5мМ MgCl2; 0,1% Tween 20); 0,2мМ dNTP, 25 пкмол каждого из праймеров, 1 ЕД Taq-полимеразы. ДНК для анализа брали в объёме 1,0 мкл. Праймеры, используемые для анализа, представлены в таблице 3.

Список литературы диссертационного исследования доктор биологических наук Волкова, Наталья Александровна, 2008 год

1. Абдрахманов, И.К. Характеристика линий клеток, упаковывающих рекомбинантные ретровирусные векторы в переносе экзогенной ДНК в клетки млекопитающих/ И.К. Абдрахманов //Автореф. дисс. . канд. биол. наук. - Дубровицы - 2001 - 21с.

2. Балаболкин, М.И. Секреция гормона роста в норме и патологии / М.И. Балаболкин М.: Медицина, 1978. - 173 с.

3. Балаболкин, М.И. Эндокринология / М.И. Балаболкин М.: Медицина, 1989.-416 с.

4. Брем, Г. Генные фермы новый путь производства биологически активных протеинов трансгенными животными / Г. Брем, H.A. Зиновьева, Л.К. Эрнст // Биотехнология - 1993 - №6 - С. 3-27.

5. Брем, Г. Трансгенные свиньи (mMTl- hGRF): оценка качества туш и химического состава мяса при убое животных / Г. Брем, Л.К. Эрнст, Л.А. Андропов // Генноинженерные сельскохозяйственные животные / Сб. науч. тр,-1995.-Вып. 1.- С.26-33.

6. Брем, Г. Экспериментальная генетика в животноводстве / Г.Брем, Х.Кройслих, Г.Штранцингер М.: РАСХН, 1995. - 326с.

7. Галат, В.В. Методы микроинъекции спермиев как инструмент вспомогательной репродукции и изучения биологии оплодотворения / В.В. Галат // Онтогенез 2000 - Т.31 - №1 - С.5-13.

8. Гистология / Под ред. Ю.И. Афанасьева, H.A. Юрина М.: Медицина, 2002. - 695с.

9. Глебов, O.K. Генетическая трансформация соматических клеток / O.K. Глебов-Л.: Наука, 1989-251 с.

10. Глик, Б. Молекулярная биотехнология: принципы и применение / Б. Глик, Дж. Пастернак. Пер. с англ. М.: Мир, 2002. - 589с.

11. Гольдман, И.Л. Молекулярно-биологические аспекты проблемы позиционно-независимой экспрессии чужеродных генов в клетках трансгепных животных / И.Л. Гольдман, C.B. Разин, Л.К. Эрнст, С.Г. Кадулин, М.А. Гращук // Биотехнология 1994 - N.2 - С.3-8.

12. Дыбан, А.П. Трансгенные млекопитающие: изучение фенотипиче-ских эффектов гена гормона роста человека, индуцированного животным / А.П. Дыбан, С.И. Городецкий // Биотехнология 1987 - N3 - С.352-357.

13. Завада, А.Н. Анализ хромосомной локализации фрагмента вируса лейкоза коров у трансгенных кроликов / А.Н. Завада // Молекулярно-генетические маркеры животных Киев: Аграрная наука, 1994. - С.56-57.

14. Зиновьева, H.A. Методические рекомендации по использованию метода полимеразной цепной реакции в животноводстве / H.A. Зиновьева,

15. A.Н. Попов, Л.К. Эрнст и др. Дубровицы: ВИЖ, 1998. - 47с.

16. Зиновьева, H.A. Трансгенные животные и возможности их использования: молекулярно-генетические аспекты трансгенеза в животноводстве / H.A. Зиновьева, Л.К. Эрнст, Г. Брем Дубровицы, ВИЖ, 2000. - 128с.

17. Кленовицкий, П.М. Анализ дифференциальной структуры хромосом у кролика, трансгенного по гену mMTI/bGHatt / П.М. Кленовицкий, М.М. Миталлипова, Т.Г. Цветкова // Бюлл. науч. работ ВИЖ.1. B.109. 1994 - С.80-83.

18. Кленовицкий, П.М. Мутационные изменения у трансгенных животных / П.М. Кленовицкий, A.A. Некрасов // Актуальные проблемы развития животноводства Дубровицы - 1998 - С.184-191.

19. Кленовицкий, П.М. Цитогенетика сельскохозяйственных животных / П.М. Кленовицкий, Л.Г. Моисейкина, Н.С. Марзанов Элиста: Джангар, 1999.- 142 с.

20. Кленовицкий, П.М. Ядрышкообразующие районы у трансгенных свиней (гпТ-1/hGRF) / П.М. Кленовицкий, А.Н. Завада, И.К. Живалев // Генноинженерные с.-х. животные. Сб. науч. тр. ВИЖ М. - Вып.1 - 1995 -С.64-68.

21. Кузнецов, A.B. Исследования переноса чужеродных генов сперматозоидами в яйцеклетки мидии Mytilus Galloprovincialis Lam. / A.B. Кузнецов, A.B. Пиркова, Г.А. Дворянчиков и др. // Онтогенез 2001 - Т.32 - №4 -С.309-318.

22. Лашас, JI.B. Соматотропин человека / JI.B. Лашас, Д.Г. Лашене -Вильнюс:Мокслас, 1981.- 143 с.

23. Медведев, С.Ю. Перенос гена рилизинг-фактора гормона роста человека кроликам, овцам и свиньям / С.Ю. Медведев // Автореф. дисс. . канд. биол. наук. С.- П.- Пушкин - 1992 - 17с.

24. Медведев, С.Ю. Рост и развитие трансгенных кроликов и свиней с перенесенным геном рилизинг-фактора гормона роста человека / С.Ю. Медведев, Л.В. Козикова, В.Г. Бавин, А.Ф. Яковлев // Сельскохозяйственная биология,- 1995.- №.6.- С. 43- 48.

25. Микроскопическая техника: Руководство / под ред. Д.С. Саркизова, Ю.П. Перова. М.: Медицина, 1996. - 544 с.

26. Новое в клонировании ДНК. Методы. / Под ред. Д. Гловера. М.: Мир, 1989. - 368с.

27. Прасолов, B.C. Ретровирусные векторы эффективная система переноса и экспрессии чужеродных генов в клетках млекопитающих / B.C. Прасолов // Молекулярная биология - 1989 - Т.23, вып.2. - С.8-12.

28. Ромейс, Б. Микроскопическая техника / Б. Ромейс. Пер. с нем. В.Я. Александрова, З.И. Кроковой М.: Изд.-во иностр. лит.-ры, 1953. - 718с.

29. Сингер, М. Гены и геномы / М. Сингер, П. Берг. Пер. с англ. М.: Мир, 1998.-391с.

30. Шатайло, В.Н. Биологические и продуктивные качества трансгенных свиней / В.Н. Шатайло, Л.К. Эрнст M: РАСХН, 2001. - 200 с.

31. Шевелуха, B.C. Сельскохозяйственная биотехнология / B.C. Шевелуха, Е.А. Калашникова, C.B. Дегтярев, Е.З. Кочиева, М.И.Прокофьев и др. М.: Высшая школа, 1998. - 416с.

32. Шихов, И .Я. Методические рекомендации по количественному определению нуклеиновых кислот в клетках и тканях сельскохозяйственных животных / И.Я. Шихов, М.П. Хамицеева, A.C. Лепнов и др. Дубровицы -1985 -28с.

33. Щелкунов, С.Н. Генетическая инженерия. 4.2. / С.Н. Щелкунов -Новосибирск: Изд-во Новосиб. ун-та, 1997. 400с.

34. Щит, И.Ю. Негативное действие экзогенной ДНК на оплодотворение / И.Ю. Щит, A.B. Кузнецов, С.А. Каурова, И.В. Кузнецова, В.В. Гусев // Проблемы репродукции 1998 - №4.

35. Эрнст, Л.К. Биотехнология сельскохозяйственных животных / Л.К. Эрнст, H.A. Зиновьева, Г.Брем М.: РАСХН, 2002. - 192с.

36. Эрнст, Л.К. Биотехнология сельскохозяйственных животных / Л.К. Эрнст, М.И. Прокофьев М.: Колос, 1995. - 192с.

37. Эрнст, Л.К. Генная инженерия в животноводстве: трансгенные сельскохозяйственные животные, кормовые растения, микроорганизмы рубца / Л.К. Эрнст, И.Л. Гольдман, С.Г. Кадулин // Биотехнология 1993 -N5 - С.2-14.

38. Эрнст, Л.К. Молекулярно-генетические аспекты в создании и использовании трансгенных сельскохозяйственных животных / Л.К. Эрнст, Н.А. Зиновьева // Вестник РФФИ. 2002. - №3(29). - С.56-65.

39. Aaronson, S.A. Endogenous type-C RNA viruses of mammalian cells / S.A. Aaronson, J.R. Stephenson // Biochim. Biophys. Acta. 1976. - V.458, P.323-354.

40. Adams, D.H. Cardiac xenotransplantation: clinical experience and future direction / D.H. Adams, R.N. Chen, A. Kadner // Ann. Thorac. Surg. 2000. -V.70. - P.320.

41. Ahearn, J.M. Rosengard A.M. Complement receptors // In: The Human Complement System In Health And Disease. Eds: J.E. Volanakis., M.M. Frank. New York: Marcel Dekker. 1998. - P. 167-202.

42. Akiyoshi, D.E. Identification of a full-length cDNA for an endogenous retrovirus of miniature swine / D.E. Akiyoshi, M. Denaro, H. Zhu, J.L. Greenstein, P. Banerjee et al. // J. Virol. 1998. - V.72. - P.4503-4507.

43. Alexander, L.J. Complete nucleotide sequence of bovine p-lactoglobulin gene / L.J. Alexander, G. Hayes, Bawden W., Stewart A.F., Mackinley A.G.// Animal Biotechnology. 1993. -1 - P. 1-10.

44. Ali, S. Characterisation of the gene encoding ovine B-lactoglobulin: mi-larity to the genes for retinol-binding protein and other secretory proteins/ S.Ali, A.J.Clarke // Mol. Biol. 1988.-V. 199. - P. 415-426.

45. Anderson, D.J. The role of complement component C3b and its receptors in sperm-oocyte interaction / D.J. Anderson, A.F. Abbott, R.M. Jack // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1993.- V.90. - P.10051-10055.

46. Archibald, A.L. Molekular Biological Approaches and their Possible Aplications, in J.W. Owen and R.F.E. Axford (eds), Breeding for Disease Resistance in Farm Animals / A.L. Archibald // C.A.B. International, UK. 1991. -P.100-122.

47. Archibald, A.L. High-level expression of biologically active human alpha 1-antitrypsin in the milk of transgenic mice / A.L.Archibald, M.McClenaghan, V.Hornsey, J.P. Simons, A.J. Clark // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1990. -V. 87. -P. 5178-5182.

48. Arezzo, F. Sea urchin sperm as a vector of foreign genetic information / F. Arezzo // Cell Biol. Int. Rep. 1989. - V.13 (4). - P.391-404.

49. Auchincloss, H.J. Xenogeneic transplantation / H.J. Auchincloss, D.H. Sachs // Annu. Rev. Immunol. 1998. - V.16. - P.433-470.

50. Bach, F.H. Barriers to xenotransplantation / F.H. Bach, et al. // Nature Medicine. 1995. - V.l. - P.869-873.

51. Bachiller, D. Liposome-mediated DNA uptake by sperm cells / D. Bachiller, K. Schellander, J. Peli, et al. // Mol. Reprod. Dev. 1991. - V.30 (3). -P. 194-200.

52. Bailey, L. Baboon-to-human cardiac xenotransplantation in a neonate / L. Bailey, S. Nehlsen-Canarella, W. Concepcion, et al. // Journal of the American Medical Association (JAMA). 1985. - V.254. - P.3321-3329.

53. Ballard, L. A polymorphism of the complement regulatory protein MCP (membrane cofactor protein or gp45-70) / L. Ballard, T. Seya, J. Teckman, et al. // J. Immunol. 1987. -V.138. -P.3850-3855.

54. Barash, I. Expression of B-lactoglobulin/human serum albumin fusion genes in transgenic mice: hormonal regulation and in situ localization / I.Barash, A.Faerman, T.Ratovitsky, R.Puzis, M.Nathan et al. // Transgenic Res. 1994. -V.3. - P. 141-151.

55. Barilla-LaBarca, M. Role of Membrane Cofactor Protein (CD46) in Regulation of C4b and C3b Deposited on Cells / M. Barilla-LaBarca, M. Liszewslci, J. Lambris, D. Hourcade, J. Atkinson // The Journal of Immunology. 2002. -V. 168. - P.6298-6304.

56. Barre-Sinoussi, F. Isolation of a T-lymphotropic retrovirus from a patient at risk for aquired immune deficiency syndrome (AIDS) / F. Barre-Sinoussi, J.C. Cherman, F. Rey, M.T. Nugeyre, S. Chamaret et al. // Science. 1983. V.220. -P.868-871.

57. Bawden, W.S. The genes encoding the major milk-specific proteins and their use in transgenic studies and protein engineering / W.S.Bawden, R.J.Passey, A.G. Mackinlay // Biotechnology and Genetic Engineering Reviews. 1994. - V. 12. - P. 89-137.

58. Bayna, E.M. Tissue-specific, high level expression of the rat whey adic protein gene in transgenic mice / E.M.Bayna, J.M. Rosen // Nucl. Acids Res. -1990.-V. 18. P.2977-2985.

59. Berardino, M. Development and chromosomal constitution of nuclear transplants derived from male germ cells / M. Berardino, M. Hoffher // J. of Exper. Zoology. 1976. - V.176( 1). - P.61-72.

60. Berggard, K. Bordetella pertussis binds the human complement regulator C4BP: role of filamentous hemagglutinin / K. Berggard, E. Johnsson, F.R. Mooi, G. Lindahl Infect. Immun. - 1997. - V.65. - P.3638-3643.

61. Bhatti, F. Survival of life-supporting HDAF transgenic kidneys in primates is enhanced by splenectomy / F. Bhatti, A. Zaidi, M. Schmoeckel, E. Cozzi,

62. G. Chavez et al. // Transplant. Proc. 1998. - V.30. - P.2467.

63. Bigam, D. Xenotransplantation / D. Bigam, R. Zhong, G. Levy, D. Grant //Can. J. Surg. 1999.-V.42.-P. 12-16.

64. Blake, J. Beta geo, a combined selection and reporter gene for retroviral and transgenic studies / J. Blake, P.S. Salinas, S.M. Hughes // Biotechnigues. — 1997. V.23(4). - P.690-695.

65. Bora, N.S. Membrane cofactor protein (MCP) of the complement system: a Hind III RFLP that correlates with expression polymorphism / N.S. Bora, T.W. Post, J.P. Atkinson // J. Immunol. 1991. - V. 146. - P.2821 -2825.

66. Borwompinyo, S. Germ-line transmission of a lacZ gene in chickens using an avian Spleen Necrosis Virus-based vector / S. Borwompinyo, D.W. McCoy, P.E. Mozdziak, J.N. Petitte // J. Anim. Sei., 79 (1), 54th Annu. Ree. Meat Conf., Vol. II, Abstr. 174,42.

67. Bosselman, R.A. Germline transmission of exogenous genes in the chicken / R.A. Bosselman, R.Y. Hsu, T. Boggs, S. Hu, J. Bruszewski et al. // Science. 1989. - V.243 (4890). - P.533-535.

68. Braskett, B.G. Uptake of heterologous genome by mammalian spermatozoa and its transfer to ova through fertilization / B.G. Braskett, W. Baranska, W. Sawicki et al. // Proc. Natl. Acad. Sei. 1971. - V.68. - P.353-357.

69. Brazolot, C.L. Efficient transfection of chicken cells by lipofection, and introduction of transfected blastodermal cells into the embryo / C.L. Brazolot // Mol. Reprod. Dev. 1991.-V.30.-P.304-312

70. Brem, G. Expression synthetic cDNA sequences encoding human insulinlike growth factor-1 (IGF-1) in the lammary gland of transgenic rabbits / G.Brem, P.Hartl, U.Besenfelder, E.Wolf, N.Zinovieva et al. // Gene. 1994. - V. 149. - P. 351-355.

71. Brem, G. Mammary and specific expression of chymosin constructs in transgenic rabbits / G.Brem, U.Besenfelder, N. Zinovieva, S J.eregi, L.Solti et al. // Theriogenology. 1995. - V. 43. - P. 175.

72. Brem, G. Production of foreign proteins in the mammary ands of transgenic mammals / G.Brem, U.Besenfelder, P. Hartl // Chimica Oggi. 1993. - V. 11.-P. 21-25.

73. Brem, G. Production of transgenic mice rabbits and pigs by microinjection into pronuclei / G. Brem, B. Brenig, H.M. Goodman, R.C. Seiden, F. Graf et al. // Zuchthygiene. 1985. - V. 20. - P. 251 - 252.

74. Brinster, R.L. Germline transmission of donor haplotype following spermatogonial transplantation / R.L. Brinster, M.R. Avarbock // Proc. Natl. Acad. Sei. 1994.-V.91.-P.l 1303-11307.

75. Brinster, R.L. No simple solution for making transgenic mice / R.L. Brinster, E.P. Sandgren, R.R. Behringer, A.F. Palmiter 1989. - V.59. - P.239-241.i

76. Buehler, T. Rabbit b-casein promoter directs secretion of human interleu-kin-2 into the milk of transgenic rabbits / T.Buehler, T.Bruyer, D.F.Went, G.Stranzinger, K.Buerki // Theriogenology. 1990. - V. 8. - P. 140-143.

77. Byrne, G.W. Protection of xeno-geneic cardiac endothelium from human complement by ex-pression of CD59 or DAF in transgenic mice / G.W. Byrne, K.R. McCurry, D. Kagan, C. Quinn, M.J. Martin et al. // Transplantation. 1995. -V.60.- P.l 149-1156.

78. Caffin, J.P. Physiological and pathological factors fluencing bovine a-lactalbumin and p-lactoglobulin concentrations in milk / J.P. Caffin, B. Poutrel, P.Rainard // J. Dairy Sei.- 1985.-V. 68. P. 1087-1094.

79. Capecchi, M.R. High efficiency transformation by direct microinjection of DNA into cultured mammalian cells / M.R. Capecchi // Cell. 1980. - V.22 (27). -P.9139-9143.

80. Carrington, C.A. Expression of human DAF and MCP on pig endothelial cells protects from human complement / C.A. Carrington, A.C. Richards, E. Cozzi, G. Langford, N. Yannoutsos, D.J. White // Transplantation Proceedings. 1995. -V.27 (1). - P.321.

81. Carsience, R.S. Germline chimeric chickens from dispersed donor blasto-dermal cells and compromised recipient embryos / R.S. Carsience // Development. 1993. - V. 117. - P.669-675.

82. Casasnovas, J.M. Crystal structure of two CD46 domains reveals an extended measles virus-binding surface / J.M. Casasnovas, M. Larvie, T. Stehle // EMBO J. 1999.-V.18.-P.2911-2922.

83. Castro, F.O. Introduction of foreign DNA into the spermatozoa of farm animals / F.O. Castro, et al. // Theriogenology. 1990. - V.34. - P. 1099-1110.

84. Chang, I.K. Germ line chimera produced by transfer of cultured chick primordial germ cells / I.K. Chang, A. Yoshiki, M. Kusakabe, A. Tajima, T. Chi-kamune et al. // Cell Biol Int. 1995. - V.19 (7). - P.569-576.

85. Chapman, L.E. Xenogenic infections and public health / L.E. Chapman // Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology. 1999. - V.26. -P.1005-1008.

86. Chapman, L.E. Xenotransplantation and xenogeneic infections / L.E. Chapman, T.M. Folks, D.R. Salomon, A.P. Patterson, T.E. Eggerman et al. // New England Journal of Medicine. 1995. - V.333 - P.1498-1501.

87. Chapman, S.C. Ubiquitous GFP expression in transgenic chickens using a lentiviral vector / S.C.Chapman, A.Lawson, W.C. Macarthur, R.J.Wiese, R.H. Loechcl et al. // Development 2005 - V. 132. - P.935-940.

88. Chong, H. Replication-competent retrovirus produced by a 'split-function' third generation amphotropic packaging cell line / H. Chong, R.G. Vile // Gene Ther. 1996. - V.3. - P.624-629.

89. Clark, A.J. Pharmaceuticals from transgenic livestock. / A.J. Clark // Trends Biotechnol. 1987. - V.5. P.20-24.

90. Clark, A.J. Expression of human anti-gemophilic Factor IX in the milk of transgenic sheep / Clark A.J., Bessos H., Bishop J.O., Brown P., Harris S. et al. // BioTechnology. 1989. - V.7. - P.487-492.

91. Clark, A.J. Expression of human anti-hemophilic factor ix in the milk of transgenic sheep / A.J. Clark, H. Bessos, J.O. Bishop et.al. Bio/Tech. - 1989. -V.7. - P.487-492.

92. Clark, A.J. Expression of human antihemophilic factor IX in the milk of transgenic sheep / A.J. Clark // Biotechnology. N 7. - 1989. - P.487-492.

93. Clark, A.J. Gene targeting in livestock: a preview / A.J. Clark, S. Burl, C. Denning, P. Dickinson Transgenic Research. - 2000. - V.9. - P.263-275.

94. Coffin, J.M. Structure and classification of retroviruses. In 'The Retrovi-ridae' (ed. L.A. Levy) / J.M. Coffm // Plenum Press, NY. 1992. - P. 19-49.

95. Cone, R.D. High-efficiency gene transfer into mammalian cells: generation of helper-free recombinant retrovirus with broad mammalian host range / R.D. Cone, R.C. Mulligan // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1984. - V.81. - P.6349-6353.

96. Constantini, F. Insertional mutations in transgenic mice / F. Constantini, G. Radoce, G. Lee // Progr. Nucl. Acid Res. And Mol. Biol. San Diego. 1989. -V.36. - P.159-169.

97. Cooper D., Lanza R. // In: Xeno: the promise of transplanting animal organs into humans // Oxford Univ. Press. 2000. - P. 180-184.

98. Cosset, F.L. A new avian leukosis virus-based packaging cell line that uses two separate transcomplementing helper genomes / F.L. Cosset // J. Virol. -1990.-V.64.-P. 1070-1078.

99. Cosset, F.L. Packaging cells for avian leukosis virus-based vectors with various host ranges / F.L. Cosset // J. Virol. 1992. - V.66. - P.5671-5676.

100. Cozzi, E. The generation of transgenic pigs as potential organ donors for humans / E. Cozzi, D. White // Nature Medicine. 1995. - V. 1. - P.964-966.

101. Dahlback, B. Protein S and C4b-binding protein: components involved in the regulation of the protein C anticoagulant system / B. Dahlback // Thromb Haemost. -1991.- V.66. P.49-61.

102. Das, R.C. Production of therapeutic proteins from transgenic animals / R.C. Das // BioBusiness. 2001. - Feb. - P.60-62.

103. Davies, A. Policing the membrane: cell surface proteins which regulate complement / A. Davies // Res. Immunol. 1996. - V.147. - P.82-87.

104. De Rooij, D.G. Proliferation and differentiation of spermatogonial stem cells / D.G. De Rooij //Reproduction. 2001. - V. 121. - P.347-354.

105. Deacon, T. Histologic evidence of fetal pig neural cell survival after transplantation into a patient with Parkinson's disease / T. Deacon, J. Schumacher, J. Dinsmore, C. Thomas, P. Palmer et al. // Nature Medicine. 1997. - V.3. -P.350-353.

106. Denman, J. Transgenic expression of a variant of human tissue-type plasminogen activator in goat milk: purification and characterization of the recombinant enzyme / J. Denman // Biotechnology. 1991. - V.9. - P.839-843.

107. Diamond, L. Characterization of transgenic pigs expressing functionally active human CD59 on cardiac endothelium / L. Diamond, K. McCurry, M.J. Martin, S. McLennan, E. Oldham et al. // Transplantation. 1996. - V.61. -P. 1241.

108. Diamond, L.E. Human CD59 expressed in transgenic mouse hearts inhibits the activation of complement / L.E. Diamond, K.R. McCurry, E.R. Oldham, M. Tone, H. Waldmann et al. // Transpl. Immunol. 1995. - V.3. -P.305-312.

109. DiTullio, P. Production of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator in the milk of transgenic mice / P. DiTullio, S.H Cheng., J. Marshall, RJ.Gregory, K.M.Ebert et al. // Biotechnology. 1992. - V. 10. - P. 74-77.

110. Dobrovolsky, V.N. Human gamma-interferon expression in the mammary gland of ansgenic mice / V.N.Dobrovolsky, O.V.Lagutin, T.V.Vinogradova, I.S.Frolova, P.Kuznetsov et al.//FEBS Lett. 1993. -V. 319. - P. 181-184.

111. Dolci, S. Combined action of stem cell factor, leukemia inhibitory factor and cAMP on in vitro proliferation of mouse primordial germ cells / S. Dolci, M. Pesce, M. de. Felici // Mol. Reprod. Dev. 1993. - V.35 - P. - 134-139.

112. Donahue, R.E. Helper vims induced T-cell lymphomas in non-human promates after retroviral mediated gene transfer / R.E. Donahue, S.W. Kessler, D. Bodine, K. McDonagh, C. Dunbar et al. // J. Exp. Med. 1992. - V.176. - P.l 1251135.

113. Dorig, R.E. CD46, a primate-specific receptor for measles virus / R.E.

114. Dorig, A. Marcil, C.D. Richardson // Trends Microbiol. 1994. - V.2. - P.312-318.

115. Dym, M. Expression of c-kit receptor and its autophosphorylation in immature rat type A spermatogonia / M. Dym, M.-C. Jia, G. Dirami, J.M. Price // Biology of reproduction. 1995 - V.52. - P.8-19.

116. Ebert, K.M. Porcine growth hormone gene expression from viral promotors in transgenic swine / K.M. Ebert, T.E. Smith, F.C. Buonoma, E.W. Overstrom // Animal Biotechnology. 1990. - V.l. - P. 145-159.

117. Ebert, K.M. Transgenic production of a variant of human tissue-type plasmingen activator in goat milk: generation of transgenic goats and analysis of expression / K.M. Ebert, J.P. Selgrath, P. Ditullo et el. // BioTechnology. N 9. -1991. - P.835-838.

118. Ebert. K.M. Induction of human tissue asminogen activator in the mammary gland of transgenic goats / K.M.Ebert, P.DiTullio, C.A.Barry, J.E.Schindler, S.L.Ayers et al. // Biotechnology. -1994.-V. 12. P. 699-702.

119. Emery, D.W. Development of a condensed locus control region cassette and testing in retrovirus vectors for a gamma-globin / D.W. Emery // Blood Cells Mol Dis. V.24 (3). - 1998. - P.322-339.

120. Erickson, R.P. Minireview: creating animal models of genetic diseases / R.P. Erickson //Amer. J. Hum. Genet. 1988. - V.43. - P.382-386.

121. Ernst, L.K. Transgenic rabbits with antisense RNA gene targeted at adenovirus H.5 / L.K. Ernst, V.I. Zaharchenko, N.M. Suraeva, T.I. Ponomoreva, O.I. Miroshnichenk et al. // Theriogenology. 1991. - V.35. - P. 1257-1271.

122. Evans, M.G. Establishment in culture of plurepotential cells from mouse embryos / M.G. Evans, M. Kaufman //Nature. 1982. - V.292. - P. 154-156.

123. Eyal-Giladi, H. Avian primordial germ cells are of epiblastic origin / H. Eyal-Giladi, M. Ginsburg, A. Farbarov // J Embryol Exp Morphol. 1981. - V.65.- P.139-147.

124. Fabre, J.W. Nudging xenotransplantation towards humans / J.W. Fabre // Nature Medicine 1995. - V.l. -P.403-404.

125. Fearon, D.T. Identification of the membrane glycoprotein that is the C3b receptor of the human erythrocyte, polymorphonuclear leukocyte, B lymphocyte and monocyte / D.T. Fearon // J. Exp. Med. 1989. - V.l52. - P.20.

126. Fearon, D.T. The CD 19/CR2/TAPA-1 complex of B lymphocytes: linking natural to acquired immunity / D.T. Fearon, R.H. Carter // Annu. Rev. Immunol. 1995. - V.l3. - P. 127-149.

127. Fischer, E. Characterization of the human glomerular C3 receptor as the C3b/C4b complement type one (CR1) receptor / E. Fischer, M. D. Appay, J. Cook, M.D. Kazatchkine // J. Immunol. 1986. - V.l36. - P. 1373.

128. Folch, J.M. Complete sequence of the caprine B-ttoglobulin gene / J.M. Folch, A.Coll, A.Sanchez//J. Dairy Sci. 1994. -V. 77. - P. 3493-3497.

129. Fransolini, M. Evidence for nuclear internalization of exogenous DNA into mammalian sperm cells / M. Fransolini et al. // Mol. Reprod. and Dev. 1993.- V.34. -P.133-139.

130. Fraser, R.A. Efficient incorporation of transfected blastodermal cells into chimeric chicken embryos / R.A. Fraser // Int. J. Dev. Biol. 1993. - V.37. -P.381-385.

131. Gahne, M.B. Electroporation of bovine spermatozoa to carry foreign DNA in oocytes / M.B. Gahne, F. Pothier, M.A. Sirard //Mol. Reprod. Dev. -1991.-V.29.-P.6-15.

132. Galili, U. A unique natural human IgG antibody with anti-alphagalactosyl specificity / U. Galili, E.A. Rachmilewitz, A. Peleg, I. Flechner // J. Exp. Med. 1984. - V. 164. - P. 1519.

133. Gallo, R.C. Frequent detection and isolation of cytophatic retroviruses (HTLV-III) from patients with AIDS and at risk for AIDS / R.C. Gallo, S.Z. Sala-huddin, M. Popovic, G.M. Shearer, M. Kaplan et al. // Science. 1984. - V.224. -P.500-503.

134. Gandolfi, F. Spermatozoa, DNA binding and transgenic animals / F. Gandolfi // Trasgenic Research. 1998. - V.7. - P.147-155.

135. Gilbert, A.B. Egg albumen and its formation / A.B. Gilbert // Physiology and Biochemistry of the Domestic Fowl (Bell, D.J., Free, B.M. eds), Academic Press. 1984.-pp. 1291-1329.

136. Gordon, J.W. Genetic transformation of mouse embryos by microinjection of purified DNA / J.W. Gordon, G.A. Scangos, D.J. Plotkin, J.A. Barbosa, F.H. Ruddle // Proc. Natl. Acd. Sci. USA. 1980. - V.77. - P.7380-7384.

137. Gorodetskii, S.I. Isolation and characterisation Ithe bos taurus b-casein gene / S.I.Gorodetskii, T.M.Tkach, T.V. Kapelinskaya // Gene. 1988. - V. 66. -P. 87-96.

138. Gottschalk, S. Synthetic vehicles for effecient gene transfer and expression in mammalian cells / S. Gottschalk // J. Cell Biochem. Suppl. 21a. - 1995. -P.393.

139. Gray, D.A. Insertional mutagenesis: neoplasia arising from retroviral integration / D.A. Gray // Cancer Invest. 1991. - V.9. - P.295-304.

140. Grosovsky, A.J. Insertional inactivation of the tk-locus in a human B lymphoblastoid cell line by a retroviral shuttle vector / A.J. Grosovsky, A. Skandalis, L. Hasegawa, B.N Walter // Mutat. Res. 1993. - V.289. - P.297-308.

141. Gruendbaum, J. Sperm cells as vectors for generation of transgenic chickens / J. Gruendbaum, E. Revel, S. Yarns, A. Fainsod //J. Cell Biochem. -1991.-Suppl.15.-P.194.

142. Guenzburg, W.H. A mammary-specific romoter directs expression of growth hormone not only to the mammary gland, but also to Bergman glia cells in transgenic mice / W.H.Guenzburg, B.Salmons, B.Zimmerman // Mol. Endocr. -1991. -V. 5. P. 123-33.

143. Hammer, R.E. Production of transgenic rabbits, sheep and pigs by microinjection / R.E. Hammer, V.G. Pursel, C.E. Rexroad, R.J. Wall, D.J. et al. // Nature. 1985.- V.315. - P.680-683.

144. Han, J. Y. Production of germline chimeras by transfer of chicken gonadal primordial germ cells maintained in vitro for an extended period / J.Y.Han, T.S. Park, Y.H. Hong, D.K. Jeong, J. N. Kim et al.// Theriogenology. 2002. -V.58. - P.1531-1539.

145. Hancock, W.W. Beyond hyperacute rejection: strategies for development of pig-to-primate xenotransplantation / W.W. Hancock // Kidney Int. 1997. -V.58. - P.36-40.

146. Hansson, L. Structure of the human b-casein encoding gene / L.Hansson, A.Edlund, J. Tohhansson, O.Hernell, M.Stromqvist et al. // Gene. 1994. -V. 13. -P. 193-199.

147. Harvey, A.J. Expression of exogenous protein in the egg white of transgenic chickens / A.J. Harvey // Nat. Biotechnol. 2002. - V.20. - P.396-399.

148. Heneine, W. No evidence of infection with porcine endogenous retrovirus in recipients of porcine islet-cell xeno-grafts / W. Heneine, A. Tibell, W.M. Switzer, P. Sandstrom, G.V. Rosales et al. // Lancet. 1998. - V.352. -P.695-699.

149. Hill, K.G. Production of transgenic cattle by pronuclear injection / K.G. Hill, J.Curry, F.J. DeMayo, K. Jones-Diller, J.R. Slapak // Theriogenology. 1992. -V.37.-P.222.

150. Hitchin, E. Bovine beta-casein expressed in transgenic mouse milk is phosphorylated and incorporated to micelles/ E.Hitchin, E.M.Stevenson, A.J.Clark, M.McClenaghan, J.Leaver // Protein Expr. Purif. 1996. - V. 7. - № 3. - P. 247252.

151. Hochi, S. Fate of exogenous DNA carried into mouse eggs spermatozoa / S. Hochi, T. Ninomiya, A. Mizuno, M. Honma, A. Yuki //Anim. Biotech. 1990. - V.1.-P.21-31.

152. Hu, S. Generation of competent virus in the REV helper cell line C3 / S. Hu, J. Bruszewski, M. Nicolson, J. Tseng, R.Y. Hsu et al. // Virology. 1987. -V. 159. - P.446-449.

153. Hyttinen, J.M. Generation of transgenic dairy cattle from transgene analysed and sexed embryos produced in vitro / J.M. Hyttinen, T.Peura, M.Tolvanen, J.Aalto, L. Alhonen et al. // BioTechnology. 1994. - V.12. - P. 606-608.

154. Ibanez, E. Expression of caprine beta-lactoglobulin in the milk of transgenic mice / E. Ibanez, J.M.Folch, F.Vidal, A.Coll, J.Santalo et al. // Transgenic les. 1997. -V. 6. - P. 69-74.

155. Ivarie, R. Avian transgenesis: progress towards the promise // Trends Biotechnol. -2003. V.21. - P. 14-19.

156. Izadyar, F. Spermatogonial stem cell transplantation / F. Izadyar, F. van Dissel-Emiliani, A. van Pelt, D.G. de Rooij // Molecular and Cellular Endocrinology. 2000. - V. 169. - P.21-26.

157. Jiang, F.X. Behaviour of spermatogonia following recovery from busul-fan treatment in the rat / F.X. Jiang // Anat. Embryol. 1998. - V.198 (1). - P.53-61.

158. Jin, H. Expression of porcine endogenous retrovirus in peripheral blood leukocytes from ten different breeds / H. Jin, Y. Inoshima, D. Wu, A. Morooka, H. Sentsui // Transplant Infectious Disease. 2000. - V.2. - P. 11-14.

159. Jones, W.K. The rat casein mltigene family. Fine structure and the evolution of the b-casein gene / W.K.Jones, L.-Y.Yu-Lee, S.M.Clift, T.L.Brown, J.M. Rosen// Biol. Chem. 1985.- V. 260. - P. 7042-7050.

160. Kagan, D. Expression of complement regulatory factors using heterologous promoters in transgenic mice / D. Kagan, L. Piatt, J. Logan, G. Byrne // Transpl. Proc. 1994. - V.26. - P. 1242.

161. Kamihira, MTransgenic birds for the production of recombinant proteins / M.Kamihira, K.Nishijima, S.Iijima // Adv. Biochem. Eng. Biotechnol. -2004.-V.91.-P.171-189.

162. Karagenc, L. Soluble factors and the emergence of chick primordial germ cells in vitro / L. Karagenc, J.N.Petitte // Poult. Sci.- 2000. V.79. - P.80-85.

163. Khoo, H.-W. Sperm-mediated gene transfer: a review / H.-W. Khoo, J. Patil, E. Chen // SEAMEO Jasper Fellowship Monograph 1993 Seriesl. 1993. -P.75-92.

164. Kiies, W. A. The contribution of farm animals to human health / W. A. Kiies, H. Niemann // Trends Biotechnol. 2004 - V.22. - P.286-294.

165. Kim, J.H. Development of a positive method for male stem cellmediated gene transfer in mouse and pig / J.H. Kim, H.S. Jung-Ha, H.T. Lee, et al. // Mol. Reprod. Dev. 1997. - V.46. - P.515-526.

166. Kitamura, M. Possible association of infertility with sperm-specific abnormality of CD46 / M. Kitamura, M. Matsumiya, M. Yamanaka, S. Takahara, T. Hara et al. // J. Reprod. Immunol. 1997. - V.33. - P.83-88.

167. Ko, J.H. Production of biologically active human granocyte colony stimulating factor in the milk of transgenic goat / J.H. Ko // Transgenic Reseach. V. 9. - 2000. - P.215-222.

168. Koczan, G.,Genomic organisation of the bovine aSl-asein gene / G.Koczan, G.Hobom, H.-M. Seyfert // Nucl. Acids Res. 1991. - V. 19. - P. 55915596.

169. Kooyman, D.L. In vivo transfer of GPI-linked complement restriction factors from erythrocytes to the endothelium / D.L. Kooyman, G.W. Byrne, S. McClellan, D. Nielsen, M. Tone et al. // Science 1995. - V.269. - P.89-92.

170. Korhonen, V.P. Expression of bovine beta-lactoglobulin human erythropoietin fusion protein in the milk of transgenic mice and rabbits / V.P. Korhonen, M. Tolvanen, J.M. Hyttinen // Eur. J. Biochem. 1997. - V.15. - P.482-489.

171. Krimpenfort, P. Generation of transgenic dairy cattle using in vitro embryo production / P. Krimpenfort, A. Rademakers, W. Eyestone, A. van der Schans, S. van den Broek et al. // Bio.Tech. 1991. - V.9. - P.844-847.

172. Lai, L.X. Production of alpha-1,3-galactosyltransferase knockout pigs by nuclear transfer cloning / L.X. Lai, D. Kolber Simonds, K.W. Park, H.Y. Cheong, J.L. Greenstain et al. // Science. - 2002. - V.295 (5557). -P.1089-1092.

173. Lambris, J.D. The chemistry and biology of C3, C4, and C5 / J.D. Lambris, A. Sahu, R. Wetsel // In: Volanakis J.E., Frank M. Eds. The Human Complement System in Health and Disease. Marcel Dekker, New York. 1998. -P.83-118.

174. Lampe, DJ. Factors affecting transposition of the Himarl mariner trans-poson in vitro / D.J. Lampe // Genetics. 1998. - V.149. - P. 179-187.

175. Larsson, E. Human endogenous pro viruses / E. Larsson, N. Kato, M. Cohen // Curr. Top. Microbiol, Immunol. 1989. - V.148. - P. 115-132.

176. Lavitrano, M. Sperm cells as vectors for introducing foreign DNA into eggs: genetic transformation of mice / M. Lavitrano, A. Camaioni, V.M. Fasio, et al. // Cell. 1989. - V.57. - P.717-723.

177. Lavitrano, M. The interaction of sperm cells with exogenous DNA a role of CD4 and major histocompatibility complex class II molecules / M. Lavitrano, B. Maione, E. Forte, M. Francolini, S. Sperandio, et al. // Exp. Cell Res. -1997. - V.233. - P.56-62.

178. Le Tissier, P. Two sets of human-tropic pig retrovirus / P. Le Tissier, J.P. Stoye, Y. Takeuchi, C. Patience, R.A. Weiss // Nature 1997. - V.389. - P.681

179. Lee, C.S. An efficient expression of human growth hormone (hGH) in the milk of transgenic mice using rat beta-casein/hGH fusion genes / C.S.Lee, K.Kim, D.Y.Yu, K.K. Lee // Ippl. Biochem. Biotechnol. 1996. -V. 56. - P. 211222.

180. Lee, K.F. Tissue-specific expression of le rat p-casein gene in transgenic mice / K.F.Lee, F.J.DeMayo, S.H.Atiee, J.M. Rosen // Nucl. Acids Res. 1988. -V. 16. - P.1027-1041.

181. Levy, J.A. Isolation of lymphocytopathic retroviruses from San Francisco patients with AIDS / J.A. Levy, A.D. Hoffmann, S.M. Kramer, J.A. Landis, J.M. Shimabukuro et al. // Science. 1984. - V.225. - P.840-842.

182. Li, Y. Ballistic transfection of avian primordial germ cell in ovo / Y. Li, J. Behnam, K. Simkiss // Transgenic Res. 1995. - V.4 (1). - P.26-29.

183. Lindenmann, J. Inheritance of resistance to influenza virus in mice / J. Lindenmann Proc. Soc. Exp. Biol. Med. - 1964. - V.l 16. - P.506-509.

184. Linial, M. An avian oncovirus mutant (SE21Qlb) deficient in genomic RNA: biological and biochemical characterization. / M. Linial, E. Medeiros, W.S Hayward // Cell. 1978. - V.15. - P.1371-1381.

185. Linial, M. Transfer of defective avian tumor virus genomes by a Rous sarcoma virus RNA packaging mutant / M. Linial // J. Virol. 1981. - V.38. -P.380-382.

186. Lipinski, D.Transgenic rabbit producing human growth hormone in milk / D. Lipinski, J. Jura, R.Kalakl, A. Plawski, M. Kala, M. Szalata. // J. Appl. Genet. 2003. - 44(2). - P. 165-174.

187. Liszewski, M.K. Membrane cofactor protein (MCP or CD46): newest member of the regulators of complement activation gene cluster / M.K. Liszewski,

188. T.W. Post, J.P. Atkinson//Ann. Rev. Immunol. 1991. - V.9. -P.431-455.

189. Logan, J.S. Potential use of genetically modified pigs as organ donors for transplantation into humans / J.S. Logan, A. Sharma // Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology 1999. - V.26. - P. 1020-1025.

190. Love, J. Transgenic birds by DNA microinjection / J. Love // Biotechnology. 1994. - V. 12. - P.60-63.

191. Lower, R. Identification of human endogenous retroviruses with complex mRNA expression and particle formation / R. Lower, K. Boiler, B. Hasenmaier, C. Korbmacher, N. Muller-Lantsch et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1993. -V.90. - P.4480-4484.

192. Maga, E.A. Expression of human fsozyme mRNA in the mammary gland of transgenic mice / E.A.Maga, G.B.Anderson, M.C.Huang, J.D. Murray // Transgenic Res. 1994. - V.3.-P. 36-42.

193. Maga, E.A. Mammary gland expression of transgenes and the potential for altering the properties of milk / E.A.Maga, J.D. Murray // Biotechnol. 1995. -V.13. - P.1452-1457.

194. Makowka, L. The use of a pig liver xenograft for temporary support of a patient with fulminant hepatic failure / L. Makowka, D.V. Cramer, A. Hoffman // Transplantation. 1995. - V.59. - P. 1654-1659.

195. Malhotra, R. Identification of human complement factor H as a ligand for L-selectin / R. Malhotra, M. Ward, R.B. Sim, M.T. Bird // Biochem. J. 1999. -V.341. - P.61-69.

196. Mann, R. Construction of a retrovirus packaging mutant and its use to produce helper-free defective retrovirus / R. Mann, R.C. Mulligan, D. Baltimore // Cell. 1983. - V.33. - P. 153-159.

197. Manon, K. Prenatal letality in a transgenic mouse line is the result of a chromosomal translocation / K. Manon, P. Overbeek, H. Westphal // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1988. - V.85. - P. 1165-1168.

198. Mark, W. An insertional mutation in a transgenic mouse line results in developmental arrest at day 5 of gestation / W. Mark, E. Signorelli, E. Lacy // Cold

199. Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 1985. - P.453-460.

200. Martin, U. Expression of pig endogenous retrovirus by primary porcine endothelial cells and infection of human cells / U. Martin, V. Kiessig, J.H. Blusch, A. Haverich, K. von der Helm et al. // Lancet. 1998. - V.352. - P.692-694.

201. Massoud, M. The deleterious effects of human erythropoietin gene driven by the rabbit whey acidic protein gene promoter in transgenic rabbits / M. Massoud, J. Attal, D. Thepot// Reprod. Nutr. Dev. 1996. - V.36. - P.555-563.

202. Mccreath, K.J. Production of genetargered sheep by nuclear transfer from cultured somatic cells / K.J. Mccreath, J. Howcroft, K.H.S. Campbell, A. Colman, A.E. Shnieke et al. // Nature. 2000. - V.405 (6790). - P. 1066-1069.

203. McCurry, K.R. Human complement regulatory proteins protect swine-to-primate cardiac xenografts from humoral injury / K.R. McCurry, D.L. Kooyman, C.G. Alvarado, A.H. Cotterell, M.J. Martin et al. // Nat. Med. 1995. - V.l. -P.423-427.

204. McGrew, M. J. Efficient production of germline transgenic chickens using lentiviral vectors / M. J.McGrew, A.Sherman, F.M.Ellard, S.G.Lillico, H. J.Gilhooley et al. // F.MBO Rep. 2004. - V.5. - P.728-733.

205. Meade, H. Bovine alpha SI-casein gene equences direct high level expression of active human urokinase in mouse milk / H.Meade, L Gates, E.Lacy, N.Lonberg // Biotechnology. 1990. - V. 8. - P. 443-446.

206. Meri, S. Distribution of protectin (CD59), a complement membrane attack inhibitor, in normal human tissues / S. Meri, H. Waldmann, P.J. Lachmann

207. Laboratory Investigation. 1991. - V.65 (5). - P.532.

208. Michaels, M.G. Xenotransplant-associated zoonoses. Strategies for prevention / M.G. Michaels, R.L. Simmons // Transplantation. 1994. - V.57. -P.1-7.

209. Miller, A.D Retroviral packaging cells./ A.D. Miller // Hum. Gene Ther. 1990.-V.l.-P.5-14.

210. Miller, A.D. Generation of helper-free amphotropic retroviruses that transduce a dominant-acting, methotrexate-resistant dihydrofolate reductase gene / A.D. Miller, M.F. Law, I.M. Verma // Mol. Cell. Biol. 1985. - V.5. - P.431-437.

211. Miller, A.D. Redesign of retroviral packaging cell lines to avoid recombination leading to helper virus production / A.D. Miller, C. Buttimore // Mol. and Cell. Biol. 1986. - V.6. - P.2895-2902.

212. Miyagawa, S. In vitro and in vivo studies to prevent hyperacute rejection / S. Miyagawa, M. Mikata, H. Matsuda, M. lkawa, M. Okabe et al. // Transplantation Proceedings. 1996. - V.28 (2). - P. 1031.

213. Miyagawa, S. The mechanism of discordant xenograft rejection / S. Miyagawa, H. Hirose, R. Shirakura, Y. Naka, S. Nakata et al. // Transplantation. -1988. V.46. - P.825-830.

214. Mollnes, T.E. Xentransplantation: how to overcome the complement obstacle? / T.E. Mollnes, A.E. Fiane // Molecular Immunology. 1999. - V.36. -P.269-276.

215. Morgan, B.P. Complement Regulatory Proteins / B.P. Morgan, C.L. Harria // San Diego: Academic Press. 1999.

216. Mozdziak, P. E. Isolation of chicken primordial germ cells using fluorescence-activated cell sorting / P.E.Mozdziak, J. Angerman-Stewart, B. Rushton, S. L. Pardue, J. N. Petitte // Poult. Sci.-2005.-V.84.-P.594-600.

217. Mozdziak, P.E. Development of transgenic chickens expressing bacterial beta-galactosidase / P.E. Mozdziak, S. Borwornpinyo, D.W. McCoy, J.N. Petitte // Dev Dyn. 2003. - V.226 (3). - P.439-445.

218. Muller, M. Transgenic strategies to increase disease resistance in livestock / M.Miiller, G.Brem // Reproduction Fertility and Development. 1996. -V.6.-P. 605-613.

219. Muller, M. Disease resistance of farm animals / M. Muller, G. Brem -Experientia. 1991.

220. Murakami, H. Production of transgenic pigs expressing human DAF (CD55) regulated by the porcine MCP promoters / H. Murakami, H. Nagashima, Y. Takahagi, T. Fujimura, S. Miyagawa et al. // Transplant. Proc. 2001. - V.32. - P.2505-2506.

221. Murray, J.D. The production of transgenic Merino sheep by microinjection of ovine metallothionein-ovine growth hormone fusion genes / J.D. Murray , C.D.Nancarrow, J.T.Marshall, I.G. Flazelton, K.A.Ward // Reprod. Fert. Dev. -1989- V.1.-P.147-155.

222. Naito, M. Production of germline chimeric chickens, with high transmission rate of donor-derived gametes, produced by transfer of primordial germ cells / M. Naito, A. Tajima, Y. Yasuda, T. Kuwana // Mol Reprod Dev. 1994. - V.39 (2). - P.153-161.

223. Nakanishi, A. Gene transfer in the chicken by sper-mediated methods / A. Nakanishi, A. Iritani //Mol. Reprod. Dev. 1993. - V.36. - P.258-261.

224. Naldini, L. In vivo gene delivery and stable transduction of nondividing cells by a lentiviral vector / L. Naldini, U. Blomer, P. Gallay, D. Ory, R. Mulligan et al. // Science. 1996. - V.272. - P.263-267.

225. Naniche, D. Human membrane cofactor protein (CD46) acts as a cellular receptor for measles virus / D. Naniche, G. Varior-Krishnan, F. Cervoni, T.F. Wild, B. Rossi et al. // J. Virol. 1993. - V.67. - P.6025-6032.

226. Nicholson-Weller, A. Structure and function of decay accelerating factor CD55 / A. Nicholson-Weller, C.E. Wang // J. Lab. Clin. Med. 1994. - V.123. -P.485-491.

227. Niekrasz, M. The pig as organ donor for man / M. Niekrasz, Y. Ye, L.L. Rolf// Transplant. Proc. 1992. - V.24. - P.625.

228. Nilson, B.H.K. Targeting of retroviral vectors through protease- substrate interactions / B.H.K. Nilson //Gene Ther. 1996. - V.3. - P.280-286.

229. Ninomiya, H. The human complement regulatory protein CD59 binds to the alpha-chain of C8 and to the "b"domain of C9/ H. Ninomiya, P.J. Sims // Journal of Biological Chemistry. 1992. - V.267 (19). - P.13675.

230. Ninomiya, T. Functions of milk protein gene flanking regions oh human growth hormone gene / T.Ninomiya, M.Harabayashi, J.Sagara, A. Yuki // Mol. Reprod. Dev. 1994. - V.37. - P. 276-283.

231. Nocka, K. Expression of c-kit gene products in known cellular targets of W mutations in normal and W mutant mice-evidence for an impaired c-kit kinase in mutant mice / K. Nocka, S. Majumder, B. Chabot, et al. // Genes Dev. 1989. -V.3. - P.816-826.

232. Norin, A.J. Enhanced survival of porcine endothelial cells and lung xenografts expressing human CD59 / A.J. Norin, R.J. Brewer, N. Lawson, G.A. Grijalva, M. Vaynblatt et al. // Transplant. Proc. 1996. - V.28. - P.797-798.

233. Norman, D.G. Three-dimensional structure of a complement control protein module in solution / D.G. Norman, P.N. Barlow, M. Baron, A.J. Day, R.B. Sim, I.D. Campbell // J. Mol. Biol. 1991. - V.219. - P.717-725.

234. Ogawa, T. Leuorolide, a gonadotropin-releasing hormone agonist, enhances colonization after spermatogonial transplantation into mouse testes / T. Ogawa, I. Dobrinski, M.R. Avarbock, R.L. Brinster //Tissue Cell. 1998. - V.30 (5). - P.583-588.

235. Ogawa, T. Transplantation of male germ line stem cells restores fertility in infertile mice / T. Ogawa, I. Dobrinski, M.R. Avarbock, R.L. Brinster //Nature Medicine. 2000. - V.6. - P.29-34.

236. Ogawa, T. Transplantation of testis germinal cells into mouse seminiferous tubules / T. Ogawa, J.M. Arechaga, M.R. Avarbock, R.L. Brinster //International Journal of Developmental Biology. 1997. - V.41. - P.l 11-122.

237. Ogawa, T. Xenogeneic spermatogenesis following transplantation of hamster germ cells to mouse testes / T. Ogawa, I. Dobrinski, M.R. Avarbock, R.L. Brinster //Biol. Reprod. 1999a. - V.60. - P.515-521.

238. Oglesby, T.J. Membrane cofactor protein (CD46) protects cells from complement-mediated attack by an intrinsic mechanism / T.J. Oglesby, C.J. Allen, M.K. Liszewski, D.J. White, J.P. Atkinson // J. Exp. Med. 1992. - V.175. -P.1547-1551.

239. Okada N. Membrane cofactor protein (CD46) is a keratinocyte receptor for the M protein of the group A streptococcus / N. Okada, M.K. Liszewski, J.P. Atkinson, M. Caparon // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1995. - V.92. - P.2489-2493.

240. Oldstone, M. Measles virusinfection in a transgenic model: virus-induced immunosuppression and central nervous system disease / M. Oldstone, H.1.wicki, D. Thomas, A. Tishon, S. Dales et al. // Cell. 1999. - V.98. - P.629-640.

241. Ory, D.S. A stable human-derived packaging cell line for production of high retrovirus / vesicular stomatitis virus G pseudotypes / D.S. Ory, B.A. Neugeboren, R.C. Mulligan // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. - V.93. - P. 11400 -11406.

242. Pain, B. Long-term in vitro culture and characterisation of avian embryonic stem cells with mul tiple morphogenetic potentialities / B. Pain, M. E. Clark, M. Shen, H. Nakazawa, M. Sakurai et al. // Development. 1996. - V.122. - P.2339-2348.

243. Paleyanda, R.K. Transgenic pigs produce functional luman factor VIII in milk / R.K.Paleyanda, W.H.Velander, T.K.Lee, D.H.Scandella, F.C.Gwazdauskas et al. //Nat. Biotechnol. 1997. -V. 15. - P. 971-975.

244. Palmiter, R. Dramatic growth of mice that develop from eggs microinjected with metallothioneingrowth hormone fusion genes / R. Palmiter, R. Brinster, R. Hammer, M. Trumbauer, M. Rosenfeld et al. // Nature 1982. -V.300.-P.611-615.

245. Paradis, K. Search for cross-species trans-mission of porcine endogenous retrovirus in patients treated with living pig tissue / K. Paradis, G. Langford, Z. Long, W. Heneine, P. Sandstrom et al. //Science 1999. - V.285. -P.1236-1241.

246. Parreira, C.G. Development of germ cell transplants in mice / C.G. Par-reira, T. Ogawa, M.R. Avarbock, L.R. Franca, L.R. Brinster et al. //Biology of Reproduction. 1998. - V.59. - P. 1360-1370.

247. Parrish, J.J. Capacitation of bovine sperm by heparin / J.J. Parrish, J.L. Susko-Parrish Biol Reprod. - 1989. - V.41. - P.683-699.

248. Passoni, L. Sperm cells mediated gene transfer: presence of foreign

249. DNAinto bovine blastocyst obtained from in vitro fertilization / L. Passoni, L. Mauri, A. Luciano, P. Pocar, Ajmone-Marsan, et. al. // A preliminary report. -1995. P.427-428.

250. Patience, C. Infection of human cells by an endogenous retrovirus of pigs / C. Patience, Y. Takeuchi, R.A. Weiss Nat. Med. - 1997. - V.3. - P.282-286.

251. Patience, C. No evidence of pig DNA or retroviral infection in patients with short-term extracorporeal connection to pig kidneys / C. Patience, G.S. Patton, Y. Takeuchi, R.A. Weiss, M.O. McClure et al. // Lancet. 1998. - V.352. - P.699-701.

252. Perry, A.C. Mammalian transgenesis by intracytoplasmic sperm injection / A.C. Perry, T. Wakayama, H. Kishikawa, et al. // Science. 1999. - V.284 (5417).-P.l 180-1183.

253. Pervaiz ,S. Homology of b-lactoglobulin, serum retinol-binding protein md protein HC / S.Pervaiz, K.Brew // Science. 1985. - V. 228. - P. 335-337.

254. Petitte, J. N. Avian pluripotent stem cells / J.N. Petitte, G. Liu, Z. Yang // Mech. Dev. 2004. - V. 121. - P. 1159-1168.

255. Petitte, J.N. Production of somatic and germline chimeras in the chicken by transfer of early blastodermal cells / J.N. Petitte // Development. 1990. -V.108. - P.185-189.

256. Petitte, J.N. The origin of the avian germ line and transgenesis in birds / J.N. Petitte, L. Karagenc, M. Ginsburg // Poult. Sei. 1997. - V.76 (8). - P. 10841092.

257. Petranka, J. Structure-Function Relationships of the Complement Regulatory Protein, CD59 / J. Petranka, J. Zhao, J. Norris, N. Tweedy, R. Ware, et al. // Blood Cells, Molecules, and Diseases. 1996. - V.22. - P.281-296.

258. Platenburg, G.J. Expression of human lactoferin in milk of transgenic mice / G.J.Platenburg, E.P.Kootwijk, P.M.Kooiman, S.L Woloshuk, J.H.Nuijens et al. // Transgenic Res. 1994. - V. 3. - P. 99-108.

259. Piatt, J. The transplantation of organs and tissues between species / J. Piatt, J. Logan // In: Xenotransplantation, Eds: Cooper D., et al Springer. - 1997. - P.650-658.

260. Piatt, J.L. Xenotransplantation: recent progress and current perspectives / J.L. Piatt // Current Opinion In Immunology. 1996. - V.8 (5). - P.721.

261. Prunkard, D. High-level expression of recombinant human fibrinogen in the milk of transgenic mice / D.Prunkard, I.Cottingham, I.Garner, M.Dalrymple, G.Lasser et al. //Nat. Biotechnol. 1996. - V. 14. - P. 867-871.

262. Pursel, V. Growth potential of transgenic pigs expressing a bovine growth hormone gene / V. Pursel, R. Cambell, K. Miller, R. Behringer, R. Palmiter et al. // J. Anim. Sci. 1988. - V.66. - P.267.

263. Pursel, V.G. Genetic engineering of livestock / V.G. Pursel, C.A. Pin-kert, K.F. Miller, D.J.,Bolt, R.G.Campbell et al. // Science. 1989. - V. 244. -P.1281-1288.

264. Pursel, V.G. Modification of production traits. In: Clark, A.J. (Ed.), Animal breeding. Technology for the 21st century. Harwood Academic Publishers, 1998, P. 187.

265. Pursel, V.G. Progress in gene transfer in farm animals / V.G. Pursel,

266. C.E. Jr. Rexroad, D.J. Bolt, K.F. Miller, R.J. Wall et al. // Vet. Immunol. Histopath. 1987. -V. 17. - P.303-312.

267. Pursel, V.G. Transfer of an ovine metallothionein-ovine growth hormone fusion gene into swine / V.G.Pursel, R.J. Wall, M.B.Solomon, D.J. Bolt, J.D. Murray et al. // Journal of Animal Science. 1997. - V.75. - P. 2208 - 2214.

268. Ram, S. Interactions between Neisseria gonorrhoeae and C4b-binding protein: a molecular basis for gonococcal serum resistance / S. Ram, S. Gulati,

269. D.P. McQuillen, R. Boden, C. Elkins et al. // Mol. Immunol. Abstr. 1999. - V.36. - P.297.

270. Rapp, J.C. Biologically active human interferon alpha-2b produced in the egg white of transgenic hens / J.C. Rapp, A.J.Harvey, G.L.Speksnijder, W. Hu, R.Ivarie // Transgenic Res. 2003 - V.12. - P.569-575.

271. Reemtsma, K. Renal heterotransplantation in man / K. Reemtsma, B. McCracken, J. Schlegel // Annals of Surgery. 1964. - V.160. - P.384-408.

272. Rexroad, C.E. Insertion, expression and phisiology of growth-regulating genes / C.E. Rexroad, R.E. Hammer, R.R. Behringer, R.D. Palmiter, R.L. Brinster // J. Reprod. Fert. Suppl. 1990. - V.41. - P. 119-124.

273. Rexroad, C.E. Production of transgenic sheep with growth relating genes / C.E.Rexroad, R.E. Hammer, D.J. Bolt, T.H. Elsasser, K.F. Miller, R.R. Behringer // Molecular Reproduction and Development. 1989. - V. 1. - P. 164-169.

274. Rexroad, C.E. Transferrin- and albumin-directed expression of growth-related peptides in transgenic sheep / C.E. Rexroad, K.M. Mayo, D.J. Bolt, T.H.Elsasser, K.F. Miller et al. // Journal of Animal Science. 1991. - V.69. - P. 2995 - 3004.

275. Rigg, R.J. A novel human amphotropic packaging cell line: High titer, complement resistance, and improved safety / R.J. Rigg, J. Chen, J.S. Dando, S.P. Forestell, I. Plavec, E. Bohnlein//Virology. 1996. - V.218. - P.290-295.

276. Rijnkels, M. Expression analysis of the individual bovine beta-, alpha si- and kappa-casein genes in transgenic mice / M. Rijnkels, P.M. Kooiman, P.J.Krimpenfort, H.A. de Boer, F.R. Pieper // Biochem. J. 1995. - V. 311. - P. 929-937.

277. Roberts ,B. Cloning of the goat b-casein encoding gene and expression in transgenic mice / B. Roberts, P.DiTulio, J.Vitale, K.Hehir, K Gordon // Gene. -1992.-V. 121.-P. 255-262.

278. Rodriguez, A. Exogenous cloned DNA can penetrate living sperm cells / A. Rodriguez, F. O. Castro, J. Guillen, et al. //Advances in Gene Technology: Feeding the World in the 21st Century. 1991. - P.53.

279. Rollins, S.A. The complement-inhibi-tory activity of CD59 resides in its capacity to block incorpo-ration of C9 into membrane C5b-9 / S.A. Rollins, P.J. Sims // J. Immunol. 1990. - V.144. - P.3478-3483.

280. Rooney, I.A. Complement in human reproduction: activation and control / I.A. Rooney, T.J. Oglesby, J.P. Atkinson // Immunol. Res. 1993. - V.12. -P.276-294.

281. Roshlau, K. Gene transfer experiments in cattle / K. Roshlau, P. Rommel, L. Andreewa, M. Tackel, D. Roshlau et al. // Journal of Reproduction and Fertility. 1989. - V.38. - P.153-160.

282. Rottman, O. Liposomemediated gene transfer via spermatozoa into avian egg cells / O. Rottman, R. Antes , P. Hofer, G. Maierhofer //J. Anim. Breed. Genet. 1991. - V. 109. - P.64-70.

283. Rowe, J.A. Plasmodium falciparum rosetting mediated by a parasite-variant erythrocyte membrane protein and complement-receptor 1 / J.A. Rowe, J.M. Moulds, C.I. Newbold, L.H. Miller // Nature. 1997. - V.388. - P.292-295.

284. Rowe, P.M. Xenotransplantation: from animal facility to the clinic? / P.M. Rowe//Molecular Medicine Today. 1996. -V.2 (1). - P.10-15.

285. Rubanyi, G. The future of human gene therapy / G. Rubanyi // Mol. aspects of Medicine. 2001. - V.22. - P. 113-142.

286. Russell, S.J. Gene therapy: Science, medicine and the future / S.J. Russell // Br. Med. J. 1997. -V.315. -P.803-815.

287. Ruysschaert, J.-M. A novel cationic amphiphile for transfection of mammalian cells / J.-M. Ruysschaert, A. Ouahabi, V. Willeaume //Biochem. and Bioph. Res. Comm. 1994.-V.203 (3). - P. 1622-1628.

288. Saadi, S. Role of compliment in xenotransplantation / S. Saadi, J.L. Piatt // Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology. 1999. - V.26. -P.1016-19.

289. Sachs, D.H. The pig as a potential xenograft donor / D.H. Sachs // Vet1.munol Immunopathol. 1994. - V.43. - P. 185.

290. Salter, D.W. Gene insertion into the chicken germ line by retroviruses / D.W. Salter, E.J. Smith, S.H. Hughes, S.E. Wright, A.M. Fadly et al. // Poult Sci. 1986. - V.65 (8). - P.1445-1458.

291. Salter, D.W. Insertion of a disease resistance gene into the chicken germline / D.W. Salter, L.B. Crittenden // Biotechnology. 1991. - V. 16. - P. 125131.

292. Salter, D.W. Transgenic chickens: insertion of retroviral genes into the chicken germ line / D.W. Salter, E.J. Smith, S.H. Hughes, S.E. Wright, L.B. Crittenden//Virology. 1987. - V. 157 (1). - P.236-240.

293. Sang, H. Prospects for transgenesis in the chick // Mech. Dev. 2004 -V.121. - P.l 179-1186.

294. Sato, M. Direct injection of foreign DNA into mouse testis as a possible alternative of sperm-mediated gene transfer / M. Sato, R. Iwase, K. Kasai, N. Tada //Animal Biotechnology. 1994. - V.5 (1). - P. 19-31.

295. Scott, B. B. Generation of tissue-specific transgenic birds with lentiviral vectors / B.B. Scott and C. Lois // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2005. - V.102. -P.16443-16447.

296. Seamon, J.A. Inserting a nuclear targeting signal into a replication-competent Moloney murine leukemia virus affects viral export and is not sufficient for cell cycle-independent infection / J.A. Seamon //J. Virol. V.76 (16). - 2002. -P.8475-8484.

297. Seidel, G. Embryo transfer: the next 100 years / G. Seidel // Therioge-nology.- 1991.-V.35 (1). P.171-180.

298. Seidel, G. Production of genetically identical sets of Mammals: Cloning / G. Seidel //J. Exp. Zool. 1983. - V.2. - P.228.

299. Seya, T. Functional properties of membrane cofactor protein of complement / T. Seya, J.P. Atkinson // Biochem. J. 1989. - V.264. - P.581-588.

300. Seya, T. Human membrane cofactor protein (MCP, CD46): multiple isoforms and functions / T. Seya, A. Hirano, M. Matsumoto, et al. // Int. J. Biochem. Cell Biol. 1999.-V.31.-P.1255-1260.

301. Seya, T. Purification and characterization of a membrane protein (gp45-70) that is a cofactor for cleavage of C3b and C4b / T. Seya, J.R. Turner, J.P. Atkinson// Journal of Experimental Medicine. 1986. - V.163 (4). - P.837.

302. Shafren, D.R. Coxsackievirus A21 binds to decay-accelerating factor but requires intercellular adhesion molecule 1 for cell entry / D.R. Shafren, D.J. Dorahy, R.A. Ingham, G.F. Bums, R.D. Barry // Journal of Virology. 1997. -V.71 (6). - P.4736.

303. Shank, P. Avian oncovirus mutant (SE21Qlb) deficient in genomic RNA: characterization of a deletion in the provirus / P. Shank, M. Linial // J. Virol. -1980. V.36. - P.450-456.

304. Sherman, A. Transposition of the Drosophila element mariner into the chicken germ line / A. Sherman // Nat. Biotechnol. 1998. - V. 16. - P. 1050-1053.

305. Shinohara, T. Enrichment and transplantation of spermatogonial stem cells / T. Shinohara, R.L. Brinster //Int. J. Androl. 2000. - V.23. - P.89-91.

306. Shnieke, A.E. Humanfactor IX transgenic seep produced by transfer of nuclei from transfected fetal fibroblasts / A.E. Shnieke, A.J. Kind, W.A. Ritchie, K. Mycock, A.R. Scott etal. //Science. 1997. -V.278 (5346). - P.2130-2133.

307. Simons, J.P. Gene transfer into sheep / J.P. Simons, I. Wilmut, A.J.Clark, A.L. Archibald, J.O. Bishop et al. // Biotechnology. 1988. -V. 6. - P. 189-183.

308. Sperandio, S. Sperm-mediated DNA transfer in bovine and swine species / S. Sperandio, V. Lulli, M. Bacci, M. Form, B. Maioni, et al. //Anim. Biotech. -1996.-V.7.-P.59-77.

309. Starzl, T. // Baboon-to-human liver transplantation / T. Starzl, J. Fung, A. Tzakis, A. Todo, A. J. Demetris et al. // Lancet. 1993. - V.341. - P.65-71.

310. Steele D.J., Auchincloss H.J. Xenotransplantation // Annu. Rev. Med. -1995. V.46. - P.345-360.

311. Stevens, R.B. The pathogenesis of hyperacute xenograft rejection / R.B. Stevens, J.L. Platt // American Journal of Kidney Diseases 1992. - V.20 (4). -P.414.

312. Stoye, J.P. The dangers of xenotransplantation / J.P. Stoye, J.M. Coffin // Nature Medicine 1995. - V. 1. - P. 1100.

313. Stromqvist, M. Recombinant human extracellular superoxide dismutase produced in milk of transgenic rabbits / M.Stromqvist, M.Houdebine, J.O. Anders-son, A.Edlund, C. Johansson et al. //Transgenic Res. 1997. -V. 6. - P. 271-278.

314. Subramanian, A. Rate limitations in posttranslational processing by the mammary gland of transgenic animals / A.Subramanian, K.Paleyanda, H.Lubon, \ B.L.Williams, F.C.Gwazdauskas et al. // Ann. NY Acad. Sei. 1996. - V. 782. - P. 87-96.

315. Sugita, Y. Determination of carboxyl-terminal residue and disulfide bonds of MACIF (CD59), a glycosyl-phosphatidylinositol-anchored membrane protein / Y. Sugita, Y. Nakano, E. Oda, et al. // J. Biochem. (Tokyo) 1993. -V. 14. - P.473-477.

316. Takeuchi, Y. Host range and interference studies of three classes of pig endogenous retrovirus / Y. Takeuchi, C. Patience, S. Magre, R.A. Weiss, P.T. Banerjee, P. Le Tissier, J.P. Stoye // J. Virol. 1998. - V.72. - P.9986-9991.

317. Temin, H.M. Safety considerations in somatic gene therapy of human disease with retrovirus vectors / H.M. Temin // Hum. Gene Ther. 1990. - V.l. -P.111-123.

318. Thepot, D. Structure of the gene incoding rabbit beta-casein / Thepot D., Devinoy E., Fontaine M.L., Houdebine L.M. //Gene. -1991. V. 97. - P. 301-306.

319. Thern, A. Expression of two different antiphagocytic M proteins by Streptococcus pyogenes of the OF + lineage / A. Thern, M. Wästfelt, G. Lindahl // J. Immunol. 1998. - V.60. - P.860-869.

320. Thern, A. Ig-binding surface proteins of Streptococcus pyogenes also bind human C4b-binding protein (C4BP), a regulatory component of the complement system / A. Thern, L. Stenberg, B. Dahlbäck, G. Lindahl // J. Immunol. 1995. - V. 154. - P.375-386.

321. Todaro, G.J. Characterization of a type C virus released from the porcine cell line PK (15) / G.J. Todaro, R.E. Benveniste, M.M. Lieber, C.J. Sherr // Virology. 1974. - V.58. - P.65-74.

322. Tsai, H.J. Sperm as a carrier to introduce an exogenous DNA fragment into the oocyte of Japanese abalone (Haliotis divorsicolor suportexta) / H.J. Tsai, C.H. Lai, H.S. Yang //Transgenic Res. 1997. - V.6 (1). - P.85-95.

323. Tsunoda, Y. The recent progress on nuclear transfer in mammals / Y. Tsunoda, Y. Kato // Zool. Sei. 2000. - V.17 (9). - P. 1177-1184.

324. Uckert, W. Retrovirus-mediated gene transfer in cancer therapy / W. Uckert, W. Walther //Pharmac. Ther. 1994. - V.63. - P.323-247.

325. Urven, L.E. Distribution of extracellular matrix in the migratory pathway of avian primordial germ cells / L.E. Urven, U.K. Abbott, C.A. Erickson // Anat Ree. 1989. - V.224 (1). - P.14-21.

326. Van Cott, K.E. Phenotypic and genotypic stability of multiple lines of (ansgenic pigs expressing recombinant human protein C / K.E.Van Cott, H.Lubon,

327. C.G.Russel, S.P.Butler, F.C.Gwazdauskas et al. // Transgenic Res. 1997. - V.6. -P. 203-212.

328. Velander, W.H. High-level expression of a heterologous protein in the milk of transgenic swine using the c DNA encoding human protein C / W.H. Velander// Proc. Natl Acad. Sci. USA. 1992. - V.89. - P. 12003-12007.

329. Vial, C.M. Life supporting function for over one month of a transgenic porcine heart in a baboon / C.M. Vial, D.J. Ostlie, F.N.K. Bhatti, E. Cozzi, M. Goddard et al. // The Journal of Heart and Lung Transplantation. 2000. - V.19. -P.224-229.

330. Vick, L. Transgenic birds from transfonned primordial germ cells / L. Vick, Y. Li, K. Simkiss // Proc. R. Soc. Lond. 1993. - V.251. - P. 179-182.

331. Vize, P.D. Introduction of a porcine growth hormone fusion gene into transgenic pigs promotes growth / P.D. Vize, A.E. Michalska, R. Ashman, B. Lloyd, B.A. Stone, P.Quinn // Journal of Cell Science. 1988. - V.90. - P. 295 -300.

332. Waddington, D. Chronology of events in the first cell cycle of the polys-permic egg of the domestic fowl (Gallus domesticus ) / D. Waddington // Int. J. Dev. Biol. 1998. - V.42. - P.625-628.

333. Wakayama, T. Mouse cloning with nucleus donor cells of different age type / T. Wakayama, R. Yanagimachi Mol. Reprod. Dev. - 2001. - V.58 (4). -P.376-383.

334. Wall, R.J. Synthesis and secretion of the mouse whey acidic protein in transgenic sheep / RJ.Wall, C.E.Rexroad, A.Powell, A.Shamay, R.McKnight et al. // Transgenic Res. 1996. - V. 5. - P. 67-72.

335. Weiss, R.A. Xenografts and retroviruses / R.A. Weiss // Science. 1999. - V.285. - P.1221-1222.

336. Wentworth, B.C. Manipulation of avian primordial germ cells and gonadal differentiation / B.C. Wentworth, H. Tsai, J.H. Hallett, D.S. Gonzales, G. Rajcic-Spasojevic // Poult Sci. 1989. - V.68 (7). - P.999-1010.

337. White, D. Hearts from pigs transgenic for human DAF are not hyperacutely rejected when xenografted to primates / D. White, R. Braidley, J. Dunning, et.al. // 3rd Int. Congr. Xenotranspl. 1995. - P. 128.

338. Whitelaw, C.B.A. Position-ndependent expression of the ovine beta-lactoglobulin gene in transgenic mice / C.B.A.Whitelaw, S.Harris, McClenaghan, J.P.Simons, A.J. Clark // Biochem. J. 1992. - V. 286. - P. 31-39.

339. Wilmut, J. Viable offspring derived from fetal and adult mammalian cells / J. Wilmut, A.E. Shnieke , J. McWhir, A.J. Kind, K.H.S. Campbell // Nature. 1997. - V.3 85 (6619). - P.810-813.

340. Wilson, J.G. Characterization of human T lymphocytes that express the C3b receptor / J.G. Wilson, T.F. Tedder,. D.T. Fearon // J. Immunol. 1983. -V.131. - P.684.

341. Wilton, A.N. Strong associations between RFLP and protein polymorphism for CD46 / A.N. Wilton, R.W. Johnstone, I. McKenzie, et al. // Immunogenetics. 1992. - V.36. - P.79-85.

342. Wolf, E. Expressionbedingte Veränderungen bei Wachstumshormong-transgenen Mausen / E. Wolf// München, Diss. med. vet. 1990.

343. Wolf, E. Transgenic technology in farm animals-progress and perspectives / E. Wolf, W. Shernthaner, V. Zakhartchenko, K. Prelle, M. Stojkovic, G. Brem // Exp.Physiol. 2000. - V.85 (6). - P.615-625.

344. Wright, G. High level expression of active human alpha-1-antitrypsin in the milk of transgenic sheep / G.Wright, A.Carver, D.Cottom, D.Reeves, A. Scott et al. // Biotechnology. -1991. -V. 9. P. 830-834.

345. Xu, C. A critical role for murine complement regulator crry in fetomaternal tolerance / C. Xu, D. Mao, V.M. Holers, B. Palanca, A.M. Cheng, H. Molina // Science. 2000. - V.287. - P.498-501.

346. Yamazaki, Y. In vivo gene transfer to mouse spermatogenic cells by deoxyribonucleic acid injection into seminerous tubules and subsequent electropo-ration / Y. Yamazaki, H. Fujimoto, H. Ando, et al. //Biol. Reprod. 1998. - V.59. -P. 1439-1444.

347. Yarus, S. Secretion of unprocessed human surfactant protein B in milk of transgenic mice / S.Yarus, N.M.Greenberg, Y.Wei, J.A.Whitsett, T.E.Weaver et al. // Transgenic Res. 1997. - V. 6. - P. 51-57.

348. Yasuda, Y. A method to obtain avian germ-line chimaeras using isolated primordial germ cells / Y. Yasuda, A. Tajima, T. Fujimoto, T. Kuwana // J Reprod Fertil. 1992. - V.96 (2). - P.521-528.

349. Ye, Y. Secondary organ allografting after a primary "bridging" xenotransplant / Y. Ye, Y. Luo, T. Kobayashi, S. Taniguchi, S. Li, S. Kosanke, et al. // Transplantation. 1995. - V.60 (1). - P. 19-22.

350. Ye, Y. The pig as a potential organ donor for man. A study of potentially transferable disease from donor pig to recipient man / Y. Ye, M. Niekrasz, S.

351. Kosanke, R. Welsh, H. E. Jordan et al. // Transplantation. 1994. - V.57. - P.694-703.

352. Yeatman, M. Complement-mediated pulmonary xenograft injury studies in swine-to-primate orthotopic single lung transplant models / M. Yeatman, C.W. Daggett, W. Parker, G.W. Byrne, J.S. Logan et al. // Transplantation. 1998. -V.65. - P.1084-1093.

353. Yoshimura, M. Isolation and the structural analysis of the mouse B-casein gene / M.Yoshimura, T.Oka // Gene. 1989. - V. 78. - P. 267-272.

354. Yu, J. Mapping the Regions of the Complement Inhibitor CD59 Responsible for Its Species Selective Activity / J. Yu, S. Dong, N. Rushmere, B. Morgan, R. Abagyan, S. Tomlinson // Biochemistry. 1997. - V.36. - P.9423-9428.

355. Yu, Z. Gene expression profiles in different stages of mouse spermato-genic cells during spermatogenesis / Z. Yu, R. Guo, Y. Ge, et al. //Biol. Reprod. -2003. V.69 (1). - P.37-47.

356. Zaidi, A. Life-supporting pig-to-primate renal xenotransplantation using genetically modified donors / A. Zaidi, M. Schmoeckel, F. Bhatti, P. Waterworth, M. Tolan et al. // Transplantation. 1998. - V.65. - P.1584-1590.

357. Zandrum, B. Diploid nuclear replacement in mature human ova with cleavage / B. Zandrum, M.D. Shettles //Am. J. Obstet. Gynecol. 1979. - V.l 33. -P.222-224.

358. Zelenin, A.V. Genetic transformation of mouse cultured cells with help of high velocity mechanical DNA-injection / A.V. Zelenin, A.V. Titomirov, V.A. Kolesnikov //FEBS Letters. 1989. - V.244. - P.65-67.

359. Zhao, D. F. Purification of avian circulating primordial germ cells by nycodenz density gradient centrifugation / D. F.Zhao, T. Kuwana. 2003.// Br. Poult. Sci. 2003. - V.44. - P.30-35.

360. Zhu, L. Production of human monoclonal antibody in eggs of chimeric chickens / L.Zhu, M. C. van de Lavoir, J. Albanese, D.O. Beenhouwer // Nat. Biotechnol. 2005. - V.23. - P. 1159-1169.